CN115852048A - 检测四种呼吸道病毒的等温多自配引发扩增试剂和试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明属于分子检测技术领域，具体涉及检测四种呼吸道病毒的等温多自配引发扩增试剂和试剂盒。本发明提供了一种检测呼吸道病毒的等温多自配引发扩增试剂，针对每种病毒分别设计6条引物，分别是四条混合式引物(DsF、DsR、FIT和RIT)和两条非混合式引物(SteR和SteF)。本发明基于新型等温多自配引发扩增技术(IMSA)建立了对新型冠状病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒的快速检测方法，整个检测时间可缩短至1.5小时内，检测灵敏度和特异性可与实时荧光定量PCR媲美，并可完成可视化检测，且无需特殊仪器。
Description
技术领域
本发明属于分子检测技术领域，具体涉及检测四种呼吸道病毒的等温多自配引发扩增试剂和试剂盒。
背景技术
近年来，核酸扩增技术成为病原微生物快速检测的主要手段。目前，核酸扩增主要基于两种策略：一种是通过升温降温来完成模板变性、退火、延伸：另一种是在等温条件下由特殊功能性酶的作用下，完成模板的大量扩增。传统的聚合酶链式反应(PCR)是基于热循环的核酸分子扩增技术。随着PCR技术的发展，实时荧光定量PCR、多重PCR、巢式PCR及逆转录PCR也相继被开发出来。PCR技术目前已经广泛采用被作为分子诊断的标准分析技术，但在现场检测合床旁检测(POCT)的应用中受限。而等温扩增技术仅需要简单的恒温装置即可实现，且与PCR相比，能在短时间内产生大量扩增子，实现快速检测，但是扩增效率较低。
现有技术开发的新型的等温核酸扩增技术，即等温多自配引发扩增(isothermalmultiple self-matching-initiated amplication，IMSA)，在等温核酸扩增过程中会产生多倍数的能自我配对继而引发循环扩增的特殊核苷酸结构(self-matching structure，SMS)。这种结构的大量产生富集，使得随后循环扩增引发几率明显增加，继而使得扩增效率增加，最终使得检测灵敏度提升。但是目前并没有基于IMSA检测呼吸道病毒的研究。
发明内容
本发明的目的在于提供检测四种呼吸道病毒的等温多自配引发扩增试剂和试剂盒，可用于可视化检测四种常见的呼吸道病毒，灵敏度高、特异性良好。
本发明提供了一种检测呼吸道病毒的等温多自配引发扩增试剂，所述等温多自配引发扩增试剂包括针对呼吸道病毒的特异基因设计的引物，针对每种呼吸道病毒分别设计6条引物；
当所述呼吸道病毒为新型冠状病毒时，所述特异基因包括ORFlab基因和/或N基因；
当所述呼吸道病毒为甲型流感病毒时，所述特异基因为Matrix基因；
当所述呼吸道病毒为乙型流感病毒时，所述特异基因为NS1基因；
当所述呼吸道病毒为呼吸道合胞病毒时，所述特异基因为Polymerase基因。
优选的，当所述呼吸道病毒为新型冠状病毒时，所述6条引物包括ORF1ab-DsF、ORF1ab-DsR、ORF1ab-FIT、ORF1ab-RIT、ORF1ab-SteF和ORF1ab-SteR，或N-DsF、N-DsR、N-FIT、N-RIT、N-SteF和N-SteR；
其中ORF1ab-DsF的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，ORF1ab-DsR的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，ORF1ab-FIT的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，ORF1ab-RIT的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，ORF1ab-SteF的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，ORF1ab-SteR的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；
N-DsF的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示，N-DsR的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示，N-FIT的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示，N-RIT的核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示，N-SteF的核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示，N-SteR的核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示。
优选的，当所述呼吸道病毒为甲型流感病毒时，所述6条引物包括FluA-DsF、FluA-DsR、FluA-FIT、FluA-RIT、FluA-SteF和FluA-SteR；
其中FluA-DsF的核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示，FluA-DsR的核苷酸序列如SEQID NO.14所示，FluA-FIT的核苷酸序列如SEQ ID NO.15所示，FluA-RIT的核苷酸序列如SEQID NO.16所示，FluA-SteF的核苷酸序列如SEQ ID NO.17所示，FluA-SteR的核苷酸序列如SEQ ID NO.18所示。
优选的，当所述呼吸道病毒为乙型流感病毒时，所述6条引物包括Flu B-DsF、FluB-DsR、Flu B-FIT、Flu B-RIT、Flu B-SteF和Flu B-SteR；
所述Flu B-DsF的核苷酸序列如SEQ ID NO.19所示，Flu B-DsR的核苷酸序列如SEQ ID NO.20所示，Flu B-FIT的核苷酸序列如SEQ ID NO.21所示，Flu B-RIT的核苷酸序列如SEQ ID NO.22所示，Flu B-SteF的核苷酸序列如SEQ ID NO.23所示，Flu B-SteR的核苷酸序列如SEQ ID NO.24所示。
优选的，当所述呼吸道病毒为呼吸道合胞病毒时，所述6条引物包括RSV-DsF、RSV-DsR、RSV-FIT、RSV-RIT、RSV-SteF和RSV-SteR；
其中RSV-DsF的核苷酸序列如SEQ ID NO.25所示，RSV-DsR的核苷酸序列如SEQ IDNO.26所示，RSV-FIT的核苷酸序列如SEQ ID NO.27所示，RSV-RIT的核苷酸序列如SEQ IDNO.28所示，RSV-SteF的核苷酸序列如SEQ ID NO.29所示，RSV-SteR的核苷酸序列如SEQ IDNO.30所示。
本发明还提供了一种包含上述等温多自配引发扩增试剂的试剂盒。
优选的，所述试剂盒中，针对每种呼吸道病毒所设计的引物的工作浓度的比值，均为：DsF和DsR的组合:FIT和RIT的组合:SteR和SteF的组合＝1:4:8。
优选的，所述试剂盒中还包括可视化检测试剂。
本发明还提供了一种非诊疗目的的检测呼吸道病毒的等温多自配引发扩增方法，包括以下步骤：提取目标事件中的RNA，分别利用所述RNA与上述等温多自配引发扩增试剂配制反应体系，于60～65℃环境中反应1.5h，判定是否阳性。
优选的，当肉眼观察到白色沉淀，证明为阳性；
或当于扩增前加入羟基萘酚蓝染料后，颜色从紫色变成天蓝色，证明为阳性；
或当于扩增后加入羟基萘酚蓝改良染料后，颜色从灰色变成深绿色，证明为阳性；
或当采用1％琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物时，出现梯子状条带，证明为阳性。
有益效果：本发明提供了一种检测呼吸道病毒的等温多自配引发扩增试剂，针对每种病毒分别设计6条引物，分别是四条混合式引物(DsF、DsR、FIT和RIT)和两条非混合式引物(SteR和SteF)。本发明基于新型等温多自配引发扩增技术(IMSA)建立了对新型冠状病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒的快速检测方法，分别选择ORF1ab基因、N基因、Matrix基因、NS1基因和呼吸道合胞病毒Polymerase基因序列的保守区域分别进行引物设计。利用本发明所述IMSA试剂，整个检测时间可缩短至1.5小时内，检测灵敏度可与实时荧光定量PCR媲美。其次，检测特异性高。所设计的6条特异性引物，只在其与识别靶序列中七个结合区完全匹配的情况下扩增才能顺利进行。再则，所有的扩增过程都可在60～65℃等温下完成，无需PCR仪，降低了对实验硬件的要求。最后，污染机会低和结果可视化，从而实现了扩增反应的高灵敏性和高特异性。针对RNA病毒，可通过添加逆转录酶，建立逆转录等温多自配引发扩增(RT-IMSA)来实现扩增。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为IMSA引物设计位点及引物组合示意图；
图2为IMSA扩增中最初产生的四种自我配对结构。
具体实施方式
本发明提供了一种检测呼吸道病毒的等温多自配引发扩增试剂，所述等温多自配引发扩增试剂包括针对呼吸道病毒的特异基因设计的引物，针对每种呼吸道病毒的特异基因设计6条引物；
当所述呼吸道病毒为新型冠状病毒时，所述特异基因包括ORFlab基因和/或N基因；
当所述呼吸道病毒为甲型流感病毒时，所述特异基因为Matrix基因；
当所述呼吸道病毒为乙型流感病毒时，所述特异基因为NS1基因；
当所述呼吸道病毒为呼吸道合胞病毒时，所述特异基因为Polymerase基因。
在本发明中，IMSA扩增原理可分为两个阶段：一是原始自我配对结构(self-matching structure，SMS)的生成；二是基于SMS的自我循环扩增(cyclingamplification)，针对病原基因具有简单、快速、高灵敏性高特异性的检测优势；图1为IMSA引物设计的位点和组合，图2为IMSA扩增中最初产生的四种自我配对结构。本发明对所述病毒的毒株并没有特殊限定，针对各毒株及变异株均具有类似的灵敏度。
本发明针对不同的病毒，设计的引物并不相同，如表1～表4所示。
表1RT-IMSA检测新型冠状病毒引物组
表2RT-IMSA检测甲型流感病毒引物组
表3RT-IMSA检测乙型流感病毒引物组
表4RT-IMSA检测呼吸道合胞病毒引物组
本发明还提供了一种包含上述等温多自配引发扩增试剂的试剂盒。
本发明所述试剂盒中，针对不同病毒所设计的引物工作浓度的比值优选为：DsF和DsR的组合:FIT和RIT的组合:SteR和SteF的组合＝1:4:8，且DsF和DsR的浓度比、FIT和RIT的浓度比以及SteR和SteF的浓度比，均为1:1。
本发明所述试剂盒中优选还包括可视化检测试剂，如羟基萘酚蓝染料(HNB)、羟基萘酚蓝改良染料(1000×GeneFinderTM与15mMHNB的混合染料)。
本发明还提供了一种非诊疗目的的检测呼吸道病毒的等温多自配引发扩增方法，包括以下步骤：提取目标事件中的RNA，分别利用所述RNA与上述等温多自配引发扩增试剂配制反应体系，于60～65℃环境中反应1.5h，判定是否阳性。
利用本发明所述方法，可用于各级疾病预防控制机构，流感检测网络实验室，哨点医院用于SARS-Cov-2、FluA、FluB和RSV病毒检测和监测，且RNA的提取优选按照Qiagen试剂盒说明书提取不同来源的病原RNA。
本发明所述IMSA的反应体系以25μL计，优选包括：12.5μL(2×)反应液(广州迪澳生物科技有限公司)、对应于特定基因的6条IMSA引物各1.0μL[引物浓度为DsF与DsR(5pmol/μL)、FIT与RIT(20pmol/μL)、SteR与SteF(40pmol/μL)]、1μL Bst2.0DNA聚合酶(8U/μL，NEB公司)、0.5μL AMV反转录酶(10U/μL，Promega公司)和4μL RNA样品，添加无核酸酶水至体系总体积为25μL。混匀，置于温度为60～65℃恒温扩增装置中反应1.5h，然后85℃放置2min终止反应，即可进行阳性判定。在本发明中，当出现下列现象中的任何一个时，即可认定为对应病毒阳性：当肉眼观察到白色沉淀，证明为阳性；或当于扩增前加入羟基萘酚蓝染料后，颜色从紫色变成天蓝色，证明为阳性；或当于扩增后加入羟基萘酚蓝改良染料后，颜色从灰色变成深绿色，证明为阳性；或当采用1％琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物时，出现梯子状条带，证明为阳性。
为了进一步说明本发明，下面结合附图和实施例对本发明提供的检测四种呼吸道病毒的等温多自配引发扩增试剂和试剂盒进行详细地描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
基于新型等温多自配引发扩增技术(IMSA)检测SARS-Covs-2、甲型流感病毒、乙型流感病毒和呼吸道合胞病毒的特异性
1.1合成引物：按表1～4的引物信息表合成引物(上海生工生物有限公司)
1.2核酸提取：按照Qiagen试剂盒说明书提取不同来源的病原RNA。
1.3实验过程：针对不同病原基因的检测均建立如下新型等温多自配引发扩增技术(IMSA)的扩增反应体系：12.5μL(2×)反应液(广州迪澳生物科技有限公司)、对应于特定基因的6条IMSA引物各1.0μL[引物浓度为DsF与DsR(5pmol/μL)、FIT与RIT(20pmol/μL)、SteR与SteF(40pmol/μL)]、1μL Bst2.0DNA聚合酶(8U/μL，NEB公司)、0.5μL AMV反转录酶(10U/μL，Promega公司)和4μLRNA样品，添加无核酸酶水至体系总体积为25μL。混匀，置于温度为63℃恒温扩增装置中反应1.5h，然后85℃放置2min终止反应。
1.4结果判定：方法一，观察反应管内有无白色沉淀；方法二，于扩增前加入1μLHNB(3mmol/L)，待反应完，观察反应管颜色变化；方法三，于扩增后加入1μL HNB改良染料即1000×GeneFinderTM与15mM HNB的混合染料，观察反应管颜色变化；方法四，取5μL扩增产物进行1％琼脂糖凝胶电泳，观察有无梯度状条带出现。
1.5实验结果：只有对应的病原RNA才有特异性扩增或者阳性现象结果(以新型冠状病毒为例)。
表5新型冠状病毒的阳性示例
实施例2
基于新型等温多自配引发扩增技术(IMSA)检测SARS-Covs-2、甲型流感病毒、乙型流感病毒和呼吸道合胞病毒的灵敏度
2.1实验过程：将从样本提取的对应不同病原RNA10倍梯度稀释至10-1～10-7的稀释度，对应的IMSA检测的体系同实施例1。
2.2实验结果：新型冠状病毒的ORF1ab基因和N基因检测灵敏度可达10-7稀释度；甲型流感的Matrix基因检测灵敏度为10-6稀释度；乙型流感的NS1基因检测灵敏度为10-6稀释度；呼吸道合胞病毒的Polymerase基因检测灵敏度为10-7稀释度。
尽管上述实施例对本发明做出了详尽的描述，但它仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部实施例，人们还可以根据本实施例在不经创造性前提下获得其他实施例，这些实施例都属于本发明保护范围。
Claims (10)
1.一种检测呼吸道病毒的等温多自配引发扩增试剂，其特征在于，所述等温多自配引发扩增试剂包括针对呼吸道病毒的特异基因设计的引物，针对每种呼吸道病毒的特异基因设计6条引物；
当所述呼吸道病毒为新型冠状病毒时，所述特异基因包括ORFlab基因和/或N基因；
当所述呼吸道病毒为甲型流感病毒时，所述特异基因为Matrix基因；
当所述呼吸道病毒为乙型流感病毒时，所述特异基因为NS1基因；
当所述呼吸道病毒为呼吸道合胞病毒时，所述特异基因为Polymerase基因。
2.根据权利要求1所述等温多自配引发扩增试剂，其特征在于，当所述呼吸道病毒为新型冠状病毒时，所述6条引物包括ORF1ab-DsF、ORF1ab-DsR、ORF1ab-FIT、ORF1ab-RIT、ORF1ab-SteF和ORF1ab-SteR，或N-DsF、N-DsR、N-FIT、N-RIT、N-SteF和N-SteR；
其中ORF1ab-DsF的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，ORF1ab-DsR的核苷酸序列如SEQID NO.2所示，ORF1ab-FIT的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，ORF1ab-RIT的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，ORF1ab-SteF的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示和ORF1ab-SteR的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；
N-DsF的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示，N-DsR的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示，N-FIT的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示，N-RIT的核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示，N-SteF的核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示和N-SteR的核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示。
3.根据权利要求1所述等温多自配引发扩增试剂，其特征在于，当所述呼吸道病毒为甲型流感病毒时，所述6条引物包括FluA-DsF、FluA-DsR、FluA-FIT、FluA-RIT、FluA-SteF和FluA-SteR；
其中FluA-DsF的核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示，FluA-DsR的核苷酸序列如SEQ IDNO.14所示，FluA-FIT的核苷酸序列如SEQ ID NO.15所示，FluA-RIT的核苷酸序列如SEQ IDNO.16所示，FluA-SteF的核苷酸序列如SEQ ID NO.17所示和FluA-SteR的核苷酸序列如SEQID NO.18所示。
4.根据权利要求1所述等温多自配引发扩增试剂，其特征在于，当所述呼吸道病毒为乙型流感病毒时，所述6条引物包括Flu B-DsF、Flu B-DsR、Flu B-FIT、FluB-RIT、Flu B-SteF和FluB-SteR；
所述Flu B-DsF的核苷酸序列如SEQ ID NO.19所示，Flu B-DsR的核苷酸序列如SEQ IDNO.20所示，Flu B-FIT的核苷酸序列如SEQ ID NO.21所示，Flu B-RIT的核苷酸序列如SEQID NO.22所示，FluB-SteF的核苷酸序列如SEQ ID NO.23所示和Flu B-SteR的核苷酸序列如SEQ ID NO.24所示。
5.根据权利要求1所述等温多自配引发扩增试剂，其特征在于，当所述呼吸道病毒为呼吸道合胞病毒时，所述6条引物包括RSV-DsF、RSV-DsR、RSV-FIT、RSV-RIT、RSV-SteF和RSV-SteR；
其中RSV-DsF的核苷酸序列如SEQ ID NO.25所示，RSV-DsR的核苷酸序列如SEQ IDNO.26所示，RSV-FIT的核苷酸序列如SEQ ID NO.27所示，RSV-RIT的核苷酸序列如SEQ IDNO.28所示，RSV-SteF的核苷酸序列如SEQ ID NO.29所示和RSV-SteR的核苷酸序列如SEQID NO.30所示。
6.一种包含权利要求1～5任一项所述等温多自配引发扩增试剂的试剂盒。
7.根据权利要求6所述试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中，针对每种呼吸道病毒所设计的引物的工作浓度的比值，均为：DsF和DsR的组合:FIT和RIT的组合:SteR和SteF的组合＝1:4:8。
8.根据权利要求6或7所述试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还包括可视化检测试剂。
9.一种非诊疗目的的检测呼吸道病毒的等温多自配引发扩增方法，其特征在于，包括以下步骤：提取目标事件中的RNA，分别利用所述RNA与权利要求1～5任一项所述等温多自配引发扩增试剂配制反应体系，于60～65℃环境中反应1.5h，判定是否阳性。
10.根据权利要求9所述等温多自配引发扩增方法，其特征在于，当肉眼观察到白色沉淀，证明为阳性；
或当于扩增前加入羟基萘酚蓝染料后，颜色从紫色变成天蓝色，证明为阳性；
或当于扩增后加入羟基萘酚蓝改良染料后，颜色从灰色变成深绿色，证明为阳性；
或当采用1％琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物时，出现梯子状条带，证明为阳性。
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| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN115852048A (zh) |
Citations (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104169439A (zh) * | 2011-10-04 | 2014-11-26 | 杰纳罗生物系统有限责任公司 | 使用核酸探针和珠粒亚组检测呼吸道病原体的组合物和方法 |
| CN104388581A (zh) * | 2013-08-23 | 2015-03-04 | 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所 | 新型等温多自配引发扩增技术(imsa) |
| CN109762942A (zh) * | 2019-03-13 | 2019-05-17 | 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所 | 一种快速检测呼吸道合胞病毒的含内参双重等温核酸扩增方法 |
| CN110964854A (zh) * | 2019-12-19 | 2020-04-07 | 武汉中帜生物科技股份有限公司 | 用于同时检测七项呼吸道病原体核酸的试剂盒及其应用 |
| CN110964853A (zh) * | 2019-12-19 | 2020-04-07 | 武汉中帜生物科技股份有限公司 | 一种基于双扩增技术联合检测呼吸道合胞病毒、副流感病毒及腺病毒的试剂盒及其应用 |
| CN111088408A (zh) * | 2020-03-20 | 2020-05-01 | 广州凯普医药科技有限公司 | 一种新冠病毒、甲乙流感及呼吸道合胞病毒检测试剂盒 |
| CN111663007A (zh) * | 2020-07-17 | 2020-09-15 | 广州阳普医疗科技股份有限公司 | 一种多种病毒核酸联合检测引物与探针组合以及检测试剂盒 |
| CN112410470A (zh) * | 2020-12-03 | 2021-02-26 | 江苏默乐生物科技股份有限公司 | 新型冠状病毒和甲型、乙型流感病毒核酸快速检测试剂盒 |
| WO2022057060A1 (zh) * | 2020-09-17 | 2022-03-24 | 广州达安基因股份有限公司 | 多重检测呼吸道病毒核酸的方法及试剂盒 |
| KR20220040073A (ko) * | 2020-09-23 | 2022-03-30 | 주식회사 팍스젠바이오 | Rsv, 인플루엔자 a 및 인플루엔자 b 감염 여부 진단용 키트 및 이를 이용한 rsv, 인플루엔자 a 및 인플루엔자 b 검출방법 |
| CN114262759A (zh) * | 2022-02-11 | 2022-04-01 | 重庆巴斯德生物医药科技有限公司 | 一种联合检测多种呼吸道病毒的pcr引物组及试剂盒 |
-
2022
- 2022-10-24 CN CN202211304296.7A patent/CN115852048A/zh active Pending
Patent Citations (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104169439A (zh) * | 2011-10-04 | 2014-11-26 | 杰纳罗生物系统有限责任公司 | 使用核酸探针和珠粒亚组检测呼吸道病原体的组合物和方法 |
| CN104388581A (zh) * | 2013-08-23 | 2015-03-04 | 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所 | 新型等温多自配引发扩增技术(imsa) |
| CN109762942A (zh) * | 2019-03-13 | 2019-05-17 | 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所 | 一种快速检测呼吸道合胞病毒的含内参双重等温核酸扩增方法 |
| CN110964854A (zh) * | 2019-12-19 | 2020-04-07 | 武汉中帜生物科技股份有限公司 | 用于同时检测七项呼吸道病原体核酸的试剂盒及其应用 |
| CN110964853A (zh) * | 2019-12-19 | 2020-04-07 | 武汉中帜生物科技股份有限公司 | 一种基于双扩增技术联合检测呼吸道合胞病毒、副流感病毒及腺病毒的试剂盒及其应用 |
| CN111088408A (zh) * | 2020-03-20 | 2020-05-01 | 广州凯普医药科技有限公司 | 一种新冠病毒、甲乙流感及呼吸道合胞病毒检测试剂盒 |
| CN112342315A (zh) * | 2020-03-20 | 2021-02-09 | 广州凯普医药科技有限公司 | 一种新冠病毒、甲乙流感及呼吸道合胞病毒检测试剂盒 |
| CN111663007A (zh) * | 2020-07-17 | 2020-09-15 | 广州阳普医疗科技股份有限公司 | 一种多种病毒核酸联合检测引物与探针组合以及检测试剂盒 |
| WO2022057060A1 (zh) * | 2020-09-17 | 2022-03-24 | 广州达安基因股份有限公司 | 多重检测呼吸道病毒核酸的方法及试剂盒 |
| KR20220040073A (ko) * | 2020-09-23 | 2022-03-30 | 주식회사 팍스젠바이오 | Rsv, 인플루엔자 a 및 인플루엔자 b 감염 여부 진단용 키트 및 이를 이용한 rsv, 인플루엔자 a 및 인플루엔자 b 검출방법 |
| CN112410470A (zh) * | 2020-12-03 | 2021-02-26 | 江苏默乐生物科技股份有限公司 | 新型冠状病毒和甲型、乙型流感病毒核酸快速检测试剂盒 |
| CN114262759A (zh) * | 2022-02-11 | 2022-04-01 | 重庆巴斯德生物医药科技有限公司 | 一种联合检测多种呼吸道病毒的pcr引物组及试剂盒 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 国家知识产权局学术委员会编: "《产业专利分析报告 第81册 应用于即时检测关键技术》", 知识产权出版社, pages: 180 - 183 * |
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