CN117257865B - 一种用于提高禽畜免疫力的发酵型中药组合物的制备方法及其应用 - Google Patents
一种用于提高禽畜免疫力的发酵型中药组合物的制备方法及其应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明属于发酵中药组分的技术领域，具体涉及一种用于提高禽畜免疫力的发酵型中药组合物的制备方法及其应用。采用的山楂核、榴莲皮、地瓜藤、淡豆豉、无花果叶均含有较为较为丰富的生物活性物质，采用枯草芽孢杆菌以及乳酸杆菌对富含纤维素的中药成分进行发酵，就是利用微生物在繁殖过程中所分泌的酶，提高中药有效成分的含量、增强药效，除了抗氧化，有助于肠道健康之外，还有抗菌、抗炎等提高免疫力的作用，本发明的发酵型中药组合物对于大肠杆菌、金黄色葡萄球菌以及沙门氏菌具有抑制作用，对于提高免疫力具有一定的促进作用。
Description
技术领域
本发明属于发酵中药组分的技术领域，具体涉及一种用于提高禽畜免疫力的发酵型中药组合物的制备方法及其应用。
背景技术
中草药方剂在畜禽养殖生产中应用非常广泛，在畜禽疾病防治方面发挥重要作用。中草药方剂产品在开始投放市场的时候，多是采用粉碎的方法，根据中草药方剂用途不同，有抗病毒和提高机体免疫力的，有止咳平喘的，也有治疗腹泻的。随着科技的快速发展，破壁机开始走进千家万户，中草药通过破壁机进行粉碎，能达到把中草药中的植物细胞壁破坏了，甚至达到超微粉状态。这时再把中草药与饲料进行搅拌后饲喂畜禽，中草药的药效得到进一步提高。最近几年，随着微生态技术的发展，使用不同菌种结合酶制剂来发酵中草药产品的技术越来越成熟，同时也出现了一些问题：中药的选择难度高，其发酵以及分解的途径不清晰，并不是任何中药都可用于发酵或者发酵物都有利于禽畜；发酵菌株的选择缺乏，存在发酵机理单一或者作用机理不明的问题。
因此，为了促进中药与微生物菌种的高效利用，且成为绿色、健康促生长的饲料添加剂，采用农业废弃物的中药组分与菌株联合发酵应用于禽畜肠道健康以及免疫的提高为研究重点。
发明内容
针对上述问题，本发明的目的在于提供一种用于提高禽畜免疫力的发酵型中药组合物的制备方法及其应用。
本发明的技术内容如下：
本发明提供了一种用于提高畜禽免疫力的发酵型中药组合物的制备方法，包括如下步骤：
1)制备发酵菌液A：将山楂核、榴莲皮(带壳)洗净、消毒、干燥，进行粉碎，与发酵菌株混合，加入无菌水、密封后置于25～50℃的恒温环境下发酵36～72h，即得到发酵菌液A；
所述粉碎为粒径为1～5mm；
2)制备发酵菌液B：将地瓜藤、淡豆豉、无花果叶洗净、消毒、干燥，混合浸泡于水中40～60min，料液比为1:(45～55)g/mL，之后减压蒸馏获得提取液，提取液冷却后接种入发酵菌株，密封后置于25～50℃的恒温环境下发酵36～72h，即得到发酵菌液B；
所述发酵菌株包括枯草芽孢杆菌、保加利亚乳杆菌、乳酸链球菌的一种以上，接种量为提取液的2～5％wt；
所述减压蒸馏的条件为压力为0.1～0.5MPa，温度为55～65℃；
3)将发酵菌液A和发酵菌液B混合即为发酵型中药组合物；
所采用的山楂核作为中药发酵成分，由于山楂核含有大量纤维素、半纤维素和木质素等成分，属于可再生生物质材料，在合适的发酵条件下，采用枯草芽孢杆菌进行发酵，可以利用山楂核成分的营养物质，提高菌种的生物活性，使得芽孢杆菌在繁殖的过程中，产生酶降解中药细胞壁的纤维素以及木质素，而其中所产生的酶主要有纤维素酶，除了降解纤维素、半纤维素之外，还能够辅助降解木质素，促进对山楂核成分的发酵分解，释放出其中的黄酮类、三萜类(多酚)等成分，实现山楂核与菌种之间互相作用，最终形成的山楂核发酵液具有抗氧化、抗菌的作用，作为饲料添加剂，抗氧化作用有助于禽畜肠道的功能维持，而抗菌作用则是提高禽畜的免疫能力，对于金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和的抑制具有显著效果，而将山楂核与榴莲皮以及其它中药组分的发酵液结合，还发现对致病性病毒等具有一定程度的抑制作用，提高免疫力。
所采用榴莲皮发酵菌液，为采用榴莲皮进行菌种发酵制得，榴莲是一种营养价值高、风味独特的水果，榴莲皮因重、刺手或者味道大而被作为废弃物，实际上榴莲壳中含有丰富的营养成分包括粗蛋白、粗脂肪、粗纤维以及矿物元素等，含量丰富，适口性好，可作为饲料成分，而采用菌株(如保加利亚乳杆菌)对其进行发酵，分解产生黄酮类以及多酚类等活性物质，可增加肠道菌群的多样性，提高肠道的抗氧化性能，以及抑制致病菌群生长。
所采用的地瓜藤为桑科榕属植物地瓜榕的全草，具有清热解毒、祛风化湿、舒筋活络、通利乳汁、益气健脾、消肿止痛、活血等功效。
所采用的淡豆豉是以豆类为原料，在多种微生物混合发酵后，获得累积大豆异黄酮、大豆低聚糖、活性肽等多种活性物质的最终产品味苦、辛，性凉，为解表药，临床常用于治疗感冒、痢疾、恶疮等，水提物中以多糖、蛋白及氨基酸等水溶性成分为主，还有含有异黄酮类和胡萝卜苷，采用益生菌发酵有助于生物活性分子的释放。
所采用的无花果叶是桑科无花果属植物无花果的叶子，无花果可以药用，具有清热解毒，消肿止痛的功效。无花果叶中含有许多有效的活性物质，其中常见的是香豆素、多酚、黄酮、维生素C及微量元素等。采用益生菌对其发酵可以增加发酵液中活性物质的增加，包括黄酮类物质、有机酸、多肽等，有助于提高抗氧化、抗肿瘤的作用。
本发明还提供了的发酵型中药组合物应用于制备禽畜饲料，应用于制备提高禽畜免疫力的饲料；
所述免疫力疾病包括鸡新城疫以及猪口蹄疫。
本发明的有益效果如下：
本发明的用于畜禽的发酵型中药组合物，所采用的山楂核、榴莲皮、地瓜藤、淡豆豉、无花果叶均含有较为丰富的生物活性物质，采用枯草芽孢杆菌以及乳酸杆菌对富含纤维素的中药成分进行发酵，就是利用微生物在繁殖过程中所分泌的酶，经体外生物转化技术，将天然药物通过微生物的作用，对其结构加以修饰和转化，显著提高中药生物活性因子(如黄酮类、多酚类以及其它各个中药的特有物质成分)的含量、增强药效，可用于抗氧化，清除自由基，以免自由基会对蛋白质、核酸、糖类、脂质等生物大分子的结构和功能造成损伤，导致生物体生病，除了抗氧化，有助于肠道健康之外，还有抗菌、抗炎等提高免疫力的作用，本发明的发酵型中药组合物对于大肠杆菌、金黄色葡萄球菌以及沙门氏菌具有抑制作用，对于提高免疫力具有一定的促进作用。
附图说明
图1为本发明山楂核发酵菌液的生物活性成分含量结果图；
图2为本发明山楂核发酵菌液的抑菌效果；
图3为本发明榴莲皮发酵菌液的生物活性成分含量结果图；
图4为本发明发酵型中药组合物的生物活性成分含量结果图；
图5为本发明的添加饲料对仔猪的肠道抗氧化能力。
具体实施方式
以下通过具体的实施案例以及附图说明对本发明作进一步详细的描述，应理解这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的保护范围，在阅读了本发明之后，本领域技术人员对本发明的各种等价形式的修改均落于本申请所附权利要求所限定。
若无特殊说明，本发明的所有原料和试剂均为常规市场的原料、试剂。
本发明所采用的枯草芽孢杆菌、保加利亚乳杆菌、乳酸链球菌均来源于慧明(嘉兴)生物技术有限公司。
实施例1
山楂核发酵菌液
将山楂核、洗净、消毒、干燥，进行粉碎，与3％wt枯草芽孢杆菌混合，加入无菌水，置于25～37℃的恒温环境下发酵48～72h，即得到山楂核发酵菌液；
发酵过程中，由于山楂核主要成分为木脂素、少量黄酮类以及多酚类物质，检测发酵后的含量变化，并且以酵母菌作为对照，结果如图1所示，发酵得到木脂素以及黄酮类物质、多酚物质随着发酵时间的延长而增多，含量增加速度趋于缓和，表明已完成发酵，并且相比酵母菌，采用枯草芽孢杆菌由于枯草芽孢杆菌会产生纤维素酶、蛋白酶、β-葡萄糖苷酶等对山楂核的纤维素成分进行酶解，更有利于对山楂核的发酵酶解，促进营养成分的释放，而酵母菌在发酵过程中虽然也能够产生多种内源酶，但山楂核所释放的活性成分中对酵母菌的活性具有一定的抑制作用。
将所得山楂核发酵菌液制备成0.5mg/mL的溶液用于抑菌测试，检测对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的影响，菌量均为3×108CFU/mL，结果如图2所示，对金黄色葡萄球菌(左图)的抑制直径在18～22mm，对大肠杆菌(右图)的抑制直径在15～20mm。
实施例2
榴莲皮发酵菌液
将榴莲皮(带壳)洗净、消毒、干燥，进行粉碎，与3％wt保加利亚乳杆菌混合，加入无菌水、密封后置于38～44℃的恒温环境下发酵48～72h，即得到榴莲皮发酵菌液。
发酵过程中，由于榴莲皮(带壳)中的多酚类物质居多，还含有黄酮类物质，检测发酵后含量变化，并且以酵母菌作为对照，结果如图3所示，所提取的多酚物质、黄酮类物质随着发酵时间的延长而增多，之后趋于缓和；并且相比酵母菌对照组的含量变化，也表明了采用保加利亚乳杆菌更有利于榴莲皮(带壳)的纤维物质的酶解，由于产生β-葡萄糖苷酶以及多种内源酶，水解榴莲皮中的糖苷键，促进营养成分的释放。
实施例3
用于畜禽的发酵型中药组合物的制备
发酵菌液A：将山楂核100g、榴莲皮(带壳)100g洗净、消毒、干燥，进行粉碎，与8g枯草芽孢杆菌混合，加入300g无菌水、密封后置于35℃的恒温环境下发酵50h，即得到发酵菌液A；
所述粉碎为粒径1～5mm；
发酵菌液B中：将地瓜藤80g、淡豆豉70g、无花果叶80g洗净、消毒、干燥，混合浸泡于水中50min，料液比为1:50g/mL，之后0.1Mpa、60℃下减压蒸馏1.5h获得提取液，提取液冷却后接种入枯草芽孢杆菌，密封后置于35℃的恒温环境下发酵48h，即得到发酵菌液B；
将发酵菌液A和发酵菌液B混合即为发酵型中药组合物。
实施例4
用于畜禽的发酵型中药组合物的制备
发酵菌液A：将山楂核150g、榴莲皮(带壳)120g洗净、消毒、干燥，进行粉碎，与15g乳酸链球菌混合，加入400g无菌水、密封后置于37℃的恒温环境下发酵60h，即得到发酵菌液A；
所述粉碎为粒径1～5mm；
发酵菌液B中：将地瓜藤100g、淡豆豉100g、无花果叶80g洗净、消毒、干燥，混合浸泡于水中60min，料液比为1:55g/mL，之后0.1Mpa、65℃下减压蒸馏1.5h获得提取液，提取液冷却后接种入乳酸链球菌，密封后置于35℃的恒温环境下发酵36h，即得到发酵菌液B；
将发酵菌液A和发酵菌液B混合即为发酵型中药组合物。
实施例5
用于畜禽的发酵型中药组合物的制备
发酵菌液A：将山楂核180g、榴莲皮(带壳)150g洗净、消毒、干燥，进行粉碎，与20g保加利亚乳杆菌混合，加入500g无菌水、密封后置于34℃的恒温环境下发酵48h，即得到发酵菌液A；
所述粉碎为粒径1～5mm；
发酵菌液B中：将地瓜藤120g、淡豆豉100g、无花果叶100g洗净、消毒、干燥，混合浸泡于水中50min，料液比为1:45g/mL，之后0.2Mpa、60℃下减压蒸馏1.5h获得提取液，提取液冷却后接种入保加利亚乳杆菌，密封后置于45℃的恒温环境下发酵36h，即得到发酵菌液B；
将发酵菌液A和发酵菌液B混合即为发酵型中药组合物。
将以上所得发酵型重要组合物进行检测，结果如表1所示：
表1发酵型中药组合物的营养成分
由表1可见，本发明所制备的发酵型中药组合物具有丰富的营养成分，表明所采用的山楂核、榴莲等中药组分得到了有效的发酵分解，产生多种不同类型的黄酮类、多酚类等营养物质，促进中药中的活性成分更好地被吸收利用，具备抗氧化、抑菌、抗炎等作用。
以及如图4可见，随着发酵时间的延长，本发明所采用的枯草芽孢杆菌、乳酸链球菌以及保加利亚乳杆菌的菌株活性均为上升的趋势，在36～48h的时间内菌株活性较高，表明本发明所采用的中药成分有利于所采用的菌株的存活，甚至与以上菌株具有相互促进的作用，使得菌株提高活性，分泌各类酶从而有助于对中药成分的分解，促进中药成分中生物活性因子的释放。
试验例1
将所得发酵型中药组合物用于鸡的饲养以及效果研究
选取广东省农业科学院动物科学研究所的42日龄的肉鸡60只，分成三种饲料组进行饲喂，每组5个重复，每个重复4只肉鸡，饲养鸡场温度在25℃左右，期间自由采食和饮水，试验期为30d，其它管理照常。
三种饲料组分别为：
A组：基础肉鸡饲料组；
B组：基础肉鸡饲料组+10％wt发酵型中药组合物(实施例3)；
C组：基础肉鸡饲料组+10％wt中药组合物(未经过发酵，与实施例3的同等含量的中药成分，均没有采用菌株进行发酵)；
所采用的基础肉鸡饲料购自广东广大饲料有限公司，符合饲养标准的饲料均可。
饲养30天结束后，所有肉鸡禁食12h，于结束的第2天收集肉鸡的颈静脉血，收集到真空血管中，常温静置约45min后，在3000r/min下离心10min(4℃条件)。
1.肉鸡的生长情况
根据饲养期间记录的肉鸡初重、末重以及采食量，按照常规公式计算平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)和料重比(F/G)；
平均日增重＝(终末体重-初始体重)/试验天数；
平均日采食量＝(总采食量)/(试验天数×饲喂头数)；
料重比＝平均日采食量/平均日增重；
结果如下所示：
表2发酵型中药组合物对肉鸡生长的影响
由表3可见，采用本发明发酵型中药组合物B组饲养的肉鸡在末重、平均日采食量、平均日增重均高于A组和C组，可见对饲料的转化率有所提高。
2.肉鸡的血清生化指标
采用全自动生化分析仪分别测定所采取的血清样本中的总蛋白TP、白蛋白ALB、球蛋白GLB、免疫球蛋白M、免疫球蛋白G、免疫球蛋白A、尿氮素UN和坏死因子TNF-α，结果如下所示：
表3发酵型中药组合物对肉鸡血清生化指标的影响
由表3可见，相比A、C组的饲料，添加了本发明发酵型中药组合物的饲料B组可显著提高肉鸡的血清总蛋白和蛋白含量，还能够提高免疫球蛋白的含量，同时降低了尿氮素和坏死因子TNF-α的含量，表明了肉鸡蛋白质代谢效率和氮的利用率得到了提高，以及增强了免疫能力。
3.肉鸡的血清抗氧化指标
采用试剂盒对血清的氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、丙二醛(MDA)、血清过氧化氢酶(CAT)以及总抗氧化能力(T-AOC)进行检测，均采用南京建成生物技术研究所的试剂盒检测，按照说明书进行操作测定。
表4发酵型中药组合物对肉鸡血清抗氧化酶相对表达量的测定
如表4可见，B组和C组的MDA值显著低于A组对照组，B组和C组的SOD、CAT值均显著高于A组，B组的GSH-Px、T-AOC值显著高于A组和C组，表明添加本发明的发酵型中药组合物以及所采用的中药组合物可提高肉鸡血清的抗氧化性能。
4.肉鸡对鸡新城疫的佐剂效果
选取7日龄肉鸡通过注射新城疫活疫苗(郑州永信生物科技有限公司)0.5mL/只，4周后加强免疫1次，第7周称重、翅静脉采血。血样室温静置4h后，于4℃冰箱过夜，3000r/min离心3min，吸取血清分装于0.2mL塑料离心管中，-20℃保存，采用ELISA试剂盒(北京城林生物技术有限公司)检测抗体含量，结果如下所示：
表5发酵型中药组合物佐剂免疫后的新城疫抗体水平(pg/mL)
由表5可见，B、C组的抗体含量具有明显提升，表明饲喂含有本发明发酵型中药组合物的饲料对于肉鸡新城疫疫苗的免疫效果具有一定的增强作用。
试验例2
将所得发酵型中药组合物用于猪的饲养以及效果研究
试验设计
选取广东省农业科学院动物科学研究所的30日龄的断奶仔猪30头，饲喂三种饲料组，每组5个重复，每个重复2头仔猪，饲养猪舍温度在25℃左右，期间仔猪自由采食和饮水，试验期为30d，其它管理照常。
三种饲料组分别为：
D组：基础仔猪饲料组；
E组：基础仔猪饲料组+10％wt发酵型中药组合物(实施例3)；
F组：基础仔猪饲料组+10％wt中药组合物(未经过发酵，与实施例3的同等含量的中药成分，均没有采用菌株进行发酵)；
所采用的基础仔猪饲料购自广东广大饲料有限公司，符合饲养标准的饲料均可。
饲养30天结束后，所有断奶仔猪禁食12h，于结束的第2天和第7天收集断奶仔猪的颈静脉血，4℃离心10min收集血浆，-80℃保存血浆。
进行如下指标测试：
1.仔猪的生长情况
根据饲养期间记录的仔猪初重、末重，按照上述公式计算平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)和料重比(F/G)，结果如下所示：
表6发酵型中药组合物对仔猪生长的影响
由表6可见，B组饲养的仔猪在平均日增重、平均日采食量和料重比均较A组和C组有所提高，表明采用本发明发酵型中药组合物有助于促进仔猪的日增重，且增加食欲，提高饲料使用率以及转化率，有助于改善仔猪的生长。
2.仔猪的血清指标
2.1抗氧化
通过氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、丙二醛(MDA)和总抗氧化酶(T-AOC)含量来检测，均采用南京建成生物技术研究所有限公司试剂盒检测，按照说明书进行操作测定。
SOD通过催化超氧阴离子自由基歧化为过氧化氢(H2O2)，再由GSH-Px将其转化为水(H2O)，因此其活性可以反映机体的抗氧化能力。MDA是机体脂质过氧化的产物，其含量可以反映细胞氧化损伤的程度。T-AOC是反映机体抗氧化功能的综合指标。由图5可见，相比对照组以及无菌株发酵中药组的饲料，添加了本发明发酵型中药组合物的饲料提高了断奶仔猪血清中SOD、GSH-Px活性和T-AOC，降低了MDA含量，有助于增强仔猪的肠道抗氧化能力。
2.2免疫能力
采用ELISA试剂盒(上海酶联生物科技有限公司)检测血浆中免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等免疫指标，具体操作参照试剂盒说明书进行，结果如下所示。
表7发酵型中药组合物对仔猪免疫力的影响
由表7可见，相比对照组以及无菌株发酵中药组的饲料，添加了本发明发酵型中药组合物的饲料显著提高了断奶仔猪血浆中免疫球蛋白的含量，同时降低了促炎因子的含量，表明了仔猪的机体的免疫功能得到了增强。
2.3对猪口蹄疫疫苗的佐剂效果
选取10日龄仔猪通过注射O型口蹄疫疫苗(OZK/93株，批号：1012001)(中牧实业股份有限公司生产)0.5mL/头，4周后加强免疫1次，第7周称重、前腔静脉采血。血样室温静置于4h后，于4℃冰箱过夜，3000r/min离心3min，吸取血清分装于0.2mL塑料离心管中，-20℃保存，采用ELISA(武汉科前动物生物制品有限责任公司)检测抗体水平(抗体滴度)，结果如下所示：
表8发酵型中药组合物佐剂免疫后的口蹄疫抗体水平
由表8可见，免疫前各组口蹄疫抗体水平OD630nm值均＜0.2，低于试剂盒0.4的阳性标准，相比A、C组，B组的OD630nm值显著提高，由抗体水平的结果可以看出，饲喂含有本发明发酵型中药组合物的饲料对于仔猪口蹄疫疫苗具有一定的增强作用。
综上所示，本发明所制备的发酵型中药组合物，用于禽畜的饲料添加剂，不仅能够促进生长和肠道健康，还能抑制致病菌以及增强抗病力，表明本发明的中药与益生菌的发酵工艺中，实现了两者的互相促进，使得在抑菌和免疫调节均有较好的体现，利用山楂核/榴莲皮等农业废弃物，实现变废为宝，使得发酵产物产生了对动物体内有益的营养物质和活性因子，农业废弃物在制备功效饲料的应用具有巨大的潜力。
3.抗菌力
采用微量二倍稀释法，将本发明的发酵型中药组合物对猪源大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和沙门氏菌进行最小抑菌浓度的测定。
根据常规方法，分别取鸡源的大肠杆菌、沙门氏菌以及猪源大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌进行活化，接种于MH肉汤培养基中，37℃恒温培养24h，再取经培养的菌落接种于MH肉汤培养基中得到菌悬液，培养至对数生长期，使得各致病菌株的活性均为3×108CFU/mL。
之后进行测定：
1)在48孔细胞培养板上，每一行第一孔分别加入发酵型中药组合物(用水配置成1g/mL)100μL，作为母液，用同样的肉汤进行倍比稀释，得到系列梯度浓度样品(每两行一种药物，即二个重复)；
2)将配制好的菌悬液加入到向每个孔中添加400μL，移液枪对其进行充分吹打(至少三次)，使药物与肉汤混合均匀；
3)在同一块板的G排上做一列阴性对照(只加500μLMH肉汤培养基，未加菌悬液)，并在H排上做一列阳性对照(只加菌悬液，不加发酵型中药组合物)；
4)将微量板置于垫有湿纱布的搪瓷方盘内，37℃培养16～24h；
5)在衬有黑色底板的光线下观察结果，细菌在小孔中呈弥散状浑浊或孔底部有丝网样的沉积物；
无菌培养孔中的抗菌药物浓度即为MIC(g/mL)，结果如下所示：
表9各致病菌株的MIC(g/mL)
由表9可见，本发明所制备的发酵型中药组合物对于鸡源、猪源的致病菌均有一定的抑制作用。
综上可见，本发明的山楂核以及榴莲皮(带壳)的菌株发酵提取物含有活性因子，如黄酮类、多酚类物质，并且将其与其它中药成分如芦根、地瓜藤、淡豆豉、无花果叶等中药发酵组分共用，可作为禽畜饲料的添加剂，有助于改善禽畜的血清生化指标，如抗氧化力、抗菌抗炎等，还有助于提高免疫能力，在肉鸡对新城疫有一定的免疫作用，以及仔猪对口蹄疫有一定的免疫作用，可见本发明所制备的发酵型中药组合物的作用效果显著。
Claims (6)
1.一种用于提高畜禽免疫力的发酵型中药组合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
1）制备发酵菌液A：将山楂核100g、榴莲皮带壳100g洗净、消毒、干燥，进行粉碎，与8g枯草芽孢杆菌混合，加入300g无菌水、密封后置于35℃的恒温环境下发酵50h，即得到发酵菌液A；
所述粉碎为粒径1~5 mm；
2）制备发酵菌液B：将地瓜藤80g、淡豆豉70g、无花果叶80g洗净、消毒、干燥，混合浸泡于水中50 min，料液比为1:50 g/mL，之后0.1 Mpa、60℃下减压蒸馏1.5h获得提取液，提取液冷却后接种入枯草芽孢杆菌，密封后置于35℃的恒温环境下发酵48h，即得到发酵菌液B；
3）将发酵菌液A和发酵菌液B混合即为发酵型中药组合物。
2.一种用于提高畜禽免疫力的发酵型中药组合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
1）制备发酵菌液A：将山楂核150g、榴莲皮带壳120g洗净、消毒、干燥，进行粉碎，与15g乳酸链球菌混合，加入400g无菌水、密封后置于37℃的恒温环境下发酵60h，即得到发酵菌液A；
所述粉碎为粒径1~5 mm；
2）制备发酵菌液B：将地瓜藤100g、淡豆豉100g、无花果叶80g洗净、消毒、干燥，混合浸泡于水中60min，料液比为1:55 g/mL，之后0.1 Mpa、65℃下减压蒸馏1.5h获得提取液，提取液冷却后接种入乳酸链球菌，密封后置于35℃的恒温环境下发酵36h，即得到发酵菌液B；
3）将发酵菌液A和发酵菌液B混合即为发酵型中药组合物。
3.一种用于提高畜禽免疫力的发酵型中药组合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
1）制备发酵菌液A：将山楂核180g、榴莲皮带壳150g洗净、消毒、干燥，进行粉碎，与20g保加利亚乳杆菌混合，加入500g无菌水、密封后置于34℃的恒温环境下发酵48h，即得到发酵菌液A；
所述粉碎为粒径1~5 mm；
2）制备发酵菌液B：将地瓜藤120g、淡豆豉100g、无花果叶100g洗净、消毒、干燥，混合浸泡于水中50min，料液比为1: 45 g/mL，之后0.2 Mpa、60℃下减压蒸馏1.5h获得提取液，提取液冷却后接种入保加利亚乳杆菌，密封后置于45℃的恒温环境下发酵36h，即得到发酵菌液B；
3）将发酵菌液A和发酵菌液B混合即为发酵型中药组合物。
4.一种权利要求1-3任一项所述制备方法制得的用于提高畜禽免疫力的发酵型中药组合物。
5.一种权利要求4所述的发酵型中药组合物应用于制备禽畜饲料。
6.一种权利要求4所述的发酵型中药组合物应用于制备提高禽畜免疫力的饲料。
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