CN115420823B

CN115420823B - 罗沙司他中有关物质的测定方法

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Publication number: CN115420823B
Application number: CN202211039100.6A
Authority: CN
Inventors: 罗林; 严存香; 王娟; 嵇利娟; 祁智
Original assignee: Nanjing Zhengji Pharmaceutical Research Co ltd
Current assignee: Nanjing Zhengji Pharmaceutical Research Co ltd
Priority date: 2022-08-29
Filing date: 2022-08-29
Publication date: 2023-09-29
Anticipated expiration: 2042-08-29
Also published as: CN115420823A

Abstract

本发明提供了一种罗沙司他中有关物质的测定方法。属于药物检测分析技术领域，该方法采用高效液相色谱法对罗沙司他中杂质1、杂质2、杂质3、杂质4和杂质5进行检测分析，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充柱的色谱柱，采用20mmol/L磷酸二氢钠为流动相A，乙腈为流动相B，进行梯度洗脱。该方法具有灵敏度高、精密度高、含量测定结果准确、专属性和线性关系良好等优势，是一种全新的有利于罗沙司他样品质量控制的检测分析方法。

Description

罗沙司他中有关物质的测定方法

技术领域

本发明属于药物检测分析技术领域，涉及一种罗沙司他中有关物质的测定方法。

背景技术

罗沙司他，化学名为[[(4-羟基-1-甲基-7-苯氧基-异喹啉-3-)羰基]-氨基]-乙酸，是一个具有异喹啉环的杂环化合物，为脯氨酰羟化酶(prolyl hydroxylase enzymes)的酮戊二酸类似物。其CAS号为：808118-40-3，分子式为C₁₉H₁₆N₂O₅，分子量为：352.35，化学结构如下：

罗沙司他是一种新型低氧诱导因子(HIF)-脯氨酰羟化酶(PH)酶抑制剂，用于治疗正在接受透析治疗的患者因慢性肾脏病(CKD)引起的贫血。因慢性肾病(CKD)引起的贫血，其部分原因是由于肾脏内生产红细胞生成素的特定细胞未能生产足够的红细胞生成素。罗沙司他通过模拟脯氨酰羟化酶(PH)的底物之一酮戊二酸来抑制PH酶，影响PH酶在维持HIF生成和降解速率平衡方面的作用，从而达到纠正贫血的目的。2018年12月，国家药品监督管理局通过优先审评审批程序批准罗沙司他胶囊上市。罗沙司他胶囊的上市将为因慢性肾脏病引起的贫血患者提供了新的治疗手段。

为了确保罗沙司他药品的安全有效，须对原料药中的有关物质进行研究和控制。通过分析罗沙司他原料药的合成工艺路线，对杂质谱进行梳理，涉及的工艺副产物和降解产物等杂质主要有以下5种杂质，具体结构分别为：

杂质1：

杂质2：

杂质3：

杂质4：

杂质5：

现有的罗沙司他有关物质的检测方法中没有针对上述杂质的，且并未对其方法的专属性、灵敏度、线性关系、准确度以及溶液稳定性等方面进行研究，无法判断其方法耐用性和是否可以精确定量，因此建立一种专属性强、灵敏度高，能有效地洗脱、分离和定量的分析检测方法对罗沙司他及杂质进行检测分析是非常必要的。

发明内容

针对上述问题，本发明针对上述罗沙司他有关物质进行分析研究，提供一种专属性强、灵敏度高、线性关系良好、准确度高，能有效地洗脱、分离和定量的分析检测罗沙司他及杂质的检测方法。

本发明的技术方案是：本发明所述的一种罗沙司他中有关物质的测定方法，采用液相色谱法对罗沙司他有关物质进行检测分析，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充柱的色谱柱，采用磷酸二氢钠为流动相A，乙腈为流动相B，在35℃-45℃柱温下进行梯度洗脱。

其中，罗沙司他为

所述有关物质具体包括包括杂质1-5，其中杂质1为：

杂质2为：

杂质3为：

杂质4为：

杂质5为：

所述的磷酸二氢钠溶液的浓度为20mmol/L，用磷酸调节pH值为2.3～2.7，优选pH值为2.5。

采用检测器为紫外吸收检测器，其检测波长为258～262nm，优选检测波长是260nm。

所述的流动相的流速为1.0ml/min～1.4ml/min，优选流速是1.2ml/min。

所述的十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱为YMC Triart C18柱，规格为4.6mm×250mm，填料粒径为5μm。

所述的柱温优选是40℃。

流动相A的起始体积分数为70％～80％。

梯度洗脱的程序为：0min～30min，流动相A的体积分数由70％～80％降低至35％～25％，30min～35min，流动相A的体积分数保持在35％～25％。

优选的，梯度洗脱程序为：

时间(分钟)	流动相A(％)	流动相B(％)
			0	75	25
30	30	70
			35	30	70
35.1	75	25
			45	75	25

本发明的检测方法还包括供试品溶液配制：精密称定罗沙司他样品，加体积分数为80％乙腈水溶液溶解稀释成含罗沙司他0.5mg/ml的溶液

本发明的有益效果是：该方法建立了罗沙司他有关物质的测定方法，可以准确、有效的控制罗沙司他的质量状况，该方法操作简单，具有灵敏度高、精密度高、含量测定结果准确、专属性和线性关系良好等优势，可以准确检测并分离罗沙司他中的有关物质，是一种全新的有利于罗沙司他样品质量控制的检测分析方法。

附图说明：

图1为本发明实施例1的HPLC色谱图；

图2为本发明实施例2的HPLC色谱图；

图3为本发明实施例3的HPLC色谱图；

图4为本发明实施例4的HPLC色谱图。

具体实施方式

为了更清楚地说明本发明的技术方案，下面将对本发明中进行进一步的叙述；

实施例1：

色谱柱：Agilent XDB C18 4.6mm×150mm，3.5μm

流动相A：0.1％磷酸溶液

流动相B:乙腈

流速：1.0ml/min

柱温：40℃

波长：260nm

供试品浓度：0.5mg/ml

表1实施例1的梯度洗脱程序

溶液配制：

稀释剂：乙腈：水8：2(V/V)

杂质贮备液：分别取杂质1对照品、杂质2对照品、杂质3对照品、杂质4对照品、杂质5对照品适量，分别加稀释剂溶解并稀释制成每1ml约含各杂质500μg的溶液。

系统适用性溶液：取罗沙司他对照品适量，精密称定，加稀释剂使溶解，另取上述杂质1对照品贮备液、杂质2对照品贮备液、杂质3对照品贮备液、杂质4对照品贮备液、杂质5对照品贮备液适量，制成每1ml约含各杂质0.75μg、罗沙司他0.5mg的混合溶液。

样品测定：分别量取空白溶液和系统适用性溶液各10μl，分别注入液相色谱仪。

检测结果：结果参见附图1，故可知在本实施例中RT＝17.116min为罗沙司他的峰，RT＝6.129min为杂质1的峰，RT＝8.764min为杂质2的峰，RT＝10.161min为杂质3的峰，RT＝16.167min为杂质4的峰，RT＝22.577min为杂质5的峰，其它均为未知杂质峰，有未知杂质与主峰未分开。

实施例2

色谱柱：Agilent XDB C18 4.6mm×150mm，3.5μm

流动相A：10mM磷酸二氢钾溶液(磷酸调pH2.5)

流动相B:乙腈

流速：1.0ml/min

柱温：40℃

波长：260nm

供试品浓度：0.5mg/ml

表2实施例2的梯度洗脱程序

采用与实施例1相同的方法配制系统适用性溶液，采用与实施例1相同的样品测定方法测得罗沙司他和杂质的保留时间。

检测结果：结果参见附图2，其中，RT＝17.223min为罗沙司他的峰，RT＝6.117min为杂质1的峰，RT＝8.697min为杂质2的峰，RT＝10.300min为杂质3的峰，RT＝16.047min为杂质4的峰，RT＝24.770min为杂质5的峰，其它均为未知杂质峰，最小分离度为2.48，但是杂质和主峰间未达到基线分离。

实施例3

色谱柱：Agilent XDB C18 4.6mm×150mm，3.5μm

流动相A：20mM磷酸二氢钠溶液(磷酸调pH2.5)

流动相B:乙腈

流速：1.0ml/min

柱温：40℃

波长：260nm

表3实施例3的梯度洗脱程序

检测结果：结果参见附图3，其中，RT＝21.022min为罗沙司他的峰，RT＝7.048min为杂质1的峰，RT＝9.738min为杂质2的峰，RT＝12.947min为杂质3的峰，RT＝20.084min为杂质4的峰，RT＝28.734min为杂质5的峰，其它均为未知杂质峰，最小分离度为3.72，该方法杂质4与主峰间不能达到基线分离。

实施例4

色谱柱：YMC Triart C18 4.6mm×250mm，5μm

流动相A：20mM磷酸二氢钠溶液(磷酸调pH2.5)

流动相B:乙腈

流速：1.2ml/min

柱温：40℃

波长：260nm

表4实施例4的梯度洗脱程序

检测结果：结果参见附图4，其中，RT＝17.000min为罗沙司他的峰，RT＝6.043min为杂质1的峰，RT＝8.593min为杂质2的峰，RT＝10.353min为杂质3的峰，RT＝15.827min为杂质4的峰，RT＝22.057min为杂质5的峰，其它均为未知杂质峰，该方法主峰与相邻杂质、已知杂质间均能达到基线分离，最小分离度为4.08。

实施例4中的方法学验证结果如下表5：

表5验证结果及结论

由上述表5的数据可知，本发明提供的实施例4的方法测定罗沙司他中的有关物质，具有专属性强、灵敏度高、线性关系良好、准确度高且有良好的溶液稳定性及耐用性等特点。可以实现罗沙司他样品及有关物质的准确检测。

最后，应当理解的是，本发明中所述实施例仅用以说明本发明实施例的原则；其他的变形也可能属于本发明的范围；因此，作为示例而非限制，本发明实施例的替代配置可视为与本发明的教导一致；相应地，本发明的实施例不限于本发明明确介绍和描述的实施例。

Claims

1.罗沙司他中有关物质的测定方法，其特征在于，采用高效液相色谱法对罗沙司他有关物质进行检测分析，再以十八烷基硅烷键合硅胶为填充柱的色谱柱，采用磷酸二氢钠溶液为流动相A，乙腈为流动相B，在35℃-45℃柱温下进行梯度洗脱；

所述罗沙司他为[[(4-羟基-1-甲基-7-苯氧基-异喹啉-3-)羰基]-氨基]-乙酸，其结构式为：

所述有关物质包括杂质1、杂质2、杂质3、杂质4及杂质5，

其结构式具体如下所示：

杂质1：

杂质2：

杂质3：

杂质4：

杂质5：

所述十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱为YMC Triart C18柱，其规格为4.6mm×250mm，填料粒径为5μm；

所述磷酸二氢钠溶液的浓度为20mmol/L，用磷酸调节pH值为2.3～2.7；

所述梯度洗脱的程序为：

从0min～30min时，流动相A的体积分数由70％～80％降低至35％～25％；

从30min～35min时，流动相A的体积分数保持在35％～25％。

2.根据权利要求1所述的罗沙司他中有关物质的测定方法，其特征在于，采用的检测器为紫外吸收检测器，其检测波长是258nm-262nm。

3.根据权利要求1所述的罗沙司他中有关物质的测定方法，其特征在于，所述流动相的流速为1.0ml/min～1.4ml/min。

4.根据权利要求1所述的罗沙司他中有关物质的测定方法，其特征在于，所述梯度洗脱程序为：

时间/分钟流动相A/％流动相B/％ 0 75 25 30 30 70 35 30 70 35.1 75 25 45 75 25

。

5.根据权利要求1所述的罗沙司他中有关物质的测定方法，其特征在于，还包括供试品溶液配制，其具体的是：精密称定罗沙司他样品，加体积分数为80％乙腈水溶液溶解稀释成含罗沙司他0.5mg/ml的溶液。