CN113214233A - 一种从芒果核中提取纯化芒果苷的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种从芒果核中提取纯化芒果苷的方法,属于食品技术及生物技术领域。所述方法包括以下步骤:先将芒果核干燥粉碎,得到芒果核粉末,再用甲醇提取得到提取液,提取液经浓缩或进一步干燥得到浸膏A,浸膏A用水或乙醇溶解,除去不溶物,再经大孔吸附树脂吸附,接着用体积分数为40‑70%的乙醇溶液洗脱,得到含有芒果苷的洗脱液;洗脱液经减压浓缩或进一步真空冷冻干燥得到浸膏B,浸膏B用水或乙醇溶解,除去不溶物,再进行硅胶柱层析,得到含有芒果苷的馏分,再经去溶剂、浓缩或进一步干燥得到含有芒果苷的芒果核芒果苷提取物。本发明的芒果核芒果苷提取物具有显著的抑菌、抗氧化、抗炎等作用,可作为抑菌或抗氧化活性产品而进一步研究开发。
Description
技术领域
本发明涉及一种从芒果核中提取纯化芒果苷的方法,属于食品技术及生物技术领域。
背景技术
芒果苷(mangiferin)又名芒果素、知母宁,是一种四羟基吡酮的碳苷,属双苯吡酮类化合物,分子式为C19H18O11,相对分子量为422。近几年,芒果苷因其具有显著的抗糖尿病、抗病毒、抗肿瘤、抗氧化、抑菌、增强免疫生理活性等而受到人们的关注。
目前,芒果苷的制备方法主要有以下几种方法:
(1)水基溶剂法:从植物中提取芒果苷,该方法工艺简单,设备要求低,但难以生产高纯度的芒果苷,由于受原料成本较高,且原料中芒果苷含量的限制而意义不大。
(2)有机溶剂提取法:该方法得到的芒果苷的纯度较高,如进行其他仪器设备的辅助提取,提取效率更高,平均纯度可以达到97%,但是使用大量有机溶剂会额外增加生产成本且易造成产品污染,设备操作复杂。
(3)酶法提取,该方法得到的芒果苷的得率相对稳定,但是纯度不稳定,极易受外界因素因素影响。中国专利(CN201910168576.1、CN201910250628.X、CN201811639079.7、CN201010292465.0、CN201210053385.9、CN201610099728.3、CN201710057903.7)公开了不同芒果苷的制备方法,但所用制备过程较为繁琐复杂,酶也需要精制纯化,而且产物中还有一种未知的醌类物质,为产品的分离纯化带来了很大困难。
芒果属于性平味甘、解渴生津的果品,有益胃、止呕、防晕的功效。芒果中含有的芒果苷具有明显的抗过氧化、保护脑神经元和祛痰止咳的功效。
广西作为我国生产芒果为数不多的主要省份之一,更是具有芒果资源丰富,品种繁多等优势,但是目前市场上主要还是以产地鲜销为主,少量加工成果汁、果脯以及果肉为辅外,芒果深加工产业亟待需要进一步发展。在芒果生产加工中的废弃物,在过去常被丢弃或者饲养牲畜。近年来,人们逐渐对芒果废弃物进行研究,包括芒果叶、芒果皮、芒果核、芒果树皮等,尤其是占芒果总重20-60%的芒果核获得大部分研究者和企业家的关注。
据报道,芒果核富含有氨基酸、多肽、蛋白质、酚类、黄酮、多糖、有机酸、皂苷、鞣质、黄酮、蒽醌、生物碱、香豆素与内酯、三萜及甾体、生物碱、挥发油及油脂等多种活性成分。
发明内容
本发明的目的是充分利用自然资源,尤其是广西特色果蔬资源,提供一种从芒果核中提取纯化芒果苷的方法,所述方法制备得到的芒果核芒果苷提取物中含有的芒果苷纯度较高,且制备过程所用试剂安全无毒,可用于食品、保健品或药品,具有广阔的应用前景。
本发明的技术方案为:
一种从芒果核中提取纯化芒果苷的方法,包括以下步骤:先将芒果核干燥粉碎,得到芒果核粉末,芒果核粉末用甲醇提取得到提取液,提取液经浓缩或进一步干燥得到浸膏A,浸膏A用水或乙醇溶解,除去不溶物,再经大孔吸附树脂吸附,接着用体积分数为40-70%的乙醇溶液洗脱,得到含有芒果苷的洗脱液;洗脱液经减压浓缩或进一步真空冷冻干燥得到浸膏B,浸膏B用水或乙醇溶解,除去不溶物,再进行硅胶柱层析,得到含有芒果苷的馏分,再经去溶剂、浓缩或进一步干燥得到含有芒果苷的芒果核芒果苷提取物。
进一步地,所述方法包括以下步骤:
(1)取芒果核,干燥,粉碎,得到芒果核粉末;
(2)用体积分数为30-80%的甲醇溶液对步骤(1)得到的芒果核粉末进行提取,得到提取液,提取液经减压浓缩或进一步真空冷冻干燥得到浸膏A;
(3)将步骤(2)得到的浸膏A用水或体积分数小于50%的乙醇溶液溶解,除去不溶物,得到大孔吸附树脂上样溶液;
(4)将步骤(3)得到的大孔吸附树脂上样溶液加载在非极性或弱极性大孔吸附树脂上,先用水洗去杂质,再用体积浓度为40-70%的乙醇溶液进行洗脱,收集洗脱液,得到洗脱液;所述大孔吸附树脂和芒果核干燥粉末重量比为1:0.5-1:20;
大孔吸附树脂的类型选用HPD-722、HPD-826、LX-17、LX-26、LX-28、SP70、SP700、AB-8、DM21或者D101,优选大孔树脂AB-8、DM21、D101,更优选地为AB-8;
(5)将步骤(4)得到的洗脱液减压浓缩或进一步真空冷冻干燥至浸膏B,浸膏B用水或体积分数小于50%的乙醇溶液溶解,除去不溶物,得到硅胶柱上样溶液;然后进行硅胶柱层析结合薄层色谱分析,收集合并含有芒果苷的馏分,并减压浓缩或进一步真空冷冻干燥,得到含有芒果苷的芒果核芒果苷提取物。
进一步地,所述步骤(2)中,所述提取为:芒果核粉末与体积分数为30%-80%的甲醇溶液按料液比为1kg:(2-50)L混合,经热回流提取、浸渍提取或浸漉提取2-5次,滤过,合并滤液,得到提取液;其中热回流提取时每次提取1-3h,浸渍或浸漉提取时每次提取10-15天。
进一步地,所述步骤(5)的硅胶柱层析为:将硅胶柱上样溶液加入到硅胶层析柱中,依次用体积比为95:4:1、94:5:1、93:6:1、92:7:1、90:9:1的的氯仿、丙酮和甲酸混合液进行梯度洗脱,每个梯度中,所述氯仿、丙酮和甲酸混合液的用量为柱体积的1~10倍。
进一步地,所述步骤(5)中氯仿/丙酮/甲酸混合液每个梯度用3倍的柱体积洗脱液进行洗脱。
进一步地,所述步骤(5)中,所述硅胶柱层析的流速控制在2mL/min。
进一步地,所述步骤(5)中,所述薄层色谱分析所用的展开剂为氯仿:丙酮:甲酸=9:0.9:0.1或石油醚:丙酮:甲酸=7.9:2:0.1或石油醚:乙酸乙酯:甲酸=6:3.9:0.1或环己烷:乙酸乙酯:甲酸=6.9:3:0.1或氯仿:甲醇=6:1。
本发明提供上述方法得到的芒果核芒果苷提取物。
本发明还提供上述芒果核芒果苷提取物在制备抑菌或抗氧化活性产品上的应用。上述抑菌或抗氧化活性产品为食品、保健品或药物。
由于采用上述技术方案,本发明的有益效果为:
(1)本发明提出的用芒果核制备芒果苷提取物的方法,芒果核原料经水醇提取,蒸发浓缩、大孔吸附树脂和硅胶柱层析分离可得到含有芒果苷的芒果核芒果苷提取物。得到的提取物中芒果苷的纯度可达85-90%。
(2)本发明制备得到的芒果核芒果苷提取物具有抑菌、抗氧化活性,能应用于保健品或药品领域。
(3)芒果在我国有丰富的资源,本发明实现了从芒果核中提取、纯化具有生物活性的芒果苷,以廉价的芒果核为原料生产得到价格昂贵的芒果苷,将芒果核变废为宝,提升了芒果的综合利用价值。
(4)本发明方法工艺简单且所用试剂安全无毒,适合大规模生产,具有非常广阔的经济前景。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明的技术内容做进一步说明,下述实施例是说明性的,不是限定性的,不能以下述实施例来限定本发明的保护范围。
各实施例中使用的仪器设备、化学试剂以及检测方法如下:
仪器与设备:FW100高速万能粉碎机,天津市泰斯特仪器有限公司;UPC-Ⅱ-20T优普系列超纯水器,四川优普超纯科技有限公司;SQP电子天平,赛多利斯科学仪器(北京)有限公司;ZWYR-D2403振荡培养箱,上海智诚分析仪器制造有限公司;SHZ-DⅢ予华牌循环水真空泵,巩义市予华仪器有限责任公司;HHS-6S电子恒温不锈钢水浴锅,上海宜昌仪器纱筛厂;UV1901PC紫外可见分光光度计,上海奥析科学仪器有限公司;
化学试剂:无水碳酸钠、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、福林酚试剂、没食子酸标准品、芒果苷标准品、各种类型大孔树脂、硅胶板等均由柳州苏利有限责任公司提供。
芒果核芒果苷提取物中芒果苷纯度的测定:
分别吸取标准溶液1,5,10,15和20mL于200mL容量瓶中,加水稀释定容至刻度线,配成质量浓度依次为1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0、12.0、14.0、16.0、20μg·mL-1的对照品稀释液。以纯水为参比,在标准溶液紫外光谱测定的最大吸收波长下,测定不同浓度对照品溶液的吸光度,重复测定3次,取其平均值。以芒果苷标准品溶液质量浓度(ρ)为横坐标,相应的吸光度(A)为纵坐标,绘制标准曲线。将分离纯化获得的样品分别配制20μg·mL-1的石榴皮芒果苷供试品检测溶液,分别稀释1 000倍后测定其吸光度,根据标准曲线回归方程计算芒果苷质量浓度,再推算出芒果苷质量,计算芒果苷提取液中芒果苷的纯度,即芒果苷纯度=(提取液中芒果苷质量浓度×稀释倍数×提取液体积)/芒果苷提取液干质量*100%。
抗氧化活性的测定:
清除羟基自由基能力测定:分别取不同质量浓度的待测样液于5只试管中,各加入硫酸亚铁、双氧水,静置,10min后加入水杨酸,静置后在510nm处测定吸光度A1,用蒸馏水替代水杨酸按照上述方法测定吸光度值A2,用蒸馏水代替待测液按上述方法测定吸光度值A0,VC做对照,按照下列公式求芒果苷物质对羟自由基的清除率:羟自由基(%)=[A0-(A1-A2)]/(A0)*100(%)。
DPPH清除能力测定:分别取2.0mL不同质量浓度(1.0、5.0、10.0、15.0、芒果核活性成分样液于5只试管中,各加入2mL DPPH(0.04mg/ml),静置20min在517nm检测吸光度A1;以无水乙醇代替DPPH,按照上述方法测定吸光度A2;做空白组按上述方法测定吸光度A0,以VC做对照,样品对DPPH自由基的清除率:DPPH清除率(%)=[1-(A1-A2)/A0]*100(%)。
实施例1:本发明的芒果核芒果苷的粗提取
粗提取:芒果核干燥粉碎,称取芒果核粉末1kg加入20L的体积分数为50%的甲醇,热回流提取三次,热回流提取每次1h,合并提取液,提取液减压浓缩得到浸膏A,浸膏A用浸膏重量10倍的水溶解,过滤除去不溶物,得到大孔吸附树脂上样溶液。
实施例2:大孔吸附树脂、硅胶柱层析纯化工艺
(1)大孔吸附树脂上柱:将实施例1得到的大孔吸附树脂上样溶液加载在大孔吸附树脂AB-8的上柱,控制流出液流速为0.5BV/h,上样量与树脂AB-8体积比为2:1,至上样溶液全部进入树脂床。
(2)大孔吸附树脂的乙醇洗脱:用5BV的体积分数为70%乙醇以2BV/h流速进行单独洗脱,得到洗脱液。
(3)硅胶柱层析:
上样:洗脱液经真空干燥得到浸膏B,浸膏B用尽可能少量的乙醇溶解,并加入少量100-200目的硅胶拌匀,然后进行旋转蒸发直至乙醇挥发完全,再倒入装好的硅胶层析柱中,使样品表面平整,并在样品表面再覆盖上一层石英砂,以防在添加洗脱剂时样品被冲散。其中浸膏B与硅胶总质量比为1:100。
过柱及洗脱收集:上样结束后,就向柱子中不同梯度的洗脱剂进行梯度洗脱,洗脱剂分别为氯仿:丙酮:甲酸=95:4:1、94:5:1、93:6:1、92:7:1和90:9:1,每个梯度用3倍的柱体积洗脱液进行洗脱,控制流速在2mL/min,每20mL左右接一个馏分,在低于40℃真空旋转蒸发器回收洗脱溶剂,得到样品备用。
硅胶层析柱分离组分的定性鉴定:将备用的样品,通过硅胶薄层层析板检测收集的组分是否为同一组分,同一组分则合并,合并完成后,采用10%的硫酸-乙醇溶液以及碘进行显色反应来初步定性判定各洗脱组分。
其中,薄层色谱分析所用的展开剂为氯仿:丙酮:甲酸=9:0.9:0.1。结果显示,含有芒果苷的样品干燥后得到的芒果核芒果苷提取物中芒果苷的纯度为87.6%。
实施例3:不同大孔吸附树脂洗脱液经硅胶层析柱分离得到的芒果苷纯度
(1)大孔吸附树脂上柱:
取11份处理好的AB-8树脂各20ml于柱内,将实施例1得到的大孔吸附树脂上样溶液分别加载在AB-8树脂上,上样量与AB-8树脂体积比为2:1,以0.5BV/h的流速进行吸附后,分别用5BV的水、5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%乙醇以2BV/h流速进行单独洗脱,按照树脂体积流出收集洗脱液。
(2)硅胶柱层析:
上样:称取从大孔吸附树脂中经水、5%-90%体积浓度乙醇洗脱流出液真空干燥后的样品,将样品用尽可能少量的乙醇溶解,并加入少量100-200目的硅胶拌拌匀,然后进行旋转蒸发直至乙醇挥发完全,将混有样品的硅胶倒入装好的硅胶层析柱中,使样品表面平整,并在样品表面再覆盖上一层石英砂,以防在添加洗脱剂时样品被冲散。
过柱及洗脱收集:上样结束后,就向柱子中加入不同梯度的洗脱剂进行梯度洗脱,其中洗脱剂为氯仿:丙酮:甲酸=95:4:1、94:5:1、93:6:1、92:7:1、90:9:1,每个梯度用3倍的柱体积洗脱液进行洗脱,控制流速在2mL/min,每20mL左右接一个馏分。在低于40℃真空旋转蒸发器回收洗脱溶剂,样品备用。经过硅胶柱层析后合并含有芒果苷的馏分,得到芒果核芒果苷提取物。
结果显示,芒果核芒果苷提取物中,由水洗脱液得到的提取物的芒果苷纯度约为10%,5%乙醇洗脱液得到的提取物的芒果苷纯度约为15%,10%乙醇洗脱液得到的提取物的芒果苷纯度约为20%,20%乙醇洗脱液得到的提取物的芒果苷纯度约为25%,30%乙醇洗脱液得到的提取物的芒果苷纯度约为28%,40%乙醇洗脱液得到的提取物的芒果苷纯度约为40%,50%乙醇洗脱液得到的提取物的芒果苷纯度约为70%,60%乙醇洗脱液得到的提取物的芒果苷纯度约为80%,70%乙醇洗脱液得到的提取物的芒果苷纯度约为90%。
实施例4:本发明方法得到的芒果核芒果苷提取物的抗菌抗氧化性能
抑菌效果的测定:
将供试菌株于斜面培养基上活化,用接种环挑取环1-2环于50mL无菌生理盐水三角瓶中振荡10min(内有数粒玻璃珠),要求菌悬液约108CFU/mL左右备用。称取一定量真空冷冻干燥的实施例2得到的芒果核芒果苷提取物样品,在超净工作台上用无菌的40%乙醇水溶液溶解样品至所需的浓度,备用。新鲜配制的培养基基于121℃条件下灭菌,当培养基冷至50-60℃时,于超净工作台上将培养基倒入灭菌的的培养皿中,每皿15-20mL培养基,待平板冷却后,每皿中加入0.5mL菌悬液,用三角玻璃涂棒均匀涂成薄板备用。将无菌滤纸片浸入配好的药液其中12h,沥干。每一含菌平板上,呈正三角形排布3片带药无菌纸片,细菌于37℃条件下培养24h,啤酒酵母和黑曲霉于30℃条件下培养5d,测其抑菌圈直径。根据抑菌圈大小来确定其抑菌效果。以不加芒果核芒果苷溶液只加菌悬液为对照。结果显示,本发明得到的芒果核芒果苷具有强烈的抑菌效果。
芒果核芒果苷物质抗氧化活性研究:
羟基是活性最强的活性氧化自由基,会诱发机体产生氧化损伤,其清除率常常是反应药物抗氧化作用的重要指标。同样的,超氧阴离子也是生物体主要的活性氧自由基,由其引起的体内脂质过氧化是机体衰老、心血管疾病及肿瘤发生的重要原因。芒果核芒果苷羟基自由基清除能力随着芒果苷浓度增加而增加,当芒果核芒果苷的浓度达到0.05-0.25mg/mL时清除率能达到约90%,说明芒果核芒果苷具有较强的清除羟基自由基作用,且清除作用比VC的清除作用强。芒果核芒果苷提取物DPPH自由基清除能力随着芒果苷浓度增加而增加,当浓度达到0.06-0.25mg/mL以上时,其对DPPH自由基的清除率能达到89%,说明芒果核芒果苷具有较强的清除DPPH自由基作用。以上数据说明芒果果核芒果苷对羟基自由基以及DPPH·自由基均具有较好的清除能力,研究结果将为芒果核资源的综合利用及其相应的功能性食品开发提供参考借鉴。
实施例5:本发明方法得到的芒果核芒果苷提取物的抗炎作用
实施例2的芒果核芒果苷提取物进行二甲苯诱导小鼠耳肿胀、足肿胀模型建立时发现,本发明的芒果核芒果苷提取物具有较好的抗炎症作用,当给药剂量分别达0.5g/kg和0.1g/kg时,其对小鼠耳肿胀与足肿胀的抑制效果与20mg/kg的阳性药吲哚美辛相当。
以上通过实施例对本发明的内容进行了详细说明,但所述内容仅为本发明的较佳实施例,不能被认为用于限定本发明的实施范围。任何熟悉此技术的人,在不脱离本发明的精神和范围内,都可做各种的改动与修饰,因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。
Claims (10)
1.一种从芒果核中提取纯化芒果苷的方法,其特征在于:包括以下步骤:先将芒果核干燥粉碎,得到芒果核粉末,芒果核粉末用甲醇提取得到提取液,提取液经浓缩或进一步干燥得到浸膏A,浸膏A用水或乙醇溶解,除去不溶物,再经大孔吸附树脂吸附,接着用体积分数为40-70%的乙醇溶液洗脱,得到含有芒果苷的洗脱液;洗脱液经减压浓缩或进一步真空冷冻干燥得到浸膏B,浸膏B用水或乙醇溶解,除去不溶物,再进行硅胶柱层析,得到含有芒果苷的馏分,再经去溶剂、浓缩或进一步干燥得到含有芒果苷的芒果核芒果苷提取物。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述方法包括以下步骤:
(1)取芒果核,干燥,粉碎,得到芒果核粉末;
(2)用体积分数为30-80%的甲醇溶液对步骤(1)得到的芒果核粉末进行提取,得到提取液,提取液经减压浓缩或进一步真空冷冻干燥得到浸膏A;
(3)将步骤(2)得到的浸膏A用水或体积分数小于50%的乙醇溶液溶解,除去不溶物,得到大孔吸附树脂上样溶液;
(4)将步骤(3)得到的大孔吸附树脂上样溶液加载在非极性或弱极性大孔吸附树脂上,先用水洗去杂质,再用体积浓度为40-70%的乙醇溶液进行洗脱,收集洗脱液,得到洗脱液;所述大孔吸附树脂和芒果核干燥粉末重量比为1:0.5-1:20;
(5)将步骤(4)得到的洗脱液减压浓缩或进一步真空冷冻干燥至浸膏B,浸膏B用水或体积分数小于50%的乙醇溶液溶解,除去不溶物,得到硅胶柱上样溶液;然后进行硅胶柱层析结合薄层色谱分析,收集合并含有芒果苷的馏分,并减压浓缩或进一步真空冷冻干燥,得到含有芒果苷的芒果核芒果苷提取物。
3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述步骤(2)中,所述提取为:芒果核粉末与体积分数为30%-80%的甲醇溶液按料液比为1kg:(2-50)L混合,经热回流提取、浸渍提取或浸漉提取2-5次,滤过,合并滤液,得到提取液;其中热回流提取时每次提取1-3h,浸渍或浸漉提取时每次提取10-15天。
4.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述步骤(5)的硅胶柱层析为:将硅胶柱上样溶液加入到硅胶层析柱中,依次用体积比为95:4:1、94:5:1、93:6:1、92:7:1、90:9:1的的氯仿、丙酮和甲酸混合液进行梯度洗脱,每个梯度中,所述氯仿、丙酮和甲酸混合液的用量为柱体积的1~10倍。
5.根据权利要求4所述的方法,其特征在于,所述步骤(5)中氯仿/丙酮/甲酸混合液每个梯度用3倍的柱体积洗脱液进行洗脱。
6.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述步骤(5)中,所述硅胶柱层析的流速控制在2mL/min。
7.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述步骤(5)中,所述薄层色谱分析所用的展开剂为氯仿:丙酮:甲酸=9:0.9:0.1或石油醚:丙酮:甲酸=7.9:2:0.1或石油醚:乙酸乙酯:甲酸=6:3.9:0.1或环己烷:乙酸乙酯:甲酸=6.9:3:0.1或氯仿:甲醇=6:1。
8.权利要求1~7任一所述方法得到的芒果核芒果苷提取物。
9.权利要求8所述芒果核芒果苷提取物在制备抑菌或抗氧化活性产品上的应用。
10.根据权利要求9所述的应用,其特征在于,所述抑菌或抗氧化活性产品为食品、保健品或药物。
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Citations (2)
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---|---|---|---|---|
CN105998109A (zh) * | 2016-06-24 | 2016-10-12 | 贺州学院 | 一种芒果核多酚提取物及其制备方法 |
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2021
- 2021-05-27 CN CN202110585827.3A patent/CN113214233A/zh active Pending
Patent Citations (2)
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CN105998109A (zh) * | 2016-06-24 | 2016-10-12 | 贺州学院 | 一种芒果核多酚提取物及其制备方法 |
CN106138130A (zh) * | 2016-07-26 | 2016-11-23 | 贺州学院 | 一种芒果核黄酮提取物及其制备方法 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
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康超 等: "芒果核多酚纯化物成分分析及其抗氧化研究", 食品研究与开发 * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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CN115737624A (zh) * | 2021-12-31 | 2023-03-07 | 山东省妇幼保健院 | 天然药物在制备抗鲍曼不动杆菌药物中的应用 |
CN115737624B (zh) * | 2021-12-31 | 2024-03-12 | 山东省妇幼保健院 | 天然药物在制备抗鲍曼不动杆菌药物中的应用 |
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