CN115754283A - 一种基于量子点化学发光法的免疫试纸条及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种基于量子点化学发光法的免疫试纸条及其制备方法，包括试纸条和反应缓冲液，所述试纸条包括背板以及依次设置于所述背板上的样品垫、荧光垫、反应垫和吸收垫，所述荧光垫上包被有量子点标记的抗体，所述反应垫上包被线形的辣根过氧化物酶标记的抗体或抗原蛋白形成检测线，所述反应缓冲液包含鲁米诺和过氧化氢。本发明首次将量子点化学发光法应用于免疫试纸条这类干式产品，使用该免疫试纸条检测具有很高的灵敏度和较宽的检测范围，并且检测速度快，能够明显提高检测速率，而且该产品可2～30℃下运输，降低运输和贮存成本，且产品稳定性更高，更易贮存。
Description
技术领域
本发明涉及免疫检测技术领域，具体涉及一种基于量子点化学发光法的免疫试纸条及其制备方法。
背景技术
化学发光是某种物质分子吸收化学能而产生的光辐射，这种物质分子为发光剂(或发光标记物)。化学发光法是依据化学检测体系中待测物浓度与体系的化学发光强度在一定条件下呈线性定量关系的原理，利用仪器对体系化学发光强度的检测而确定待测物含量的一种痕量分析方法。目前，化学发光法的商业化发光标记物主要为鲁米诺、吖啶酯、金刚烷化合物分子等，辐射波段位于可见光区。该方法在实际应用中，化学发光的发射强度依赖于各种环境因素，发射强度和时间的曲线有较大的差别。
量子点由于有着极好的光电性质逐渐成为潜在的化学发光(CL)发射体，它可以作为一种催化剂、能量接收体或直接地氧化参与化学发光反应来增强化学发光强度。近年来，将量子点与化学发光法联合应用于生物小分子的检测、DNA和蛋白质的分析、细胞成像以及免疫分析中的报道屡见不鲜，解决了很多生物分析上的难题。
然而，目前化学发光法通常需在液体环境上进行，产生的运输及保存过程中的冷链成本较高，且稳定性不高。
发明内容
本发明提供一种基于量子点化学发光法的免疫试纸条及其制备方法，将量子点化学发光法应用于干式量子点免疫层析法产品中，解决其运输及保存过程中的冷链成本较高的问题，且稳定性高、更易贮存。
本发明提供一种基于量子点化学发光法的免疫试纸条，所述免疫试纸条用于检测待测物，包括试纸条和反应缓冲液，所述试纸条包括背板以及依次设置于所述背板上的样品垫、荧光垫、反应垫和吸收垫，所述荧光垫上包被有量子点标记的标记物，所述反应垫上包被线形的与辣根过氧化物酶偶联的偶联物形成检测线，所述反应缓冲液包含鲁米诺和过氧化氢，所述待测物和所述偶联物与所述标记物竞争结合，或所述待测物与所述标记物和所述偶联物同时结合。
进一步的，所述反应垫上包被线形的羊抗鼠IgG多克隆抗体-辣根过氧化物酶形成质控线，所述质控线与所述样品垫的距离大于所述检测线与所述样品垫的距离；
或，所述反应垫上包被兔抗鸡IgY抗体-辣根过氧化物酶形成质控线，所述质控线与所述样品垫的距离大于所述检测线与所述样品垫的距离，所述荧光垫上包被有量子点标记的鸡IgY抗体。
进一步的，在反应垫发光后使用半导体激光器发射出特定波长的激光照射。
本发明还提供一种如上述的免疫试纸条的制备方法，所述量子点标记的标记物的制备方法包括以下步骤：
S1、稀释待标记的标记物；
S2、将活化试剂加入到S1稀释好的标记物中，混匀，室温孵育；
S3、将量子点溶液加入到S2的混合液中，混匀，室温孵育。
进一步的，所述量子点标记的标记物的制备方法还包括步骤S4：将封闭试剂加入到S3的混合液中，室温孵育。
进一步的，所述与辣根过氧化物酶偶联的偶联物的制备方法包括以下步骤：
S1、将待标记的偶联物在缓冲液中透析，调整待标记的偶联物的浓度；
S2、制备NaIO4溶液与辣根过氧化物酶溶液，并将两者混合，4℃下静置30min使辣根过氧化物酶氧化，将乙二醇缓慢加入氧化后的辣根过氧化物酶溶液，室温避光静置30min；
S3、在避光条件下，将氧化好的辣根过氧化物酶溶液直接加至已处理好的偶联物溶液中，室温反应2h，再加入NaBH4溶液，PBS透析过夜。
本发明还提供如上述的免疫试纸条在检测同型半胱氨酸中的应用，所述标记物为SAH抗体，所述偶联物为SAH；
或，所述标记物为HCY抗体，所述偶联物为HCY。
本发明还提供如上述的免疫试纸条在检测C反应蛋白中的应用，所述标记物和所述偶联物可同时与C反应蛋白结合，所述标记物为CRP第一抗体，所述偶联物为CRP第二抗体。
本发明提供的基于量子点化学发光法的免疫试纸条，首次将量子点化学发光法应用于免疫试纸条这类干式产品，使用该免疫试纸条检测，仪器设备简单、操作简便，自动化程度高，避免了杂散光的干扰，具有很高的灵敏度和较宽的检测范围，有效解决传统荧光免疫检测方法的灵敏度不足、线性范围不宽及化学发光的发射强度依赖于各种环境因素、发射强度和时间的曲线有较大的差别等缺点，不同于普通的试纸条往往只满足定性检测的要求，该试纸条可用于定量检测，并且检测速度快，能够明显提高检测速率，而且该产品可常温(2～30℃)下运输，降低运输和贮存成本，使该试纸条具有更大的利润空间，且产品稳定性更高，更易贮存。并且使用本发明的免疫试纸条检测了同型半胱氨酸(HCY)和C反应蛋白(CRP)，其检测结果也表明了该免疫试纸条具有很高的灵敏度和较宽的检测范围。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对本发明实施例的描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明的基于量子点化学发光法的免疫试纸条的结构示意图；
图2为使用本发明的免疫试纸条检测HCY的浓度-检测值坐标图；
图3为使用本发明的免疫试纸条检测CRP的浓度-检测值坐标图。
具体实施方式
为了使本发明要解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白，以下结合实施例及附图，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。以下结合具体实施例对本发明作具体的介绍。
本发明实施例提供一种基于量子点化学发光法的免疫试纸条，所述免疫试纸条用于检测待测物，包括试纸条和反应缓冲液，所述试纸条包括背板以及依次设置于所述背板上的样品垫、荧光垫、反应垫和吸收垫，所述荧光垫上包被有量子点标记的标记物，所述反应垫上包被线形的辣根过氧化物酶(HRP)标记的偶联物形成检测线，所述反应缓冲液包含鲁米诺和过氧化氢，所述待测物和所述偶联物与所述标记物竞争结合，或所述待测物与所述标记物和所述偶联物同时结合。
其中，量子点作为一种新型纳米荧光材料，具有诸多优异的荧光特性，量子点化学发光法为将量子点与化学发光法联用的方法，该方法基于量子点的化学发光共振能量转移(CRET)，化学发光共振能量转移(CRET)是一种化学发光供体(donor)和一种荧光接受体(acceptor)之间的距离小于10nm时发生的非辐射能量转移。因为量子点有较宽的激发光谱，所以特别适合作为CRET中的荧光接受体。用一个非常简化的机理可以这样描述：一个能激发发光的化合物被氧化，然后激发量子点接受体(即量子点)，使得量子点接受体发射的荧光大大增强(敏化荧光)，从而大大提高检测灵敏度。本发明提供的免疫试纸条将量子点荧光检测技术和辣根过氧化物酶+鲁米诺化学发光技术有效结合，辣根过氧化物酶+鲁米诺化学发光的能量转移激发量子点产生荧光。
具体过程：检测样品经反应缓冲液稀释后滴加至样品垫后，依次沿样品垫、荧光垫、反应垫层析移动，当检测样品中含待测物时，待测物和偶联物与标记物竞争结合(竞争法)或待测物与标记物和偶联物同时结合(夹心法)形成免疫复合物，免疫复合物中的HRP连续催化反应缓冲液中的鲁米诺和过氧化氢发生化学发光反应，进而发生CRET，激发量子点，敏化荧光，使用半导体激光器发射出特定波长的激光照射，分析仪检测其相对光子强度，检测样品中的待测物与相对光子强度成一定比例关系，分析仪自动拟合计算待测物浓度。当检测样品中不含待测物时，偶联物全部与标记物结合(竞争法)或无结合(夹心法)，对应分别在检测线处发出最大光或不发光。
本发明实施例提供的基于量子点化学发光法的免疫试纸条既可基于竞争法又可基于夹心法制备，且可检测的待测物既可为抗原又可为抗体。
具体的，所述反应垫上包被线形的羊抗鼠IgG多克隆抗体-辣根过氧化物酶形成质控线，所述质控线与所述样品垫的距离大于所述检测线与所述样品垫的距离，检测时荧光垫中包被的量子点标记的标记物层析移动，一部分与HRP偶联的偶联物结合，未结合的部分则继续层析移动至质控线，标记物与羊抗鼠IgG多克隆抗体结合，在此处发光，用于反映该免疫试纸条的质量和数据的有效性；
或，所述反应垫上包被兔抗鸡IgY抗体-辣根过氧化物酶形成质控线，所述质控线与所述样品垫的距离大于所述检测线与所述样品垫的距离，所述荧光垫上包被有量子点标记的鸡IgY抗体，检测时量子点标记的鸡IgY抗体层析移动，移动至质控线，鸡IgY抗体与兔抗鸡IgY抗体结合，在此处发光，为独立C线系统，不受量子点标记的标记物的结合量的影响，用于反映该免疫试纸条的质量和数据的有效性。
具体的，在反应垫发光后使用半导体激光器发射出特定波长的激光照射，量子点再次被激发出一定波长的荧光，荧光光强通过光敏二极管接收，将光信号转化为电压信号，使得量子点荧光信号增强数倍，仪器最终检测荧光信号，通过检测量子点荧光信号强度，以此为依据测量被测物的浓度和含量，从而进一步实现高灵敏度的检测目的。
具体的，所述反应垫的材质为硝酸纤维膜。
本发明还提供一种如上述的免疫试纸条的制备方法，所述量子点标记的抗体的制备方法包括以下步骤：
S1、稀释待标记的标记物；
S2、将活化试剂加入到S1稀释好的标记物中，混匀，室温孵育；
S3、将量子点溶液加入到S2的混合液中，混匀，室温孵育。
具体的，所述量子点标记的标记物的制备方法还包括步骤S4：将封闭试剂加入到S3的混合液中，室温孵育。
具体的，所述活化试剂为EDC和NHS。
具体的，所述封闭试剂为PBS(pH7.2)+5％BSA+1‰procline 300。
具体的，所述与辣根过氧化物酶偶联的偶联物的制备方法包括以下步骤：
S1、将待标记的偶联物在缓冲液中透析，调整待标记的偶联物的浓度；
S2、制备NaIO4溶液与辣根过氧化物酶溶液，并将两者混合，4℃下静置30min使辣根过氧化物酶氧化，将乙二醇缓慢加入氧化后的辣根过氧化物酶溶液，室温避光静置30min；
S3、在避光条件下，将氧化好的辣根过氧化物酶溶液直接加至已处理好的偶联物溶液中，室温反应2h，再加入NaBH4溶液，PBS透析过夜。
具体的，所述缓冲液为50mM碳酸盐缓冲液(0.015M Na2CO3，0.035M NaHCO3，pH9.6)。
本发明实施例还提供如上述的免疫试纸条在检测同型半胱氨酸中的应用，所述待测物和所述偶联物与所述标记物竞争结合。
具体的，所述标记物为SAH抗体，所述偶联物为SAH；
或，所述标记物为HCY抗体，所述偶联物为HCY。
本发明实施例还提供如上述的免疫试纸条在检测C反应蛋白(CRP)中的应用，所述标记物和所述偶联物可同时与C反应蛋白结合，所述标记物为CRP第一抗体，所述偶联物为CRP第二抗体。
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到，未详细描述的技术均按照本领域人员熟知的标准方法进行。
实施例1量子点标记的标记物的制备
1、试剂检查：在350～450nm紫外或蓝光光源照射下量子点应为发荧光的均质溶液。使用前通过低速离心收集试剂于管底，避免开盖溅洒损失，待标记的标记物可以是冻干粉状态或保存在磷酸钠缓冲溶液(PB/PBS pH7～8)中，配置后初始浓度最低不低于1mg/ml。
2、用10×反应液和去离子水稀释待标记的标记物浓度至1-10mg/ml范围内，缓冲体系为1×反应工作液；标记物为抗体时，抗体分子量约为150KDa，通过质量浓度(mg/ml)可换算抗体摩尔浓度，公式：抗体质量浓度(mg/ml)÷150(KDa)＝摩尔浓度(mM)。
3、按活化试剂EDC(10mg/ml)和NHS(10mg/ml)：标记物＝20：1的摩尔比，将活化试剂加入到步骤2中稀释好的标记物溶液中，混匀，室温孵育30分钟；反应混合物中活化试剂的量不得超过总反应体积的5％。
4、按标记物：量子点＝2∶1的摩尔比，将量子点溶液加入到步骤3的反应混合液中，混匀，室温孵育30分钟，标记完成。
5、选做：将封闭试剂(PBS(pH7.2)+5％BSA+1‰procline 300)加入到步骤4的反应混合液中，室温孵育30分钟，封闭完成，即可用于后续试验。
实施例2与辣根过氧化物酶(HRP)偶联的偶联物(NaIO4氧化法)的制备
1、偶联物的处理
待偶联的偶联物在50mM碳酸盐缓冲液(0.015M Na2CO3，0.035M NaHCO3，pH9.6)中透析，其间换液2次，偶联物的浓度调整为2mg/ml；或者将高浓度的偶联物用0.5M碳酸盐缓冲液(0.15M Na2CO3，0.35M NaHCO3，pH9.6)稀释到2mg/ml，如果原偶联物溶液中含有Tris、NH4+等游离氨基的试剂，必须透析除去。
2、HRP的氧化
2.1称取2mg HRP干粉(Frdbio)溶于100μL ddH2O中。
2.2称取NaIO4 21mg，溶于1mL的ddH2O中，吸取100μL NaIO4溶液与100μL的HRP溶液缓慢混合，4℃下静置30min，此时溶液为绿色。
(注意：此后的操作均在避光条件下进行。)
2.3吸取2μL乙二醇缓慢加入氧化后的HRP溶液，室温避光静置30min，此时溶液为褐色。
3、偶联物与HRP偶联
3.1将氧化好的HRP溶液直接加入到已处理好的偶联物溶液中，室温反应2h。
3.2称取0.4mg的NaBH4，溶解于20μL的ddH2O中，全部加入上步反应液中，4℃静置2h，每30min摇动一次。
3.3 PBS(pH7.2)透析过夜，加入体积比30％～50％的甘油，混匀后置于-20℃保存。
实施例3荧光垫、样品垫、反应垫的制备及免疫试纸条的组装
1、荧光垫的制备：切5mm×300mm的玻璃纤维，按照每条1ml的总体积进行配置，50ul标记液(实施例1制备的量子点标记的标记物)+950ul重悬液(PBS(pH7.2)+5％BSA+1‰procline 300)进行混合后，涂铺1条荧光垫；湿度小于20％，温度37度，干燥24小时，干燥备用。
2、样品垫的制备：根据实际要求切割玻璃纤维作为样品垫；以25mm×300mm为例，配制总体积5ml重悬液(PBS(pH7.2)+5％BSA+1‰procline 300)，将5ml液体涂每条样品垫；湿度小于20％，温度37度，干燥24小时，干燥备用。
3、反应垫的制备：根据实际要求切割硝酸纤维素膜作为反应垫，取实施例2制备的与辣根过氧化物酶偶联的偶联物经划膜仪线形包被于硝酸纤维素膜的观察结果的测试反应区，即形成检测线，37℃干燥2h，得到反应垫，4℃密封保存。
3、组装：依次将样品垫、荧光垫、反应垫和吸收垫粘附于PVC背板上，样品垫设置有样品孔。荧光垫粘附于样品垫之上，并与反应垫相搭接，反应垫与吸收垫相搭接，真空封装，4℃密封保存，可保质1年以上。
实施例4使用免疫试纸条检测同型半胱氨酸(HCY)
同型半胱氨酸(HCY)是一种含硫氨基酸，为蛋氨酸和半胱氨酸代谢过程中产生的重要中间产物。结合或二聚化的HCY(氧化型)在二硫苏糖醇(DTT)的作用下还原为游离HCY，在有足量的腺苷存在的情况下，游离HCY被重组的S-腺苷-同型半胱氨酸水解酶(rSAHHase)转化为S-腺苷-同型半胱氨酸(SAH)。
按实施例1-3制备测定HCY的免疫试纸条，其反应垫在距离检测线5mm远处线形包被1mg/ml的正常羊抗鼠IgG多克隆抗体-辣根过氧化物酶形成质控线，标记物为SAH抗体，量子点标记的SAH抗体按实施例1的方法制备，偶联物为SAH，与HRP偶联的SAH按实施例2的方法制备。
1.线性范围
使用制备的测定HCY的免疫试纸条检测浓度为1.56、3.13、6.25、12.50、25、50、100、200μmol/L的HCY，使用荧光免疫分析仪检测，结果如下表1所示，检测线性范围为0.78125-200μmol/L，以浓度为横坐标x轴，检测值为纵坐标y轴，上述各浓度和检测值在坐标轴中的分布如图2所示，计算其线性回归的相关系数r为0.999749，不低于0.9900。
2.检出限
使用制备的测定HCY的免疫试纸条检测空白样本20次，20次测定值及其平均值(M)和标准差(SD)见下表2，以M+2SD或M-2SD计算出相应的浓度，即为检出限，经计算检出限不高于0.78μmol/L。
3.特异性
使用制备的测定HCY的免疫试纸条检测内源性干扰物质胆红素(30mg/dl)和甘油三酯(1000mg/dl)存在时检测样本(10μmol/L)，结果如下表3所示，结果表明，对内源性干扰物质胆红素(30mg/dl)和甘油三酯(1000mg/dl)的交叉反应率均小于1％，达到预期性能标准的要求，以上内源性干扰物质对在一定浓度内，对检测结果无影响。
对于采用EDTA-K2和肝素抗凝的血浆样本，分析抗凝剂对本试剂检测结果的影响。对10份临床阴性样本和10份阳性临床样本，分别用EDTA-K2和肝素抗凝处理，然后按照正常的检测方法进行试验，相同样本来源病人的血清样本不经EDTA-K2和肝素抗凝处理进行检测作为对比，分析结果的一致性。结果如下表4所示：
(单位：μmol/L)
从表4可看出，使用本发明的免疫试纸条检测含EDTA-K2和肝素抗凝血浆样本与血清样本一致性良好，说明其检测不受EDTA-K2和肝素抗凝剂的影响。
实施例5使用免疫试纸条检测C反应蛋白(CRP)
CRP是由肝脏合成的一种急性时相反应蛋白，痕量存在于健康人血清中，当机体受到感染或组织损伤时含量迅速升高，随着病情改善或组织结构功能的恢复其含量恢复到正常水平。在感染发生后6～8小时开始升高，24～48小时达到顶峰。
按实施例1-3制备测定CRP的免疫试纸条，其反应垫在距离检测线5mm远处线形包被0.6-2.0mg/mL的正常兔抗鸡IgY抗体-辣根过氧化物酶形成质控线，在荧光垫还包被有0.1-0.6mg/mL量子点标记的鸡IgY抗体，标记物为CRP第一抗体，量子点标记的CRP第一抗体按实施例1的方法制备，偶联物为CRP第二抗体，与HRP偶联的偶联物按实施例2的方法制备。
1、线性范围
将接近线性区间上限的C反应蛋白高值样本用阴性血清按稀释比例1、0.25、0.03125、0.015625、0.007813稀释为5个浓度，其中低值浓度的样本须接近线性区间的下限。用试剂盒将每一浓度重复检测2次，分别求出检测结果的均值(yi)，结果如下表5所示。以稀释比列(xi)为自变量，以检测结果均值(yi)为因变量求出线性回归方程为y＝247.13x+0.9922，计算线性回归的相关系数R2为0.9996，不低于0.9900。
| 稀释比例 | 1 | 0.25 | 0.03125 | 0.015625 | 0.00048831 3 |
| 实测1(mg/L) | 246.90 | 65.73 | 7.92 | 3.99 | 0.125 |
| 实测2(mg/L) | 247.67 | 66.92 | 7.94 | 3.87 | 0.123 |
| 平均值(mg/L) | 247.28 | 66.32 | 7.93 | 3.93 | 0.124 |
2、准确度
使用C反应蛋白(CRP)国家标准品(A2，标定浓度为100ng/mL；B2，标定浓度为200ng/mL)进行检测，每个样品重复测定3次，计算相对偏差和平均相对偏差，结果见下表6所示。从表6中可知，相对偏差和平均相对偏差均不超过±15％。
3、检出限
对5份浓度近似最低检出限C反应蛋白的低值样本进行检测，每份样本检测5次，结果见下表7所示，从表7中可知，检出限不高于0.2mg/L。
4、重复性
用同一批号试剂盒检测高、低两种不同浓度的C反应蛋白质控品，各重复检测10次，分别计算10次检测结果的平均值(M)和标准差(SD)，并计算变异系数(CV)，结果见下表8所示，从表8中可知，变异系数均不大于10％。
| 标示值 | 100ng/mL | 200ng/mL |
| 实测1 | 94.37 | 212.36 |
| 实测2 | 101.59 | 206.48 |
| 实测3 | 96.65 | 201.68 |
| 实测4 | 102.50 | 195.96 |
| 实测5 | 107.56 | 188.91 |
| 实测6 | 95.24 | 194.86 |
| 实测7 | 94.17 | 214.39 |
| 实测8 | 111.78 | 198.43 |
| 实测9 | 101.08 | 210.49 |
| 实测10 | 105.65 | 191.45 |
| 平均值 | 101.06 | 201.50 |
| 标准差 | 6.02 | 9.03 |
| CV | 6.0％ | 4.5％ |
5、特异性
使用制备的测定CRP的免疫试纸条检测甘油三酯和胆红素存在时检测样本(100ng/m1)，结果如下表9所示，结果表明，对内源性干扰物质胆红素和甘油三酯的交叉反应率均小于1％，达到预期性能标准的要求，以上内源性干扰物质对在一定浓度内，对检测结果无影响。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (8)
1.一种基于量子点化学发光法的免疫试纸条，所述免疫试纸条用于检测待测物，包括试纸条和反应缓冲液，所述试纸条包括背板以及依次设置于所述背板上的样品垫、荧光垫、反应垫和吸收垫，其特征在于，所述荧光垫上包被有量子点标记的标记物，所述反应垫上包被线形的与辣根过氧化物酶偶联的偶联物形成检测线，所述反应缓冲液包含鲁米诺和过氧化氢，所述待测物和所述偶联物与所述标记物竞争结合，或所述待测物与所述标记物和所述偶联物同时结合。
2.如权利要求1所述的免疫试纸条，其特征在于，所述反应垫上包被线形的羊抗鼠IgG多克隆抗体-辣根过氧化物酶形成质控线，所述质控线与所述样品垫的距离大于所述检测线与所述样品垫的距离；
或，所述反应垫上包被兔抗鸡IgY抗体-辣根过氧化物酶形成质控线，所述质控线与所述样品垫的距离大于所述检测线与所述样品垫的距离，所述荧光垫上包被有量子点标记的鸡IgY抗体。
3.如权利要求1所述的免疫试纸条，其特征在于，在反应垫发光后使用半导体激光器发射出特定波长的激光照射。
4.一种如权利要求1-3任一项所述的免疫试纸条的制备方法，其特征在于，所述量子点标记的标记物的制备方法包括以下步骤：
S1、稀释待标记的标记物；
S2、将活化试剂加入到S1稀释好的标记物中，混匀，室温孵育；
S3、将量子点溶液加入到S2的混合液中，混匀，室温孵育。
5.如权利要求4所述的免疫试纸条的制备方法，其特征在于，所述量子点标记的标记物的制备方法还包括步骤S4：将封闭试剂加入到S3的混合液中，室温孵育。
6.如权利要求4所述的免疫试纸条的制备方法，其特征在于，所述与辣根过氧化物酶偶联的偶联物的制备方法包括以下步骤：
S1、将待标记的偶联物在缓冲液中透析，调整待标记的偶联物的浓度；
S2、制备NaIO4溶液与辣根过氧化物酶溶液，并将两者混合，4℃下静置30min使辣根过氧化物酶氧化，将乙二醇缓慢加入氧化后的辣根过氧化物酶溶液，室温避光静置30min；
S3、在避光条件下，将氧化好的辣根过氧化物酶溶液直接加至已处理好的偶联物溶液中，室温反应2h，再加入NaBH4溶液，PBS透析过夜。
7.如权利要求1-3任一项所述的免疫试纸条在检测同型半胱氨酸中的应用，其特征在于，所述标记物为SAH抗体，所述偶联物为SAH；
或，所述标记物为HCY抗体，所述偶联物为HCY。
8.如权利要求1-3任一项所述的免疫试纸条在检测C反应蛋白中的应用，其特征在于，所述标记物和所述偶联物可同时与C反应蛋白结合，所述标记物为CRP第一抗体，所述偶联物为CRP第二抗体。
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Citations (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101046452A (zh) * | 2007-04-26 | 2007-10-03 | 上海交通大学 | 基于化学发光共振能量转移原理构建生物纳米器件的方法 |
| US20080305507A1 (en) * | 2003-07-10 | 2008-12-11 | General Atomics | Methods and compositions for assaying homocysteine |
| CN105062490A (zh) * | 2015-07-23 | 2015-11-18 | 成都理工大学 | 一种用于化学发光共振能量转移的集成化双酶-量子点制备方法 |
| US20160327580A1 (en) * | 2014-11-17 | 2016-11-10 | Fraunhofer-Gesellschaft Zur Forderung Der Angewandten Forschung E.V. | Competitive immunoassay test system for detecting a pyrogen |
| CN108291908A (zh) * | 2015-05-25 | 2018-07-17 | 黄菊 | 用免疫和化学方法快速简便测定s-腺苷蛋氨酸，s-腺苷同型半胱氨酸和同型半胱氨酸 |
| CN110007073A (zh) * | 2019-04-01 | 2019-07-12 | 南京迪格诺斯生物技术有限公司 | 一种多指标联检化学发光试剂盒及其制备方法和应用 |
| KR20210001680A (ko) * | 2019-06-28 | 2021-01-06 | 주식회사 지엠디바이오텍 | 자동신호증폭이 가능한 측방유동면역센서 |
| CN114236139A (zh) * | 2021-12-30 | 2022-03-25 | 苏州和锐生物科技有限公司 | 一种TNF-α生物制剂的抗体检测试剂盒、制备方法 |
| US20220317128A1 (en) * | 2019-09-06 | 2022-10-06 | Dai Nippon Toryo Co., Ltd. | Method for detecting particulate substance using immunochromatography, and kit for same |
-
2022
- 2022-12-06 CN CN202211563703.6A patent/CN115754283B/zh active Active
Patent Citations (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20080305507A1 (en) * | 2003-07-10 | 2008-12-11 | General Atomics | Methods and compositions for assaying homocysteine |
| CN101046452A (zh) * | 2007-04-26 | 2007-10-03 | 上海交通大学 | 基于化学发光共振能量转移原理构建生物纳米器件的方法 |
| US20160327580A1 (en) * | 2014-11-17 | 2016-11-10 | Fraunhofer-Gesellschaft Zur Forderung Der Angewandten Forschung E.V. | Competitive immunoassay test system for detecting a pyrogen |
| CN108291908A (zh) * | 2015-05-25 | 2018-07-17 | 黄菊 | 用免疫和化学方法快速简便测定s-腺苷蛋氨酸，s-腺苷同型半胱氨酸和同型半胱氨酸 |
| CN105062490A (zh) * | 2015-07-23 | 2015-11-18 | 成都理工大学 | 一种用于化学发光共振能量转移的集成化双酶-量子点制备方法 |
| CN110007073A (zh) * | 2019-04-01 | 2019-07-12 | 南京迪格诺斯生物技术有限公司 | 一种多指标联检化学发光试剂盒及其制备方法和应用 |
| KR20210001680A (ko) * | 2019-06-28 | 2021-01-06 | 주식회사 지엠디바이오텍 | 자동신호증폭이 가능한 측방유동면역센서 |
| US20220317128A1 (en) * | 2019-09-06 | 2022-10-06 | Dai Nippon Toryo Co., Ltd. | Method for detecting particulate substance using immunochromatography, and kit for same |
| CN114236139A (zh) * | 2021-12-30 | 2022-03-25 | 苏州和锐生物科技有限公司 | 一种TNF-α生物制剂的抗体检测试剂盒、制备方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| FAHIMEH GHAVAMIPOUR 等: "The application of the QDs/H2O2 chemiluminescence system in HRP assay and HRP-based immunoassay", COLLOIDS AND SURFACES B: BIOINTERFACES, vol. 206, pages 1 - 7 * |
| HYUN TAE KIM 等: "Portable Chemiluminescence-Based Lateral Flow Assay Platform for the Detection of Cortisol in Human Serum", BIOSENSORS, vol. 11, no. 191, pages 1 - 12 * |
| JIANGHUA JIA 等: "Quantum dots assembly enhanced and dual-antigen sandwich structured lateral flow immunoassay of SARS-CoV-2 antibody with simultaneously high sensitivity and specificity", BIOSENSORS AND BIOELECTRONICS, vol. 198 * |
Also Published As
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| CN115754283B (zh) | 2024-02-27 |
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