CN115530380B - 一种小分子复合肽组合物及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种小分子复合肽组合物及其制备方法和应用，所述组合物包括小分子肽、亚油酸C18:2、亚麻酸C18:3以及辅料，其中小分子肽由大豆肽、豌豆肽、绿豆肽、核桃肽、玉米低聚肽、小麦低聚肽、花生肽、大米肽、螺旋藻肽组成；辅料由聚甘油蓖麻醇酯、琥珀酸单甘油酯、环状糊精、聚乙二醇、D‑甘露聚糖、己二酸组成；本发明的小分子复合肽组合物成分之间具有良好的配伍性，能够显著提高蛋白肽的生物利用，本发明的组合物具有改善身体机能、提升免疫力、缓解疲劳、改善微循环、抗衰老、促进新陈代谢、调节肠道的功能，可用于增强免疫力作用的保健品或食品的制备中。
Description
技术领域
本发明属于食品、保健品技术领域，具体涉及一种小分子复合肽组合物及其制备方法和应用。
背景技术
蛋白质为大分子化合物，在胃肠道不能被直接吸收，需经胃液水解为小分子的游离氨基酸和短肽后，才能被机体吸收利用。但对于胃肠道消化吸收不良的患者对整蛋白存在吸收障碍，所以提供一种供给胃肠道消化吸收不良患者易于消化和吸收的蛋白质是非常有必要的，能快速补充身体缺乏的蛋白质，研究指出人体通过食物摄入的蛋白质经过消化后并不只是以氨基酸分子的形式进行吸收，人体对多肽的吸收率与氨基酸和蛋白质相比都要高，小分子的肽更容易被人体直接吸收，由于分子量小，大部分片段可以不经过肠道消化而直接被人体吸收，充分利用这一特征，生产具有营养疗效的食品、肠内营养食品，特别是针对胃肠道功能受损的病人和术后康复期的病人作为其特殊营养剂，具有巨大的发展空间。另外由于运动人群也需要快速补充氮源，因此小分子肽的应用前景也十分广阔。
目前，对于许多大分子蛋白质的生物利用研究较多，动物来源的胶原蛋白肽已广泛应用到化妆品和食品中，植物来源的大豆肽也早已风靡全球，2012年9月5日卫生部发布了关于批准小麦低聚肽作为新资源食品的公告（卫生部公告2012年第 16 号），但大部分研究仅仅是为了获得单一蛋白质物质，而对于蛋白质组合物的研究并不全面，由于蛋白质组合物的复配过程较复杂，获得一种丰富的蛋白组合物、且易于吸收和效果，增强功效是非常困难的，如CN109198649A仅公开一种大豆肽保健品及其制备方法，其采用了大豆肽和鸡蛋果提取物的复配获得协同增效作用；CN109805233A公开了一种具有提升免疫力功效的茯苓饮料及其制备方法，该方法采用将羧甲基茯苓多糖、螺旋藻提取物、玉米低聚肽粉、牛磺酸、环拉酸钠、蜂蜜、山梨酸钾和去离子水制备得到的组合物具备提高免疫力功效；基于上述公开的一些蛋白质物质的产品和技术，都难以获得一种全面、丰富、易吸收、活性高的小分子肽组合物产品。
发明内容
针对上述现有的技术问题，本发明提供了一种小分子复合肽组合物，具有改善身体机能、提升免疫力、缓解疲劳、调节血脂、改善微循环、抗衰老、促进新陈代谢，可用于具有增强免疫力作用的保健品或食品的制备。
第一方面，本发明提供的一种小分子复合肽组合物包括小分子肽、亚油酸C18:2、亚麻酸C18:3以及辅料；
进一步地，所述小分子肽由大豆肽、豌豆肽、绿豆肽、核桃肽、玉米低聚肽、小麦低聚肽、花生肽、大米肽、螺旋藻肽组成；
进一步地，所述辅料由聚甘油蓖麻醇酯、琥珀酸单甘油酯、环状糊精、聚乙二醇、D-甘露聚糖、己二酸组成；
进一步地，按质量份数计，所述组合物包括小分子肽15~45份、亚油酸C18:20.1~2份、亚麻酸C18:30.1~5份以及辅料5~45份；
进一步地，所述小分子肽由大豆肽5~10份、豌豆肽5~20份、绿豆肽3~10份、核桃肽5~15份、玉米低聚肽5~20份、小麦低聚肽5~20份、花生肽3~10份、大米肽5~20份、螺旋藻肽5~20份组成；
进一步地，按质量份数计，所述辅料由聚甘油蓖麻醇酯1~5份、琥珀酸单甘油酯1~5份、环状糊精1~15份、聚乙二醇1~15份、D-甘露聚糖1~6份、己二酸1~5份组成；
第二方面，本发明提供了所述小分子肽的制备方法如下：
将大豆蛋白、豌豆蛋白、绿豆蛋白、核桃蛋白、花生蛋白、大米蛋白、螺旋藻蛋白分别与水混合，搅拌均匀，酶解、灭酶，过滤，收集滤液、干燥，分别得到大豆肽、豌豆肽、绿豆肽、核桃肽、花生肽、大米肽、螺旋藻肽。
进一步地，所述酶解选自唾液淀粉酶、纤维素酶、果胶酶、胰淀粉酶、麦芽糖酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、风味蛋白酶中的一种或组合；
进一步地，所述小分子肽分子量低于1500Da。
第三方面，本发明提供了所述小分子复合肽组合物的制备方法，包括以下步骤：
S1、将大豆肽、豌豆肽、绿豆肽、核桃肽、玉米低聚肽、小麦低聚肽、花生肽、大米肽、螺旋藻肽混合均匀，制得粉料；
S2、向适量水中加入亚油酸C18:2、亚麻酸C18:3、聚甘油蓖麻醇酯和琥珀酸单甘油酯，搅拌均匀后，加入步骤S1的粉料混合，然后加入己二酸，混合均匀；
S3、将水加热至40~65℃，加入环状糊精、聚乙二醇和D-甘露聚糖，搅拌均匀，加入至步骤S2中混合；
S4、 将步骤S3制得的混合物进行喷雾干燥，喷雾干燥控制进风温度为180~220℃，出风温度75~85℃，即得小分子复合肽组合物。
第四方面，本发明提供了所述小分子复合肽组合物在食品、保健品中的应用。
本发明采用大豆肽、豌豆肽、绿豆肽、核桃肽、玉米低聚肽、小麦低聚肽、花生肽、大米肽、螺旋藻肽等9种植物蛋白肽，具备丰富的营养成分和调节身体机能的作用，同时添加人体必须脂肪酸，亚油酸C18:2、亚麻酸C18:3可降低因必须脂肪酸摄入不足引起的亚健康，进一步能够清除体内血液中的低密度脂蛋白，平衡肠道菌群、代谢功能进行调节，具有良好的有益效果，但由于小分子肽以及脂肪酸成分较多，各组分之间的配伍性能难以平衡，影响活性成分的吸收，因此，本发明采用了聚甘油蓖麻醇酯和琥珀酸单甘油酯对小分子肽和亚油酸C18:2、亚麻酸C18:3的混合匀度进行调节，进一步添加环状糊精、聚乙二醇、D-甘露聚糖和己二酸，提高了活性组分的稳定性和体内胃肠道的吸收效果。
与现有技术相比，本发明的有益效果如下：
（1）本发明采用特定的酶解法分别制备得到9种蛋白肽，相比现有技术种采用的酶解法，获得的小分子复合肽组合物具有显著的功能活性；
（2）本发明通过采用9种小分子复合肽，并添加亚油酸C18:2和亚油酸C18:3成分，通过辅料添加促进了小分子肽与亚油酸C18:2和亚油酸C18:3成分的配伍性，采用己二酸调节组合物的酸碱度，添加聚甘油蓖麻醇酯和琥珀酸单甘油酯对组合物的混合匀度进行调节，添加环状糊精、聚乙二醇、D-甘露聚糖均提高了组合物的稳定性，并促进活性物质的胃肠吸收；
本发明的小分子复合肽组合物具有显著的抗氧化活性，可改善微循环、抗衰老、促进新陈代谢，同时，本发明的小分子复合肽具有促进肠道蠕动作用，调节肠道功能，有良好的促排便功效，润肠通便，净化肠道，同时还具有显著的抗疲劳作用，改善身体机能、提升免疫力。
具体实施方式
本发明下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。实施例中所用到的各种常用化学试剂，均为市售产品。
除非另有定义，本发明所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不用于限制本发明。
本发明的术语“包括”和“具有”以及它们任何变形，意图在于覆盖不排他的包含。例如包含了一系列步骤的过程、方法、装置、产品或设备没有限定于已列出的步骤或模块，而是可选地还包括没有列出的步骤，或可选地还包括对于这些过程、方法、产品或设备固有的其它步骤。
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明了，下面结合具体实施方式，对本发明进一步详细说明。应该理解，这些描述只是示例性的，而并非要限制本发明的范围。此外，在以下说明中，省略了对公知结构和技术的描述，以避免不必要地混淆本发明的概念。
以下实施例对本发明做进一步的描述，但该实施例并非用于限制本发明的保护范围。
实施例1小分子肽的制备
本发明的实施例中使用的小分子肽的制备步骤如下：
大豆肽、豌豆肽、绿豆肽的制备：将大豆蛋白、豌豆蛋白、绿豆蛋白分别与水以质量比1:22混合，搅拌均匀，先加入质量比为1:3的纤维素酶和果胶酶进行酶解2.0h，然后加热至56℃通过复合酶酶解（复合酶为质量比0.5:4:3的木瓜蛋白酶：碱性蛋白酶：胰淀粉酶），然后灭酶，经超滤膜过滤，收集小于1000Da分子量的滤液、冷冻干燥，分别得大豆肽、豌豆肽、绿豆肽。
核桃肽、花生肽、大米肽的制备：将核桃蛋白、花生蛋白、大米蛋白分别与水以质量比1:20混合，先加入质量比为1:3的纤维素酶和果胶酶进行酶解1.5h，然后加热至58℃通过复合酶酶解（复合酶为质量比1.2:3.5:0.6的唾液淀粉酶：胰淀粉酶：碱性蛋白酶），然后灭酶，经超滤膜过滤，收集小于1000Da分子量的滤液、冷冻干燥，分别得到核桃肽、花生肽、大米肽。
螺旋藻肽的制备：将螺旋藻蛋白与水以质量比1:20混合，先加入质量比为1:2.2的纤维素酶和果胶酶进行酶解1.8h，然后加热至56℃通过复合酶酶解（复合酶为质量0.4:3.0:1.5的碱性蛋白酶：胰淀粉酶：麦芽糖酶），然后灭酶，经超滤膜过滤，收集小于700Da分子量的滤液、冷冻干燥，即得螺旋藻肽。
实施例2小分子复合肽组合物的制备
本实施例中的3组小分子复合肽组合物的组成配方如表1所示；
表1 本发明小分子复合肽组合物的组成配方
小分子复合肽组合物的制备方法如下：
S1、按配方量将大豆肽、豌豆肽、绿豆肽、核桃肽、玉米低聚肽、小麦低聚肽、花生肽、大米肽、螺旋藻肽混合均匀，制得粉料；
S2、向600份去离子水中加入配方量的亚油酸C18:2、亚麻酸C18:3、聚甘油蓖麻醇酯和琥珀酸单甘油酯，搅拌均匀后，加入步骤S1的粉料混合，然后加入配方量的己二酸，混合均匀；
S3、将100份去离子水加热至55℃，加入β-环状糊精、聚乙二醇和D-甘露聚糖，搅拌均匀，加入至步骤S2中混合；
S4、 将步骤S3制得的混合物进行喷雾干燥，喷雾干燥控制进风温度为220℃，出风温度78℃，即得小分子复合肽组合物。
试验例一、本发明的小分子复合肽组合物的抗氧化性能评价
第一部分、抗氧化性能试验方法
采用DPPH自由基清除率进行小分子复合肽组合物的抗氧化性试验，将2ml、0.1mmol/L的DPPH乙醇溶液分别加入到2ml不同浓度的实施例2中3组小分子复合肽组合物中进行混匀，室温下避光反应30min，测此时在517nm的吸光度A2，样品浓度为0.25、0.50、1.00、2.00和4.00mg/ml，同时，取等体积的乙醇溶液代替DPPH乙醇溶液进行测得吸光度A1，取等体积去离子水代替实施例2中3组小分子复合肽组合物进行测得吸光度A0，具体计算公式如式（1）所示；
（1）
第二部分、抗氧化性能试验结果
按照第一部分的试验方法，实施例2中3组小分子复合肽组合物的抗氧化性试验结果见表2；
表2 小分子复合肽组合物的抗氧化性试验结果
由表2结果可见，本发明的小分子复合肽组合物的DPPH自由基清除率可达94.35~96.15%，抗氧化活性高。
对比例1～5
对比例1~5与实施例2中编号3的小分子复合肽组合物成分的区别在于小分子肽和亚油酸C18:2、亚麻酸C18:3的添加量，其余辅料的组成成分和制备步骤一致，对比例1～5的小分子复合肽组合物的组成配方见表3；
表3 对比例1~5组合物的组成配方
对比例6～11
与实施例2中编号3的小分子复合肽组合物成分的区别在于辅料成分，其余组成成分和制备步骤一致，对比例6～11的小分子复合肽组合物的组成配方见表4；
表4 对比例6~11组合物的组成配方
试验例二、对比例1~11组合物抗氧化性能评价
采用试验例一的抗氧化性能试验方法对对比例1~11的组合物进行抗氧化性能评价，具体结果见表5；
表5 对比例1~11组合物的抗氧化性试验结果
由表5结果可知，对比例1~11中的对比例1~5对组合物的抗氧化活性影响较大，其中以大米肽和螺旋藻肽对组合物的抗氧化活性影响最大，相比实施例2中的编号3，该对比例3抗氧化活性降低了7.9%，由对比例1~2可看出，大豆肽和绿豆肽、玉米低聚肽和小麦低聚肽对组合物的抗氧化活性也有一定影响；组合物中的亚油酸C18:2和亚麻酸C18:3对组合物的抗氧化活性影响较大，超出亚油酸C18:2和亚麻酸C18:3的添加比例范围，组合物的抗氧化活性明显下降（对比例4~5）；另外，由对比例6~11的数据结果可知，辅料对组合物的抗氧化活性影响较小。
试验例三、本发明的小分子复合肽组合物调节肠道功能评价
第一部分、小肠推进运动试验
试验方法：动物：昆明种小鼠，体重18~22g，雌雄各半，实验前饲养于室内适应环境3天，室温18~25℃，相对湿度45~65%；
小肠推进运动实验：取昆明种小鼠160只，雌雄各半，随机分成16组，每组10只，分别为空白对照组、模型对照组、3组实验组（实施例2的编号1~3）、11组对照实验组（对比例1~11），各组均给予基础饲料，空白对照组、模型对照组给予生理盐水灌胃，实验组和对照实验组分别给予相应的组合物进行灌胃(3mg/kg·BW)，连续15天后，各组小鼠禁食不禁水16h，除空白对照组外，各组小鼠按体重灌复方地芬诺酯(5mg/kg·BW)，0.5h后，空白对照组和模型对照组给予墨汁灌胃，实验组和对照实验组分别给予含相应受试品的墨汁(含5%的活性炭、10%阿拉伯树脂)，25min后立即脱颈椎处死小鼠，打开腹腔分离肠系膜，剪取上端自幽门，下端至回盲部的肠管，置于托盘上，轻轻将小肠拉成直线，测量肠管长度为“小肠总长度”，从幽门至墨汁前沿为“墨汁推进长度”，计算方法如公式（2）；
（2）
第二部分、排便时间、粪便粒数和粪便重量测定
试验方法：取昆明种小鼠160只，按第一部分实验分组，给药量同小肠推进运动实验，连续15天后，各组小鼠禁食不禁水16h，除空白对照组外，各组小鼠按体重灌复方地芬诺酯(5mg/kg·BW)，0.5h后，空白对照组和模型对照组给予墨汁灌胃，实验组和对照实验组分别给予含相应受试品的墨汁(含5%的活性炭、10%阿拉伯树脂)，正常进食饮水，记录每只小鼠自灌胃墨汁起首次排黑便时间、8h内排黑便质量。
第三部分、调节肠道功能评价结果
（1）根据第一部分试验方法，小肠推进运动试验结果见表6；
表6 小肠推进运动试验结果（n=10）
由表6结果可知，相对于空白对照组，模型对照组的墨汁推进率显著降低，造模成功，实验组1~3的墨汁推进率可达80.27%~83.56%，均明显优于对照实验组，表明本发明制备的小分子复合肽组合物具有调节肠道功能的良好效果，对照实验组1~11相比实验组墨汁推进率明显降低，其中对比实验组1~3的墨汁推进率较低，表明本发明的小分子复合肽组合物中的9种小分子肽可共同促进肠道调节功能，对比实验组4~5结果可知，亚油酸C18:2和亚麻酸C18:3在一定比例条件下可显著提高组合物的促肠运动功能，对比实验组6结果表明己二酸可提高组合物的墨汁推进率，可能的原因是由于己二酸调节了组合物的酸碱性，从而使组合物吸收效果更佳，促肠运动效果更好；另外，本对比实验组采用PEG200、PEG800显著降低墨汁推进率，表明本发明的组合物中采用的PEG400~600对组合物的肠道吸收效果有明显的促进效果。
综上试验结果表明，本发明的小分子复合肽组合物具有促进肠道蠕动作用，本发明的组合物配伍性好，共同促进肠道蠕动，调节肠道功能。
（2）根据第一部分试验方法，小鼠排便试验结果见表7；
表7 小鼠排便试验结果（n=10）
由表7可知，以小鼠首次排便时间为指标时，空白对照组与模型对照组具有显著差异，表明造模成功。实验组1~3的首次排黑便时间均明显短于对照组，8h内排黑便质量均高于对照组，充分说明本发明制得的小分子复合肽组合物具有良好的促排便功效，润肠通便，净化肠道。
试验例四、本发明的小分子复合肽组合物抗疲劳功效评价
将150只ICR小鼠随机分为15组，一组空白组，3组实验组和11组对照实验组，每组10只，其中：
空白组：给予纯净水，按照20mL/kg体重给小鼠灌胃，经口灌胃30d；
实验组1～3：将实施例2的编号1～3的小分子复合肽组合物；
对照实验组1～11：对比例1～11的组合物；
按照0.4g/kg进行灌胃，将组合物制备成浓度为0.02g/mL的水溶液，按照20mL/kg体重给小鼠灌胃，经口灌胃30d；
负重游泳实验：末次经口灌胃给予组合物30min后，置尾根部负荷5％体重铅皮的小鼠于游泳箱中，水深大于30cm，水温25℃±1 .0℃，记录小鼠负重游泳开始至头部没入水中5s无法返回水面的时间，作为小鼠负重游泳时间，实验数据用SPSS软件进行统计分析，结果如表8所示；
表8 小鼠负重游泳时间（n=10）
由表8结果可知，本发明的小分子复合肽组合物对小鼠体重、粮食和水摄入量均没有影响；在给药30天后，实施例2中的编号1～3制备的组合物能显著延长小鼠负重游泳的时间，而对比实验组的小鼠负重游泳的时间明显低于实验组，表明本发明小分子复合肽组合物具有明显抗疲劳的作用。
技术特征所有可能的组合都进行描述，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例以及不同实施例的特征进行结合和组合。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (3)
1.一种小分子复合肽组合物，其特征在于，所述组合物包括小分子肽、亚油酸C18:2、亚麻酸C18:3以及辅料；
按质量份数计，所述小分子肽由大豆肽10份、豌豆肽15份、绿豆肽6份、核桃肽10份、玉米低聚肽8份、小麦低聚肽18份、花生肽3份、大米肽15份、螺旋藻肽8份组成；
所述亚油酸C18:2 为0.5份；
所述亚麻酸C18:3 2.5份；
所述辅料由聚甘油蓖麻醇酯4份、琥珀酸单甘油酯1份、β-环状糊精10份、聚乙二醇40015份、D-甘露聚糖3份、己二酸1.2份组成；
所述小分子肽的制备方法为：
（1）大豆肽、豌豆肽、绿豆肽的制备：将大豆蛋白、豌豆蛋白、绿豆蛋白分别与水以质量比为1 : 22混合，搅拌均匀，先加入质量比为1 : 3的纤维素酶和果胶酶进行酶解2h，然后加热至56℃通过质量比为0.5 : 4 : 3的木瓜蛋白酶 : 碱性蛋白酶 : 胰淀粉酶的复合酶进行酶解，灭酶，经超滤膜过滤，收集小于1000Da分子量的滤液、冷冻干燥，分别得大豆肽、豌豆肽、绿豆肽；
（2）核桃肽、花生肽、大米肽的制备：将核桃蛋白、花生蛋白、大米蛋白分别与水以质量比为1 : 20混合，先加入质量比为1:3的纤维素酶和果胶酶进行酶解1.5h，然后加热至58℃通过质量比为1.2 : 3.5 : 0.6的唾液淀粉酶 : 胰淀粉酶 : 碱性蛋白酶的复合酶进行酶解，灭酶，经超滤膜过滤，收集小于1000Da分子量的滤液、冷冻干燥，分别得到核桃肽、花生肽、大米肽；
（3）螺旋藻肽的制备：将螺旋藻蛋白与水以质量比为1 : 20混合，先加入质量比为1:2.2的纤维素酶和果胶酶进行酶解1.8h，然后加热至56℃通过质量比为0.4 : 3.0 : 1.5的碱性蛋白酶 : 胰淀粉酶 : 麦芽糖酶的复合酶进行酶解，灭酶，经超滤膜过滤，收集小于700Da分子量的滤液、冷冻干燥，即得螺旋藻肽。
2.一种制备权利要求1所述小分子复合肽组合物的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、将大豆肽、豌豆肽、绿豆肽、核桃肽、玉米低聚肽、小麦低聚肽、花生肽、大米肽、螺旋藻肽混合均匀，制得粉料；
S2、向600份去离子水中加入亚油酸C18:2、亚麻酸C18:3、聚甘油蓖麻醇酯和琥珀酸单甘油酯，搅拌均匀后，加入步骤S1的粉料混合，然后加入己二酸，混合均匀；
S3、将100份去离子水加热至55℃，加入β-环状糊精、聚乙二醇400和D-甘露聚糖，搅拌均匀，加入至步骤S2中混合；
S4、 将步骤S3制得的混合物进行喷雾干燥，喷雾干燥控制进风温度为220℃，出风温度78℃，即得小分子复合肽组合物。
3.根据权利要求1所述的小分子复合肽组合物在制备食品或保健品中的应用。
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