CN115887536B - 一种火棘果提取物在改善睡眠作用中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种火棘果提取物改善睡眠作用中的应用及其制备方法。它是以火棘果为主要原料，按照热水煎煮、70％乙醇冷浸、物理压榨及超微粉碎制得相应提取物，用于治疗原发型失眠症。所述火棘果各提取物各剂量组可以剂量依赖性地增加阈下剂量戊巴比妥钠引起入睡的小鼠数量，还可以剂量依赖性地缩短阈上剂量戊巴比妥纳所致的入睡潜伏期，并延长阈上剂量戊巴比妥纳所致的睡眠持续时间。此外，70％乙醇提取物还可以显著降低戊四氮诱导惊厥小鼠的死亡率。本发明所述火棘果提取物治疗原发型失眠起效剂量低、效果佳和安全性高。
Description
技术领域
本发明涉及一种火棘果提取物在制备药物或食品中的应用。
背景技术
睡眠是人体的一种主动过程，可以恢复精神和解除疲劳。其犹如饮食一样，是人体不可或缺的生命活动之一，人的一生大约有1/3的时光贯穿于睡眠。随着人类社会的发展及人们面对生活和工作压力、饮食习惯、熬夜常态化等因素，诱发失眠症。失眠是一种常见的睡眠问题，临床主要表现为入睡困难、早醒、睡眠质量差，发病率逐年上升且趋于年轻化，已成为现代城市文明的流行病，严重影响人们健康和日常生活。2021年3月18日，慕思联手中国睡眠研究会发布了《2021运动与睡眠白皮书》，显示目前中国油3亿人存在睡眠障碍，56％的互联网用户表示自己有睡眠问题，九成青年由于睡前长期接触电子产品而出现睡眠不佳的情况。此前更有研究显示，中国成年人中38％饱受失眠困扰，国内有睡眠障碍的人群比例较之世界平均水平高10％。随着2020年新冠疫情的爆发，很多人的睡眠都出现了问题。长期失眠会导致精神萎靡、记忆力下降、注意力不集中、烦躁易怒等精神症状，更有甚者会导致精神分裂、抑郁等精神障碍疾病。由此可见，加深公众对睡眠的认识、改善睡眠健康，刻不容缓。
目前，对睡眠障碍治疗药物是首选，主要药物有巴比妥类、苯二氮卓类、非苯二氮卓类药、褪黑素类及一些抗抑郁药。但这些药物长期服用可产生依赖性、成瘾性、戒断症状及停药后出现反跳现象等毒副作用，故针对安全、高效的改善睡眠药物的研发刻不容缓。近年来，大量报道已证实药食同源植物如灵芝、辣木、玛咖、猕猴桃、人参、西番莲等富含多种营养及功能活性物质，具有良好的改善睡眠作用，与化学药物相比，副作用小、活性强，因此而受到国内外学者的重视，研究重心逐渐转向从天然产物中寻找改善睡眠的功能因子。
火棘Pyracantha fortuneana(Maxim.)Li作为云南一种特色药食同源植物，富含多种活性成分如黄酮(槲皮素、芦丁、山奈酚、柚皮素、金丝桃苷等)、多酚、多糖及色素等。现代药理学研究表明，火棘具有抗氧化、抗肿瘤、抗肥胖、抗糖尿病等功效，并未见其报道有改善睡眠作用。本发明的发明人发现火棘果提取物具有改善睡眠功能的作用，可应用于药物和食品当中。
发明内容
本发明涉及一种火棘果提取物在制备药物或食品中的应用，所述火棘果提取物通过火棘鲜果或火棘干果提取得到，所述提取方法为常规提取方法，例如水提、醇提、榨汁、榨油、发酵等。
本发明涉及一种火棘果提取物在制备改善睡眠功能的药物或食品中的应用。
进一步，所述火棘果提取物为火棘鲜果或火棘干果通过常规方法得到的提取物；优选包含火棘果果汁、水提物、70％乙醇提取物、火棘籽油、发酵火棘果渣，进一步优选70％乙醇提取物。
本发明涉及一种火棘果提取物的制备方法，所述
进一步，本发明涉及一种火棘果汁的制备方法，其特征在于将新鲜火棘果采用榨汁机压榨后，多层纱布过滤得到澄清果汁。
进一步，本发明涉及一种发酵火棘果渣粉的制备方法，其特征在于从发酵罐底部取出发酵后的火棘果渣，60℃烘干，将其放入超微粉碎机进行粉碎制得。
进一步，本发明涉及一种火棘果水提物的制备方法，将火棘果原料打粉，用水浸泡，过滤，合并滤液，浓缩，干燥，粉碎和过筛。
进一步，本发明涉及一种火棘油的制备方法，将火棘果的种子粉碎，提取，通过CO2超临界液体萃取，过滤后制得。
进一步，本发明涉及一种火棘果的70％乙醇提取物的制备方法，其特征在于，将火棘鲜果烘干后，用70％乙醇浸泡，多层纱布过滤，残渣再用70％乙醇浸泡，多层纱布过滤，合并两次滤液，上旋转蒸发仪进行浓缩，然后上冻干机制备冻干粉，备用。
进一步，第一次用70％乙醇浸泡的重量比为1：5-1：15，优选1：10；第二次用70％乙醇浸泡的重量比为1：5-1：15，优选1：8。
本发明涉及一种药物组合物，其特征在于，其中含有火棘果提取物，所述火棘果提取物包含火棘果果汁、水提物、70％乙醇提取物、火棘籽油、发酵火棘果渣，优选70％乙醇提取物。
本发明涉及一种食品，其特征在于，其中含有火棘果提取物，所述火棘果提取物包含火棘果果汁、水提物、70％乙醇提取物、火棘籽油、发酵火棘果渣，优选70％乙醇提取物。
本发明涉及一种火棘果提取物的HPLC的检测方法。采用高效液相色谱(HPLC)对火棘果渣粉、鲜果、火棘水提物、火棘果70％醇提物进行检测，检测的目标成分为：山奈酚、槲皮素、芦丁、金丝桃苷、槲皮苷和茶多酚；
液相色谱参数如下所示：
1.山奈酚-槲皮素色谱参数：TSK gel ODS-80TM色谱柱；流动相：A相：0.2％磷酸水溶液；B相：80％甲醇水溶液，梯度从40％B到90％B，流速为0.8mL/min，40min内完成，检出波长254nm，柱温40℃，进样量为10μL，每次完成后系统平衡7min后再次进样。分析样都经孔径为0.45μm的滤膜过滤后进行HPLC检测。
2.芦丁色谱条件：色谱柱为SHIMADZU shim-pack C18色谱柱,以乙腈(A)为有机相,0.5％醋酸(B)为流动相，采用梯度洗脱,设流速为0.8m L·min-1,波长为254nm，柱温为30℃,进样10μL。每次完成后系统平衡7min后再次进样。分析样都经孔径为0.45μm的滤膜过滤后进行HPLC检测。
3.金丝桃苷-槲皮苷色谱条件：色谱柱:Agilent Extend C18(4.6mm×250mm,5μm)，柱温:30℃；流速1mL/min；进样量:10μL；流动相A:0.3％磷酸-水溶液,流动相B:0.3％磷酸-乙腈；波长为265nm，梯度洗脱。每次完成后系统平衡7min后再次进样。分析样都经孔径为0.45μm的滤膜过滤后进行HPLC检测。
4.茶多酚：色谱柱：SB C18(250mm×4.6mm,5μm)；柱温:40℃；流速1mL/min；流动相A:乙腈；流动相B:0.5％甲酸水，波长为280nm梯度洗脱。每次完成后系统平衡7min后再次进样。分析样都经孔径为0.45μm的滤膜过滤后进行HPLC检测。
本文所用的术语“可药用辅料”包括任意和所有药学上可接受的载体或稀释剂、溶剂、分散介质、包衣料、表面活性剂、抗氧化剂、防腐剂、等张剂、吸收延迟剂、盐、防腐剂、稳定剂、粘合剂、赋形剂、崩解剂、润滑剂、甜味剂、矫味剂、染料等或其任意组合，如本领域普通技术人员已知的那样。在药物组合物或药物制剂中可以使用任何本领域已知的辅料，只要它与活性成分相容。
本发明所述火棘果，与火棘含义相同。
本发明所述火棘果70％醇提物，与70％乙醇提取物、醇提物、火棘鲜果醇提物、火棘醇提物或火棘果醇提物含义相同。
附图说明
图1火棘果对戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠作用的影响
图2火棘果70％乙醇提取物活性成分色谱图
图3火棘果水提取物活性成分色谱图
图4火棘果发酵渣粉活性成分色谱图
图5火棘鲜果汁活性成分色谱图
图1中：(A)小鼠入睡个数，(B)睡眠潜伏期，(C)睡眠持续时间；与阴性对照组相比：*p<0.05，**p<0.01,***p<0.001。
图2-4中：(A)阿魏酸和槲皮素的含量，(B)茶多酚含量，(C)芦丁、金丝桃苷、槲皮苷、山奈酚含量
实施例
实施例1火棘果提取物的制备方法
1.火棘果汁：采集新鲜火棘果，采用榨汁机压榨后，多层纱布过滤得到澄清果汁。
2.发酵火棘果渣粉：从发酵罐底部取出发酵后的火棘果渣，60℃烘干，将其放入超微粉碎机进行粉碎制得。
3.火棘果70％醇提物(下称70％乙醇提取物、醇提物、或火棘果醇提物)：新鲜采集的火棘鲜果，60℃烘干后，用70％乙醇(重量比1:10)浸泡过夜3天，多层纱布过滤，残渣再用70％乙醇(重量比1:8)浸泡3天，多层纱布过滤，合并两次滤液，上旋转蒸发仪进行浓缩，然后上冻干机制备冻干粉，备用。
4、水提物，采购自陕西帕尼尔生物科技有限公司
5、火棘果油，采购自陕西帕尼尔生物科技有限公司
实施例2火棘果提取物对阈下剂量戊巴比妥钠所致小鼠入睡的影响
将雄性ICR小鼠分为火棘果果汁、水提物、70％乙醇提取物、火棘籽油、发酵火棘果渣高低剂量组(2、1g/kg)，空白组，阳性对照组。
火棘果果汁、水提物、70％乙醇提取物、火棘籽油、发酵火棘果渣如实施例1所述的方法进行制备。
各组小鼠均灌胃给药，连续给药14d，空白组给予0.5％羧甲基纤维素溶液，阳性组给予安定(2mg/kg)。末次灌胃后30min，各鼠腹腔注射阈下剂量戊巴比妥钠溶液(30mg/kg)，观察并记录15min内每组小鼠的入睡只数(小鼠翻正反射消失达1min以上为入睡)
实验结果如图1所示，以上实验数据表明，与阴性对照组相比(给予0.5％羧甲基纤维素钠溶液)，火棘果提取物(火棘果果汁、水提物、70％乙醇提取物、火棘籽油、发酵火棘果渣)均具有不同程度改善睡眠的作用(p<0.05/0.01)，且具有良好的量效关系，其中以70％乙醇提取物效果最佳。
实施例3火棘果提取物对阈下剂量戊巴比妥钠所致小鼠入睡的影响
分组及给药同实施例2，各组小鼠继续灌胃3d后，末次灌胃后30min，注射阈剂量戊巴比妥钠溶液(50mg/kg)，观察并记录小鼠入睡潜伏期和睡眠持续时间。
实施例4戊四氮诱导小鼠惊厥实验
分组及给药同实施例3，末次灌胃后30min，各鼠腹腔注射戊四氮溶液(90mg/kg)，观察并记录15min内各组小鼠惊厥数及死亡数。
表1 不同火棘果提取物的戊四氮诱导小鼠惊厥实验结果
表注：与阴性对照组比较，**p<0.01,***p<0.001；死亡率(100％)＝(每组惊厥小鼠死亡只数/每组动物总数)×100％；死亡保护率(％)＝(空白对照组死亡动物数-各给药组死亡动物数)/空白对照组死亡数×100％。
由表可知，与阴性对照组相比(给予0.5％羧甲基纤维素钠溶液)，火棘果70％乙醇提取物高剂量组具有明显的抗惊厥作用(p<0.01)，为改善睡眠保健品研发供有力的实验依据。
实施例2-4中所有数据应用SPSS 18.0统计软件进行分析，方法包括不成对t检验、单向方差分析(one-way ANOVA)、卡方检验(χ2)、双向方差分析(two-way ANOVA)等，以P<0.05为差异有显著性。应用GraphPad Prism5作图软件，采用平均数±标准误的方式对实验数据进行作图。
实施例5火棘果营养成分及其相关提取物的的检测方法
火棘果营养成分及其相关提取物的化学成分进行了检测，为本项目开展提供了物质基础，实验结果如下：
(1)化学成分分析
采用高效液相色谱(HPLC)对火棘果渣粉、鲜果、火棘水提物、火棘果70％醇提物进行检测，检测的目标成分为：山奈酚、槲皮素、芦丁、金丝桃苷、槲皮苷和茶多酚。
液相色谱参数如下所示：
1.山奈酚-槲皮素色谱参数：TSK gel ODS-80TM色谱柱；流动相：A相：0.2％磷酸水溶液；B相：80％甲醇水溶液，梯度从40％B到90％B，流速为0.8mL/min，40min内完成，检出波长254nm，柱温40℃，进样量为10μL，每次完成后系统平衡7min后再次进样。分析样都经孔径为0.45μm的滤膜过滤后进行HPLC检测。
2.芦丁色谱条件：色谱柱为SHIMADZU shim-pack C18色谱柱,以乙腈(A)为有机相,0.5％醋酸(B)为流动相，采用梯度洗脱,设流速为0.8m L·min-1,波长为254nm，柱温为30℃,进样10μL。每次完成后系统平衡7min后再次进样。分析样都经孔径为0.45μm的滤膜过滤后进行HPLC检测。
3.金丝桃苷-槲皮苷色谱条件：色谱柱:Agilent Extend C18(4.6mm×250mm,5μm)，柱温:30℃；流速1mL/min；进样量:10μL；流动相A:0.3％磷酸-水溶液,流动相B:0.3％磷酸-乙腈；波长为265nm，梯度洗脱。每次完成后系统平衡7min后再次进样。分析样都经孔径为0.45μm的滤膜过滤后进行HPLC检测。
4.茶多酚：色谱柱：SB C18(250mm×4.6mm,5μm)；柱温:40℃；流速1mL/min；流动相A:乙腈；流动相B:0.5％甲酸水，波长为280nm梯度洗脱。每次完成后系统平衡7min后再次进样。分析样都经孔径为0.45μm的滤膜过滤后进行HPLC检测。
对于火棘果70％醇提物的HPLC分析如图2所示，表2显示各活性成分的相对含量。
表2 火棘果70％醇提物中活性成分相对含量
对于火棘果水提物的HPLC分析如图3所示，表3显示各活性成分的相对含量。
表3 火棘果水提物中活性成分相对含量
对于火棘果渣粉的HPLC分析如图4所示，表4显示各活性成分的相对含量。
表4 火棘果渣粉中活性成分相对含量
对于火棘鲜果汁的HPLC分析如图5所示，表5显示各活性成分的相对含量。
表5 火棘鲜果汁中活性成分相对含量
由上述测定结果可知，火棘果70％乙醇提物中活性成分的相对含量远远高于其他受试物，在各活性成分中以芦丁、金丝桃苷、槲皮素、阿魏酸、山奈酚含量为主。
Claims (1)
1.一种火棘果提取物在制备改善睡眠功能的药物或食品中的应用，其特征在于
其中含有火棘果的70％乙醇提取物，所述
火棘果的70％乙醇提取物的制备方法是：新鲜采集的火棘鲜果，60℃烘干后，用70％乙醇浸泡过夜3天，其中火棘鲜果与70％乙醇的重量比1:10，多层纱布过滤，残渣再用70％乙醇浸泡3天，其中残渣与70％乙醇重量比1:8，多层纱布过滤，合并两次滤液，上旋转蒸发仪进行浓缩，然后上冻干机制备冻干粉，备用。
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Legal Events
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| GR01 | Patent grant | ||
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