CN115721774A - 一种基于干细胞提取物的凝胶及其制备方法与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种基于干细胞提取物的凝胶及其制备方法与应用。将干细胞外泌体冻干粉、透明质酸、壳聚糖、柠檬香茅提取物、维生素E、己二醇、卵磷脂与水混合，得到基于干细胞提取物的凝胶。本发明产品具有良好的止血作用，凝胶体系可以维持药物的作用时间，并减少疤痕形成；在伤口感染的预防中具有应用价值。
Description
技术领域
本发明属于外用敷料技术，具体涉及一种基于干细胞提取物的凝胶及其制备方法与应用。
背景技术
修复凝胶作为成熟产品已有市售，现有技术也公开了针对不同应用的修复凝胶。比如一种含生物活性矿物质材料的口腔溃疡修复凝胶，原料按质量百分数计包括：生物粘附性凝胶基质0.05％-5％，生物活性矿物质材料0.05％-5％，分散剂3％-20％，pH调节剂0.01％-1％，介质余量。比如一种可长期保存的外泌体修复凝胶，该修复凝胶由外泌体和凝胶基质组成，凝胶基质按照重量份数包括以下组分：天然芦荟80-100份，混合植物精油15-20份，其制备方法包括：将混合植物精油加入到天然芦荟中进行搅拌，搅拌的同时加入抗氧化剂与防腐剂，得到凝胶基质；将凝胶基质与外泌体混合，并搅拌均匀存于冰箱即得。比如一种水凝胶的制备方法，包括如下步骤：步骤1)，制备装载有DNA的碳酸钙纳米颗粒；步骤2)，将海藻酸钠、壳聚糖、CaCO3@DNA配制成第一反应溶液；向第一反应溶液中加入葡糖酸内酯并搅拌，得到混合液；将所述混合液静置后，得到水凝胶。本发明主要用于制备一种能缓释DNA、且结构均匀性好的水凝胶；该水凝胶敷于伤口疮面时，可吸附渗液，阻隔细菌，维持湿性环境；同时体液中的盐分与水凝胶中的Ca2+发生离子交换从而使海藻酸网络缓慢降解，从而释放出装载DNA的碳酸钙纳米颗粒。相对于游离的DNA分子而言，碳酸钙纳米颗粒可以将DNA更加高效地传递到细胞当中，促进细胞的增殖。比如一种激活面部多能干细胞的组合物，以水、甘油、丁二醇、PEG/PPG/聚丁二醇-8/5/3甘油、甜菜碱、岩藻依聚糖、泛醇、甘草酸二钾、水解透明质酸钠、水解胶原、角鲨烷以及寡肽制备而成。由此，该组合物能够营造适合多能干细胞分化和增殖的微环境，从而唤醒和激活种植于面部的多能干细胞，使其能够分化和增殖，达到及时替换面部衰老细胞的效果，抗衰作用显著。另外，现有技术公开了一种高效培育干细胞外泌体的方法及其在化妆品中的应用，提供了脐带血干细胞制备得到的外泌体以及具有高抗原免疫原性表位的TRP-2片段，并且制备得到了多个特异性的TRP-2单克隆抗体，所述抗体与外泌体一起使用具有协同的增强抑制黑色素瘤细胞增殖的效果，能够用于制备美白的化妆品或者抑制黑色素瘤细胞增殖的药物及其药物组合物。但是利用干细胞外泌体作为疮面修复凝胶的技术思路未见公开。
发明内容
在干细胞及其外泌体被用于各种化妆品以及医用材料的大趋势下，本发明公开了一种基于干细胞提取物的凝胶及其制备方法与应用，能够促进皮肤愈合、抑菌、保湿。
本发明采用如下技术方案：
一种基于干细胞提取物的凝胶，其原料包括干细胞外泌体冻干粉、透明质酸、壳聚糖、柠檬香茅提取物、维生素E、己二醇、卵磷脂；作为常识，还包括水。
本发明中，将干细胞外泌体冻干粉、透明质酸、壳聚糖、柠檬香茅提取物、维生素E、己二醇、卵磷脂与水混合，得到基于干细胞提取物的凝胶。
本发明中，熟地黄水煮后过滤，滤液减压浓缩为浸膏，再加入乙醇，静置数天，然后取上清液，减压去除乙醇后，浓缩为稠膏，再干燥为粉体，作为熟地黄提取物。将柠檬香茅粉碎后水煮、过滤，收集滤液减压浓缩为浸膏，再干燥为粉体，作为柠檬香茅提取物。这两种提取物都为现有产品，可根据现有方法制备。
本发明中，100g水中，干细胞外泌体冻干粉为2～8g，透明质酸为1～5g，壳聚糖0.5～3g，柠檬香茅提取物0.1～1g，维生素E0.5～2g，己二醇0.5～3g，卵磷脂0.05～0.5g；优选的，100g水中，干细胞外泌体冻干粉为3～7g，透明质酸为1.5～4g，壳聚糖1～2.5g，柠檬香茅提取物0.2～0.5g，维生素E0.6～1g，己二醇0.8～2g，卵磷脂0.07～0.2g；再优选的，100g水中，干细胞外泌体冻干粉为4～6g，透明质酸为2～3.5g，壳聚糖1.5～2.5g，柠檬香茅提取物0.2～0.4g，维生素E0.7～0.9g，己二醇0.9～1.2g，卵磷脂0.08～0.13g。
本发明公开了上述基于干细胞提取物的凝胶在制备疮面修复药膏或者材料中的应用；或者，在制备促进皮肤愈合、抑菌和/或保湿材料中的应用。可以皮肤外用，也可在自然环境中应用。
本发明以现有原料，尤其是之前公开的干细胞外泌体作为有效成分，结合透明质酸、壳聚糖等凝胶基质，首次公开了基于干细胞提取物的凝胶，透明质酸、壳聚糖具有良好的组织相容性、无菌、促进伤口愈合和吸收伤口渗出液等性质，结合柠檬香茅提取物同时具有良好的止血作用，凝胶体系可以维持药物的作用时间，并减少疤痕形成；在伤口感染的预防中具有医药应用价值。
具体实施方式
本发明以干细胞外泌体冻干粉、透明质酸、壳聚糖、柠檬香茅提取物、维生素E、己二醇、卵磷脂、水为原料，制备疮面修复凝胶。具体原料都为现有产品，具体制备操作以及实验方法为现有方法，如无特殊说明，制备过程在常规环境、常规搅拌下进行。
提取物为现有产品，可根据现有方法制备或者购买、索取。本实施例中，将柠檬香茅粉碎后加10倍量水煮3小时、过滤，收集滤液减压浓缩为浸膏，再真空烘干为粉体，作为柠檬香茅提取物。干细胞外泌体冻干粉来自CN113234663A（参见其第14段）；透明质酸、壳聚糖等为常规医用凝胶材料。
实施例一
100g水中，干细胞外泌体冻干粉为5g，透明质酸为3g，壳聚糖2g，柠檬香茅提取物0.3g，维生素E0.8g，己二醇1g，卵磷脂0.1g。
将干细胞外泌体冻干粉加入20g水中，得到冻干粉溶液；将柠檬香茅提取物、维生素E、己二醇、卵磷脂加入10g水中，得到提取物溶液；将透明质酸、壳聚糖分别加入35g水中，然后混合，于50℃搅拌2分钟，撤去保温，在自然冷却的同时加入提取物溶液，搅拌1分钟，最后加入冻干粉溶液，搅拌15分钟，然后静置，至形成凝胶，为基于干细胞提取物的凝胶。
实施例二
100g水中，干细胞外泌体冻干粉为4g，透明质酸为3.5g，壳聚糖2.5g，柠檬香茅提取物0.35g，维生素E0.9g，己二醇1g，卵磷脂0.1g。
将干细胞外泌体冻干粉加入20g水中，得到冻干粉溶液；将柠檬香茅提取物、维生素E、己二醇、卵磷脂加入10g水中，得到提取物溶液；将透明质酸、壳聚糖分别加入35g水中，然后混合，于50℃搅拌2分钟，撤去保温，在自然冷却的同时加入提取物溶液，搅拌1.5分钟，最后加入冻干粉溶液，搅拌10分钟，然后静置，至形成凝胶，为基于干细胞提取物的凝胶。
实施例三
100g水中，干细胞外泌体冻干粉为6g，透明质酸为2g，壳聚糖1.5g，柠檬香茅提取物0.4g，维生素E0.7g，己二醇1.2g，卵磷脂0.12g。
将干细胞外泌体冻干粉加入15g水中，得到冻干粉溶液；将柠檬香茅提取物、维生素E、己二醇、卵磷脂加入15g水中，得到提取物溶液；将透明质酸、壳聚糖分别加入35g水中，然后混合，于50℃搅拌1.5分钟，撤去保温，在自然冷却的同时加入提取物溶液，搅拌1分钟，最后加入冻干粉溶液，搅拌10分钟，然后静置，至形成凝胶，为基于干细胞提取物的凝胶。
对比例
100g水中，透明质酸为3g，壳聚糖2g，柠檬香茅提取物0.3g，维生素E0.8g，己二醇1g，卵磷脂0.1g。
将柠檬香茅提取物、维生素E、己二醇、卵磷脂加入30g水中，得到提取物溶液；将透明质酸、壳聚糖分别加入35g水中，然后混合，于50℃搅拌2分钟，撤去保温，在自然冷却的同时加入提取物溶液，搅拌16分钟，然后静置，至形成凝胶，为疮面修复凝胶。
应用实验
召集志愿者十名，男女各半，在手上涂实施例一的基于干细胞提取物的凝胶，硬币大小，5小时内无发红、出疹等现象，还可看出，涂抹区域较其他部位有保湿现象。
市购4周雄鼠，分为三组，实验组三只，对照组三只，对比组三只，实验过程常规喂养，且动物实验符合常规伦理以及标准要求。麻醉小鼠，在每只小鼠背面常规手术建立损伤模型，1cm2全层伤口，所有小鼠无差异；实验组建模后抹实施例一的基于干细胞提取物的凝胶，对照组建模后抹市售壳聚糖创面修复凝胶（武汉大正），对比组建模后抹对比例凝胶；抹胶后常规包扎，每天换一次凝胶与纱布。三天时，换药可见，都出现结痂，比较而言，实验组与对照组近似但实验组更好，对比例明显较对照组差；七天时，换药可见，实验组全部结痂并出现新皮（大于50%），对照组出现新皮的面积（小于50%）明显小于实验组，对比例未见新皮；最终愈合结果看，实验组创伤处没有明显痕迹，对照组愈合速度以及愈合质量较实验组略差，对比组存在愈合痕迹且愈合速度明显低于对照组。
另外，在实施例一的基础上不添加柠檬香茅提取物，得到的凝胶与实施例一的凝胶进行平行动物实验发现，愈合速度以及愈合质量较实施例一差，非严谨比较而言，与对照组接近。
作为常识，皮肤创伤是最常见的组织损伤之一，提高伤口愈合的效率对患者自身和社会经济都具有重大意义，因此，对理想伤口敷料的需求不断增加。本发明基于干细胞提取物的凝胶能够保持创面的湿润环境，可减少组织脱水及细胞死亡，在干细胞外泌体作用下加快细胞再生，加快表层细胞迁移速度，从而缩短愈合时间，减轻了疼痛，促进伤口修复。
Claims (10)
1.一种基于干细胞提取物的凝胶，其特征在于，原料包括干细胞外泌体冻干粉、透明质酸、壳聚糖、柠檬香茅提取物、维生素E、己二醇、卵磷脂。
2.根据权利要求1所述基于干细胞提取物的凝胶，其特征在于，将干细胞外泌体冻干粉、透明质酸、壳聚糖、柠檬香茅提取物、维生素E、己二醇、卵磷脂与水混合，得到基于干细胞提取物的凝胶。
3.根据权利要求1所述基于干细胞提取物的凝胶，其特征在于，100g水中，干细胞外泌体冻干粉为2～8g，透明质酸为1～5g，壳聚糖0.5～3g，柠檬香茅提取物0.1～1g，维生素E0.5～2g，己二醇0.5～3g，卵磷脂0.05～0.5g。
4.根据权利要求3所述基于干细胞提取物的凝胶，其特征在于，100g水中，干细胞外泌体冻干粉为3～7g，透明质酸为1.5～4g，壳聚糖1～2.5g，柠檬香茅提取物0.2～0.5g，维生素E0.6～1g，己二醇0.8～2g，卵磷脂0.07～0.2g。
5.根据权利要求4所述基于干细胞提取物的凝胶，其特征在于，100g水中，干细胞外泌体冻干粉为4～6g，透明质酸为2～3.5g，壳聚糖1.5～2.5g，柠檬香茅提取物0.2～0.4g，维生素E0.7～0.9g，己二醇0.9～1.2g，卵磷脂0.08～0.13g。
6.权利要求1所述基于干细胞提取物的凝胶在制备疮面修复药膏或者材料中的应用。
7.权利要求1所述基于干细胞提取物的凝胶的制备方法，其特征在于，将干细胞外泌体冻干粉、透明质酸、壳聚糖、柠檬香茅提取物、维生素E、己二醇、卵磷脂与水混合，得到基于干细胞提取物的凝胶。
8.权利要求1所述基于干细胞提取物的凝胶在制备促进皮肤愈合、抑菌和/或保湿材料中的应用。
9.原料在制备基于干细胞提取物的凝胶或者疮面修复材料中的应用，其特征在于，原料包括干细胞外泌体冻干粉、透明质酸、壳聚糖、柠檬香茅提取物、维生素E、己二醇、卵磷脂。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，柠檬香茅提取物为粉体。
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