TW201420107A - 白花蝴蝶蘭花瓣的萃取物及其製備方法與用途 - Google Patents

Abstract

本發明揭示一種白花蝴蝶蘭花瓣的萃取物暨其製備方法。本發明亦揭示該白花蝴蝶蘭花瓣的萃取物可被用於促進皮膚美白、提升皮膚的保濕能力以及預防和/或延緩皮膚老化。

Description

白花蝴蝶蘭花瓣的萃取物及其製備方法與用途

本發明是有關於一種白花蝴蝶蘭花瓣(Phalaenopsis amabilis petals)的萃取物暨其製備方法。本發明亦有關於使用該白花蝴蝶蘭花瓣的萃取物來促進皮膚美白、提升皮膚的保濕能力以及預防和/或延緩皮膚老化。

皮膚是保護人類個體的最大屏障，它具有對抗水分散失、病原菌以及各種環境損害之功能。暴露於大量的紫外線(ultraviolet,UV)、游離輻射(ionizing radiation)、藥物或異生物質(xenobiotics)會促使皮膚生成活性氧族(reactive oxygen species,ROS)以及自由基(free radicals)。當所累積的活性氧族以及自由基的數量超過細胞或組織本身的抗氧化能力時，活性氧族以及自由基會與細胞內的組成物(包括DNA、蛋白質以及脂質等)相反應，進而對皮膚產生非所欲的影響。已有報導指出，活性氧族以及自由基在黑色素生成(melanogenesis)以及皮膚老化(skin aging)的過程中扮演極為重要的角色(Kim Y.J.and Yokozawa T. (2009),Biol.Pharm.Bull.,32：1155-1159)。

黑色素生成意指酪胺酸(tyrosine)在黑色素細胞(melanocytes)內經由酪胺酸酶(tyrosinase)的催化以及一系列的氧化還原反應而被轉化為黑色素(melanin)的過程，它主要是由紫外線[特別是紫外線-B(UV-B)]的照射所導致。當皮膚受到紫外線的照射後，在角質細胞(keratinocyte)中所生成的活性氧族以及自由基會誘發腫瘤蛋白質53(tumor protein 53,p53)的表現，進而促使前腦啡黑細胞促素皮促素基因(proopiomelanocortin gene,POMC gene)的表現並且釋放出POMC-衍生的胜肽(POMC-derived peptides)[諸如α-促黑素細胞素(α-melanocyte stimulating hormone,α-MSH)以及促腎上腺皮質激素(adrenocorticotropic hormone,ACTH)]，繼而使得黑色素細胞內的酪胺酸酶基因被表現，最後導致大量的黑色素累積於皮膚上。

皮膚老化可被區分為下面2大類別：(1)內在皮膚老化(intrinsic skin aging)[亦被稱為時序老化(chronological aging)]：它是隨著時間而進行的自然老化過程，主要是因為氧化性細胞代謝(oxidative cellular metabolism)所產生的活性氧族以及自由基的持續累積而導致；以及(2)外在皮膚老化(extrinsic skin aging)[亦被稱為光老化(photoaging)]：它是由環境因素(特別是紫外線的照射)所引起的過早老化(premature aging)。在皮膚老化的過程中，由氧化性細胞代謝以及紫外線的照射所產生的活性氧族與自由基皆會藉由促進轉錄因子活化蛋白1(activation protein 1,AP1)的形成來誘導一系列的基質金屬蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)的表現，進而促進膠原蛋白以及胞外基質(extracellular matrix)的其它組成物[例如，彈性蛋白(elastin)以及蛋白多糖(proteoglycan)]的降解，最後導致皮膚老化。皮膚老化的症狀包括：毛細血管擴張(telangiectasia)、表皮變薄、皮膚萎縮(skin atrophy)、膠原纖維(collagen fiber)與彈性纖維(elastic fiber)的減少、彈性組織變性(elastosis)、皮膚彈性(skin elasticity)變差、皮膚質地(skin texture)變粗糙、乾燥(dryness)、皺紋產生(wrinkle formation)以及色素改變(pigmentary change)[例如，雀斑(lentigines)、斑點(freckles)、色素過少(hypopigmentation)或色素過多(hyperpigmentation)]等。

近年來，人類對於皮膚美白(skin whitening)、抗老化(antiaging)以及保濕(moisturizing)的需求與日俱增，特別地，使用天然成分不會對皮膚產生非所欲的不利副作用，因而已成為現今醫學美容市場的趨勢。因此，醫藥界以及化妝品工業的研究人員嘗試從傳統中藥(traditional Chinese medicines,TCM)或植物中來尋找安全並且具有美白、抗老化以及保濕之效用的活性組分(active components)以供廣大的醫學美容市場之所需。

白花蝴蝶蘭(拉丁學名：Phalaenopsis amabilis；英文俗名：Moon Orchid)是蘭科(Orchidaceae)蝴蝶蘭屬(Phalaenopsis)之多年生草本植物；莖較短，被緊密之葉鞘包被；葉子外觀呈椭圓形、長圓形或鐮刀狀長圓形，革質； 花朵為白色，花形似蝶。產區分佈於台灣、印度以及菲律賓等。

目前已有研究是有關於白花蝴蝶蘭之經水萃取的產物以及經醇類萃取的產物在皮膚美白上的應用。例如，CN 100589790 C揭示一種皮膚增白或去色素化妝品，其包括佔該化妝品總重量之0.005-5%的白花蝴蝶蘭的葉、花和莖的水或醇或水/醇萃取物以及佔該化妝品總重量之0.5-5%的奇異果萃取物。依據此件大陸專利案的說明書，在製備該白花蝴蝶蘭的葉、花和莖的水或醇或水/醇萃取物時可以使用一範圍落在10-40℃內的萃取溫度，並且以一元醇(例如，乙醇、丙醇、異丙醇或它們的混合物)或多元醇(例如丙二醇)來作為萃取溶劑。在此件大陸專利案的實施例中，白花蝴蝶蘭之一經丙二醇萃取的產物以及一經乙醇萃取的產物被獲得，並且該白花蝴蝶蘭之經丙二醇萃取的產物進一步與奇異果之一經乙醇萃取的產物一起被製成一增白乳膏，而該增白乳膏經由人體試驗而被證實具有去色素(depigmentation)的效用。

在南台科技大學生物科技系的曾美璇所著學生專題[名稱：“比較十種花的美白效果(Comparison of ten flowers on the Whitening effect)”]中，曾美璇對6種花[亦即花色為白花黃心(white with yellow lip)的白花蝴蝶蘭、花色為白花紅心(white with red lip)的白花蝴蝶蘭、花色為紅色的非洲鳳仙花(Impatiens walleriana)、花色為白色的非洲鳳仙花、白玫瑰(Rosa rugosa var.alba Ware)以及紅玫瑰 (Rosa rugosa var.rosea Rehd)]的花瓣各取2.5g並分別予以剪碎，繼而於60℃下分別以50mL的95%乙醇來進行浸泡萃取歷時24小時，藉此而得到該6種花的花辦之經乙醇萃取的產物。曾美璇將該6種花的花辦之經乙醇萃取的產物拿來進行酪胺酸酶抑制能力的測試，而實驗結果顯示：花色為白花黃心的白花蝴蝶蘭花瓣之經乙醇萃取的產物的酪胺酸酶抑制能力與花色為白花紅心的白花蝴蝶蘭所具者沒有顯著的差異存在。而在花色為白花黃心的白花蝴蝶蘭、花色為紅色的非洲鳳仙花、花色為白色的非洲鳳仙花、白玫瑰以及紅玫瑰當中，紅玫瑰花瓣之經乙醇萃取的產物的酪胺酸酶抑制能力是最佳的。

於本發明中，申請人以超臨界CO₂(supercritical CO₂)來萃取白花蝴蝶蘭花瓣，而分別得到白花蝴蝶蘭花瓣的脂溶性萃取物(lipid soluble extract)、水溶性萃取物(water soluble extract)以及醇溶性萃取物(alcohol soluble extract)，並且這3種萃取物經由實驗而被證實具有促進皮膚美白、提升皮膚的保濕能力以及抗-皮膚老化的效用。因此，依據本發明的白花蝴蝶蘭花瓣的萃取物被預期可供作為一種護膚產品。

發明概要

於是，在第一個方面，本發明提供一種白花蝴蝶蘭花瓣(Phalaenopsis amabilis petals)的萃取物，它是藉由一包含下列步驟的方法而被製得：以超臨界CO₂ (supercritical CO₂)來萃取白花蝴蝶蘭花瓣，俾以得到一白花蝴蝶蘭花瓣的脂溶性萃取物。

在第二個方面，本發明提供一種白花蝴蝶蘭花瓣的萃取物，它是藉由一包含下列步驟的方法而被製得：以超臨界CO₂來萃取白花蝴蝶蘭花瓣，藉此而得到一白花蝴蝶蘭花瓣的脂溶性萃取物以及一殘餘物(residue)；以及以水來萃取該殘餘物，俾以得到一白花蝴蝶蘭花瓣的水溶性萃取物。

在第三個方面，本發明提供一種白花蝴蝶蘭花瓣的萃取物，它是藉由一包含下列步驟的方法而被製得：以超臨界CO₂來萃取白花蝴蝶蘭花瓣，藉此而得到一白花蝴蝶蘭花瓣的脂溶性萃取物以及一殘餘物；以及以乙醇來萃取該殘餘物，俾以得到一白花蝴蝶蘭花瓣的醇溶性萃取物。

在第四個方面，本發明提供一種用以製備一白花蝴蝶蘭花瓣的萃取物的方法，其包含下列步驟：以超臨界CO₂來萃取白花蝴蝶蘭花瓣，藉此而得到一白花蝴蝶蘭花瓣的脂溶性萃取物以及一殘餘物。

依據本發明，該方法可進一步包含下列步驟：以水來萃取該殘餘物，俾以得到一白花蝴蝶蘭花瓣的水溶性萃取物。

此外，依據本發明，該方法可進一步包含下列步驟：以乙醇來萃取該殘餘物，俾以得到一白花蝴蝶蘭花 瓣的醇溶性萃取物。

在第五個方面，本發明提供一種用於美白皮膚的組成物，其包含有如上所述的3種白花蝴蝶蘭花瓣的萃取物當中的任一者，或者它們的組合。

在第六個方面，本發明提供一種用於美白皮膚的方法，其包括對一需要促進皮膚美白的個體投予(administering)一如上所述的組成物。

在第七個方面，本發明提供一種用於提升皮膚的保濕能力的組成物，其包含有如上所述的3種白花蝴蝶蘭花瓣的萃取物當中的任一者，或者它們的組合。

在第八個方面，本發明提供一種用於提升皮膚的保濕能力的方法，其包括對一需要提升皮膚的保濕能力的個體投予一如上所述的組成物。

在第九個方面，本發明提供一種用於抗-皮膚老化的組成物，其包含有如上所述的3種白花蝴蝶蘭花瓣的萃取物當中的任一者，或者它們的組合。

在第十個方面，本發明提供一種用於抗-皮膚老化的方法，其包括對一需要預防和/或延緩皮膚老化的個體投予一如上所述的組成物。

本發明的上述以及其它目的、特徵與優點，在參照以下的詳細說明與較佳實施例和隨文檢附的圖式後，將變得明顯。

發明的詳細說明

為了這本說明書之目的，將被清楚地瞭解的 是：文字“包含有(comprising)”意指“包含但不限於”，以及文字“包括(comprises)”具有一對應的意義。

要被瞭解的是：若有任何一件前案刊物在此被引述，該前案刊物不構成一個下述承認：在台灣或任何其他國家之中，該前案刊物形成本技藝中的常見一般知識之一部分。

除非另外有所定義，在本文中所使用的所有技術性與科學術語具有熟悉本發明所屬技藝的人士所共同瞭解的意義。一熟悉本技藝者會認知到許多與那些被描述於本文中者相似或等效的方法和材料，它們可被用於實施本發明。當然，本發明決不受到所描述的方法和材料之限制。

為了從植物中獲得具有護膚效用的天然活性組分(natural active components)，申請人嘗試以各種不同的方法來對白花蝴蝶蘭的不同部位進行萃取，並且進一步將所得到的萃取物拿來進行活體外試驗(in vitro test)與人體試驗而發現到：白花蝴蝶蘭花瓣(Phalaenopsis amabilis petals)的脂溶性萃取物、水溶性萃取物以及醇溶性萃取物具有促進皮膚美白、提升皮膚的保濕能力以及抗-皮膚老化的效用。

因此，本發明提供一種白花蝴蝶蘭花瓣的脂溶性萃取物，它是藉由一包含下列步驟的方法而被製得：以超臨界CO₂來萃取白花蝴蝶蘭花瓣，藉此而得到該白花蝴蝶蘭花瓣的脂溶性萃取物以及一殘餘物。

依據本發明，以水來對該殘餘物進行進一步萃 取處理，藉此而得到一白花蝴蝶蘭花瓣的水溶性萃取物。

此外，依據本發明，以乙醇來對該殘餘物進行進一步萃取處理，藉此而得到一白花蝴蝶蘭花瓣的醇溶性萃取物。

本發明亦提供一種用以製備一白花蝴蝶蘭花瓣的萃取物的方法，其包含下列步驟：

以超臨界CO₂來萃取白花蝴蝶蘭花瓣，藉此而得到一白花蝴蝶蘭花瓣的脂溶性萃取物以及一殘餘物。

依據本發明，該方法進一步包含下列步驟：以水來萃取該殘餘物，俾以得到一白花蝴蝶蘭花瓣的水溶性萃取物。

此外，依據本發明，該方法進一步包含下列步驟：以乙醇來萃取該殘餘物，俾以得到一白花蝴蝶蘭花瓣的醇溶性萃取物。

依據本發明，該白花蝴蝶蘭花瓣可以得自於尚未開花的花芽(flower bud)或是在開花後的第1至90天(1 to 90 day after flowering,DAF)的花朵。較佳地，該白花蝴蝶蘭花瓣是得自於在開花後的第1至60天且具有一範圍落在3.5至5g內的重量的花朵。

如本文中所用的，術語“超臨界CO₂(supercritical CO₂)”或“超臨界二氧化碳(supercritical carbon dioxide)”意指所使用的CO₂被維持在等於或大於一臨界溫度(亦即31.1℃)以及一臨界壓力(亦即1100psi)的狀態下，而在此狀態下，CO₂同時具有近似於一氣體的黏度 (viscosity)以及一液體的密度(density)，因而可被用來作為一萃取溶劑。

有關使用超臨界CO₂的萃取處理的操作程序與參數條件等是落在熟習此項技術之人士的專業素養與例行技術範疇內。在此方面，可以參考，例如潘建亮與楊士緯(2010)，擴冶，54：83-89、國立成功大學化學研究所的吳俊毅所著碩士論文[名稱：“以超臨界二氧化碳萃取海豹油之研究(Study on extraction of seal oil with supercritical fluid carbon dioxide)”]，以及國立成功大學化學研究所的林爽秋所著碩士論文[名稱：“超臨界二氧化碳萃取中草藥及其萃出物對抑制黑色素生成的研究(Studies on the supercritical carbon dioxide extraction of the Chinese herbal medicine and its extract for inhibition of melanin formation)”]。

依據本發明，該超臨界CO₂的萃取是在一範圍落在35℃至100℃內的溫度下以及一範圍落在1500psi至7250psi內的壓力下被進行。在本發明的一個較佳具體例中，該超臨界CO₂的萃取是在一為40℃的溫度下以及一為4350psi的壓力下被進行。

依據本發明，該白花蝴蝶蘭花瓣的水溶性萃取物是藉由將該殘餘物與水混合後進行一超音波處理而被獲得。

依據本發明，該白花蝴蝶蘭花瓣的醇溶性萃取物是藉由將該殘餘物與乙醇混合後進行一超音波處理而被獲得。

依據本發明，該超音波處理是在一範圍落在10℃至50℃內的溫度下以及一範圍落在20KHz至100KHz內的頻率下被進行。在本發明的一個較佳具體例中，該超音波處理是在一為25℃的溫度下以及一為30KHz的頻率下被進行。

依據本發明，在該超音波處理後可進一步進行一過濾處理，俾以移除不可溶的雜質。該過濾處理可以採用熟習此項技藝者所詳知且慣用的技術來進行。例如，該過濾處理可以藉由使用紗布(cheese cloth)，或者具有一選定的孔徑大小之濾紙(filter paper)或濾膜(filter membrane)而被進行。在本發明的一個較佳具體例中，該過濾處理是藉由使用一具有一孔徑為6μm的濾紙而被進行。

依據本發明的白花蝴蝶蘭花瓣的萃取物經由活體外試驗而被證實可以有效地抑制皮膚黑色素瘤細胞(skin melanoma cell)的黑色素生成以及酪胺酸酶活性，並且具有清除α,α-二苯-β-苦味基肼基(α,α-diphenyl-β-picryhydrazyl,DPPH)自由基的能力。此外，依據本發明的白花蝴蝶蘭花瓣的萃取物經由人體試驗而被證實能夠有效地提升皮膚顏色的明亮度。

基於上述，依據本發明的白花蝴蝶蘭花瓣的萃取物被預期具有促進皮膚美白的效用，因而可供應用於製備一用來美白皮膚之醫藥品的用途。

於是，本發明提供一種用於美白皮膚的組成物，其包含有如上所述的3種白花蝴蝶蘭花瓣的萃取物當 中的任一者，或者它們的組合。

如本文中所用的，術語“美白(whitening)”與“膚色淡化(skin color lightening)”、“漂白(bleaching)”、“淨白”、“增白(brightening)”、“退黑”、“驅黑”以及“淡化黑色素(lightening the melanin)”可被交換地使用。

在本發明的一個較佳具體例中，該組成物包含有如上所述的白花蝴蝶蘭花瓣的脂溶性萃取物以及白花蝴蝶蘭花瓣的水溶性萃取物。

在本發明的另一個較佳具體例中，該組成物包含有如上所述的白花蝴蝶蘭花瓣的醇溶性萃取物以及白花蝴蝶蘭花瓣的水溶性萃取物。

依據本發明，該組成物可利用熟習此技藝者所詳知的技術而被製造成一適合於局部地(topically)施用於皮膚上的外部製劑(external preparation)，這包括，但不限於：乳劑(emulsion)、凝膠(gel)、軟膏(ointment)、乳霜(cream)、貼片(patch)、擦劑(liniment)、粉末(powder)、氣溶膠(aerosol)、噴霧(spray)、乳液(lotion)、乳漿(serum)、糊劑(paste)、泡沫(foam)、滴劑(drop)、懸浮液(suspension)、肥皂(soap)、油膏(salve)、繃帶(bandage)以及類似之物。

依據本發明，該外部製劑是藉由將本發明的組成物與一為熟習此項技藝者所詳知的基底(base)相混合而被製備。

依據本發明，該基底可包含有一或多種選自於下列的添加劑(additives)：水、醇(alcohols)、甘醇(glycol)、 碳氫化合物(hydrocarbons)[諸如石油膠(petroleum jelly)以及白凡士林(white petrolatum)]、蠟(wax)[諸如石蠟(paraffin)以及黃蠟(yellow wax)]、保存劑(preserving agents)、抗氧化劑(antioxidants)、界面活性劑(surfactants)、吸收增強劑(absorption enhancers)、安定劑(stabilizing agents)、膠凝劑(gelling agents)[諸如卡波普^®941(carbopol^®941)、微結晶纖維素(microcrystalline cellulose)以及羧基甲基纖維素(carboxymethylcellulose)]、活性劑(active agents)、保濕劑(humectants)、氣味吸收劑(odor absorbers)、香料(fragrances)、pH調整劑(pH adjusting agents)、螯合劑(chelating agents)、乳化劑(emulsifiers)、閉塞劑(occlusive agents)、軟化劑(emollients)、增稠劑(thickeners)、助溶劑(solubilizing agents)、滲透增強劑(penetration enhancers)、抗刺激劑(anti-irritants)、著色劑(colorants)以及推進劑(propellants)等。有關這些添加劑的選用與數量是落在熟習此項技術之人士的專業素養與例行技術範疇內。

本發明亦提供一種用於美白皮膚的方法，其包括對一需要促進皮膚美白的個體投予一如上所述的組成物。較佳地，該方法包括對該個體的皮膚施用一有效量的該組成物，並且歷時一足夠的時間直到皮膚的黑色素被顯著地淡化。

如本文中所用的，術語“投予(administering)”與“投藥”以及“施用(application)”可被交換地使用。

如此處所用的，術語“有效量(effective amount)” 意指當本發明的組成物被投予一需要促進皮膚美白的個體時，一足以提供所欲達致之美白功效並且不會對皮膚產生非所欲的不利副作用的安全用量。

如此處所用的，術語“有效量(effective amount)”與“有效劑量(effective dose)”、“美白有效量(whitening effective amount)”以及“美白有效劑量(whitening effective dose)”可被交換地使用。

依據本發明，該組成物的有效量與施用頻率(frequency of application)會視下列因素而變化：要被淡化黑色素的皮膚區域之初始病況(initial condition)以及所欲達致之最終的美白效果。一般而言，當依據本發明的組成物被局部地施用於皮膚上時，每次施用的有效量通常是1至6mg/平方公分的皮膚面積，每天大約1至3次。

另外，依據本發明的白花蝴蝶蘭花瓣的萃取物經由人體試驗而被證實能夠有效地提升皮膚的角質層(stratum corneum)的屏障功能以及含水量(water content)，並且減少皮膚水分的散失。

基於上述，依據本發明的白花蝴蝶蘭花瓣的萃取物被預期具有提升皮膚的保濕能力的效用，因而可供應用於製備一用來提升皮膚的保濕能力之醫藥品的用途。

於是，本發明提供一種用於提升皮膚的保濕能力的組成物，其包含有如上所述的3種白花蝴蝶蘭花瓣的萃取物當中的任一者，或者它們的組合。

在本發明的一個較佳具體例中，該組成物包含 有如上所述的白花蝴蝶蘭花瓣的脂溶性萃取物以及白花蝴蝶蘭花瓣的水溶性萃取物。

在本發明的另一個較佳具體例中，該組成物包含有如上所述的白花蝴蝶蘭花瓣的醇溶性萃取物以及白花蝴蝶蘭花瓣的水溶性萃取物。

依據本發明，該組成物的投藥途徑、劑型以及可供使用的基底是如上面所述者。

本發明亦提供一種用於提升皮膚的保濕能力的方法，其包括對一需要提升皮膚的保濕能力的個體投予一如上所述的組成物。較佳地，該方法包括對該個體的皮膚施用一有效量的該組成物，並且歷時一足夠的時間直到皮膚的保濕能力被顯著地提升。

如此處所用的，術語“有效量(effective amount)”意指當本發明的組成物被投予一需要提升皮膚的保濕能力的個體時，一足以提供所欲達致之保濕功效並且不會對皮膚產生非所欲的不利副作用的安全用量。

如此處所用的，術語“有效量(effective amount)”與“有效劑量(effective dose)”、“保濕有效量(moisture-retaining effective amount)”以及“保濕有效劑量(moisture-retaining effective dose)”可被交換地使用。

依據本發明，該組成物的有效量與施用頻率會視下列因素而變化：要被提升保濕能力的皮膚區域之初始病況以及所欲達致之最終的保濕效果。一般而言，當依據本發明的組成物被局部地施用於皮膚上時，每次施用的有 效量通常是1至6mg/平方公分的皮膚面積，每天大約1至3次。

另外，依據本發明的白花蝴蝶蘭花瓣的萃取物經由人體試驗而被證實能夠有效地提升皮膚的彈性。

基於上述，依據本發明的白花蝴蝶蘭花瓣的萃取物被預期具有預防和/或延緩皮膚老化的效用，因而可供應用於製備一用來抗-皮膚老化之醫藥品的用途。

於是，本發明提供一種用於抗-皮膚老化的組成物，其包含有如上所述的3種白花蝴蝶蘭花瓣的萃取物當中的任一者，或者它們的組合。

如本文中所用的，術語“延緩(retarding)”意指治療(treating)、減少(reducing)、減輕(alleviating)、改善(ameliorating)、緩解(relieving)或控制(controlling)一疾病(disease)或障礙(disorder)的一或多個臨床徵兆(clinical sign)，以及降低(lowering)、停止(stopping)或逆轉(reversing)一正在被治療中的病況(condition)或症狀(symptom)之嚴重性的進展(progression of severity)。

如本文中所用的，術語“皮膚老化(skin aging)”意欲涵蓋自然發生的內在皮膚老化(intrinsic skin aging)，以及由環境因素(特別是紫外線的照射)所引起的外在皮膚老化(extrinsic skin aging)。皮膚老化的症狀包括，但不限於：毛細血管擴張(telangiectasia)、表皮變薄、皮膚萎縮(skin atrophy)、膠原纖維(collagen fiber)與彈性纖維(elastic fiber)的減少、彈性組織變性(elastosis)、皮膚彈性(skin elasticity) 變差、皮膚質地(skin texture)變粗糙、乾燥(dryness)、皺紋產生(wrinkle formation)以及色素改變(pigmentary change)[例如，雀斑(lentigines)、斑點(freckles)、色素過少(hypopigmentation)或色素過多(hyperpigmentation)]等。

在本發明的一個較佳具體例中，該組成物包含有如上所述的白花蝴蝶蘭花瓣的脂溶性萃取物以及白花蝴蝶蘭花瓣的水溶性萃取物。

在本發明的另一個較佳具體例中，該組成物包含有如上所述的白花蝴蝶蘭花瓣的醇溶性萃取物以及白花蝴蝶蘭花瓣的水溶性萃取物。

依據本發明，該組成物的投藥途徑、劑型以及可供使用的基底是如上面所述者。

本發明亦提供一種用於抗-皮膚老化的方法，其包括對一需要預防和/或延緩皮膚老化的個體投予一如上所述的組成物。較佳地，該方法包括對該個體的皮膚施用一有效量的該組成物，並且歷時一足夠的時間直到皮膚老化的症狀被顯著地改善。

如此處所用的，術語“有效量(effective amount)”意指當本發明的組成物被投予一需要預防和/或延緩皮膚老化的個體時，一足以提供所欲達致之抗-皮膚老化的功效並且不會對皮膚產生非所欲的不利副作用的安全用量。

如此處所用的，術語“有效量(effective amount)”與“有效劑量(effective dose)”、“抗-老化有效量(anti-aging effective amount)”以及“抗-老化有效劑量(anti-aging effective dose)”可被交換地使用。

依據本發明，該組成物的有效量與施用頻率會視下列因素而變化：想要預防和/或延緩老化的皮膚區域之初始病況以及所欲達致之最終的抗-皮膚老化效果。一般而言，當依據本發明的組成物被局部地施用於皮膚上時，每次施用的有效量通常是1至6mg/平方公分的皮膚面積，每天大約1至3次。

特別地，依據本發明的白花蝴蝶蘭花瓣的脂溶性萃取物、水溶性萃取物以及醇溶性萃取物亦被預期可供應用於製備一用來促進皮膚美白、提升皮膚的保濕能力以及預防和/或延緩皮膚老化之化妝品的用途。

於是，本發明提供一種化妝品組成物，其包含有如上所述的3種白花蝴蝶蘭花瓣的萃取物當中的任一者，或者它們的組合。

較佳地，該化妝品組成物包含有如上所述的白花蝴蝶蘭花瓣的脂溶性萃取物以及白花蝴蝶蘭花瓣的水溶性萃取物。

較佳地，該化妝品組成物包含有如上所述的白花蝴蝶蘭花瓣的醇溶性萃取物以及白花蝴蝶蘭花瓣的水溶性萃取物。

依據本發明，該化妝品組成物可進一步包含有一被廣泛地使用於化妝品製造技術之化妝品上可接受的佐劑(cosmetically acceptable adjuvant)。例如，該化妝品上可接受的佐劑可包含有一或多種選自於下列的試劑：溶劑 (solvent)、膠凝劑、活性劑、防腐劑(preservative)、抗氧化劑、遮蔽劑(screening agent)、螯合劑、介面活性劑、染色試劑(coloring agent)、增稠劑(thickening agent)、填料(filler)、香料以及氣味吸收劑。有關這些試劑的選用與數量是落在熟習此項技術之人士的專業素養與例行技術範疇內。

依據本發明，該化妝品組成物可利用熟習此技藝者所詳知的技術而被製造成一適合於護膚(skincare)或化妝(makeup)的形式，這包括，但不限於：水性溶液(aqueous solution)、水-醇溶液(aqueous-alcohol solution)或油性溶液(oily solution)、呈水包油型(oil-in-water type)、油包水型(water-in-oil type)或複合型之乳劑、凝膠、軟膏、乳霜、面膜(mask)、貼片、貼布(pack)、擦劑、粉末、氣溶膠、噴霧、乳液、乳漿、糊劑、泡沫、分散液、滴劑、慕斯(mousse)、防曬油(sunblock)、化妝水(tonic water)、粉底(foundation)、眼影(eyeshadow)、卸妝產品(makeup remover products)、肥皂(soap)以及其他身體清潔產品(body cleansing products)等。

在本發明的一個較佳具體例中，該化妝品組成物被製造成一水-醇溶液。

依據本發明，該化妝品組成物亦可與一或多種選自於下列之已知活性的外用劑(external use agents)一起合併使用：美白劑(whitening agents)[諸如維生素A酸(tretinoin)、兒茶素(catechin)、麴酸、熊果苷以及維生素 C]、保濕劑、抗發炎劑(anti-inflammatory agents)、殺菌劑(bactericides)、紫外線吸收劑(ultraviolet absorbers)、植物萃取物(plant extracts)[諸如蘆薈萃取物(aloe extract)]、皮膚營養劑(skin nutrients)、麻醉劑(anesthetics)、抗痘劑(anti-acne agent)、止癢劑(antipruritic)、止痛劑(analgesic)、抗皮膚炎劑(antidermatitis agents)、抗過角化劑(antihyperkeratolytic agents)、抗乾皮膚劑(anti-dry skin agents)、抗汗劑(antipsoriatic agents)、抗老化劑(antiaging agents)、抗皺劑(antiwrinkle agents)、抗皮脂溢出劑(antiseborrheic agents)、傷口治療劑(wound-healing agents)、皮質類固醇(corticosteroids)以及激素(hormones)。有關這些外用劑的選用與數量是落在熟習此項技術之人士的專業素養與例行技術範疇內。

本發明之其他的特徵及功效，將於參照圖式的實施方式中清楚地呈現，其中：圖1顯示將依據本發明的實施例1所製得的白花蝴蝶蘭花瓣的脂溶性萃取物拿來進行HPLC所得到的洗提圖形，其中波峰a1至a7表示在第0至60分鐘的滯留期間所出現的7個主要成份；圖2顯示將依據本發明的實施例1所製得的白花蝴蝶蘭花瓣的水溶性萃取物拿來進行HPLC所得到的洗提圖形，其中波峰b1至b5表示在第0至60分鐘的滯留期間所出現的5個主要成份； 圖3顯示將依據本發明的實施例1所製得的白花蝴蝶蘭花瓣的醇溶性萃取物拿來進行HPLC所得到的洗提圖形，其中波峰c1至c5表示在第0至60分鐘的滯留期間所出現的5個主要成份；圖4顯示將依據CN 100589790 C所製得的白花蝴蝶蘭花瓣的乙醇萃取物拿來進行HPLC所得到的洗提圖形，其中波峰d1至d2表示在第0至60分鐘的滯留期間所出現的2個主要成份；圖5顯示將依據南台科技大學生物科技系的曾美璇所著學生專題(同上述)所製得的白花蝴蝶蘭花瓣的乙醇萃取物拿來進行HPLC所得到的洗提圖形，其中波峰e1至e2表示在第0至60分鐘的滯留期間所出現的2個主要成份；圖6顯示受試者的左臉與右臉的皮膚在分別被施用以本發明的白花蝴蝶蘭精華液1與對照精華液後隨著時間所測得的ITA數值；圖7顯示受試者的左臉與右臉的皮膚在分別被施用以本發明的白花蝴蝶蘭精華液2與對照精華液後隨著時間所測得的ITA數值；圖8顯示受試者的左臉與右臉的皮膚在分別被施用以本發明的白花蝴蝶蘭精華液3與對照精華液後隨著時間所測得的ITA數值；圖9顯示受試者的左臉與右臉的皮膚在分別被施用以本發明的白花蝴蝶蘭精華液4與對照精華液後隨著時間所測得的ITA數值； 圖10顯示受試者的左臉與右臉的皮膚在分別被施用以本發明的白花蝴蝶蘭精華液5與對照精華液後隨著時間所測得的ITA數值；圖11顯示受試者的左臉與右臉的皮膚在分別被施用以本發明的白花蝴蝶蘭精華液1與對照精華液後隨著時間所測得的角質層含水量；圖12顯示受試者的左臉與右臉的皮膚在分別被施用以本發明的白花蝴蝶蘭精華液2與對照精華液後隨著時間所測得的角質層含水量；圖13顯示受試者的左臉與右臉的皮膚在分別被施用以本發明的白花蝴蝶蘭精華液3與對照精華液後隨著時間所測得的角質層含水量；圖14顯示受試者的左臉與右臉的皮膚在分別被施用以本發明的白花蝴蝶蘭精華液4與對照精華液後隨著時間所測得的角質層含水量；圖15顯示受試者的左臉與右臉的皮膚在分別被施用以本發明的白花蝴蝶蘭精華液5與對照精華液後隨著時間所測得的角質層含水量；圖16顯示受試者的左臉與右臉的皮膚在分別被施用以本發明的白花蝴蝶蘭精華液1與對照精華液後隨著時間所測得的穿皮水分散失數值；圖17顯示受試者的左臉與右臉的皮膚在分別被施用以本發明的白花蝴蝶蘭精華液2與對照精華液後隨著時間所測得的穿皮水分散失數值； 圖18顯示受試者的左臉與右臉的皮膚在分別被施用以本發明的白花蝴蝶蘭精華液3與對照精華液後隨著時間所測得的穿皮水分散失數值；圖19顯示受試者的左臉與右臉的皮膚在分別被施用以本發明的白花蝴蝶蘭精華液4與對照精華液後隨著時間所測得的穿皮水分散失數值；圖20顯示受試者的左臉與右臉的皮膚在分別被施用以本發明的白花蝴蝶蘭精華液5與對照精華液後隨著時間所測得的穿皮水分散失數值；圖21顯示受試者的左臉與右臉的皮膚在分別被施用以本發明的白花蝴蝶蘭精華液1與對照精華液後隨著時間所測得的R2數值；圖22顯示受試者的左臉與右臉的皮膚在分別被施用以本發明的白花蝴蝶蘭精華液2與對照精華液後隨著時間所測得的R2數值；圖23顯示受試者的左臉與右臉的皮膚在分別被施用以本發明的白花蝴蝶蘭精華液3與對照精華液後隨著時間所測得的R2數值；圖24顯示受試者的左臉與右臉的皮膚在分別被施用以本發明的白花蝴蝶蘭精華液4與對照精華液後隨著時間所測得的R2數值；以及圖25顯示受試者的左臉與右臉的皮膚在分別被施用以本發明的白花蝴蝶蘭精華液5與對照精華液後隨著時間所測得的R2數值。

較佳實施例之詳細說明

本發明將就下面的實施例來做進一步說明，但應瞭解的是，該等實施例僅是供例示說明用，而不應被解釋為本發明的實施上的限制。

實施例

一般實驗材料：

1.細胞株的來源與培養：

在下面的實施例中所使用的老鼠皮膚黑色素瘤細胞株B16F10(BCRC 60031)(對應於ATCC CRL-6475)是購自於台灣的食品工業發展研究所(FIRDI)的生物資源保存及研究中心(Biosource Collection and Research Center,BCRC)。

B16F10細胞被培養於含有杜貝可氏改良的依格氏培養基(Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium,DMEM)(購自於德怡科技有限公司)[添加有10%胎牛血清(Fetal Bovine Serum,FBS)、100U/mL盤尼西林(penicillin)以及100U/mL鏈黴素(streptomycin)]的10-cm培養皿(10-cm petri dish)中，接著在培養條件被設定為37℃與5% CO₂的培養箱中進行培養。之後，大約每隔2天更換新鮮的培養基。當細胞密度達到約80-90%匯聚(confluence)時，移除培養基並以無血清(serum-free)的培養基來洗滌細胞共計2次，接著加入胰蛋白酶-EDTA(trypsin-EDTA)以使細胞自培養皿的底部脫離。之後，加入新鮮的培養基來中和胰蛋白酶的活性 並以量吸管(pipette)反覆地吸沖培養基以充分打散細胞，然後將所形成的細胞懸浮液分配到新的培養皿中，並在培養條件被設定為37℃與5% CO₂的培養箱中進行培養。

實施例1. 製備白花蝴蝶蘭花瓣(Phalaenopsis amabilis petals)的萃取物

實驗方法：

A、製備白花蝴蝶蘭花瓣的脂溶性萃取物(lipid soluble extract)：

首先，將購自於台灣蘭花生物科技園區(台南市，台灣)的白花蝴蝶蘭的新鮮花瓣以無菌水清洗2至3次，接著置於一溫度被設定在50℃的烘箱中進行乾燥。之後，秤取60公克經乾燥的花瓣並將之置於一超臨界流體萃取系統(supercritical fluid extraction system)(購自於台超萃取洗淨精機股份有限公司，型號為OV-SCF-10000)的一萃取容器中，繼而將CO₂導入至該萃取容器中，然後在40℃以及4350psi的壓力下進行萃取歷時1小時。在萃取的過程中，CO₂以6mL/min的流速通過該萃取容器，繼而進入一於常壓下的收集容器中，藉此一呈黃綠色膏狀之白花蝴蝶蘭花瓣的脂溶性萃取物在該收集容器中被獲得。將所得到的白花蝴蝶蘭花瓣的脂溶性萃取物溶於95%的乙醇中而生成一濃度為4mg/mL的儲備溶液備用。另外，在該萃取容器中所得到之白花蝴蝶蘭花瓣的殘餘物(residue)被拿來進行下面第B項與第C項的實驗。

B、製備白花蝴蝶蘭花瓣的水溶性萃取物(water soluble extract)：

秤取100公克依據上面第A項所得到的白花蝴蝶蘭花瓣的殘餘物並將之加入至一燒杯中，接著加入1000mL的純水並充分混合之後，將所形成的混合物於25℃下使用一超音波處理器(ultrasonicator)(購自於台超萃取洗淨精機股份有限公司，型號為ES600N)並以一為30KHz的頻率來進行震盪歷時4.5小時，接著以一孔徑為6μm的濾紙(ADVANTEC，No.1 Qualitative Filter Papers)予以過濾而得到一濾液。之後，將該濾液以一冷凍乾燥機(FDU2200,EYELA)來進行冷凍乾燥歷時72小時，而得到一呈凍乾粉末(lyophilized powder)的白花蝴蝶蘭花瓣的水溶性萃取物。將所得到的白花蝴蝶蘭花瓣的水溶性萃取物溶於純水中而生成一濃度為4mg/mL的儲備溶液備用。

C、製備白花蝴蝶蘭花瓣的醇溶性萃取物(alcohol soluble extract)：

秤取100公克依據上面第A項所得到的白花蝴蝶蘭花瓣的殘餘物並將之加入至一燒杯中，接著加入1000mL的95%的乙醇並充分混合之後，將所形成的混合物於25℃下使用一超音波處理器並以一為30KHz的頻率來進行震盪歷時4.5小時，接著以一孔徑為6μm的濾紙予以過濾而得到一濾液。之後，將該濾液以一減壓濃縮機(購自於尚德儀器股份有限公司，型號為RA-3000V1-B)來進行濃縮歷時5小時，而得到一呈黃色膠狀的白花蝴蝶蘭花瓣的醇溶性萃取物。將所得到的白花蝴蝶蘭花瓣的醇溶性萃取物溶於 75%的乙醇中而生成一濃度為4mg/mL的儲備溶液備用。

實施例2. 白花蝴蝶蘭花瓣的萃取物的高效能液相層析(high performance liquid chromatography,HPLC)分析

為瞭解本發明的白花蝴蝶蘭花瓣的萃取物的主要成份分佈，依據上面實施例1所得到的3種白花蝴蝶蘭花瓣的萃取物(亦即白花蝴蝶蘭花瓣的脂溶性萃取物、水溶性萃取物以及醇溶性萃取物)被拿來進行高效能液相層析分析。

實驗材料：

為供比較，申請人依據習知方法來製備2種白花蝴蝶蘭花瓣的乙醇萃取物(以下簡稱為習知的花瓣的乙醇萃取物1以及習知的花瓣的乙醇萃取物2)，並將它們拿來進行相同的HPLC分析。有關習知的花瓣的乙醇萃取物1是參考CN 100589790 C當中所述的方法來進行，並略作修改。簡言之，將白花蝴蝶蘭的花瓣與95%乙醇以一為1：10(wt/wt)的比例予以均勻混合，接著於25℃下進行萃取歷時24小時，藉此而得到該習知的花瓣的乙醇萃取物1。

另外，有關習知的花瓣的乙醇萃取物2是參考南台科技大學生物科技系的曾美璇所著學生專題(同上述)當中所述的方法來進行，並略作修改。簡言之，秤取2.5g的白花蝴蝶蘭的花瓣並且予以剪碎，繼而於60℃下以50mL的95%乙醇來進行加熱萃取歷時24小時，藉此而得到該習知的花瓣的乙醇萃取物2。

實驗方法：

本實驗所使用的HPLC分析儀器如下：ATIMA-等度/400高效能液相層析系統(ATIMA-Isocratic/400 high performance liquid chromatography system,CVC Technologies,Inc.)以及UV-Vis偵測器(UVD-100,CVC Technologies,Inc.)，而有關HPLC的各項操作參數與條件被顯示於下面的表1中。

結果：

圖1至圖3分別顯示將依據上面實施例1所製得的白花蝴蝶蘭花瓣的脂溶性萃取物、水溶性萃取物以及醇溶性萃取物拿來進行高效能液相層析所得到的洗提圖形(elution profile)，而圖4與圖5分別顯示將依據CN 100589790 C所製得的習知的花瓣的乙醇萃取物1以及依據南台科技大學生物科技系的曾美璇所著學生專題(同上述) 所製得的習知的花瓣的乙醇萃取物2拿來進行高效能液相層析所得到的洗提圖形。

從圖1可見，本發明的白花蝴蝶蘭花瓣的脂溶性萃取物在第0至60分鐘的滯留期間出現有7個主要的洗提波峰(分別被標示為波峰a1、a2、a3、a4、a5、a6以及a7)。從圖2可見，本發明的白花蝴蝶蘭花瓣的水溶性萃取物在第0至60分鐘的滯留期間出現有5個主要的洗提波峰(分別被標示為波峰b1、b2、b3、b4以及b5)。從圖3可見，本發明的白花蝴蝶蘭花瓣的醇溶性萃取物在第0至60分鐘的滯留期間出現有5個主要的洗提波峰(分別被標示為波峰c1、c2、c3、c4以及c5)。

另外，從圖4可見，該習知的花瓣的乙醇萃取物1在第0至60分鐘的滯留期間出現有2個主要的洗提波峰(分別被標示為波峰d1以及d2)。從圖5可見，該習知的花瓣的乙醇萃取物2在第0至60分鐘的滯留期間出現有2個主要的洗提波峰(分別被標示為波峰e1以及e2)。

經由比對圖1至圖3的波峰位置可清楚地發現，依據本發明所得到的白花蝴蝶蘭花瓣的脂溶性萃取物、水溶性萃取物以及醇溶性萃取物的成份是彼此不相同。此外，經由比對圖1至圖5的波峰位置可清楚地發現，依據本發明所得到的3種白花蝴蝶蘭花瓣的萃取物的成份是明顯不同於依據習知方法所得到的2種白花蝴蝶蘭花瓣的乙醇萃取物所具者。

實施例3. 白花蝴蝶蘭花瓣的萃取物的細胞可活性分析 (cell viability analysis)

依據上面實施例1所得到的白花蝴蝶蘭花瓣的水溶性萃取物與醇溶性萃取物被拿來進行下面的實驗，俾以為評估這兩種萃取物的細胞毒性(cytotoxicity)。

實驗方法：

將依照上面“一般實驗材料”的第1項「細胞株的來源與培養」來進行繼代培養的B16F10細胞分成2組，其中包括1個對照組(control)以及1個實驗組。將各組細胞分別以一為1×10⁴細胞/井的數量培養於含有100μL的DMEM(添加有10% FBS、100U/mL盤尼西林以及100U/mL鏈黴素)的96-井培養盤(96-well plate)中，並在培養箱(37℃，5% CO₂)中進行培養歷時24小時。接著，將適量之依據上面實施例1的第B項所得到之白花蝴蝶蘭花瓣的水溶性萃取物的儲備溶液添加至實驗組的細胞培養物中，而使得它具有一最終濃度為1.25%(w/v,g/L)的白花蝴蝶蘭花瓣的水溶性萃取物。至於對照組的細胞培養物則不作任何處理。各組細胞培養物在培養箱(37℃，5% CO₂)中進行培養歷時24小時之後，將3-[4,5-二甲基噻唑-2-基]-2,5-二苯四唑溴化物{3-[4,5-Dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide}(MTT，1mg/mL，100μL)分別添加至各井中並予以培養歷時3小時。之後，移除各井中的液體，繼而加入100μL的二甲亞(dimethylsulfoxide,DMSO)並予以混合均勻，然後於570nm的波長下以一ELISA讀取機(ELISA reader)(Sunrise^TM,TECAN)來讀取各 井的吸光值(OD₅₇₀)。

有關白花蝴蝶蘭花瓣的醇溶性萃取物的細胞可活性分析大體上是參照上面針對白花蝴蝶蘭花瓣的水溶性萃取物所描述的操作程序來進行實驗，不同之處在於：以依據上面實施例1的第C項所得到之白花蝴蝶蘭花瓣的醇溶性萃取物的儲備溶液來代替白花蝴蝶蘭花瓣的水溶性萃取物的儲備溶液。

細胞可活性百分比(%)是藉由將所測得的吸光值(OD₅₇₀)代入下列公式(1)而被計算出：公式(1)：A=(B/C)×100

其中：A=細胞可活性百分比(%)B=各組所測得的OD₅₇₀吸光值C=對照組所測得的OD₅₇₀吸光值

結果：

下面表2顯示B16F10細胞在分別以1.25%(w/v)的白花蝴蝶蘭花瓣的水溶性萃取物與醇溶性萃取物予以處理後所測得的細胞可活性百分比。從表2可見，實驗組的細胞可活性百分比皆高達90%以上，與對照組相較之下沒有明顯的差異存在。這個實驗結果顯示：依據本發明的白花蝴蝶蘭花瓣的水溶性萃取物與醇溶性萃取物不會對細胞造成傷害，因此不具有細胞毒性。

實施例4. 白花蝴蝶蘭花瓣的萃取物在抑制黑色素生成(inhibition of melanogenesis)上的效用評估

在本實施例中，申請人藉由測定黑色素含量(melanin content)以及酪胺酸酶活性(tyrosinase activity)來評估本發明的白花蝴蝶蘭花瓣的水溶性萃取物與醇溶性萃取物在抑制黑色素生成(melanogenesis)上的效用。

實驗方法：

A、黑色素含量的測定：

有關於黑色素含量的測定是委託台灣檢驗科技股份有限公司(SGS Taiwan Ltd.)並且大體上參考Koo J.H.et al.(2008),Exp.Mol.Med.,40：313-319當中所述的方法來進行。簡言之，將依照上面“一般實驗材料”的第1項「細胞株的來源與培養」來進行繼代培養的B16F10細胞分成2組，其中包括1個對照組以及1個實驗組。將各組細胞分別以一為1.5×10⁶細胞的數量培養於含有適量的DMEM[添加有10% FBS、盤尼西林、鏈黴素以及0.1mM 3-異丁基-1-甲基黃嘌呤(3-isobutyl-1-methylxanthine,IBMX)]的10-cm 培養皿(petri dish)中，並在培養箱(37℃，5% CO₂)中進行培養歷時24小時，而使得B16F10細胞被誘發黑色素生成。接著，將適量之依據上面實施例1的第B項所得到之白花蝴蝶蘭花瓣的水溶性萃取物的儲備溶液添加至實驗組的細胞培養物中，而使得它具有一最終濃度為1.25%(w/v,g/L)的白花蝴蝶蘭花瓣的水溶性萃取物。至於對照組的細胞培養物則不作任何處理。各組細胞培養物在培養箱(37℃，5% CO₂)中進行培養歷時24小時之後，以磷酸鹽緩衝生理鹽水(Phosphate Buffered Saline,PBS)予以清洗共計2次，繼而分別加入1mL的胰蛋白酶-EDTA以使細胞自培養皿的底部脫離。之後，加入適量的新鮮的培養基來中和胰蛋白酶的活性，然後以量吸管將所形成的混合溶液吸取至一離心管中並予以離心。在移除上澄液之後，分別加入適量的溶解緩衝液(lysis buffer)[含有20mM Tris以及0.1%(v/v)Triton X-100]來溶解細胞並予以離心。接著，收集部份上澄液並藉由Bradford蛋白質分析法(Bradford protein assay)來測定該上澄液內的總蛋白質濃度。

此外，收集部分的上澄液並添加以適量的20%三氯乙酸(trichloroacetic acid,TCA)而使得沉澱物(precipitate)被析出。在離心之後，移除上澄液並以10%三氯乙酸予以清洗，然後依序以一含有乙醇與乙醚的有機溶劑以及乙醚予以清洗，接而予以風乾(air drying)。之後，以適量的0.85M KOH來充分散浮所得到的沉澱物，繼而對所形成的混合物取出適量的體積，並於440nm的波長下以 一ELISA讀取機來量測吸光值(OD₄₄₀)。

有關白花蝴蝶蘭花瓣的醇溶性萃取物對於黑色素含量的影響大體上是參照上面針對白花蝴蝶蘭花瓣的水溶性萃取物所描述的操作程序來進行分析，不同之處在於：以依據上面實施例1的第C項所得到之白花蝴蝶蘭花瓣的醇溶性萃取物的儲備溶液來代替白花蝴蝶蘭花瓣的水溶性萃取物的儲備溶液。

黑色素含量(%)是藉由將所測得的吸光值(OD₄₄₀)代入下列公式(2)而被計算出：公式(2)：D=(E/F)×100

其中：D=黑色素含量(%)E=各組所測得的OD₄₄₀吸光值F=對照組所測得的OD₄₄₀吸光值

B、酪胺酸酶活性的測定：

首先，將0.5g L-酪胺酸(L-tyrosine,Sigma,T8566)加入至100mL PBS中並予以充分混合，繼而在室溫下靜置歷時30分鐘。接著，以3000rpm進行離心歷時15分鐘後，吸取上澄液而得到一酪胺酸緩衝溶液(tyrosine buffer solution)備用。

之後，將適量的依據上面實施例1的第B項所得到之白花蝴蝶蘭花瓣的水溶性萃取物的儲備溶液分別加入至二次水(ddH₂O)中，而得到具有一白花蝴蝶蘭花瓣的水溶性萃取物濃度分別為0.5%、0.75%、1.0%、1.25%、1.5%與2.0%(w/v,g/L)的待測樣品(亦即實驗組1至6)。接著， 對各組的待測樣品各取100μL，然後予以加入5μL酪胺酸(tyrosinase,Sigma,T3824)溶液(7U/μL，配於PBS中)以及900μL酪胺酸緩衝溶液。另外，對照組(control)是以100μL酪胺酸緩衝溶液來取代待測樣品。在充分混合之後，將所形成的混合物置於37℃下進行避光作用歷時1小時。之後，對各組的混合物各取100μL並將之加入至一個96-井培養盤中，然後於450nm的波長下以一ELISA讀取機來量測各井的吸光值(OD₄₅₀)。

有關白花蝴蝶蘭花瓣的醇溶性萃取物對於酪胺酸酶活性的影響大體上是參照上面針對白花蝴蝶蘭花瓣的水溶性萃取物所描述的操作程序來進行分析，不同之處在於：以依據上面實施例1的第C項所得到之白花蝴蝶蘭花瓣的醇溶性萃取物的儲備溶液來代替白花蝴蝶蘭花瓣的水溶性萃取物的儲備溶液。

酪胺酸酶活性的抑制率(%)是藉由將所測得的吸光值(OD₄₅₀)代入下列公式(3)而被計算出：公式(3)：G=[1-(H/I)]×100

其中：G=酪胺酸酶活性的抑制率(%)H=各組所測得的OD₄₅₀吸光值I=對照組所測得的OD₄₅₀吸光值

結果：

A、黑色素含量的測定：

下面表3顯示被誘發黑色素生成的B16F10細胞在分別以1.25%(w/v)的白花蝴蝶蘭花瓣的水溶性萃取物與 醇溶性萃取物予以處理後所測得的黑色素含量。從表3可見，與照組相較之下，實驗組的細胞的黑色素含量皆有明顯的降低。這個實驗結果顯示：依據本發明的白花蝴蝶蘭花瓣的水溶性萃取物與醇溶性萃取物對於經IBMX處理的B16F10細胞的黑色素生成皆具有一強效的抑制作用。

B、酪胺酸酶活性的測定：

下面表4顯示不同濃度的白花蝴蝶蘭花瓣的水溶性萃取物與醇溶性萃取物所測得之酪胺酸酶活性的抑制率。從表4可見，與對照組相較之下，實驗組1至6的酪胺酸酶活性的抑制率皆有提高，同時會隨著白花蝴蝶蘭花瓣的水溶性萃取物或醇溶性萃取物之濃度的增加而更趨於明顯。這個實驗結果顯示：依據本發明的白花蝴蝶蘭花瓣的水溶性萃取物與醇溶性萃取物皆具有一優越的抑制酪胺酸酶活性的效用。

綜合以上的實驗結果可知：依據本發明的白花蝴蝶蘭花瓣的水溶性萃取物與醇溶性萃取物可以有效地抑制皮膚黑色素瘤細胞的黑色素生成以及酪胺酸酶的活性，進而達到皮膚美白(skin whitening)的效用。

實施例5. 白花蝴蝶蘭花瓣的萃取物在抗氧化效力(antioxidation efficacy)上的評估

在本實施例中，申請人藉由分析白花蝴蝶蘭花瓣的水溶性萃取物與醇溶性萃取物在清除α,α-二苯-β-苦味基肼基(α,α-diphenyl-β-picryhydrazyl,DPPH)自由基上的能力來評估這兩種萃取物的抗氧化效力。

實驗方法：

首先，將適量的依據上面實施例1的第B項所得到之白花蝴蝶蘭花瓣的水溶性萃取物的儲備溶液分別加入至甲醇溶液中，而得到具有一白花蝴蝶蘭花瓣的水溶性 萃取物濃度分別為0.5%、0.75%、1.0%、1.25%、1.5%與2.0%(w/v,g/L)的待測樣品(亦即實驗組1至6)。接著，對各組的待測樣品各取0.5mL，然後予以加入2mL甲醇以及0.5mL之含有0.2mM DPPH的甲醇溶液。另外，對照組是以0.5mL甲醇來取代待測樣品。在充分混合之後，將所形成的混合物置於室溫下進行避光作用歷時30分鐘，接而於517nm的波長下以一分光光度計來量測吸光值(OD₅₁₇)。若所測得的吸光值(OD₅₁₇)越低，代表清除DPPH自由基的能力越佳。

有關白花蝴蝶蘭花瓣的醇溶性萃取物在清除DPPH自由基上的能力大體上是參照上面針對白花蝴蝶蘭花瓣的水溶性萃取物所描述的操作程序來進行分析，不同之處在於：以依據上面實施例1的第C項所得到之白花蝴蝶蘭花瓣的醇溶性萃取物的儲備溶液來代替白花蝴蝶蘭花瓣的水溶性萃取物的儲備溶液。

DPPH自由基清除率(radical scavenging rate)(%)是藉由將所測得的吸光值(OD₅₁₇)代入下列公式(4)而被計算出：公式(4)：J=[1-(K/L)]×100

其中：J=DPPH自由基清除率(%)K=各組所測得的OD₅₁₇吸光值L=對照組所測得的OD₅₁₇吸光值

結果：

下面表5顯示不同濃度的白花蝴蝶蘭花瓣的水溶性萃取物與醇溶性萃取物所測得之DPPH自由基清除 率。從表5可見，與對照組相較之下，實驗組1至6的DPPH自由基清除率皆有提高，同時會隨著白花蝴蝶蘭花瓣的水溶性萃取物或醇溶性萃取物之濃度的增加而更趨於明顯。這個實驗結果顯示：依據本發明的白花蝴蝶蘭花瓣的水溶性萃取物與醇溶性萃取物皆具有一優越的DPPH自由基清除能力。申請人據此而推論：依據本發明的白花蝴蝶蘭花瓣的水溶性萃取物與醇溶性萃取物可藉由清除皮膚細胞內的自由基來抑制黑色素的生成，進而達至皮膚美白(skin whitening)的效用。因此，申請人認為：依據本發明的白花蝴蝶蘭花瓣的水溶性萃取物與醇溶性萃取物具有發展成為一皮膚美白劑的高潛力。

實施例6. 白花蝴蝶蘭花瓣的萃取物對於人類個體的護膚效用(skincare effect)之評估

為瞭解依據本發明的白花蝴蝶蘭花瓣的脂溶性 萃取物、水溶性萃取物、醇溶性萃取物、一種由上述的脂溶性萃取物與水溶性萃取物所構成的組合，以及一種由上述的水溶性萃取物與醇溶性萃取物所構成的組合分別對於人類個體的護膚效用，下面的試驗被進行。

實驗材料、個體以及方法：

A、製備含有白花蝴蝶蘭花瓣的萃取物之精華液：

依據上面實施例1的第A項所得到之白花蝴蝶蘭花瓣的脂溶性萃取物的儲備溶液、第B項所得到之白花蝴蝶蘭花瓣的水溶性萃取物的儲備溶液以及第C項所得到之白花蝴蝶蘭花瓣的醇溶性萃取物的儲備溶液分別被拿來製造成5種可施用於人類的臉部皮膚上的精華液(下面簡稱為白花蝴蝶蘭精華液1至5)。另外，為供比較，一不含有白花蝴蝶蘭花瓣的萃取物的精華液(下面簡稱為對照精華液)被製備。有關這6種精華液的組成與配方被顯示在下面的表6中。

有關白花蝴蝶蘭精華液1的製備是依照下面步驟來進行：首先，將卡波普^®941以及海藻酸鈉溶於純水中，繼而添加以二丙烯甘醇、聚乙二醇400以及依據上面實施例1的第B項所得到之白花蝴蝶蘭花瓣的水溶性萃取物的儲備溶液並予以充分混合，藉此而得到一水性溶液(aqueous solution)。另外，將去水山梨醇單油酸酯、聚氧乙烯(20)去水山梨醇單硬脂酸酯、油醇、對羥苯甲酸丙酯以及依據上面實施例1的第A項所得到之白花蝴蝶蘭花瓣的脂溶性萃取物的儲備溶液溶於乙醇中，藉此而得到一醇性溶液(alcoholic solution)。接著，將該醇性溶液緩慢地加入至該水性溶液中以進行微乳化(microemulsion)，繼而將氫氧化鉀溶液添加至所得到的混合物中並予以充分混合，藉此而得到該白花蝴蝶蘭精華液1。

另外，有關白花蝴蝶蘭精華液2至5以及對照精華液大體上是依照上述步驟而被製得，不同之處在於：在配製白花蝴蝶蘭精華液2的醇性溶液的過程中，以依據上面實施例1的第C項所得到之白花蝴蝶蘭花瓣的醇溶性萃取物的儲備溶液來代替白花蝴蝶蘭花瓣的脂溶性萃取物的儲備溶液；在配製白花蝴蝶蘭精華液3的水性溶液的過程中沒有添加白花蝴蝶蘭花瓣的水溶性萃取物的儲備溶液，而所欠缺的體積是在配製該水性溶液的過程中以等體積的純水來補足；在配製白花蝴蝶蘭精華液4的醇性溶液的過程中沒有添加白花蝴蝶蘭花瓣的脂溶性萃取物的儲備溶液，而所欠缺的體積是在配製該水性溶液的過程中以等 體積的純水來補足；在配製白花蝴蝶蘭精華液5的醇性溶液的過程中，以白花蝴蝶蘭花瓣的醇溶性萃取物的儲備溶液來代替白花蝴蝶蘭花瓣織的脂溶性萃取物的儲備溶液，以及在配製該水性溶液的過程中沒有添加白花蝴蝶蘭花瓣的水溶性萃取物的儲備溶液，而所欠缺的體積是在配製該水性溶液的過程中以等體積的純水來補足；以及在配製對照精華液的水性溶液的過程中沒有添加白花蝴蝶蘭花瓣的水溶性萃取物的儲備溶液，以及在配製對照精華液的醇性溶液的過程中沒有添加白花蝴蝶蘭花瓣的脂溶性萃取物的儲備溶液，而所欠缺的體積是在配製該水性溶液的過程中以等體積的純水來補足。

B、實驗個體的篩選：

參與本試驗的實驗對象是來自於弘光科技大學的教職員生，他們必須不具有下面表7中所示之排除標準(exclusion criteria)的任一者。此外，針對所有參與試驗的個體都有取得他們的告知同意書(informed consent)。

本試驗共計有100位受試者，他們被隨機地分成5組，亦即精華液組1至5(每組n=20)。各組受試者的臉部皮膚依據下面第C項當中所述的方法而被施用以不同的白花蝴蝶蘭精華液，然後依據下面第D至G項當中所述的方法來評估該等白花蝴蝶蘭精華液在護膚上的效用。有關各組受試者的臨床資訊(clinical information)(包括：性別、平均年齡以及年齡範圍)以及所施用的精華液種類被顯示在下面的表8中。

C、白花蝴蝶蘭精華液的施用：

首先，以各組受試者的左臉皮膚作為實驗區，而右臉皮膚作為對照區，接著各組受試者的實驗區分別被施用以依據上面第A項所製得的白花蝴蝶蘭精華液(有關各組所施用的精華液種類如上面表8中所示)，而各組受試者的對照區皆被施用以對照精華液。實驗區與對照區的施用劑量皆為：每1平方公分的面積施用以2mg的精華液，每天2次，試驗期間總共歷時28天。在第0天之時(亦即在施用精華液之前)以及在施用精華液之後的第7、14、21以及28天之時，依據下面第D、E、F以及G項當中所述的方法來對各組受試者之實驗區與對照區的顴骨部位(cheek bone site)的皮膚進行測定。

D、皮膚色度(colorimetry of skin)的測定：

在第0天之時(亦即在施用精華液之前)以及在施用精華液之後的第7、14、21以及28天之時，各組受試者之實驗組與對照組的顴骨區域的皮膚是藉由使用一色度計(colorimeter)(Chromameter^® CR-10,Minolta)來進行皮膚色度的測定，藉此而分別得到一L數值以及一b數值。

ITA數值是藉由將所測得的L數值以及b數值代入下列公式(5)而被計算出：公式(5)：M={Arc TAN[(N-50)/O]}×180/π

其中：M=ITA數值N=在各個測試時間點所測得的L數值O=在各個測試時間點所測得的b數值

若所測得的ITA數值越高，代表皮膚的顏色越明亮。

E、角質層含水量(water content of stratum corneum)的測定：

在第0天之時(亦即在施用精華液之前)以及在施用精華液之後的第7、14、21以及28天之時，各組受試者之實驗組與對照組的顴骨區域的皮膚是藉由使用一電容計(capacitance meter)(Corneometer^® CM 285,Courage & Khazaka)來進行角質層含水量的測定。

F、穿皮水分散失(transepidermal water loss,TEWL)的測定：

在第0天之時(亦即在施用精華液之前)以及在施用精華液之後的第7、14、21以及28天之時，各組受試者之實驗組與對照組的顴骨區域的皮膚是藉由使用一蒸發計(evaporimeter)(Tewameter^® TM300,Courage & Khazaka)來進行穿皮水分散失的測定。

G、皮膚黏彈性(viscoelasticity of skin)的測定：

在第0天之時(亦即在施用精華液之前)以及在施用精華液之後的第7、14、21以及28天之時，各組受試者之實驗區與對照區的顴骨部位的皮膚是藉由使用一皮膚彈性計(skin elasticity meter)(Cutometer^® MPA580,Courage & Khazaka)來進行皮膚黏彈性的測定，藉此而得到一R2數值。若所測得的R2數值越趨近1，代表皮膚的彈性越佳。

結果：

A、皮膚色度的測定：

圖6至圖10分別顯示被施用以本發明的白花蝴蝶蘭精華液1至5的實驗區在不同的時間點所測得的ITA數值。從圖6至圖10可見，與對照區相較之下，實驗區所測得的ITA數值皆有顯著的上升，並且會隨著時間而更趨於明顯。相反地，對照區所測得的ITA數值在整個實驗期間並沒有呈現明顯的變化。這個實驗結果顯示：依據本發明的白花蝴蝶蘭精華液能夠有效地美白皮膚。

B、角質層含水量的測定：

圖11至圖15分別顯示被施用以本發明的白花蝴蝶蘭精華液1至5的實驗區在不同的時間點所測得的角質層含水量。從圖11至圖15可見，與對照區相較之下，實驗區所測得的角質層含水量皆有顯著的增加，並且會隨著時間而更趨於明顯。相反地，對照區所測得的角質層含水量會隨著時間而呈現緩慢增加的情形。這個實驗結果顯示：依據本發明的白花蝴蝶蘭精華液能夠有效地提升皮膚的保濕能力(moisture-retaining capacity)。

C、穿皮水分散失的測定：

圖16至圖20分別顯示被施用以本發明的白花蝴蝶蘭精華液1至5的實驗區在不同的時間點所測得的穿皮水分散失數值。從圖16至圖20可見，與對照區相較之下，實驗區所測得的穿皮水分散失數值皆有顯著的降低，並且會隨著時間而更趨於明顯。相反地，對照區所測得的穿皮水分散失數值會隨著時間而呈現緩慢降低的情形。這 個實驗結果顯示：依據本發明的白花蝴蝶蘭精華液能夠有效地提升皮膚角質層的屏障功能(barrier function)。

D、皮膚黏彈性的測定：

圖21至圖25分別顯示被施用以本發明的白花蝴蝶蘭精華液1至5的實驗區在不同的時間點所測得的R2數值。從圖21至圖25可見，與對照區相較之下，實驗區所測得的R2數值皆有顯著的上升，並且會隨著時間而更趨於明顯。相反地，對照區所測得的R2數值在整個實驗期間並沒有呈現明顯的變化。這個實驗結果顯示：依據本發明的白花蝴蝶蘭精華液能夠有效地提升皮膚彈性。

綜合以上的實驗結果可知：依據本發明的白花蝴蝶蘭花瓣的脂溶性萃取物、水溶性萃取物、醇溶性萃取物、一種由上述脂溶性萃取物與水溶性萃取物所構成的組合，以及一種由上述水溶性萃取物與醇溶性萃取物所構成的組合皆能讓皮膚達致美白、保濕以及抗老化的效用。因此，申請人認為：依據本發明的3種白花蝴蝶蘭花瓣的萃取物(亦即白花蝴蝶蘭花瓣的脂溶性萃取物、水溶性萃取物以及醇溶性萃取物)以及它們的組合具有發展成為護膚產品的高潛力。

於本說明書中被引述之所有專利和文獻以其整體被併入本案作為參考資料。若有所衝突時，本案詳細說明(包含界定在內)將佔上風。

雖然本發明已參考上述特定的具體例被描述，明顯地在不背離本發明之範圍和精神之下可作出很多的修 改和變化。因此意欲的是，本發明僅受如隨文檢附之申請專利範圍所示者之限制。

Claims (40)

1. 一種白花蝴蝶蘭花瓣的萃取物，它是藉由一包含下列步驟的方法而被製得：以超臨界CO₂來萃取白花蝴蝶蘭花瓣，俾以得到一白花蝴蝶蘭花瓣的脂溶性萃取物。
2. 一種白花蝴蝶蘭花瓣的萃取物，它是藉由一包含下列步驟的方法而被製得：以超臨界CO₂來萃取白花蝴蝶蘭花瓣，藉此而得到一白花蝴蝶蘭花瓣的脂溶性萃取物以及一殘餘物；以及以水來萃取該殘餘物，俾以得到一白花蝴蝶蘭花瓣的水溶性萃取物。
3. 一種白花蝴蝶蘭花瓣的萃取物，它是藉由一包含下列步驟的方法而被製得：以超臨界CO₂來萃取白花蝴蝶蘭花瓣，藉此而得到一白花蝴蝶蘭花瓣的脂溶性萃取物以及一殘餘物；以及以乙醇來萃取該殘餘物，俾以得到一白花蝴蝶蘭花瓣的醇溶性萃取物。
4. 如請求項1至3中任一項的白花蝴蝶蘭花瓣的萃取物，其中在該方法中，該超臨界CO₂的萃取是在一範圍落在35℃至100℃內的溫度下以及一範圍落在1500psi至7250psi內的壓力下被進行
5. 如請求項2的白花蝴蝶蘭花瓣的萃取物，其中在該方法中，該白花蝴蝶蘭花瓣的水溶性萃取物是藉由將該殘餘物與水混合後進行一超音波處理而被獲得。
6. 如請求項3的白花蝴蝶蘭花瓣的萃取物，其中在該方法 中，該白花蝴蝶蘭花瓣的醇溶性萃取物是藉由將該殘餘物與乙醇混合後進行一超音波處理而被獲得。
7. 如請求項5或6的白花蝴蝶蘭花瓣的萃取物，其中在該方法中，該超音波處理是在一範圍落在10℃至50℃內的溫度下被進行。
8. 如請求項5或6的白花蝴蝶蘭花瓣的萃取物，其中在該方法中，在該超音波處理後可進一步進行一過濾處理。
9. 一種用以製備一白花蝴蝶蘭花瓣的萃取物的方法，其包含下列步驟：以超臨界CO₂來萃取白花蝴蝶蘭花瓣，藉此而得到一白花蝴蝶蘭花瓣的脂溶性萃取物以及一殘餘物。
10. 如請求項9的方法，它進一步包含下列步驟：以水來萃取該殘餘物，俾以得到一白花蝴蝶蘭花瓣的水溶性萃取物。
11. 如請求項9的方法，它進一步包含下列步驟：以乙醇來萃取該殘餘物，俾以得到一白花蝴蝶蘭花瓣的醇溶性萃取物。
12. 如請求項9至11中任一項的方法，其中該超臨界CO₂的萃取是在一範圍落在35℃至100℃內的溫度下以及一範圍落在1500psi至7250psi內的壓力下被進行。
13. 如請求項10的方法，其中該白花蝴蝶蘭花瓣的水溶性萃取物是藉由將該殘餘物與水混合後進行一超音波處理而被獲得。
14. 如請求項11的方法，其中該白花蝴蝶蘭花瓣的醇溶性 萃取物是藉由將該殘餘物與乙醇混合後進行一超音波處理而被獲得。
15. 如請求項13或14的方法，其中該超音波處理是在一範圍落在10℃至50℃內的溫度下被進行。
16. 如請求項13或14的方法，其中在該超音波處理後可進一步進行一過濾處理。
17. 一種用於美白皮膚的組成物，其包含有一如請求項1至3中任一項的白花蝴蝶蘭花瓣的萃取物。
18. 如請求項17的組成物，其包含有該白花蝴蝶蘭花瓣的脂溶性萃取物以及該白花蝴蝶蘭花瓣的水溶性萃取物。
19. 如請求項17的組成物，其包含有該白花蝴蝶蘭花瓣的醇溶性萃取物以及該白花蝴蝶蘭花瓣的水溶性萃取物。
20. 如請求項17的組成物，它是呈一供局部投藥的劑型。
21. 一種用於提升皮膚的保濕能力的組成物，其包含有一如請求項1至3中任一項的白花蝴蝶蘭花瓣的萃取物。
22. 如請求項21的組成物，其包含有該白花蝴蝶蘭花瓣的脂溶性萃取物以及該白花蝴蝶蘭花瓣的水溶性萃取物。
23. 如請求項21的組成物，其包含有該白花蝴蝶蘭花瓣的醇溶性萃取物以及該白花蝴蝶蘭花瓣的水溶性萃取物。
24. 如請求項21的組成物，它是呈一供局部投藥的劑型。
25. 一種用於抗-皮膚老化的組成物，其包含有一如請求項1至3中任一項的白花蝴蝶蘭花瓣的萃取物。
26. 如請求項25的組成物，其包含有該白花蝴蝶蘭花瓣的脂溶性萃取物以及該白花蝴蝶蘭花瓣的水溶性萃取物。
27. 如請求項25的組成物，其包含有該白花蝴蝶蘭花瓣的醇溶性萃取物以及該白花蝴蝶蘭花瓣的水溶性萃取物。
28. 如請求項25的組成物，它是呈一供局部投藥的劑型。
29. 一種包含有一如請求項1至3中任一項的白花蝴蝶蘭花瓣的萃取物之組成物供應用於製備一用來美白皮膚之醫藥品或化妝品的用途。
30. 如請求項29的用途，其中該組成物包含有該白花蝴蝶蘭花瓣的脂溶性萃取物以及該白花蝴蝶蘭花瓣的水溶性萃取物。
31. 如請求項29的用途，其中該組成物包含有該白花蝴蝶蘭花瓣的醇溶性萃取物以及該白花蝴蝶蘭花瓣的水溶性萃取物。
32. 如請求項29的用途，其中該醫藥品或化妝品是呈一供局部施用的形式。
33. 一種包含有一如請求項1至3中任一項的白花蝴蝶蘭花瓣的萃取物之組成物供應用於製備一用來提升皮膚的保濕能力之醫藥品或化妝品的用途。
34. 如請求項33的用途，其中該組成物包含有該白花蝴蝶蘭花瓣的脂溶性萃取物以及該白花蝴蝶蘭花瓣的水溶性萃取物。
35. 如請求項33的用途，其中該組成物包含有該白花蝴蝶蘭花瓣的醇溶性萃取物以及該白花蝴蝶蘭花瓣的水溶性萃取物。
36. 如請求項33的用途，其中該醫藥品或化妝品是呈一供 局部施用的形式。
37. 一種包含有一如請求項1至3中任一項的白花蝴蝶蘭花瓣的萃取物之組成物供應用於製備一用來抗-皮膚老化之醫藥品或化妝品的用途。
38. 如請求項37的用途，其中該組成物包含有該白花蝴蝶蘭花瓣的脂溶性萃取物以及該白花蝴蝶蘭花瓣的水溶性萃取物。
39. 如請求項37的用途，其中該組成物包含有該白花蝴蝶蘭花瓣的醇溶性萃取物以及該白花蝴蝶蘭花瓣的水溶性萃取物。
40. 如請求項37的用途，其中該醫藥品或化妝品是呈一供局部施用的形式。