CN115980242A - 一种基于低共熔溶剂的葛根中五种药效成分的提取方法 - Google Patents
一种基于低共熔溶剂的葛根中五种药效成分的提取方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供一种基于低共熔溶剂的葛根中五种药效成分的提取方法，低共熔溶剂的制备采用一步制备法，将按照一定摩尔比的氢键供体与受体进行混合，直至形成稳定的液体；然后将所述低共熔溶剂加入经过前处理的葛根中，制备样品溶液后，进行HPLC检测。其中，葛根中五种药效成分为3‑羟基葛根素，葛根素、3‑甲氧基葛根素、大豆苷、大豆苷元；样品溶液的制备时利用超声辅助；所述低共熔溶剂的氢键供体为尿素，果糖，或葡萄糖，受体为氯化胆碱或甜菜碱。本发明低共熔溶剂制备简单，经济，无需辅助技术，无需提纯，采用一步制备法。
Description
技术领域
本发明涉及天然有机化合物提取与分离技术领域，具体涉及一种基于低共熔溶剂的葛根中五种药效成分的提取方法。
背景技术
公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
葛根别名野葛，在一些西方国家，葛根提取物被应用于医疗卫生保健行业。葛根总黄酮提取液可以增加女性雌激素含量，治疗痛经。葛根还具有治疗头痛发热，心痛等的症状，葛根中含有人类所需要的必要元素如钙，铁，锌等。葛根中的主要营养成分包括3-羟基葛根素，葛根素，大豆苷，大豆苷元。贯众、干葛花、葛根、甘草、缩砂仁等5种中药材组成葛根散，出自《儒门事亲》卷十二，用于治疗饮酒过度，酒毒内蕴者。
异黄酮类化合物是葛根中的主要生物活性成分，其中葛根素含量最高。目前对葛根中的葛根素的提取研究分为两种。一种是对葛根中黄酮类有效成分的提取研究。另一种是对葛根中总黄酮提取方法的优化研究。但在诸多研究中，使用低共熔溶剂进行活性成分提取的很少。低共熔溶剂化学性质稳定，热稳定性高，热容量大，在化学各个领域都受到科学工作者的广泛关注。
目前工业污染日益严重，研究使用新型绿色溶剂来提取天然化合物中的有效成分，减少环境污染，这一重要任务日益紧迫。
发明内容
为了解决现有技术的不足，本发明提供一种基于低共熔溶剂的葛根中五种药效成分的提取方法。根据低共熔溶剂对提取效率的影响，提取葛根中的大豆苷元，大豆苷，3-甲氧基葛根素，葛根素，3-羟基葛根素，测算出总黄酮含量，得出最适宜提取条件。
为了实现上述目的，本发明的技术方案为：
本发明的第一方面，提供一种基于低共熔溶剂的葛根中五种药效成分的提取方法，其特征在于，所述低共熔溶剂的制备采用一步制备法，将按照一定摩尔比的氢键供体与受体进行混合，直至形成稳定的液体；取一定量经过前处理的葛根置于比色管中，再加入所述低共熔溶剂，后将比色管放入数控超声波清洗器中进行超声，摇匀静置后，进行离心，取上清液制备样品溶液，进行HPLC检测；
所述氢键供体为尿素、柠檬酸、果糖或葡萄糖，受体为氯化胆碱或甜菜碱，所述葛根与低共熔溶剂的质量比为1:1
本发明的第二方面，提供一种基于上述低共熔溶剂的葛根中五种药效成分的提取方法所采用的低共熔溶剂。
本发明的有益效果为：
(1)本发明低共熔溶剂制备简单，经济，无需辅助技术，无需提纯，采用一步制备法，将两种或者两种以上的化合物进行混合，直至形成稳定的液体，低共熔溶剂对水和空气相对稳定，一般在常温常压下进行，基本不需要真空或惰性气氛等特殊环境。
(2)本发明根据低共熔溶剂对提取效率的影响，提取葛根中的大豆苷元，大豆苷，3-甲氧基葛根素，葛根素，3-羟基葛根素，测算出总黄酮含量，得出最适宜提取条件。
附图说明
构成本发明的一部分的说明书附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。
图1为本发明实施例1中3-羟基葛根素标准曲线图。
图2为本发明实施例1中葛根素标准曲线图。
图3为本发明实施例1中3-甲氧基葛根素标准曲线图。
图4为本发明实施例1中大豆苷标准曲线图。
图5为本发明实施例1中大豆苷元标准曲线图。
图6为本发明实施例2中葛根中五种有效成分提取高效液相色谱图。
图7为本发明实施例3中温度对葛根素提取率的影响。
图8为本发明实施例3中温度对3-羟基葛根素提取率的影响。
图9为本发明实施例3中温度对3-甲氧基葛根素提取率的影响。
图10为本发明实施例3中温度对大豆苷提取率的影响。
图11为本发明实施例3中温度对大豆苷元提取率的影响。
图12为本发明实施例4中时间对3-羟基葛根素提取率的影响。
图13为本发明实施例4中时间对葛根素提取率的影响。
图14为本发明实施例4中时间对3-甲氧基葛根素提取率的影响。
图15为本发明实施例4中时间对大豆苷提取率的影响。
图16为本发明实施例4中时间对大豆苷元提取率的影响。
图17为本发明实施例5中水量对3-羟基葛根素提取率的影响。
图18为本发明实施例5中水量对葛根素提取率的影响。
图19为本发明实施例5中水量对3-甲氧基葛根素提取率的影响。
图20为本发明实施例5中水量对大豆苷提取率的影响。
图21为本发明实施例5中水量对大豆苷提取率的影响。
具体实施方式
应该指出，以下详细说明都是示例性的，旨在对本发明提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本发明的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。
目前工业污染日益严重，研究新型绿色溶剂，减少环境污染，这一重要任务日益紧迫，该选题的主要目的是研究低共熔溶剂提取葛根中5种活性成分的工艺研究，深入研究低共熔溶剂对提取效率的影响，提取葛根中的大豆苷元，大豆苷，3-甲氧基葛根素，葛根素，3-羟基葛根素，测算出总黄酮含量，得出最适宜提取条件。为其他中药材的高效绿色提取提供方向。
本发明以葛根为研究对象，葛根中含有3-羟基葛根素，葛根素，大豆苷，大豆苷元，3-甲氧基葛根素等活性成分，采用超声辅助低共熔溶剂，低共熔溶剂提取活性成分，用于达成一定的药物治疗作用，提高其在工业中的实际应用。
本发明提供一种基于低共熔溶剂的葛根中五种药效成分的提取方法，所述低共熔溶剂的制备采用一步制备法，将按照一定摩尔比的氢键供体与受体进行混合，直至形成稳定的液体；取一定量经过前处理的葛根置于比色管中，再加入所述低共熔溶剂，后将比色管放入数控超声波清洗器中进行超声，摇匀静置后，进行离心，取上清液制备样品溶液，进行HPLC检测；
所述氢键供体为尿素、柠檬酸、果糖或葡萄糖，受体为氯化胆碱或甜菜碱，所述葛根与低共熔溶剂的质量比为1:1。
在本发明的一些典型实施方式中，所述一步制备法的具体方式为：按照一定摩尔比将氢键供体与受体倒入圆底烧瓶，加入磁子，将圆底烧瓶放入集热式恒温加热磁力搅拌器中，设置温度进行反应2-3小时，生成均一稳定的低共熔溶剂；
优选的，所述反应时间为2小时。
在本发明的一些典型实施方式中，所述设置温度的方式为：氯化胆碱型低共熔溶剂设为80℃，甜菜碱型低共熔溶剂设为100℃；
所述氯化胆碱型低共熔溶剂的氢键供体分别为尿素、柠檬酸、葡萄糖、果糖，受体都为氯化胆碱；所述甜菜碱型低共熔溶剂的氢键供体分别为甲酸、乙酸，受体都为甜菜碱。
在本发明的一些典型实施方式中，所述氢键供体为氯化胆碱，受体为果糖；
进一步的，所述一定摩尔比为1:5-3:1；优选为1:2-2:1。
在本发明的一些典型实施方式中，所述葛根的前处理步骤为：
将野生葛根放入粉碎机进行粉碎，而后用不同规格的筛子过筛，得到不同颗粒度的样品，50-70目，优选为60-70目，将样片存放于矿样袋于干燥阴暗的环境储存；
进一步地，所述葛根中五种药效成分为3-羟基葛根素，葛根素、3-甲氧基葛根素、大豆苷、大豆苷元。
在本发明的一些典型实施方式中，所述样品溶液的制备步骤为：
准确称取99.5g至100.5g的葛根样品于1.0L的玻璃容器内中，加入低共熔溶剂，然后加入去离子水，将其放入数控超声波清洗器中进行超声，摇匀静置后，进行离心，取上层清液1.0mL加入甲醇，混匀，移用1.0mL，经有机膜过滤得到样品溶液。
进一步地，所述超声温度为30-70℃，优选为60℃；
进一步地，所述超声时间为5-30min，优选为30min；
进一步地，所述去离子水的加入量为1-5mL，优选为400mL；
进一步地，所述甲醇为3.9mL 60％的甲醇；
进一步地，所述有机膜的孔径为0.45μm。
在本发明的一些典型实施方式中，所述HPLC分析的条件包括：采用GL SciencesInertSustain C18 column，粒径为5μm，内径为250mm×4.6mm。
在本发明的一些典型实施方式中，所述HPLC分析条件包括：用乙腈作为B泵，0.1％甲酸A泵作为流动相；
流速为1.0mL/min；
进样量为20.0μL；
检测波长为λ＝260nm。
在本发明的一些典型实施方式中，所述HPLC分析条件还包括梯度洗脱：
0min：85％A，15％B；
16min：70％A，30％B；
30min：100％B，0％A；
31min：85％B，15％A；
40min：85％A，15％B。
在本发明的另一种典型实施方式中，提供一种基于上述低共熔溶剂的葛根中五种药效成分的提取方法所采用的低共熔溶剂。
为了使得本领域技术人员能够更加清楚地了解本发明的技术方案，以下将结合具体的实施例详细说明本发明的技术方案。
本发明所使用材料与试剂：
野葛根：济南中鲁医院；
甲醇：北京百灵威科技有限公司；
乙腈：赛默飞世尔科技(中国)有限公司；
甲酸：天津市光复精细化工研究所；
去离子水：山东省分析测试中心
葛根素标准品：上海源叶生物科技有限公司；
3-甲氧基葛根素标准品：上海源叶生物科技有限公司；
大豆苷标准品：上海源叶生物科技有限公司；
大豆苷元标准品：上海源叶生物科技有限公司；
3-羟基葛根素标准品：上海源叶生物科技有限公司。
本发明所使用的实验仪器：
BPG-9156A型精密鼓风干燥箱：上海精宏实验设备有限公司；
XS205型电子天平：METTLER TOLEDO；
集热式恒温加热磁力搅拌器：巩义市英峪高科仪器厂；
SPD-20A型液相色谱仪(紫外)：安捷伦1260；
KQ-600KDE型数控超声清洗仪：昆山市超声仪器有限公司；
电热恒温水浴锅：北京市永光明医疗仪器有限公司。
实施例1
(1)制备低共熔溶剂
将按照一定摩尔比的氢键供体如尿素，果糖，葡萄糖等与受体如氯化胆碱，甜菜碱倒入圆底烧瓶，加入磁子，将圆底烧瓶放入集热式恒温加热磁力搅拌器中，设置温度(氯化胆碱型设为80℃，甜菜碱型设为100℃)反应2小时左右，生成均一稳定的低共熔溶剂。
(2)葛根的前处理
将野生葛根放入粉碎机进行粉碎，而后用不同规格的筛子过筛，得到不同颗粒度的样品，50-70目，优选为60-70目，本实施例中将样片存放于山东省分析测试中心矿样袋于干燥阴暗的环境储存。
(3)样品溶液的制备
准确称取100.0g(±0.5g)的葛根样品于1.0L玻璃容器中，加入低共熔溶剂，然后加入300mL的去离子水，将其放入数控超声波清洗器中于30摄氏度超声10min，摇匀静置后，进行离心，取上层清液1.0mL,加入3.9mL 60％的甲醇，混匀，移用1.0mL，经0.45μm有机膜过滤得到样品溶液，进行HPLC检测。
(4)色谱条件
用低共熔溶剂和低共熔溶剂获得的葛根样品提取液进行HPLC分析，分析条件如下：采用GL Sciences InertSustain C18 column(5μm，250mm×4.6mm)；用乙腈作为B泵，0.1％甲酸A泵作为流动相
梯度洗脱：0min：85％A，15％B；
16min：70％A，30％B；
30min：100％B，0％A；
31min：85％B，15％A；
40min：85％A，15％B；
检测波长为λ＝260nm；
流速为1.0mL/min；
进样量为20.0μL。
比较保留时间、峰面积、分离效果，并考察其重现性。
(5)葛根五种有效成分的标准曲线的绘制
称取3-羟基葛根素1.32mg于10mL棕色容量瓶中，用甲醇定容，M＝0.132mg/mL；
称取葛根素2.02mg于10mL棕色容量瓶中，用甲醇定容，M＝0.202mg/mL。
称取3-甲氧基葛根素2.14mg于10mL棕色容量瓶中，用甲醇定容，M＝0.214mg/mL。
称取大豆苷1.28mg于10mL棕色容量瓶中，用甲醇定容，M＝0.128mg/mL。
称取大豆苷元1.24mg于10mL棕色容量瓶中，用甲醇定容，M＝0.124mg/mL。
取M＝0.132mg/mL的3-羟基葛根素0.5mL用60％的甲醇定容至10mL得到M＝6.6ug/mL。
取M＝0.202mg/mL葛根素2.5mL用60％的甲醇定容至10mL得到M＝5.5ug/mL。
取M＝0.214mg/mLl3-甲氧基葛根素1mL，用60％的甲醇定容至10mL得到M＝21.4ug/mL。
取M＝0.128mg/mL大豆苷0.5mL用60％的甲醇定容至10mL得到M＝6.4ug/mL。
取M＝0.124mg/mL大豆苷元0.5mL用60％的甲醇定容至10mL得到M＝6.2ug/mL取稀释后的3-羟基基葛根素、葛根素、3-甲氧基葛根素、大豆苷0.2mL和40μL的稀释后的大豆苷元和160μL的60％的甲醇。
而后3-羟基基葛根素、葛根素、3-甲氧基葛根素、大豆苷、大豆苷元进行HPLC检测，以标准品浓度为横坐标，色谱峰面积值为纵坐标，绘制标准曲线，分别得到3-羟基基葛根素、葛根素、3-甲氧基葛根素、大豆苷、大豆苷元的曲线方程，分别如图1、图2、图3、图4、图5所示。
实施例2
低共熔溶剂对葛根中五种有效成分提取效率的影响
(1)准确称取100.0g(±0.5g)的葛根样品，于1.0L玻璃容器内中，在提取时间30min，药材颗粒度大于70目，分别加入不同的低共熔溶剂提取溶剂，加水量300mL条件下，经HPLC检测，其他试验条件与实施例1相同。
其中，DES-1的氢键供体为氯化胆碱，受体为尿素，摩尔比为1：2；
DES-2的氢键供体为氯化胆碱，受体为柠檬酸，摩尔比为1：2；
DES-3的氢键供体为氯化胆碱，受体为葡萄糖，摩尔比为1：2；
DES-4的氢键供体为氯化胆碱，受体为果糖，摩尔比为1：2；
DES-5的氢键供体为甜菜碱，受体为甲酸，摩尔比为1：2；
DES-6的氢键供体为甜菜碱，受体为乙酸，摩尔比为1：2。
经HPLC检测，色谱图如图6所示，结果如表1。由表格得DES-4提取效果最好。
表1不同低共熔溶剂的提取效率
实施例3
温度对葛根中五种黄酮有效成分提取效率的影响
准确称取100.0g(±0.5g)的葛根样品，于1.0L玻璃容器内中，在提取时间30min，药材颗粒度大于70目，加入100.0g DES-4，加水量3mL条件下，选择提取温度分别为：30℃、40℃、60℃、70℃进行提取，其他试验条件与实施例1相同。经HPLC检测结果如图7、图8、图9、图10及图11所示。
经HPLC检测可以看出，加入100.0g低共熔溶剂时，随着提取温度逐渐升高，3-羟基葛根素随着温度的升高，显减小后增大。葛根素的提取率呈先增加后减少的趋势，在60℃时提取率最大，即葛根素的提取量随着提取温度的升高先增多后降低，在60℃时提取量最高，而60℃以后提取量逐渐减少，随着温度升高，一些物质分解转化为其他物质，温度逐渐升高导致有效成分部分分解；大豆苷的提取率随着提取温度的升高呈先增加后减少的趋势，即大豆苷的提取量随着提取温度的升高先增多后降低，但在60℃时提取量最高，这是因为当提取温度超过60℃后，大豆苷分解为其他物质，因此，综合考虑3-羟基葛根素，大豆苷，大豆苷元，葛根素，3-甲氧基葛根素的提取含量，在60℃的时候，提取含量最高。选取60℃为最佳提取温度。
实施例4
时间对葛根中五种黄酮有效成分提取效率的影响
准确称取100.0g(±0.5g)的葛根样品于比色管中，在提取温度30℃，药材颗粒度大于70目，加入100.0g低共熔溶剂，加水量300mL条件下，选择提取时间分别为：5、15、20、30min进行提取，其他试验条件与实施例1相同。结果如图12、图13、图14、图15及图16所示。
随着提取时间的延长，3-羟基葛根素，葛根素，3-甲氧基葛根素，大豆苷的含量不断增高，即其提取效率增强，大豆苷元随着时间的延长，其提取含量逐渐降低，提取率下降综合考虑最佳提取时间30min。
实施例5
水量对葛根中五种黄酮有效成分提取效率的影响
准确称取100.0g(±0.5g)的葛根样品于比色管，在提取温度30℃，提取所耗用时间10min，加入100.0g低共熔溶剂，药材颗粒度大于70目条件下，加水量分别为：1.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL进行提取，经HPLC检测，其他试验条件与实施例1相同。结果如图17、图18、图19、图20及图21所示。从图中可以看出大豆苷，葛根素随着加水量的增多，提取率呈先增加后减少的趋势，在加入水量400mL时，大豆苷，葛根素提取含量最高，提取率最佳。超过400mL以后提取量逐渐减少的原因是大豆苷、葛根素是脂溶性物质，加水量增多，导致提取液定容时60％甲醇的用量减少，脂溶性的有效成分没有溶解完全；3-羟基葛根素提取率是随着加水量的增多呈现增加趋势，即3-羟基葛根素的提取量也是随着加水量的增多而增加，因此，综合考虑选取料加水量400mL。
实施例6
测定葛根提取物抗氧化活性
本实验采用DPPH自由基清除法测定葛根的抗氧化能力。具体步骤如下：
称取2,2-二苯基-1-1古肼基自由基0.0132g用无水乙醇定容于250mL容量瓶中，放入冰箱保存备用，取葛根提取液40μL于4mL比色管，加入DPPH 4mL，用恒温水浴锅在37摄氏度恒温反应20min，用紫外分光光度计在510nm处检验其吸光度。空白用DPPH 4mL和40μL的去离子水。
抑制率(％)＝[1-(AX-A0')/A0]*100
表2葛根提取物抗氧化活性
其中，DES-1、DES-2、DES-3、DES-4、DES-5、DES-6的成分及氢键供体与受体的摩尔比均与实施例2中相同。
根据实施例2-5的试验数据可知，使用低共熔溶剂进行葛根五种有效成分提取时，最佳提取条件为时间：30min，提取温度60度，药材比1:1；对于离子液体而言，最佳提取条件为时间：30min，提取温度40度，加水量400mL。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种基于低共熔溶剂的葛根中五种药效成分的提取方法，其特征在于，所述低共熔溶剂的制备采用一步制备法，将按照一定摩尔比的氢键供体与受体进行混合，直至形成稳定的液体；取一定量经过前处理的葛根置于比色管中，再加入所述低共熔溶剂，后将比色管放入数控超声波清洗器中进行超声，摇匀静置后，进行离心，取上清液制备样品溶液，进行HPLC检测；
所述氢键供体为尿素、柠檬酸、果糖或葡萄糖，受体为氯化胆碱或甜菜碱，所述葛根与低共熔溶剂的质量比为1:1。
2.根据权利要求1所述一种基于低共熔溶剂的葛根中五种药效成分的提取方法，其特征在于，所述一步制备法的具体方式为：按照一定摩尔比将氢键供体与受体倒入圆底烧瓶，加入磁子，将圆底烧瓶放入集热式恒温加热磁力搅拌器中，设置温度进行反应2-3小时，生成均一稳定的低共熔溶剂；
优选的，所述反应时间为2小时。
3.根据权利要求2所述一种基于低共熔溶剂的葛根中五种药效成分的提取方法，其特征在于，所述设置温度的方式为：氯化胆碱型低共熔溶剂设为80℃，甜菜碱型低共熔溶剂设为100℃；
所述氯化胆碱型低共熔溶剂的氢键供体分别为尿素、柠檬酸、葡萄糖、果糖，受体都为氯化胆碱；所述甜菜碱型低共熔溶剂的氢键供体分别为甲酸、乙酸，受体都为甜菜碱。
4.根据权利要求1所述一种基于低共熔溶剂的葛根中五种药效成分的提取方法，其特征在于，所述氢键供体为氯化胆碱，受体为果糖；
进一步的，所述一定摩尔比为1:5-3:1；优选为1:2-2:1。
5.根据权利要求1所述一种基于低共熔溶剂的葛根中五种药效成分的提取方法，其特征在于，所述葛根的前处理步骤为：
将野生葛根放入粉碎机进行粉碎，而后用不同规格的筛子过筛，得到不同颗粒度的样品，50-70目，优选为60-70目，将样片存放于矿样袋于干燥阴暗的环境储存；
进一步地，所述葛根中五种药效成分为3-羟基葛根素，葛根素、3-甲氧基葛根素、大豆苷、大豆苷元。
6.根据权利要求1所述一种基于低共熔溶剂的葛根中五种药效成分的提取方法，其特征在于，所述样品溶液的制备步骤为：
准确称取99.5g至100.5g的葛根样品于1.0L的玻璃容器内中，加入低共熔溶剂，然后加入去离子水，将其放入数控超声波清洗器中进行超声，摇匀静置后，进行离心，取上层清液1.0mL加入甲醇，混匀，移用1.0mL，经有机膜过滤得到样品溶液。
进一步地，所述超声温度为30-70℃，优选为60℃；
进一步地，所述超声时间为5-30min，优选为30min；
进一步地，所述去离子水的加入量为1-5mL，优选为400mL；
进一步地，所述甲醇为3.9mL 60％的甲醇；
进一步地，所述有机膜的孔径为0.45μm。
7.根据权利要求1所述一种基于低共熔溶剂的葛根中五种药效成分的提取方法，其特征在于，所述HPLC分析的条件包括：采用GL Sciences InertSustain C18 column，粒径为5μm，内径为250mm×4.6mm。
8.根据权利要求6所述一种基于低共熔溶剂的葛根中五种药效成分的提取方法，其特征在于，所述HPLC分析条件包括：用乙腈作为B泵，0.1％甲酸A泵作为流动相；
流速为1.0mL/min；
进样量为20.0μL；
检测波长为λ＝260nm。
9.根据权利要求6所述一种基于低共熔溶剂的葛根中五种药效成分的提取方法，其特征在于，所述HPLC分析条件还包括梯度洗脱：
0min：85％A，15％B；
16min：70％A，30％B；
30min：100％B，0％A；
31min：85％B，15％A；
40min：85％A，15％B。
10.权利要求1-9任一项所述基于低共熔溶剂的葛根中五种药效成分的提取方法所采用的低共熔溶剂。
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| CN202211489786.9A CN115980242A (zh) | 2022-11-25 | 2022-11-25 | 一种基于低共熔溶剂的葛根中五种药效成分的提取方法 |
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| CN202211489786.9A CN115980242A (zh) | 2022-11-25 | 2022-11-25 | 一种基于低共熔溶剂的葛根中五种药效成分的提取方法 |
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