CN115704805A - 一种双氯芬酸钠制剂中双氯芬酸钠含量及有关物质的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种双氯芬酸钠制剂中有关物质的检测方法，为解决双氯芬酸钠制剂中有关物质的检测问题，提供了一种便捷、高效、准确的检测方法，该方法能检测双氯芬酸钠制剂中有关物质的含量，从而有效保障用药安全，便于双氯芬酸钠制剂的质量控制，该方法便捷、高效、准确，在系统适用性、重复性、专属性、准确度方面完全符合中国药典方法验证的指导原则，可用于双氯芬酸钠制剂的质量控制。
Description
技术领域
本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种双氯芬酸钠制剂中双氯芬酸钠含量及有关物质的检测方法。
背景技术
双氯芬酸钠(Diclofenac Sodium)，化学名为2-[(2,6-二氯苯基)氨基]-苯乙酸钠，其分子式为C14H10Cl2NNaO2，分子量为318.13，其结构式如下：
,双氯芬酸钠是一种解热镇痛、非甾体类抗炎药，适用于缓解类风湿关节炎、骨关节炎、脊柱关节病、痛风性关节炎、风湿性关节炎等.
有关物质主要是在生产过程中带入的起始原料、中间体、聚合体、副反应产物，以及贮藏过程中的降解产物等,有关物质研究是药品质量研究中关键性的项目之一，其含量是反映药品纯度的直接指标,在双氯芬酸钠原料中可能存在的工艺杂质或降解杂质及结构式如下：杂质A：
，杂质B：
，杂质C：
，杂质D：
，杂质E：
，杂质F：
，在将双氯芬酸钠原料药制备成双氯芬酸钠制剂之后，从原料药中带入的这些杂质可能会存在于制剂当中，在对双氯芬酸钠制剂进行质量研究时，需要考虑以上6种由原料药带入的杂质以及其他未知的杂质，有必要开发一种能够广泛适用于双氯芬酸钠制剂中有关物质的研究方法。
现有的文献中，对双氯芬酸钠制剂中有关物质的检测使用的高效液相色谱条件，对杂质的分离较差，有文献使用超高效液相色谱检测双氯芬酸钠中的有关物质，对检测的仪器和色谱柱要求较高，检测成本较高。
本发明首次公开了用高效液相色谱法对双氯芬酸钠制剂中双氯芬酸钠含量及有关物质检测的方法，为解决双氯芬酸钠含量及有关物质的检测问题，提供了一种应用广泛、便捷、高效、准确的检测方法，该方法能检测双氯芬酸钠含量及有关物质的含量，从而有效保障用药安全，便于双氯芬酸钠制剂的质量控制。
发明内容
本发明提供一种双氯芬酸钠制剂中双氯芬酸钠含量及有关物质的检测方法，为解决双氯芬酸钠制剂的检测问题，提供了一种应用广泛、便捷、高效、准确的检测方法，该方法能检测双氯芬酸钠制剂中双氯芬酸钠含量及有关物质的含量，从而有效保障用药安全，便于双氯芬酸钠制剂的质量控制，该方法便捷、高效、准确，在系统适用性、重复性、专属性、准确度方面完全符合中国药典方法验证的指导原则，可用于双氯芬酸钠制剂的质量控制。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种双氯芬酸钠制剂中有关物质的检测方法，所述检测方法包括以下步骤：
（1）配制溶液，分别配制空白溶液、灵敏度溶液和供试品溶液。
（2）测定方法：采用液相色谱法测定双氯芬酸钠制剂中双氯芬酸钠含量及有关物质，待系统稳定后，分别进空白溶液，灵敏度溶液和供试品溶液，记录色谱图；
色谱条件如下:色谱柱：用辛基硅烷键合硅胶为填充剂，流速：1.2ml/min；检测波长：254nm；进样量：20μl；柱温：30℃；运行时间：30min，流动相以乙酸钠缓冲液：乙腈体系为流动相进行梯度洗脱。
进一步的，所述空白溶液为50%乙腈；
所述流动相为：流动相A：三水合乙酸钠缓冲液（用冰醋酸调节pH值至5.8)-乙腈（75：25）；流动相B：三水合乙酸钠缓冲液（用冰醋酸调节pH值至5.8)-乙腈（25：75）；所述灵敏度溶液：取适量对照品置于容量瓶中，用空白溶液稀释至刻度，摇匀； 所述供试品溶液：取适量双氯芬酸钠供试品，置于容量瓶中，加空白溶液溶解并稀释至刻度超声溶解，摇匀。
进一步的，所述色谱柱为Symmetry C8 Column 4.6 mm x250；5μm或效能相当色谱柱，所述梯度洗脱如下：
更优选的，本发明所述的双氯芬酸钠制剂中有关物质测定方法，包括以下步骤：
（1）配制溶液：空白溶液：量取500mL水与500mL乙腈，混匀，超声10min；
三水合乙酸钠缓冲液：取三水合乙酸钠约10.2g，用水溶解并稀释至1000mL，并用冰醋酸调节pH值至5.8后，用0.45μm的滤膜抽滤。
流动相A：量取750mL三水合乙酸钠缓冲液与250mL乙腈，混匀，超声10分钟；
流动相B：量取250mL三水合乙酸钠缓冲液与750mL乙腈，混匀，超声10分钟；
对照品储备液：取双氯芬酸钠对照品约25mg，精密称定，置25mL量瓶中，加空白溶液15mL，超声约5分钟使溶解，用空白溶液稀释至刻度，摇匀。（浓度：1.0mg/mL）
对照品溶液：精密量取对照品储备液5mL，置250mL量瓶中，用空白溶液稀释至刻度，摇匀，再精密量取5mL，置50mL量瓶中，用空白溶液稀释至刻度，摇匀。（浓度：2μg/mL）
灵敏度溶液：量取对照品储备液液5mL，置250mL量瓶中，用空白溶液稀释至刻度，摇匀，再精密量取5mL，置200mL量瓶中，用空白溶液稀释至刻度，摇匀。（浓度：0.5μg/mL）
供试品溶液：取供试品适量置于500mL量瓶中，加空白溶液约350mL，超声30分钟使溶解，冷却至室温后，用空白溶液稀释至刻度，摇匀，离心（转速5000 rpm，10分钟）。（浓度1mg/mL）。
（2）色谱条件：
仪器：高效液相色谱仪、分析天平、pH计；
色谱柱：辛基硅烷键合硅胶为填充剂（Symmetry C8 Column 4.6 mm x250；5μm或效能相当色谱柱）；
流速：1.2ml/min； 检测波长：254nm；
进样量：20μl； 柱温：30℃；
运行时间：30min；
流动相A：三水合乙酸钠缓冲液（用冰醋酸调节pH值至5.8)-乙腈（75：25）
流动相B：三水合乙酸钠缓冲液（用冰醋酸调节pH值至5.8)-乙腈（25：75）
洗脱方式：
（3）测定方法：
待系统稳定后，进空白溶液1针，灵敏度溶液1针，对照品溶液6针，供试品溶液1针，记录色谱图。
式中：AT—有关物质供试品溶液中杂质峰面积；
AS—6针有关物质对照品溶液的平均峰面积；
WS—有关物质对照品溶液的取样量（单位：mg）；
WT—有关物质供试品溶液的取样量（单位：mg）；
RRF—相对响应因子；（未知杂质的RRF=1）
Avg.Wt.—供试品的平均重量；
P—对照品的含量；
L—供试品的规格（100mg）
要求：①灵敏度溶液中双氯芬酸钠色谱峰的信噪比（S/N）应不小于10；
②6针对照品溶液主峰峰面积RSD≤5.0%；
③对照品溶液中双氯芬酸钠峰拖尾因子应不大于2.0；
更优选的，本发明所述的双氯芬酸钠制剂中双氯芬酸钠含量的检测方法如下：
色谱条件同有关物质检测的色谱条件相同；
溶液配制如下：
对照品储备液：取双氯芬酸钠对照品约25mg，精密称定，置25mL量瓶中，加空白溶液15mL，超声约5分钟使溶解，用空白溶液稀释至刻度，摇匀。（浓度：1.0mg/mL）
对照品溶液：精密量取对照品储备液5mL，置250mL量瓶中，用空白溶液稀释至刻度，摇匀。（浓度：20μg/mL）
供试品溶液：取供试品适量，置500mL量瓶中，加空白溶液约350mL，超声约30分钟使溶解，冷却至室温后，用空白溶液稀释至刻度，摇匀，离心（转速5000 rpm，10分钟），精密量取上清液5mL，置250mL量瓶中，用空白溶液稀释至刻度，摇匀。（浓度20μg/mL）
进样程序：待仪器稳定后依次进样，空白溶液1针[必要时，可进多针（1～3针）]，对照品溶液6针，供试品溶液各1针，记录色谱图。
要求：（1）理论板数按双氯芬酸钠峰计算不低于2000，拖尾因子应不大于2.0；
（2）5针对照品溶液的主峰峰面积RSD≤2.0%；6针及以上对照品溶液的主峰峰面积RSD≤3.0%；
（3）对照品溶液回收率应为98%~102%。
计算公式：
结果判断：含双氯芬酸钠（C14H10Cl2NNaO2）应为标示量的90.0%～110.0%。
本发明公开了双氯芬酸钠制剂中双氯芬酸钠含量及有关物质的检测方法，本发明为解决双氯芬酸钠制剂中双氯芬酸钠含量及有关物质的检测问题，提供了一种便捷、高效、准确的检测方法，该方法能检测双氯芬酸钠制剂中双氯芬酸钠含量及有关物质的含量，从而有效保障用药安全。
具体实施方式
以下通过实施例进一步说明本发明，但不作为对本发明的限制。
实施例1：
（1）配制溶液：空白溶液：量取500mL水与500mL乙腈，混匀，超声10min；
三水合乙酸钠缓冲液：取三水合乙酸钠约10.2g，用水溶解并稀释至1000mL，并用冰醋酸调节pH值至5.8后，用0.45μm的滤膜抽滤。
流动相A：量取750mL三水合乙酸钠缓冲液与250mL乙腈，混匀，超声10分钟；
流动相B：量取250mL三水合乙酸钠缓冲液与750mL乙腈，混匀，超声10分钟；
对照品储备液：取双氯芬酸钠对照品约25mg，精密称定，置25mL量瓶中，加空白溶液15mL，超声约5分钟使溶解，用空白溶液稀释至刻度，摇匀。（浓度：1.0mg/mL）
对照品溶液：精密量取对照品储备液5mL，置250mL量瓶中，用空白溶液稀释至刻度，摇匀，再精密量取5mL，置50mL量瓶中，用空白溶液稀释至刻度，摇匀。（浓度：2μg/mL）
灵敏度溶液：量取对照品储备液液5mL，置250mL量瓶中，用空白溶液稀释至刻度，摇匀，再精密量取5mL，置200mL量瓶中，用空白溶液稀释至刻度，摇匀。（浓度：0.5μg/mL）
供试品溶液：取供试品适量置于500mL量瓶中，加空白溶液约350mL，超声30分钟使溶解，冷却至室温后，用空白溶液稀释至刻度，摇匀，离心（转速5000 rpm，10分钟）。（浓度1mg/mL）。
杂质A、B、C、D、E、F储备液：分别取杂质A、B、C、D、E、F对照品10mg，置100ml量瓶中，加空白溶液70ml，超声约5分钟溶解，用空白溶液稀释至刻度，摇匀。（浓度：0.1mg/mL）
杂质混合储备液：取杂质A、B、C、D、E、F储备液各1ml至50ml 容量瓶中，加入空白溶液稀释到刻度，定容，摇匀。（杂质A、B、C、D、E、F浓度：2ug/ml）
系统适用性溶液：称取双氯芬酸钠对照品约50mg，置50ml量瓶中，加空白溶液30ml，超声约5分钟溶解，精密加入杂质A、B、C、D、E、F储备液各1ml置同一50ml的量瓶中，用空白溶液稀释至刻度，摇匀（双氯芬酸钠浓度：1mg/ml，杂质A、B、C、D、E、F浓度：2ug/ml）
（2）色谱条件：
仪器：高效液相色谱仪、分析天平、pH计；
色谱柱：辛基硅烷键合硅胶为填充剂（Symmetry C8 Column 4.6 mm x250；5μm或效能相当色谱柱）；
流速：1.2ml/min； 检测波长：254nm；
进样量：20μl； 柱温：30℃；
运行时间：30min；
流动相A：三水合乙酸钠缓冲液（用冰醋酸调节pH值至5.8)-乙腈（75：25）
流动相B：三水合乙酸钠缓冲液（用冰醋酸调节pH值至5.8)-乙腈（25：75）
洗脱方式：
（1）测定方法：
待系统稳定后，进空白溶液1针，灵敏度溶液1针，对照品溶液6针，供试品溶液1针，记录色谱图。
式中：AT—供试品溶液中各杂质峰面积；
AS—6针对照品溶液的平均峰面积；
WS—对照品溶液的取样量（单位：mg）；
WT—供试品溶液的取样量（单位：mg）；
RRF—相对响应因子；
Avg.Wt.—供试品的平均重量；
P—对照品的含量；
L—供试品的规格（100mg）
要求：①灵敏度溶液中双氯芬酸钠色谱峰的信噪比（S/N）应不小于10；
②6针对照品溶液主峰峰面积RSD≤5.0%；
③对照品溶液中双氯芬酸钠峰拖尾因子应不大于2.0；
实施例2：系统适用性
系统适用性是通过测定灵敏度溶液中主峰的S/N值及6针对照品溶液中主峰峰面积的RSD而实现的，要求灵敏度溶液中主峰的S/N值应≥10，6针对照品溶液中主峰峰面积的RSD应≤2.0%，对照品溶液色谱图中理论塔板数以双氯芬酸钠峰计算应不得低于2000，主峰拖尾因子应不大于2.0，本次灵敏度溶液中主峰的S/N值为17，6针对照品溶液主峰峰面积RSD%为0.8%，对照品溶液色谱图中理论塔板数以双氯芬酸钠峰计算为66665，主峰拖尾因子为1.1，符合要求。
实施例3：专属性
方法的专属性主要考察空白溶液对检测有无干扰及选择性溶液中各组分与相邻杂质峰之间的分离度而实现的，要求空白溶液对检测应无干扰，选择性溶液中各组分与相邻杂质峰之间的分离度应不小于1.5。本次检测空白溶液对检测无干扰。
实施例4：精密度（重复性）
按测试方法制备并分析双氯芬酸钠制剂中双氯芬酸钠及有关物质的含量，重复测试6次，计算测定值和RSD。
精密度（中间精密度）
实施例5：准确度(回收率)
通过将一定量的双氯芬酸钠对照品及杂质对照品加入至供试品溶液中，以得到20%、50%、100%、150% 浓度水平的回收率测试溶液，回收率测试溶液一式三份，按照上述色谱条件分别取20ul注入液相色谱仪，记录色谱图，并计算回收率，双氯芬酸钠含量在98%～102%，RSD≤2.0%，各杂质含量回收率在80%～120%，RSD≤15.0%。
实施例6：线性
该方法的线性是通过制备涵盖 0.25 ppm 至 100 ppm（相当于供试品溶液0.03%至 0.3%，）范围的标准溶液来证明，同时考虑未知杂质水平，并将峰面积与浓度作线性回归图，计算相关系数和方法偏差（% y-截距），结果显示各杂质均满足验收标准，在制备0.5mg/ml 的储备溶液并进一步稀释以得到 0.25 ppm 至 100 ppm 的范围的各线性溶液，取各线性溶液各20ul，注入液相色谱仪分析并用于建立线性回归方程。
实施例7：稳定性
分别考察含量对照品溶液和供试品溶液在室温条件放置0小时、36小时、56小时的溶液稳定性，有关物质（对照品溶液、加标供试品溶液）分别在室温和冷藏（2-8℃）下放置24时的溶液稳定性，要求含量对照品溶液和供试品溶液在室温下放置一段时间内，对照品溶液的回收率应在98.0%～102.0%，供试品溶液含量的差值±2.0%；有关物质（对照品溶液、加标供试品溶液）各组分含量相对偏差（%）±5%。结果显示含量对照品溶液在56小时内溶液稳定性良好，供试品溶液在36小时内溶液稳定性良好；有关物质（对照品溶液、加标供试品溶液）在室温（25℃）及冷藏（2-8℃）条件下20小时内溶液稳定性良好。
表8为对照品溶液的稳定性测定结果。
表9为供试品溶液的稳定性测定结果。
Claims (3)
1.一种双氯芬酸钠制剂中双氯芬酸钠含量及有关物质的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：
（1）配制溶液，分别配制空白溶液、灵敏度溶液和供试品溶液；
（2）测定方法：采用液相色谱法测定双氯芬酸钠制剂中双氯芬酸钠含量及有关物质，待系统稳定后，分别进空白溶液，灵敏度溶液和供试品溶液，记录色谱图；
色谱条件如下:色谱柱：用辛基硅烷键合硅胶为填充剂，流速：1.2ml/min；检测波长：254nm；进样量：20μl；柱温：30℃；运行时间：30min，流动相以乙酸钠缓冲液：乙腈体系为流动相进行梯度洗脱。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：
所述空白溶液为50%乙腈；
所述流动相为：
流动相A：三水合乙酸钠缓冲液（用冰醋酸调节pH值至5.8)-乙腈（75：25）
流动相B：三水合乙酸钠缓冲液（用冰醋酸调节pH值至5.8)-乙腈（25：75）；
所述灵敏度溶液：取适量对照品置于容量瓶中，用空白溶液稀释至刻度，摇匀；
所述供试品溶液：取适量双氯芬酸钠供试品，置于容量瓶中，加空白溶液溶解并稀释至刻度超声溶解，摇匀。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述色谱柱为Symmetry C8 Column 4.6mm x250；5μm或效能相当色谱柱，所述梯度洗脱如下：
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