CN115754076A - 气相色谱法测定4-亚甲基哌啶盐酸盐中的有关物质 - Google Patents

Abstract

本发明公开了气相色谱法测定4‑亚甲基哌啶盐酸盐中的有关物质。色谱柱为100%二甲基聚硅氧烷（G27或极性相当），采用程序升温的方式，所述色谱柱升温程序为：起始温度为80℃，维持2min；以3℃/min的速率升至170℃；再以20℃/min的速率升至220℃维持2min。检测器为火焰离子化检测器。结果显示，在该色谱条件下，4‑亚甲基哌啶盐酸盐的各种杂质能良好的得到分离；精密度重复和稳定性结果良好。该方法操作简便，重复性高，结果稳定可靠，可用于4‑亚甲基哌啶盐酸盐中有关物质的检测。

Description

气相色谱法测定4-亚甲基哌啶盐酸盐中的有关物质

技术领域

本发明属于化学分析技术领域，具体涉及一种气相色谱法测定4-亚甲基哌啶盐酸盐中的有关物质的方法。

背景技术

4-亚甲基哌啶盐酸盐，别名：4-甲烯基哌啶盐酸盐。4-亚甲基哌啶盐酸盐是一种结构单元，可通过Suzuki交叉偶联与芳基卤化物偶联，得到苄基哌啶和相关化合物。是艾菲康唑、阿格列汀等原料药的中间体。

由于4-亚甲基哌啶盐酸盐的制备过程中会产生4-亚甲基哌啶4-甲基-1,2,3,6-四氢吡啶盐酸盐、4-甲基-4-氯哌啶等杂质，对后续原料药的制备工艺产生一定的影响。其杂质均无紫外特征吸收波长，固无法通过高效液相色谱法进行有关物质的定量检测。其结构具有不稳定性、引湿性、氧化性等特点。现有液相方法CN 108017573选择200nm波长，已低于流动相的截止波长，对液相要求及高，在分析过程中会产生分离度差，空白干扰等现象。

发明内容

为了克服上述缺陷，我们尝试了多种类型的色谱柱，通过改变起始温度、流速、程序升温梯度等最后确定了4-亚甲基哌啶盐酸盐有关物质的测定方法。

本发明提供了一种气相色谱法测定4-亚甲基哌啶盐酸盐中的有关物质，该方法能够同时准确且定量测定4-亚甲基哌啶盐酸盐中的有关物质，具有灵敏度高、准确度强、重现性好、方法稳定等特点。

本发明提供了一种气相色谱法测定4-亚甲基哌啶盐酸盐中的有关物质，其包括以下步骤：

1)分别配置空白溶液、对照品溶液以及供试品溶液；

2)采用非极性色谱柱，进行有关物质的保留分离；

3)按面积归一法以峰面积计算有关物质的含量。

所述空白溶液为90％甲醇水溶液，对照品溶液为10mg/ml 4-亚甲基哌啶盐酸盐(麦克林C12215338)溶液，供试品溶液为10mg/ml 4-亚甲基哌啶盐酸盐溶液。

所述检测的有关物质为4-亚甲基哌啶盐酸盐的制备过程中产生的1,5-二溴-3-戊酮、N-苄基哌啶酮、4-甲基哌啶、N-甲基-4-哌啶酮、N-Boc-4-亚甲基哌啶、N-叔丁氧羰基-4-哌啶酮等杂质。

所述有关物质，杂质1为1,5-二溴-3-戊酮，杂质2为N-甲基-4-哌啶酮，杂质3为N-Boc-4-亚甲基哌啶，杂质4为N-叔丁氧羰基-4-哌啶酮。

所述非极性色谱柱为100％二甲基聚硅氧烷(G2或极性相当)的色谱柱。例如可以为G1色谱柱、G2色谱柱、G27色谱柱、HP-1色谱柱或极性相当的色谱柱。

所述色谱柱温度中，起始温度为80℃，维持2min；以3℃/min的速率升至170℃；再以20℃/min的速率升至220℃维持2min。

所述气相色谱条件采用检测器为火炼离子化检测器，检测器的温度为220℃，进样口的温度为220℃，载气的流量为1.0mL/min，分流比为10：1，气相色谱仪为安捷伦8860。

所述外标法计算公式为：杂质％＝杂质峰面积÷主峰峰面积×100％。

色谱条件如下：

气相色谱仪参数：

进样口温度：220℃；检测器温度：220℃；检测器：火焰离子化检测器；

色谱柱流量：1.0mL/min；分流比：10:1；

色谱柱：100％二甲基聚硅氧烷(G2或极性相当)30m×0.53mm×1.5μm；

色谱柱升温程序：起始温度为80℃，维持2min；以3℃/min的速率升至170℃；再以20℃/min的速率升至220℃维持2min；

溶液的制备方法

空白溶液/稀释剂：90％甲醇水溶液。

对照品溶液：称取4-亚甲基哌啶盐酸盐，置量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得。

供试品溶液：取供试品4-亚甲基哌啶盐酸盐，置量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得。

系统适用性取对照品溶液直接进样，记录色谱图，空白无干扰，各峰分离度不小于1.5。

定量限精密称定4-亚甲基哌啶盐酸盐，用稀释剂稀释至低浓度，测定S/N≈10作为定量限。

线性与范围

精密量取对照品储备液，按梯度取多份(≥5)，分别置于同体积的容量瓶内，用稀释剂定容，分别进样记录色谱图，以浓度和峰面积计算线性回归方程和相关系数。

溶液稳定性

取对照品溶液，配制完后立即进样，记录色谱图。室温放置一段时间后，再次进样，记录色谱图，进行杂质变化比较。

本发明检测方法灵敏度高、准确度强、重现性好、方法稳定，能准确检测出4-亚甲基哌啶盐酸盐的有关物质。

有益效果：

本发明的优点在于，采用了现有常规带火焰离子化检测器的气相色谱仪，能准确检测出4-亚甲基哌啶盐酸盐的有关物质，该方法灵敏度高、准确度强、重现性好、方法稳定，能有效分离不同沸点的杂质。由于4-亚甲基哌啶盐酸盐及其杂质均无紫外特征吸收波长，固无法通过高效液相色谱法进行有关物质的定量检测。其结构具有不稳定性、引湿性、氧化性等特点，直接进样避免了样品降解产生杂质，并提高了检测效率。

附图说明

图1实施例1图谱；

图2实施例2图谱；

图3实施例3图谱；

图4实施例4图谱；

图5实施例5图谱；

图6实施例6图谱。

具体实施方式

实施例1

仪器与色谱条件：

安捷伦8860气相色谱仪；色谱柱为HP-1(30m×0.53mm×1.5μm)；进样口温度：220℃；检测器温度：220℃；检测器：火焰离子化检测器；色谱柱流量：1.0mL/min；分流比：60:1；升温程序：起始温度为80℃，维持15min；

试验结果表明，主峰拖尾，见图1。

实施例2

安捷伦8860气相色谱仪；色谱柱为HP-5(30m×0.32mm×0.25μm)；进样口温度：220℃；检测器温度：220℃；检测器：火焰离子化检测器；色谱柱流量：1.0mL/min；分流比：60:1；升温程序：起始温度为80℃，维持15min；

试验结果表明，主峰拖尾，见图2。

实施例3

安捷伦8860气相色谱仪；色谱柱为HP-1(30m×0.53mm×1.5μm)；进样口温度：220℃；检测器温度：220℃；检测器：火焰离子化检测器；色谱柱流量：1.0mL/min；分流比：60:1；升温程序：起始温度为40℃，维持5min；以10℃/min的速率升至220℃；维持2min；

试验结果表明，主峰拖尾，见图3。

实施例4

安捷伦8860气相色谱仪；色谱柱为RTX-5(30m×0.53mm×1.5μm)；进样口温度：220℃；检测器温度：220℃；检测器：火焰离子化检测器；色谱柱流量：1.0mL/min；分流比：60:1；升温程序：起始温度为40℃，维持5min；以10℃/min的速率升至200℃；维持2min；

试验结果表明，杂质峰前伸，见图4。

实施例5

安捷伦8860气相色谱仪；色谱柱为HP-1(30m×0.53mm×1.5μm)；进样口温度：220℃；检测器温度：220℃；检测器：火焰离子化检测器；色谱柱流量：1.0mL/min；分流比：10:1；升温程序：起始温度为80℃，维持2min；以3℃/min的速率升至170℃；再以20℃/min的速率升至220℃维持2min；

试验结果表明，主峰分、杂质峰峰形良好，各峰分离度良好，见图5。

实施例6

1.仪器与试剂

安捷伦8860气相色谱仪；4-亚甲基哌啶盐酸盐(批号：211111，江苏恒盛药业有限公司)对照品(麦克林C12215338)；其余使用到的试剂均为色谱级溶剂；水为超纯水(≥18.2MΩ)。

2.色谱条件

气相色谱仪参数：

进样口温度：220℃；

检测器温度：220℃；

检测器：火焰离子化检测器；

色谱柱流量：1.0mL/min；

分流比：10:1；

色谱柱：100％二甲基聚硅氧烷(G27)色谱柱，30m×0.53mm，1.5μm；

色谱柱系统升温程序：起始温度为80℃，维持2min；以3℃/min的速率升至170℃，再以20℃/min的速率升至220℃维持2min；

3.溶液的制备方法

3.1.空白溶液/稀释剂

90％甲醇水溶液。

3.2.对照品溶液

精密量取对照品4-亚甲基哌啶盐酸盐100ml置于10ml量瓶中，用90％甲醇水溶液溶解并稀释至刻度，混匀即得对照品溶液。

3.3.供试品溶液

取供试品4-亚甲基哌啶盐酸盐100mg置于10ml量瓶中，用90％甲醇水溶液溶解并稀释至刻度，混匀即得供试品溶液。

4.系统适用性与专属性

取供试品溶液置2ml进样瓶中，作为系统适用性溶液。各组分峰面积及最小分离度见表1，对照品溶液色谱图见图5。

表1各组分峰面积及最小分离度

5.定量限

定量限溶液：精密移取各溶剂适量，用稀释剂稀释成一定的浓度，使各溶剂的峰高大约为噪声的10倍，此时溶液浓度即为各溶剂的定量限(LOQ)，结果见表2。

表2各组分定量限浓度

溶液名称	定量限(μg/mL)	S/N
			定量限溶液	1.2923	18.6

6.线性与范围

取对照品2000mg，精密称定，置100ml量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀即得(200％)。

0.2％浓度溶液：精密量上述溶液1.0ml，置1000ml量瓶中，加稀释剂使溶解，定容，摇匀，即得。

2％浓度溶液：精密量上述溶液1.0ml，置100ml量瓶中，加稀释剂使溶解，定容，摇匀，即得。

10％浓度溶液：精密量上述溶液1.0ml，置20ml量瓶中，加稀释剂使溶解，定容，摇匀，即得。

50％浓度溶液：精密量上述溶液5.0ml，置20ml量瓶中，加稀释剂使溶解，定容，摇匀，即得。

100％浓度溶液：精密量上述溶液5.0ml，置10ml量瓶中，加稀释剂使溶解，定容，摇匀，即得。

140％浓度溶液：精密量上述溶液7.0ml，置10ml量瓶中，加稀释剂使溶解，定容，摇匀，即得。

按浓度从低到高一次进样，记录色谱图。以浓度和峰面积做线性回归方程，结果程良好的线性关系。数据结果见表3。

表3溶液线性与相关系数

线性方程	相关系数
		y＝1934.7x-1.8984	1.0000

7.稳定性

取对照品溶液，配制完后立即进样，记录色谱图。将对照品溶液放置室温下24小时，再次进样，记录色谱图。

表4稳定性数据

时间	主峰纯度	杂质2
			0小时	99.74％	0.26％
24小时	99.74％	0.26％

实施例7

精密称取4-亚甲基哌啶盐酸盐100mg，精密称定，至10ml量瓶中，加稀释剂使溶解，定容，摇匀，即得，配置不同6个批次样品(样品均来自于江苏恒盛药业有限公司，批号见表格)，按面积归一法计算结果，结果见表5。

表5批不同样品结果汇总表

样品批号

杂质1

主峰

杂质2

未知单杂

杂质4

杂质5

211217

0.09％

99.67％

0.00％

0.03％

0.18％

0.03％

211218

0.08％

99.68％

0.00％

0.02％

0.19％

0.03％

211219

0.10％

99.65％

0.00％

0.04％

0.17％

0.04％

211220

0.09％

99.68％

0.00％

0.03％

0.17％

0.03％

211221

0.11％

99.65％

0.00％

0.05％

0.16％

0.05％

211222

0.08％

99.70％

0.00％

0.02％

0.18％

0.02％

所述有关物质，杂质1为1,5-二溴-3-戊酮，杂质2为N-甲基-4-哌啶酮，杂质3为N-Boc-4-亚甲基哌啶，杂质4为N-叔丁氧羰基-4-哌啶酮。

Claims (9)

1.气相色谱法测定4-亚甲基哌啶盐酸盐中的有关物质的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)分别配置空白溶液、对照品溶液以及供试品溶液；

2)采用非极性色谱柱，进行有关物质的保留分离；

3)按面积归一法以峰面积计算有关物质的含量。

2.根据权利要求1所述的气相色谱法测定4-亚甲基哌啶盐酸盐中的有关物质，其特征在于，所述空白溶液为90％甲醇水溶液，对照品溶液为5-15mg/ml 4-亚甲基哌啶盐酸盐溶液，供试品溶液为5-15mg/ml 4-亚甲基哌啶盐酸盐溶液。

3.根据权利要求2所述的气相色谱法测定4-亚甲基哌啶盐酸盐中的有关物质，其特征在于，所述对照品溶液为10mg/ml 4-亚甲基哌啶盐酸盐溶液。

4.根据权利要求1所述的气相色谱法测定4-亚甲基哌啶盐酸盐中的有关物质，其特征在于，所述非极性色谱柱为100％二甲基聚硅氧烷的色谱柱。

5.根据权利要求1所述的气相色谱法测定4-亚甲基哌啶盐酸盐中的有关物质，其特征在于，所述色谱柱升温程序为：起始温度为80℃，维持2min；以3℃/min的速率升至170℃；再以20℃/min的速率升至220℃维持2min。

6.根据权利要求1所述的气相色谱法测定4-亚甲基哌啶盐酸盐中的有关物质，其特征在于，所述气相色谱条件为：采用检测器为火炼离子化检测器，检测器的温度为220℃，进样口的温度为220℃，载气的流量为1.0mL/min，分流比为10：1，气相色谱仪为安捷伦8860。

7.根据权利要求1所述的气相色谱法测定4-亚甲基哌啶盐酸盐中的有关物质，其特征在于，所述外标法计算公式为：杂质％＝杂质峰面积÷主峰峰面积×100％。

8.根据权利要求4所述的气相色谱法测定4-亚甲基哌啶盐酸盐中的有关物质，其特征在于，所述非极性色谱柱为G1色谱柱、G2色谱柱、G27色谱柱、HP-1色谱柱或极性相当的色谱柱。

9.根据权利要求4所述的气相色谱法测定4-亚甲基哌啶盐酸盐中的有关物质，其特征在于，所述检测的有关物质为4-亚甲基哌啶盐酸盐的制备过程中产生的1,5-二溴-3-戊酮、N-苄基哌啶酮、4-甲基哌啶、N-甲基-4-哌啶酮、N-Boc-4-亚甲基哌啶、N-叔丁氧羰基-4-哌啶酮等杂质。

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