KR101814498B1

KR101814498B1 - 유칼립투스 잎과 붉은토끼풀 잎의 혼합 추출물을 함유하는 화장료 조성물

Info

Publication number: KR101814498B1
Application number: KR1020150128836A
Authority: KR
Inventors: 이상락; 이광식; 이건국
Original assignee: 주식회사 비오코스
Priority date: 2015-09-11
Filing date: 2015-09-11
Publication date: 2018-01-05
Also published as: KR20170031386A

Abstract

본 발명은 유칼립투스잎과 붉은토끼풀잎의 혼합 추출물 함유하는 화장료 조성물에 관한 것이다. 보다 상세하게는 유칼립투스잎과 붉은토끼풀잎의 혼합 추출물을 포함하는 피부 보습 증진용 또는 피부 자극 완화 및 MMP-1 생성 억제 효과가 탁월한 화장료 조성물에 관한 것이다. 따라서, 본 발명의 조성물은 환경오염, 스트레스 등으로 인해 발생하는 다양한 피부 트러블을 개선하며 피부를 보호해주는 용도로 광범위하게 사용될 수 있다.

Description

유칼립투스 잎과 붉은토끼풀 잎의 혼합 추출물을 함유하는 화장료 조성물{Cosmetic Composition Containing the Mixed Extract of Eucalyptus Globulus Leaf and Trifolium Pratense Leaf}

본 발명은 유칼립투스 잎과 붉은토끼풀 잎의 혼합 추출물을 함유하는 화장료 조성물에 관한 것이다.

일반적으로 사람의 피부는 환경의 변화, 내적, 외적 스트레스 등으로 피부가 칙칙해지고, 민감해지며, 피부 수분 보유력이 저하하는 등의 다양한 피부 트러블들을 경험하게 된다. 특히 노화로 인해 가장 크게 나타나는 피부 특성이 피부 건조 및 피부 탄력이 떨어지며, 주름 생성이 많아지며 피부도 칙칙해진다. 또한 외부의 약한 자극에도 쉽게 민감해지며 회복에도 오랜 시간이 걸린다. 따라서, 이러한 피부 트러블을 해결하기 위한 많은 노력을 수행하고 있으며 대표적인 방법으로 천연 식물성 성분 및 자극 완화제를 활용하여 해결하는 것이며, 화장품 업계에서도 이러한 방법을 많이 사용하고 있다. 화장품은 피부를 아름답고 건강하게 유지시켜주며 나이가 들면서 생기는 피부 트러블 및 피부 건조를 완화시켜 주는 용도로 주로 사용되어 지고 있다. 최근 화장품 시장 동향은 천연 식물 추출물을 사용하는 것 외에 천연물을 발효시켜줌으로써 천연물의 기본적 특성과 함께 발효로 인해 생성되는 발효 산물을 이용한 소재 개발을 많이 시도하고 있다. 또한 여러 가지 천연 추출물을 복합 추출해서 사용하여 시너지 효과를 주는 경우도 많이 있다. 본 발명은 유칼립투스잎과 붉은토끼풀잎의 혼합 추출물이 기존의 식물추출물보다 우수한 효과를 갖는다는 것을 확인하였다.

본 발명은 여러 천연 식물 추출물들 중에서 상기 종래 기술보다 보습 능력이 탁월하고, 피부 트러블 완화에 도움이 되는 물질을 찾던 도중에 유칼립투스 잎과 붉은토끼풀 잎의 혼합 추출물이 보습 효과 및 피부 스트레스에 의한 피부 자극 완화에 도움을 줄 수 있음을 확인하였고, 이에 따라 본 발명을 완성하였다.

따라서, 본 발명의 목적은 유칼립투스(Eucalyptus Globulus) 잎과 붉은토끼풀(Trifolium Pratense) 잎의 혼합 추출물을 함유하여 다양한 피부 트러블 현상을 개선하고 피부 보습에 도움을 주는 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적 및 이점은 하기의 발명의 실시를 위한 구체적인 내용 및 청구범위에 의해 보다 명확하게 될 것이다.

본 발명은 유칼립투스(Eucalyptus Globulus) 잎과 붉은토끼풀(Trifolium Pratense) 잎의 혼합 추출물을 함유하는 화장료 조성물에 관한 것이다.

바람직하게는, 상기 화장료 조성물은 피부 자극 완화 효과, 주름 개선 효과 또는 피부 보습 효과를 가진다.

바람직하게는, 상기 혼합 추출물은 화장료의 총 중량에 대하여 0.0001 ~ 30 중량%를 함유된다.

바람직하게는, 상기 혼합 추출물은 분쇄 추출, 용매 추출, 발효 추출, 초고압 처리 추출로 이루어진 군에서 선택되는 추출방법으로 추출된 것인 화장료 조성물이다.

바람직하게는, 상기 화장료 조성물은 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이로 구성된 군으로부터 선택되는 제형을 갖는다.

본 발명은 유칼립투스 잎과 붉은토끼풀 잎의 혼합 추출물을 함유하는 화장료 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 유칼립투스 잎과 붉은토끼풀 잎의 혼합 추출물은 피부 자극 완화 및 MMP-1 생성 억제 효과가 탁월하다. 또한 유칼립투스 잎과 붉은토끼풀 잎의 혼합 추출물을 함유하는 본 발명의 조성물은 피부 보습효과가 우수하다. 따라서, 본 발명의 조성물은 환경오염, 스트레스 등으로 인해 발생하는 다양한 피부 트러블을 개선하며 피부를 보호해주는 화장료의 용도로 광범위하게 사용될 수 있다.

본 발명의 조성물에서 유효성분으로 이용되는 유칼립투스 잎과 붉은토끼풀 잎의 혼합 추출물은 유칼립투스 잎과 붉은토끼풀 잎에서 추출한 추출물을 의미한다.

또한, 유칼립투스 잎과 붉은토끼풀 잎의 혼합 추출물은 바람직하게는 화장료 조성물의 총 중량에 대해 0.0001 내지 30 중량%로 함유될 수 있으며, 더 바람직하게는 0.001 내지 20 중량%, 가장 바람직하게는 0.01 내지 10 중량% 포함될 수 있다. 상기 추출물의 함량이 0.0001 중량% 미만인 경우에는 피부 개선 효과가 나타나지 않고, 30 중량%를 초과하는 경우에는 함유량 증가에 대한 효과 증대 정도가 미미하며, 제형상의 안전 및 안정성에 문제가 있으며 경제적인 면에서도 바람직하지 못하다.

본 발명의 유칼립투스 잎과 붉은토끼풀 잎의 혼합 추출물은 유칼립투스 잎과 붉은토끼풀 잎을 1:3 내지 3:1의 중량비로 포함할 수 있으며, 바람직하게는 1:1의 중량비로 포함할 수 있다.

본 발명의 유칼립투스 잎과 붉은토끼풀 잎의 혼합 추출물의 추출법 중 분쇄 추출은 유칼립투스 잎과 붉은토끼풀 잎을 미세분쇄기로 분쇄한 다음 건더기를 체에 걸러 여과한 것을 의미한다. 이때, 분쇄한 분쇄물은 300메시 이하의 체를 통과시켜 여과한 것을 사용하는 것이 바람직하다.

또한, 본 발명의 유칼립투스 잎과 붉은토끼풀 잎의 혼합 추출물의 추출법 중 용매 추출은 당업계에 공지된 통상의 방법에 따라, 통상적인 용매를 사용하여 제조될 수도 있다. 통상적인 용매는 예컨대, 물, 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올(예를 들면, 메탄올, 에탄올, 프로판올 및 부탄올), 프로필렌글리콜, 1.3-부틸렌글리콜, 글리세린, 아세톤, 디에틸에테르, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트, 디클로로메탄, 클로로포름, 헥산 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 용매로 추출한 것을 의미한다.

또한, 본 발명의 유칼립투스 잎과 붉은토끼풀 잎의 혼합 추출물의 추출법 중 발효 추출은 유칼립투스 잎과 붉은토끼풀 잎을 발효시킨 추출물을 포함한다. 이때, 상기 발효 추출은 유칼립투스 잎과 붉은토끼풀 잎을 효모균, 유산균, 바실러스속 균 및 이의 혼합물로 이루어지는 군중에서 선택되는 균으로 20 내지 40 ℃의 온도 조건 하에서 pH 5 내지 7을 유지하면서 1 내지 7일간 발효시켜 추출한 것을 의미하며, 바람직하게는 상기 균은 사카로미세스 세레비시아(Saccharomyces cerevisisae)이며, 가장 바람직하게는 카사로미세스 세리비시아 KCTC 7904이다.

또한, 본 발명의 유칼립투스 잎과 붉은토끼풀 잎의 혼합 추출물의 추출법 중 초고압 추출은 유칼립투스잎과 붉은토끼풀잎을 초고압 처리하여 얻어지는 추출물을 포함한다. 이때, 초고압 처리는 100 내지 3000 ㎫의 압력에서 40 내지 90 ℃의 온도로 1 내지 24 시간 동안 처리하는 것을 의미하며, 바람직하게는 500 내지 1000 ㎫의 압력에서 40 내지 60 ℃의 온도 및 12 내지 24시간 처리이며, 가장 바람직하게는 1000 ㎫의 압력에서 50℃의 온도 및 24 시간 동안 처리하는 것을 의미한다.

또한, 본 발명의 유칼립투스 잎과 붉은토끼풀 잎의 혼합 추출물은 상술한 추출 방법을 혼합 적용하여 추출할 경우 피부의 보습 증진 및 피부 트러블을 개선 효과에 더욱 효과적인 추출물을 얻을 수 있다. 예컨대, 본 발명의 유칼립투스 잎과 붉은토끼풀 잎의 혼합 추출물은 유칼립투스 잎과 붉은토끼풀 잎을 미세하게 분쇄한 분쇄물을 효모균, 유산균, 바실러스속 균 및 이외 혼합물로 이루어지는 군중에서 선택되는 균으로 발효시킨 후 100 내지 3000 ㎫의 압력에서 40 내지 90 ℃의 온도로 1 내지 24 시간 동안 초고압 추출하는 단계를 처리하여 얻어지는 유칼립투스잎, 붉은토끼풀잎 초고압 추출물도 포함한다. 또한, 본 발명의 유칼립투스 잎과 붉은토끼풀 잎의 혼합 추출물은 상기 추출 방법으로 추출한 추출물의 농도를 조절하고 유효성분의 농도를 증가시키기 위해 여과, 유기용매 환류추출, 감압농축, 동결건조 등의 과정을 거칠 수도 있다. 상술한 추출 방법에 의한 추출물을 여과, 정제 및 농축 과정을 거친 추출물도 본 발명에 포함되는 것은 당업계에서 자명한 일이다.

한편, 본 발명의 유칼립투스 잎과 붉은토끼풀 잎의 혼합 추출물은 상술한 추출 방법 뿐만 아니라, 다른 추출 방법을 이용하여 추출될 수도 있다.

본 발명의 바람직한 실시예에 따르면, 유칼립투스 잎과 붉은토끼풀 잎의 혼합 추출물은 다음의 방법으로 제조된다. 먼저, 유칼립투스잎과 붉은토끼풀잎을 충분히 세척한 다음 분쇄한 후 300메시를 이용하여 미세하게 만든다. 이것이 100g/L되게 유칼립투스잎과 붉은토끼풀잎을 사카로미세스 속 (사카로미세스 세레비시아 KCTC 7904) 균주 배양액에 첨가한다. 여기에 탄소원으로 포도당 1~4% (바람직하게는 1~2%)를, 질소원으로 펩톤 0.1~1% (바람직하게는 0.2~0.5%)를 첨가하여 배양하였다. 배양은 5L 발효조를 이용하여 20 내지 40℃의 온도 조건 하에서, pH 5-7로 유지하면서 1 내지 7일간 배양하였다. 배양 후 배양액을 원심 분리하여 배양균을 1차 제거하였다. 배양균을 제거한 유칼립투스잎과 붉은토끼풀잎 배양액을 100 내지 3000 MPa의 압력에서 40 내지 90 ℃의 온도로 1 내지 24 시간 동안 초고압 처리하여 추출하며, 바람직하게는 500 내지 1000MPa의 압력에서 40 내지 60℃의 온도로 12∼24시간 처리하는 것이며, 가장 바람직하게는 압력 1000 MPa의 압력에서 50℃의 온도로 24 시간 동안 처리한다. 초고압 처리한 유칼립투스 잎과 붉은토끼풀 잎의 혼합 추출물을 최종 70%(V/V) 에탄올 수용액이 되도록 에탄올을 첨가하여 5시간씩 3회 환류추출하고 냉침한 후, 와트만(Whatman) #2 여과지로 여과한다. 여과가 완료되면 본 발명에서는 상기 추출단계에서 얻어진 추출액을 농축조로 이송하여 감압농축하고 이를 동결 건조한다. 감압농축은 로터리 감압농축기를 이용하여 농축하였으며 농축 조건은 1,000ml 라운드플라스크에 700ml의 추출물을 넣고 650mmHg~750mmHg의 압력으로 50~70℃, 600~1200rpm으로 회전하면서 2시간 동안 감압 농축한다. 감압 농축한 농축액은 예비동결을 수행하여 -40℃로 온도를 낮추고 -40℃로 2~4시간 동안 유지한 후 트랩 냉동을 통하여 -80까지 떨어트리고, 진공을 10~30mTorr로 유지한 다음 120분에 걸쳐 -40C까지 다시 올린다. 그 후 -20℃로 240분, 0℃로 40분, 15℃ 340분, 30℃로 130분 유지하고 완전히 건조될 때까지 1300℃로 유지한다.

본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효 성분으로서 상기 유효성분 이외에 화장품 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함하며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 당 업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화 될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수(스킨), 영양 화장수(밀크로션), 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징크림, 클렌징 폼, 클렌징워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.

또한, 본 발명은 유칼립투스 잎과 붉은토끼풀 잎의 혼합 추출물을 함유하는 화장료 조성물을 인간의 피부에 도포하여 피부 트러블을 개선하는 것을 특징으로 하는 화장방법을 제공한다.

본 발명의 화장 방법은 본 발명의 화장료 조성물을 인간의 피부에 도포하는 모든 화장 방법을 일컫는다. 즉, 화장료 조성물을 피부에 도포하는 당업계에 공지된 모든 방법이 본 발명의 화장 방법에 속한다.

본 발명의 화장료 조성물은 단독 또는 중복 도포하여 사용하거나, 본 발명 이외의 다른 화장료 조성물과 중복 도포하여 사용할 수 있다. 또한 본 발명에 따른 피부 보호 효과가 우수한 화장료 조성물은 통상적인 사용방법에 따라 사용될 수 있으며, 사용자의 피부 상태 또는 취향에 따라 그 사용횟수를 달리할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물이 비누, 계면활성제 함유 클렌징 또는 계면활성제 비함유 클렌징 제형일 경우, 피부에 도포한 후 닦아내거나 떼거나 물로 씻어낼 수도 있다. 구체적인 예로서, 상기 비누는 액상비누, 가루비누, 고형 비누 및 오일비누이며, 상기 계면활성제 함유 클린징 제형은 클렌징폼, 클렌징 워터, 클렌징 수건 및 클렌징 팩이며, 상기 계면활성제 비함유 클렌징 제형은 클렌징크림, 클렌징 로션, 클렌징 워터 및 클렌징 겔이며, 이에 한정되는 것은 아니다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.

< 실시예 1> 유칼립투스 잎과 붉은토끼풀 잎의 용매 추출물 제조

유칼립투스 잎 500g과 붉은토끼풀 잎 500g을 시료로 선별하여 충분히 세척한 다음 분쇄한 후 300메시 체에 통과시켜 분쇄물을 미세하게 만들었다. 최종 농도가 70%(V/V) 에탄올 수용액이 되도록 에탄올을 첨가하여 5시간씩 3회 환류추출하고 냉침 한 후, 와트만(whatman) #2 여과지로 여과하였다. 여과된 추출물은 감압농축 후 동결 건조하였다. 이 파우더를 50% 글리세린을 이용하여 2%(W/V)가 되게 녹여 유칼립투스 잎과 붉은토끼풀 잎의 용매 추출물을 제조하였다.

< 실시예 2> 유칼립투스 잎과 붉은토끼풀 잎의 발효 추출물 제조

유칼립투스 잎 500g과 붉은토끼풀 잎 500g을 시료로 선별하여 충분히 세척한 다음 300메시 체를 통과할 수 있도록 분쇄물을 미세하게 만들었다. 이것을 10g/L되게 유칼립투스와 붉은토끼풀의 잎을 사카로미세스 속 (사카로미세스 세레비시아 KCTC 7904) 균주 배양액에 첨가하였다. 여기에 탄소원으로 포도당 1~4%를 사용하며 바람직하게는 2%(W/V)를 첨가하였으며, 펩톤 0.1~1%를 첨가하며 바람직하게는 0.5%(W/V)를 추가로 첨가하여 배양하였다. 배양은 5L 발효조를 이용하여, 37℃에서, pH 5-7로 유지하면서 바람직하게는 pH 6으로 유지하면서, 1~7일간 바람직하게는 5일간 배양하였다. 배양 후 배양액을 원심분리하여 배양균을 1차 제거하였다.

배양균이 1차 제거된 발효물을 최종 70%(V/V) 에탄올 수용액이 되도록 에탄올을 첨가하여 5시간씩 3회 환류추출하고 냉침한 후, 와트만(whatman) #2 여과지로 여과하였다. 여과가 완료 된 추출액을 농축조로 이송하여 여과된 추출물을 감압농축하고 이를 동결 건조하였다. 이 파우더를 50% 글리세린을 이용하여 2%(W/V)가 되게 녹여 유칼립투스 잎과 붉은토끼풀 잎의 발효 추출물을 제조하였다.

< 실시예 3> 유칼립투스 잎과 붉은토끼풀 잎의 초고압 추출물 제조

유칼립투스 잎 500g과 붉은토끼풀 잎 500g을 시료로 선별하여 충분히 세척한 다음 300메시 체를 통과할 수 있도록 미세하게 분쇄한 유칼립투스잎과 붉은토끼풀잎 분쇄물을 초고압처리기를 이용하여 압력 1000MPa 하에서 온도를 50℃로 승온시키고 24시간 처리한 후 실온으로 냉각시켰다.

초고압 처리한 혼합 추출물을 최종 70%(V/V) 에탄올 수용액이 되도록 에탄올을 첨가하여 5시간씩 3회 환류 추출하고 냉침한 후, 와트만(Whatman) #2 여과지로 여과하였다. 여과가 완료되면 본 발명에서는 상기 추출 단계에서 얻어진 추출액을 농축조로 이송하여 여과된 추출물을 감압 농축하고 이를 동결 건조하였다. 동결건조물을 50% 글리세린을 이용하여 2%(W/V)가 되게 녹여 유칼립투스 잎과 붉은토끼풀잎의 초고압 추출물을 제조하였다.

< 실시예 4> 유칼립투스 잎과 붉은토끼풀 잎 발효 초고압 추출물 제조

유칼립투스 잎 500g과 붉은토끼풀 잎 500g을 시료로 선별하여 충분히 세척한 다음 300메시 체를 통과할 수 있도록 분쇄물을 미세하게 만들었다. 이 분쇄물을 10g/L되게 사카로미세스 속(사카로미세스 세레비시아 KCTC 7904) 균주 배양액에 첨가하였다. 여기에 탄소원으로 포도당 1 내지 4%를 사용하며 바람직하게는 2%(W/V)를 첨가하였으며, 펩톤 0.1 내지 1%를 첨가하며 바람직하게는 0.5%(W/V)를 추가로 첨가하여 배양하였다. 배양은 5L 발효조를 이용하여, 37℃에서, pH 5-7로 유지하면서 바람직하게는 pH 6으로 유지하면서, 1 내지 7일간 바람직하게는 5일간 배양하였다. 미생물 배양 후 배양액을 원심 분리하여 배양균을 1차 제거하였다.

배양균이 1차 제거된 유칼립투스 잎과 붉은토끼풀 잎 발효물을 초고압처리기를 이용하여 압력 1000MPa 하에서 온도를 50℃로 승온시키고 24시간 동안 초고압 처리한 후 실온으로 냉각시켰다. 초고압 처리한 유칼립투스잎과 붉은토끼풀잎 발효물을 최종 70%(V/V) 에탄올 수용액이 되도록 에탄올을 첨가하여 5시간씩 3회 환류추출하고 냉침한 후, 와트만(Whatman) #2 여과지로 여과하였다. 여과가 완료되면 본 발명에서는 상기 추출단계에서 얻어진 추출액을 농축조로 이송하여 50℃ 이하에서 감압농축 후 동결 건조하였다. 감압농축은 로터리감압농축기를 이용하여 농축하였으며, 농축 조건은 1,000ml 라운드플라스크에 700ml의 추출물을 넣고 650mmHg~750mmHg의 압력으로 50~70℃, 600~1200rpm으로 회전하면서 2시간 동안 감압 농축하였다. 감압 농축한 농축액은 예비동결을 수행하여 -40℃로 온도를 낮추고 -40℃로 2~4시간 동안 유지한 후 트랩 냉동을 통하여 -80까지 떨어트리고, 진공을 10~30mTorr로 유지한 다음 120분에 걸쳐 -40C까지 다시 올린다. 그 후 -20℃로 240분, 0℃로 40분, 15℃ 340분, 30℃로 130분 유지하고 완전히 건조될 때까지 1300분으로 유지하였다. 동결건조물을 50% 글리세린을 이용하여 2%가 되게 녹여 유칼립투스 잎과 붉은토끼풀 잎의 발효 초고압 추출물을 제조하였다.

< 비교실시예 1> 유칼립투스잎 추출물

유칼립투스 잎 1000g을 시료로 선별하여, 실시예 1의 방법에 따라 유칼립투스잎 추출물을 제조하였다.

< 비교실시예 2> 붉은토끼풀잎 추출물

붉은토끼풀잎 1000g을 시료로 선별하여, 실시예 1의 방법에 따라 유칼립투스잎 추출물을 제조하였다.

<제조예 1> 화장료 제조

본 발명의 유칼립투스 잎과 붉은토끼풀 잎의 혼합 추출물을 함유하는 화장료를 다음과 같이 제조하였다. 제형예 1 내지 4는 각각 실시예 1의 유칼립투스 잎과 붉은토끼풀 잎의 용매 추출물, 실시예 2의 유칼립투스 잎과 붉은토끼풀 잎의 발효 추출물, 실시예 3의 유칼립투스 잎과 붉은토끼풀 잎의 초고압 추출물, 실시예 4의 유칼립투스 잎과 붉은토끼풀 잎의 발효 초고압 추출물을 유효성분으로 함유하며, 비교제형예 1은 유칼립투스 잎과 붉은토끼풀 잎 추출물이 전혀 첨가되지 않은 화장료 제형이다. 그리고 비교 제형예 2 내지 3은 실시예 1 내지 4와 같이 유칼립투스 잎과 붉은토끼풀 잎을 혼합하여 사용하지 않고 단독으로 추출하여 유효성분으로 사용하였을때의 제형예를 보여주고 있다.

성분 (단위 : 중량 %)	제형예1	제형예2	제형예3	제형예4	비교제형예 1	비교제형예 2	비교제형예 3
글리세릴 스테아레이트SE	1.5	1.5	1.5	1.5	1.5	1.5	1.5
스테아릴 알콜	1.5	1.5	1.5	1.5	1.5	1.5	1.5
라놀린	1.5	1.5	1.5	1.5	1.5	1.5	1.5
폴리솔베이트 60	1.3	1.3	1.3	1.3	1.3	1.3	1.3
솔비탄스테아레이트	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5
경화식물유	1.0	1.0	1.0	1.0	1.0	1.0	1.0
광물유	5.0	5.0	5.0	5.0	5.0	5.0	5.0
스쿠알란	3.0	3.0	3.0	3.0	3.0	3.0	3.0
트리옥타노인	2.0	2.0	2.0	2.0	2.0	2.0	2.0
디메치콘	1.0	1.0	1.0	1.0	1.0	1.0	1.0
초산토코페롤	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5
카르복시비닐폴리머	0.12	0.12	0.12	0.12	0.12	0.12	0.12
글리세린	6.0	6.0	6.0	6.0	6.0	6.0	6.0
1.3-부틸렌글리콜	2.0	2.0	2.0	2.0	2.0	2.0	2.0
소듐히아루로네이트	1.0	1.0	1.0	1.0	1.0	1.0	1.0
트리 에탄올아민	0.12	0.12	0.12	0.12	0.12	0.12	0.12
메틸파라벤	0.2	0.2	0.2	0.2	0.2	0.2	0.2
향	0.02	0.02	0.02	0.02	0.02	0.02	0.02
실시예 1	3	-	-	-	-	-	-
실시예 2	-	3	-	-	-	-	-
실시예 3	-	-	3	-	-	-	-
실시예 4	-	-	-	3	-	-	-
비교실시예 1	-	-	-	-	-	3	-
비교실시예 2	-	-	-	-	-	-	3
증류수	잔량	잔량	잔량	잔량	잔량	잔량	잔량
합계	100	100	100	100	100	100	100

< 실험예 1> 피부 보습 증진 효과 측정

실시예 1 내지 4의 화장료 제형(제형예 1 내지 4) 및 비교제형예 1 내지 3을 이용하여 피부보습증진 효과를 비교하였다.

실험은 피부 질환이 없는 20-40대 25명을 대상으로 1조 당 20명씩 2개조로 나누고, 각 조별로 제형예 1 내지 4 및 비교 제형예 1 내지 3의 크림을 매일 2회씩 1개월간 얼굴 및 전박부에 도포하게 하였다. 도포 시작 전에 미리 항온, 항습 조건(24도, 습도 40%)에서 corneometer (CM820 courage Khazaka electronic GmbH, Germany)에서 피부 전도도를 측정하여 기본 값을 삼고, 1주, 2주, 4주 경과 후의 피부 전도도를 측정하여 그 증가율을 평가하였다. 그 결과를 하기 표 2에 나타내었다.

피부 전도도 증가율(%)

시 료	1주 후	2주 후	4주 후
제형예 1	25	26	27
제형예 2	33	34	37
제형예 3	29	31	31
제형예 4	43	43	45
비교 제형예 1	16	18	22
비교 제형예 2	19	21	23
비교 제형예 3	20	21	24

상기 표 2의 결과를 통해 알 수 있는 바와 같이, 본 발명의 유칼립투스 잎과 붉은토끼풀 잎의 혼합 추출물을 함유한 제형예 1 내지 4는 유칼립투스 잎과 붉은토끼풀 잎의 혼합 추출물을 전혀 함유하지 않은 비교제형예 1과 유칼립투스 잎과 붉은토끼풀 잎 단독 추출물을 함유하는 비교제형예 2 내지 3에 비하여 피부 전도도 증가율이 우수하였으며, 특히 발효 또는 초고압추출을 시행한 추출물을 함유한 제형(제형예 2 내지 4)의 경우, 일반적인 추출법만 시행한 경우(제형예 1)에 비해 피부 전도도가 더 우수하였으며, 발효와 초고압 추출물 모두 시행한 추출물을 함유하는 제형예 4의 경우 피부 전도도가 가장 우수하였다. 또한 일반적으로 피부 전도도는 피부 수분량에 비례하므로, 상기의 결과로부터 본 발명의 유칼립투스 잎과 붉은토끼풀 잎의 혼합 추출물을 함유하는 제형예 1 내지 4는 유칼립투스 잎과 붉은토끼풀 잎의 혼합 추출물을 함유하지 않는 비교제형예 1과 유칼립투스 잎과 붉은토끼풀 잎 단독 추출물을 함유하는 비교제형예 2 내지 3에 비해 피부 수분 함량도 높게 유지한다는 것을 확인할 수 있다. 이러한 결과로 유칼립투스 잎과 붉은토끼풀 잎의 혼합 추출물은 피부 보습 증진에 효과가 있음을 알 수 있었고, 특히 유칼립투스잎과 붉은토끼풀잎을 발효하여 초고압으로 얻은 추출물이 가장 월등한 효과가 있었다.

이는, 종래기술의 검토에서도 알 수 있듯이 유칼립투스 잎과 붉은토끼풀 잎의 혼합 추출물의 구성성분들 중 폴리페놀과 이소플라본을 포함하는 수많은 유효성분들이 발효 및 초고압 추출 단계를 거치면서 더 유효한 유효성분으로 변형 또는 농축되었기 때문으로 추정된다.

< 실험예 2> 락트산에 의한 피부 자극 완화 효과 시험

본 발명의 유칼립투스 잎과 붉은토끼풀 잎의 혼합 추출물에 의한 피부 자극 완화 효과를 알아보기 위하여 락트산에 의한 피부 자극 완화 효과 시험을 실시하였으며, 시험 방법은 다음과 같다.

인간 피부 세포인 섬유아세포(한국 세포주 은행, 대한민국)를 T-75 플라스크(Falcon, 미합중국)에서 80% 정도 성장할 때까지 배양하였다. 이것을 다시 96-웰 플레이트(Falcon, 미합중국)에 3×10⁴ cells/well이 되게 옮겨 24시간 배양하였다. 배양 후 현미경을 통해 세포가 완전히 부착되어 잘 자라는지 여부를 확인하고 피부세포 자극원으로 락트산을 이용하여 실험을 진행하였다. 이때 락트산은 0.2% 를 사용하였다. 즉, 96-웰의 각각에 0.2% 락트산이 함유된 DMEM(시그마, 미합중국) 배지를 200㎕씩 첨가하고 실시예 1 내지 4에서 제조한 유칼립투스 잎과 붉은토끼풀 잎의 혼합 추출물을 각각 1.0 %(v/v)로 조절하여 첨가하였다. 이때 락트산 및 유칼립투스 잎과 붉은토끼풀 잎의 혼합 추출물을 첨가하지 않은 것을 대조군으로 하였고, 락트산만 첨가한 것을 비교군으로 하였다. 시험물질을 첨가하고 12시간 경과 후 세포의 생존율을 비교하기 위하여 MTT(시그마, 미합중국) 솔루션 (3mg/ml)을 첨가하여 세포 생존율을 ELISA READER(Molecular Devices, 미합중국)를 이용하여 570nm에서 흡광도를 측정하고 하기 수학식 1에 따라 세포 생존율(%)을 계산하였으며 실험 결과는 하기 표 3에 기재하였다.

시험물질(농도 %)	세포 생존율(%)
대조군	100
실시예1의 추출물(1%)	99.8
실시예2의 추출물(1%)	99.6
실시예3의 추출물(1%)	99.9
실시예4의 추출물(1%)	99.8
비교군(락트산 0.2%)	0.0
락트산 (0.2%) + 실시예1의 추출물(1%)	65.9
락트산 (0.2%) + 실시예2의 추출물(1%)	72.3
락트산 (0.2%) + 실시예3의 추출물(1%)	79.5
락트산 (0.2%) + 실시예4의 추출물(1%)	80.2

상기 표 3의 결과를 통해 알 수 있는 바와 같이, 유칼립투스 잎과 붉은토끼풀 잎의 혼합 추출물을 첨가한 것이 락트산 처리에 의한 세포 생성 억제 완화 효과를 보였다. 또한 각각의 추출물은 그 자체로는 세포 생존율에 아무런 영향을 미치치 않아 세포 독성도 없는 것으로 나타났다.

< 실험예 3> MMP -1 생성 억제 효과 - 주름 개선 효과

인간 정상 피부세포인 섬유아세포(한국 세포주 은행, 대한민국)를 48-웰 마이크로 플레이트(Nunc, 덴마크)에 각 웰당 1× 10⁶ 세포가 되도록 접종하고, DMEM 배지(Sigma, 미합중국) 및 37℃의 조건에서 24시간 동안 배양한 후 상기 실시예 1 및 4의 혼합 추출물을 최종농도가 1.0% 되게 첨가한 무혈청 DMEM 배지 및 대조군으로 유칼립투스 잎과 붉은토끼풀 잎의 혼합 추출물이 포함되지 않은 무혈청 DMEM 배지에서 48시간 동안 추가로 배양하였다. 배양 후, 각 웰의 상층액을 모아 MMP-1 분석 킷트(Amersham, 미합중국)를 이용하여 새로 합성된 MMP-1의 양(ng/㎖)을 측정하고, 하기 수학식 2에 따라 MMP-1 생성 억제율을 계산하였으며, 그 결과는 표 4에 나타내었다. 이때, MMP-1 생성 억제율의 양성 대조군으로 TGF-β(10ng/ml, Roche, 미합중국)을 사용하였다.

시험물질(농도 %)	MMP-1 생성 억제율(%)
TGF-β(10ng/ml)	73.8
실시예1의 추출물(1%)	76.8
실시예2의 추출물(1%)	77.2
실시예3의 추출물(1%)	79.6
실시예4의 추출물(1%)	82.9
비교제형예 2의 추출물(1%)	74.2
비교제형예 3의 추출물(1%)	74.3

상기 표 4의 결과에서 보는 바와 같이, MMP-1 생성 억제율에 대하여, 실시예 1 내지 4의 유칼립투스 잎과 붉은토끼풀 잎의 혼합추출물을 1.0 %의 농도로 처리한 군은 양성대조군으로 사용한 TGF-β 처리군과 비교제형예 2내지 3에 비해 보다 우수한 MMP-1 생성 억제율을 보여주었다. 여기서 MMP-1은 콜라겐 분해효소이고, 다양한 외부 자극(자외선) 등으로 인해 발생 되는 스트레스에 의해 발현이 증가되는 단백질이다. 자외선을 받으면 피부세포에 그 합성이 증가되고, 피부의 기질 단백질을 녹이고 분해하는 작용을 하며 자외선을 비롯한 외부 자극들이 MMP-1 효소와 합성을 더욱 증가시켜 노화가 촉진되는 작용을 한다. 이 MMP-1 효소의 생성이 억제된다는 것은 피부의 주름 개선에 효과가 있다는 것을 의미한다. 따라서, 유칼랍투스 잎과 붉은토끼풀 잎의 혼합추출물이 이 단백질의 합성을 저하시켜주는 것은 스트레스 등으로 인한 피부 트러블을 해결해주고 주름 개선에 효과가 있다는 것을 의미한다.

이하 상기한 실험예의 결과를 근거로 하여 본 발명의 유칼립투스 잎과 붉은토끼풀 잎의 혼합추출물을 포함하는 화장료를 조성하여 제시한다. 그러나 본 발명의 조성물을 하기의 처방예들로 한정하고자 하는 것은 아니다.

처방예 1: 유연화장수

유칼립투스 잎과 붉은토끼풀 잎의 혼합추출물을 함유한 화장료 중 유연화장수의 처방예는 다음과 같다.

성 분	함량(%)
유칼립투스 잎과 붉은토끼풀 잎의 혼합 추출물	1.0
글리세린	4.0
1.3-부틸렌글리콜	1.0
알란토인	0.1
DL-판테놀	1
이.디.티.에이-2NA	0.02
벤조페논-9	0.04
소듐 히아루로네이트	5.0
니콜 HCO 60	0.4
메틸 파라벤	0.2
향	0.01
증류수	잔량
합 계	100

처방예 2: 영양화장수

유칼립투스 잎과 붉은토끼풀 잎의 혼합추출물을 함유한 화장료 중 영양화장수의 처방예는 다음과 같다.

성분	함량(단위:중량%)
유칼립투스 잎과 붉은토끼풀 잎의 혼합추출물	3.0
글리세릴 스테아레이트SE	1.5
스테아릴 알콜	1.5
라놀린	1.5
폴리솔베이트 60	1.3
솔비탄스테아레이트	0.5
경화식물유	1.0
광물유	5.0
스쿠알란	3.0
트리옥타노인	2.0
디메치콘	1.0
초산토코페롤	0.5
카르복시비닐폴리머	0.12
글리세린	6.0
1.3-부틸렌글리콜	2.0
소듐히아루로네이트	1.0
트리 에탄올아민	0.12
메틸파라벤	0.2
향	0.02
증류수	잔량
합계	100

처방예 3: 영양크림

유칼립투스 잎과 붉은토끼풀 잎의 혼합추출물을 함유한 화장료 중 영양크림의 처방예는 다음과 같다.

성 분	함량(단위:중량%)
유칼립투스 잎과 붉은토끼풀 잎의 혼합추출물	5.0
친유형 모노스테아린산글리세린	1.0
세테아릴알콜	3.2
스테아린산	2.5
밀납	1.0
폴리솔베이트 60	1.5
솔비탄스테아레이트	0.5
경화식물유	1.0
스쿠알란	2.0
광물유	4.0
트리옥타노인	7.0
디메치콘	2.0
소듐마그네슘실리케이트	0.1
글리세린	5.0
베타인	4.0
트리에타올아민	1.0
소듐히아루로네이트	4.0
메틸파라벤	0.2
향	0.1
증류수	잔량
합계	100

이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims

유칼립투스(Eucalyptus Globulus) 잎과 붉은토끼풀(Trifolium Pratense) 잎을 1:1의 중량비로 혼합한 후 추출한 혼합 추출물을 함유하는 피부 자극 완화 효과 또는 피부 보습 효과를 갖는 화장료 조성물로서,
상기 혼합 추출물은 발효 추출, 초고압 추출 및 발효 후 초고압 추출로 이루어진 군에서 선택되는 추출방법으로 추출된 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
삭제
제1항에 있어서, 상기 혼합 추출물은 화장료의 총 중량에 대하여 0.0001 ~ 30 중량%를 함유되는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
삭제
제1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이로 구성된 군으로부터 선택되는 제형을 갖는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.