CN115299526B - 一种仔猪饲料 - Google Patents
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Abstract
发明属于生物技术领域，公开了一种生物制剂，包括如下重量份组分：虫草花提取物0.05‑0.15份；灭活乳酸杆菌及其发酵产物0.05‑0.15份；黑水虻油脂提取物0.1‑0.3份。本发明的生物制剂在猪的料重比，血清的生化指标、激素指标、免疫指标抗氧化指标和肠道形态组织结构方面均具有明显的促进作用。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种仔猪饲料。
背景技术
CN202110218005.1公开了一种生物制剂，包括如下重量份组分：腐殖酸钠0.1-0.3份；丝兰提取物0.05-0.15份；黑水虻油脂提取物0.05-0.15份。通过系列化的动物养殖试验我们可以得到以下结论：本发明的生物制剂在鸡的料重比，血液生化指标、抗氧化指标回肠组织免疫指标、肠道形态组织结构均具有明显的促进作用。
该案主要研究了传统添加剂腐殖酸钠和黑水虻油脂提取物如何去改善鸡的肠道健康，以改善料重比等参数。
在猪的养殖过程中，我们期望黑水虻油脂提取物能够在料重比等方面展现更好的表现。
本案所要解决的技术问题是：如何提高猪的料重比。
发明内容
针对以上现有技术存在的缺点和不足之处，本发明的首要目的在于提供一种生物制剂及其制备方法。
本发明目的通过以下技术方案实现：
一种生物制剂，包括如下重量份组分：
虫草花提取物 0.05-0.15份；
灭活乳酸杆菌及其发酵产物 0.05-0.15 份；
黑水虻油脂提取物 0.1-0.3份。
在上述的生物制剂中，所述虫草花提取物为粉末状，灭活乳酸杆菌及其发酵产物中灭活乳酸杆菌的细胞密度为108～1010个/g。
在上述的生物制剂中，包括如下重量份组分：
虫草花提取物 0.1份；
灭活乳酸杆菌及其发酵产物 0.1份；
黑水虻油脂提取物 0.1-0.25份。
在上述的生物制剂中，所述黑水虻油脂提取物的提取方法为：
步骤1：将3～5日龄黑水虻幼虫置于养殖盒中，不饲喂过夜直至清空幼虫肠道内容物；
步骤2：将空腹过夜的黑水虻幼虫置于三角锥瓶中，用蒸馏水清洗三次，滤干水分，再用70～75vol%乙醇消毒一次，滤干备用，去除黑水虻幼虫肠道；
步骤3：准确称取一定量的黑水虻幼虫虫体，采用高速组织捣碎机对幼虫虫体进行匀浆，分别用有机溶剂乙酸乙酯按1:5～1:3比例浸泡虫体组织匀浆液，低温提取72h，后将组织匀浆液用5层纱布过滤或于4℃下6000r/min离心10min，除去沉淀，分别获得虫体粗提液；采用旋转蒸发仪对粗提液进行浓缩，直至有机溶剂蒸发完毕，温度设定为55℃，压力为0.09Mpa，转速为4档，分别得到虫体粗提物；
步骤4：虫体粗提物经300目硅胶柱层析，用有机溶剂无水乙醇进行洗脱，洗脱液再经Sephadex LH-20凝胶柱层析，又以无水乙醇进行洗脱纯化，得到洗脱液，洗脱液进行旋转蒸发回收有机溶剂，温度设定为55℃，压力为0.1Mpa，转速为3档，获得黑水虻油脂提取物。
同时，本发明还公开了一种动物饲料，包括基础饲料以及添加在基础饲料中的生物制剂，所述生物制剂相当于基础饲料总重的0.1-0.5%。
在上述的动物饲料中，所述基础饲料为仔猪饲料。
在上述的动物饲料中，所述基础饲料含如下组分 ：
玉米 53%；
面粉 13%；
豆粕 8%；
发酵豆粕 6%；
膨化大豆 6%；
乳清粉 5%；
鱼粉 3% ；
预混料 5%。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明的生物制剂在仔猪的料重比，血清的生化指标、激素指标、免疫指标抗氧化指标和肠道形态组织结构方面均具有明显的促进作用。
经过和单用黑水虻油脂提取物、黑水虻油脂提取物和灭活乳酸杆菌的组合、黑水虻油脂提取物和虫草花提取物，和灭活乳酸杆菌与虫草花提取物及黑水虻油脂提取物的组合进行比对，发现本发明的组合物其在上述性能提升方面贡献更为显著。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
原料来源说明：
虫草花提取物购自兰州沃特莱斯生物科技有限公司，规格10：1，棕色粉末；
灭活乳酸杆菌及其发酵产物由本院动物科学研究所赞助；
活乳酸杆菌及其发酵产物的制备方法参考本院动物科学研究所所申请的专利ZL201410606557.X，一种合生素饲料添加剂及其应用；活乳酸杆菌的含量约为109个/g。
黑水虻油脂提取物实验室自制。
实施例1
一种生物制剂，包括如下重量份组分：
虫草花提取物 0.1份；
灭活乳酸杆菌及其发酵产物 0.1份；
黑水虻油脂提取物 0.2份。
该生物制剂的制备方法为：
1）按上述重量份数比称取原料虫草花提取物、灭活乳酸杆菌及其发酵产物、黑水虻油脂提取物，留着备用；
2）将步骤1）中的虫草花提取物和灭活乳酸杆菌及其发酵产物均匀混合，得到混合物a；
3）将步骤2）所得的混合物a喷洒黑水虻油脂提取物，进行充分混合，得到所述的生物制剂。
黑水虻油脂提取物参考CN202110218005.1的实施例1。
上述生物制剂标记为样品A。
实施例2
一种生物制剂，包括如下重量份组分：
虫草花提取物 0.15份；
灭活乳酸杆菌及其发酵产物 0.05份；
黑水虻油脂提取物 0.1份。
制备方法同实施例1。
实施例3
一种生物制剂，包括如下重量份组分：
虫草花提取物 0.05份；
灭活乳酸杆菌及其发酵产物 0.15份；
黑水虻油脂提取物 0.3份。
制备方法同实施例1。
对比例1
一种生物制剂，包括如下重量份组分：
虫草花提取物 0.2份；
黑水虻油脂提取物 0.2份。
标记为样品B。
制备方法为：
1）按上述重量份数比称取原料虫草花提取物，留着备用；
2）喷洒黑水虻油脂提取物，进行充分混合，得到所述的生物制剂。
对比例2
一种生物制剂，包括如下重量份组分：
灭活乳酸杆菌及其发酵产物 0.2份；
黑水虻油脂提取物 0.2份。
标记为样品C。
制备方法为：
1）按上述重量份数比称取灭活乳酸杆菌及其发酵产物，留着备用；
2）喷洒黑水虻油脂提取物，进行充分混合，得到所述的生物制剂。
对比例3
参考CN202110218005.1的实施例1，制备得到腐殖酸钠、丝兰提取物及黑水虻油脂提取物组成的生物制剂。
标记为样品D。
试验选取546头断奶日龄和断奶体重相近的"杜×长×大"三元杂交仔猪，随机分为7组，每组6个重复，每个重复13头仔猪。其中，对照组仔猪饲喂基础日粮为玉米豆粕型日粮，试验组分别在基础日粮中添加0.3%的样品A、0.3%样品B、0.3%的样品C、0.3%的样品D、0.1%的黑水虻油脂提取物和0.3%黑水虻油脂提取物。基础日粮参照美国NRC（1998）营养需要配制的颗粒状乳猪配合饲料进行配制，并制成颗粒料。试验为期30天，试验期间，所有仔猪自由采食和饮水。基础日粮组成及营养水平表见表1。
表1基础日粮组成表
| 原料组成 | 含量% | 营养水平 | |
| 玉米 | 53 | 消化能（MJ/kg） | 14.21 |
| 面粉 | 13 | 代谢能（MJ/kg） | 13.54 |
| 豆粕 | 8 | 净能（MJ/kg） | 10.07 |
| 发酵豆粕 | 6 | 粗蛋白% | 18.79 |
| 膨化大豆 | 6 | 赖氨酸% | 1.23 |
| 乳清粉 | 5 | 可消化赖氨酸% | 1.09 |
| 鱼粉 | 3 | 蛋氨酸% | 0.36 |
| 预混料 | 5 | 蛋氨酸+半胱氨酸% | 0.61 |
| 苏氨酸% | 0.69 | ||
| 色氨酸% | 0.18 | ||
| 缬氨酸% | 0.64 | ||
| 合计 | 100 |
于正式试验第30天，每组选取2只体重接近平均体重的仔猪，采血后进行屠宰采取十二指肠、空肠和回肠中段2cm完整无损伤部分，用PBS缓冲液清洗后，置于4%的多聚甲醛溶液中保存，用于肠道组织形态学观察。
测定指标与方法：
生长性能：
试验过程中每天统计每栏腹泻仔猪头数、死亡数和淘汰头数，用于计算腹泻率。在试验开始、第15和30d时，以栏为单位称取仔猪重量，同时记录每天每栏的采食量，用于计算平均日采食量（ADFI）、平均日增重（ADG）、料重比（F/G）。
血清指标：
于试验第15天和第30天从每组的每个随机重复选取2头猪，前腔静脉采血10mL,倾斜放置30min，3000r/min离心15min，收集血清，-20℃低温冷藏。
血清生化指标：按照说明书采用试剂盒测定血清中葡萄糖（GLU），尿素氮（UN）、血清总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、甘油三酯（TG）、胆固醇（T-Cho）的含量，试剂盒的购自南京建成生物工程研究所。
血清激素指标：按照说明书采用ELISA试剂盒测定生长激素（GH）、胰岛素（ISN）、三碘甲状腺原氨酸（T3）和甲状腺素（T4）,试剂盒购自南京建成生物工程研究所。
血清免疫指标：按照说明书采用ELISA试剂盒测定免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白A（IgA）、白细胞介素4（IL-4）和白细胞介素6（IL-6）,试剂盒购自南京建成生物工程研究所。
抗氧化性指标：按照购买于南京建成生物工程研究所的试剂盒说明书步骤测定血清中总抗氧化能力（T-AOC）、总超氧化物歧化酶（T-SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、过氧化氢酶（CAT）和丙二醛（MDA）的含量。
肠道形态学观察：
分别取十二指肠、空肠和回肠中段1cm完整无损伤部分，放入固定液（4%多聚甲醛溶液）中保存，用于肠道组织的观察。经脱水、包埋、切片和苏木精-伊红染色等处理后，在显微镜下观察。每个样本进行全肠镜切片，每张切片选取10处不同视野观察，测定完整绒毛长度和隐窝深度。
试验结果：
1、料重比
如表2所示样品A的性能优于0.3%黑水虻油脂提取物、样品B和样品C，略弱于样品D，相比于对照组，样品A和0.3%黑水虻油脂提取物组显著增加了仔猪0-14d、15-30d以及1-30d的平均日增重，降低了0-14d、15-30d以及1-30d的F:G。由此可见，日粮的不同处理对仔猪各阶段生长性能有显著的影响。
表2 日粮添加不同添加剂对仔猪生长性能的影响
2、血清生化指标
表3 日粮添加不同添加剂对仔猪血清生化指标的影响
血清中的生化指标在一定的程度上可间接反映宿主的整体代谢情况，也是衡量机体健康标准的主要指标。动物机体处于良好的新陈代谢状态可促进其对营养物质的消化吸收，使得机体处于营养水平，进而改善动物的生长性能，进一步提高其生产效益。
如表3所示，在15d和30d时，与对照组、样品B、样品C和0.3%黑水虻油脂提取物组对比，样品A显著增加了仔猪的总蛋白、白蛋白、葡萄糖、甘油三酯和胆固醇的浓度，同时降低了尿素氮的浓度，与样品D相比，样品A略高于样品D。
3、血清激素指标
表4 日粮添加不同添加剂对仔猪血清激素指标的影响
血清中各种激素的浓度在一定的程度下可反映机体内新陈代谢能力的强弱，与其机体的生长性能密切相关。
如表4所示，在15d和30d时，与对照组、样品B、样品C和0.3%黑水虻油脂提取物组对比，样品A显著增加了仔猪的生长激素、胰岛素、三碘甲状腺原氨酸和甲状腺素的浓度;与样品D相比，样品A略高于样品D。
4、血清免疫指标
表5 日粮添加不同添加剂对仔猪血清免疫指标的影响
血清中免疫球蛋白和细胞因子等含量是评价动物机体免疫能力的重要指标，免疫受到抑制将促进促炎因子水平含量升高、抗炎因子和免疫球蛋白等含量降低。
如表5所示，在15d和30d时，与对照组、样品B、样品C和0.3%黑水虻油脂提取物组对比，样品A显著增加了仔猪的免疫球蛋白B、免疫球蛋白A、白细胞介素4和白细胞介素6的含量;与样品D相比，样品A略高于样品D。
5、血清抗氧化性指标
表6 日粮添加不同添加剂对仔猪血清抗氧化性指标的影响
血清中氧化和抗氧化指标在一定程度上可反映机体抗氧化能力的强弱，而抗氧化功能的强弱与宿主生长性能密切相关。
如表6所示，在15d和30d时，与对照组、样品B、样品C和0.3%黑水虻油脂提取物组对比，样品A显著增加了仔猪的总抗氧化能力、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化酶和过氧化氢酶的活性，同时降低了丙二醛的活性;与样品D相比，样品A略高于样品D的总抗氧化能力、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化酶和过氧化氢酶的活性，略低于丙二醛的活性。
6、肠道形态组织结构
表7日粮添加不同添加剂对仔猪肠道形态组织结构的影响
肠道形态在吸收养分和腹泻的发生中起着重要的作用。绒毛高度、隐窝深度以及其比值通常作为评价肠道黏膜结构完整性的指标。
与对照组、样品B、样品C和0.3%黑水虻油脂提取物组对比，样品A显著增加了十二指肠、回肠和空肠的绒毛高度，同时减低了隐窝深度，从而提高了绒毛高度和隐窝深度的比值。与样品D相比，样品A略高于样品D的绒毛高度，略低于样品D的隐窝深度，故略高于样品D的绒毛高度和隐窝深度的比值。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其它的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
Claims (1)
1.一种仔猪饲料，其特征在于，包括基础饲料以及添加在基础饲料中的生物制剂，所述生物制剂相当于基础饲料总重的0.3%；
所述基础饲料含如下重量百分比组分 ：
玉米 53%；
面粉 13%；
豆粕 8%；
发酵豆粕 6%；
膨化大豆 6%；
乳清粉 5%；
鱼粉 3% ；
预混料 5%；
所述生物制剂，包括如下重量份组分：
虫草花提取物 0.1份；
灭活乳酸杆菌及其发酵产物 0.1 份；
黑水虻油脂提取物 0.2份；
所述虫草花提取物为粉末状，灭活乳酸杆菌及其发酵产物中灭活乳酸杆菌的细胞密度为109个/g；
所述黑水虻油脂提取物的提取方法为：
步骤1：将3～5日龄黑水虻幼虫置于养殖盒中，不饲喂过夜直至清空幼虫肠道内容物；
步骤2：将空腹过夜的黑水虻幼虫置于三角锥瓶中，用蒸馏水清洗三次，滤干水分，再用70～75vol%乙醇消毒一次，滤干备用，去除黑水虻幼虫肠道；
步骤3：准确称取一定量的黑水虻幼虫虫体，采用高速组织捣碎机对幼虫虫体进行匀浆，分别用有机溶剂乙酸乙酯按1:5～1:3比例浸泡虫体组织匀浆液，低温提取72h，后将组织匀浆液用5层纱布过滤或于4℃下6000r/min离心10min，除去沉淀，分别获得虫体粗提液；采用旋转蒸发仪对粗提液进行浓缩，直至有机溶剂蒸发完毕，温度设定为55℃，压力为0.09Mpa，转速为4档，分别得到虫体粗提物；
步骤4：虫体粗提物经300目硅胶柱层析，用有机溶剂无水乙醇进行洗脱，洗脱液再经Sephadex LH-20凝胶柱层析，又以无水乙醇进行洗脱纯化，得到洗脱液，洗脱液进行旋转蒸发回收有机溶剂，温度设定为55℃，压力为0.1Mpa，转速为3档，获得黑水虻油脂提取物；
所述生物制剂的制备方法包括如下步骤：
1）按重量份数比称取原料虫草花提取物、灭活乳酸杆菌及其发酵产物、黑水虻油脂提取物，留着备用；
2）将步骤1）中的虫草花提取物和灭活乳酸杆菌及其发酵产物均匀混合，得到混合物a；
3）将步骤2）所得的混合物a喷洒黑水虻油脂提取物，进行充分混合，得到所述的生物制剂。
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