CN115887519A - 一种从金银花中有效提取microRNA有效成分的提取工艺 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种从金银花中有效提取microRNA有效成分的提取工艺，包括将金银花打磨成散粉状，单独制备成制剂或者与其他药物或辅料混合制备成复方中药制剂。本发明发现直接打粉的金银花冲泡后MIR2911含量显著高于金银花水煎剂，且当pH控制在5.0‑5.5范围内，高温灭菌几乎不影响MIR2911的含量。
Description
技术领域
本发明属于生物工程技术领域，涉及一种金银花中microRNA有效成分的提取工艺。
背景技术
中药是我国特有的以天然有效成分为基础的药物体系，被誉为“大自然母亲的药物宝库”，长期以来已有无数临床实践已证实其治疗的有效性。然而，现有的有效成分往往并不能系统阐明中药的有效成分和作用机制。
金银花自古以来以它的药用价值而闻名，中医认为其有“清热解毒、凉血化淤之功效”，长期以来被用于治疗风热、瘟病。近年来，对金银花的最新研究发现，其中存在一种特异性microRNA——MIR2911。MIR2911在金银花汤剂中能够稳定存在，经口服后能被吸收进循环，并递送到各个组织中去，直接抑制多种病毒的复制，减轻流感的症状。在细胞及动物水平的研究成果进一步证实，MIR2911能抑制埃博拉病毒、寨卡病毒、非洲猪瘟病毒、中东呼吸热病毒、猪轮状病毒及新冠病毒等多种病毒，是一种具有广谱抗病毒潜力的新型核酸类有效成分。
发明内容
1.本发明的目的第一方面是提供一种提高金银花microRNA有效成分的制剂工艺或工艺制剂，能够增加金银花中microRNA有效成分的产量，减少金银花煎煮过程中microRNA有效成分损失。本发明所述的microRNA有效成分，是一类来源于传统中药金银花的天然功能性核酸分子，具有调控非植物靶基因的功能。
2.本法发明的第二方面，提供了一系列用于提高金银花中microRNA有效成分的制剂工艺或工艺制剂，说明中所提制剂工艺是将市场上购买的金银花直接打磨成粉，散状冲服。
3.本发明的第三方面，证明了通过上述工艺制备的制剂中microRNA有效成分同样能够被哺乳动物吸收，并能够进入哺乳动物循环系统中，在血清中检测到。
4.本发明的第四方面，提供一种提高金银花中microRNA有效成分的工艺制剂形式包括片剂、胶囊剂、粉剂、丸剂、颗粒剂、糖浆剂、溶液、混悬液、乳剂、混悬剂、喷雾剂、气雾剂、粉雾剂、挥发性液体、注射液、粉针剂、外用溶液剂、洗剂、浇淋剂、搽剂、巴布膏剂、膏药、橡胶膏剂、软膏剂、硬膏剂、糊剂、滴眼剂、滴鼻剂、眼用软膏剂、含漱剂、舌下片剂或栓剂。
5.本发明的第五方面，提供一种提高金银花中microRNA有效成分的工艺制剂，其中复方粉剂，所加入的复方药物种类较多，可以是辅助金银花有效microRNA在人体发挥作用的中药粉剂或者共同起主要作用的中药粉剂。
6.本发明的第六方面，提供一种提高金银花中microRNA有效成分的工艺制剂，其中复方药剂，加入的是所加入的复方药物种类和形式较多，可以是辅助金银花有效microRNA发挥或者共同起主要作用的中药药剂，这部分说明中的复方中药药剂可以是中药水煎剂浓缩物或者提取物。
7.本发明的第七方面，提供一种提高金银花中microRNA有效成分的工艺制剂，这些不同形式需要依赖“药学上可以接受的载体”制成粉后，延长药效和使用周期，这些载体指的是一种或多种相容性固体或液体填料或凝胶物质它们适合于人使用，而且必须有足够的纯度和足够低的毒性。三是金银花打粉后跟其他中药粉剂相互掺和，通过上述载体行成不同的组合药剂。
8.本发明的第八方面，发现了一项可指标金银花核酸的microRNA-MIR2911，MIR2911具有调节非植物靶基因功能，非植物靶基因包括但不限于细菌基因、病毒基因、衣原体基因、酵母基因、动物基因。
9.在本发明的第九方面中，冲泡的MIR2911的吸收主要参照外泌体的MIR2911的量。
10.在本发明的第一方面中，所述非植物靶基因包括细菌基因、病毒基因、衣原体基因、酵母基因、动物基因或所述的非植物靶基因是病原体(包括细菌、病毒、衣原体等)的基因。
有益效果：
本发明发现直接打粉的金银花冲泡后MIR2911含量显著高于金银花水煎剂，且当pH控制在5.0-5.5范围内，高温灭菌几乎不影响MIR2911的含量。
附图说明
图1.显示8个不同产地金银花煎煮1.5h、粉剂冲泡10min后高压灭菌20min处理后，利用real-time PCR法，测定金银花药剂中MIR2911含量的结果。
图2.显示同一产地金银花加水煎煮、粉剂冲泡后，120℃高压灭菌5min处理后，利用real-time PCR法，测定金银花药剂中MIR2911含量的结果。
图3.显示不同pH下，加水煎煮、粉剂冲泡后，120℃高压灭菌5min处理后，利用real-time PCR法，测定金银花药剂中MIR2911含量的结果。
图4.显示利用加水煎煮、粉剂冲泡方法制备金银花制剂后，对小鼠进行灌胃，3小时后检测小鼠血清中MIR2911含量
图5.显示利用加水煎煮、粉剂冲泡方法制备金银花制剂后，对小鼠进行灌胃，3小时后检测小鼠血清外泌体中MIR2911含量
图6显示金银花制剂中MIR2911有效成分MIR2911与新冠病毒基因组的预测结合位点
图7通过luciferase实验证明MIR2911与新冠病毒基因组上结合位点的结合能力。
具体实施方式
发现一种提高金银花中microRNA有效成分的制剂工艺，一方面大大改善了传统中医药金银花的水煎剂中microRNA有效成分的损失，另一方面可用于调控动物体内所述内源性靶基因的表达进而用于调控动物的生理病理活动。因此可用于指导金银花入药的药剂形式。在此基础上，发明人完成了本发明。
金银花microRNA有效成分
此外本发明所提的核酸包括各种形式的microRNA，例如pri-microRNA、pre-microRNA以及microRNA成熟体.
所述金银花microRNA例子，包括但并不限于MIR2911，尤其是选自下列的一种或多种：MIR156h、MIR166f、MIR396a、MIR166a、MIR168a、MIR1440、MIR2910、MIR2911、MIR2915、MIR2916。
提高金银花microRNA有效成分的工艺
加水煎煮组，取6g金银花加1L水煎煮1.5小时浓缩至约200mL。粉剂冲泡，在金银花的制剂过程中，首先将购买的金银花直接机器打磨，最终颗粒大小100-300目，打磨后的粉剂马上称重。利用1M浓盐酸调节至不同pH值后的纯净水加热至沸腾，每6g粉剂加入200毫升沸水进行冲泡10分钟，所得汤剂用100目筛过滤残渣。为满足除菌需求，利用120℃高温灭菌5分钟，所得汤剂用于灌胃小鼠。
动物实验方案：
取6周龄C57bl/6j小鼠，禁食过夜后，以0.5mL/只剂量灌胃给药金银花制剂(pH5.0的制剂)，3小时后取血清检测MIR2911吸收情况，每只小鼠以自身灌胃前所取血清样品作为自身对照。
应用
不同金银花药剂混匀后用Trizol法抽提RNA，通过RNA逆转录体系形成cDNA样品，用植物microRNA设计引物，加入TaqMan探针再进行PCR反应，检测进金银花药剂中MIR2911含量。
本发明所述一种金银花microRNA有效成分的工艺制剂是指粉剂以及粉剂再加工的药剂。其中所述的金银花microRNA具有调控非植物靶基因的功能。因此也可用于制备与其他中药混合后调控非植物靶基因的组合药物。其中所述的调控包括抑制下调靶基因的表达、促进上调靶基因的表达。
所述非植物靶基因包括细菌基因、病毒基因、衣原体基因、酵母基因、动物基因或所述的非植物靶基因是病原体(包括细菌、病毒、衣原体等)的基因。
所述非植物靶基因相关疾病包括肿瘤(如肝癌、肺癌)；急慢性传染病(如病毒性流感、病毒性肝炎、艾滋病、SARS等的病毒性疾病，如结核、细菌性肺炎等的细菌性疾病，以及病原微生物导致的急慢性传染病)；其它急慢性疾病(如呼吸系统疾病、免疫系统疾病、血液与造血系统疾病、如心脑血管疾病的循环系统疾病、内分泌系统代谢性疾病、消化系统疾病、神经系统疾病、泌尿系统疾病、生殖系统疾病和运动系统疾病)。
本发明中金银花工艺制剂分为粉剂和粉后药剂两种形式，其中粉剂包括单粉剂和复方粉剂，粉后药剂也分为单药剂和复方药剂两种形式。给药方式包括口服、呼吸道、注射、透皮、粘膜或腔道给药。
本发明中粉后药剂包括片剂、胶囊剂、粉剂、丸剂、颗粒剂、糖浆剂、溶液、混悬液、乳剂、混悬剂、喷雾剂、气雾剂、粉雾剂、挥发性液体、注射液、粉针剂、外用溶液剂、洗剂、浇淋剂、搽剂、巴布膏剂、膏药、橡胶膏剂、软膏剂、硬膏剂、糊剂、滴眼剂、滴鼻剂、眼用软膏剂、含漱剂、舌下片剂或栓剂。
本发明中一种提高金银花核酸有效工艺药剂是一种粉后剂形，主要分为三种形式，一是单纯的金银花粉剂，沸水冲泡后服用，这个时候可以和其他中药(水煎汤剂或粉剂)一起口服。二是单一金银花的打粉后通过“药学上可以接受的载体”制成粉后药剂，延长药效和使用周期，这些载体指的是一种或多种相容性固体或液体填料或凝胶物质它们适合于人使用，而且必须有足够的纯度和足够低的毒性。三是金银花打粉后跟其他中药粉剂相互掺和，通过上述载体行成不同的组合药剂。
药学上可以接受的载体部分例子有纤维素及其衍生物(如梭甲基纤维素钠、乙基纤维素钠、纤维素乙酸酷等)、明胶、滑石、固体润滑剂如硬脂酸、硬脂酸镁、硫酸钙、植物油如豆油、芝麻油、花生油、橄榄油等、多元醇如丙二醇、甘油、甘露醇、山梨醇等、乳化剂如吐温、润湿剂(如十二烷基硫酸钠、着色剂、调味剂、稳定剂、抗氧化剂、防腐剂、无热原水等)
通过本发明所述的方法鉴定出金银花中自然状态下相较于水煎汤剂功能性microRNA，可直接指导技术人员对所述核酸进行人工合成microRNA从而提高金银花中该类有效microRNA的生产。并将合成的植物功能性分子与药学上可接受的载体混合microRNA从而形成组合药物。
本发明所述的一种提高金银花microRNA有效成分的工艺制剂可以同样用于其他可打磨成粉中药中，这类中药制法简便，剂量可随症增减，后期可根据疗法制成单散剂和复方散剂。
给需要的对象如哺乳动物或人施用本发明所述金银花工艺制剂从而实现预防或治疗与非植物靶基因相关的疾病，其中所述的金银花microRNA有效成分具有调控非植物靶基因包括细菌基因、病毒基因、衣原体基因、酵母基因、动物基因的功能。
Claims (6)
1.一种提高金银花中microRNA有效成分的制剂工艺，其特征在于，将金银花打磨成散粉状，单独制备成制剂或者与其他药物或辅料混合制备成复方中药制剂。
2.根据权利要求1所述的制剂工艺，其特征在于，所述的制剂选自片剂、胶囊剂、粉剂、丸剂、颗粒剂、糖浆剂、溶液、混悬液、乳剂、混悬剂、喷雾剂、气雾剂、粉雾剂、挥发性液体、注射液、粉针剂、外用溶液剂、洗剂、浇淋剂、搽剂、巴布膏剂、膏药、橡胶膏剂、软膏剂、硬膏剂、糊剂、滴眼剂、滴鼻剂、眼用软膏剂、含漱剂、舌下片剂或栓剂中的任意一种。
3.根据权利要求1所述的制剂工艺，其特征在于，所述的其他药物是辅助金银花有效microRNA在人体发挥作用的中药粉剂或者共同起主要作用的中药粉剂。
4.根据权利要求1所述的制剂工艺，其特征在于，所述的复方中药制剂为中药水煎剂浓缩物或者提取物。
5.根据权利要求1所述的制剂工艺，其特征在于，将金银花药材直接打磨成粉剂，最终颗粒大小100-300目，利用浓盐酸调节至pH值为5.0-5.5后的纯净水加热至沸腾，每6g粉剂加入200毫升pH为5.0-5.5的沸水进行冲泡，所得汤剂用100目筛过滤残渣。
6.根据权利要求1所述的制剂工艺，其特征在于，所述的制剂工艺还包括在汤剂过滤后经120℃高温灭菌5分钟的步骤。
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|---|---|---|---|---|
| CN103589721A (zh) * | 2012-08-15 | 2014-02-19 | 北京命码生科科技有限公司 | 植物微小核糖核酸的提取、制备及其应用 |
| CN106511484A (zh) * | 2016-12-07 | 2017-03-22 | 洛阳君山制药有限公司 | 一种复方金银花颗粒的提取制备工艺 |
| CN109985126A (zh) * | 2017-12-29 | 2019-07-09 | 刘海燕 | 一种野菊花金银花清热解毒泡腾片 |
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