TWI648054B - 江氏龍鬚菜水萃取物的水解產物及其製備方法與用途 - Google Patents

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Abstract

本發明揭示一種江氏龍鬚菜水萃取物的水解產物暨其製備方法。本發明亦揭示該江氏龍鬚菜水萃取物的水解產物可被用於提升皮膚的保濕能力、促進傷口癒合以及抗氧化。

Description

江氏龍鬚菜水萃取物的水解產物及其製備方法與用途
本發明是有關於一種江氏龍鬚菜水萃取物的水解產物(hydrolysate of water extract ofGracilariopsis chiangii )暨其製備方法。本發明亦有關於使用該江氏龍鬚菜水萃取物的水解產物來提升皮膚的保濕能力、促進傷口癒合以及抗氧化。
皮膚是保護人類個體的最大屏障，它具有對抗水分散失、病原菌以及各種環境損害之功能。暴露於大量的紫外線(ultraviolet, UV)、游離輻射(ionizing radiation)、藥物或異生物質(xenobiotics)會促使皮膚生成活性氧族(reactive oxygen species, ROS)以及自由基(free radicals)。當所累積的活性氧族以及自由基的數量超過細胞或組織本身的抗氧化能力時，便會形成氧化性壓力(oxidative stress)。接著，活性氧族以及自由基會與細胞內的組成物(包括DNA、蛋白質以及脂質等)相反應，進而對皮膚產生非所欲的影響。已有報導指出，活性氧族以及自由基會造成傷口癒合的延遲(delay of wound healing)(Kim Y.J. and Yokozawa T. (2009),Biol. Pharm. Bull ., 32:1155-1159；Kurahashi T. and Fujii J. (2009),J. Dev. Biol ., 3:57-70)。
當皮膚受到損傷[諸如，燙傷(scald)、創傷(trauma)、外科手術(surgery)以及挫傷(contusion)等]而產生傷口(wound)時，在傷口處會產生發炎反應(inflammatory response)，大量的活性氧族以及自由基會被釋放，以協助免疫細胞對抗病原菌。然而，過多的活性氧族以及自由基會對傷口周圍的組織造成傷害。在傷口癒合(wound healing)的過程中，纖維母細胞(fibroblast)會聚集至傷口處來進行增生並且釋放生長因子(growth factor)，進而導致血管生成(angiogenesis)、上皮形成(epithelialization)以及膠原蛋白重塑(collagen remolding)等。然而，過多的活性氧族以及自由基不僅會抑制血管生成，並且會使涉及信號傳遞路徑(signaling pathway)的酵素失活，進而阻礙傷口癒合。
龍鬚菜是屬於紅藻植物門中的真紅藻亞綱(Florideophycidae )、杉藻目(Gigartinales )、龍鬚菜科(Gracilariaceae )、龍鬚菜屬(Gracilaria )，是一種高膳食纖維、高蛋白質、低脂肪且富含維生素和礦物質的海藻，生活在海水表層，生長適宜水溫0~25℃，光照時間要求較長，龍鬚菜乾品的瓊脂含量高達18%，是全球熱帶及溫帶沿海常見的經濟海藻。因為種類的差異，藻體的顏色略有不同，有棗紅色、深紅色、褐色、綠色與黑色等。
龍鬚菜含有豐富的不飽和脂肪酸、多醣類與類胡蘿蔔素，在抗氧化活性、提高免疫機能、降低血脂及抗癌方面有一定的效果，目前已有研究是有關於龍鬚菜萃取物在藥學領域上的應用。例如，在高雄海洋科技大學之論文「紅藻龍鬚菜蛋白萃取物抗自由基活性探討」，即有探討以「細基龍鬚菜(Gracilaria tenuistipitata )」萃取物添加鳳梨酶(bromelain)後，探討其抗自由基之功效。雖然已有上述的文獻報導，本領域的相關研究人員仍致力於找出具有更佳生物活性的龍鬚菜種類。在先前研究中，申請人發現在眾多龍鬚菜品種中，江氏龍鬚菜(Gracilariopsis chiangii )的水萃取物經鳳梨酵素水解處理後，所具有之抗氧化活性、抗自由基活性與協助傷口癒合等方面之效果都明顯優於已知龍鬚菜種類。因此，江氏龍鬚菜水萃取物的水解產物被預期可供作為一種護膚產品或醫藥品。
發明概要
於是，在第一個方面，本發明提供一種江氏龍鬚菜水萃取物的水解產物，它是藉由一包含下列步驟之方法而被製得： 以水來萃取江氏龍鬚菜而得到一水萃取物；以及 令該水萃取物進行一使用一鳳梨酶的水解處理，藉此而得到該江氏龍鬚菜水萃取物的水解產物。
在第二個方面，本發明提供一種用以製備一江氏龍鬚菜水萃取物的水解產物的方法，其包含下列步驟： 以水來萃取江氏龍鬚菜而得到一水萃取物；以及 令該水萃取物進行一使用一鳳梨酶的水解處理，藉此而得到該江氏龍鬚菜水萃取物的水解產物。
在第三個方面，本發明提供一種組成物，其包含有一如上所述的江氏龍鬚菜水萃取物的水解產物。
在第四個方面，本發明提供一如上所述的江氏龍鬚菜水萃取物的水解產物供應用於製備一用來提升皮膚的保濕能力之醫藥品或化妝品的用途。
在第五個方面，本發明提供一種用於提升皮膚的保濕能力的方法，其包括對一需要提升皮膚的保濕能力的個體投予一如上所述的江氏龍鬚菜水萃取物的水解產物。
在第六個方面，本發明提供一如上所述的江氏龍鬚菜水萃取物的水解產物供應用於製備一用來促進傷口癒合之醫藥品或化妝品的用途。
在第七個方面，本發明提供一種用於促進傷口癒合的方法，其包括對一具有一傷口的個體投予一如上所述的江氏龍鬚菜水萃取物的水解產物。
在第八個方面，本發明提供一如上所述的江氏龍鬚菜水萃取物的水解產物供應用於製備一用來抗氧化之醫藥品或化妝品的用途。
在第九個方面，本發明提供一種用於抗氧化的方法，其包括對一具有氧化性壓力的個體投予一如上所述的江氏龍鬚菜水萃取物的水解產物。
本發明的上述以及其它目的、特徵與優點，在參照以下的詳細說明與較佳實施例和隨文檢附的圖式後，將變得明顯。
發明的詳細說明
為了這本說明書之目的，將被清楚地瞭解的是：文字“包含有(comprising)”意指“包含但不限於”，以及文字“包括(comprises)”具有一對應的意義。
要被瞭解的是：若有任何一件前案刊物在此被引述，該前案刊物不構成一個下述承認：在台灣或任何其他國家之中，該前案刊物形成本技藝中的常見一般知識之一部分。
除非另外有所定義，在本文中所使用的所有技術性與科學術語具有熟悉本發明所屬技藝的人士所共同瞭解的意義。一熟悉本技藝者會認知到許多與那些被描述於本文中者相似或等效的方法和材料，它們可被用於實施本發明。當然，本發明決不受到所描述的方法和材料之限制。
為了從植物中獲得具有護膚效用的天然活性組分(natural active components)，申請人嘗試以各種不同的方法來對江氏龍鬚菜進行處理，並且進一步將所得到的產物拿來進行活體外試驗(in vitro test)與人體試驗而發現到：當使用鳳梨酶(bromelain)來對江氏龍鬚菜的水萃取物(water extract ofGracilariopsis chiangii )進行水解處理，其在提升皮膚的保濕能力以及促進傷口癒合上的效用會被顯著地提升。
因此，本發明提供一種江氏龍鬚菜水萃取物的水解產物，它是藉由一包含下列步驟之方法而被製得： 以水來萃取江氏龍鬚菜而得到一水萃取物；以及 令該水萃取物進行一使用一鳳梨酶的水解處理，藉此而得到該江氏龍鬚菜水萃取物的水解產物。
本發明亦提供一種用以製備一江氏龍鬚菜水萃取物的水解產物的方法，其包含下列步驟： 以水來萃取江氏龍鬚菜而得到一水萃取物；以及 令該水萃取物進行一使用一鳳梨酶的水解處理，藉此而得到該江氏龍鬚菜水萃取物的水解產物。
依據本發明，術語“江氏龍鬚菜(Gracilariopsis chiangii )”意指包含有江氏龍鬚菜的可食用的部分。
依據本發明，該江氏龍鬚菜可具有不同的成熟度(fruit maturity)。
依據本發明，水萃取的方法可以採用熟習此項技藝者所詳知且慣用的技術來進行。在此方面，可以參照，例如，嘉南藥理科技大學化粧品科技研究所的陳宜貞所著碩士論文[名稱：“蓮霧花萃取液於抗氧化之應用(Application of extracts from wax apple flowers on antioxidation)”]。
可瞭解到的是，有關萃取方法的操作條件會進一步隨著所使用的江氏龍鬚菜的處理方式以及水與江氏龍鬚菜的用量比例等因素而被變動，以便達致最佳的萃取效果。而這些操作條件的選擇是熟習此項技藝者能例行性地自行決定的。
依據本發明，該江氏龍鬚菜的水萃取可以使用新鮮的江氏龍鬚菜來進行，或者可使用預先經過一選自於由下列所構成之群組中的加工處理的江氏龍鬚菜來進行：乾燥處理、研磨處理、切碎處理、粉碎處理，以及它們的組合。
依據本發明，該江氏龍鬚菜與水的重量比是介於1：0.5至1：5之間。在本發明的一個較佳具體例中，該江氏龍鬚菜與水的重量比是1：1.25。
依據本發明，該江氏龍鬚菜的水萃取是在一範圍落在35℃至65℃內的溫度下被進行。在本發明的一個較佳具體例中，該水萃取是在50℃下被進行。
依據本發明，使用鳳梨酶的水解處理可以採用熟習此項技藝者所詳知且慣用的技術來進行。
可瞭解到的是，有關水解處理的操作條件會進一步隨著該水萃取物與鳳梨酶的用量比例等因素而被變動，以便達致最佳的萃取效果。而這些操作條件的選擇是熟習此項技藝者能例行性地自行決定的。
依據本發明，該水萃取物與該鳳梨酶的重量比是介於250：1至600：1之間。在本發明的一個較佳具體例中，該水萃取物與該鳳梨酶的重量比是450：1。
依據本發明，該水解處理是在一範圍落在30℃至60℃內的溫度下作用歷時3至6小時而被進行。在本發明的一個較佳具體例中，該水解處理是在45℃溫度下作用歷時4小時而被進行。
依據本發明，該水萃取物在進行水解處理後可進一步進行一固液分離處理，俾以移除固體部分。該固液分離處理可以採用熟習此項技藝者所詳知且慣用的技術來進行，這包括，但不限於：過濾(filtration)、離心(centrifugation)以及傾析(decantation)。在本發明的一個較佳具體例中，該固液分離處理是過濾。
依據本發明的江氏龍鬚菜水萃取物的水解產物經由人體試驗而被證實能夠有效地提升皮膚的角質層(stratum corneum)的含水量(water content)。據此，依據本發明的江氏龍鬚菜水萃取物的水解產物被預期具有提升皮膚的保濕能力的效用，因而可供應用於製備一用來提升皮膚的保濕能力之醫藥品的用途。
依據本發明，該醫藥品可利用熟習此技藝者所詳知的技術而被製造成一適合於口服地(orally)或局部地(topically)投藥的劑型，這包括，但不限於：無菌的粉末(sterile powder)、錠劑(tablet)、片劑(troche)、丸劑(pill)、膠囊(capsule)、外部製劑(external preparation)以及類似之物。
依據本發明，該醫藥品可進一步包含有一被廣泛地使用於藥物製造技術之藥學上可接受的載劑(pharmaceutically acceptable carrier)。例如，該藥學上可接受的載劑可包含一或多種選自於下列的試劑：溶劑(solvent)、緩衝液(buffer)、乳化劑(emulsifier)、懸浮劑(suspending agent)、分解劑(decomposer)、崩解劑(disintegrating agent)、分散劑(dispersing agent)、黏結劑(binding agent)、賦形劑(excipient)、安定劑(stabilizing agent)、螯合劑(chelating agent)、稀釋劑(diluent)、膠凝劑(gelling agent)、防腐劑(preservative)、潤濕劑(wetting agent)、潤滑劑(lubricant)、吸收延遲劑(absorption delaying agent)、脂質體(liposome)以及類似之物。有關這些試劑的選用與數量是落在熟習此項技術之人士的專業素養與例行技術範疇內。
依據本發明，該醫藥品可利用熟習此技藝者所詳知的技術而被製造成一適合於口服投藥(oral administration)的劑型(dosage form)，這包括，但不限於：無菌的粉末、錠劑(tablet)、片劑(troche)、口含錠(lozenge)、丸劑(pellet)、膠囊(capsule)、分散性粉末(dispersible powder)或細顆粒(granule)、溶液、懸浮液(suspension)、乳劑(emulsion)、糖漿(syrup)、酏劑(elixir)、濃漿(slurry)以及類似之物。
依據本發明，該醫藥品亦可利用熟習此技藝者所詳知的技術而被製造成一適合於局部地施用於皮膚上的外部製劑(external preparation)，這包括，但不限於：乳劑(emulsion)、凝膠(gel)、軟膏(ointment)、乳霜(cream)、貼片(patch)、擦劑(liniment)、粉末(powder)、氣溶膠(aerosol)、噴霧(spray)、乳液(lotion)、乳漿(serum)、糊劑(paste)、泡沫(foam)、滴劑(drop)、懸浮液(suspension)、油膏(salve)以及繃帶(bandage)。
依據本發明，該外部製劑是藉由將該醫藥品與一為熟習此項技藝者所詳知的基底(base)相混合而被製備。
依據本發明，該基底可包含有一或多種選自於下列的添加劑(additives)：水、醇(alcohols)、甘醇(glycol)、碳氫化合物(hydrocarbons)[諸如石油膠(petroleum jelly)以及白凡士林(white petrolatum)]、蠟(wax)[諸如石蠟(paraffin)以及黃蠟(yellow wax)]、保存劑(preserving agents)、抗氧化劑(antioxidants)、界面活性劑(surfactants)、吸收增強劑(absorption enhancers)、安定劑(stabilizing agents)、膠凝劑(gelling agents)[諸如卡波普® 974P (carbopol® 974P)、微結晶纖維素(microcrystalline cellulose)以及羧基甲基纖維素(carboxymethylcellulose)]、活性劑(active agents)、保濕劑(humectants)、氣味吸收劑(odor absorbers)、香料(fragrances)、pH調整劑(pH adjusting agents)、螯合劑(chelating agents)、乳化劑(emulsifiers)、閉塞劑(occlusive agents)、軟化劑(emollients)、增稠劑(thickeners)、助溶劑(solubilizing agents)、滲透增強劑(penetration enhancers)、抗刺激劑(anti-irritants)、著色劑(colorants)以及推進劑(propellants)等。有關這些添加劑的選用與數量是落在熟習此項技術之人士的專業素養與例行技術範疇內。
本發明亦提供一種用於提升皮膚的保濕能力的方法，其包括對一需要提升皮膚的保濕能力的個體投予本發明的江氏龍鬚菜水萃取物的水解產物。較佳地，該方法包括對該個體的皮膚施用一有效量的該江氏龍鬚菜水萃取物的水解產物，並且歷時一足夠的時間直到皮膚的保濕能力被顯著地提升。
如本文中所用的，術語“投予(administering)”與“投藥”以及“施用(application)”可被交換地使用。
如此處所用的，術語“有效量(effective amount)”意指當本發明的江氏龍鬚菜水萃取物的水解產物被投予一需要提升皮膚的保濕能力的個體時，一足以提供所欲達致之保濕功效並且不會對皮膚產生非所欲的不利副作用的安全用量。
如此處所用的，術語“有效量”與“有效劑量(effective dose)”、“保濕有效量(moisture-retaining effective amount)”以及“保濕有效劑量(moisture-retaining effective dose)”可被交換地使用。
依據本發明，該江氏龍鬚菜水萃取物的水解產物的有效量與施用頻率(frequency of application)會視下列因素而變化：要被提升保濕能力的皮膚區域之初始病況(initial condition)以及所欲達致之最終的保濕效果。一般而言，當依據本發明的江氏龍鬚菜水萃取物的水解產物被局部地施用於皮膚上時，每次施用的有效量通常是1至10 mg/平方公分的皮膚面積，每天大約1至3次。而當依據本發明的江氏龍鬚菜水萃取物的水解產物是被口服地投藥時，每次投藥的有效量通常是0.05至5 mg/Kg體重，每天大約1至3次。
另外，依據本發明的該江氏龍鬚菜水萃取物的水解產物經由活體外試驗而被證實可以有效地促進纖維母細胞-媒介的傷口閉合(fibroblast-mediated wound closure)。據此，依據本發明的該江氏龍鬚菜水萃取物的水解產物被預期具有促進傷口癒合的效用，因而可供應用於製備一用來促進傷口癒合之醫藥品的用途。
依據本發明，該醫藥品的投藥途徑、劑型以及可供使用之藥學上可接受的載劑是如上面所述者。
本發明亦提供一種用於促進傷口癒合的方法，其包括對一具有一傷口的個體投予本發明的江氏龍鬚菜水萃取物的水解產物。較佳地，該方法包括對該個體的傷口施用一有效量的該江氏龍鬚菜水萃取物的水解產物，並且歷時一足夠的時間直到傷口區域的面積被顯著地減少。
如此處所用的，術語“有效量(effective amount)”意指當本發明的江氏龍鬚菜水萃取物的水解產物被投予一具有一傷口的個體時，一足以提供所欲達致之促進傷口癒合的功效並且不會對傷口產生非所欲的不利副作用的安全用量。
如此處所用的，術語“有效量”與“有效劑量(effective dose)”、“傷口癒合有效量(wound healing effective amount)”以及“傷口癒合有效劑量(wound healing effective dose)”可被交換地使用。
依據本發明，該江氏龍鬚菜水萃取物的水解產物的有效量與施用頻率會視下列因素而變化：傷口區域之初始病況以及所欲達致之最終的傷口癒合效果。一般而言，當依據本發明的江氏龍鬚菜水萃取物的水解產物被局部地施用於皮膚上時，每次施用的有效量通常是1至10 mg/平方公分的皮膚面積，每天大約1至3次。而當依據本發明的江氏龍鬚菜水萃取物的水解產物是被口服地投藥時，每次投藥的有效量通常是0.05至5 mg/Kg體重，每天大約1至3次。
另外，依據本發明的江氏龍鬚菜水萃取物的水解產物經由活體外試驗而被證實具有優越的DPPH自由基清除能力與還原力。據此，依據本發明的該江氏龍鬚菜水萃取物的水解產物被預期具有抗氧化的效用，因而可供應用於製備一用來抗氧化之醫藥品的用途。
依據本發明，該醫藥品的投藥途徑、劑型以及可供使用之藥學上可接受的載劑是如上面所述者。
本發明亦提供一種用於抗氧化的方法，其包括對一具有氧化性壓力的個體投予本發明的江氏龍鬚菜水萃取物的水解產物。較佳地，該方法包括對該個體施用一有效量的該江氏龍鬚菜水萃取物的水解產物，並且歷時一足夠的時間直到氧化性壓力被顯著地改善。
如此處所用的，術語“有效量(effective amount)”意指當本發明的江氏龍鬚菜水萃取物的水解產物被投予一需要抗氧化的個體時，一足以提供所欲達致之抗氧化的功效並且不會產生非所欲的不利副作用的安全用量。
如此處所用的，術語“有效量”與“有效劑量(effective dose)”、“抗氧化有效量(antioxidant effective amount)”以及“抗氧化有效劑量(antioxidant effective dose)”可被交換地使用。
依據本發明，該江氏龍鬚菜水萃取物的水解產物的有效量與施用頻率會視下列因素而變化：氧化性壓力之初始病況以及所欲達致之最終的抗氧化效果。一般而言，當依據本發明的江氏龍鬚菜水萃取物的水解產物被局部地施用於皮膚上時，每次施用的有效量通常是1至10 mg/平方公分的皮膚面積，每天大約1至3次。而當依據本發明的江氏龍鬚菜水萃取物的水解產物是被口服地投藥時，每次投藥的有效量通常是0.05至5 mg/Kg體重，每天大約1至3次。
基於依據本發明的江氏龍鬚菜水萃取物的水解產物的抗氧化效用，依據本發明的江氏龍鬚菜水萃取物的水解產物被預期具有預防和/或延緩皮膚老化的效用，因而可供應用於製備一用來抗皮膚老化之醫藥品的用途。
如本文中所用的，術語“延緩(retarding)”意指治療(treating)、減少(reducing)、減輕(alleviating)、改善(ameliorating)、緩解(relieving)或控制(controlling)一疾病(disease)或障礙(disorder)的一或多個臨床徵兆(clinical sign)，以及降低(lowering)、停止(stopping)或逆轉(reversing)一正在被治療中的病況(condition)或症狀(symptom)之嚴重性的進展(progression of severity)。
如本文中所用的，術語“皮膚老化(skin aging)”意欲涵蓋自然發生的內在皮膚老化(intrinsic skin aging)，以及由環境因素(特別是紫外線的照射)所引起的外在皮膚老化(extrinsic skin aging)。皮膚老化的症狀包括，但不限於：毛細血管擴張(telangiectasia)、表皮變薄、皮膚萎縮(skin atrophy)、膠原纖維(collagen fiber)與彈性纖維(elastic fiber)的減少、彈性組織變性(elastosis)、皮膚彈性(skin elasticity)變差、皮膚質地(skin texture)變粗糙、乾燥(dryness)、皺紋產生(wrinkle formation)以及色素改變(pigmentary change)[例如，雀斑(lentigines)、斑點(freckles)、色素過少(hypopigmentation)或色素過多(hyperpigmentation)]等。
依據本發明，該醫藥品的投藥途徑、劑型以及可供使用之藥學上可接受的載劑是如上面所述者。
本發明亦提供一種用於抗皮膚老化的方法，其包括對一需要預防和/或延緩皮膚老化的個體投予以本發明的江氏龍鬚菜水萃取物的水解產物。較佳地，該方法包括對該個體的皮膚施用一有效量的該江氏龍鬚菜水萃取物的水解產物，並且歷時一足夠的時間直到皮膚老化的症狀被顯著地改善。
如此處所用的，術語“有效量(effective amount)”意指當本發明的江氏龍鬚菜水萃取物的水解產物被投予一需要預防和/或延緩皮膚老化的個體時，一足以提供所欲達致之抗皮膚老化的功效並且不會對皮膚產生非所欲的不利副作用的安全用量。
如此處所用的，術語“有效量”與“有效劑量(effective dose)”、“抗老化有效量(anti-aging effective amount)”以及“抗老化有效劑量(anti-aging effective dose)”可被交換地使用。
依據本發明，該江氏龍鬚菜水萃取物的水解產物的有效量與施用頻率會視下列因素而變化：想要預防和/或延緩老化的皮膚區域之初始病況以及所欲達致之最終的抗皮膚老化效果。一般而言，當依據本發明的江氏龍鬚菜水萃取物的水解產物被局部地施用於皮膚上時，每次施用的有效量通常是1至10 mg/平方公分的皮膚面積，每天大約1至3次。而當依據本發明的江氏龍鬚菜水萃取物的水解產物是被口服地投藥時，每次投藥的有效量通常是0.05至5 mg/Kg體重，每天大約1至3次。
特別地，依據本發明的江氏龍鬚菜水萃取物的水解產物亦被預期可供應用於製備一用來提升皮膚的保濕能力、預防和/或延緩皮膚老化、促進傷口癒合以及抗氧化之化妝品的用途。
依據本發明，該化妝品可進一步包含有一被廣泛地使用於化妝品製造技術之化妝品上可接受的佐劑(cosmetically acceptable adjuvant)。例如，該化妝品上可接受的佐劑可包含有一或多種選自於下列的試劑：溶劑(solvent)、膠凝劑、活性劑、防腐劑(preservative)、抗氧化劑、遮蔽劑(screening agent)、螯合劑、介面活性劑、染色試劑(coloring agent)、增稠劑(thickening agent)、填料(filler)、香料以及氣味吸收劑。有關這些試劑的選用與數量是落在熟習此項技術之人士的專業素養與例行技術範疇內。
依據本發明，該化妝品可利用熟習此技藝者所詳知的技術而被製造成一適合於護膚(skincare)或化妝(makeup)的形式，這包括，但不限於：水性溶液(aqueous solution)、水-醇溶液(aqueous-alcohol solution)或油性溶液(oily solution)、呈水包油型(oil-in-water type)、油包水型(water-in-oil type)或複合型之乳劑、凝膠、軟膏、乳霜、面膜(mask)、貼片、貼布(pack)、擦劑、粉末、氣溶膠、噴霧、乳液、乳漿、糊劑、泡沫、分散液、滴劑、慕斯(mousse)、防曬油(sunblock)、化妝水(tonic water)、粉底(foundation)、眼影(eyeshadow)、卸妝產品(makeup remover products)、肥皂(soap)以及其他身體清潔產品(body cleansing products)等。
在本發明的一個較佳具體例中，該化妝品被製造成一水-醇溶液。
依據本發明，該化妝品亦可與一或多種選自於下列之已知活性的外用劑(external use agents)一起合併使用：美白劑(whitening agents)[諸如維生素A酸(tretinoin)、兒茶素(catechin)、麴酸、熊果苷以及維生素C]、保濕劑、抗發炎劑(anti-inflammatory agents)、殺菌劑(bactericides)、紫外線吸收劑(ultraviolet absorbers)、植物萃取物(plant extracts)[諸如蘆薈萃取物(aloe extract)]、皮膚營養劑(skin nutrients)、麻醉劑(anesthetics)、抗痘劑(anti-acne agent)、止癢劑(antipruritic)、止痛劑(analgesic)、抗皮膚炎劑(antidermatitis agents)、抗過角化劑(antihyperkeratolytic agents)、抗乾皮膚劑(anti-dry skin agents)、抗汗劑(antipsoriatic agents)、抗老化劑(antiaging agents)、抗皺劑(antiwrinkle agents)、抗皮脂溢出劑(antiseborrheic agents)、傷口治療劑(wound-healing agents)、皮質類固醇(corticosteroids)以及激素(hormones)。有關這些外用劑的選用與數量是落在熟習此項技術之人士的專業素養與例行技術範疇內。
本發明亦提供一種組成物，其包含有一如上所述的江氏龍鬚菜水萃取物的水解產物。
依據本發明，該組成物的投藥途徑與劑型或施用形式以及可供使用之載劑或佐劑是如上面所述者。
較佳實施例之詳細說明
本發明將就下面的實施例來做進一步說明，但應瞭解的是，該等實施例僅是供例示說明用，而不應被解釋為本發明的實施上的限制。實施例 實施例 1. 製備江氏龍鬚菜水萃取物 (water extract of Gracilariopsis chiangii ) 的鳳梨酶水解產物 (bromelain hydrolysate)
首先，將採集自屏東縣大鵬灣的江氏龍鬚菜(Gracilariopsis chiangii )(3-9 g)粉碎，繼而將江氏龍鬚菜粉末與水以一為1：1.25的重量比進行混合並於50℃下加熱歷時1小時，藉此而得到江氏龍鬚菜水萃取物。接著，將該江氏龍鬚菜水萃取物與1600 U/mL的鳳梨酶(bromelain)(購自於青旺生技，貨號為1600GD)以一為450：1的重量比進行混合，繼而置於45℃下進行酵素水解反應歷時4小時。之後，將所得到的反應混合物依序以孔徑為5、1以及0.5 μm的過濾器(購自於德璽實業，型號分別為PureMax、SCB2000-001以及SP2000-00A)來進行過濾，藉此而得到一江氏龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物。之後，將該江氏龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物拿來進行冷凍乾燥，而得到一凍乾粉末(lyophilized powder)備用。
另外，為供下面的比較實驗之用，該江氏龍鬚菜水萃取物亦被拿來進行如上所述的過濾，藉此而得到一江氏龍鬚菜水萃取物。之後，將該江氏龍鬚菜水萃取物拿來進行冷凍乾燥，而得到一凍乾粉末備用。
再者，參照上面針對江氏龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物所描述的步驟來製備一種江氏龍鬚菜的鳳梨酶水解產物，不同之處在於：江氏龍鬚菜粉末溶於水之後沒有被拿來進行加熱歷時1小時，而是直接以鳳梨酶來進行酵素水解反應。實施例 2. 江氏龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物的高效能液相層析 (high performance liquid chromatography, HPLC) 分析
為瞭解本發明的江氏龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物的主要成分分佈，依據上面實施例1所得到的江氏龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物被溶於二次水中以配製成一具有一濃度為1 mg/mL的待測樣品，繼而將之拿來進行高效能液相層析(HPLC)分析。
本實驗所使用的HPLC分析儀器如下：高效能液相層析系統(廠牌為惠普，型號為SERIES 1100)，以及Build in偵測器(廠牌為惠普，型號為SERIES 1100)，而有關HPLC分析的各項操作參數與條件被顯示於下面的表1中。 表1. HPLC分析的操作參數與條件
圖1顯示將依據上面實施例1所製得的江氏龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物拿來進行HPLC分析所得到的洗提圖形(elution profile)。從圖1可見，本發明的江氏龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物在第0至35分鐘的滯留期間出現有3個主要的洗提波峰(分別被標示為波峰a、b以及c)。實施例 3. 江氏龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物在抗氧化效力 (antioxidation efficacy) 上的效用評估
在本實施例中，為了瞭解本發明的江氏龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物是否具有抗氧化效力，申請人將之拿來進行α,α-二苯-β-苦味基肼基(α,α-diphenyl-β-picryhydrazyl, DPPH)自由基清除能力以及還原力(reducing power)的分析。另外，為供比較，申請人參照上面實施例1的步驟來製備一種細基龍鬚菜水萃取物(water extract ofGracilaria tenuistipitata )的鳳梨酶水解產物(bromelain hydrolysate)。 實驗材料： 1. 細基龍鬚菜 水萃取物 (water extract ofGracilaria tenuistipitata ) 的鳳梨酶水解產物 (bromelain hydrolysate) 的製備：
有關細基龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物的製備大體上是參照上面實施例1當中所述的步驟來進行，不同之處在於：以採自雲林縣口湖鄉的細基龍鬚菜來代替江氏龍鬚菜。 實驗方法： A. 江氏龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物與細基龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物的 DPPH 自由基清除能力：
DPPH自由基清除能力分析是依據Yamaguchiet al. (1998)當中所述的方法來進行。簡言之，將適量之在上面實施例1中所得到之經冷凍乾燥處理的江氏龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物加入至二次水中，而得到具有一江氏龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物濃度分別為100 μg/mL、300 μg/mL、500 μg/mL、700 μg/mL以及900 μg/mL的待測樣品(亦即江氏龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物組)。接著，各個待測樣品分別加入1 mL之含有0.1 mM DPPH的乙醇溶液。另外，對照組是以1 mL的90%乙醇來取代待測樣品。在充分混合之後，將所形成的混合物置於室溫下進行避光作用歷時1小時，接而於517 nm的波長下以一分光光度計來量測吸光值(OD517 )。若所測得的吸光值(OD517 )越低，代表清除DPPH自由基的能力越佳。
有關細基龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物的DPPH自由基清除能力大體上是參照上面針對江氏龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物所描述的操作程序來進行分析，不同之處在於：以依據上面“實驗材料”的第1項所得到之經冷凍乾燥處理的細基龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物來代替江氏龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物。
DPPH自由基清除率(radical scavenging rate)(%)是藉由將所測得的吸光值(OD517 )代入下列公式(I)而被計算出：A ＝ [1 － (B/C)] × 100 (I) 其中：A＝DPPH自由基清除率(%) B＝各組所測得的OD517 吸光值 C＝對照組所測得的OD517 吸光值
所得到的實驗數據是以平均值±標準偏差(Standard Deviation, S.D.)來表示。所有的數據是藉由史徒登氏t- 試驗(Student’s t-test)來作分析，俾以評估各組之間的差異性。若所得到的統計分析結果是p ＜0.05，表示有統計學顯著性(statistical significance)。B. 江氏龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物與江氏龍鬚菜水萃取物的 DPPH 自由基清除能力：
本實驗大體上是參照上面第A項「江氏龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物與細基龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物的DPPH自由基清除能力」中所述的方法來進行，不同之處在於：以依據上面實施例1中所得到之經冷凍乾燥處理的江氏龍鬚菜水萃取物來代替細基龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物，各個待測樣品的濃度為100 μg/mL、300 μg/mL以及500 μg/mL。C. 江氏龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物與江氏龍鬚菜的鳳梨酶水解產物的 DPPH 自由基清除能力：
將適量之在上面實施例1中所得到之未經冷凍乾燥處理的江氏龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物加入至乙醇中，而得到具有一江氏龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物濃度為25 μL/mL的待測樣品(亦即江氏龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物組)。接著，該待測樣品加入0.8 mL之含有0.24 mM DPPH的乙醇溶液。另外，對照組是以1 mL的90%乙醇來取代待測樣品。在充分混合之後，將所形成的混合物置於室溫下進行避光作用歷時1小時，接而於517 nm的波長下以一分光光度計來量測吸光值(OD517 )。
有關江氏龍鬚菜的鳳梨酶水解產物的DPPH自由基清除能力大體上是參照上面針對江氏龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物所描述的操作程序來進行分析，不同之處在於：以依據上面實施例1中所得到之未經冷凍乾燥處理的江氏龍鬚菜的鳳梨酶水解產物來代替江氏龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物。
而有關DPPH自由基清除率的計算是參照上面公式(I)來進行。D. 江氏龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物與細基龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物的還原力：
首先，將適量之在上面實施例1中所得到之經冷凍乾燥處理的江氏龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物加入至二次水中，而得到具有一江氏龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物濃度分別為100 μg/mL、300 μg/mL、500 μg/mL以及700 μg/mL的待測樣品(亦即江氏龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物組)。另外，對照組是以0.5 mL的100%乙醇來取代待測樣品。接著，各個待測樣品分別加入0.5 mL的0.2 M磷酸緩衝溶液(pH 6.6)以及0.5 mL的1%赤血鹽並予以混合均勻，繼而置於50℃下歷時20分鐘。之後，予以加入0.5 mL的10%三氯醋酸(trichloroacetic acid)溶液並混合均勻，繼而以3000 rpm予以離心歷時10分鐘。收取上清液，然後予以加入1 mL蒸餾水以及0.2 mL的0.1%氯化鐵(ferric chloride)溶液並混合均勻，繼而置於室溫下進行避光作用歷時10分鐘，然後於700 nm的波長下以一分光光度計來量測吸光值(OD700 )。若所測得的吸光值(OD700 )越高，代表還原力越強。另外，以1 mg/mL的二丁基羥基甲苯(dibutyl hydroxytoluene, BHT)來作為標準品。
有關細基龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物的還原力大體上是參照上面針對江氏龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物所描述的操作程序來進行分析，不同之處在於：以依據上面“實驗材料”的第1項所得到之經冷凍乾燥處理的細基龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物來代替江氏龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物。
還原力(reducing power)(%)是藉由將所測得的吸光值(OD700 )代入下列公式(II)而被計算出：D ＝ (E/F) × 100 (I I ) 其中：D＝還原力(%) E＝各組所測得的OD700 吸光值 F＝標準品所測得的OD700 吸光值
所得到的實驗數據是以平均值±標準偏差來表示。所有的數據是藉由史徒登氏t- 試驗來作分析，俾以評估各組之間的差異性。若所得到的統計分析結果是p ＜0.05，表示有統計學顯著性。E. 江氏龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物與江氏龍鬚菜水萃取物的還原力：
本實驗大體上是參照上面第D項「江氏龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物與細基龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物的還原力」中所述的方法來進行，不同之處在於：以依據上面實施例1中所得到之經冷凍乾燥處理的江氏龍鬚菜水萃取物來代替細基龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物。F. 江氏龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物與江氏龍鬚菜的鳳梨酶水解產物的還原力：
本實驗大體上是參照上面第D項「江氏龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物與細基龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物的還原力」中所述的方法來進行，不同之處在於：以依據上面實施例1中所得到之經冷凍乾燥處理的江氏龍鬚菜的鳳梨酶水解產物來代替細基龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物，待測樣品的濃度為1000 mg/mL，並且以5 mg/mL的丁基羥基甲氧苯(butylated hydroxyanisole, BHA)來代替二丁基羥基甲苯(BHT)。 結果： A. DPPH 自由基清除能力分析：
圖2顯示本發明的江氏龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物與細基龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物的DPPH自由基清除率。由圖2可見，江氏龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物的DPPH自由基清除率是明顯地高於細基龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物所具者。
圖3顯示本發明的江氏龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物與江氏龍鬚菜水萃取物的DPPH自由基清除率。由圖3可見，江氏龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物的DPPH自由基清除率是明顯地高於江氏龍鬚菜水萃取物所具者。
圖4顯示本發明的江氏龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物與江氏龍鬚菜的鳳梨酶水解產物的DPPH自由基清除率。由圖4可見，江氏龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物的DPPH自由基清除率是高於江氏龍鬚菜的鳳梨酶水解產物所具者。
這些實驗結果顯示：依據本發明的江氏龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物具有一優越的DPPH自由基清除能力，進而可達到抗氧化的效用。B. 還原力分析：
圖5顯示本發明的江氏龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物與細基龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物的還原力。由圖5可見，江氏龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物的還原力是明顯地高於細基龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物所具者。
圖6顯示本發明的江氏龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物與江氏龍鬚菜水萃取物的還原力。由圖6可見，江氏龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物的還原力是明顯地高於江氏龍鬚菜水萃取物所具者。
圖7顯示本發明的江氏龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物與江氏龍鬚菜的鳳梨酶水解產物的還原力。由圖7可見，江氏龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物的還原力是高於江氏龍鬚菜的鳳梨酶水解產物所具者。
這些實驗結果顯示：依據本發明的江氏龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物具有一優越的還原力，進而可達到抗氧化的效用。實施例 4. 江氏龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物在促進傷口癒合 (wound healing) 上的效用評估
在本實施例中，申請人利用傷口癒合的細胞移動分析(wound-healing cell migration assay)來評估本發明的江氏龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物在促進傷口癒合上的效用。此外，為供比對，在上面實施例1中所得到的江氏龍鬚菜水萃取物以及在上面實施例3中所得到的細基龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物被拿來進行相同的實驗。 實驗材料： 1. 人類皮膚纖維母細胞細胞株 (human skin fibroblast cell line) Detroit 551 的來源與培養：
在本實施例中所使用的人類皮膚纖維母細胞細胞株Detroit 551是購自於台灣的食品工業發展研究所(Food Industry Research and Development Institute, FIRDI)的生物資源保存及研究中心(Biosource Collection and Research Center, BCRC)。
Detroit 551細胞被培養於含有最低基本培養基(minimum essential medium, MEM)(Sigma, M2279)[添加有10%胎牛血清(fetal bovine serum, FBS)、10%盤尼西林-鏈黴素(penicillin-streptomycin)(Sigma, 15140122)]的培養皿(petri dish)中，接著在培養條件被設定為37℃與5% CO2 的培養箱中進行培養。之後，大約每隔2天更換新鮮的培養基。當細胞密度達到約80~90%匯聚(confluence)時，移除培養基並以磷酸鹽緩衝生理鹽水(phosphate buffered saline, PBS)來洗滌細胞共計2次，接著加入胰蛋白酶-EDTA (trypsin-EDTA)以使細胞自培養皿的底部脫離。之後，加入新鮮的培養基來中和胰蛋白酶的活性並以量吸管(pipette)反覆地吸沖培養基以充分打散細胞，然後將所形成的細胞懸浮液分配到新的培養皿中，並在培養條件被設定為37℃與5% CO2 的培養箱中進行培養。 實驗方法：
首先，將依據上面“實驗材料”的第1項「人類皮膚纖維母細胞細胞株Detroit 551的來源與培養」來進行繼代培養的Detroit 551細胞分成4組，其中包括1個江氏龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物組、1個細基龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物組、1個江氏龍鬚菜水萃取物組以及1個對照組。將各組細胞分別以一為2×105 細胞/井的數量培養於含有500 µL的MEM (添加有10%胎牛血清)的24-井培養盤中，並在培養箱(37℃、5% CO2 )中進行培養歷時24小時。
接著，將各組的細胞培養物分別更換以新鮮的培養基，繼而使用200 μL的塑膠量吸管尖管(plastic pipette tip)沿著各井直徑來刮除Detroit 551細胞，以沿著該培養盤的直徑產生一無細胞貼附且寬度約為500 mm的傷口區域(wound area)，接著以PBS來洗滌各井共計2次。在更換新鮮的MEM (添加有5%胎牛血清)之後，將適量之在上面實施例1中所得到的江氏龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物以及江氏龍鬚菜水萃取物分別添加至江氏龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物組以及江氏龍鬚菜水萃取物組，以及將適量之在上面實施例3中所得到的細基龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物添加至細基龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物組，而使得江氏龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物組具有一最終濃度為0.03% (w/w)的江氏龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物，使得江氏龍鬚菜水萃取物組具有一最終濃度為0.03% (w/w)的江氏龍鬚菜水萃取物，以及使得細基龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物組具有一最終濃度為0.03% (w/w)的細基龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物。至於對照組則不作任何處理。
之後，將各組細胞培養物在培養箱(37℃，5% CO2 )中進行培養歷時12小時。在進行培養之前以及在開始培養之後的第12小時，使用一倒立顯微鏡(型號為TE300，廠牌為Nikon)並在一為40倍的放大倍數下來對各組的傷口區域進行觀察，並且使用一數位相機(型號為F90，廠牌為Nikon)來進行拍照，繼而藉由使用軟體Image J來對所拍得的照片進行分析而計算出該傷口區域的面積。傷口癒合百分比(wound healing percentage)(%)是藉由將所計算出的傷口區域的面積代入下列公式(III)而被計算出：G ＝ [1-(H/I)] × 100 (III) 其中：G＝傷口癒合百分比(%) H＝在開始培養之後的第12小時所測得的傷口區域的面積 I＝在進行培養之前所測得的傷口區域的面積
各組實驗被重複進行2次。所得到的實驗數據是以平均值±標準偏差來表示。所有的數據是藉由史徒登氏t- 試驗來作分析，俾以評估各組之間的差異性。若所得到的統計分析結果是p ＜0.05，表示有統計學顯著性。 結果：
圖8顯示各組的傷口癒合百分比。由圖8可見，江氏龍鬚菜水萃取物組的傷口癒合百分比與對照組相較之下沒有明顯的差異存在，而江氏龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物組的傷口癒合百分比是顯著地高於對照組、江氏龍鬚菜水萃取物組以及細基龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物組。這個實驗結果顯示：本發明的江氏龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物能夠有效地促進纖維母細胞-媒介的傷口閉合(fibroblast-mediated wound closure)。申請人據此而認為：本發明的江氏龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物可藉由促進纖維母細胞-媒介的傷口閉合來達到促進傷口癒合的效用。實施例 5. 江氏龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物在 提升皮膚的 保濕能力 (moisture-retaining capacity) 上的效用評估 實驗方法： A. 製備精華液：
為評估本發明的江氏龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物對於人類皮膚的保濕效用以及安全性，申請人將上面實施例1中所得到的江氏龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物配製成可施用於人類的皮膚上的精華液(下面簡稱為水解產物精華液)。另外，為供比較，一含有在上面實施例1中所得到的江氏龍鬚菜水萃取物的精華液(下面簡稱為水萃取物精華液)以及一不含有江氏龍鬚菜水萃取物或其鳳梨酶水解產物的精華液(下面簡稱為對照精華液)被製備。有關這3種精華液的組成與配方被顯示在下面的表2中，其中，所使用的丁二醇(butylene glycol)以及羥乙基纖維素(hydroxyethyl cellulose)皆是購自於第一化工(First Chemical Co., Ltd.)，而Dermosoft OMP是購自於嘉誠化學(HonorChem Co., Ltd)。 表2. 精華液的配方
有關水解產物精華液與水萃取物精華液的製備是依照下面步驟來進行：將丁二醇與羥乙基纖維素添加至去離子水中，並於75℃下進行攪拌以充分溶解。在冷卻至40至45℃後，依序加入江氏龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物或江氏龍鬚菜水萃取物以及Dermosoft OMP並進行攪拌。之後，利用NaOH將所得到的混合物的pH值調整至6至7，藉此而得到水解產物精華液與水萃取物精華液。另外，對照精華液大體上是依照上述步驟而被製得，不同之處在於：沒有添加江氏龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物或江氏龍鬚菜水萃取物。B. 實驗個體的篩選 ：
參與本試驗的實驗對象是來自於允頂企業有限公司(Yeun Diing Enterprise Co., Ltd.)以及頂宏生物科技股份有限公司(M.H. Biotechnology Co., Ltd.)的員工，在以下面表3中所示之排除標準(exclusion criteria)予以篩選後，本試驗共計有10位年齡介於25歲至40歲的受試者參加，其中包括4位男性與6位女性。 表3. 用以篩選實驗個體的排除標準 C. 精華液的施用 ：
首先，在各個受試者的右臂皮膚上區分出3個分別供塗抹上面第A項所配製出之水解產物精華液、水萃取物精華液以及對照精華液的施用區(下稱水解產物區、水萃取物區以及對照區)，每區寬度大約為4指幅(fingerbreadth)，每次施用0.5 mL的精華液，每天2次，試驗期間總共歷時28天。D. 角質層含水量 (water content of stratum corneum) 的測定 ：
在施用精華液之前(亦即第0天)以及在施用精華液之後的第7、14、21以及28天之時，藉由使用一電容計(capacitance meter)(Corneometer® CM 285, Courage & Khazaka)來對各區皮膚進行角質層含水量的測定。
角質層含水量的增加百分比(%)是藉由將所測得的角質層含水量代入下列公式(IV)而被計算出：J ＝ (L-K)/K × 100 (IV) 其中：J＝角質層含水量的增加百分比(%) K＝在第0天之時所測得的角質層含水量 L＝在施用精華液之後的第7、14、21以及28天之時所測得的角質層含水量
所得到的實驗數據是以平均值±標準偏差來表示。所有的數據是藉由史徒登氏t- 試驗來作分析，俾以評估各組之間的差異性。若所得到的統計分析結果是p ＜0.05，表示有統計學顯著性。E. 安全性的評估 ：
在施用精華液之前(亦即第0天)，將少量的精華液塗抹於各個受試者的上臂內側的皮膚作為測試，接著詢問並觀察受試者是否有出現任何皮膚刺激性反應(skin irritation reaction)[包括搔癢(itching)、刺激(irritation)以及紅斑(erythema)]。在施用精華液之後的第7、14、21以及28天之時，詢問並觀察受試者的各個施用區的皮膚是否有出現任何皮膚刺激性反應。 結果： A. 角質層含水量的測定 ：
圖9顯示各區皮膚在不同的時間點所測得的角質層含水量的增加百分比。從圖9可見，與對照區以及水萃取物區相較之下，水解產物區所測得的角質層含水量皆有顯著的增加，並且會隨著時間而更趨於明顯。相反地，水萃取物區所測得的角質層含水量會隨著時間而呈現緩慢增加的情形。這個實驗結果顯示：本發明的江氏龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物能夠更有效地提升皮膚的保濕能力(moisture-retaining capacity)。B. 安全性的評估 ：
在整個試驗的過程中，所有的受試者皆無產生任何皮膚刺激性反應(數據未顯示)。
綜合以上的實驗結果可知：依據本發明的江氏龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物具有抗氧化能力，並且能夠提升皮膚的保濕能力以及促進傷口癒合。因此，申請人認為：依據本發明的江氏龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物具有發展成為護膚產品的高潛力。
於本說明書中被引述之所有專利和文獻以其整體被併入本案作為參考資料。若有所衝突時，本案詳細說明(包含界定在內)將佔上風。
雖然本發明已參考上述特定的具體例被描述，明顯地在不背離本發明之範圍和精神之下可作出很多的修改和變化。因此意欲的是，本發明僅受如隨文檢附之申請專利範圍所示者之限制。
本發明的其他的特徵及功效，將於參照圖式的實施方式中清楚地呈現，其中： 圖1顯示將依據本發明的江氏龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物拿來進行HPLC所得到的洗提圖形，其中波峰a至c表示在第0至35分鐘的滯留期間所出現的3個主要成份； 圖2顯示本發明的江氏龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物與細基龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物在DPPH自由基清除能力上的效用比較，其中“**”與“***”分別表示：當與細基龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物組作比較，p ＜0.01與p ＜0.001； 圖3顯示本發明的江氏龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物與江氏龍鬚菜水萃取物在DPPH自由基清除能力上的效用比較，其中“***”表示：當與江氏龍鬚菜水萃取物組作比較，p ＜0.001； 圖4顯示本發明的江氏龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物與江氏龍鬚菜的鳳梨酶水解產物在DPPH自由基清除能力上的效用比較； 圖5顯示本發明的江氏龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物與細基龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物在還原力上的效用比較，其中“**”與“***”分別表示：當與細基龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物組作比較，p ＜0.01與p ＜0.001； 圖6顯示本發明的江氏龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物與江氏龍鬚菜水萃取物在還原力上的效用比較，其中“**”與“***”分別表示：當與江氏龍鬚菜水萃取物組作比較，p ＜0.01與p ＜0.001； 圖7顯示本發明的江氏龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物與江氏龍鬚菜的鳳梨酶水解產物在還原力上的效用比較； 圖8顯示本發明的江氏龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物、江氏龍鬚菜水萃取物以及細基龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物在促進傷口癒合上的效用比較，其中“**”與“***”分別表示：當與江氏龍鬚菜水萃取物的鳳梨酶水解產物組作比較，p ＜0.01與p ＜0.001；以及 圖9顯示水解產物精華液、水萃取物精華液以及對照精華液在提升角質層含水量上的效用比較，其中“*”、“**”與“***”分別表示：當與水解產物區作比較，p ＜0.05、p ＜0.01與p ＜0.001。

Claims (16)

  1. 一種江氏龍鬚菜水萃取物的水解產物，它是藉由一包含下列步驟之方法而被製得：以水來萃取江氏龍鬚菜而得到一水萃取物；以及令該水萃取物進行一使用一鳳梨酶的水解處理，藉此而得到該江氏龍鬚菜水萃取物的水解產物。
  2. 如請求項1的江氏龍鬚菜水萃取物的水解產物，其中該江氏龍鬚菜與水的重量比是介於1：0.5至1：5之間。
  3. 如請求項1的江氏龍鬚菜水萃取物的水解產物，其中該水萃取物與該鳳梨酶的重量比是介於250：1至600：1之間。
  4. 如請求項1的江氏龍鬚菜水萃取物的水解產物，其中在該方法中，該水萃取物在進行水解處理後可進一步進行一過濾處理。
  5. 一種組成物，其包含有一如請求項1至4中任一項的江氏龍鬚菜水萃取物的水解產物。
  6. 如請求項5的組成物，其進一步包含有一藥學上可接受的載劑或一化妝品上可接受的佐劑。
  7. 一種如請求項1至4中任一項的江氏龍鬚菜水萃取物的水解產物供應用於製備一用來提升皮膚的保濕能力之醫藥品的用途。
  8. 一種如請求項1至4中任一項的江氏龍鬚菜水萃取物的水解產物供應用於製備一用來促進傷口癒合之醫藥品的用途。
  9. 一種如請求項1至4中任一項的江氏龍鬚菜水萃取物的水解產物供應用於製備一用來抗氧化之醫藥品的用途。
  10. 如請求項7至9中任一項的用途，其中該醫藥品是呈一供局部投藥的劑型或口服投藥的劑型。
  11. 一種如請求項1至4中任一項的江氏龍鬚菜水萃取物的水解產物作為化妝品之用途。
  12. 如請求項11的用途，其中該化妝品是呈一供局部施用的形式。
  13. 一種用以製備一江氏龍鬚菜水萃取物的水解產物的方法，其包含下列步驟：以水來萃取江氏龍鬚菜而得到一水萃取物；以及令該水萃取物進行一使用一鳳梨酶的水解處理，藉此而得到該江氏龍鬚菜水萃取物的水解產物。
  14. 如請求項13的方法，其中該江氏龍鬚菜與水的重量比是介於1：0.5至1：5之間。
  15. 如請求項13的方法，其中該水萃取物與該鳳梨酶的重量比是介於250：1至600：1之間。
  16. 如請求項13的方法，其中該水萃取物在進行水解處理後可進一步進行一過濾處理。
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紅藻龍鬚菜蛋白酵素水解物機能探討，黃秀鳳，國立高雄海洋科技大學水產食品科學研究所，100年7月 *
紅藻龍鬚菜蛋白酵素水解物機能探討，黃秀鳳，國立高雄海洋科技大學水產食品科學研究所，100年7月。
龍鬚菜抽取物之抗氧化效果與添加於化妝品之功效評估，康永岳，國立高雄海洋科技大學水產食品科學研究所，99年8月 *
龍鬚菜抽取物之抗氧化效果與添加於化妝品之功效評估，康永岳，國立高雄海洋科技大學水產食品科學研究所，99年8月。

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