CN116003642A - 一种碱性电解水提取羊肚菌多糖的方法及所得羊肚菌多糖 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种碱性电解水提取羊肚菌多糖的方法及所得羊肚菌多糖，涉及多糖提取技术领域，所述方法包括以下步骤：(1)羊肚菌粉碎处理，得羊肚菌粉；(2)羊肚菌粉和碱性电解水混合，水浴处理，固液分离，收集上清液，浓缩所述上清液，得浓缩液；(3)然后醇沉所述浓缩液，得沉淀物为羊肚菌多糖粗提物；(4)将所述羊肚菌多糖粗提物溶解后、去除蛋白，然后脱色取上清液，为纯化羊肚菌多糖。达到了提高羊肚菌多糖提取得率和提取效率的技术效果，并且所得提取物纯度高、生物活性好。
Description
技术领域
本发明涉及多糖提取技术领域，尤其涉及一种碱性电解水提取羊肚菌多糖的方法及所得羊肚菌多糖。
背景技术
羊肚菌营养丰富，因具有显著的药用和生物学特性而备受关注，作为其主要生物活性成分之一的多糖，具有抗氧化、增强免疫、抗肿瘤等生物活性，高效提取多糖并保持其优良生物活性，是充分利用羊肚菌多糖的重要前提。
多糖的活性受其结构影响，提取获得的多糖的结构又因提取方法而异。传统的羊肚菌多糖提取方法有热水浸提法、碱辅助法、酸辅助法，其中碱或酸提取多糖法，多糖分子结构易发生降解，对提取设备耐腐蚀性要求高，且产生的废水污染环境。亚临界水提取、脉冲电场提取、超声和微波辅助提取技术等新技术和技术集成不断涌现，这些技术具有提高多糖提取效率、省时等优点，但提取成本高、操作复杂。为满足工业化大规模生产，需要低成本、高得率，因此考虑对传统方法改进。
已有文献报道，将强碱性电解水应用于灵芝多糖的提取，可以提高其得率，扩大工业化生产规模，但会造成更多的消耗与污染。并且灵芝与羊肚菌属于不同亚门，因此灵芝多糖与羊肚菌多糖在链结构、单糖组成、分子量、糖醛酸组成及比例等方面均具有差异。灵芝的单糖组成较复杂，以葡萄糖、半乳糖和甘露糖为主的单糖主要构成灵芝多糖主链，岩藻糖、木糖和阿拉伯糖等糖单元主要构成其支链，通过β-(1→4)和β-(1→6)连接，羊肚菌单糖主要由葡萄糖和半乳糖组成，通过β-(1→6)糖苷键连接，相同溶剂对不同链结构提取效果不同；两者分子量也有较大差异，在使用强碱性电解水热提取过程中，可能会对链结构造成影响导致分子量分布范围更广，并且过强的碱性会影响其部分生物活性，应用受限。
发明内容
本发明的目的在于提供一种碱性电解水提取羊肚菌多糖的方法，达到羊肚菌多糖提取得率和提取效率高，并且所得提取物纯度高、生物活性好的技术效果。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种碱性电解水提取羊肚菌多糖的方法，包括以下步骤：
(1)羊肚菌粉碎处理，得羊肚菌粉；
(2)羊肚菌粉和碱性电解水混合，水浴处理，固液分离，收集上清液，浓缩所述上清液，得浓缩液；
(3)然后醇沉所述浓缩液，得沉淀物为羊肚菌多糖粗提物；
(4)将所述羊肚菌多糖粗提物溶解后、去除蛋白，然后脱色取上清液，为纯化羊肚菌多糖。
优选的，步骤(1)所述粉碎处理包括依次进行的初步粉碎和超微粉碎；所述初步粉碎后，过40～200目网筛，收集筛下物进行超微粉碎，再次过筛，得羊肚菌粉；再次过筛的筛网目数≥250目。
优选的，所述步骤(2)中，羊肚菌粉和碱性电解水混合比例为1g：30～40mL，碱性电解水pH为8～10；水浴处理温度为60～80℃，时间为0.5～2h；浓缩的温度为50～85℃，浓缩液体积为上清液体积的10～20％。
优选的，步骤(3)中所述醇沉用无水乙醇进行，无水乙醇与浓缩液的体积比为7～9:1～3。
优选的，步骤(3)中，醇沉所述浓缩液后，还包括离心处理，所述离心转速为5000～8000r/min，所述离心的时间为10～30min。
优选的，步骤(4)中所述去除蛋白采用酶解的方法，所述羊肚菌多糖粗提物溶解后获得羊肚菌多糖粗提物溶液，所述羊肚菌多糖粗提物溶液的浓度为0.8～1.2mg/mL；所述酶解采用木瓜蛋白酶进行，所述木瓜蛋白酶酶活为180～220U/mg，木瓜蛋白酶用量为羊肚菌多糖粗提物溶液总质量的2～4％。
优选的，所述酶解的温度为45～65℃，所述酶解的时间为25～45min，所述酶解的pH为6.5～7.5。
优选的，所述步骤(4)中脱色处理为：将H2O2溶液与去除蛋白后的羊肚菌多糖粗提物溶液混合摇匀脱色，所述H2O2溶液的质量为去除蛋白后的羊肚菌多糖粗提物溶液质量的0.5～1.5％，所述脱色的温度为25～35℃；所述脱色后还包括离心的步骤，所述离心的转速为3500～5500r/min，所述离心的时间为10～20min；所述H2O2溶液浓度为2～3mol/L。
优选的，所述步骤(4)中脱色取上清后还包括冷冻干燥的步骤，所述冷冻干燥的温度为-40～-80℃，所述冷冻干燥的时间为18～30h。
本发明还提供了所述碱性电解水提取羊肚菌多糖的方法制备得到的羊肚菌多糖提取物。
本发明提供了一种碱性电解水提取羊肚菌多糖的方法，本发明通过采用特定pH范围内的碱性电解水提取羊肚菌多糖，减小了对多糖分子量的影响，所得羊肚菌多糖的分子量分布较集中，纯度较高；并且本发明采用超微粉碎的方式配合碱性电解水提取，提高了所得羊肚菌多糖的纯度和生物活性，同时能够达到更高的提取得率和效率；减少了对于成本的消耗，同时碱性电解水可以在一段时间后自行还原成普通水质，达到了环保的技术效果。
附图说明
图1为单糖混合标准溶液的组成成分含量图(Man-甘露糖；Rib-核糖；Rha-鼠李糖；Xyl-木糖；Glc-葡萄糖；Gal-半乳糖)；
图2为实施例1、对比例1～2所得羊肚菌多糖中单糖组成图(MCP-1为实施例1、MCP-2为对比例1、MCP-3为对比例2；Man-甘露糖、Glc-葡萄糖、Gal-半乳糖)；
图3为实施例1、对比例1～2所得羊肚菌多糖的红外吸收光谱(MCP-1为实施例1、MCP-2为对比例1、MCP-3为对比例2)；
图4为实施例1、对比例1～2所得羊肚菌多糖的X衍射图(MCP-1为实施例1、MCP-2为对比例1、MCP-3为对比例2)。
具体实施方式
本发明提供了一种碱性电解水提取羊肚菌多糖的方法，包括以下步骤：
(1)羊肚菌粉碎处理，得羊肚菌粉；
(2)羊肚菌粉和碱性电解水混合，水浴处理，固液分离，收集上清液，浓缩所述上清液，得浓缩液；
(3)然后醇沉所述浓缩液，得沉淀物为羊肚菌多糖粗提物；
(4)将所述羊肚菌多糖粗提物溶解后、去除蛋白，然后脱色取上清液，为纯化羊肚菌多糖。
在本发明中，所述步骤(1)羊肚菌粉碎处理，得羊肚菌粉，粉碎处理包括依次进行的初步粉碎和超微粉碎，所述初步粉碎后，过网筛，收集筛下物进行超微粉碎，再次过筛，得羊肚菌粉；所述初步粉碎过筛，网筛粒径优选为40～200目，进一步优选为80～160目，再进一步优选为100～140目；所述超微粉碎再次过筛，筛网粒径优选为≥250目，进一步优选为≥300目；所述初步粉碎优选的采用CSM-280H中药粉碎机进行粉碎，所述超微粉碎优选为采用CJ120超微粉碎机进行。
在本发明中，所述步骤(2)羊肚菌粉和碱性电解水混合，水浴处理，固液分离，收集上清液，浓缩所述上清液，得浓缩液；羊肚菌粉和碱性电解水混合比例优选为1g：30～40mL，进一步优选为1g：32～38mL，再进一步优选为1g：34～36mL；碱性电解水pH优选为8～10，进一步优选为8.5～9.5，再进一步优选为8.8～9.2；所述碱性电解水由多功能富氢水制备器制备，电解槽阳极加入饱和KCl溶液，阴极接入纯水，施加20V电压，电解一定时间测定得到碱性电解水；水浴处理的温度优选为60～80℃，进一步优选为65～75℃，再进一步优选为68～72℃；水浴处理的时间优选为0.5～2h，进一步优选为0.8～1.7h，再进一步优选为1～1.5h；浓缩优选的采用旋转蒸发仪进行，浓缩的温度优选为50～85℃，进一步优选为55～80℃，进一步优选为60～75℃；浓缩液的体积优选为上清液体积的10～20％，进一步优选为12～18％，再进一步优选为14～16％。
在本发明中，所述步骤(3)醇沉所述浓缩液，然后离心处理，得沉淀物为羊肚菌多糖粗提物；醇沉优选的采用无水乙醇进行，无水乙醇与浓缩液的体积比优选为7～9:1～3，进一步优选为7.5～8.5:1.5～2.5，再进一步优选为8:2；离心转速优选为5000～8000r/min，进一步优选为5500～7500r/min，再进一步优选为6000～7000r/min，离心时间优选为10～30min，进一步优选为15～25min，再进一步优选为18～22min。
在本发明中，所述步骤(4)将所述羊肚菌多糖粗提物溶解后、去除蛋白，然后脱色取上清液，为纯化羊肚菌多糖，所述去除蛋白优选为采用酶解的方法；所述羊肚菌多糖粗提物溶解后获得羊肚菌多糖粗提物溶液，羊肚菌多糖粗提物溶液的浓度优选为0.8～1.2mg/mL，进一步优选为0.9～1.1mg/mL，再进一步优选为1mg/mL；所述酶解优选为采用木瓜蛋白酶进行，木瓜蛋白酶酶活优选为180～220U/mg，进一步优选为190～210U/mg，再进一步优选为195～205U/mg，木瓜蛋白酶用量优选为羊肚菌多糖粗提物溶液总质量的2～4％，进一步优选为2.5～3.5％，再进一步优选为3％；所述酶解温度优选为45～65℃，进一步优选为50～60℃，再进一步优选为52～58℃，酶解时间优选为25～45min，进一步优选为30～40min，再进一步优选为32～38min，酶解的pH优选为6.5～7.5，进一步优选为6.8～7.2，再进一步优选为6.9～7.1。
在本发明中，所述步骤(4)中脱色处理优选为将H2O2溶液与去除蛋白后的羊肚菌多糖粗提物溶液混合摇匀脱色，所述H2O2溶液的质量优选为去除蛋白后的羊肚菌多糖粗提物溶液质量的0.5～1.5％，进一步优选为0.8～1.2％，再进一步优选为1％，所述H2O2溶液浓度优选为2～3mol/L，进一步优选为2.2～2.8mol/L，再进一步优选为2.4～2.6mol/L；所述脱色的温度优选为25～35℃，进一步优选为28～32℃，再进一步优选为30℃；所述脱色取上清液为离心处理，离心的转速优选为3500～5500r/min，进一步优选为3600～5400r/min，再进一步优选为3800～5200r/min，离心的时间优选为10～20min，进一步优选为12～18min，再进一步优选为14～16min。
在本发明中，所述步骤(4)脱色取上清后，优选的还包括冷冻干燥步骤，所述冷冻干燥的温度优选为-40～-80℃，进一步优选为-50～-70℃，再进一步优选为-55～-65℃，所述冷冻干燥的时间优选为18～30h，进一步优选为20～28h，再进一步优选为22～26h。
本发明还提供了所述碱性电解水提取羊肚菌多糖的方法制备得到的羊肚菌多糖提取物。
下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
选取城口县羊肚菌子实体，50℃烘干至恒重，将所述羊肚菌进行初步粉碎，过120目筛网，收集筛下物进行超微粉碎，过300目筛网，得羊肚菌粉；取5.0g羊肚菌粉和pH为9的碱性电解水以料液比1g：35mL混合，进行水浴处理，水浴温度为80℃，水浴时间为1h，然后5500r/min离心15min，固液分离，收集上清液；在65℃温度条件下浓缩，浓缩至所述滤液体积的15％，得浓缩液；无水乙醇与浓缩液按照体积比8:2混合，进行醇沉处理，6500r/min离心20min分离沉淀，得到羊肚菌多糖提取物；将羊肚菌多糖粗提物溶解配置成浓度为1mg/mL的溶液，加入羊肚菌多糖粗提物溶液总质量3％的木瓜蛋白酶，木瓜蛋白酶酶活为200U/mg，55℃，pH为7的环境下，酶解35min，80℃下灭酶30min，取出冷却；加入浓度为2.5mol/L的H2O2溶液，加入H2O2溶液的质量为去除蛋白后的羊肚菌多糖粗提物溶液质量的1％，在30℃下脱色处理，然后4500r/min离心15min，除去沉淀，取上清，放入-60℃，冷冻干燥24h，得到羊肚菌多糖提取物。
实施例2
选取城口县羊肚菌子实体，50℃烘干至恒重，将所述羊肚菌进行初步粉碎，过40目筛网，收集筛下物进行超微粉碎，过250目筛网，得羊肚菌粉；取5.0g羊肚菌粉和pH为8的碱性电解水以料液比1g：30mL混合，进行水浴处理，水浴温度为60℃，水浴时间为2h，然后5500r/min离心15min，固液分离，收集上清液；在50℃温度条件下浓缩，浓缩至所述滤液体积的20％，得浓缩液；无水乙醇与浓缩液按照体积比7:3混合，进行醇沉处理，5000r/min离心30min分离沉淀，得到羊肚菌多糖提取物；将羊肚菌多糖粗提物溶解配置成浓度为0.8mg/mL的溶液，加入羊肚菌多糖粗提物溶液总质量2％的木瓜蛋白酶，木瓜蛋白酶酶活为180U/mg，45℃，pH为6.5的环境下，酶解25min，80℃下灭酶30min，取出冷却；加入浓度为2mol/L的H2O2溶液，加入H2O2溶液的质量为去除蛋白后的羊肚菌多糖粗提物溶液质量的0.5％，在25℃下脱色处理，然后3500r/min离心20min，除去沉淀，取上清，放入-80℃，冷冻干燥18h，得到羊肚菌多糖提取物。
实施例3
选取城口县羊肚菌子实体，50℃烘干至恒重，将所述羊肚菌进行初步粉碎，过200目筛网，收集筛下物进行超微粉碎，过300目筛网，得羊肚菌粉；取5.0g羊肚菌粉和pH为10的碱性电解水以料液比1g：40mL混合，进行水浴处理，水浴温度为70℃，水浴时间为2h，然后5500r/min离心15min，固液分离，收集上清液；在85℃温度条件下浓缩，浓缩至所述滤液体积的10％，得浓缩液；无水乙醇与浓缩液按照体积比9:1混合，进行醇沉处理，8000r/min离心10min分离沉淀，得到羊肚菌多糖提取物；将羊肚菌多糖粗提物溶解配置成浓度为1.2mg/mL的溶液，加入羊肚菌多糖粗提物溶液总质量4％的木瓜蛋白酶，木瓜蛋白酶酶活为220U/mg，65℃，pH为7.5的环境下，酶解25min，80℃下灭酶30min，取出冷却；加入浓度为3mol/L的H2O2溶液，加入H2O2溶液的质量为去除蛋白后的羊肚菌多糖粗提物溶液质量的1.5％，在35℃下脱色处理，然后5500r/min离心10min，除去沉淀，取上清，放入-40℃，冷冻干燥30h，得到羊肚菌多糖提取物。
对比例1
选取城口县羊肚菌子实体，50℃烘干至恒重，将所述羊肚菌进行初步粉碎，过120目筛网，收集筛下物进行超微粉碎，过300目筛网，得羊肚菌粉；取5.0g羊肚菌粉和pH为7的纯水以料液比1g：35mL混合，进行水浴处理，水浴温度为80℃，水浴时间为1h，然后5500r/min离心15min，固液分离，收集上清液；在65℃温度条件下浓缩，浓缩至所述滤液体积的15％，得浓缩液；无水乙醇与浓缩液按照体积比8:2混合，进行醇沉处理，6500r/min离心20min分离沉淀，得到羊肚菌多糖提取物；将羊肚菌多糖粗提物溶解配置成浓度为1mg/mL的溶液，加入羊肚菌多糖粗提物溶液总质量3％的木瓜蛋白酶，木瓜蛋白酶酶活为200U/mg，55℃，pH为7的环境下，酶解35min，80℃下灭酶30min，取出冷却；加入浓度为2.5mol/L的H2O2溶液，加入H2O2溶液的质量为去除蛋白后的羊肚菌多糖粗提物溶液质量的1％，在30℃下脱色处理，然后4500r/min离心15min，除去沉淀，取上清，放入-60℃，冷冻干燥24h，得到羊肚菌多糖提取物。
对比例2
选取城口县羊肚菌子实体，50℃烘干至恒重，将所述羊肚菌进行初步粉碎，过120目筛网，收集筛下物进行超微粉碎，过300目筛网，得羊肚菌粉；取5.0g羊肚菌粉和pH为9的食品级氢氧化钠溶液以料液比1g：35mL混合，进行水浴处理，水浴温度为80℃，水浴时间为1h，然后5500r/min离心15min，固液分离，收集上清液；在65℃温度条件下浓缩，浓缩至所述滤液体积的15％，得浓缩液；无水乙醇与浓缩液按照体积比8:2混合，进行醇沉处理，6500r/min离心20min分离沉淀，得到羊肚菌多糖提取物；将羊肚菌多糖粗提物溶解配置成浓度为1mg/mL的溶液，加入羊肚菌多糖粗提物溶液总质量3％的木瓜蛋白酶，木瓜蛋白酶酶活为200U/mg，55℃，pH为7的环境下，酶解35min，80℃下灭酶30min，取出冷却；加入浓度为2.5mol/L的H2O2溶液，加入H2O2溶液的质量为去除蛋白后的羊肚菌多糖粗提物溶液质量的1％，在30℃下脱色处理，然后4500r/min离心15min，除去沉淀，取上清，放入-60℃，冷冻干燥24h，得到羊肚菌多糖提取物。
实验例
(一)羊肚菌多糖提取物中多糖重量的测定
分别称取干燥后的实施例1、对比例1和对比例2中的羊肚菌多糖提取物配制为1mg/mL溶液，各取1mL置于10mL比色管中，分别加入5％苯酚溶液1mL，摇匀，匀速加入5mL浓硫酸，立即摇匀后冷却至室温，多糖浓度经吸光度在490nm下进行检测，多糖含量经紫外检测，然后得到羊肚菌多糖提取物的重量，具体如下：
待测多糖提取物中多糖重量＝多糖浓度C×稀释倍数；
多糖占多糖提取物的百分比＝多糖含量/多糖提取物含量×100％。
表1实施例1、对比例1和对比例2羊肚菌多糖提取率对比
| 组别 | 实施例1 | 对比例1 | 对比例2 |
| 羊肚菌多糖提取物含量/g | 8.525 | 8.137 | 8.231 |
| 羊肚菌多糖含量/g | 7.056 | 6.428 | 6.381 |
| 多糖所占百分比/％ | 82.76 | 78.99 | 77.52 |
结果如表1所示，实施例1相比于对比例1～2的羊肚菌多糖提取率更高，纯度更高，实施例1的羊肚菌多糖提取物具有更高的多糖含量，说明本发明的机械破壁超微粉碎、碱性电解水的组合，有效地提高了羊肚菌多糖的提取率。
(二)羊肚菌多糖提取物的抗氧化活性的测定
准确称取DPPH用无水乙醇配制成浓度为0.2mmol/L的溶液，配制不同浓度(2.5、2、1.5、1、0.5mg/mL)的实施例1、对比例1和对比例2羊肚菌多糖提取物溶液与等体积DPPH混合，纯水、乙醇做空白对照，摇匀后避光反应25min，测吸光值，根据下式计算清除率；
式中：A0为纯水组吸光度；A1为乙醇组吸光度；A2为样品吸光度。
分别取0.50mL不同浓度(2.5、2、1.5、1、0.5mg/mL)的实施例1、对比例1和对比例2羊肚菌多糖提取物溶液，与等体积磷酸缓冲液(pH＝6.6)、质量浓度为1％铁氰化钾混合，50℃水浴25min，冷却至室温，再加入1.00mL质量浓度为10％的三氯乙酸，混匀取1mL上清液加入0.25mL质量浓度为0.1％氯化铁溶液，避光反应30min，于700nm测吸光度值。通过比较羊肚菌多糖提取物溶液和VC的吸光度，判断多糖的还原能力。
表2羊肚菌多糖提取物的体外抗氧化活性对比
实施例1及对比例1的样品均能够对DPPH的自由基进行清除，且清除率较高，说明实施例1及对比例1的样品均具有抗氧化性，而实施例1的提纯后的羊肚菌多糖提取物样品的DPPH自由基清除率、FRAP还原力均高于相同浓度的对比例1的羊肚菌多糖提取物粗品，说明在提纯后，提升了羊肚菌多糖提取物的抗氧化性能。
(三)羊肚菌多糖提取物的结构性质测定
纯度鉴定和分子量测定：凝胶渗透色谱法测定多糖分子量分布和纯度，配制实施例1、对比例1和对比例2的羊肚菌多糖提取物溶液(2mg/mL)过0.45μm微孔滤膜进入系统，使用Sepax SRT SEC-100(7.8mm×300mm)凝胶柱；流速1mL/min，柱温40℃；通过一系列不同分子量(708kDa、344kDa、107kDa、47kDa、5908Da)标准聚钠盐(苯乙烯磺酸钠)校准，根据保留时间计算待测多糖的分子质量。
表3实施例1、对比例1和对比例2羊肚菌多糖提取物多糖相对分子质量及其分布(MCP-1-实例1；MCP-2-对比例1；MCP-3-对比例2)
分子量分布见表3，纯水和电解水所得多糖重均分子量、峰分子量接近，略高于碱水得多糖，说明用碱性电解水提取不会对羊肚菌多糖分子造成很大影响。
(四)羊肚菌多糖提取物的单糖组成测定
单糖组成测定方法为：取10mg纯化多糖三氟乙酸水解2h，取1mL水解液加入1mL甲醇摇匀，70℃水浴同时N2吹干；分别取0.5mL样品水解液与单糖标准溶液混合，加入0.5mL的PMP-甲醇溶液混匀，70℃反应2h，调节pH至6～7过0.22μm水系膜进液相系统分析；使用Agilent EC-C18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)，进样量8μL，流速0.8mL/min，流动相A为25mmol/L乙酸铵缓冲液：B乙腈＝80:20。
结果如图1～2所示，羊肚菌单糖组成以及摩尔质量百分比分别为实施例1甘露糖4.18％、葡萄糖44.77％、半乳糖51.05％；对比例1甘露糖3.87％、葡萄糖44.94％、半乳糖51.19％；对比例2甘露糖3.32％、葡萄糖47.03％、半乳糖49.65％。实施例1、对比例1和对比例2三种提取方法所得多糖在单糖组成种类上没有区别，仅在比例上略有差异，原因可能是多糖分子在提取过程中受高温、碱性条件影响部分降解，导致单糖组成比例不同。
(五)傅里叶红外光谱检测
将干燥处理的羊肚菌多糖提取物3mg置于压片模具中，在400-4000cm-1波数范围内以空气为背景进行扫描。
红外扫描结果如图3，实施例1、对比例1和对比例2三种多糖出峰位置无差异，3399cm-1处由多糖的O-H伸缩震动引起波数变化；1620cm-1处峰由C＝O弯曲震动产生，结合1405cm-1的峰可以认定有半乳聚糖的存在，符合单糖组成测定结果；出现于1200～1000cm－1范围的吸收峰如1076和1147cm-1处的小肩通常是多糖中的吡喃糖结构；845和922cm-1处的吸收峰表明多糖含有α型糖苷键。据报道灰树花子实体具有α构型的吡喃糖有明显的免疫功能，羊肚菌多糖也检测到相似结构，可能具有相似功能；三种方法得到的多糖均具有相同的典型红外光谱特征峰，因此碱性电解水作为溶剂提取多糖，不会影响其结构。
(六)X-射线衍射检测
将干燥的实施例1、对比例1和对比例2的羊肚菌多糖均匀置于X射线衍射仪样品池，测试条件为：X射线的波长λ＝0.154178nm；管压40kV；扫描范围(2θ)10～65°，扫描速度5°/min。
结晶性测定结果如图4，因为碱性电解水含小分子团簇渗透性强，渗入并包裹使细胞壁结合多糖转化为可溶性多糖，同时使多糖分子链排列更规则结晶度改变，利于后续醇沉析出。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种碱性电解水提取羊肚菌多糖的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)羊肚菌粉碎处理，得羊肚菌粉；
(2)羊肚菌粉和碱性电解水混合，水浴处理，固液分离，收集上清液，浓缩所述上清液，得浓缩液；
(3)然后醇沉所述浓缩液，得沉淀物为羊肚菌多糖粗提物；
(4)将所述羊肚菌多糖粗提物溶解后、去除蛋白，然后脱色取上清液，为纯化羊肚菌多糖。
2.如权利要求1所述碱性电解水提取羊肚菌多糖的方法，其特征在于，步骤(1)所述粉碎处理包括依次进行的初步粉碎和超微粉碎；所述初步粉碎后，过40～200目网筛，收集筛下物进行超微粉碎，再次过筛，得羊肚菌粉；再次过筛的筛网目数≥250目。
3.如权利要求2所述碱性电解水提取羊肚菌多糖的方法，其特征在于，所述步骤(2)中，羊肚菌粉和碱性电解水混合比例为1g：30～40mL，碱性电解水pH为8～10；水浴处理温度为60～80℃，时间为0.5～2h；浓缩的温度为50～85℃，浓缩液体积为上清液体积的10～20％。
4.如权利要求1所述碱性电解水提取羊肚菌多糖的方法，其特征在于，步骤(3)中所述醇沉用无水乙醇进行，无水乙醇与浓缩液的体积比为7～9:1～3。
5.如权利要求4所述碱性电解水提取羊肚菌多糖的方法，其特征在于，步骤(3)中，醇沉所述浓缩液后，还包括离心处理，所述离心转速为5000～8000r/min，所述离心的时间为10～30min。
6.如权利要求1所述碱性电解水提取羊肚菌多糖的方法，其特征在于，步骤(4)中所述去除蛋白采用酶解的方法，所述羊肚菌多糖粗提物溶解后获得羊肚菌多糖粗提物溶液，所述羊肚菌多糖粗提物溶液的浓度为0.8～1.2mg/mL；所述酶解采用木瓜蛋白酶进行，所述木瓜蛋白酶酶活为180～220U/mg，木瓜蛋白酶用量为羊肚菌多糖粗提物溶液总质量的2～4％。
7.如权利要求6所述碱性电解水提取羊肚菌多糖的方法，其特征在于，所述酶解的温度为45～65℃，所述酶解的时间为25～45min，所述酶解的pH为6.5～7.5。
8.如权利要求1所述碱性电解水提取羊肚菌多糖的方法，其特征在于，所述步骤(4)中脱色处理为：将H2O2溶液与去除蛋白后的羊肚菌多糖粗提物溶液混合摇匀脱色，所述H2O2溶液的质量为去除蛋白后的羊肚菌多糖粗提物溶液质量的0.5～1.5％，所述脱色的温度为25～35℃；所述脱色后还包括离心的步骤，所述离心的转速为3500～5500r/min，所述离心的时间为10～20min；所述H2O2溶液浓度为2～3mol/L。
9.如权利要求1所述碱性电解水提取羊肚菌多糖的方法，其特征在于，所述步骤(4)中脱色取上清后还包括冷冻干燥的步骤，所述冷冻干燥的温度为-40～-80℃，所述冷冻干燥的时间为18～30h。
10.权利要求1～9所述任意一项所述的碱性电解水提取羊肚菌多糖的方法制备得到的羊肚菌多糖提取物。
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| CN (1) | CN116003642B (zh) |
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2022
- 2022-07-27 CN CN202210888702.2A patent/CN116003642B/zh active Active
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