CN115948280A - 一株产淀粉酶菌株r26及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一株产淀粉酶菌株R26，该菌株经鉴定为鼠李糖乳杆菌，因而命名为Lactobacillus rhamnosus R26。利用该菌株对莲藕渣进行微生物发酵得到的莲藕多糖LrMP的DPPH·自由基清除能力和还原能力明显增强，且与LrMP浓度成正相关，LrMP生物活性得到提高；此外，发酵制得的不溶性膳食纤维LrMIDF在持水性、溶胀性和持油性方面均表现出较佳的特性；鼠李糖乳杆菌R26发酵莲藕渣不仅可以提高莲藕多糖的得率并分解淀粉、蛋白质等杂质，而且提高了莲藕多糖的抗氧化能力，增强了莲藕膳食纤维的功能特性，在功能食品方面具有较好的应用前景。
Description
技术领域
本发明属于微生物领域，具体涉及一株产淀粉酶菌株R26及其应用。
背景技术
多糖是一种可再生资源，它因具有特殊而良好的理化性质及能提供给人类极具使用价值的产品的特性，而被广泛应用于食品、化工、医药、石油等领域。一般由十个以上单糖分子结合在一起组成的生物聚合物称为多糖，多糖聚合物中通常含有几百甚至几千个单糖分子。那些来自天然产物的多糖由于其广泛的药理活性和相对较低的毒性而吸引了越来越多的关注，人们也对多糖及其产品在治疗疾病和获得其他健康益处方面表现出越来越大的兴趣，包括免疫调节、抗氧化、抗肿瘤、抗凝血、抗衰老和抗感染的特性。其中，多糖的抗氧化性能备受关注，包括多糖的还原能力、抗脂质过氧化、良好的氧自由基、羟基自由基、DPPH·等自由基的清除率，这些都有助于抑制H2O2诱导的红细胞氧化损伤。
莲藕是一种莲科多年生经济水生植物，用途广泛，常被用作食品、药物以及园艺观赏植物。莲藕的主要成分是淀粉、蛋白质以及碳水化合物，新鲜莲藕中淀粉的含量在15％左右，除此之外，莲藕中还含有生物碱、酚酸和桦木酸等对人体健康有益的成分。莲藕中的水溶性多糖物质，已被证实具有抗氧化能力。此外，莲藕多糖还具有抗肿瘤、免疫调节、抗肥胖和抗糖尿病等生物活性。罗登宏等的研究表明，对于患有糖尿病的实验小鼠，莲藕多糖可以有效减轻病症引起的消瘦症状，莲藕多糖的注射量显著影响小鼠的血糖值，显著提高了小鼠的葡萄糖耐受能力，推测是通过莲藕多糖的降糖作用和抗氧化活性来防治糖尿病的，这可能是该研究的主要药理学基础。莲藕多糖还能够防止大脑老化、延缓衰老，改善体内自由基代谢、抗衰老，这些功效的实现都与莲藕多糖的良好抗氧化性能密切相关，莲藕多糖主要通过抑制氧自由基损伤来获得一系列生理功能。
相关研究表明，多糖的来源、提取工艺的不同不仅影响其感官性能和加工性能，而且还会改变其生理活性和功能特性。适当的改性方式可以优化莲藕多糖的制备工艺，提高多糖的品质，增加其商业经济价值。常用的改性方法包括化学法、物理法和生物发酵法。化学法副反应较多，难以人为控制，局限性较大；目前关于物理法的研究较多，常用的技术有超微粉碎技术、挤压膨化技术以及亚临界水萃取技术等。生物发酵法利用微生物发酵原理，分解大分子物质，提高多糖含量的同时优化其理化特性和生物活性。相比于另外两类方法，发酵法被认为是一种相对安全、高效、低成本的高活性多糖制备和改良方法。
而与固体发酵法相比，液体发酵法具有时间短、用工少、生长速度快、操作简单等优点；此外，液体发酵很容易引导代谢途径并增加代谢物产量。基于安全性、适用性、改良型和培养特性等方面考虑，目前研究中涉及的发酵菌种主要是真菌和乳酸菌。乳酸菌发酵制备高活性多糖的过程简单，生产力更高，易于实现工业化生产，而且乳酸菌发酵制品具有其他发酵菌种不具备的特殊清香风味，达到掩盖部分原料原有的不良风味的目的。乳酸菌发酵普遍是利用的保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌进行混合发酵。李成忠研究确定了保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌混合发酵提取柑橘皮渣膳食纤维的最佳条件。李安平等研究了乳酸菌发酵制得的竹笋膳食纤维理化特性和生理活性更好，且还有乳酸发酵液这一副产品可用来生产竹笋乳酸菌保健饮料。因此研究其他乳酸菌发酵提取多糖对于优化植物多糖提取工艺具有一定意义。
而据目前所掌握的信息可知，现有的利用乳酸菌发酵产植物多糖的研究较少，迄今为止还没有利用乳酸菌发酵莲藕提取莲藕多糖的相关报道。
发明内容
本发明的目的在于解决现有技术中的不足，提供一株产淀粉酶菌株R26，鼠李糖乳杆菌R26可以有效发酵莲藕渣，制备所得的多糖具有更高的得率和更强的抗氧化能力，莲藕膳食纤维的功能特性也在一定程度上得到改善，在功能食品方面具有较好的应用价值，对实现多糖的有效化利用具有较大实际意义。
本发明的技术方案为：本发明所述的一株产淀粉酶菌株R26，该菌株于2022年07月11日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏地址为位于中国武汉的武汉大学，保藏编号为CCTCC NO:M 20221081，菌株R26属于Lactobacillus rhamnosus。
利用菌株R26可发酵制备莲藕微生物发酵水溶性多糖LrMP，LrMP能够提高莲藕多糖的DPPH·自由基清除能力和还原能力，且与LrMP的浓度成正相关。
利用菌株R26可发酵制备不溶性膳食纤维，利用R26发酵得到的膳食纤维的持水性、溶胀性和持油性均得到提高。
上述莲藕微生物发酵水溶性多糖的制备工艺如下：
1)将菌株R26接种至种子培养基中，恒温培养活化；
2)活化后离心过滤，用无菌生理盐水将菌种沉淀洗脱至灭菌后的发酵培养基中；
3)静置发酵，每天搅拌一次；
4)将发酵液于90℃下高温灭菌3h，灭菌混合物即为莲藕微生物发酵液；
5)冷冻干燥发酵液，加水浸提冻干后的莲藕渣，离心过滤，保留上清液，残渣重复浸提，两次上清液合并得到粗多糖溶液；
6)粗多糖溶液旋转蒸发浓缩至1/3体积，Sevag法除去蛋白；
7)透析粗多糖溶液；
8)旋转蒸发浓缩多糖溶液，用三倍体积的80％乙醇醇沉，剧烈搅拌，过夜，分离沉淀，冷冻干燥即得莲藕微生物发酵水溶性多糖。
进一步地，步骤1)中，菌种接种量为2％，接种后于37℃恒温培养箱培养36h。
进一步地，步骤2)中，发酵培养基中菌种的接种量为5％。
进一步地，步骤3)中，发酵温度为37℃，发酵时间为72h
进一步地，步骤5)中，加水浸提时的料液比为1:20，两次浸提过程均在90℃水浴环境下进行，每次浸提3h。
进一步地，步骤7)中，透析过程在4℃纯水中进行，透析时间为48h，白天1h换一次水。
本发明的有益效果是：
1、本申请筛选得到的是一株产淀粉酶菌株，经分类鉴定为鼠李糖乳杆菌，种类学名是Lactobacillus rhamnosus R26；该菌株通过产生淀粉酶、大量有机酸来降解淀粉等杂质并对纤维素等大分子物质进行分解，可用于发酵莲藕进而高效提取莲藕多糖和不溶性膳食纤维；
2、乳酸菌株R26发酵莲藕可以提高莲藕多糖的得率并分解淀粉、蛋白质等杂质；
3、基于菌株R26，利用微生物发酵法制备的莲藕多糖LrMP能够提高莲藕多糖的DPPH·自由基清除能力和还原能力，使得多糖生物活性有所改善；
4、菌株R26发酵莲藕可改善莲藕膳食纤维的功能特性，制备得到的莲藕不溶性膳食纤维LrMIDF在持水性、溶胀性和持油性方面均有提高，在未来的食品应用中具有相应潜力；
5、本申请筛选出的菌株R26可为后续分离纯化各种多糖提供菌种资源，具有较为广阔的市场应用前景，可为生物发酵法制备的植物多糖食品中的开发和利用提供参考。
附图说明
图1是产淀粉酶乳酸菌菌株的透明圈效果图；
图2是菌株R26的16S rDNA基因序列；
图3是菌株R26的16S rDNA系统发育树；
图4是发酵法制备莲藕多糖的工艺流程图；
图5是制得的莲藕多糖的得率、多糖含量和蛋白含量数据统计图；
图6是葡萄糖标准曲线(A)和蛋白质标准曲线(B)；
图7是LrP和LrMP的DPPH·自由基清除率统计表；
图8是LrP和LrMP的FRAP总抗氧化能力数据统计表；
图9是关于莲藕不溶性膳食纤维的得率和功能特性数据的统计图。
具体实施方式
以下实施例进一步说明本发明的内容，但不应理解为对本发明的限制。在不背离本发明实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改和替换，均属于本发明的范围。
一株产淀粉酶的菌株R26，保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏地址为位于中国武汉的武汉大学，保藏编号：CCTCC NO：M 20221081，保藏日期为2022年07月11日。
供试材料及培养基
供试菌株，均来自扬州大学食品质量与安全课题组；莲藕，扬州市邗江区万达广场永辉超市；脱脂奶粉、玉米油，市售；Lugols碘液购自Solarbio公司；MRS肉汤、葡萄糖、胰蛋白胨、可溶性淀粉、牛肉膏、NaCl、琼脂、氯仿、正丁醇、乙醇、苯酚、硫酸，国药集团化学试剂有限公司；BCA蛋白浓度测定试剂盒、总抗氧化能力检测试剂盒(FRAP法)，上海碧云天生物技术有限公司；DPPH·自由基，上海梯希爱化成工业发展有限公司；0.45μm微孔滤膜，天津市津腾实验设备有限公司；透析袋(7000D)，上海源叶生物科技有限公司；96孔细胞培养板，美国Coaster公司；试剂均为分析纯。
MRS Broth培养基(MRS)：MRS肉汤54g、琼脂15g、水定容至1000mL；
MRS Broth液体培养基(MRS)：MRS肉汤54g、水定容至1000mL；
淀粉酶选择培养基：葡萄糖5.0g、胰蛋白胨10.0g、可溶性淀粉10.0g、牛肉膏5.0g、NaCl 5.0g、Agar 17g、水定容至1000mL，121℃高温高压灭菌20min。
1、实验方法
1.1菌株R26的筛选
1.1.1供试菌株
1.1.2产淀粉酶菌株的筛选
从实验室的乳酸菌保藏管中吸取100μL菌液至5mL MRS液体培养基中(按2％接种量)进行菌种活化，置于37℃恒温培养箱中16-24h。将活化后菌株划线培养于固体MRS培养基上，菌落长出后，用灭过菌的牙签挑取单菌落接种至5mL液体MRS培养基中，在37℃培养箱中放置培养16-24h，菌液浑浊后拿出放置于4℃冰箱中待用。用移液枪精确吸取微量菌液(10μL)，交叉点样接种在淀粉酶选择培养基上，置于超净台中自然风干，将培养平板装进密封袋中倒置于37℃恒温培养箱中培养72h。待菌落长出后，通过Lugols碘液染色法确定是否产生透明圈，选取最佳产酶菌株。
最终从35株乳酸菌株中筛选出1株产淀粉酶乳酸菌菌株，产淀粉酶菌株的透明圈效果图见图2：(A)、(B)为菌株LBP2-3，无透明圈；(R26)为菌株R26。由图2可知，菌株R26能分解淀粉酶选择培养基中加入的可溶性淀粉，表明该菌株产生了淀粉酶。而且在乳酸菌株R26发酵过程中能够使得纤维素大分子的糖苷键断裂，从而产生新的还原性末端，这是乳酸菌发酵产生大量有机酸导致的结果。此外莲藕基质纤维的糖苷键断裂，部分不溶性膳食纤维转化成水溶性多糖，提高了水溶性多糖的含量。因此选择菌株R26作为微生物发酵莲藕制备水溶性多糖和不溶性膳食纤维的发酵菌种。
1.2产淀粉酶乳酸菌菌株的鉴定
纯化和活化筛选出的乳酸菌菌株，送至菌株鉴定机构(上海生工生物公司)，得到筛选菌株的16s rDNA序列结果，测序特异性引物为乳酸菌株鉴定通用引物27F/1492R，所得基因序列如图2所示。
将筛选所得乳酸菌株的16s rDNA序列结果在NCBI数据库中进行BLAST在线相似性比对，得到与其同源的乳酸菌株及它们的16s rDNA序列。绘制乳酸菌的16s rDNA的系统发育树(见图3)，从而确定乳酸菌的进化分类地位。
发育树结果表明，R26菌株与鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)聚为一群。说明R26与鼠李糖乳杆菌高度同源，处于同一进化分支。将R26菌株鉴定为鼠李糖乳杆菌，命名为Lactobacillus rhamnosus R26。
1.3水溶性莲藕多糖和不溶性膳食纤维的提取
1.3.1培养基
种子培养基：采用MRS液体培养基
发酵培养基：取150g切片藕片，按V藕:水＝1:2的体积比加水磨浆，分别加2％脱脂奶粉和1.5％蔗糖，置于1000mL锥形瓶，90℃灭菌15min。
1.3.2菌种培养及发酵工艺
每5mL种子培养基接种100μL活化菌种，37℃恒温培养箱放置36h，活化后进行离心过滤(8000rpm，10min)，用微量无菌生理盐水将菌种沉淀洗脱至灭菌后的发酵培养基中，接种量为5％。37℃静置发酵72h，每天搅拌一次，充分发酵。最后将发酵液在90℃高温灭菌3h。灭菌混合物为莲藕微生物发酵液。发酵工艺流程如图4所示，每组实验做三次重复，取平均值作为实测值。
1.3.3提取工艺
将发酵液进行冷冻干燥，精确称取冻干后莲藕渣，做三个平行，料液比为1:20加水，于90℃水浴中浸提3h，离心过滤(6000rpm，10min)，保留上清液，残渣重复在90℃水浴中浸提3h，离心，将两次上清液合并得到粗多糖溶液，待用。
将残渣冷冻干燥，粉碎，得到莲藕微生物发酵不溶性膳食纤维(LrMIDF)，称重。
将粗多糖溶液旋转蒸发浓缩至1/3体积(50℃)。
Sevag法除去蛋白：取粗多糖浓缩液与Sevag(氯仿-正丁醇混合液，v:v为4:1)溶液置于大容量离心管中，比例为4:1，置于摇床中充分混合30min，经过4200rpm离心5min，吸出水相，弃去氯仿相(中间为蛋白质，水层在上，有机层在下)。收集水相，重复上述过程7次，直到振荡后水层不再出现白色泡沫。
将透析装置置于磁力搅拌器上，在4℃纯水中透析48h，白天1h换一次水。旋转蒸发浓缩多糖溶液至10mL左右。用三倍体积的80％乙醇醇沉，剧烈搅拌，过夜，分离沉淀，冷冻干燥即得莲藕微生物发酵水溶性多糖(LrMP)，制备样品均保存于4℃冰箱中。莲藕多糖得率计算如下：
多糖得率(％)＝产物质量/莲藕鲜重×100％。
对照组：将150g切片莲藕按1:20的料液比混合在300mL水中，磨浆处理，加入高温α-淀粉酶，在95℃下孵育30min，直至上清液在液碘中变为蓝色。最后将混合物在90℃高温下灭菌3h。用与上述获得LrMIDF和LrMP相同的方法获得莲藕不溶性膳食纤维(LrIDF)和莲藕水溶性多糖(LrP)，放置在4℃冰箱中保存。
1.4水溶性多糖的理化性质
1.4.1基本组成测定
苯酚-硫酸法测定多糖含量
葡萄糖标准溶液：葡萄糖于105℃下干燥至恒重，精确称取20mg，用超纯水溶解，定容至500mL，即得到0.04mg/mL的葡萄糖标准溶液，备用。吸取0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6mL葡萄糖标准溶液于试管中，均加水定容至2mL，加入1mL 6％苯酚(1g苯酚，15mL水)，摇匀，快速滴加浓硫酸5mL，室温静置5min，置80℃水浴中加热20min，冰水浴冷却至室温。样品在490nm处有最大紫外吸收，用分光光度法测定样品在该波长下的吸光度，以试剂空白参比。以测定的吸光度为纵坐标，以配制的一系列葡萄糖质量浓度(mg/mL)为横坐标，绘制标准曲线，计算出多糖含量。
(2)蛋白含量测定
样品LrMP和LrP中的蛋白含量采用BCA蛋白浓度测定试剂盒参考其说明书测定。
从图5可以看出，初步纯化的LrMP为莲藕湿重的3.36％，而对照组的LrP为莲藕湿重的0.85％，实验证明菌株R26发酵莲藕能够有效提高莲藕多糖的提取率。LrMP和LrP的色泽均为白色，LrMP为絮状多糖，而LrP呈现粉末状。均易溶于水，均不溶于高浓度的乙醇、正丁醇等有机溶剂。
图6中(A)小图是葡萄糖标准曲线。标准曲线线性回归方程是y＝0.0559x-0.0131(R2＝0.9909，n＝8)。用标准曲线线性回归方程计算得到所制备的LrMP的多糖含量为78.13％，而对照组LrP多糖含量为72.12％，LrMP多糖含量显著高于LrP。
图6中(B)小图是蛋白质标准曲线，所得标准曲线公式：y＝0.8551x+0.0701，其R2＝0.999。由标准曲线可得LrMP和对照组LrP的蛋白含量分别为1.3％和6.4％，说明多糖中仍然含有少量游离或结合蛋白，可能是由于Sevag法除蛋白未能除尽。相同条件下，LrMP的蛋白含量显著少于LrP，推测原因可能是乳酸菌菌株R26发酵能分解蛋白质，提高多糖纯度。从以上结果可以推断出，乳酸菌株R26能够充分利用莲藕中的营养成分进行生长，产生淀粉酶等酶系来降解淀粉、蛋白质等在多糖提取工艺中需要除去的杂质。
1.4.2抗氧化能力测定
多糖的抗氧化机理涉及还原能力、阻止链引发、清除自由基等多个方面，测定DPPH·自由基清除能力和FRAP总抗氧化能力能综合评价微生物发酵法制备所得多糖的抗氧化能力。
(1)DPPH·自由基清除能力的测定
DPPH溶液：称取7.88mg DPPH溶于100mL无水乙醇中，用包裹锡纸的棕色瓶保存于4℃冰箱中，DPPH溶液的终浓度为0.2mmol/L。
待测样品的配制：分别准确称取LrMP和LrP，用纯水溶解，配制系列浓度的样品溶液(0.5、1、2、3和4mg/mL)，90℃水浴1h，0.45μm滤膜过滤后待测。
DPPH溶于乙醇等极性溶剂中时在波长517nm处有最大紫外吸收，DPPH乙醇溶液遇到抗氧化剂后，会发生脱色反应，样品清除DPPH自由基的能力可以通过在517nm波长处吸光度的变化来反映。
取3支试管，试管①中加入2mL的DPPH溶液和2mL待测样品，涡旋，室温下在密闭无光环境中反应30min后，此时测得的吸光度记为Ax；试管②中加入2mL DPPH溶液与2mL无水乙醇，涡旋后测得的吸光度记为A0；试管③中加入2mL待测样品与2mL无水乙醇，涡旋后测得的吸光度记为Ax0，每组做3个平行，取平均值为实测值，以Trolox标准物作为对比。待测样品的DPPH自由基清除率计算公式为：
DPPH·自由基的清除率(％)＝[1-(Ax-Ax0)/A0]×100％。
(2)还原能力的测定
使用总抗氧化能力检测试剂盒(FRAP法)进行测定，待测样品的浓度分别为0.5、1、3、5、7mg/mL，制备方法与(1)相同，在波长594nm处测定吸光度，根据标准曲线计算出样品的FRAP总抗氧化能力，用FeSO4标准溶液的浓度来表示样品的抗氧化能力，单位为mmol/g。
从图7可以看出，LrP和LrMP均能够清除DPPH·自由基，在图中所示浓度范围内，清除率随着多糖浓度的升高而增加。但是清除效果并不相同，在同等质量浓度下，LrMP的DPPH自由基清除率均显著高于LrP。LrMP的浓度为3mg/mL时清除率就能达到88.1％，明显高于4mg/mL的LrP所能达到的最高清除率。LrP和LrMP对DPPH·自由基的50％清除率(IC50)的浓度分别为2.64mg/mL和1.54mg/mL。由此可以推测，微生物发酵法制备多糖能够提高莲藕多糖的DPPH·自由基清除能力，使得多糖生物活性有所改善。
图8显示了LrP和LrMP的还原能力，从图中可以看出，在浓度为0.5～7mg/mL范围内，LrP和LrMP对三价铁离子的还原能力随着各自浓度的增加而增强。LrP和LrMP的FRAP总抗氧化能力从0.5mg/mL的0.005、0.01mmol/g最终上升到7mg/mL的0.08、0.35mmol/g。LrMP的FRAP总抗氧化能力明显高于对照组LrP，表明乳酸菌株R26发酵莲藕能够提高莲藕多糖的还原能力，增加其抗氧化活性。
1.5不溶性膳食纤维的功能特性
(1)持水性测定
称定0.5g LrMIDF和LrIDF于烧杯中，量取30mL超纯水倒入烧杯充分搅拌，放置于摇床中常温振荡1h，然后使用布氏漏斗抽滤至样品无游离水析出，于表面皿中称重。样品的初始干重记录为W1(g)，处理后的残留物质重量记录为W2(g)。持水性计算公式为：
WHC(g/g)＝(W2-W1)/W1
(2)溶胀性测定
准确称取LrMIDF和LrIDF各0.4g，置于10mL量筒中，用移液枪移取3mL超纯水于量筒中，搅拌均匀后在室温下静置24h，记录膳食纤维的最终体积。溶胀性计算公式为：
SC(mL/g)＝V/M1
式中：SC是溶胀性；V是膳食纤维的最终体积，mL；M1是样品的初始质量，g。
(3)持油性测定
各称定0.5g的LrMIDF和LrIDF置于培养皿中，平铺均匀后均匀加入8g食用玉米油，在室温条件下静置1h，使用滤纸吸干样品中游离的玉米油，称重。持油性计算公式为：
OHC(g/g)＝(M2-M1)/M1
式中：OHC是持油性；M2是膳食纤维处理后的质量，g；M1是样品的初始干重，g。
制备得到的莲藕不溶性膳食纤维LrMIDF和LrIDF质地轻柔，均呈现不同程度的浅棕色，推测LrMIDF和LrIDF中都含有含量不等的色素未经除去。从图9可以看出，LrMIDF和LrIDF的得率分别为5.01％和3.84％，得率变化并不显著。此外，与对照组LrIDF相比，LrMIDF在持水性、溶胀性和持油性方面表现更佳。虽然发酵后IDF的含量变化不大，但是持水性和持油性都有不同程度的增加，而且LrMIDF和LrIDF的持水性均优于麸皮膳食纤维的质量标准(持水性为4.00g/g)，持水性增强可能是因为LrMIDF的结构更加疏松，颗粒能够更好的与水的接触，从而增加了LrMIDF颗粒的吸水率。而且发酵增加了颗粒的多孔性，使得膳食纤维对油产生物理吸附，导致LrMIDF持油性的提高。LrMIDF的溶胀性是LrIDF的两倍，这是由于发酵后膳食纤维颗粒比表面积增大。高溶胀性物质进入胃中会吸水膨胀，形成高粘度的凝胶、溶胶，使人产生饱腹感。因此，菌株R26发酵莲藕改善了莲藕膳食纤维的功能特性，增加了其在食品中的潜在应用能力。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征及优点。但是以上所述仅为本发明的具体实施例，本发明的技术特征并不局限于此，任何本领域的技术人员在不脱离本发明的技术方案下得出的其他实施方式均应涵盖在本发明的专利范围之中。
Claims (9)
1.一株产淀粉酶菌株R26，其特征在于，该菌株于2022年07月11日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏地址为位于中国武汉的武汉大学，保藏编号为CCTCC NO:M 20221081，菌株R26属于Lactobacillus rhamnosus。
2.如权利要求1所述的菌株R26发酵制备的莲藕微生物发酵水溶性多糖，其特征在于，莲藕微生物发酵水溶性多糖LrMP能够提高莲藕多糖的DPPH·自由基清除能力和还原能力，且与LrMP的浓度成正相关。
3.如权利要求1所述的菌株R26发酵制备的不溶性膳食纤维，其特征在于，利用R26发酵得到的膳食纤维的持水性、溶胀性和持油性均得到提高。
4.如权利要求2所述的莲藕微生物发酵水溶性多糖的制备工艺，其特征在于，具体制备方法如下：
1)将菌株R26接种至种子培养基中，恒温培养活化；
2)活化后离心过滤，用无菌生理盐水将菌种沉淀洗脱至灭菌后的发酵培养基中；
3)静置发酵，每天搅拌一次；
4)将发酵液于90℃下高温灭菌3h，灭菌混合物即为莲藕微生物发酵液；
5)冷冻干燥发酵液，加水浸提冻干后的莲藕渣，离心过滤，保留上清液，残渣重复浸提，两次上清液合并得到粗多糖溶液；
6)粗多糖溶液旋转蒸发浓缩至1/3体积，Sevag法除去蛋白；
7)透析粗多糖溶液；
8)旋转蒸发浓缩多糖溶液，用三倍体积的80％乙醇醇沉，剧烈搅拌，过夜，分离沉淀，冷冻干燥即得莲藕微生物发酵水溶性多糖。
5.如权利要求4所述的莲藕微生物发酵水溶性多糖的制备工艺，其特征在于，步骤1)中，菌种接种量为2％，接种后于37℃恒温培养箱培养36h。
6.如权利要求4所述的莲藕微生物发酵水溶性多糖的制备工艺，其特征在于，步骤2)中，发酵培养基中菌种的接种量为5％。
7.如权利要求4所述的莲藕微生物发酵水溶性多糖的制备工艺，其特征在于，步骤3)中，发酵温度为37℃，发酵时间为72h。
8.如权利要求4所述的莲藕微生物发酵水溶性多糖的制备工艺，其特征在于，步骤5)中，加水浸提时的料液比为1:20，两次浸提过程均在90℃水浴环境下进行，每次浸提3h。
9.如权利要求4所述的莲藕微生物发酵水溶性多糖的制备工艺，其特征在于，步骤7)中，透析过程在4℃纯水中进行，透析时间为48h，白天1h换一次水。
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