KR102010235B1 - 피부보습 및 피부미백 기능을 갖는 화장료 조성물 - Google Patents
피부보습 및 피부미백 기능을 갖는 화장료 조성물 Download PDFInfo
- Publication number
- KR102010235B1 KR102010235B1 KR1020190067098A KR20190067098A KR102010235B1 KR 102010235 B1 KR102010235 B1 KR 102010235B1 KR 1020190067098 A KR1020190067098 A KR 1020190067098A KR 20190067098 A KR20190067098 A KR 20190067098A KR 102010235 B1 KR102010235 B1 KR 102010235B1
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- extract
- skin
- cosmetic composition
- skin whitening
- preparation
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
- A61K8/97—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from algae, fungi, lichens or plants; from derivatives thereof
- A61K8/9783—Angiosperms [Magnoliophyta]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
- A61K8/97—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from algae, fungi, lichens or plants; from derivatives thereof
- A61K8/9741—Pteridophyta [ferns]
- A61K8/9749—Filicopsida or Pteridopsida
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
- A61Q19/007—Preparations for dry skin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
- A61Q19/02—Preparations for care of the skin for chemically bleaching or whitening the skin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
- A61K2800/80—Process related aspects concerning the preparation of the cosmetic composition or the storage or application thereof
- A61K2800/85—Products or compounds obtained by fermentation, e.g. yoghurt, beer, wine
Abstract
본 발명은 흑난초 (Liparis nervosa (Thunb.) Lindl.), 섬꿩고사리 (Plagiogyria japonica Nakai), 버어먼초 (Burmannia cryptopetala Makino) 및 자주땅귀개 (Utricularia yakusimensis Masam.)의 혼합물로부터 추출된 혼합추출물을 함유하는 피부보습 및 피부미백 기능을 갖는 화장료 조성물에 관한 것이며, 이는 기존의 천연 식물소재의 피부 미백용 화장료 조성물에 비하여 피부 미백 및 보습 효과가 현저히 개선되며, 햇볕 등 자외선에 노출되어도 피부 미백효과가 장시간 유지되는 효과를 갖는다.
Description
본 발명은 피부보습 및 피부미백 기능을 갖는 화장료 조성물에 관한 것으로, 더욱 구체적으로 흑난초, 섬꿩고사리, 버어먼초 및 자주땅귀개의 혼합물로부터 추출된 혼합추출물을 이용하여 피부 보습 및 미백 효과가 탁월한 화장료 조성물에 관한 것이다.
사람의 피부는 다양한 주위의 환경변화와 스트레스 등으로 인하여 세월이 흐를수록 칙칙해지고 민감해지며 피부의 색이 점차 어두워지고 피부의 수분함량이 감소하는 등 다양한 트러블을 겪게 된다.
특히 피부의 밝은 톤은 건강과 젊음을 상징하는 것으로 남녀노소 불문하고 하얗고 깨끗한 피부를 갖기 위하여 다양한 화장품을 사용하거나 피부 시술을 받는 등 밝은 톤의 피부에 대한 사람들의 관심이 점차 증가하고 있으며, 피부보습은 사람의 피부노화를 방지하기 위하여 필수적으로 요구되는 요소이다.
따라서, 이와 같이 밝은 톤의 피부를 유지하고 피부에 충분한 수분을 유지시키기 위하여 위하여 피부 미백제를 사용하거나 피부 보습제를 사용하는 등 피부에 각종 화장료 조성물을 도포하는 등의 방법이 통상적으로 사용되고 있으며, 피부미백 또는 보습용 화장료 조성물에 관한 연구 또한 활발히 수행되고 있다.
한편, 하기 특허문헌 1에서는 저백피 및 솔나물이 각각 4:1의 중량비로 혼합되어 추출되는 저백피 및 솔나물 추출물을 함유하는 항노화 및 미백용 화장료 조성물을 개시하고 있으나, 이러한 화장료 조성물은 피부미백 효과가 미흡하고 외부 자외선 노출시 피부 미백효과가 쉽게 사라지는 등 피부미백효과의 유지시간이 짧은 문제가 있었다.
따라서, 기존의 천연 식물소재의 피부 미백용 화장료 조성물에 비하여 피부 미백효과가 현저히 개선되며, 햇볕 등 자외선에 노출되어도 피부 미백효과가 장시간 유지되고 피부 보습효과 또한 우수한 신규한 피부미백용 화장료 조성물의 개발이 절실히 요구되는 실정이다.
이에 본 발명에서는 상기 문제점을 해결하고자 흑난초 (Liparis nervosa (Thunb.) Lindl.), 섬꿩고사리 (Plagiogyria japonica Nakai), 버어먼초 (Burmannia cryptopetala Makino) 및 자주땅귀개 (Utricularia yakusimensis Masam.)의 혼합물로부터 추출된 혼합추출물을 이용하여 피부미백 효과 및 피부보습 효과가 우수하고 피부미백 기능이 장시간 유지되는 신규한 화장료 조성물을 제조할 수 있음을 우연히 발견하였고, 본 발명은 이에 기초하여 완성되었다.
본 발명의 일 구현예에 따른 피부보습 및 피부미백 기능을 갖는 화장료 조성물은 흑난초 (Liparis nervosa (Thunb.) Lindl.), 섬꿩고사리 (Plagiogyria japonica Nakai), 버어먼초 (Burmannia cryptopetala Makino) 및 자주땅귀개 (Utricularia yakusimensis Masam.)의 혼합물로부터 추출된 혼합추출물을 함유하는 것을 특징으로 한다.
본 발명의 일 구현예에 따른 피부보습 및 피부미백 기능을 갖는 화장료 조성물에 있어서, 상기 혼합물은 흑난초 (Liparis nervosa (Thunb.) Lindl.) 100 중량에 대하여 섬꿩고사리 (Plagiogyria japonica Nakai) 50 내지 150 중량, 버어먼초 (Burmannia cryptopetala Makino) 50 내지 150 중량 및 자주땅귀개 (Utricularia yakusimensis Masam.) 100 내지 150 중량을 혼합한 것을 특징으로 한다.
본 발명의 일 구현예에 따른 피부보습 및 피부미백 기능을 갖는 화장료 조성물에 있어서, 상기 혼합추출물은 상기 혼합물로부터 발효 추출법, 초고압 추출법 또는 발효 후 초고압 추출법을 이용하여 추출된 것을 특징으로 한다.
본 발명의 일 구현예에 따른 피부보습 및 피부미백 기능을 갖는 화장료 조성물에 있어서, 상기 혼합추출물은 화장료 총 중량에 대하여 0.001 내지 30 중량%로 함유된 것을 특징으로 한다.
본 발명의 일 구현예에 따른 피부보습 및 피부미백 기능을 갖는 화장료 조성물에 있어서, 상기 화장료 조성물은 크림, 유연화장수(스킨), 영양화장수(밀크로션), 팩의 제형을 갖는 것을 특징으로 한다.
본 발명에 따른 피부보습 및 피부미백 기능을 갖는 화장료 조성물은 기존의 천연 식물소재의 피부 미백용 화장료 조성물에 비하여 피부 미백 및 보습 효과가 현저히 개선되며, 햇볕 등 자외선에 노출되어도 피부 미백효과가 장시간 유지되는 효과를 갖는다.
본 발명을 좀 더 구체적으로 설명하기 전에, 본 명세서 및 청구범위에 사용된 용어나 단어는 통상적이거나 사전적인 의미로 한정되어서는 아니되며, 발명을 가장 최선의 방법으로 설명하기 위해 용어의 개념을 적절하게 정의할 수 있다는 원칙에 입각하여 본 발명의 기술적 사상에 부합하는 의미와 개념으로 해석되어야만 한다. 따라서, 본 명세서에 기재된 실시 예의 구성은 본 발명의 바람직한 하나의 예에 불과할 뿐이고, 본 발명의 기술적 사상을 모두 대변하는 것은 아니므로, 본 출원시점에 있어서 이들을 대체할 수 있는 다양한 균등물과 변형 예들이 있을 수 있음을 이해하여야 한다.
이하, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 본 발명을 용이하게 실시할 수 있도록, 본 발명의 바람직한 실시 예들을 상세히 설명한다.
본 발명은 피부보습 및 피부미백 기능을 갖는 화장료 조성물에 관한 것으로, 더욱 구체적으로 흑난초, 섬꿩고사리, 버어먼초 및 자주땅귀개의 혼합물로부터 추출된 혼합추출물을 함유하여 피부 미백 및 보습효과가 탁월한 화장료 조성물에 관한 것이다.
본 발명에 따른 피부미백 기능을 갖는 화장료 조성물은 흑난초 (Liparis nervosa (Thunb.) Lindl.), 섬꿩고사리 (Plagiogyria japonica Nakai), 버어먼초 (Burmannia cryptopetala Makino) 및 자주땅귀개 (Utricularia yakusimensis Masam.)의 혼합물로부터 추출된 혼합추출물을 함유하는 것을 특징으로 한다.
본 발명에 함유되는 상기 혼합추출물은 바람직하게는 화장료 조성물의 총 중량에 대해 0.001 내지 30 중량%로 함유될 수 있으며, 더 바람직하게는 0.001 내지 20 중량%, 가장 바람직하게는 0.01 내지 10 중량% 포함될 수 있다. 상기 추출물의 함량이 0.001 중량% 미만인 경우에는 피부 미백 및 보습 효과가 약하고, 30 중량%를 초과하는 경우에는 함유량 증가에 대한 효과 증대 정도가 미미하며, 제형상의 안전성 및 안정성에 문제가 있으며 경제적인 면에서도 바람직하지 못하다.
본 발명의 화장료 조성물에 함유되는 혼합추출물은 예를 들어, 흑난초 (Liparis nervosa (Thunb.) Lindl.) 100 중량에 대하여 섬꿩고사리 (Plagiogyria japonica Nakai) 50 내지 150 중량, 버어먼초 (Burmannia cryptopetala Makino) 50 내지 150 중량 및 자주땅귀개 (Utricularia yakusimensis Masam.) 100 내지 150 중량을 혼합한 혼합물을 이용하여 추출과정을 통하여 제조될 수 있다.
본 발명에 이용되는 혼합추출물은 흑난초, 섬꿩고사리, 버어먼초 및 자주땅귀개의 줄기를 이용하여 추출을 수행한다.
또한, 본 발명에 따른 혼합추출물의 제조에 사용되는 흑난초 (Liparis nervosa (Thunb.) Lindl.), 섬꿩고사리 (Plagiogyria japonica Nakai), 버어먼초 (Burmannia cryptopetala Makino) 및 자주땅귀개 (Utricularia yakusimensis Masam.)는 각각의 줄기를 취하여 깨끗이 세척한 후 잔존 가능성이 있는 미세 독성을 완전히 제거하기 위하여 추출 전에 100℃ 이상의 고온증기로 20분 이상 충분히 찌는 과정을 거치게 된다.
본 발명에 이용되는 혼합추출물은 분쇄 추출법을 통하여 추출될 수 있으며, 분쇄 추출은 흑난초, 섬꿩고사리, 버어먼초 및 자주땅귀개의 줄기를 미세분쇄기로 분쇄한 다음 건더기를 체에 걸러 여과함으로써 수행될 수 있다.
이때, 분쇄한 분쇄물은 300메시 이하의 체를 통과시켜 여과한 것을 사용하는 것이 바람직하다.
또한, 본 발명에 이용되는 혼합추출물은 용매 추출법에 의하여 추출될 수 있으며, 용매 추출법에 사용되는 용매는 예를 들어, 물, 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올 (예를 들어, 메탄올, 에탄올, 프로판올 및 부탄올), 프로필렌글리콜, 1.3-부틸렌글리콜, 글리세린, 아세톤, 디에틸에테르, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트, 디클로로메탄, 클로로포름, 헥산 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 용매가 사용될 수 있다.
또한, 본 발명에 이용되는 혼합 추출물은 발효 추출법에 의하여 추출될 수 있다. 본 발명에 사용되는 발효 추출법은 흑난초, 섬꿩고사리, 버어먼초 및 자주땅귀개의 줄기를 발효시키는 과정을 통하여 추출이 수행된다.
상기 발효 추출과정은 흑난초, 섬꿩고사리, 버어먼초 및 자주땅귀개의 줄기를 효모균, 유산균, 바실러스속 균 및 이의 혼합물로 이루어지는 군중에서 선택되는 균으로 20 내지 40℃의 온도 조건 하에서 pH 5 내지 7을 유지하면서 1 내지 7일간 발효시켜 추출하는 과정을 통하여 수행될 수 있으며, 효모 (Saccharomyces cerevisisae)를 이용하여 수행되는 것이 가능하다.
또한, 본 발명에 이용되는 혼합추출물은 초고압 추출법에 의하여 추출될 수 있다. 초고압 추출은 100 내지 3,000 ㎫의 압력에서 40 내지 90℃의 온도로 1 내지 24 시간 동안 처리하는 과정을 통하여 수행되는 것이 가능하며, 바람직하게는 500 내지 1,000 ㎫의 압력에서 40 내지 60℃의 온도로 12 내지 24시간 처리, 가장 바람직하게는 1,000 ㎫의 압력에서 50℃의 온도로 24 시간 동안 처리함으로써 수행될 수 있다.
또한, 본 발명의 혼합추출물은 상술한 추출 방법을 혼합 적용하여 추출할 수도 있다. 예를 들어, 본 발명의 혼합 추출물은 흑난초, 섬꿩고사리, 버어먼초 및 자주땅귀개의 줄기를 미세하게 분쇄한 분쇄물을 효모균, 유산균, 바실러스속 균 및 이외 혼합물로 이루어지는 군중에서 선택되는 균으로 발효시킨 후 100 내지 3,000 ㎫의 압력에서 40 내지 90℃의 온도로 1 내지 24 시간 동안 초고압 추출하는 단계를 처리함으로써 제조하는 것이 가능하다.
또한, 본 발명의 혼합추출물은 상기 추출 방법으로 추출한 추출물의 농도를 조절하고 유효성분의 농도를 증가시키기 위해 여과, 유기용매 환류추출, 감압농축, 동결건조 등의 과정을 거칠 수도 있다. 상술한 추출 방법에 의한 추출물을 여과, 정제 및 농축 과정을 거친 추출물 또한 본 발명에 포함되는 것으로 해석되어야 할 것이다.
본 발명의 바람직한 실시예에 따르면, 본 발명의 혼합 추출물은 다음의 방법으로 제조되는 것이 가능하다.
먼저, 흑난초, 섬꿩고사리, 버어먼초 및 자주땅귀개의 줄기를 충분히 세척한 다음 분쇄한 후 이를 고온의 증기로 찌고, 그 후 300메시 체를 통과시킨 미세 여과물을 준비한다.
이와 같이 체를 통과시킨 미세 여과물을 리터당 100g의 농도로 효모 균주 배양액에 첨가한다. 여기에 탄소원으로 포도당 1~4% (바람직하게는 1~2%)를, 질소원으로 펩톤 0.1~1% (바람직하게는 0.2~0.5%)를 첨가하여 배양할 수 있다. 배양은 5리터 발효조를 이용하여 20 내지 40℃의 온도 조건 하에서, pH 5-7로 유지하면서 1 내지 7일간 배양한다.
배양 후 배양액을 원심 분리하여 배양균을 1차 제거하고, 배양균을 제거한 배양액을 100 내지 3,000 MPa의 압력에서 40 내지 90℃의 온도로 1 내지 24 시간 동안 초고압 처리하여 추출하며, 바람직하게는 500 내지 1,000MPa의 압력에서 40 내지 60℃의 온도로 12 내지 24시간, 가장 바람직하게는 압력 1,000 MPa의 압력에서 50℃의 온도로 24 시간 동안 처리한다.
초고압 처리한 혼합 추출물을 최종 70%(V/V) 에탄올 수용액이 되도록 에탄올을 첨가하여 5시간씩 3회 환류추출하고 냉침한 후, 와트만(Whatman) #2 여과지로 여과한다.
여과가 완료되면 본 발명에서는 상기 추출단계에서 얻어진 추출액을 농축조로 이송하여 감압농축하고 이를 동결건조한다. 감압농축은 로터리 감압농축기를 이용하여 수행하는 것이 가능하며 농축 조건은 1,000㎖ 라운드플라스크에 700㎖의 추출물을 넣고 650mmHg 내지 750mmHg의 압력으로 50 내지 70℃, 600 내지 1,200rpm으로 회전하면서 2시간 동안 감압 농축한다. 감압 농축한 농축액은 예비동결을 수행하여 영하 40℃로 온도를 낮추고 영하 40℃로 2 내지 4시간 동안 유지한 후 트랩 냉동을 통하여 영하 80℃까지 온도를 낮추고, 진공을 10 내지 30m토르로 유지한 다음 120분에 걸쳐 영하 40℃까지 다시 올린다.
그 후 영하 20℃로 240분, 0℃로 40분, 15℃ 340분, 30℃로 130분 유지하고 완전히 건조될 때까지 1,300℃로 유지한다.
본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효 성분으로서 상기 유효성분 이외에 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제 또는 담체를 포함할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있다.
더욱 구체적으로 본 발명의 화장료 조성물은 크림, 유연화장수(스킨), 영양화장수(밀크로션) 또는 팩의 제형으로 제조될 수 있으며, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이크림, 클렌징크림, 클렌징 폼, 클렌징워터, 스프레이 또는 파우더 등의 제형으로 제조될 수 있다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 다만, 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것은 아니다.
<제조예 1> 흑난초, 섬꿩고사리, 버어먼초 및 자주땅귀개 줄기의 용매 혼합추출물 제조
흑난초 줄기 500g, 섬꿩고사리 줄기 500g, 버어먼초 줄기 500g 및 자주땅귀개 줄기 500g을 시료로 선별하여 충분히 세척한 다음 이들을 30분간 고온의 증기로 충분히 찌는 과정을 거쳤다. 그 후 이들을 분쇄한 후 300메시 체에 통과시켜 미세한 분쇄물을 만들었다. 최종 농도가 70%(V/V) 에탄올 수용액이 되도록 에탄올을 첨가하여 5시간씩 3회 환류 추출하고 냉침 한 후, 와트만(whatman) #2 여과지로 여과하였다. 여과된 추출물은 감압농축 후 동결 건조하였다. 이 파우더를 50% 글리세린을 이용하여 2%(W/V)가 되게 녹여 흑난초, 섬꿩고사리, 버어먼초 및 자주땅귀개의 줄기의 용매 추출물을 제조하였다.
<제조예 2> 흑난초, 섬꿩고사리, 버어먼초 및 자주땅귀개 줄기의 발효 혼합추출물 제조
흑난초 줄기 500g, 섬꿩고사리 줄기 500g, 버어먼초 줄기 500g 및 자주땅귀개 줄기 500g을 시료로 선별하여 충분히 세척한 다음 이들을 30분간 고온의 증기로 충분히 찌는 과정을 거쳤다. 그 후 300메시 체를 통과할 수 있도록 분쇄물을 미세하게 만들었다. 이와 같이 미세화된 분쇄물을 10g/ℓ의 비율로 효모 균주 배양액에 첨가하였다. 여기에 탄소원으로 포도당 2%(W/V) 및 펩톤 0.5%(W/V)를 추가로 첨가하여 배양하였다.
배양은 5ℓ 발효조를 이용하여, 37℃에서, pH 6으로 유지하면서, 5일간 배양하였다. 배양 후 배양액을 원심분리하여 배양균을 1차 제거하였다.
배양균이 1차 제거된 발효물을 최종 70%(V/V) 에탄올 수용액이 되도록 에탄올을 첨가하여 5시간씩 3회 환류 추출하고 냉침한 후, 와트만(whatman) #2 여과지로 여과하였다. 여과가 완료된 추출액을 농축조로 이송하여 여과된 추출물을 감압농축하고 이를 동결 건조하였다. 이 파우더를 50% 글리세린을 이용하여 2%(W/V)가 되게 녹여 흑난초, 섬꿩고사리, 버어먼초 및 자주땅귀개 줄기의 발효 추출물을 제조하였다.
<제조예 3> 흑난초, 섬꿩고사리, 버어먼초 및 자주땅귀개 줄기의 초고압 혼합추출물 제조
흑난초 줄기 500g, 섬꿩고사리 줄기 500g, 버어먼초 줄기 500g 및 자주땅귀개 줄기 500g을 시료로 선별하여 충분히 세척한 다음 이들을 30분간 고온의 증기로 충분히 찌는 과정을 거쳤다. 그 후 300메시 체를 통과할 수 있도록 미세하게 분쇄한 분쇄물을 초고압처리기를 이용하여 압력 1,000MPa 하에서 온도를 50℃로 승온시키고 24시간 처리한 후 실온으로 냉각시켰다.
초고압 처리한 혼합추출물을 최종 70%(V/V) 에탄올 수용액이 되도록 에탄올을 첨가하여 5시간씩 3회 환류 추출하고 냉침한 후, 와트만(Whatman) #2 여과지로 여과하였다. 여과가 완료된 후 상기 추출 단계에서 얻어진 추출액을 농축조로 이송하여 여과된 추출물을 감압 농축하고 이를 동결 건조하였다. 동결건조물을 50% 글리세린을 이용하여 2%(W/V)가 되게 녹여 흑난초, 섬꿩고사리, 버어먼초 및 자주땅귀개 줄기의 초고압 추출물을 제조하였다.
<제조예 4> 흑난초, 섬꿩고사리, 버어먼초 및 자주땅귀개 줄기의 발효-초고압 혼합추출물 제조
흑난초 줄기 500g, 섬꿩고사리 줄기 500g, 버어먼초 줄기 500g 및 자주땅귀개 줄기 500g을 시료로 선별하여 충분히 세척한 다음 이들을 30분간 고온의 증기로 충분히 찌는 과정을 거쳤다. 그 후 300메시 체를 통과할 수 있도록 분쇄물을 미세하게 만들었다. 이 분쇄물을 10g/ℓ의 비율로 효모 균주 배양액에 첨가하였다. 여기에 탄소원으로 포도당 2%(W/V) 및 펩톤 0.5%(W/V)를 추가로 첨가하여 배양하였다. 배양은 5ℓ 발효조를 이용하여, 37℃에서, pH 6으로 유지하면서, 5일간 배양하였다. 배양 후 배양액을 원심분리하여 배양균을 1차 제거하였다.
배양균이 1차 제거된 발효물을 초고압처리기를 이용하여 압력 1,000MPa 하에서 온도를 50℃로 승온시키고 24시간 동안 초고압 처리한 후 실온으로 냉각시켰다. 초고압 처리한 발효물을 최종 70%(V/V) 에탄올 수용액이 되도록 에탄올을 첨가하여 5시간씩 3회 환류추출하고 냉침한 후, 와트만(Whatman) #2 여과지로 여과하였다. 여과가 완료된 후 상기 추출단계에서 얻어진 추출액을 농축조로 이송하여 50℃ 이하에서 감압농축 후 동결 건조하였다. 감압농축은 로터리감압농축기를 이용하여 농축하였으며, 1,000㎖ 라운드플라스크에 700㎖의 추출물을 넣고 700mmHg의 압력으로 60℃, 1,000rpm으로 회전하면서 2시간 동안 감압 농축하였다. 감압 농축한 농축액은 예비동결을 수행하여 영하 40℃로 온도를 낮추었고 영하 40℃로 3시간 동안 유지한 후 트랩 냉동을 통하여 영하 80℃까지 온도를 낮추었고, 진공을 20m토르로 유지한 다음 120분에 걸쳐 영하 40℃까지 다시 올렸다.
그 후 영하 20℃로 240분, 0℃로 40분, 15℃ 340분, 30℃로 130분 유지하고 완전히 건조될 때까지 1300분 유지하였다. 동결건조물을 50% 글리세린을 이용하여 2%가 되게 녹여 흑난초, 섬꿩고사리, 버어먼초 및 자주땅귀개 줄기의 발효-초고압 추출물을 제조하였다.
<제조예 5> 흑난초 줄기 추출물
흑난초 줄기 2,000g을 시료로 선별하여, 실시예 1의 방법에 따라 흑난초 줄기 추출물을 제조하였다.
<제조예 6> 섬꿩고사리 줄기 추출물
섬꿩고사리 줄기 2,000g을 시료로 선별하여, 실시예 1의 방법에 따라 섬꿩고사리 줄기 추출물을 제조하였다.
<제조예 7> 버어먼초 줄기 추출물
버어먼초 줄기 2,000g을 시료로 선별하여, 실시예 1의 방법에 따라 버어먼초 줄기 추출물을 제조하였다.
<제조예 8> 자주땅귀개 줄기 추출물
자주땅귀개 줄기 2,000g을 시료로 선별하여, 실시예 1의 방법에 따라 자주땅귀개 줄기 추출물을 제조하였다.
<제조예 9> 섬꿩고사리, 버어먼초 및 자주땅귀개 줄기의 용매 혼합추출물 제조 (흑난초 줄기 미포함)
섬꿩고사리 줄기 700g, 버어먼초 줄기 700g 및 자주땅귀개 줄기 600g을 시료로 선별하여 충분히 세척한 다음 이들을 30분간 고온의 증기로 충분히 찌는 과정을 거쳤다. 그 후 이들을 분쇄한 후 300메시 체에 통과시켜 미세한 분쇄물을 만들었다. 최종 농도가 70%(V/V) 에탄올 수용액이 되도록 에탄올을 첨가하여 5시간씩 3회 환류 추출하고 냉침 한 후, 와트만(whatman) #2 여과지로 여과하였다. 여과된 추출물은 감압농축 후 동결 건조하였다. 이 파우더를 50% 글리세린을 이용하여 2%(W/V)가 되게 녹여 섬꿩고사리, 버어먼초 및 자주땅귀개 줄기의 용매 추출물을 제조하였다.
<제조예 10> 흑난초, 버어먼초 및 자주땅귀개 줄기의 용매 혼합추출물 제조 (섬꿩고사리 줄기 미포함)
흑난초 줄기 700g, 버어먼초 줄기 700g 및 자주땅귀개 줄기 600g을 시료로 선별하여 충분히 세척한 다음 이들을 30분간 고온의 증기로 충분히 찌는 과정을 거쳤다. 그 후 이들을 분쇄한 후 300메시 체에 통과시켜 미세한 분쇄물을 만들었다. 최종 농도가 70%(V/V) 에탄올 수용액이 되도록 에탄올을 첨가하여 5시간씩 3회 환류 추출하고 냉침 한 후, 와트만(whatman) #2 여과지로 여과하였다. 여과된 추출물은 감압농축 후 동결 건조하였다. 이 파우더를 50% 글리세린을 이용하여 2%(W/V)가 되게 녹여 흑난초, 버어먼초 및 자주땅귀개 줄기의 용매 추출물을 제조하였다.
<제조예 11> 흑난초, 섬꿩고사리 및 자주땅귀개 줄기의 용매 혼합추출물 제조 (버어먼초 줄기 미포함)
흑난초 줄기 700g, 섬꿩고사리 줄기 700g 및 자주땅귀개 줄기 600g을 시료로 선별하여 충분히 세척한 다음 이들을 30분간 고온의 증기로 충분히 찌는 과정을 거쳤다. 그 후 이들을 분쇄한 후 300메시 체에 통과시켜 미세한 분쇄물을 만들었다. 최종 농도가 70%(V/V) 에탄올 수용액이 되도록 에탄올을 첨가하여 5시간씩 3회 환류 추출하고 냉침 한 후, 와트만(whatman) #2 여과지로 여과하였다. 여과된 추출물은 감압농축 후 동결 건조하였다. 이 파우더를 50% 글리세린을 이용하여 2%(W/V)가 되게 녹여 흑난초, 섬꿩고사리 및 자주땅귀개 줄기의 용매 추출물을 제조하였다.
<제조예 12> 흑난초, 섬꿩고사리 및 버어먼초 줄기의 용매 혼합추출물 제조 (자주땅귀개 줄기 미포함)
흑난초 줄기 700g, 섬꿩고사리 줄기 700g 및 버어먼초 줄기 600g을 시료로 선별하여 충분히 세척한 다음 이들을 30분간 고온의 증기로 충분히 찌는 과정을 거쳤다. 그 후 이들을 분쇄한 후 300메시 체에 통과시켜 미세한 분쇄물을 만들었다. 최종 농도가 70%(V/V) 에탄올 수용액이 되도록 에탄올을 첨가하여 5시간씩 3회 환류 추출하고 냉침 한 후, 와트만(whatman) #2 여과지로 여과하였다. 여과된 추출물은 감압농축 후 동결 건조하였다. 이 파우더를 50% 글리세린을 이용하여 2%(W/V)가 되게 녹여 흑난초, 섬꿩고사리 및 버어먼초 줄기의 용매 추출물을 제조하였다.
<실험예 1> 세포 내 멜라닌 저해효과
B16F1 멜라노마 세포를 한국 세포주은행에서 제공받아 배양시켰다. B16F1 멜라노마 세포는 멜라닌을 생성하는 세포주로서 일반적으로 미백물질 스크리닝에 사용된다. 상기 세포를 배양하기 위한 배지는 DMEM, 10% FBS, 1% 페니실린/스트렙토마이신을 넣어 무균상태로 만들었다. 세포배양은 37℃, 5% CO2의 인큐베이터에서 배양하였다. 멜라노마 세포를 배양하여 100 mm 패트리 디쉬가 90% 정도 찼을 때 계대하였다. 본 발명에 따른 화장료 조성물의 미백효과를 측정하기 위하여 B16F1 멜라노마 세포에 처리하여 생성된 멜라닌양의 변화를 측정하였다. 6웰 플래이트에 세포를 접종(seeding)하고 제조예 1 내지 12의 추출물을 각각 200㎍/㎖농도로 처리한 후 이틀간 배양하여 세포를 회수하였다. 회수한 세포를 10% DMSO를 포함하는 1N NaOH를 가해 90℃에서 1 시간 반응시켜 멜라닌에 충분히 녹아나오도록 한 후, ELISA 리더(reader)를 이용하여 파장 405nm에서 흡광도를 측정하였다. 하기 수학식 1을 이용하여 저해도를 계산하였으며, 그 결과를 표 1에 나타내었다.
[수학식 1]
멜라닌 생성도(%) = 처리구 흡광도/미처리구 흡광도 × 100
| 구분 | 멜라닌 생성도 (%) |
| 미처리구 | 100 |
| 제조예 1 | 21.3 |
| 제조예 2 | 20.8 |
| 제조예 3 | 20.4 |
| 제조예 4 | 13.5 |
| 제조예 5 | 61.5 |
| 제조예 6 | 60.7 |
| 제조예 7 | 61.6 |
| 제조예 8 | 60.6 |
| 제조예 9 | 40.7 |
| 제조예 10 | 42.7 |
| 제조예 11 | 42.6 |
| 제조예 12 | 44.8 |
상기 표 1의 결과를 살펴보면, 본 발명의 혼합추출물인 제조예 1 내지 4의 경우 제조예 5 내지 12에 비하여 멜라닌 생성도가 현저히 낮음을 알 수 있다.
특히, 발효와 초고압 추출물 모두 시행한 추출물을 함유하는 실시예 4의 경우 멜라닌 생성도가 가장 낮은 것을 확인할 수 있다.
한편, 상기 표 1에서 제조예 1 내지 4와 제조예 9 내지 12의 멜라닌 생성도를 비교해 보면 흑난초, 섬꿩고사리, 버어먼초 및 자주땅귀개 줄기가 모두 혼합된 혼합물을 이용하여 혼합추출물을 제조한 경우가 상기 4가지 성분 중 어느 하나라도 제외된 혼합물을 이용하여 제조된 혼합추출물에 비하여 멜라닌 생성도가 현저하게 낮아진 것을 확인할 수 있다.
한편, 상기 표 1에서 제조예 5 내지 8과 제조예 1 내지 4 또는 제조예 9 내지 12를 비교하면, 흑난초, 섬꿩고사리, 버어먼초 및 자주땅귀개 줄기를 각각 단독으로 이용하여 추출물을 제조한 경우는 이들을 혼합한 경우에 비하여 멜라닌 생성도 저하효과가 미미함을 확인할 수 있다.
결국, 상기 표 1의 결과를 종합하면, 흑난초, 섬꿩고사리, 버어먼초 및 자주땅귀개 줄기를 모두 혼합한 혼합물을 이용하여 혼합추출물을 제조한 제조예 1 내지 4의 경우에 미백효과가 현저하게 우수하며, 특히 추출방법으로는 발효와 초고압 추출물 모두 시행한 추출물을 함유하는 실시예 4의 경우 멜라닌 생성도가 가장 낮음을 알 수 있다.
<화장료 제조>
제조예 1 내지 4의 혼합 추출물 및 제조예 5 내지 12의 추출물을 함유하는 크림타입의 화장료를 하기 표 2 및 3과 같이 제조하였다 (제형예: 크림).
실시예 1 내지 4는 각각 제조예 1 내지 4의 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물의 제형예를 나타내며, 비교예 2 내지 9는 각각 제조예 5 내지 12의 추출물을 유효성분으로 사용하였을 때의 화장료 조성물의 제형예를 나타낸다. 비교예 1은 제조예 1 내지 12 중 어떤 추출물도 함유하지 않는 화장료 조성물의 제형예를 나타낸다.
| 성분 (단위:중량%) |
실시 예 1 |
실시 예 2 |
실시 예 3 |
실시 예 4 |
비교 예 1 |
비교 예 2 |
비교 예 3 |
비교 예 4 |
비교 예 5 |
| 글리세릴 스테아레이트 SE |
1.5 | 1.5 | 1.5 | 1.5 | 1.5 | 1.5 | 1.5 | 1.5 | 1.5 |
| 스테아릴 알콜 | 1.5 | 1.5 | 1.5 | 1.5 | 1.5 | 1.5 | 1.5 | 1.5 | 1.5 |
| 라놀린 | 1.5 | 1.5 | 1.5 | 1.5 | 1.5 | 1.5 | 1.5 | 1.5 | 1.5 |
| 폴리솔베이트 60 | 1.3 | 1.3 | 1.3 | 1.3 | 1.3 | 1.3 | 1.3 | 1.3 | 1.3 |
| 솔비탄 스테아레이트 |
0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
| 경화식물유 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 |
| 광물유 | 5.0 | 5.0 | 5.0 | 5.0 | 5.0 | 5.0 | 5.0 | 5.0 | 5.0 |
| 스쿠알란 | 3.0 | 3.0 | 3.0 | 3.0 | 3.0 | 3.0 | 3.0 | 3.0 | 3.0 |
| 트리옥타노인 | 2.0 | 2.0 | 2.0 | 2.0 | 2.0 | 2.0 | 2.0 | 2.0 | 2.0 |
| 디메치콘 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 |
| 초산토코페롤 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
| 카르복시비닐 폴리머 |
0.12 | 0.12 | 0.12 | 0.12 | 0.12 | 0.12 | 0.12 | 0.12 | 0.12 |
| 글리세린 | 6.0 | 6.0 | 6.0 | 6.0 | 6.0 | 6.0 | 6.0 | 6.0 | 6.0 |
| 1.3-부틸렌글리콜 | 2.0 | 2.0 | 2.0 | 2.0 | 2.0 | 2.0 | 2.0 | 2.0 | 2.0 |
| 소듐 히아루로네이트 |
1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 |
| 트리에탄올아민 | 0.12 | 0.12 | 0.12 | 0.12 | 0.12 | 0.12 | 0.12 | 0.12 | 0.12 |
| 메틸파라벤 | 0.2 | 0.2 | 0.2 | 0.2 | 0.2 | 0.2 | 0.2 | 0.2 | 0.2 |
| 향료 | 0.02 | 0.02 | 0.02 | 0.02 | 0.02 | 0.02 | 0.02 | 0.02 | 0.02 |
| 제조예 1 추출물 | 3 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 제조예 2 추출물 | 0 | 3 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 제조예 3 추출물 | 0 | 0 | 3 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 제조예 4 추출물 | 0 | 0 | 0 | 3 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 제조예 5 추출물 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 3 | 0 | 0 | 0 |
| 제조예 6 추출물 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 3 | 0 | 0 |
| 제조예 7 추출물 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 3 | 0 |
| 제조예 8 추출물 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 3 |
| 제조예 9 추출물 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 제조예 10 추출물 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 제조예 11 추출물 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 제조예 12 추출물 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 정제수 | 잔량 | 잔량 | 잔량 | 잔량 | 잔량 | 잔량 | 잔량 | 잔량 | 잔량 |
| 성분 (단위:중량%) |
비교 예 6 |
비교 예 7 |
비교 예 8 |
비교 예 9 |
| 글리세릴 스테아레이트 SE |
1.5 | 1.5 | 1.5 | 1.5 |
| 스테아릴 알콜 | 1.5 | 1.5 | 1.5 | 1.5 |
| 라놀린 | 1.5 | 1.5 | 1.5 | 1.5 |
| 폴리솔베이트 60 | 1.3 | 1.3 | 1.3 | 1.3 |
| 솔비탄 스테아레이트 |
0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
| 경화식물유 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 |
| 광물유 | 5.0 | 5.0 | 5.0 | 5.0 |
| 스쿠알란 | 3.0 | 3.0 | 3.0 | 3.0 |
| 트리옥타노인 | 2.0 | 2.0 | 2.0 | 2.0 |
| 디메치콘 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 |
| 초산토코페롤 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
| 카르복시비닐 폴리머 |
0.12 | 0.12 | 0.12 | 0.12 |
| 글리세린 | 6.0 | 6.0 | 6.0 | 6.0 |
| 1.3-부틸렌글리콜 | 2.0 | 2.0 | 2.0 | 2.0 |
| 소듐 히아루로네이트 |
1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 |
| 트리에탄올아민 | 0.12 | 0.12 | 0.12 | 0.12 |
| 메틸파라벤 | 0.2 | 0.2 | 0.2 | 0.2 |
| 향료 | 0.02 | 0.02 | 0.02 | 0.02 |
| 제조예 1 추출물 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 제조예 2 추출물 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 제조예 3 추출물 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 제조예 4 추출물 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 제조예 5 추출물 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 제조예 6 추출물 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 제조예 7 추출물 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 제조예 8 추출물 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 제조예 9 추출물 | 3 | 0 | 0 | 0 |
| 제조예 10 추출물 | 0 | 3 | 0 | 0 |
| 제조예 11 추출물 | 0 | 0 | 3 | 0 |
| 제조예 12 추출물 | 0 | 0 | 0 | 3 |
| 정제수 | 잔량 | 잔량 | 잔량 | 잔량 |
<실험예 2> 피부미백 지속효과 실험
본 발명의 혼합추출물에 의한 화장료 조성물의 피부 미백효과의 지속력을 테스트하기 위하여 상기 표 2 및 3의 실시예 1 내지 4 및 비교예 1 내지 9의 화장료 크림을 이용하여 실험참가자 (20대 성인 남성 10명 및 20대 성인 여성 10명)를 대상으로 1일 3회씩 10일간 세안 후 화장료 크림을 2g씩 얼굴에 도포하게 하고 10일째 되는날 피부미백 개선정도를 측정하였다.
그 후, 11째되는 날부터 5일간 상기 화장료 크림을 도포하지 않게 하였으며, 매일 피부의 미백정도를 측정하여 그 결과를 하기 표 4에 나타내었다.
피부미백측정은 실험개시 직전에 20명 성인남녀를 대상으로 세안후 측정된 피부색의 톤의 평균값을 100으로 기준을 정하고, 피부톤의 밝아진 정도를 수치로 환산하여 표시하였다.
| 구분 | 실험전 | 10일째 | 11일째 | 12일째 | 13일째 | 14일째 | 15일째 |
| 실시예 1 | 100 | 143 | 142 | 140 | 138 | 134 | 130 |
| 실시예 2 | 100 | 144 | 140 | 139 | 137 | 130 | 129 |
| 실시예 3 | 100 | 147 | 146 | 144 | 142 | 140 | 138 |
| 실시예 4 | 100 | 162 | 158 | 150 | 148 | 146 | 144 |
| 비교예 1 | 100 | 114 | 108 | 104 | 102 | 101 | 100 |
| 비교예 2 | 100 | 119 | 117 | 116 | 108 | 105 | 102 |
| 비교예 3 | 100 | 121 | 118 | 113 | 107 | 105 | 101 |
| 비교예 4 | 100 | 123 | 119 | 113 | 107 | 104 | 100 |
| 비교예 5 | 100 | 125 | 118 | 113 | 109 | 105 | 101 |
| 비교예 6 | 100 | 133 | 122 | 121 | 118 | 115 | 110 |
| 비교예 7 | 100 | 134 | 125 | 124 | 121 | 113 | 108 |
| 비교예 8 | 100 | 130 | 126 | 125 | 120 | 115 | 111 |
| 비교예 9 | 100 | 134 | 131 | 128 | 125 | 118 | 112 |
상기 표 4의 결과를 살펴보면, 본 발명에 따른 화장료 조성물인 실시예 1 내지 4의 피부미백효과를 다시 한번 확인할 수 있으며, 특히 실시예 1 내지 4를 비교예 1 내지 9와 비교할 때, 피부미백지속효과 또한 매우 우수함을 확인할 수 있다.
<실험예 3> 피부 보습 증진 효과 측정
실시예 1 내지 4 및 비교예 1 내지 9의 화장료 조성물을 이용하여 피부보습증진 효과를 비교하였다.
피부보습 증진 효과는 피부 수분함량에 비례하는 피부 전도도를 측정하는 방법으로 수행되었다.
실험은 피부 질환이 없는 20 내지 40대 25명을 대상으로 1조당 20명씩 2개 조로 나누고, 각 조별로 실시예 1 내지 4 및 비교예 1 내지 9의 화장료 크림을 매일 2회씩 1개월간 얼굴 및 전박부에 도포하게 하였다. 도포 시작 전에 미리 항온, 항습 조건(24도, 습도 40%)에서 corneometer (CM820 courage Khazaka electronic GmbH, Germany)에서 피부 전도도를 측정하여 기본 값을 삼고, 1주, 2주, 4주 경과 후의 피부 전도도를 측정하여 그 증가율을 평가하였다. 그 결과를 하기 표 5에 나타내었다.
| 시료 | 1주 후 (피부전도도 증가율, %) |
2주 후 (피부전도도 증가율, %) |
3주 후 (피부전도도 증가율, %) |
| 실시예 1 | 35 | 39 | 42 |
| 실시예 2 | 36 | 38 | 42 |
| 실시예 3 | 36 | 39 | 43 |
| 실시예 4 | 52 | 56 | 60 |
| 비교예 1 | 10 | 12 | 14 |
| 비교예 2 | 17 | 21 | 23 |
| 비교예 3 | 19 | 22 | 23 |
| 비교예 4 | 19 | 21 | 24 |
| 비교예 5 | 20 | 22 | 25 |
| 비교예 6 | 25 | 27 | 29 |
| 비교예 7 | 25 | 27 | 29 |
| 비교예 8 | 27 | 28 | 30 |
| 비교예 9 | 26 | 29 | 31 |
상기 표 5의 결과를 통해 알 수 있는 바와 같이, 본 발명의 혼합추출물을 함유한 실시예 1 내지 4는 본 발명의 혼합추출물을 전혀 함유하지 않은 비교예 1과 흑난초, 섬꿩고사리, 버어먼초 및 자주땅귀개 줄기의 단독 추출물을 함유하는 비교예 2 내지 5에 비하여 피부 전도도 증가율이 매우 우수하였으며, 특히 발효와 초고압 추출물 모두 시행한 추출물을 함유하는 실시예 4의 경우 피부 전도도가 가장 우수하였다. 표 5의 결과로부터 본 발명의 혼합 추출물을 함유하는 실시예 1 내지 4는 각 성분의 단독 추출물을 함유하는 비교예 2 내지 5 및 어떠한 추출물도 함유하지 않는 비교예 1에 비하여 우수한 피부 보습효과를 나타냄을 확인할 수 있다.
또한, 상기 표 5에서 실시예 1 내지 4와 비교예 6 내지 9의 결과를 비교하면, 흑난초, 섬꿩고사리, 버어먼초 또는 자주땅귀개 중 어느 한 성분이라도 미포함시키고 혼합추출물을 제조할 경우, 실시예 1 내지 4에 비하여 보습효과가 임계적으로 저하됨을 확인할 수 있다.
<실험예 4> 락트산에 의한 피부 자극 완화 효과 실험
본 발명의 혼합추출물에 의한 피부 자극 완화 효과를 알아보기 위하여 다음과 같은 방법으로 락트산에 의한 피부 자극 완화 효과 시험을 실시하였다.
인간 피부 세포인 섬유아세포(한국 세포주 은행, 대한민국)를 T-75 플라스크(Falcon, 미합중국)에서 80% 정도 성장할 때까지 배양하였다. 이것을 다시 96-웰 플레이트(Falcon, 미합중국)에 3×104(세포/웰)이 되게 옮겨 24시간 배양하였다. 배양 후 현미경을 통해 세포가 완전히 부착되어 잘 자라는지 여부를 확인하고 피부세포 자극원으로 락트산을 이용하여 실험을 진행하였다. 락트산은 0.2% 희석농도 용액을 사용하였다. 즉, 96-웰의 각각에 0.2% 락트산이 함유된 DMEM(시그마, 미합중국) 배지를 200㎕씩 첨가하고 제조예 1 내지 8에서 제조한 혼합 추출물을 각각 1.0 %(v/v)로 조절하여 첨가하였다. 이때 락트산 또는 본 발명의 혼합 추출물 중 어느 것도 첨가하지 않은 것을 대조군으로 하였고, 락트산만 첨가한 것을 비교군으로 하였다. 시험물질을 첨가하고 12시간 경과 후 세포의 생존율을 비교하기 위하여 MTT(시그마, 미합중국) 솔루션 (3㎎/㎖)을 첨가하여 세포 생존율을 ELISA READER(Molecular Devices, 미합중국)를 이용하여 570nm에서 흡광도를 측정하고 하기 수학식 1에 따라 세포 생존율(%)을 계산하였으며 실험 결과는 하기 표 6에 나타내었다.
[수학식 2]
세포생존율(%)=((대조군흡광도-시험물질흡광도)/대조군흡광도)×100
| 시험물질 (농도 %) | 세포 생존율 (%) |
| 대조군 | 100 |
| 제조예 1의 추출물 (1%) | 99.9 |
| 제조예 2의 추출물 (1%) | 99.8 |
| 제조예 3의 추출물 (1%) | 99.9 |
| 제조예 4의 추출물 (1%) | 99.8 |
| 제조예 5의 추출물 (1%) | 99.9 |
| 제조예 6의 추출물 (1%) | 99.8 |
| 제조예 7의 추출물 (1%) | 99.8 |
| 제조예 8의 추출물 (1%) | 99.9 |
| 제조예 9의 추출물 (1%) | 99.9 |
| 제조예 10의 추출물 (1%) | 99.9 |
| 제조예 11의 추출물 (1%) | 99.9 |
| 제조예 12의 추출물 (1%) | 99.9 |
| 비교군 (락트산, 0.2%) | 0.0 |
| 락트산 (0.2%) + 제조예 1의 추출물 (1%) | 77.5 |
| 락트산 (0.2%) + 제조예 2의 추출물 (1%) | 79.2 |
| 락트산 (0.2%) + 제조예 3의 추출물 (1%) | 80.5 |
| 락트산 (0.2%) + 제조예 4의 추출물 (1%) | 84.5 |
| 락트산 (0.2%) + 제조예 5의 추출물 (1%) | 21.5 |
| 락트산 (0.2%) + 제조예 6의 추출물 (1%) | 20.5 |
| 락트산 (0.2%) + 제조예 7의 추출물 (1%) | 30.5 |
| 락트산 (0.2%) + 제조예 8의 추출물 (1%) | 22.5 |
| 락트산 (0.2%) + 제조예 9의 추출물 (1%) | 60.5 |
| 락트산 (0.2%) + 제조예 10의 추출물 (1%) | 62.7 |
| 락트산 (0.2%) + 제조예 11의 추출물 (1%) | 63.5 |
| 락트산 (0.2%) + 제조예 12의 추출물 (1%) | 62.4 |
상기 표 6의 결과를 통하여, 본 발명의 혼합 추출물을 첨가하는 경우 락트산 처리에 따른 세포 생장억제를 현저하게 완화함을 확인할 수 있다.
<실험예 5> 피부자극시험 1
무게 1.75 내지 2.25 ㎏ 사이의 뉴질랜드 (New Zealand)계 웅성 토끼 4마리를 사용하여 실험하였다. 본 발명의 상기 혼합추출물을 시험물질로 적용하기 전, 적용 부위인 토끼의 등쪽을 제모하였으며, 토끼의 좌우 각각 2부위를 주사침을 이용하여 표피만을 찰과하였다. 각 추출물을 50 ㎎/㎖ 농도로 증류수에 녹인 후, 찰과부위 (abraded part)와 비찰과부위 (intact part)에 각각 0.5 ㎖ 투여하고 비처치구는 0.5 ㎖의 증류수를 투여한 후 2㎝의 거즈로 덮었다. 적용 후 처치구와 비처치구는 비자극성 테이프로 잘 고정하고 24시간 경과 후 잔류물질을 제거하였다. 피부반응 적용시간은 24시간과 72시간 후에 패취를 제거하고 관찰하였으며, 그 결과를 하기 표 7에 나타내었다.
| 구분 | 처치구 | 비처치구 | ||||||||||||||
| 변화 | 홍반 및 가피 | 부종 | 홍반 및 가피 | 부종 | ||||||||||||
| 부위 | 비찰과 | 찰과 | 비찰과 | 찰과 | 비찰과 | 찰과 | 비찰과 | 찰과 | ||||||||
| 시간 | 24 | 72 | 24 | 72 | 24 | 72 | 24 | 72 | 24 | 72 | 24 | 72 | 24 | 72 | 24 | 72 |
| 제조예 1 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 제조예 2 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 제조예 3 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 제조예 4 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 전체 | 0 | 0 | ||||||||||||||
실험기간 동안 사망한 실험동물은 없었으며 체중은 증가하였고 자극에 대한 뚜렷한 반응은 나타나지 않았다. 본 발명의 혼합 추출물을 토끼에 실험한 후 도포된 피부는 엷은 갈색으로 염색되었으나 피부반응 실험에는 영향을 받지 않았다. 표 4를 통하여 확인할 수 있는 바와 같이, 처치구와 비처치구의 피부 모두 어떠한 자극도 관찰되지 않았으며, 홍반 (erythema), 부종 (edema), 가피 (eschar)도 나타나지 않았다. 상기 표 4의 결과에 따라 본 발명의 혼합추출물은 피부에 어떠한 자극도 주지 않음을 확인할 수 있다.
<실험예 6> 피부자극시험 2
무게 1.75 내지 2.25 ㎏ 사이의 뉴질랜드 (New Zealand)계 웅성 토끼 4마리를 사용하여 실험하였다. 본 발명의 실시예 1 내지 4의 화장료 조성물을 시험물질로 적용하기 전, 적용 부위인 토끼의 등쪽을 제모하였으며, 토끼의 좌우 각각 2부위를 주사침을 이용하여 표피만을 찰과하였다. 각 추출물을 50 ㎎/㎖ 농도로 증류수에 녹인 후, 찰과부위 (abraded part)와 비찰과부위 (intact part)에 각각 0.5 ㎖ 투여하고 비처치구는 0.5 ㎖의 증류수를 투여한 후 2㎝의 거즈로 덮었다. 적용 후 처치구와 비처치구는 비자극성 테이프로 잘 고정하고 24시간 경과 후 잔류물질을 제거하였다. 피부반응 적용시간은 24시간과 72시간 후에 패취를 제거하고 관찰하였으며, 그 결과를 하기 표 8에 나타내었다.
| 구분 | 처치구 | 비처치구 | ||||||||||||||
| 변화 | 홍반 및 가피 | 부종 | 홍반 및 가피 | 부종 | ||||||||||||
| 부위 | 비찰과 | 찰과 | 비찰과 | 찰과 | 비찰과 | 찰과 | 비찰과 | 찰과 | ||||||||
| 시간 | 24 | 72 | 24 | 72 | 24 | 72 | 24 | 72 | 24 | 72 | 24 | 72 | 24 | 72 | 24 | 72 |
| 실시예 1 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 실시예 2 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 실시예 3 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 실시예 4 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 전체 | 0 | 0 | ||||||||||||||
실험기간 동안 사망한 실험동물은 없었으며 체중은 증가하였고 자극에 대한 뚜렷한 반응은 나타나지 않았다. 본 발명의 혼합 추출물을 토끼에 실험한 후 도포된 피부는 엷은 갈색으로 염색되었으나 피부반응 실험에는 영향을 받지 않았다. 표 4를 통하여 확인할 수 있는 바와 같이, 처치구와 비처치구의 피부 모두 어떠한 자극도 관찰되지 않았으며, 홍반 (erythema), 부종 (edema), 가피 (eschar)도 나타나지 않았다. 상기 표 8의 결과에 따라 실시예 1 내지 4의 화장료 조성물은 피부에 어떠한 자극도 주지 않음을 확인할 수 있다.
<실험예 8> 안점막 자극실험 1
무게 1.75 내지 2.25 ㎏ 사이의 뉴질랜드 (New Zealand)계 웅성 토끼 4마리를 사용하여 실험하였다. 각 추출물을 50㎎/㎖ 농도로 증류수에 녹인 후, 각 실험동물은 처치구로 좌측안구의 결막낭에 0.1 ㎖을 점안하였으며 비처치 대조군으로 우측안구의 결막낭에 0.1 ㎖의 증류수를 점안하였다. 눈 독성에 대한 반응 실험은 시험물질 투여 1, 2, 3, 4, 7일 후 관찰하였으며, 그 결과를 하기 표 9에 나타내었다.
| 구분 |
조직 |
처치 후 경과일 (day) | ||||
| 1 | 2 | 3 | 4 | 7 | ||
| 제조예 1 |
각막 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 홍채 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | |
| 결막 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | |
| 제조예 2 |
각막 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 홍채 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | |
| 결막 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | |
| 제조예 3 |
각막 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 홍채 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | |
| 결막 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | |
| 제조예 4 |
각막 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 홍채 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | |
| 결막 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | |
| 비처치 대조군 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | |
| 전체 | 0 | |||||
토끼에 대한 안점막 자극시험 결과 모든 토끼는 정상으로 관찰되었다. 시료를 점안 후 7일간의 시험기간 동안 눈물흘림 (누루), 충혈, 부종 및 고름과 같은 병적인 변화는 나타나지 않았다. 상기 표 9의 결과에 따라 본 발명의 혼합추출물은 안점막에 대한 어떠한 자극도 없는 것으로 나타났다.
<실험예 9> 안점막 자극실험 2
무게 1.75 내지 2.25 ㎏ 사이의 뉴질랜드 (New Zealand)계 웅성 토끼 4마리를 사용하여 실험하였다. 실시예 1 내지 4의 화장료 조성물을 50㎎/㎖ 농도로 증류수에 녹인 후, 각 실험동물은 처치구로 좌측안구의 결막낭에 0.1 ㎖을 점안하였으며 비처치 대조군으로 우측안구의 결막낭에 0.1 ㎖의 증류수를 점안하였다. 눈 독성에 대한 반응 실험은 시험물질 투여 1, 2, 3, 4, 7일 후 관찰하였으며, 그 결과를 하기 표 10에 나타내었다.
| 구분 |
조직 |
처치 후 경과일 (day) | ||||
| 1 | 2 | 3 | 4 | 7 | ||
| 실시예 1 |
각막 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 홍채 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | |
| 결막 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | |
| 실시예 2 |
각막 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 홍채 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | |
| 결막 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | |
| 실시예 3 |
각막 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 홍채 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | |
| 결막 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | |
| 실시예 4 |
각막 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 홍채 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | |
| 결막 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | |
| 비처치 대조군 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | |
| 전체 | 0 | |||||
토끼에 대한 안점막 자극시험 결과 모든 토끼는 정상으로 관찰되었다. 시료를 점안 후 7일간의 시험기간 동안 눈물흘림 (누루), 충혈, 부종 및 고름과 같은 병적인 변화는 나타나지 않았다. 상기 표 9의 결과에 따라 본 발명의 화장료 조성물은 안점막에 대한 어떠한 자극도 없는 것으로 나타났다.
Claims (5)
- 흑난초 (Liparis nervosa (Thunb.) Lindl.), 섬꿩고사리 (Plagiogyria japonica Nakai), 버어먼초 (Burmannia cryptopetala Makino) 및 자주땅귀개 (Utricularia yakusimensis Masam.)의 혼합물로부터 추출된 혼합추출물을 함유하는 피부보습 및 피부미백 기능을 갖는 화장료 조성물.
- 청구항 1에 있어서,
상기 혼합물은 흑난초 (Liparis nervosa (Thunb.) Lindl.) 100 중량에 대하여 섬꿩고사리 (Plagiogyria japonica Nakai) 50 내지 150 중량, 버어먼초 (Burmannia cryptopetala Makino) 50 내지 150 중량 및 자주땅귀개 (Utricularia yakusimensis Masam.) 100 내지 150 중량을 혼합한 것인 피부보습 및 피부미백 기능을 갖는 화장료 조성물. - 청구항 1 또는 2에 있어서,
상기 혼합추출물은 상기 혼합물로부터 발효 추출법, 초고압 추출법 또는 발효 후 초고압 추출법을 이용하여 추출된 것인 피부보습 및 피부미백 기능을 갖는 화장료 조성물. - 청구항 1 또는 2에 있어서,
상기 혼합추출물은 화장료 총 중량에 대하여 0.001 내지 30 중량%로 함유된 것인 피부보습 및 피부미백 기능을 갖는 화장료 조성물. - 청구항 1 또는 2에 있어서,
상기 화장료 조성물은 크림, 유연화장수(스킨), 영양화장수(밀크로션), 팩의 제형을 갖는 것인 피부보습 및 피부미백 기능을 갖는 화장료 조성물.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020190067098A KR102010235B1 (ko) | 2019-06-07 | 2019-06-07 | 피부보습 및 피부미백 기능을 갖는 화장료 조성물 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020190067098A KR102010235B1 (ko) | 2019-06-07 | 2019-06-07 | 피부보습 및 피부미백 기능을 갖는 화장료 조성물 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR102010235B1 true KR102010235B1 (ko) | 2019-08-13 |
Family
ID=67624499
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020190067098A KR102010235B1 (ko) | 2019-06-07 | 2019-06-07 | 피부보습 및 피부미백 기능을 갖는 화장료 조성물 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| KR (1) | KR102010235B1 (ko) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20220095489A (ko) | 2020-12-30 | 2022-07-07 | 주식회사 헬리오스 | 광나무 추출물의 바이오리노베이션에 의한 미백 조성물 및 이의 제조 방법 |
| KR20220095488A (ko) | 2020-12-30 | 2022-07-07 | 주식회사 헬리오스 | 유채 추출물의 바이오리노베이션에 의한 미백 조성물 및 이의 제조 방법 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008520588A (ja) * | 2004-11-18 | 2008-06-19 | ビオファーマコペ デジン アンテルナショナル インク． | 植物抽出物およびその皮膚科使用法 |
| KR101522369B1 (ko) | 2014-08-28 | 2015-05-21 | 주식회사 웰코스 | 저백피 및 솔나물 추출물을 함유하는 항노화 및 미백용 화장료조성물 |
-
2019
- 2019-06-07 KR KR1020190067098A patent/KR102010235B1/ko active IP Right Grant
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008520588A (ja) * | 2004-11-18 | 2008-06-19 | ビオファーマコペ デジン アンテルナショナル インク． | 植物抽出物およびその皮膚科使用法 |
| KR101522369B1 (ko) | 2014-08-28 | 2015-05-21 | 주식회사 웰코스 | 저백피 및 솔나물 추출물을 함유하는 항노화 및 미백용 화장료조성물 |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20220095489A (ko) | 2020-12-30 | 2022-07-07 | 주식회사 헬리오스 | 광나무 추출물의 바이오리노베이션에 의한 미백 조성물 및 이의 제조 방법 |
| KR20220095488A (ko) | 2020-12-30 | 2022-07-07 | 주식회사 헬리오스 | 유채 추출물의 바이오리노베이션에 의한 미백 조성물 및 이의 제조 방법 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP2313082B1 (en) | Cosmetic composition for anti-aging of the skin comprising phaseolus radiatus seed extracts by fermentation and enzyme treatment | |
| KR101913235B1 (ko) | 애기참반디, 강아지풀, 하늘매발톱 및 홍지네고사리의 혼합추출물을 함유하는 화장료 조성물의 제조방법 | |
| KR20090056521A (ko) | 람부탄 및 리치 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부노화방지용 및 피부주름 개선용 화장료 조성물 | |
| KR20180048408A (ko) | 쉰다리 전통 발효 기술에 의해 피부 미백 효능이 증진된 삼백초를 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물 및 그 제조방법 | |
| KR102010235B1 (ko) | 피부보습 및 피부미백 기능을 갖는 화장료 조성물 | |
| KR101814498B1 (ko) | 유칼립투스 잎과 붉은토끼풀 잎의 혼합 추출물을 함유하는 화장료 조성물 | |
| KR102059008B1 (ko) | 피부미백 기능을 갖는 화장료 조성물 | |
| KR20130072706A (ko) | 탁시폴린 배당체를 함유하는 작약추출물의 제조방법 및 작약추출물을 함유하는 화장료 조성물 | |
| KR101960810B1 (ko) | 블랙커런트 열매와 아로니아 열매의 혼합 추출물을 함유하는 화장료 조성물 | |
| KR101855206B1 (ko) | 장뇌삼 발효액을 포함하는 화장료 조성물 | |
| KR101350292B1 (ko) | 천삼, 녹각영지, 백호은침으로 구성된 발효 추출물을 유효 성분으로 하는 화장료 조성물 및 이의 제조 방법 | |
| KR101970628B1 (ko) | 블랙베리 및 크랜베리 추출물을 포함하는 화장료 조성물 | |
| KR20080046830A (ko) | 바실러스 속 미생물을 이용하여 배양한 흑 마늘 발효액을함유하는 화장료 조성물 | |
| KR102247965B1 (ko) | 옥수수수염 발효액을 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물 | |
| KR20210060801A (ko) | 식물 복합 발효물을 유효성분으로 포함하는 항노화 화장료 조성물 | |
| KR102308756B1 (ko) | 귤껍질 및 칼메그의 혼합추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물 | |
| KR102098695B1 (ko) | 뽕나무뿌리와 모란뿌리의 혼합추출물을 함유하는 화장료 조성물 | |
| KR101803757B1 (ko) | 생약재 복합 발효 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물 | |
| KR102247966B1 (ko) | 녹두씨, 만주자작나무수액 및 소리쟁이뿌리의 혼합추출물을 함유하는 화장료 조성물 | |
| KR102064602B1 (ko) | 초록입 홍합 발효액을 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물 | |
| KR20110122448A (ko) | 지리터리풀 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물 | |
| KR101317433B1 (ko) | 지구자, 길경, 밀싹 및 세이지 추출물을 함유하는 미백 화장용 조성물 | |
| KR20160087507A (ko) | 녹두·강낭콩·흑콩 발효-효소 추출물을 포함하는 화장료 조성물 | |
| KR100946584B1 (ko) | 지실 추출물 및 블루로터스 추출물을 함유하는 수렴 및 피부 자극 완화용 화장료 조성물 | |
| KR20200073523A (ko) | 지치 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부주름 개선용 화장료 조성물 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| E701 | Decision to grant or registration of patent right | ||
| GRNT | Written decision to grant |