CN1152936A - 含微生物的颗粒剂及其制备和用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及a)成膜的、水溶性的且基本上未交联的聚合物，且以所述的制剂为基础，颗粒剂含有不少于按重量计0.5％的水，或b)成膜的、含有羧基或硫酸基团的且在钾离子存在下于水中可以膨胀的结构上交联的多糖，且以所述的制剂为基础，颗粒剂含有不少于按重量计0.5％的水。本发明还涉及制备所述颗粒剂的方法以及该制剂用于保护作物不受病害侵染或昆虫损害的方法。

Description

含微生物的颗粒剂及其制备和用途
本发明涉及一种颗粒剂，它包含(1)一种固体的水不溶细小颗粒基质，(2)一种水溶性的或水可膨胀的成膜聚合物，所述的聚合物不共价地交联或与多价阳离子交联，(3)微生物和(4)水。本发明还涉及制备所述颗粒剂的方法以及该制剂用于保护作物不受病虫害侵害的用途。
采用形成孢子的细胞或营养细胞(微生物)保护作物近来日益受到重视。采用这些生物防治剂的前提是，能够将它们加工成有用的制剂如悬浮剂、可分散粉剂、颗粒剂或特别是撒施颗粒剂。然而，这些制剂的制备有着很大的难度。例如，由于采用高于约40℃的温度时，微生物会受损害，并且观察到其生活力严重丧失，因此，对于大多数营养细胞和以及对于一些孢子而言，不能采用温度高于约40℃的制备方法。由于细胞的死亡，在环境条件下细胞生活力受到损失是不可能避免，或需要将制剂在低温下贮藏以避免生活力的损失时，贮藏也同样成问题。
大多数已知的微生物制剂由含有微生物的、与多价阳离子交联的聚合物凝胶组成。这种制剂，如采用藻酸盐作为聚合物，已由D.R.Fravel等(特别是)描述于《(植物病理学》(Phytopathologt)第75卷，第7期，第774-777页(1985)中。此文公开了基质使用的相同之处。这些制剂通常通过混合天然或合成的形成凝胶的聚合物的溶液(例如藻酸盐)和多价金属离子的水溶液未实现，由此形成单独的微滴，这样使得微生物可以悬浮于两种反应溶液之一中或两种反应溶液中。当微生物的悬浮液滴加入凝胶剂的溶液中时，凝胶形成便开始。这些凝胶颗粒可以随后被干燥。此方法称作离子移变凝胶。根据干燥的程度，此方法提供出与多价阳离子交联的且含有基本上均匀分布的微生物和基质的聚合物的紧实硬丸。颗粒的大小可达5毫米。
EP-A1-0 097 571公开了基于部分交联的多糖的制剂，该制剂除了含有微生物外，可含有作为基质的细小颗粒硅酸，且交联可以用Ca++离子来实现。制剂的水活性不大于0.3。在Alan R.Liss，Inc.于1990年出版的《生物防治的新方向：抑制农业病虫害的替代方法》(New Directions inBiological Control：Alternatives for Supressing Agricultural Pests andDiseases)第345-372页的一篇综述不同制剂体系的文章中，W.J.Connick等涉及到用蛭石作基质的颗粒剂，并涉及了由离子移变方法制备的紧实的藻酸盐丸。这些制剂也由D.R.Fravel公开于美国费城的ASTM STP1112 American Society for Testing and Materials于1992年出版的《农药制剂和应用体系》(Pesticide Formulations and Application Systems)第11卷，第173-179页中。
由于凝胶是水不溶的，且通常形成直径大于几毫米的大颗粒，因此这些交联的凝胶制剂有着缓慢释放生物防治剂的缺点。如果需要更为快速的释放，制剂一般须用缓冲溶液预处理。这便更加大了最终使用者的困难，并限制了操作的安全性。减少施用量需要较高的种群密度，在较高的种群密度(＞109CFU/g＝菌落形成单位/g)下，体系通常不具备充分的稳定性，从而需要冷藏保存，以避免大量的丧失。制备这些制剂时，形成凝胶的聚合物必须溶解于水中，但这在某些情况下是困难的，且只可能以提高温度来实现之。为获得可用的颗粒剂，逐滴凝胶形成是必须的加工步骤。提供在工业规模上进行此种方法的技术装备无疑是困难和昂贵的。而且如此获得的颗粒仍有高的水分含量，而高的水分含量又必须通过干燥来除去，以确保可接受的贮藏稳定性。这种干燥步骤使此方法变得更加昂贵，微生物也会遭受另外的损害，并且会进一步减小其生活力。以水溶性的或水可膨胀聚合物为基础且不用离子移变凝胶作用制备的贮藏稳定颗粒剂是现有技术中尚没有的。
出人意外的是，现已发现，有可能(a)不用凝胶移变作用和部分地无需完全溶解聚合物，制备出微生物于聚合物层中的颗粒剂，(b)基本上减少当干燥时活细胞死亡而造成的损失，(c)达到高的贮藏稳定性，特别是在环境条件下，(d)获得非常高的微生物种群密度，且仍确保优异的贮藏稳定性，(e)获得生物防治剂的快速释放，和(f)实现特定的营养细菌细胞的优异的稳定作用，这点是通过将在不共价交联的或由多价阳离子交联的、水溶性的或水可膨胀的成膜聚合物中的微生物涂在基质上或者与基质一起来实现的，且以整个制剂为基础，制剂含有不少于按重量计0.5％的水。
本发明的一个目的是提供包含细小颗粒状基质和含有微生物的聚合物层的颗粒剂，所述的聚合物为a)成膜的、水溶性的且基本上未交联的聚合物，且以所述的制剂为基础，颗粒剂含有不少于按重量计0.5％的水，或b)成膜的、含有羧基或硫酸基团的且在钾离子存在下于水中可以膨胀的结构上交联的多糖，且以所述的制剂为基础，颗粒剂含有不少于按重量计0.5％的水。
在本发明的上下文中，基本上未交联应理解成，没有加入导致形成共价键的单体交联剂，或没有加入造成离子移变凝胶作用的多价阳离子。
在本发明的上下文中，结构上交联是指，通过氢键或通过钾离子的静电相互作用而形成单聚合物的空间网状物或两个聚合物混合物的空间网状物。由此可得到热可逆空间结构物(凝胶)，加热时，此结构物可以再成为溶液。典型的实例是在钾离子存在下的角叉菜胶的明显的双螺旋结构，或是角叉菜胶和刺槐豆胶混合物的结构组成。由多价离子形成的热不可逆结构组成不在上述定义内。
在多糖的每个结构重复单元中可以存在一或多个羧基或硫酸基团。
在本发明的上下文中，水溶性的是指，在温度为5至95℃的范围内，可以制备至少按重量计0.5％的聚合物水溶液。
以1kg制剂为基础，颗粒剂含有优选按重量计0.1至10％的微生物干物质，优选按重量计0.3至5％，且最优选按重量计0.5至3％的干物质。颗粒剂的所有组分的和总是100％。
以细胞浓度为基础的种群密度可以特别的高。微生物的优选种群密度是1×105至1×1011CFU(菌落形成单位)/克颗粒剂。在室温下贮藏期间，此浓度的活细胞可以保持在本发明的制剂中超过10个月，而微生物只有少量的损失，损失小于1/10CFU。
残存的水分含量优选不少于按重量计1％，更优选不少于按重量计3％，且最优选不少于按重量计5％。水分含量的上限优选不大于按重量计40％，更优选不大于按重量计30％，且最优选不大于按重量计20％。水分含量的上限受载体的限制，也受聚合物的水溶性和制备该制剂的方法的限制。在涂敷方法中，例如流化床涂敷方法中，水分含量为按重量计0.5至20％是容易得到的，而在挤出方法中水分含量可以更高，且典型地可以是按重量计0.5至40％。
细小颗粒基质可以具有1μm至0.8cm的平均粒径，更优选10μm至0.5cm，最优选20μm至0.2cm。基质可以是无机物或有机物。优选使用有机物用于真菌，无机物用于营养细胞(细菌)。水不溶性有机物的典型实例是粉末状的糠、秆、锯末和纤维素。特别适合的无机基质是水不溶的金属氧化物和金属盐(SiO2、Al2O3、BaSO4、CaCO3)或碱金属和碱土金属的硅酸盐和硅铝酸盐。硅酸盐中，优选片状硅酸盐。硅酸盐的典型的实例是矿物陶土、硅镁土、硅藻土(kieselgur)、石灰粉、硅藻土、硅灰石、橄榄石、蒙脱石和蛭石。蛭石是特别优选的。
基质的量典型的可以是按重量计50至99％，优选按重量计65至95％，且最优选按重量计75至90％。
颗粒剂可以具有0.01mm至8mm的平均粒径。优选的平均粒径是0.2至4mm，特别优选的平均粒径是0.5至2mm。
成膜的、水溶性的且基本上未交联的聚合物可以是合成或天然聚合物。合成聚合物的典型实例是聚乙烯醇、聚乙二醇或聚乙烯吡咯烷酮以及聚丙烯酰胺的均聚物或共聚物。天然聚合物主要是可以衍化的多糖，优选的天然已知聚合物是很多的，且典型的是淀粉、藻酸盐、角叉菜胶、优选κ-角叉菜胶、ι-角叉菜胶、λ-角叉菜胶、黄原胶、刺槐豆胶或甲基纤维素。也可以采用其混合物。
聚合物必须与微生物相容。通过将微生物和聚合物放在一起的简单方式，本领域的技术人员可以确定相容性。
藻酸盐和角叉菜胶是特别优选的。载体和水溶性聚合物的一个特别优选的组合是蛭石与κ-角叉菜胶的组合。
结构上交联的水可膨胀的成膜聚合物是多糖，优选κ-角叉菜胶、ι-角叉菜胶、刺槐豆胶、黄原胶或其混合物，该聚合物是在钾离子存在下形成的。这些聚合物形成热可逆凝胶，其显著的特点在于分子间氢键或离子键。
水溶性的或水可膨胀的聚合物的量可以是按重量计0.1至20％，优选按重量计0.1至10％，且最优选按重量计0.5至5％。
钾离子与聚合物的羧基或硫酸基团的摩尔比是0.001∶1至1∶1。
可以用于农业中的有害生物防治或防治植物病害的微生物是已知的且特别是描述于EP-A-0 472 494中。
适合的微生物是单细胞或多细胞真菌或细菌，典型的包括根瘤菌(Rhizobium spp.)、Metharizium、镰孢属、木霉属、链霉属、粘帚霉属、青霉属、踝节菌属(Talaromyces)、轮枝孢属或毛盘孢属。优选的微生物是假单胞菌(Pseudomonas spp.)、沙雷氏菌(Serratia spp.)、芽孢杆菌(Bacillus spp.)、土壤杆菌(Agrobacter spp.)、Exserohilumspp、肠杆菌(Enterobacter spp.)。微生物桔黄假单胞菌(PSeudomonasaurantiaca)ATTC No.55169是特别优选的。
可以用微生物来控制的杂草、昆虫和真菌病害，典型的是立枯丝核菌、稻枯斑丝核菌、终极腐霉、尖孢镰孢、Alphanomyces laevis、致病疫霉、葡萄孢菌、核盘菌、芽胞杆菌、Microdochium nivale、根串珠霉、禾顶囊壳和，主要是所有的其它由病原微生物(胡萝卜软腐欧文氏菌、啤酒糖酵母、疱病黄单胞菌、丁香假单胞菌)引起的病害。
桔黄假单胞菌ATTC No.55169对上面列出的不同作物中的许多病害有活性。对棉花、胡瓜、甘兰、天竺葵、凤仙花和一品红上的立枯丝核菌的保护性防治作用特别显著。
经典的粒状颗粒剂的制备(例如，Connik W.J.：“ Formulation ofliving biological control agents with alginate”，American Chemical Society，ACS Symposium Series 1988，Vol.371，pp.241-250；Fravel D.R.，MaroisJ.J.，Lumsden R.D.，Connik W.J.：“Encapsulation of potential biocontrolagents in alginate”，Phytopathology，1985，Vol.75，pp.774-777；StormoK.E.，Crawford R.L.：“Preparation of encapsulated microbial cells forenvironmental application”，Applied and Environmental Microbiology，1992，pp.727-730)给出的颗粒是实际上不溶于水的或即使在缓冲溶液中也只是非常慢地溶解，这样使得微生物的释放非常慢或根本就不发生。
出人意外的是，现已发现，本发明方法制备的颗粒剂实现了微生物非常快速的释放。此制剂在缓冲液或水中分解，根据聚合物的不同，分解时间为0.5至几小时内，即，聚合物层分离或膨胀，这样使得所有的微生物成分在24小时内于土壤中释放。
本发明的另一个目的是提供制备包含细小颗粒基质和含有微生物的聚合物层的颗粒剂的方法，所述的聚合物为：a)成膜的、水溶性的且基本上未交联的聚合物，且以颗粒剂为基础，颗粒剂含有不少于按重量计0.5％的水，或b)成膜的、结构上交联的多糖，所述的多糖含有羧基或硫酸基团，且在钾离子的存在下于水中可膨胀，以及以所述的颗粒剂为基础，颗粒剂含有不.少于按重量计0.5％的水，该颗粒剂的制备方法包含(A)制备颗粒剂a)时，悬浮或在温度不高于95℃下，溶解成膜的、水溶性聚合物，并在此悬浮液或溶液冷却至室温后，悬浮微生物于其中，(B)制备颗粒剂b)时，悬浮含有羧基或硫酸基团的多糖于含有钾离子的缓冲水溶液中，然后悬浮微生物于此溶液中，(C)直接将所得的悬浮液喷雾于细小颗粒基质上或将所述的悬浮液与细小颗粒基质混合，和(D)去除水分直至成一浓缩物，以颗粒剂为基础，浓缩物的水分不少于按重量计0.5％。
如果成膜的、水溶性聚合物用于制备颗粒剂a)，则所述的悬浮液优选在10至30℃的温度范围内制备。制备成膜的、水溶性聚合物时，根据聚合物的类型，此温度范围是25至95℃。
微生物是添加至低于40℃温度下的聚合物悬浮液或是添加至低于40℃，优选低于30℃的冷却聚合物溶液中。
在另一种不同的方法中，颗粒剂b)是在提高的温度下，例如，70℃，通过将含有羧基或硫酸基团的多糖溶解于含有钾离子的缓冲水溶液中，或者是以确定的方法将相互作用的两种聚合物溶解。由这些冷却的溶液形成热可逆的凝胶。微生物是在温度低于40℃下的快要达到固化点之前加入。
缓冲液可以是任何多元酸的含钾离子的盐。市场上可买到的磷酸缓冲液是特别优选的。根据磷酸二氢盐与磷酸氢盐的比率的不同，pH可以调节至约6.5至约7.5。优选的pH是7。
缓冲液的浓度优选是0.00001M/l至1M/l，最优选0.005M/l至0.05M/l。
在尽可能温和的条件下将水分去除，优选在室温下或稍微提高的达约35℃的温度下。
去除水分的设备和方法是本身已知的。最佳的方法取决于欲加工的批量的粘度。本发明的颗粒剂可以由采用常规设备的已知方法制备。混合各组分的喷雾方法常规地用于一般的在流化床反应器中的涂敷。在此方法中，将聚合物和微生物的溶液或悬浮液喷雾至流化床中的基质上，并由此同时干燥。
另一实施方案中，该方法包含用已知的挤出方法制备新颖的颗粒剂。它包括，在混合器中，与所需量的水一起，混合所有的组分，并迫使此混合物通过一孔状板。然后颗粒可以粉碎成所需大小，并干燥之。
可以使用单螺杆压出机、造粒机、小造粒机(subgranulator)、孔状板等等。
本发明的方法给出的是这样的一种颗粒剂，其中基质是用微生物分布于其中的聚合物薄层涂敷的。它所获得的通常不是个别的涂敷颗粒，而是多个不规则形状的基质颗粒的聚集物。
根据所选择的混合和干燥方法，得到不同形状的颗粒。这样，挤出方法给出圆柱状的丸，丸中基质和微生物用基本上相互独立的聚合物涂敷，而流化床中喷雾方法给出的是基质的聚集物，聚集物中颗粒是用含有微生物的薄聚合物层涂敷的。由于从此薄聚合物层可以实现微生物的特别快速的释放，因此这种颗粒形式是优选的。
所有情况下，本发明颗粒剂是固体的自由流动混合物，该混合物可以直接用作撒施颗粒剂。由于该颗粒剂可以直接装填入大田施用的机械装置，因而操作简单安全。根据微生物类型的不同，施用量可以是1kg至20kg。
本发明颗粒剂可以用来处理不同作物的植株、植株的部分或植株所在地(果实、花、叶、茎、块茎、根、土壤)，从而可以抑制或毁灭在所述之处发生的杂草、有害昆虫或病害。
可以将颗粒剂与另外的化学品同时或连续施用于欲处理的区域或植物。另外的化学品可以是化肥、微量营养素以及影响植物生长的其它物质。也可以使用选择性除草剂以及杀虫剂、杀真菌剂、杀细菌剂、杀线虫剂、杀软体动物剂或其混合物。
本发明还涉及本发明颗粒剂保护植物不受病害感染或昆虫损害的用途。防治是针对作物和农业或园艺上的观赏植物的病害，特别是针对谷物、棉花、蔬菜、藤、水果、油料和花卉植物上的病害。特别重要的蔬菜作物是胡瓜、甘兰和豆类，以及花卉植物如天竺葵、凤仙花和一品红。
本发明通过下列实施例进行说明。实施例A1
用桔黄假单胞菌ATTC No.55169接种的10×250ml的Luria Broth在摇床上细胞生长16小时后，作离心处理，沉淀饼再悬浮于0.01M磷酸缓冲液(K2HPO4∶KH2PO4＝1∶0.78，pH＝7)中，成为40ml的浓缩物。将100ml的磷酸缓冲液加热至70℃，并加入0.7g的κ-角叉菜胶，以形成在0.01M磷酸缓冲液中的0.7％κ-角叉菜胶溶液。将此溶液冷却至刚好高于固化点，并与微生物悬浮液混合。
之后在流化床中将上此混合物喷雾到100g蛭石上，给出下列组成的颗粒剂：16％残存水分1.5％微生物，干物质81.9％蛭石0.6％κ-角叉菜胶。
初始浓度为约1.1×1010CFU/g(菌落形成单位)。
为评价贮藏稳定性，经过适合的时间间隔，对浓度作测定，获得下列数据：贮藏天数    在4℃下的CFU/g  在室温下的CFU/g0            1.1×1010        1.1×101020           1.2×1010        1.2×1010130          1.0×1010        9.1×109317          1.6×109         1.4×109实施例A2
5g κ-角叉菜胶与40g的0.01M磷酸缓冲液一起搅拌。然后加入于50升发酵罐中制备的10g桔黄假单胞菌ATTC No.55169的细菌沉淀饼(30％干物质)。聚合物-微生物物质一齐与120g蛭石粉混合，然后挤出。在流化床中，将由此获得的颗粒干燥至所需的水分含量。该颗粒剂具有下列的组成：18％残存水分1.8％微生物，干物质77％蛭石3.2％κ-角叉菜胶。
初始浓度为约3.3×1010CFU/g(菌落形成单位)。贮藏天数    在4℃下的CFU/g  在室温下的CFU/g0             3.3×1010       3.3×101033            3.0×1010       2.3×1010123           6.7×109        1.6×109174           5.9×109        7.8×108实施例A3
用桔黄假单胞菌ATTC No.55169接种的250ml的Luria Broth在摇床上细胞生长16小时后，作离心处理，沉淀饼再悬浮于根据实施例1的0.01M磷酸缓冲液中，成为40ml的浓缩物。
将微生物悬浮液与根据实施例2的0.01M磷酸缓冲液中的100ml 3％藻酸钠溶液混合，并在流化床中喷雾到100g蛭石上。获得下列组成的颗粒剂：12％残存水分0.5％微生物，干物质85.5％蛭石2.5％藻酸钠。初始浓度为约7.6×108CFU/g(菌落形成单位)。贮藏天数    在4℃下的CFU/g  在室温下的CFU/g0             7.6×108        7.6×10820            3.3×108        2.7×10874            3.3×108        1.6×108
桔黄假单胞菌ATTC No.55169的自发突变株用于实施例A4和A5。此突变株是如下获得的：将桔黄假单胞菌ATTC No.55169铺平板于含有0.00005％利福平的Luria Agar上，用已知的方式分离自发的抗性突变株，并进一步培养。如此获得的抗利福平突变株用于下列的实施例A4和A5。实施例A4
用桔黄假单胞菌ATTC No.55169(抗利福平的)接种的250ml的LuriaBroth在摇床上细胞生长16小时后，作离心处理，沉淀饼根据实施例1再悬浮于0.01M磷酸缓冲液中，成为42g的浓缩物。将此微生物悬浮液与相同量的聚乙烯醇溶液(Mowiol 40-88，16％)混合，并在流化床中喷雾到100g蛭石上，获得下列组成的颗粒剂：10％残存水分0.5％微生物，干物质84％蛭石5.5聚乙烯醇。
初始浓度为约1.1×109CFU/g(菌落形成单位)。贮藏天数    在4℃下的CFU/g  在室温下的CFU/g0            1.1×109        1.1×10970           8.3×108        1.1×108120          7.0×108        5.3×108实施例A5
用桔黄假单胞菌ATTC No.55169(抗利福平的)接种的250ml的LuriaBroth在摇床上细胞生长16小时后，作离心处理，沉淀饼根据实施例1再悬浮于0.01M磷酸缓冲液中，成为40ml的浓缩物。根据实施例2将微生物悬浮液与0.01M磷酸缓冲液中的100ml 3％κ-角叉菜胶悬浮液混合，并喷雾到100g蛭石上，获得下列组成的颗粒剂：12％残存水分0.5％微生物，干物质85％蛭石2.5κ-角叉菜胶。
初始浓度为约1.1×109CFU/g(菌落形成单位)。贮藏天数    在4℃下的CFU/g  在室温下的CFU/g0            1.1×109        1.1×10990           3.1×108        1.4×108211          5.3×108        5.2×108实施例A6
8gι-角叉菜胶与40ml的0.01M磷酸缓冲液一起搅拌。然后加入于50升发酵罐中在Richard培养基上发酵120小时的5g镰孢菌(Fusariumnygamai)的离心孢子。聚合物-微生物混合物与120g蛭石粉均匀混合，然后挤出。在流化床中，将由此获得的颗粒干燥至所需的水分含量。获得下列组成的颗粒剂：13％残存水分0.5％微生物，干物质81％蛭石5.5％ι-角叉菜胶。贮藏天数    在4℃下的CFU/g  在室温下的CFU/g0             3.8×108        3.8×10843            2.4×108        2.8×10876            3.0×108        1.5×108119           4.2×108167           1.3×108        1.4×108210           1.3×108        1.6×108实施例B1：生物对照
在温室条件室温下经特定的贮藏期后，测试实施例A1中制备的颗粒剂的生物学活性。标准化的测试条件是：作物：棉花病原菌：立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)颗粒剂是以16g/升盆基质的量加入到盆基质中。
在室温下贮藏10个月后，未发现有任何生物学活性损失。

Claims (43)

1.一种包含细小颗粒基质和含有微生物的聚合物层的颗粒剂，所述的聚合物为
a)成膜的、水溶性的且基本上未交联的聚合物，且以所述的制剂为基础，颗粒剂含有不少于按重量计0.5％的水，或
b)成膜的、含有羧基或硫酸基团的且在钾离子存在下于水中可以膨胀的结构上交联的多糖，且以所述的制剂为基础，颗粒剂含有不少于按重量计0.5％的水。
2.根据权利要求1的颗粒剂，以1kg的所述颗粒剂为基础，它含有按重量计0.1至10％量的微生物。
3.根据权利要求1的颗粒剂，以1kg的所述颗粒剂为基础，它含有按重量计0.3至5％量的微生物。
4.根据权利要求1的颗粒剂，以1kg的所述颗粒剂为基础，它含有按重量计0.5至3％量的微生物。
5.根据权利要求1的颗粒剂，每克所述的颗粒剂含有微生物的种群密度是1×105至1×1011CFU(菌落形成单位)。
6.根据权利要求1的颗粒剂，以所述颗粒剂为基础，其中残存的水分含量不少于按重量计1％。
7.根据权利要求1的颗粒剂，以所述颗粒剂为基础，其中残存的水分含量不少于按重量计3％。
8.根据权利要求1的颗粒剂，以所述颗粒剂为基础，其中残存的水分含量不少于按重量计5％。
9.根据权利要求1的颗粒剂，以所述颗粒剂为基础，其中最大水分含量不大于按重量计40％。
10.根据权利要求1的颗粒剂，其中细小颗粒基质具有1μm至0.8cm的平均粒径。
11.根据权利要求1的颗粒剂，其中细小颗粒基质具有10μm至0.5cm的平均粒径。
12.根据权利要求1的颗粒剂，其中细小颗粒基质具有20μm至0.2cm的平均粒径。
13.根据权利要求1的颗粒剂，其中的水不溶性基质是无机或有机物。
14.根据权利要求13的颗粒剂，其中的水不溶性基质是粉碎的糠、秆、锯末或纤维素。
15.根据权利要求13的颗粒剂，其中无机基质是水不溶性金属氧化物，金属盐(SiO2、Al2O3、BaSO4、CaCO3)，碱金属和碱土金属的硅酸盐和硅铝酸盐。
16.根据权利要求15的颗粒剂，其中水不溶性基质是矿物陶土、硅镁土、硅藻土、石灰粉、硅藻土、硅灰石、橄榄石、蒙脱石或蛭石。
17.根据权利要求15的颗粒剂，其中水不溶性基质是蛭石。
18.根据权利要求1的颗粒剂，以所述颗粒剂为基础，其中基质的量是按重量计50至99％。
19.根据权利要求18的颗粒剂，以所述颗粒剂为基础，其中基质的量是按重量计65至95％。
20.根据权利要求1的颗粒剂，以所述颗粒剂为基础，其中基质的量是按重量计75至90％。
21.根据权利要求1的颗粒剂，它具有0.01至8mm的平均粒径。
22.根据权利要求21的颗粒剂，它具有0.2至4mm的平均粒径。
23.根据权利要求21的颗粒剂，它具有0.5至2mm的平均粒径。
24.根据权利要求1的颗粒剂，其中成膜的、水溶性的且基本上未交联的聚合物是合成或天然聚合物。
25.根据权利要求1的颗粒剂，其中成膜的、水溶性的且基本上未交联的聚合物是聚乙烯醇、聚乙二醇或聚乙烯吡咯烷酮以及聚丙烯酰胺的均聚物或共聚物。
26.根据权利要求1的颗粒剂，其中成膜的、水溶性的且基本上未交联的聚合物是多糖或衍化的多糖。
27.根据权利要求26的颗粒剂，其中成膜的、水溶性的且基本上未交联的聚合物是淀粉、藻酸盐、角叉菜胶、κ-角叉菜胶、ι-角叉菜胶、黄原胶、刺槐豆胶或甲基纤维素，或其混合物。
28.根据权利要求27的颗粒剂，其中成膜的、水溶性的且基本上未交联的聚合物是κ-角叉菜胶、ι-角叉菜胶或藻酸盐。
29.根据权利要求1的颗粒剂，其中成膜的、结构上交联的、水可膨胀的、含羧基或硫酸基团的聚合物是κ-角叉菜胶、ι-角叉菜胶、黄原胶，或刺槐豆胶与黄原胶的混合物。
30.根据权利要求1的颗粒剂，其中成膜的、结构上交联的、水可膨胀的、含羧基或硫酸基团的聚合物是κ-角叉菜胶或ι-角叉菜胶。
31.根据权利要求1的颗粒剂，以所述的颗粒剂为基础，它含有按重量计0.1至20％量的水溶性的或水可膨胀的聚合物。
32.根据权利要求1的颗粒剂，其中钾离子与聚合物的羧基或硫酸基团的摩尔比是0.001∶1至1∶1。
33.根据权利要求1的颗粒剂，其中的微生物选自根瘤菌、Metharizium、镰孢属、木霉属、链霉属、粘帚霉属、青霉属、踝节菌属、轮枝孢属或毛盘孢属，假单胞菌、沙雷氏菌、Exserohilum spp.、芽孢杆菌、土壤杆菌、肠杆菌和桔黄假单胞菌ATTC No.55169。
34.根据权利要求1的颗粒剂，其中的微生物是桔黄假单胞菌ATTCNo.55169。
35.一种制备包含细小颗粒基质和含有微生物的聚合物层的颗粒剂的方法，所述的聚合物为：
a)成膜的、水溶性的且基本上未交联的聚合物，且以颗粒剂为基础，颗粒剂含有不少于按重量计0.5％的水，或
b)成膜的、结构上交联的多糖，所述的多糖含有羧基或硫酸基团，且在钾离子的存在下于水中可膨胀，以及以所述的颗粒剂为基础，颗粒剂含有不少于按重量计0.5％的水，
该颗粒剂的制备方法包含
(A)制备颗粒剂a)时，悬浮或在温度不高于95℃下，溶解成膜的、水溶性聚合物，并在此悬浮液或溶液冷却至室温后，悬浮微生物于其中，
(B)制备颗粒剂b)时，悬浮含有羧基或硫酸基团的多糖于含有钾离子的缓冲水溶液中，然后悬浮微生物于此溶液中，
(C)直接将所得的悬浮液喷雾于细小颗粒基质上或将所述的悬浮液与细小颗粒基质混合，和
(D)去除水分直至成一浓缩物，以颗粒剂为基础，浓缩物的水分不少于按重量计0.5％。
36.根据权利要求35的方法，如果成膜的、水溶性聚合物用于制备颗粒剂a)，则所述的悬浮液优选在10至30℃的温度范围内制备。
37.根据权利要求35的方法，如果成膜的、水溶性聚合物用于制备颗粒剂a)，则所述的溶液优选在25至95℃的温度范围内制备。
38.根据权利要求35的方法，其中微生物是在低于40℃的温度下加至聚合物的溶液或悬浮液中的。
39.根据权利要求35的方法，其中微生物是在低于30℃的温度下加入的。
40.根据权利要求35的方法，其中缓冲液是磷酸二氢钾和磷酸氢钾的混合物。
41.根据权利要求40的方法，其中溶液或悬浮液的pH是7。
42.根据权利要求39的方法，其中缓冲液的浓度是0.00001M/l至1M/l。
43.该颗粒剂保护植物不受病害侵染或昆虫损害的用途。
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