CN115634283A - 一种抗衰老复方生物制剂的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种抗衰老复方生物制剂的制备方法,包括将动物经清洗宰杀、匀浆冷冻、发酵、沉降分离、酶解、超滤、层析及冻干制得功能性动物离体细胞因子、蛋白多肽浓缩干粉,将原产地配伍中药材经清洗晾干、萃取、超滤、修饰后配液制得中药配伍原药制剂,以及将功能性动物离体细胞因子、蛋白多肽浓缩干粉与中药配伍原药制剂进行复方,得到抗衰老复方生物制剂。制得的抗衰老复方生物制剂可使衰老性疾病血液免疫因子改善显效率达100%,血液SOD酶活性提高率平均值达69.21%,且肤色、体力、视力、听力、肺活量、皮肤弹性等方面有明显改善,此外,对三十岁以上青年、壮年、中年人群可起到治未病的作用。
Description
技术领域
本发明涉及抗衰制剂技术领域,具体涉及一种抗衰老复方生物制剂的制备方法。
背景技术
人体内各种各样的生长因子可以促进细胞的生长、修复并补充营养。当人体组织由于受伤、疾病或衰老的原因而遭受损害时,人类生长素即刺激生长因子产生,以修复损害。
细胞生长因子是一种多功能强力细胞因子,对促进纤维细胞的代谢和胶原蛋白的形成发挥着重要功能。细胞生长因子可以促进皮肤组织的生长繁殖,它通过与细胞表面特异受体结合,调控皮肤上皮、内皮和基质细胞的分裂、繁殖和生长分化,促进细胞代谢,增强氧化作用;能促进皮肤损伤有关细胞的迅速生长繁殖,并调节细胞间基质的合成、分泌及分解;能促进角质层细胞的再生,加速皮肤角质层和基质层的修复,促进人体皮肤细胞的生长;能增强皮肤细胞的蛋白质合成和细胞代谢,具有延缓皮肤细胞衰老、促进表皮细胞的修复和生长作用,使皮肤光滑丰润。
发明内容
针对上述不足,本发明的目的在于,提供一种抗衰老复方生物制剂的制备方法,制得的抗衰老复方生物制剂可有效治疗衰老性疾病,并使亚健康人群恢复健康。
为实现上述目的,本发明所提供的技术方案是:
一种抗衰老复方生物制剂的制备方法,包括以下步骤:
S1功能性动物离体细胞因子、蛋白多肽浓缩干粉的制备:将动物经清洗宰杀、匀浆冷冻、发酵、沉降分离、酶解、超滤、层析及冻干制得功能性动物离体细胞因子、蛋白多肽浓缩干粉;
S2中药配伍原药制剂的制备:将原产地配伍中药材经清洗晾干、萃取、超滤、修饰后配液制得中药配伍原药制剂;
S3复方:将步骤S1制得的功能性动物离体细胞因子、蛋白多肽浓缩干粉与步骤S2制得的中药配伍原药制剂进行复方。
优选的,所述步骤S1的具体过程为:
S11:将乳猪用无热源水整体冲洗干净后宰杀;
S12:分离出所需部分猪肉组织,匀浆冷冻备用;
S13:将匀浆冷冻后的猪肉组织进行发酵,并经沉降分离得上清液;
S14:将上清液置入酶解反应釜中,用胰蛋白酶进行酶解得水解液;
S15:将水解液通过分子量膜进行超滤,小分子物质透过得透过液;
S16:将透过液进行离子树脂柱层析得生物制剂峰物质;
S17:将所得峰物质进行冻干得冻干原粉,备用。
优选的,所述乳猪为有机养殖至30~40kg的乳猪。
优选的,所述步骤S13中,在-20℃条件下将匀浆冷冻猪肉组织进行发酵、沉降分离得上清液,沉降分离的离心转速为10000~15000r/min,离心时间为0.5~1h。
优选的,所述步骤S14中,胰蛋白酶用量为:4000~6000单位/kg,酶解时长为1.5h,酶解温度为35~45℃。
优选的,所述步骤S17中,在-60℃下进行冻干。
优选的,所述步骤S2的具体过程为:
S21:选择原产地配伍中药材,清洗晾干;
S22:使用超临界萃取得单体中药液;
S23:经澄清药液、膜超滤后得超滤透过液;
S24:对透过液进行修饰;
S25:配液得中药配伍原药制剂。
优选的,所述中药材包括五味子、石斛和人参。
本发明的有益效果为:本发明从哺乳动物离体细胞中分离出生物活性因子,包括多肽、蛋白质、酶活性物质及免疫代谢因子,并以免疫代谢因子为主要成分,与其他生物提取物、中药制剂复方制得抗衰老复方生物制剂。所得产品可快速激活体内休眠干细胞,并促使其分化,同时调节机体内微环境,为干细胞提供有利的生长条件,同时靶向性地作用于人体内的受损细胞,使受损细胞被重新激活进行正常细胞分裂,进而使有机体组织迅速恢复提高各器官、系统的原有功能,并长期保持稳定;尤其是对衰老性疾病患者,如肿瘤、肝炎、肺结核,用药后,血液免疫因子(T细胞亚群)的改善显效率为100%,血液SOD酶活性的提高率平均值为69.21%,并且用药者在肤色、体力、视力、听力、肺活量、皮肤弹性等方面有明显改善。
此外,本发明所制得的抗衰老复方生物制剂不仅适宜治疗老龄、高龄濒危人群的各种衰老性疾病,同时也适宜三十岁以上的青年、中年、壮年人群的未病先治,达到“治未病”的目的。
具体实施方式
为了使本发明的发明目的、技术方案和有益效果更加清晰,以下结合实施例对本发明进行进一步详细说明。应当理解的是,本说明书中描述的实施例仅仅是为了解释本发明,并非为了限定本发明。
为了简便,本文仅明确地公开了一些数值范围。然而,任意下限可以与任何上限组合形成未明确记载的范围;以及任意下限可以与其它下限组合形成未明确记载的范围,同样任意上限可以与任意其它上限组合形成未明确记载的范围。此外,尽管未明确记载,但是范围端点间的每个点或单个数值都包含在该范围内。因而,每个点或单个数值可以作为自身的下限或上限与任意其它点或单个数值组合或与其它下限或上限组合形成未明确记载的范围。
在本文的描述中,需要说明的是,除非另有说明,“以上”、“以下”为包含本数,“一种抗衰老复方生物制剂的制备方法或多种”中的“多种”的含义为两种以上,“一个或多个”中的“多个”的含义是两个以上。
本发明的上述发明内容并不意欲描述本发明中的每个公开的实施方式或每种实现方式。如下描述更具体地举例说明示例性实施方式。在整篇申请中的多处,通过一系列实施例提供了指导,这些实施例可以以各种组合形式使用。在各个实施例中,列举仅作为代表性组,不应解释为穷举。
本发明制得的产品能激活机体整体上处于休眠状态下的各种干细胞群,以替代更新原有的因衰老或病理性等因素所造成组织细胞的衰退和老化,达到组织器官功能的恢复,增强组织器官的活性和原有的抗耐受力,改善因衰老等因素所造成的细胞与细胞间、细胞与细胞外基质间的信息传递,增强和加快各组织细胞的新老更替等作用。
当细胞因子不断地满足皮肤需要时,皮肤的健康就会得到保证,皮肤老化问题就可以被有效地预防,皮肤就可以重新回到更年轻的状态。这种转化和赋活能力,就好像是皮肤的不同层次被许多新生的细胞所充满,增强皮肤的活力。
细胞因子还可以在体内分化为内胚层、中胚层以及外胚层3个胚层来源组织的细胞。干细胞输入宿主体内后,可以归巢在特定部位,在微环境影响下能向正确表型的细胞分化,成为心肌细胞、肝细胞、肾细胞、胰岛细胞、神经细胞、皮肤细胞、脂肪细胞、肌肉细胞、骨细胞、软骨细胞、肌腱细胞等,达到抗衰老的目的。
本发明制得的产品完整保留了动物离体干细胞中的分子生物活性、分子结构及构型,直接参与人体组织代谢反应,提高增加机体免疫力,恢复免疫系统对突变细胞的监视、杀灭作用;能抑制肿瘤细胞的糖酶解,阻止肿瘤细胞的扩展和灭杀癌变,使癌变细胞恢复为正常细胞。
对内分泌系统的作用:促进人体荷尔蒙生长,加强各种酶、荷尔蒙的分泌,增强肾功能,加强水的代谢,帮助体内排毒。
对生殖系统的作用:刺激性激素分泌,强壮性器官肌肉组织,加强性器官神经耐力,打开微循环,加快性器官充血。
对免疫系统的作用:刺激胸腺再生,加快淋巴T细胞、B细胞、吞噬细胞的生成,提高免疫功能,吞噬病毒病菌和癌细胞,治疗癌症和肿瘤。
对神经系统的作用:加快恢复神经系统功能,促进脑神经细胞、树突生成,逆转脑萎缩,加快深度睡眠,治疗老年性痴呆、神经衰弱、记忆力减退、神经性头痛等。
一、对衰老性疾病患者临床分析
本发明选择医院已经确诊的病毒性肝炎病例100例,结核病例100例,肿瘤病例100例,病例按1:1的比例随机分为用药组和对照组。对照组按常规治疗,用药组在常规治疗的基础上,增加使用本发明制得的抗衰老复方生物制剂进行治疗。临床试验结果表明,使用抗衰老复方生物制剂2-3个疗程后,经检查患者T细胞亚群中CD3、CD4、CD4/CD8均有显著增高(P<0.01),SOD活性明细增高,患者一般病情明显改善。试验结果充分证明本发明制得的抗衰老复方生物制剂对病毒性肝炎、结核病和肿瘤等疾病具有良好的治疗和辅助治疗作用。
对照组病例按常规治疗,用药组病例在常规治疗的基础上,使用抗衰老复方生物制剂2g/50ml一次静脉注射,每天一次,五天为一个治疗疗程。疗程结束后做相应的检查,并将检测结果与用药前的检测结果和对照组的检测结果做相对应的比较。
治疗效果分析:
(1)用药前后T细胞亚群指标变化情况分析
细胞亚群指标正常参考值:
CD3(成熟T细胞)60-80%;
CD4(辅助T细胞)35-55%;
CD8(抑制性T细胞)20-30%;
CD4/CD8:1.5-2.0。
表1结核病例用药前后T细胞亚群指标变化情况比较表
治疗组用药后T细胞亚群有显著性改变:P<0.01。
表2临床病毒性肝炎病例用药前后T细胞亚群
治疗组用药后T细胞亚群有显著性改变:P<0.01。
表3临床肿瘤病例用药前后T细胞亚群指标变化情况对比表
治疗组用药后T细胞亚群有显著性改变:P<0.01。
从表1、2、3的结果显示使用抗衰老复方生物制剂后T细胞亚群指标变化明显,各组病例CD3、CD4均明显增高,差异非常明显(P<0.01)。临床试验验证表明使用抗衰老复方生物制剂后病毒性肝炎、结核、肿瘤病例的CD3、CD4、CD4/CD8均恢复到正常范围,证明制得的抗衰老复方生物制剂有显著增高机体免疫功能的作用。各组病例使用该产品后CD8变化不大,表明制得的抗衰老复方生物制剂对机体免疫功能具有双向调节作用。
(2)临床用药前后各组病例红细胞超氧化歧化酶活性变化情况红细胞超氧化物歧化酶活性正常参考值,比色法:2500-5000u/ghb。
表4临床用药前后红细胞超氧化歧化酶活性变化情况
各用药组前后SOD活性都有显著性差异:P<0.01。
从表4可知,用药组红细胞氧化物歧化酶活性均有不同程度增高,与对照组相比有显著性差异,P<0.01,肿瘤病用药组增高更加明显,达76.26%,统计结果表明,使用本发明制得的抗衰老复方生物制剂后,各组病例的红细胞超氧化物歧化酶活性明显增高。
(3)用药前后各组病例临床症状体征变化情况
表5用药前后各组病例临床症状体征变化情况
从表5可知,抗衰老复方生物制剂治疗组与各对照组相比,能有效改善患者一般症状及疾病典型临床症状及体征,有效促进疾病痊愈及机体恢复。
(4)典型案例
1、男,55岁,临床诊断为左肺空洞型肺结核伴糖尿病,X线检查:左肺空洞直径2.5cm,结核杆菌培养[t],接受常规抗结核治疗无效,常规治疗辅以抗衰老复方生物制剂,每日静脉注射2000mg/日,30天后,症状缓解,X线检查空洞愈合,结核杆菌培养[—],淋巴细胞亚群指标CD3、CD4、CD8分别由用药前的25%、17%、15%升至61%、38%、20%;血液SOD酶活性由用药前的2010u/gHb升至3250u/gHb,痊愈。
2、男,37岁,临床诊断为肝炎,伴黄疸,肝炎已持续4年左右,先后多次治疗无效,后开始使用常规治疗,并辅以抗衰老复方生物制剂,每日静脉注射2000mg/日,15天后黄疸明显消退,ALT由135降到18,Bilit由122.4降至35.9,Bilid由32.9降至19.1,食欲体重大增,肝炎二对半检查E抗体为阳性,其余指标转阴,淋巴细胞亚群指标CD3、CD4、CD8分别由用药前的30%、18%、19%上升至用药后的68%、45%、26%,指标全部恢复正常;血液SOD酶活性由用药前的2210u/gHb升至3980u/gHb,痊愈。
3、男,60岁,临床诊断为原发弥漫性巨快型晚期肝癌。常规治疗并辅以抗衰老复方生物制剂,静脉注射2000mg/日,40天后,X光显示肿块缩小近一半,食欲增加,体重增加4Kg,CD3、CD4、CD8分别由用药前的47%、23%、10%上升至用药后的60%、39%、25%,血液SOD酶活性由用药前的1860u/gHb升至3470u/gHb,病情恶化得到基本控制。
二、对亚健康人群临床分析
本发明选择社会亚健康人群100例,按1:1的比例随机分为用药组和对照组,对照组使用氨基酸注射液,用药组使用抗衰老复方生物制剂,按时间段分组进行。试验结果表明,使用抗衰老复方生物制剂一个疗程后,血液T细胞亚群CD3、CD4、CD4/CD8均有显著增高(P<0.01),血液SOD酶活性成倍大幅度提高;其它对外观体能指标得到明显年轻化改善,试验结果显示抗衰老复方生物制剂对亚健康人群有很好的生物抗衰延寿作用。
试验方式:
对照组静脉注入复合氨基酸50ml(西南制药三厂生产),用药组静脉注射抗衰老复方生物制剂2g/50ml,隔日一次,三次为一个疗程。
在使用抗衰老复方生物制剂之前,用单体克隆抗体APPAAP法(碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶桥联酶标法)检测血液T细胞亚群指标,在完成抗衰老复方生物制剂一个疗程后,重复检测一次,以作对比。
在使用抗衰老复方生物制剂前,所有人员采用邻苯三酚自氧化法测定血液SOD酶活性,用药一个疗程后重复测一次,以作对比。
结果分析:
生物抗衰疗效判断标准如下:
显效:T细胞亚群指标恢复到正常范围;
有效:T细胞亚群指标恢复到15%以上;
无效:T细胞亚群指标恢复不到15%。
红细胞超氧化物歧化酶活性判断标准:
显效:超氧化物歧化酶活性增强率≥50%;
有效:超氧化物歧化酶活性增强率≥20%;
无效:超氧化歧化酶活性增强率≤10%。
T细胞亚群指标正常参考值:
CD3(成熟T细胞)60-80%;
CD4(辅助T细胞)35-55%;
CD8(抑制性T细胞)20-30%;
CD4/CD8:1.5-2.0。
(1)亚健康人群用药前后血液T细胞亚群指标分析
表1亚健康人群用药前后血液T细胞亚群指标
治疗组用药前后T细胞亚群有显著的改变:P<0.01。
由该表可知,用药前后变化明显,CD3、CD4明显增高,差异非常显著(P<0.01);CD8变化不明显,但CD4/CD8明显增高。其结果表明,使用抗衰老复方生物制剂后,CD3、CD4、CD4/CD8功能均在正常值范围,其有效率为100%。
(2)亚健康人群用药前后血液SOD酶活性变化
表2亚健康人群用药前后红细胞超氧化物歧化酶活性变化情况
组别 | 用药前 | 用药后 | 变化率(%) |
对照组50例(平均值) | 2640 | 2698 | 2.29 |
用药组50例(平均值) | 2314 | 3956 | 71 |
用药前后SOD酶活性有显著差异:P<0.01。
(3)用药前后亚健康人群体征变化情况
试验结果表明,用药组和对照组相比,能有效改善肤色、体力、视力、听力、肺活量、皮肤弹性、食欲、睡眠等外观体征。
(4)典型案例
1、男,61岁,用药前有严惩衰老体征,体弱多病,面黄肌瘦,长期咳嗽,患有慢性支气管炎,食欲、睡眠差,神经衰弱,怕过冬季,基本丧失劳动能力;使用抗衰老复方生物制剂2g/50ml×5×2次后,食欲、睡眠、视力、听力明显改善,精神变好,皮肤有光泽、弹性增强,咳嗽、哮喘遇冷也未复发,在短期内恢复了健康体质。
下述实施例更具体地描述了本发明公开的内容,这些实施例仅仅用于阐述性说明,因为在本发明公开内容的范围内进行各种修改和变化对本领域技术人员来说是明显的。除非另有声明,以下实施例中所报道的所有份、百分比、和比值都是基于重量计,而且实施例中使用的所有试剂都可商购获得或是按照常规方法进行合成获得,并且可直接使用而无需进一步处理,以及实施例中使用的仪器均可商购获得。
实施例1:
一种抗衰老复方生物制剂的制备方法,包括以下步骤:
S1功能性动物离体细胞因子、蛋白多肽浓缩干粉的制备:
S11:将乳猪有机养殖至30~40kg,然后用无热源水整体冲洗干净后宰杀;
S12:分离出所需部分猪肉组织,匀浆冷冻备用;
S13:在-20℃条件下,将匀浆冷冻后的猪肉组织进行发酵,并经沉降分离得上清液,沉降分离的离心转速为10000r/min,离心时间为1h;
S14:将上清液置入酶解反应釜中,用胰蛋白酶进行酶解得水解液,胰蛋白酶用量为:4000单位/kg,酶解时长为1.5h,酶解温度为45℃;
S15:将水解液通过10000分子量膜进行超滤,小分子物质透过得透过液;
S16:将透过液进行离子树脂柱层析得生物制剂峰物质;
S17:将所得峰物质在-60℃下进行冻干得冻干原粉,备用。
S2中药配伍原药制剂的制备:
S21:选择原产地配伍中药材,包括五味子、石斛和人参,清洗晾干;
S22:使用超临界萃取得单体中药液;
S23:经澄清药液、膜超滤后得超滤透过液;
S24:对透过液进行修饰;
S25:配液得中药配伍原药制剂。
S3复方:将步骤S1制得的功能性动物离体细胞因子、蛋白多肽浓缩干粉与步骤S2制得的重要配伍原药制剂进行复方。
实施例2:
本实施例与实施例1类似,不同之处在于:
沉降分离的离心转速为15000r/min,离心时间为0.5h;
酶解过程中,胰蛋白酶的用量为6000单位/kg,酶解时长为1.5h,酶解温度为35℃。
实施例3:
本实施例与实施例1类似,不同之处在于:
沉降分离的离心转速为12000r/min,离心时间为0.7h;
酶解过程中,胰蛋白酶用量为5000单位/kg,酶解时长为1.5h,酶解温度为40℃。
实施例4:
本实施例与实施例1类似,不同之处在于:本实施例以乳牛或乳羊为原材料制备功能性动物离体细胞因子、蛋白多肽浓缩干粉。
以上所述,仅为本发明的具体实施方式,但本发明的保护范围并不局限于此,任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内,可轻易想到各种等效的修改或替换,这些修改或替换都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此,本发明的保护范围应以权利要求的保护范围为准。
Claims (8)
1.一种抗衰老复方生物制剂的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
S1功能性动物离体细胞因子、蛋白多肽浓缩干粉的制备:将动物经清洗宰杀、匀浆冷冻、发酵、沉降分离、酶解、超滤、层析及冻干制得功能性动物离体细胞因子、蛋白多肽浓缩干粉;
S2中药配伍原药制剂的制备:将原产地配伍中药材经清洗晾干、萃取、超滤、修饰后配液制得中药配伍原药制剂;
S3复方:将步骤S1制得的功能性动物离体细胞因子、蛋白多肽浓缩干粉与步骤S2制得的中药配伍原药制剂进行复方。
2.如权利要求1所述的一种抗衰老复方生物制剂的制备方法,其特征在于:所述步骤S1的具体过程为:
S11:将乳猪用无热源水整体冲洗干净后宰杀;
S12:分离出所需部分猪肉组织,匀浆冷冻备用;
S13:将匀浆冷冻后的猪肉组织进行发酵,并经沉降分离得上清液;
S14:将上清液置入酶解反应釜中,用胰蛋白酶进行酶解得水解液;
S15:将水解液通过分子量膜进行超滤,小分子物质透过得透过液;
S16:将透过液进行离子树脂柱层析得生物制剂峰物质;
S17:将所得峰物质进行冻干得冻干原粉,备用。
3.如权利要求2所述的一种抗衰老复方生物制剂的制备方法,其特征在于:所述乳猪为有机养殖至30~40kg的乳猪。
4.如权利要求2所述的一种抗衰老复方生物制剂的制备方法,其特征在于:所述步骤S13中,在-20℃条件下将匀浆冷冻猪肉组织进行发酵、沉降分离得上清液,沉降分离的离心转速为10000~15000r/min,离心时间为0.5~1h。
5.如权利要求2所述的一种抗衰老复方生物制剂的制备方法,其特征在于:所述步骤S14中,胰蛋白酶用量为:4000~6000单位/kg,酶解时长为1.5h,酶解温度为35~45℃。
6.如权利要求2所述的一种抗衰老复方生物制剂的制备方法,其特征在于:所述步骤S17中,在-60℃下进行冻干。
7.如权利要求1所述的一种抗衰老复方生物制剂的制备方法,其特征在于:所述步骤S2的具体过程为:
S21:选择原产地配伍中药材,清洗晾干;
S22:使用超临界萃取得单体中药液;
S23:经澄清药液、膜超滤后得超滤透过液;
S24:对透过液进行修饰;
S25:配液得中药配伍原药制剂。
8.如权利要求7所述的一种抗衰老复方生物制剂的制备方法,其特征在于:所述中药材包括五味子、石斛和人参。
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