CN116019185B - 一种副干酪乳杆菌在制备发酵枸杞中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种副干酪乳杆菌在制备发酵枸杞中的应用，属于微生物技术领域。副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracei)E10菌具有抗氧化能力及对胆盐耐受能力。本发明提供的副干酪乳杆菌E10菌对枸杞原浆进行发酵，再向发酵枸杞浆中添加入氨基酸和膳食纤维，最后进行灭菌灌装得到发酵枸杞复合饮。副干酪乳杆菌E10菌发酵枸杞原浆不仅改善枸杞风味，还增加枸杞的抗氧化活性及酶抑制活性。添加的氨基酸和膳食纤维为人体提供营养成分，进而达到一个功能和营养共兼得的发酵枸杞复合饮。
Description
技术领域
本发明涉及一种副干酪乳杆菌在制备发酵枸杞中的应用，属于微生物技术领域。
背景技术
口服保健饮品是天然、安全、有效的干预疾病手段。枸杞是天然的药食同源的食物，具有补肝，滋肾，润肺，明目的功能。然而其含有高含量的糖，这可能不利于患有代谢性疾病，如肥胖，糖尿病等人的食用。乳酸菌在各种炎症疾病中显示出许多有益的作用。乳酸菌发酵可枸杞中的糖转化为有机酸等功能性代谢物，使得乳酸菌发酵枸杞果浆具有更丰富的功能。本发明中的膳食纤维，可使肠道微生物代谢更多有益代谢物，除次之外还可增加饮品的味觉层次。此外氨基酸是人体必需的营养成分，饮品中的氨基酸为必需氨基酸，只能从食物中摄取，该成分的加入增加了饮品的保健功能。因此，利用乳酸菌发酵枸杞复合饮品保护酒精性肝损伤具有广阔的前景，该饮品兼具了保健和美味双重优势。
发明内容
本发明提供一种含有副干酪乳杆菌E10的发酵枸杞复合饮品，本发明结合了具有良好抗氧化能力的副干酪乳杆菌E10发酵的枸杞原浆、氨基酸和粗纤维，制备得到一种可以乳酸菌发酵枸杞复合饮品。
本发明的第一个目的是提供一种副干酪乳杆菌在制备发酵枸杞中的应用，所述的副干酪乳杆菌于2021年6月21日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保存地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.22744。
进一步地，所述应用是将所述副干酪乳杆菌接种至枸杞原浆中进行发酵。
进一步地，所述发酵是将所述副干酪乳杆菌种子进行活化、扩增，获得种子液，将种子液接种至枸杞原浆中，在37～38℃厌氧培养24～36h，得到枸杞发酵液。
进一步地，所述枸杞原浆为宁夏枸杞制备得到。
进一步地，所述种子液通过如下步骤制备：将所述副干酪乳杆菌菌种涂布于MRS固体培养基中，37～38℃培养24～48h，活化菌种；将活化后的菌株于MRS固体培养基上划线，37～38℃培养24～48h，获得菌株单菌落；挑取单菌落接种于MRS液体培养基中，37～38℃厌氧培养24～36h，得到初级种子液；将初级种子液以2～4％的接种量接种于液体MRS培养基中，37～38℃厌氧培养24～36h，得到种子液。
进一步地，MRS固体培养基：胰蛋白胨8～12g/L；酵母粉4～6g/L；牛肉膏8～12g/L；葡萄糖15～25g/L；柠檬酸氢二胺1～3g/L；乙酸钠4～6g/L；K2HPO4·3H2O 2.5～2.7g/L；MgSO4·7H2O 0.1～0.3g/L；MnSO4·4H2O 0.04～0.06g/L；吐温80 0.8～1.2mL/L；1.5～2％的琼脂粉；MRS液体培养基：胰蛋白胨8～12g/L；酵母粉4～6g/L；牛肉膏8～12g/L；葡萄糖15～25g/L；柠檬酸氢二胺1～3g/L；乙酸钠4～6g/L；K2HPO4·3H2O 2.5～2.7g/L；MgSO4·7H2O0.1～0.3g/L；MnSO4·4H2O 0.04～0.06g/L；吐温80 0.8～1.2mL/L。
本发明的第二个目的是提供一种乳酸菌发酵枸杞复合饮品，按重量份计，所述乳酸菌发酵枸杞复合饮品包括50～70份经副干酪乳杆菌发酵获得的枸杞发酵液、10～20份氨基酸和10～30份膳食纤维；其中，所述副干酪乳杆菌于2021年6月21日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保存地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.22744。
进一步地，所述经副干酪乳杆菌发酵获得的枸杞发酵液中活菌数不低于1×109CFU/g。
进一步地，所述的氨基酸为牛磺酸、半胱氨酸、甲硫氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、缬氨酸七种必需氨基酸中的至少三种。
进一步地，所述的粗纤维为纤维素、半纤维素和木质素三种非水溶性纤维中的至少两种
本发明的乳酸菌发酵枸杞复合饮品的制备方法，按照如下步骤进行：
(1)将所述的副干酪乳杆菌E10取100μL冻存液涂布于MRS固体培养基中，37～38℃培养24～48h，活化菌种；
(2)挑取适量菌种于MRS固体培养基上划线，37～38℃培养24～48h，获得菌株单菌落；
(3)挑取固体培养基中的副干酪乳杆菌E10单菌落，接种于MRS液体培养基中，37～38℃厌氧培养24～36h，得到初级种子液；
(4)将初级种子液以2-4％的接种量接种于液体MRS培养基中，37～38℃厌氧培养24～36h，得到种子液；
(5)将种子液以2-4％的接种量接种于宁夏枸杞原浆中，37～38℃厌氧培养24～36h，得到发酵液；
(6)按照重量份的原料，将副干酪乳杆菌E10发酵的宁夏枸杞原浆、氨基酸和粗纤维混合，制成所述的乳酸菌发酵枸杞复合饮品。
进一步地，MRS固体培养基：胰蛋白胨8～12g/L；酵母粉4～6g/L；牛肉膏8～12g/L；葡萄糖15～25g/L；柠檬酸氢二胺1～3g/L；乙酸钠4～6g/L；K2HPO4·3H2O 2.5～2.7g/L；MgSO4·7H2O 0.1～0.3g/L；MnSO4·4H2O 0.04～0.06g/L；吐温80 0.8～1.2mL/L；1.5～2％的琼脂粉。
进一步地，MRS液体培养基：胰蛋白胨8～12g/L；酵母粉4～6g/L；牛肉膏8～12g/L；葡萄糖15～25g/L；柠檬酸氢二胺1～3g/L；乙酸钠4～6g/L；K2HPO4·3H2O 2.5～2.7g/L；MgSO4·7H2O 0.1～0.3g/L；MnSO4·4H2O 0.04～0.06g/L；吐温80 0.8～1.2mL/L。
本发明的有益效果是：
本发明中副干酪乳杆菌E10具有强的胃肠道消化系统的抗性及对胆盐耐受能力。副干酪乳杆菌E10发酵的枸杞原浆，乳酸菌发酵枸杞原浆后改善其风味，并增强其抗氧化功能及α-糖苷酶及胰脂肪酶抑制活性；本发明还添加必需氨基酸，具有补充机体营养成分的作用；此外还添加具有促进胃肠消化和提高味觉层次功能的膳食纤维。
生物材料保藏：
副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)E10，于2021年6月21日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保存地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.22744。
附图说明：
图1为发酵枸杞抗氧化活性及酶抑制活性。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，以使本领域的技术人员可以更好地理解本发明并能予以实施，但所举实施例不作为对本发明的限定。
MRS固体培养基：胰蛋白胨10g；酵母粉5g；牛肉膏10g；葡萄糖20g；柠檬酸氢二胺2g；乙酸钠5g；K2HPO4·3H2O 2.6g；MgSO4·7H2O 0.2g；MnSO4·4H2O 0.05g；吐温80 1mL；1.5～2％的琼脂粉。pH调节6.8±0.2；定容至1L。
MRS液体培养基：胰蛋白胨10g；酵母粉5g；牛肉膏10g；葡萄糖20g；柠檬酸氢二胺2g；乙酸钠5g；K2HPO4·3H2O 2.6g；MgSO4·7H2O 0.2g；MnSO4·4H2O 0.05g；吐温80 1mL。pH调节6.8±0.2；定容至1L。
宁夏枸杞原浆：将枸杞鲜果直接经打浆、粗滤、均质、巴氏杀菌、灌装工序制成。
实施例1：一种副干酪乳杆菌及其发酵枸杞复合饮的制备
(1)菌种的活化：将所述的副干酪乳杆菌E10取100μL冻存液涂布于MRS固体培养基中，37℃培养36h，活化菌种；
(2)单菌落的获取：挑取适量菌种于MRS固体培养基上划线，37℃培养36h，获得菌株单菌落；
(3)初级种子液的制备：挑取固体培养基中的副干酪乳杆菌E10单菌落，接种于MRS液体培养基中，37℃厌氧培养36h，得到初级种子液；
(4)种子液的制备：将初级种子液以2％的接种量接种于液体MRS培养基中，37℃厌氧培养36h，得到种子液；
(5)发酵液的制备：将种子液以2％的接种量接种于宁夏枸杞原浆中，37℃厌氧培养24h，得到发酵液；
(6)发酵枸杞复合饮品的制备：按照重量份的原料，将副干酪乳杆菌E10发酵的宁夏枸杞原浆、氨基酸和膳食纤维按50:20:30混合，制成所述的乳酸菌发酵枸杞复合饮品。
实施例2：一种副干酪乳杆菌及其发酵枸杞复合饮的制备
(1)菌种的活化：将所述的副干酪乳杆菌E10取100μL冻存液涂布于MRS固体培养基中，37℃培养48h，活化菌种；
(2)单菌落的获取：挑取适量菌种于MRS固体培养基上划线，37℃培养48h，获得菌株单菌落；
(3)初级种子液的制备：挑取固体培养基中的副干酪乳杆菌E10单菌落，接种于MRS液体培养基中，37℃厌氧培养36h，得到初级种子液；
(4)种子液的制备：将初级种子液以2％的接种量接种于液体MRS培养基中，37℃厌氧培养24h，得到种子液；
(5)发酵液的制备：将种子液以3％的接种量接种于宁夏枸杞原浆中，37℃厌氧培养24h，得到发酵液；
(6)发酵枸杞复合饮品的制备：按照重量份的原料，将副干酪乳杆菌E10发酵的宁夏枸杞原浆、氨基酸和膳食纤维按60:20:20混合，制成所述的乳酸菌发酵枸杞复合饮品。
实施例3：一种副干酪乳杆菌及其发酵枸杞复合饮的制备
(1)菌种的活化：将所述的副干酪乳杆菌E10取100μL冻存液涂布于MRS固体培养基中，37℃培养48h，活化菌种；
(2)单菌落的获取：挑取适量菌种于MRS固体培养基上划线，37℃培养48h，获得菌株单菌落；
(3)初级种子液的制备：挑取固体培养基中的副干酪乳杆菌E10单菌落，接种于MRS液体培养基中，37℃厌氧培养36h，得到初级种子液；
(4)种子液的制备：将初级种子液以3％的接种量接种于液体MRS培养基中，37℃厌氧培养24h，得到种子液；
(5)发酵液的制备：将种子液以4％的接种量接种于宁夏枸杞原浆中，37℃厌氧培养24h，得到发酵液；
(6)发酵枸杞复合饮品的制备：按照重量份的原料，将副干酪乳杆菌E10发酵的宁夏枸杞原浆、氨基酸和膳食纤维按70:20:10混合，制成所述的乳酸菌发酵枸杞复合饮品。
对比例1：
一种植物乳杆菌及其发酵枸杞复合饮的制备
(1)菌种的活化：将所述的植物乳杆菌CICC 6051取100μL冻存液涂布于MRS固体培养基中，37℃培养48h，活化菌种；
(2)单菌落的获取：挑取适量菌种于MRS固体培养基上划线，37℃培养48h，获得菌株单菌落；
(3)初级种子液的制备：挑取固体培养基中的植物乳杆菌CICC 6051单菌落，接种于MRS液体培养基中，37℃厌氧培养36h，得到初级种子液；
(4)种子液的制备：将初级种子液以3％的接种量接种于液体MRS培养基中，37℃厌氧培养24h，得到种子液；
(5)发酵液的制备：将种子液以4％的接种量接种于宁夏枸杞原浆中，37℃厌氧培养24h，得到发酵液；
(6)发酵枸杞复合饮品的制备：按照重量份的原料，将植物乳杆菌CICC 6051发酵的宁夏枸杞原浆、氨基酸和膳食纤维按70:20:10混合，制成所述的乳酸菌发酵枸杞复合饮品。
对比例2：
一种副干酪乳杆菌及其发酵枸杞复合饮的制备
(1)菌种的活化：将副干酪乳杆菌CICC 25095干粉溶于磷酸缓冲液中，取100μL冻存液涂布于MRS固体培养基中，37℃培养48h，活化菌种；
(2)单菌落的获取：挑取适量菌种于MRS固体培养基上划线，37℃培养48h，获得菌株单菌落；
(3)初级种子液的制备：挑取固体培养基中的副干酪乳杆菌CICC 25095单菌落，接种于MRS液体培养基中，37℃厌氧培养36h，得到初级种子液；
(4)种子液的制备：将初级种子液以2％的接种量接种于液体MRS培养基中，37℃厌氧培养36h，得到种子液；
(5)发酵液的制备：将种子液以2％的接种量接种于宁夏枸杞原浆中，37℃厌氧培养36h，得到发酵液；
(6)发酵枸杞复合饮品的制备：按照重量份的原料，将副干酪乳杆菌CICC 25095发酵宁夏枸杞原浆、氨基酸和膳食纤维按70:20:10混合，制成所述的为乳酸菌发酵枸杞复合饮品。
试验例：
1、发酵枸杞的感官评定实验。感官评定小组成员通过筛选确定，由8位食品专业相关人员组成。感官评价标准按照表1，分别从色泽、状态、香气、味觉、口感5个方面对枸杞原浆发酵饮料进行评分。
表1枸杞原浆发酵饮料感官评价标准
2、采用DPPH法、ABTS法和羟基自由基法对样品的抗氧化活性进行了评价。根据Fenton反应方法测定了样品的羟基自由基清除活性。α-葡萄糖苷酶和胰腺脂肪酶抑制试验利用酶和底物反应显色，通过测定吸光度来计算抑制活性。稀释适当倍数的样品用于以上体外活性的检测，活性以百分数抑制率表示。
3、利用高效液相色谱法对发明产品中的多酚类化合物进行测定。
4、实验结果
感官评价得分表的结果显示，实施例所得的乳酸菌发酵枸杞复合饮品的综合感官评分均达到80分以上，其中实施例3所得的乳酸菌发酵枸杞复合饮品的综合感官评分最高，达到86.37分。其在对比例所得的乳酸菌发酵枸杞复合饮品综合感官评分明显低于实施例比，其中对比例1所得的乳酸菌发酵枸杞复合饮品综合感官评分最低，为68.75分。表明副干酪乳杆菌E10发酵枸杞可明显提高枸杞原浆的风味。
表2枸杞原浆发酵饮料感官评价得分
此外，对乳酸菌发酵枸杞复合饮品的抗氧化活性及酶抑制活性进行了检测。如图1所示，实施例3所得的乳酸菌发酵枸杞复合饮品具有最高的抗氧化活性及酶抑制活性，其次是实施例2所得乳酸菌发酵枸杞复合饮品。对比例所得乳酸菌发酵枸杞复合饮品的抗氧化活性及酶抑制活性明显低于实施例，其中对比例1所得乳酸菌发酵枸杞复合饮品的抗氧化活性及酶抑制活性最低。结果表明副干酪乳杆菌E10发酵枸杞可明显提高枸杞原浆的抗氧化活性及酶抑制活性，提高其功能性。
进一步地，对不同发明产品中多酚类化合物的含量进行了测定。实验测定了发明产品中绿原酸，4-香豆酸，间羟基肉桂酸，异槲皮素和芥子酸的含量(表3)。结果表明实施例3所得的乳酸菌发酵枸杞复合饮品中含有更高含量的多酚类化合物。与实施例所得乳酸菌发酵枸杞复合饮品中多酚类化合物的含量相比，对比例中各种多酚类化合物的含量均明显低于实施例。以上结果说明副干酪乳杆菌E10发酵枸杞可明显提高枸杞原浆的多酚类化合物的含量，有利于提高其功能性。
表3发明产品中多酚类化合物的含量
综上可知，本发明产品能够明显改善枸杞原浆的风味，提高抗氧化活性及酶抑制活性，增强枸杞原浆的功能性。此外，与其他菌株发酵相比，副干酪乳杆菌E10发酵枸杞复合饮品中含有更高的多酚类化合物含量，这有利于提高发酵枸杞的功能活性。以上结果说明副干酪乳杆菌E10发酵枸杞复合饮品具有风味良好，抗氧化及酶抑制功能性强的效果，同时提改高了多酚类化合物的含量，可作为一种具有抗氧化功能的食品。
以上所述实施例仅是为充分说明本发明而所举的较佳的实施例，本发明的保护范围不限于此。本技术领域的技术人员在本发明基础上所作的等同替代或变换，均在本发明的保护范围之内。本发明的保护范围以权利要求书为准。
Claims (10)
1.一种副干酪乳杆菌在制备发酵枸杞中的应用，其特征在于，所述的副干酪乳杆菌（Lactobacillus paracasei）于2021年6月21日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保存地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.22744。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述应用是将所述副干酪乳杆菌接种至枸杞原浆中进行发酵。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述发酵是将所述副干酪乳杆菌种子进行活化、扩增，获得种子液，将种子液接种至枸杞原浆中，在37~38℃厌氧培养24~36 h，得到枸杞发酵液。
4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述枸杞原浆为宁夏枸杞制备得到。
5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述种子液通过如下步骤制备：将所述副干酪乳杆菌菌种涂布于MRS固体培养基中，37~38℃培养24~48 h，活化菌种；将活化后的菌株于MRS固体培养基上划线，37~38℃培养24~48 h，获得菌株单菌落；挑取单菌落接种于MRS液体培养基中，37~38℃厌氧培养24~36 h，得到初级种子液；将初级种子液以2~4%的接种量接种于液体MRS培养基中，37~38℃厌氧培养24~36 h，得到种子液。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，MRS固体培养基：胰蛋白胨8~12 g/L；酵母粉4~6 g/L；牛肉膏8~12 g/L；葡萄糖15~25 g/L；柠檬酸氢二胺1~3 g/L；乙酸钠4~6 g/L；K2HPO4•3H2O 2.5~2.7 g/L；MgSO4•7H2O 0.1~0.3 g/L；MnSO4•4H2O 0.04~0.06 g/L；吐温800.8~1.2mL/L；1.5~2%的琼脂粉；MRS液体培养基：胰蛋白胨8~12 g/L；酵母粉4~6 g/L；牛肉膏8~12 g/L；葡萄糖15~25 g/L；柠檬酸氢二胺1~3 g/L；乙酸钠4~6 g/L；K2HPO4•3H2O 2.5~2.7 g/L；MgSO4•7H2O 0.1~0.3 g/L；MnSO4•4H2O 0.04~0.06 g/L；吐温80 0.8~1.2mL/L。
7.一种乳酸菌发酵枸杞复合饮品，其特征在于，按重量份计，所述乳酸菌发酵枸杞复合饮品包括50~70份经副干酪乳杆菌发酵获得的枸杞发酵液、10~20份氨基酸和10~30份膳食纤维；其中，所述副干酪乳杆菌（Lactobacillus paracasei）于2021年6月21日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保存地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.22744。
8.根据权利要求7所述的乳酸菌发酵枸杞复合饮品，其特征在于，所述经副干酪乳杆菌发酵获得的枸杞发酵液中活菌数不低于1×109 CFU/g。
9.根据权利要求7所述的乳酸菌发酵枸杞复合饮品，其特征在于，所述的氨基酸为牛磺酸、半胱氨酸、甲硫氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、缬氨酸七种必需氨基酸中的至少三种。
10.根据权利要求7所述的乳酸菌发酵枸杞复合饮品，其特征在于，所述的膳食纤维为纤维素、半纤维素和木质素三种非水溶性纤维中的至少两种。
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| PB01 | Publication | ||
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| CB02 | Change of applicant information | ||
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Country or region after: China Address after: No. 1800 road 214122 Jiangsu Lihu Binhu District City of Wuxi Province Applicant after: Jiangnan University Applicant after: Qizitang (Ningxia) Health Industry Co.,Ltd. Address before: No. 1800 road 214122 Jiangsu Lihu Binhu District City of Wuxi Province Applicant before: Jiangnan University Country or region before: China Applicant before: Ningxia Qizitang wolfberry precision manufacturing industry Co.,Ltd. |
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| GR01 | Patent grant | ||
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