CN115746171A - 一种制备依诺肝素钠的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种制备依诺肝素钠的方法，其包括以下步骤，将肝素钠用纯水溶解后，加入苄索氯铵水溶液，室温进行反应1‑3小时，反应结束后离心，用水洗涤沉淀物，得到肝素苄索氯铵盐；2)肝素苄索氯铵盐洗脱，在室温条件下，将肝素苄索氯铵盐溶解于N,N‑二甲基甲酰胺上样，上样结束后用二氯甲烷与乙醇的混合溶液洗涤，再用1.5mol/L的氯化钠水溶液洗脱，洗脱终点为263nm紫外吸收值曲线至基线平稳，收集肝素苄索氯铵盐洗脱液；3)肝素苄酯制备，4)依诺肝素钠制备。本发明对肝素苄索氯铵盐进行洗脱，相对于对其他中间产物或者最终产物依诺肝素钠进行洗脱，可以更加有效地减少小分子量依诺肝素钠的比例，提高中分子依诺肝素钠的比例。
Description
技术领域
本发明公开涉及一种制备依诺肝素钠的方法。
背景技术
依诺肝素钠是用于预防和治疗深静脉血栓或肺栓塞的抗凝血剂的一种低分子量肝素。依诺肝素钠为白色或类白色粉末，无味，有引湿性，易溶于水，不溶于乙醇、丙酮等有机溶剂。在水溶液中有强负电荷，能与一些阳离子结合成分子络合物。水溶液在pH值7时较稳定。
在生产过程中，肝素钠的质量对依诺肝素钠终产品有很大影响。这是因为肝素钠分子结构异常复杂，分子量难以固定，不同工艺来源的肝素钠直接影响依诺肝素的产品质量。尤其是部分肝素钠原料厂商因为工艺控制问题，出现肝素钠的分子量分布不符合要求的情况。
发明内容
为了解决上述问题，本发明公开提供一种制备依诺肝素钠的方法，所述方法包括以下步骤：
1)肝素苄索氯铵盐制备
将肝素钠用纯水溶解后，加入苄索氯铵水溶液，室温进行反应1-3小时，反应结束后离心，用水洗涤沉淀物，得到肝素苄索氯铵盐；
2)肝素苄索氯铵盐洗脱
在室温条件下，将肝素苄索氯铵盐溶解于N,N-二甲基甲酰胺上样，上样结束后用二氯甲烷与乙醇的混合溶液洗涤，再用1.5mol/L的氯化钠水溶液洗脱，洗脱终点为263nm紫外吸收值曲线至基线平稳，收集肝素苄索氯铵盐洗脱液；
3)肝素苄酯制备
在肝素苄索氯铵盐洗脱液中加入氯化苄，在30-40℃下进行酯化，酯化20-40小时后结束，冷却至室温，加入醋酸钠甲醇沉淀，分离沉淀并用甲醇洗涤，干燥得肝素苄酯；
4)依诺肝素钠制备
将肝素苄基脂溶于纯化水中，在60℃条件下搅拌加入氢氧化钠，反应30-60min，盐酸调pH至6-8，过滤，加入氯化钠溶液，加入4倍体积的甲醇，放置12-24小时，收集沉淀，收集到的沉淀加入沉淀10倍体积的纯化水，完全溶解后，加入过氧化氢，反6-12小时，过滤，加入氯化钠，加入4倍体积的甲醇，干燥，得到依诺肝素钠。
本发明对肝素苄索氯铵盐进行洗脱，相对于对其他中间产物或者最终产物依诺肝素钠进行洗脱，可以更加有效地减少小分子量依诺肝素钠的比例，提高中分子依诺肝素钠的比例。
参考以下详细说明更易于理解本申请的上述以及其它特征、方面和优点。
具体实施方案
肝素钠，购自于安徽中弘生物工程有限公司，平均分子量为12000。其中低于5000分子量的占33.5％，5000-20000的为45.8％。
实施例1
将100重量份的肝素钠溶于1000重量份的纯化水中，将150重量份的苄索氯铵溶于2000重量份的纯化水中，在室温下将上述两种溶液混合，搅拌离心，收集沉淀，干燥，得到肝素苄索氯铵盐(收率94.7％)；
在室温条件下，将100重量份的肝素苄索氯铵盐溶解于500重量份的N,N-二甲基甲酰胺上样，上样结束后用100重量份的二氯甲烷与乙醇的混合溶液(二氯甲烷与乙醇的质量比为1:1)洗涤，再用1.5mol/L的氯化钠水溶液洗脱，洗脱终点为263nm紫外吸收值曲线至基线平稳，收集肝素苄索氯铵盐洗脱液；
将肝素苄索氯铵盐洗脱液加入300重量份的氯化苄，继续搅拌反应20小时，过滤，加入醋酸钠甲醇溶液，离心，收集沉淀，用甲醇洗涤，烘干，得肝素苄基脂，脂化率11.5％；
将100重量份的肝素苄基脂溶于800重量份的纯化水中，在60℃条件下搅拌加入10重量份的氢氧化钠，反应30nim，用2M盐酸调pH至6～8，过滤，加入10％体积的氯化钠溶液，加入4倍体积的甲醇，放置12小时，收集沉淀，得到依诺肝素钠粗品；
得到依诺肝素钠粗品加入依诺肝素钠粗品10倍体积的纯化水，完全溶解后，加入1％体积的过氧化氢，反应6小时，过滤，加入10％质量的氯化钠，加入4倍体积的甲醇，干燥，得到水分低于5％的依诺肝素钠。得到的依诺肝素钠经过分析，231nm吸收系数为15.5，分子量分布为，小于2000为19.2％，2000-8000为72.3％其余为大于8000。
实施例2
将100重量份的肝素钠溶于1000重量份的纯化水中，将150重量份的苄索氯铵溶于2000重量份的纯化水中，在室温下将上述两种溶液混合，搅拌离心，收集沉淀，干燥，得到肝素苄索氯铵盐(收率94.7％)；
在室温条件下，将100重量份的肝素苄索氯铵盐溶解于500重量份的N,N-二甲基甲酰胺上样，上样结束后用100重量份的二氯甲烷与乙醇的混合溶液(二氯甲烷与乙醇的质量比为1:0.8)洗涤，再用1.5mol/L的氯化钠水溶液洗脱，洗脱终点为263nm紫外吸收值曲线至基线平稳，收集肝素苄索氯铵盐洗脱液；
将肝素苄索氯铵盐洗脱液加入300重量份的氯化苄，继续搅拌反应20小时，过滤，加入醋酸钠甲醇溶液，离心，收集沉淀，用甲醇洗涤，烘干，得肝素苄基脂，脂化率11.8％；
将100重量份的肝素苄基脂溶于800重量份的纯化水中，在60℃条件下搅拌加入10重量份的氢氧化钠，反应30nim，用2M盐酸调pH至6～8，过滤，加入10％体积的氯化钠溶液，加入4倍体积的甲醇，放置12小时，收集沉淀，得到依诺肝素钠粗品；
得到依诺肝素钠粗品加入依诺肝素钠粗品10倍体积的纯化水，完全溶解后，加入1％体积的过氧化氢，反应6小时，过滤，加入10％质量的氯化钠，加入4倍体积的甲醇，干燥，得到水分低于5％的依诺肝素钠。得到的依诺肝素钠经过分析，231nm吸收系数为17.6，分子量分布为，小于2000为15.0％，2000-8000为78.3％，其余为大于8000。
实施例3
将100重量份的肝素钠溶于1000重量份的纯化水中，将150重量份的苄索氯铵溶于2000重量份的纯化水中，在室温下将上述两种溶液混合，搅拌离心，收集沉淀，干燥，得到肝素苄索氯铵盐(收率94.7％)；
在室温条件下，将100重量份的肝素苄索氯铵盐溶解于500重量份的N,N-二甲基甲酰胺上样，上样结束后用100重量份的二氯甲烷与乙醇的混合溶液(二氯甲烷与乙醇的质量比为1:1.5)洗涤，再用1.5mol/L的氯化钠水溶液洗脱，洗脱终点为263nm紫外吸收值曲线至基线平稳，收集肝素苄索氯铵盐洗脱液；
将肝素苄索氯铵盐洗脱液加入300重量份的氯化苄，继续搅拌反应20小时，过滤，加入醋酸钠甲醇溶液，离心，收集沉淀，用甲醇洗涤，烘干，得肝素苄基脂，脂化率12.4％；
将100重量份的肝素苄基脂溶于800重量份的纯化水中，在60℃条件下搅拌加入10重量份的氢氧化钠，反应30nim，用2M盐酸调pH至6～8，过滤，加入10％体积的氯化钠溶液，加入4倍体积的甲醇，放置12小时，收集沉淀，得到依诺肝素钠粗品；
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实施例4
将100重量份的肝素钠溶于1000重量份的纯化水中，将150重量份的苄索氯铵溶于2000重量份的纯化水中，在室温下将上述两种溶液混合，搅拌离心，收集沉淀，干燥，得到肝素苄索氯铵盐(收率94.7％)；
在室温条件下，将100重量份的肝素苄索氯铵盐溶解于500重量份的N,N-二甲基甲酰胺上样，上样结束后用100重量份的二氯甲烷与乙醇的混合溶液(二氯甲烷与乙醇的质量比为1:3)洗涤，再用1.5mol/L的氯化钠水溶液洗脱，洗脱终点为263nm紫外吸收值曲线至基线平稳，收集肝素苄索氯铵盐洗脱液；
将肝素苄索氯铵盐洗脱液加入300重量份的氯化苄，继续搅拌反应20小时，过滤，加入醋酸钠甲醇溶液，离心，收集沉淀，用甲醇洗涤，烘干，得肝素苄基脂，脂化率12.4％；
将100重量份的肝素苄基脂溶于800重量份的纯化水中，在60℃条件下搅拌加入10重量份的氢氧化钠，反应30nim，用2M盐酸调pH至6～8，过滤，加入10％体积的氯化钠溶液，加入4倍体积的甲醇，放置12小时，收集沉淀，得到依诺肝素钠粗品；
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实施例5
将100重量份的肝素钠溶于1000重量份的纯化水中，将150重量份的苄索氯铵溶于2000重量份的纯化水中，在室温下将上述两种溶液混合，搅拌离心，收集沉淀，干燥，得到肝素苄索氯铵盐(收率94.7％)；
在室温条件下，将100重量份的肝素苄索氯铵盐溶解于500重量份的N,N-二甲基甲酰胺上样，上样结束后用100重量份的二氯甲烷与乙醇的混合溶液(二氯甲烷与乙醇的质量比为1:0.2)洗涤，再用1.5mol/L的氯化钠水溶液洗脱，洗脱终点为263nm紫外吸收值曲线至基线平稳，收集肝素苄索氯铵盐洗脱液；
将肝素苄索氯铵盐洗脱液加入300重量份的氯化苄，继续搅拌反应20小时，过滤，加入醋酸钠甲醇溶液，离心，收集沉淀，用甲醇洗涤，烘干，得肝素苄基脂，脂化率12.4％；
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对比例1
将100重量份的肝素钠溶于1000重量份的纯化水中，将150重量份的苄索氯铵溶于2000重量份的纯化水中，在室温下将上述两种溶液混合，搅拌离心，收集沉淀，干燥，得到肝素苄索氯铵盐(收率94.7％)；
在室温条件下，将100重量份的肝素苄索氯铵盐溶解于500重量份的N,N-二甲基甲酰胺上样，上样结束后用100重量份的1.5mol/L的氯化钠水溶液洗涤，再用1.5mol/L的氯化钠水溶液洗脱，洗脱终点为263nm紫外吸收值曲线至基线平稳，收集肝素苄索氯铵盐洗脱液；
将肝素苄索氯铵盐洗脱液加入300重量份的氯化苄，继续搅拌反应20小时，过滤，加入醋酸钠甲醇溶液，离心，收集沉淀，用甲醇洗涤，烘干，得肝素苄基脂，脂化率11.8％；
将100重量份的肝素苄基脂溶于800重量份的纯化水中，在60℃条件下搅拌加入10重量份的氢氧化钠，反应30nim，用2M盐酸调pH至6～8，过滤，加入10％体积的氯化钠溶液，加入4倍体积的甲醇，放置12小时，收集沉淀，得到依诺肝素钠粗品；
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对比例2
将100重量份的肝素钠溶于1000重量份的纯化水中，将150重量份的苄索氯铵溶于2000重量份的纯化水中，在室温下将上述两种溶液混合，搅拌离心，收集沉淀，干燥，得到肝素苄索氯铵盐(收率94.7％)；
在室温条件下，将100重量份的肝素苄索氯铵盐溶解于500重量份的N,N-二甲基甲酰胺上样，上样结束后用100重量份的二氯甲烷洗涤，再用1.5mol/L的氯化钠水溶液洗脱，洗脱终点为263nm紫外吸收值曲线至基线平稳，收集肝素苄索氯铵盐洗脱液；
将肝素苄索氯铵盐洗脱液加入300重量份的氯化苄，继续搅拌反应20小时，过滤，加入醋酸钠甲醇溶液，离心，收集沉淀，用甲醇洗涤，烘干，得肝素苄基脂，脂化率11.9％；
将100重量份的肝素苄基脂溶于800重量份的纯化水中，在60℃条件下搅拌加入10重量份的氢氧化钠，反应30nim，用2M盐酸调pH至6～8，过滤，加入10％体积的氯化钠溶液，加入4倍体积的甲醇，放置12小时，收集沉淀，得到依诺肝素钠粗品；
得到依诺肝素钠粗品加入依诺肝素钠粗品10倍体积的纯化水，完全溶解后，加入1％体积的过氧化氢，反应6小时，过滤，加入10％质量的氯化钠，加入4倍体积的甲醇，干燥，得到水分低于5％的依诺肝素钠。得到的依诺肝素钠经过分析，231nm吸收系数为14.1，分子量分布为，小于2000为21.3％，2000-8000为74.1％，其余为大于8000。
对比例3
将100重量份的肝素钠溶于1000重量份的纯化水中，将150重量份的苄索氯铵溶于2000重量份的纯化水中，在室温下将上述两种溶液混合，搅拌离心，收集沉淀，干燥，得到肝素苄索氯铵盐(收率94.7％)；
在室温条件下，将100重量份的肝素苄索氯铵盐溶解于500重量份的N,N-二甲基甲酰胺上样，上样结束后用100重量份的乙醇洗涤，再用1.5mol/L的氯化钠水溶液洗脱，洗脱终点为263nm紫外吸收值曲线至基线平稳，收集肝素苄索氯铵盐洗脱液；
将肝素苄索氯铵盐洗脱液加入300重量份的氯化苄，继续搅拌反应20小时，过滤，加入醋酸钠甲醇溶液，离心，收集沉淀，用甲醇洗涤，烘干，得肝素苄基脂，脂化率12.1％；
将100重量份的肝素苄基脂溶于800重量份的纯化水中，在60℃条件下搅拌加入10重量份的氢氧化钠，反应30nim，用2M盐酸调pH至6～8，过滤，加入10％体积的氯化钠溶液，加入4倍体积的甲醇，放置12小时，收集沉淀，得到依诺肝素钠粗品；
得到依诺肝素钠粗品加入依诺肝素钠粗品10倍体积的纯化水，完全溶解后，加入1％体积的过氧化氢，反应6小时，过滤，加入10％质量的氯化钠，加入4倍体积的甲醇，干燥，得到水分低于5％的依诺肝素钠。得到的依诺肝素钠经过分析，231nm吸收系数为13.5，分子量分布为，小于2000为22.2％，2000-8000为71.3％，其余为大于8000。
通过上述的实验可以发现，对肝素苄索氯铵盐进行洗脱，相对于对其他中间产物或者最终产物依诺肝素钠进行洗脱，可以更加有效地减少小分子量依诺肝素钠的比例，提高中分子依诺肝素钠的比例。
以上所述，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。
Claims (5)
1.一种制备依诺肝素钠的方法，其特征在于，所述制备依诺肝素钠的方法包括以下步骤：
1)肝素苄索氯铵盐制备
将肝素钠用纯水溶解后，加入苄索氯铵水溶液，室温进行反应1-3小时，反应结束后离心，用水洗涤沉淀物，得到肝素苄索氯铵盐；
2)肝素苄索氯铵盐洗脱
在室温条件下，将肝素苄索氯铵盐溶解于N,N-二甲基甲酰胺上样，上样结束后用二氯甲烷与乙醇的混合溶液洗涤，再用氯化钠水溶液洗脱，洗脱终点为263nm紫外吸收值曲线至基线平稳，收集肝素苄索氯铵盐洗脱液；
3)肝素苄酯制备
在肝素苄索氯铵盐洗脱液中加入氯化苄，在30-40℃下进行酯化，酯化20-40小时后结束，冷却至室温，加入醋酸钠甲醇沉淀，分离沉淀并用甲醇洗涤，干燥得肝素苄酯；
4)依诺肝素钠制备
将肝素苄基脂溶于纯化水中，在60℃条件下搅拌加入氢氧化钠，反应30-60min，盐酸调pH至6-8，过滤，加入氯化钠溶液，加入4倍体积的甲醇，放置12-24小时，收集沉淀，收集到的沉淀加入沉淀10倍体积的纯化水，完全溶解后，加入过氧化氢，反6-12小时，过滤，加入氯化钠，加入4倍体积的甲醇，干燥，得到依诺肝素钠。
2.根据权利要求1所述的一种制备依诺肝素钠的方法，其特征在于，所述二氯甲烷与乙醇的混合溶液的用量为肝素苄索氯铵盐质量的80％-200％。
3.根据权利要求1所述的一种制备依诺肝素钠的方法，其特征在于，所述二氯甲烷与乙醇的混合溶液中二氯甲烷与乙醇的质量比为1:0.5-2。
4.根据权利要求1所述的一种制备依诺肝素钠的方法，其特征在于，所述的氯化钠水溶液的浓度为1-2mol/L。
5.根据权利要求1所述的一种制备依诺肝素钠的方法，其特征在于，所述N,N-二甲基甲酰胺的用量为肝素苄索氯铵盐重量的4-8倍。
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