CN115598259B - 一种药物中dhp的检测方法 - Google Patents

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Abstract

本申请提供了一种药物中DHP的检测方法，分别取药物供试品和DHP对照品用N‑甲基吡咯烷酮溶液溶解，再加入超纯水和正己烷涡旋振荡，离心，取上清液过滤，取续滤液制得供试品溶液和对照品溶液；将供试品溶液和对照品溶液分别注入气相色谱‑质谱联用仪进行分析，采用标准曲线法计算供试品溶液中DHP的限度浓度。本申请通过N‑甲基吡咯烷酮溶液、超纯水和正己烷实现DHP在溶液中的液液萃取，解决DHP在气相色谱‑质谱联用检测方法中干扰和检测限难以达到要求的问题。

Description

一种药物中DHP的检测方法
技术领域
本申请属于药物分析技术领域，尤其涉及一种药物中DHP的检测方法。
背景技术
DHP（Dihydropyran），3,4-二氢-2H-吡喃，广泛用于羟基保护，常作为医药中间体，溶剂、有机合成中间体。DHP在医药产品中作为基因毒杂质的限度不高于15ppm。
根据DHP的理化特性可采用气相色谱-质谱联用的方法进行检测，然而，由于DHP的沸点较低，在气相色谱柱上的保留较弱，导致DHP的检测易受样品基质的干扰，同时由于DHP易溶于多数有机溶剂，对于多数原料药和制剂，直接采用有机溶剂溶解后上机检测，容易导致基线抬升，噪音变大，使得检测的灵敏度差、检测限高，检测限难以达到应用要求。
发明内容
有鉴于此，本申请提供了一种药物中DHP的检测方法，通过液液萃取进行富集，同时去除杂质干扰，解决DHP气质法的样品基质干扰和检测限难以达到要求的问题。
本申请的具体技术方案如下：
本申请提供一种药物中DHP的检测方法，包括如下步骤：
分别取药物供试品和DHP对照品用N-甲基吡咯烷酮溶液溶解，再加入超纯水和正己烷涡旋振荡，离心，取上清液过滤，取续滤液制得供试品溶液和对照品溶液；
将供试品溶液和对照品溶液分别注入气相色谱-质谱联用仪进行分析，采用标准曲线法计算供试品溶液中DHP的限度浓度。
进一步的，N-甲基吡咯烷酮溶液、超纯水和正己烷的体积比为1:（1~2）:1。
进一步的，气相色谱条件中色谱柱为中等极性气相色谱柱。
进一步的，气相色谱条件中升温程序为：起始温度40~60℃，以10~15℃/min的升温速率升至100~150℃，再以80~100℃/min的升温速率升至200~250℃。
进一步的，气相色谱条件中控制模式为恒定流量，进样模式为分流进样，分流比为（1~5）：1。
进一步的，气相色谱条件中进样口温度为200~240℃，流速为1~1.5 ml/min，进样量为1~10μL。
进一步的，质谱条件中离子源为EI，采集类型为SIM，定量离子为84，定性离子为83。
进一步的，质谱条件中离子源温度为220~250℃，传输线温度为220~250℃，四极杆温度为150℃。
本申请提供了一种药物中DHP的检测方法，分别取药物供试品和DHP对照品用N-甲基吡咯烷酮溶液溶解，再加入超纯水和正己烷涡旋振荡，离心，取上清液过滤，取续滤液制得供试品溶液和对照品溶液；将供试品溶液和对照品溶液分别注入气相色谱-质谱联用仪进行分析，采用标准曲线法计算供试品溶液中DHP的限度浓度。本申请通过N-甲基吡咯烷酮溶液、超纯水和正己烷实现DHP在溶液中的液液萃取，使待测成分从溶解度较低的水相转移至正己烷层，解决DHP在气相色谱-质谱联用检测方法中样品基质干扰和检测限难以达到要求的问题，通过对方法的专属性、线性、检测限、定量限、准确度和稳定性进行验证，确认该方法适用于测定药物中DHP的限度含量。
附图说明
为了更清楚地说明本申请实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本申请的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。
图1为本申请实施例中方法验证专属性验证结果谱图（供试品溶液）；
图2为本申请实施例中方法验证专属性验证结果谱图（对照品溶液）；
图3为本申请实施例中方法验证专属性验证结果谱图（加标供试品溶液）。
具体实施方式
为使得本申请的目的、特征、优点能够更加的明显和易懂，对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，下面所描述的实施例仅仅是本申请一部分实施例，而非全部的实施例。基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本申请保护的范围。
本申请实施例所使用的试剂和原料均为市售或自制。
本实施例提供一种药物中DHP的检测方法，操作步骤如下：
1、气相色谱条件：色谱柱：VF-624ms柱（30m×0.25mm×1.4μm）；进样口温度：220℃；流速：1.5ml/min；进样体积：1μL；控制模式：恒定流量；进样模式：分流，分流比2：1；载气：He；升温程序：起始温度40℃保持1min，以10℃/min的升温速率升至100℃，再以80℃/min的升温速率升至250℃保持2min。
2、质谱参数条件：采集类型：SIM；离子源：EI；传输线温度：250℃；四极杆温度：150℃；离子源温度：230℃；定量离子84，定性离子83。
3、溶液配制：空白溶剂：精密量取N-甲基吡咯烷酮2.00ml于15ml离心管中，再准确加入2.00ml超纯水、2.00ml正己烷，涡旋振荡2min，静置分层，取上清液，即得。
对照品溶液：精密称取DHP对照品约12mg，置于10ml容量瓶中，适量N-甲基吡咯烷酮溶液使溶解并稀释至刻度，摇匀，用N-甲基吡咯烷酮溶液进行梯度稀释得到系列浓度为25ng/ml（LOD）、47ng/ml（STD1）、157ng/ml（STD2）、630ng/ml（STD3）、1576ng/ml（STD4）、3153ng/ml（STD5）、4856ng/ml（STD6）和6307ng/ml（STD7）的对照品储备液。分别取对照品储备液1ml和1.00mlN-甲基吡咯烷酮置于15ml离心管中，再准确加入2.00ml超纯水、2.00ml正己烷，涡旋振荡2min，静置分层，取上清液，即得系列浓度为12ng/ml（LOD）、23ng/ml（STD1）、78ng/ml（STD2）、315ng/ml（STD3）、788ng/ml（STD4）、1576ng/ml（STD5）、2428ng/ml（STD6）和3153ng/ml（STD7）的对照品溶液。
供试品溶液：称取供试品粉末约0.25g，置于15ml离心管中，准确加入2.00mlN-甲基吡咯烷酮溶液，涡旋至样品完全溶解，再准确加入2.00ml超纯水、2.00ml正己烷，涡旋振荡2min，离心5min（4000r/min），取上清液过滤，取续滤液。
加标供试品溶液：精密称取供试品粉末约0.25g，置于15ml离心管中，准确加入1.00ml的STD5对照品储备液和1.00ml N-甲基吡咯烷酮溶液，涡旋振荡至样品完全溶解，再准确加入2.00ml超纯水、2.00ml正己烷，涡旋振荡2min，离心5min（4000r/min），取上清液过滤，取续滤液。
4、方法验证及结果：
专属性：分别取空白溶剂、供试品溶液、STD5对照品溶液和加标供试品溶液按照色谱条件和质谱条件进行分析。结果表明，空白溶液色谱图中均未检出目标峰，对检测无干扰；供试品溶液色谱图中目标峰与相邻峰的分离度大于1.5（如图1所示）；对照品溶液色谱图中显示目标峰，且与峰面积大于LOQ的相邻峰分离度均大于1.5（如图2所示）；加标供试品溶液色谱图中均显示目标峰，且与峰面积大于LOQ的相邻峰分离度均大于1.5（如图3所示）；以上表明该方法专属性良好。
线性：分别取STD1~STD7对照品溶液按照色谱条件和质谱条件进行检测。结果表明：在23ng/ml~3153ng/ml范围内，相当于限度浓度的1.5%～200%，DHP峰面积与浓度呈良好的线性，相关系数r不小于0.990，y轴截距绝对值与100%限度浓度响应值之比为0.2%，线性符合规定。
检测限和定量限：取LOD对照品溶液和STD1对照品溶液，按照色谱条件和质谱条件分别连续进样3次与6次。结果表明：连续3针检测限溶液中DHP浓度为12.61ng/ml，相当于限度浓度的0.75%，S/N在9.0~9.7范围内；连续6针定量限溶液中DHP浓度为23.65ng/ml，约相当于限度浓度的1.5%，S/N在14.8～16.9范围内，峰面积的RSD为5.3%，该方法检测限和定量限结果符合规定。
准确度：取6份加标供试品溶液，按照色谱条件和质谱条件进行测定。结果表明，加标供试品溶液中DHP的回收率范围99.8%~108.6%，回收率的RSD为3.4%，准确度结果符合规定。
稳定性：分别取供试品溶液、STD5对照品溶液和加标供试品溶液于室温条件下依次放置0、4.5、9、12.5、22.0和31.5h后按照色谱条件和质谱条件进样分析。结果表明，于室温条件放置31.5h，供试品溶液中DHP的检测浓度与初始（0h）检测浓度的比值介于89.9%~117.0%之间；STD5对照品溶液中DHP的检测浓度与初始（0h）检测浓度的比值介于104.4%~117.0%之间；加标供试品溶液中DHP的检测浓度与初始（0h）检测浓度的比值介于101.6%~115.4%之间；以上标明供试品溶液、STD5对照品溶液和加标供试品溶液于室温条件下放置至少31.5小时内稳定。
对比例1
采用稀释剂为正己烷配制限度浓度为1.5ppm的对照品溶液。分别称取供试品粉末约0.25g，按照表1中溶剂和萃取试剂的用量进行溶液预处理，并涡旋10min，离心1min，取上清液滤液得到供试品溶液。分别将对照品溶液和供试品溶液按照实施例的气相色谱和质谱条件上样检测，记录色谱图的峰面积。
表1
Figure 603200DEST_PATH_IMAGE001
结果显示，对照品溶液的峰面积约23000，供试品溶液组别1~4的峰面积依次为9400、19000、19000和22753。说明组别1~3溶液预处理方法的萃取效率低，待测物DHP在经过液液萃取之后，并不能充分转移至正己烷层，从而影响检测方法的灵敏度，导致检测限变高。
对比例2
采用稀释剂为正己烷配制限度浓度为1.5ppm的对照品溶液。分别称取供试品粉末约0.25g，按照表2中溶剂和萃取试剂的用量进行溶液预处理，并涡旋10min，离心1min，取上清液滤液得到供试品溶液。分别将对照品溶液和供试品溶液按照实施例的气相色谱和质谱条件上样检测，记录色谱图的峰面积。
表2
Figure 263989DEST_PATH_IMAGE002
结果显示，对照品溶液的峰面积约38000，供试品溶液组别1~5的峰面积依次为27000、18000、29000、30000和30000。说明组别4~5溶液预处理方法，即N-甲基吡咯烷酮溶液、超纯水和正己烷的体积比为1:（1~2）:1时，待测物DHP的萃取效率高，萃取效果好，同时通过液液萃取除去样品基质，减弱供试品对检测体系的干扰，从而改善检测的准确度和灵敏度。
以上所述，以上实施例仅用以说明本申请的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本申请进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本申请各实施例技术方案的精神和范围。

Claims (7)

1.一种药物中DHP的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
分别取药物供试品和DHP对照品用N-甲基吡咯烷酮溶液溶解，再加入超纯水和正己烷涡旋振荡，离心，取上清液过滤，取续滤液制得供试品溶液和对照品溶液，其中，N-甲基吡咯烷酮溶液、超纯水和正己烷的体积比为1:（1~2）:1；
将供试品溶液和对照品溶液分别注入气相色谱-质谱联用仪进行分析，采用标准曲线法计算供试品溶液中DHP的限度浓度。
2.根据权利要求1所述的药物中DHP的检测方法，其特征在于，气相色谱条件中色谱柱为中等极性气相色谱柱。
3.根据权利要求1所述的药物中DHP的检测方法，其特征在于，气相色谱条件中升温程序为：起始温度40~60℃，以10~15℃/min的升温速率升至100~150℃，再以80~100℃/min的升温速率升至200~250℃。
4.根据权利要求1所述的药物中DHP的检测方法，其特征在于，气相色谱条件中控制模式为恒定流量，进样模式为分流进样，分流比为（1~5）：1。
5.根据权利要求1所述的药物中DHP的检测方法，其特征在于，气相色谱条件中进样口温度为200~240℃，流速为1~1.5ml/min，进样量为1~10μL。
6.根据权利要求1所述的药物中DHP的检测方法，其特征在于，质谱条件中离子源为EI，采集类型为SIM，定量离子为84，定性离子为83。
7.根据权利要求1所述的药物中DHP的检测方法，其特征在于，质谱条件中离子源温度为220~250℃，传输线温度为220~250℃，四极杆温度为150℃。
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