CN115804735B - 多作用靶点的蛋黄油和一种加强功效的蛋黄油组合物及其在化妆品的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了多作用靶点的蛋黄油和一种加强功效的蛋黄油组合物及其在化妆品的应用，提供了蛋黄油在抑制人类炎症因子IL‑1α、TNF‑α或人类炎症介质PGE‑2来缓解皮肤炎症的作用，公开了蛋黄油能够显著促进I型，Ⅲ型和Ⅳ型胶原蛋白基因的表达的作用，意味着蛋黄油在舒缓、修护屏障损伤、抗皱紧致等方面均有潜在的应用。本发明还提供了包含蛋黄油、蛋壳膜和西班牙鼠尾草籽提取物的组合物，并且发现该组合物在以上方面具有更优表现。
Description
技术领域
本发明涉及化妆品领域，具体涉及一种多作用靶点的蛋黄油和加强功效的蛋黄油组合物及其在化妆品的应用。
背景技术
蛋黄油有脂肪类、蛋白质氨基酸类、维生素类、矿物质四大类成分。其中包括卵磷脂、脑磷脂、磷脂酰胆碱、棕榈酸、硬脂酸、油酸、亚油酸、亚麻酸、胆甾烯醇、麦角甾醇、亮氨酸、脯氨酸、维生素A,维生素B1、叶酸、维生素E、钙、铁、磷等。蛋黄油目前在烫伤药膏、修复乳液、爽身粉、婴儿湿疹修护膏、婴儿红臀修护膏等产品中有广泛应用。目前关于蛋黄油具有舒缓修护功能的解释为蛋黄油具有疏水性可隔绝外来刺激，减轻局部疼痛，含有大量的脂肪和蛋白质对创面有很好的营养和保护作用，能降低毛细血管的通透性，促进组织生长，具有收敛和抑菌作用。Joan Cunill等人发现蛋黄油能显著降低LPS引起小鼠的炎症因子IL-1β,TNF-α和MCP-1。
蛋壳膜是鸡蛋壳内的蛋白膜又被称为"凤凰衣",由与人体皮肤蛋白性质相近的角蛋白和胶原蛋白组成,是制作化妆品的良好原料.分析表明,蛋白膜中含80.07％蛋白质,18种氨基酸。
鼠尾草籽提取物含有不饱和脂肪酸omega-3和omega-6，这两种脂肪酸是人体无法合成的必须通过外源性补充的。西班牙鼠尾草籽提取物具有很好的抑菌性能，同时能够增强皮肤屏障。
现有的包含蛋黄油的化妆品配方中，蛋黄油的添加量多数比较高，且加入了很多其他的活性物，在具体的功效方面没有突出蛋黄油的功效，对于蛋黄油的功效及功效机理研究少。对于配方中少量添加蛋黄油的配方，蛋黄油的功效也没有做特别说明。蛋黄油抑制炎症因子仅在小鼠实验上进行，而化妆品实际是应用在人的身体皮肤上，蛋黄油对人皮肤炎症因子是否有效并无相关报道。
目前蛋黄油的功效研究集中在舒缓和保湿方面，蛋黄油在抗衰老方面也没有相关报道。而且目前也还没有包含蛋黄油的活性组合物及相关机理的研究。
发明内容
为解决上述问题，本发明提供了多作用靶点的蛋黄油和一种加强功效的蛋黄油组合物及其在化妆品的应用，提供了蛋黄油通过抑制人类炎症因子IL-1α、TNF-α或人类炎症介质PGE-2来缓解皮肤炎症的作用；公开了蛋黄油能够显著促进I型，Ⅲ型和Ⅳ型胶原蛋白基因的表达，意味着蛋黄油在舒缓、修护屏障损伤、抗皱紧致等方面均有潜在的应用。同时还提供了蛋黄油、蛋壳膜和西班牙鼠尾草籽提取物的组合物，并且发现该组合物在以上方面有更优的表现。
一方面，本发明提供了蛋黄油在用于制备抑制人IL-1α、TNF-α或PGE-2中的任意一种或多种的制剂的用途。
进一步地，所述蛋黄油为选自鸡蛋黄油，鸭蛋黄油或有机蛋黄油中的任意一种。
进一步地，所述蛋黄油优选为鸡蛋黄油。
经大量研究证明，鸡蛋黄油、鸭蛋黄油和有机蛋黄油中的有效成分类似，因此不论是鸡蛋黄油，鸭蛋黄油或有机蛋黄油都具有抑制人IL-1α、TNF-α或PGE-2中的任意一种或多种的效果。
进一步地，蛋黄油浓度为0.001％-5％，能有效抑制人炎症因子IL-1α、TNF-α或炎症介质PGE-2的表达。
进一步地，蛋黄油在用于制备促进I型胶原蛋白基因、III型胶原蛋白基因或IV型胶原蛋白基因中的任意一种或多种表达的制剂的用途。
进一步地，所述蛋黄油为选自鸡蛋黄油、鸭蛋黄油或有机蛋黄油中的任意一种或多种。
进一步地，蛋黄油浓度为0.001％-5％时，能有效促进I型胶原蛋白基因、III型胶原蛋白基因、IV型胶原蛋白基因的表达
再一方面，本发明提供了一种蛋黄油组合物，其特征在于，所述组合物包括蛋黄油、蛋壳膜和鼠尾草提取物。
进一步地，所述蛋黄油为选自鸡蛋黄油、鸭蛋黄油或有机蛋黄油中的任意一种或多种。
进一步地，所述蛋壳膜为蛋壳膜提取物或水解蛋壳膜。
进一步地，所述蛋壳膜优选为水解蛋壳膜。
进一步地，所述鼠尾草提取物为选自鼠尾草籽提取物、药鼠尾草提取物、西班牙鼠尾草提取物或西班牙鼠尾草籽油中的任意一种或多种。
进一步地，所述鼠尾草提取物优选为西班牙鼠尾草籽提取物。
进一步地，所述组合物中蛋黄油：蛋壳膜：鼠尾草提取物为(1～100)：(1～20)：(1～20)。
另一方面，本发明提供了上述的蛋黄油组合物在制备抑制人炎症因子或炎症介质的制剂或促进I型胶原蛋白基因、III型胶原蛋白基因或IV型胶原蛋白基因中的任意一种或多种表达的制剂上的用途。
同时本发明经大量实验证明，蛋黄油制备的制剂通过抑制人炎症因子IL-1α、TNF-α或炎症介质PGE-2来缓解皮肤炎症的作用。蛋黄油能够抑制炎症因子和炎症介质，并能够显著促进I型，Ⅲ型和Ⅳ型胶原蛋白基因的表达，意味着蛋黄油在舒缓、修护屏障损伤、抗皱紧致等方面均有潜在的应用。包含蛋黄油、蛋壳膜和西班牙鼠尾草籽提取物的组合物在以上方面有更优的表现。
本发明的有益效果：
1、蛋黄油可以通过抑制炎症因子IL-1α、TNF-α或炎症介质PGE-2，从而可用于皮肤受刺激引起的炎症舒缓和修护。
2、蛋黄油能促进I型，Ⅲ型和Ⅳ型胶原蛋白基因的表达并具有显著性。
3、包含蛋黄油、蛋壳膜和西班牙鼠尾草籽提取物的组合物对抑制IL-1α、TNF-α或炎症介质PGE-2具有协同增效作用，对促进I型，Ⅲ型和Ⅳ型胶原蛋白基因的表达具有协同增效作用，从而具有保湿，舒缓和抗老的功效。
附图说明
图1为实施例1中蛋黄油促进I型胶原蛋白基因表达的扩增倍数
图2为实施例1中蛋黄油促进III型胶原蛋白基因表达的扩增倍数
图3为实施例1中蛋黄油促进IV型胶原蛋白基因表达的扩增倍数
图4为实施例2中蛋黄油作用于3D皮肤模型上炎症因子IL-1α表达的平均浓度
图5为实施例2中蛋黄油作用于3D皮肤模型上炎症介质PGE-2表达的平均浓度
图6为实施例2中蛋黄油作用于3D皮肤模型上炎症因子TNF-α表达的平均浓度
图7为实施例3中蛋黄油和蛋黄油组合物促进I型胶原蛋白基因表达的扩增倍数
图8为实施例3中蛋黄油和蛋黄油组合物促进III型胶原蛋白基因表达的扩增倍数
图9为实施例3中蛋黄油和蛋黄油组合物促进IV型胶原蛋白基因表达的扩增倍数
图10为实施例4中蛋黄油和蛋黄油组合物作用于3D皮肤模型上炎症因子IL-1α表达的平均浓度
图11为实施例4中蛋黄油和蛋黄油组合物作用于3D皮肤模型上炎症介质PGE-2表达的平均浓度
图12为实施例4中蛋黄油和蛋黄油组合物作用于3D皮肤模型上对抑制炎症因子TNF-α表达的平均浓度
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细描述，需要指出的是，以下所述实施例旨在便于对本发明的理解，而对其不起任何限定作用。本实施例中使用的试剂均为已知产品，通过购买市售产品获得。
实施例1蛋黄油促进胶原蛋白基因的表达
选择成纤维细胞测试模型，根据成纤维细胞的细胞毒性结果，选择细胞活性80％以上的蛋黄油浓度(小于0.2％)。选择0.16％这一浓度的鸡蛋黄油(购自美国DRACO，型号EGG YOLK OIL)，并以二甲基亚砜(DMSO)为溶剂，进行成纤维细胞测试，采用qRT-PCR的方法测试I型，Ⅲ型和Ⅳ型胶原蛋白基因表达的扩增倍数，并以未添加鸡蛋黄油为空白对照，添加100ng/mL的转化生长因子TGF-β为阳性对照。结果如图1-3所示，其中图1为蛋黄油促进I型胶原蛋白基因表达扩增倍数示意图；图2为蛋黄油促进III型胶原蛋白基因表达扩增倍数示意图；图3为蛋黄油促进IV型胶原蛋白基因表达扩增倍数示意图。
由图1-3可见，添加了0.16％蛋黄油的成纤维细胞中，Collagen I、Collagen III、Collagen IV基因含量显著上升，可见蛋黄油可以促进多种胶原蛋白的生成，尤其是对促进Collagen I、Collagen III表达的效果，与阳性对照转化生长因子TGF-β的效果较接近，可见蛋黄油对促进Collagen I、Collagen III表达的效果更为显著，具有潜在的抗衰老功效。
实施例2蛋黄油抑制人炎症因子和炎症介质的表达
将蛋黄油(购自美国DRACO，型号EGG YOLK OIL)先进行角质形成细胞的细胞毒性测试，筛选细胞活力大于80％的浓度(小于1％)，根据细胞毒性的结果在SLS-Epikutis模型上进行测试。阴离子表面活性剂十二烷基硫酸钠(Sodium laurylsulfate，SLS)具有双亲性(亲水性和亲脂性)特征，在较大浓度下接触皮肤后能够损伤皮肤屏障，尤其是屏障中的脂质成分以及细胞膜，导致皮肤屏障损伤、干燥、红斑出现。因此本实施例以体外重组的表皮模型EpiKutis为研究对象，采用0.2％的SLS刺激造成屏障损伤模型，然后分别用不同浓度的蛋黄油进行处理，并以DMSO为溶剂，同时设置未添加SLS作为空白对照，添加0.2％的SLS刺激造成屏障损伤作为阴性对照，添加0.01％地塞米松作为阳性对照，通过ELISA测试炎症因子IL-1α、TNF-α以及炎症介质PGE-2的含量，测试结果如图4、图5、图6所示，其中图4为0.2％的蛋黄油抑制人炎症因子IL-1α的结果图；图5为0.2％、0.4％、0.5％的蛋黄油抑制人炎症介质PGE-2的结果图；图6为0.2％、0.4％、0.5％的蛋黄油抑制人炎症因子TNF-α的结果图。
由图4可以看出，0.2％的蛋黄油能够抑制人炎症因子IL-1α。
由图5可以看出，0.2％的蛋黄油能够抑制人炎症介质PGE-2，且随着蛋黄油浓度的升高，抑制作用越明显，当蛋黄油浓度达到0.5％时，能显著抑制人炎症介质PGE-2，效果好于0.01％的地塞米松。
由图6可见，0.2％的蛋黄油能够抑制人炎症因子TNF-α，且随着蛋黄油浓度的升高，抑制作用越明显。
实施例3蛋黄油、水解蛋壳膜和西班牙鼠尾草籽油组合物的制备
将90g蛋黄油(购自美国DRACO，型号EGG YOLK OIL)和5g西班牙鼠尾草提取物(购自美国signum，型号HYVIA)搅拌均匀，加入5g水解蛋壳膜(购自日本丘比，型号PEPTEM)搅拌分散均匀，作为组合原料。
实施例4蛋黄油组合物促进抑制胶原蛋白基因的表达
选择成纤维细胞测试模型，根据成纤维细胞的细胞毒性结果，选择细胞活性80％以上的蛋黄油组合物浓度(小于0.2％)。以未添加的纤维细胞为空白对照，添加100ng/mL浓度的转化生长因子TGF-β为阳性对照，同时设置多组活性成分进行比较，其中第一组为单独添加0.16％蛋黄油，第二组为单独添加0.1％水解蛋壳膜，第三组为单独添加0.1％鼠尾草籽油，第四组为添加0.1％的按照实施例3制备的蛋黄油组合物，并以DMSO为溶剂，进行成纤维细胞测试，采用qRT-PCR的方法测试I型，Ⅲ型和Ⅳ型胶原蛋白基因表达的扩增倍数，结果如图7-9所示，其中图7为促进I型胶原蛋白基因表达扩增倍数示意图；图8为促进III型胶原蛋白基因表达扩增倍数示意图；图9为促进IV型胶原蛋白基因表达扩增倍数示意图。
由图7可见，第一组(0.16％蛋黄油)和第二组(0.1％水解蛋壳膜)能够促进I型胶原蛋白基因表达，但都未能达到阳性对照转化生长因子TGF-β的效果，第三组(0.1％鼠尾草籽油)对促进I型胶原蛋白基因表达没有明显效果，而当采用第四组(蛋黄油、水解蛋壳膜和西班牙鼠尾草籽油组合物)时，其对促进I型胶原蛋白基因表达的作用远远超过了阳性对照转化生长因子TGF-β的效果，可见该组合物对促进I型胶原蛋白基因表达具有明显的协同增效作用。
由图8可见，第一组(0.16％蛋黄油)能够促进III型胶原蛋白基因表达，但未能达到阳性对照转化生长因子TGF-β的效果，第二组(0.1％水解蛋壳膜)和第三组(0.1％鼠尾草籽油)对促进I型胶原蛋白基因表达没有明显效果，而当采用第四组(0.1％的蛋黄油、水解蛋壳膜和西班牙鼠尾草籽油组合物)时，其对促进III型胶原蛋白基因表达的作用超过了阳性对照转化生长因子TGF-β的效果，可见该组合物对促进III型胶原蛋白基因表达具有明显的协同增效作用。
由图9可见，第一组(0.16％蛋黄油)和第二组(0.1％水解蛋壳膜)能够促进IV型胶原蛋白基因表达，但明显低于阳性对照转化生长因子TGF-β的效果，第三组(0.1％鼠尾草籽油)对促进I型胶原蛋白基因表达没有明显效果，而当采用第四组(蛋黄油、水解蛋壳膜和西班牙鼠尾草籽油组合物)时，其对促进IV型胶原蛋白基因表达的作用达到了阳性对照转化生长因子TGF-β的效果，可见该组合物对促进IV型胶原蛋白基因表达同样具有明显的协同增效作用。
实施例5蛋黄油组合物抑制人炎症因子和炎症介质的表达
将蛋黄油先进行角质形成细胞的细胞毒性测试，筛选细胞活力大于80％的浓度，根据细胞毒性的结果(小于1％)在SLS-Epikutis模型上进行测试。阴离子表面活性剂十二烷基硫酸钠(Sodium laurylsulfate，SLS)具有双亲性(亲水性和亲脂性)特征，在较大浓度下接触皮肤后能够损伤皮肤屏障，尤其是屏障中的脂质成分以及细胞膜，导致皮肤屏障损伤、干燥、红斑出现。因此本实验以体外重组的表皮模型EpiKutis为研究对象，采用0.2％的SLS刺激造成屏障损伤模型，然后以未添加SLS为空白对照，添加0.2％的SLS刺激造成屏障损伤作为阴性对照，添加0.01％地塞米松作为阳性对照，同时设置多组活性成分进行比较，并以DMSO为溶剂，其中第一组为单独添加0.2％蛋黄油，第二组为单独添加0.1％水解蛋壳膜，第三组为单独添加0.1％鼠尾草籽油，第四组为添加0.1％按照实施例3制备的蛋黄油组合物，进行处理，测试炎症因子以及炎症介质的含量。结果如图10、11、12所示，其中图10为抑制人炎症因子IL-1α的结果图，图11为抑制人炎症介质PGE-2的结果图，图12为抑制人炎症因子TNF-α的结果图。
由图10可见，第一组(0.2％蛋黄油)和第二组(0.1％水解蛋壳膜)能够抑制人炎症因子IL-1α的表达，但都未能达到阳性对照0.01％地塞米松的效果，第三组(0.1％鼠尾草籽油)对抑制人炎症因子IL-1α的表达基本没有效果，第四组(0.1％的蛋黄油、水解蛋壳膜和西班牙鼠尾草籽油组合物)对抑制人炎症因子IL-1α的表达的作用与第一组相当，可见该组合物对抑制人炎症因子IL-1α的表达的协同增效作用不明显。
由图11可见，第一组(0.2％蛋黄油)、第二组(0.1％水解蛋壳膜)和第三组(0.1％鼠尾草籽油)能够抑制人炎症介质PGE-2表达，但都未能达到阳性对照0.01％地塞米松的效果，而当采用第四组(蛋黄油、水解蛋壳膜和西班牙鼠尾草籽油组合物)时，其对抑制人炎症介质PGE-2表达的作用明显超过了阳性对照0.01％地塞米松的效果，可见该组合物对抑制人炎症介质PGE-2表达具有明显的协同增效作用。
由图12可见，第一组(0.2％蛋黄油)能够抑制人炎症因子TNF-α表达，明显低于阳性对照0.01％地塞米松的效果，第二组(0.1％水解蛋壳膜)和第三组(0.1％鼠尾草籽油)抑制人炎症因子TNF-α表达没有明显效果，第四组0.1％(蛋黄油、水解蛋壳膜和西班牙鼠尾草籽油组合物)对抑制人炎症因子TNF-α表达也同样没有明显效果。可见该组合物对抑制人炎症因子TNF-α的表达的协同增效作用不明显。
实施例6蛋黄油组合物的配比筛选
按照实施例3的制备方法，分别采用蛋黄油、水解蛋壳膜或鼠尾草籽油中的不同成分制备组合物，并选择不同的配比关系，并以DMSO为溶剂，采用如表1所示的配比配制组合物，并分别采用实施例1提供的方法考察组合物对促进I型胶原蛋白基因表达的效果，采用实施例2提供的方法考察组合物对抑制炎症介质PGE-2方面的效果。得到的结果如表1所示：
表1.蛋黄油组合物的最佳比例筛选
(可根据实际情况修改)
由表1得，当蛋黄油组合物中蛋黄油：水解蛋黄膜：鼠尾草籽油为(1～100)：(1～20)：(1～20)范围内时，蛋黄油组合物能显著促进I型胶原蛋白基因的表达，并明显抑制炎症介质PGE-2的表达，其中随着蛋黄油含量的上升，对促进I型胶原蛋白基因的表达和抑制炎症介质PGE-2的表达效果也越明显，但当蛋黄油含量上升到一定范围后，效果不再继续提高，故优选蛋黄油：蛋黄膜：鼠尾草籽油为5:1:1时为最佳蛋黄油组合物。
实施例7一种含有该活性物组合的化妆品配方
本发明所述的含有蛋黄油、水解蛋壳膜和鼠尾草籽油的组合物的化妆品配方组合物，在不损本发明效果的范围内，可以根据需要而适宜配合在化妆品、准药品领域中通常配合的各种成分，例如粉末成分、保湿剂、增稠剂、金属离子掩蔽剂、色素、pH调节剂、皮肤营养剂、维生素、防腐剂、抗氧化剂、抗氧化助剂、香料等。
本实施例采用蛋黄油、水解蛋壳膜和鼠尾草籽油的组合物作为活性组分来制备化妆品，主要成分如下表所示：
制备方法：
(1)A相：按照配比称量各项原料，将甜菜碱，EDTA-二钠加入水中，分散均匀。分散均匀后，缓慢散入丙烯酸(酯)类/C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物，常温混匀，升温至75-80℃，加入预混后的甘油和丙烯酰二甲基牛磺酸铵/VP共聚物，均质至料体表面光洁；
(2)B相：B相各原料混合均匀，加热至75-80℃；
(3)将B相原料加入上述步骤(1)中混合均匀的A相，75-80℃均质8-10min至混合均匀；
(4)降温至40-45℃，将C相防腐剂加入上述(3)混合均匀的料体中，混匀；
(5)依次加入D相原料至上述步骤(4)混合均匀的料体中，搅拌均匀，即得。
虽然本发明披露如上，但本发明并非限定于此。任何本领域技术人员，在不脱离本发明的精神和范围内，均可作各种更动与修改，因此本发明的保护范围应当以权利要求所限定的范围为准。
Claims (2)
1.一种蛋黄油组合物，其特征在于，所述组合物包括蛋黄油、蛋壳膜和鼠尾草提取物；所述蛋壳膜为水解蛋壳膜；所述鼠尾草提取物为鼠尾草籽油；所述组合物中蛋黄油：水解蛋壳膜：鼠尾草籽油的质量比为(1~100)：(1~20)：(1~20)。
2.如权利要求1所述的蛋黄油组合物，其特征在于，所述蛋黄油为选自鸡蛋黄油、鸭蛋黄油或有机蛋黄油中的任意一种或多种。
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