CZ9297A3 - Granulated formulation containing micro-organisms, process of its preparation and use - Google Patents

Granulated formulation containing micro-organisms, process of its preparation and use Download PDF

Info

Publication number
CZ9297A3
CZ9297A3 CZ9792A CZ9297A CZ9297A3 CZ 9297 A3 CZ9297 A3 CZ 9297A3 CZ 9792 A CZ9792 A CZ 9792A CZ 9297 A CZ9297 A CZ 9297A CZ 9297 A3 CZ9297 A3 CZ 9297A3
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
water
granular formulation
formulation
granular
formulation according
Prior art date
Application number
CZ9792A
Other languages
English (en)
Inventor
Margarete Enzmann
William Baettig
Original Assignee
Ciba Geigy Ag
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ciba Geigy Ag filed Critical Ciba Geigy Ag
Publication of CZ9297A3 publication Critical patent/CZ9297A3/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
    • C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
    • C12N11/10—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a carbohydrate
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
    • C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • A01N63/20—Bacteria; Substances produced thereby or obtained therefrom
    • A01N63/27—Pseudomonas
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
    • C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
    • C12N11/08—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a synthetic polymer
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/80—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
    • C12N9/52—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from bacteria or Archaea
    • C12N9/54—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from bacteria or Archaea bacteria being Bacillus
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
    • C12N9/58—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from fungi
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
    • C12P21/06—Preparation of peptides or proteins produced by the hydrolysis of a peptide bond, e.g. hydrolysate products
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/60—Buffer, e.g. pH regulation, osmotic pressure

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Compositions Of Macromolecular Compounds (AREA)
  • Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)

Description

Vynález se týká granulované formulace obsahující (í) pevný ve vodě nerozpustný a jemně zrnitý substrát, (2) ve vodě rozpustný nebo ve vodě botnající polymer tvořící film, který není kovaíentně zesítěný nebo který je zesítěný polyvalentními kationty, (3} mikroorganismy a (4) vodu. Vynález se dále týká způsobu přípravy uvedené granulované formulace a jejího použití k ochraně rostlin proti chorobám a napadení hmyzem.
íosavadnr stav teohnt.<v
Ochrana rostlin za použití buněk (mikroorganismů; tvořících spory nebo vegetativních buněk (mikroorganismů) v poslední době získává na významu. Předpokladem využití takových biologických kontrolních činidel je schopnost zoracovat je do použitelných formulací, jako jsou suspenzní koncentráty, dispergovatelné prášky, granule, nebo zejména granule k rozmetání (scattering granules). Příprava formulací je však spojena 3 velkými obtížemi. Pro přípravu v případě většiny vegetativních buněk, a rovněž některých spor, nelze například použít žádný způsob, který by využíval teploty vyšší než přibližně 40 ’C, jelikož jsou při nich mikroorganismy poškozovány a dochází k podstatnému snížení životaschopnosti. Skladování je rovněž problematické, jelikož se nelze vyhnout ztrátám životaschopnosti za běžných podmínek okolí, které jsou následkem smrti buněk, nebo vyhnout se ztrátě životaschopnosti v případě, že j‘e nutné skladovat formulace při nízké teplotě.
Většina formulací mikroorganismů je tvořena polymerními gely zesítěnými polyvalentními kationty, které obsahují mikroorganismy. Takovou formulaci popsali mimo jiné D. R. Fravel a kol. v Phytopathology, svazek 75, č. 7, 774 - 777, 1985, za použití alginátu jako polymerního materiálu. Je tam popsáno souběžné použití substrátů. Příprava těchto formulací se obvykle provádí mícháním roztoků přírodních nebo syntetických polymerů tvořících gel, například alginátů, a vodných roztoků poiyvalentních iontů kovů tak, že se vytvoří jednotlivé kapičky a tak, že lze mikroorganismy suspendovat v jednom, ze dvou, nebo v obou reakčnich roztocích. Tvorba gelu začíná ve chvíli, kdy se k roztoku gelotvorného činidla po kapkách přidá suspenze mikroorganismů. Tyto částice gelu lze následně vysušit. Tento proces se nazývá ionotropní geiovatění. V závislosti na stupni sušení se tímto způsobem získají kompaktní a tvrdé pelety polymerů, které jsou zesítěny poiyvaíent nimi kationty a které obsahují mikroorganismy a substrát v podstatě rovnoměrném rozmístění. Velikost částic může být až do 5 mm.
EP-AÍ-0 097 571 popisuje formulace na bázi částečné zesítěných polysaoharidů které, kromě toho že obsahují mikroorganismy, mohou obsahovat jemně zrnitou kyselinu křemičitou jako substrát a zesíténi lze provést ionty Ca”. Vodní aktivita těchto formulací nesmí být větší než 0,3. V článku shrnujícím různé formulační systémy v New Directions in Biolcgical Control: Alternatives for Supressing
Agricultural Pests and Diseases, str. 345 - 372, Alan R.
Liss, lne. (1990), uvádějí W. J. Connick a kol. granulované rormulace alginátové substrátem způsobem a íccmpaktni. ionotročního R. Fravel v s vemikulitem jako pelety připravené geiovatění. Takové formulace rovněž popsal D.
Pesticide Formulations and Application Systems: 11. svazek, ASTM STP 1112 American Society for Testing and Materials, Philadelphie, 1992, str. 173 - 179.
Takovéto zesítěné gelové formulace mají ten nedostatek, že dochází k pomalému uvolňování biologického kontrolního činidla, jelikož gely jsou nerozpustné ve vodě a obvykle se vytváří velké částice o průměru větším než několik milimetrů. Pokud je žádoucí rychlejší uvolňování, je nutné formulace předem ošetřit obvykle pufrovacími roztoky. To je obtížnější oro konečného spotřebitele a omezuje se tím bezpečnost oři manipulaci. Při vyšších populačních hustotách (> IQ9 CFU/g; CFG = jednotka tvořící kolonii (colony forming unit)), které jsou nuzné pro snížení aplikační dávky, nemají tyto systémy obvykle dostatečnou stabilitu a pro vyhnutí se podstatným ztrátám je nutné skladování za studená. Pro přípravu formulací musí být polymery tvořící gel rozpuštěny ve vodě, což je v některcýh případech obtížné a možné pouze při zvýšené teplotě. Nutným krokem způsobu pro získání použitelné granulované formulace je kapkové vytváření gelu. Technické zařízení pro provádění takového způsobu v průmyslovém měřítku je nutné považovat za složité a nákladné. Takto získané částice stále vykazuji vysoký obsah vody, který musí být snižován sušením pro zajištění přijatelné stability při skladování. Toto sušení způsobuje, že je tento způsob ještě nákladnější, podrobuje mikroorganismy riziku dalšího poškození a může dále snížit jejich životaschopnost. Granulované formulace stabilní při skladování na bázi ve vodě rozpustných a ve vodě botnajících polymerů a připravená bez ionotrcpního geiovatění nejsou dosud v oboru známé.
Podstata vynálezu
Nyní bylo s překvapením zjištěno, že je možné (a) připravit granulované formulace mikroorganismů ve vrstvě polymeru bez ionotropního geiovatění a částečně bez úplného rozpouštění polymeru, (b) omezit podstatně ztráty způsobené smrtí živých buněk při sušení, (c) dosáhnout vysoká stability při skladování, zejména v běžných podmínkách okolí, (d) dosáhnout velmi vysokých populačních hustot mikroorganismů a stále zajistit výbornou stabilitu při skladování, (e) dosáhnout rychlého uvolňování biologického kontrolního činidla a (f) dosáhnout výborné stabilizace zejména vegetativních bakteriálních buněk, aplikací mikroorganismů, ve ve vodě rozpustném nebo ve vodě botnajícím polymeru tvořícím film, který není kovalentně zesítěn nebo který je zesítěn polyvalentními kationty, na substrát, nebo společně se substrátem, přičemž tato formulace obsahuje ne méně než 0,5 % hmot. vody, vztaženo na celou formulaci.
Jedním, předmětem vynálezu je granulovaná formulace obsahující jemně zrnitý substrát a vrstvu polymeru obsahující mikroorganismy, kterýmžto polymerem je a) film tvořící,· ve vodě rozpustný a v podstatě nezesítěný polymer, a granulovaná formulace obsahuje ne méně než 0,5 % hmot. vody, vztaženo na uvedenou formulaci, nebo b) film tvořící, strukturně zesítěný polysacharid, který obsahuje karboxylové nebe sulfátové skupiny a berná ve vodě za přítomností draselných iontů, a granulovaná formulace obsahuje ne méně než 0,5 % hmot. vody, vztaženo na uvedenou formulaci.
V podstatě nezesítěný znamená v kontextu vynálezu, že se nepřidávají žádná monomerní zesíťující činidla, která vedou k vytváření kovaientních vazeb, nebo žádné polyvalentní kationty, které způsobují ionotropní gelovatění.
Strukrurně zesítěný znamená v tomto textu, že dochází k vytváření prostorové sítě jediného polymeru nebo směsi dvou polymerů díky vodíkovým vazbám nebo díky elektrostatickým interakcím draselných iontů. Získá se tak termoreversíbilní prostorová struktura (gel), která při zahřátí znovu přechází do roztoku. Typickými příklady jsou výrazná dvoušroubovicová struktura karagenanu za přítomnosti draselných iontů nebo strukturní formace směsi karagenanu a rohovníkové pryskyřice (locuso beán gum). Do výše uvedené definice nespadá tacelně ireversibiiní strukturní formace polyvalentními ionty.
Na jednu strukturní opakující se j edno t ku polvsacharidu může být přítomna jedna nebo více než jedna karboxylová nebo sulfátová skupina.
Ve vodě rozpustný znamená v tomto textu, že lze ořipravit alespoň 0,5% (hmot.) vodný roztok polymeru v nepletním rozmezí 5 až 95 eC.
Granulovaná formulace obsahuje mikroorganismy výhodně v množství 0,1 až 10 % hmot., výhodněji 0,3 až 5 % hmot., a nej výhodněji 0,5 až 3 % hmot. suché hmoty, vztaženo na 1 kg formulace. Součet všech složek granulované formulace vždy činí 100 %.
Populační hustota, vztaženo na koncentraci buněk, může být obzvláště vysoká. Výhodná populační hustota mikroorganismů je od íxíO’ do 1x10” CPU (jednotek tvořících kolonie) na g granulované formulace. V průběhu skladování při oeplotě místnosti může být táno koncentrace živých buněk ve formulaci podie vynálezu zachována po dobu až 10 měsíců pouze s malými ztrátami mikroorganismů s koeficientem méně než 1 z
CPU.
Zbytkový obsah vody činí výhodně ne méně než 1 % hmot., výhodněji ne méně než 3 % hmot. a nej výhodněj i ne méně než 5 % hmot.. Horní hranice obsahu vody výhodně činí ne více než 40 % hmot., výhodněji ne více než 30 % hmot. a nej výhodněj i ne více než 20 % hmot. Horní hranice obsahu vody je dána nosičem, rozpustností polymeru ve vodě a způsobem přípravy formulace. Při cbalovacích metodách, například při obalování ve fluidním loži (ve vznosu), lze snadno dosáhnout obsahu vody 0,5 až 20 % hmot., zatímco při vytlačovacích metodách může být obsah vody vyšší a může typicky činit od 0,5 do 40 % hmot..
Jemně zrnitý substrát může mít průměrnou velikost částic 1 um až 0,9 cm, výhodněji 10 pm až 0,5 cm a nejvýhedněji cd 20 pm do 0,2 cm. Substrátem může být anorganický nebo organický materiál. Je výhodné použít organické materiály pro houby a anorganické materiály oro vegetativní buňky (bakterie). Typickými příklady va vodě nerozpustných organických materiálů jsou rozmělněné otruby, sláma, piliny a celulosa. Zejména vhodnými anorganickými substráty jsou ve vodě nerozpustné oxidy kovu a seli kovů (oxid křemičitý, oxid hlinitý, síran barnatý, uhličitan vápenatý) nebo silikáty a aluminosilikáty alkalických kovů a kovů alkalických zemin. Ze silikátů jsou výhodné listové (deskové) silikáty. Typickými příklady silikátů jsou minerální jíly, atapulgit, křemelina, práškový vápenec, infuzóriová hlinka, wollastonit, olivín, montmorillonit a vermikulit. Zejména výhodný je vermikulit.
Množství substrátu může typicky činit od 50 dc 99 % hmot., výhodně od 65 do 95 % hmot. a nejvýhodněji od 75 do 90 % hmot.
Granulovaná formulace může mít průměrnou velikost částic 0,1 mm až 8 mm. Výhodná průměrná velikost částic činí cd 0,2 do 4 mm a zejména výhodná průměrná velikost částic činí od 0,5 do 2 mm.
Film tvořícím, ve vodě rozpustným a v podstatě ne2esítěným polymerem může být syntetický nebo přírodní polymer. Typickými příklady syntetických polymerů jsou hemoa kopolymery polyvinylalkoholu, polyethylenglykolu nebo polyvinylpyrrolidonu jakož i polyakrylamidy. Přírodními polymery jsou hlavně polysacharidv, které mohou být derivatizovány. Výhodných známých přírodních polymerů je celá řada a typicky jsou jimi škrob, alginátv, karagenany, výhodně κ-karagenan, τ-karagenan, λ-karagenan, xanthan, rohovníková pryskyřice nebo methylcelulosy. Lze rovněž použít jejich směsi.
Polymery musí být kompatibilní s mikroorganismy. Kompatibilitu může odborník snadno stanovit uvedením mikroorganismů do styku s polymerem.
Zejména výhodné jsou algináty a karagenany. Zejména výhodnou kombinací nosiče a polymeru rozpustného ve vodě je vermikulit s κ-karagenanem.
Film tvořícím, strukturně zesítěným polymerem botnajícím ve vodě je polysacharič, výhodně κ-karagenan, τ-karagenan, rohovníková pryskyřice, xanthan, nebo jejich směsi, které se tvcří za přítomnosti draselných iontu. Tyto polymery tvoří tepelně reverzibilní gely, které se vyznačují intemnoiekulárními vodíkovými vazbami nebo iontovými vazbami.
Množství ve vodě rozpustného nebo ve vodě bctnajícího polymeru může činit od 0,1 do 20 % hmot., výhodně od 0,1 do 10 % hmot. a nejvýhodněji od 0,5 do 5 % hmot..
Molární poměr draselných iontů ke karboxyiovým nebo sulfátovým skupinám polymeru činí od 0,001 : 1 do 1 : 1.
Mikroorganismy, které lze použíc ke kontrole škůdců nebo ke kontrole rostlinných chorob v zemědělství jsou známé a popsané, mimo jiné v EP-A-0 472 494.
Vhodnými mikroorganismy jsou jedno- a vícebuněčné houby a oa.Kterre, Metharizium, Giiocladium, mezi které typicky patří Rhizcbium spp., Fusarium, Trichoderma, Stryptomyces,
Penicillium, Talaromyces, Verticiiiium nebo
Coiletotrichum. Výhodnými mikroorganismy jsou Pseudomonas spp., Serratia spp., Bacilus spp., Agrobacter spp., Exserohilum spp., Fnterobacter spp.. Zejména výhodný je mikroorganismus Pseudomonas aurantiaca ATTC č. 55159.
Plevely, hmyzem a houbovými chorobami, které lze kontrolovat mikroorganismy, jsou typicky Rhizoctonia solani, Pňizoctonia oryzae, Phytium ultimum, Fusarium oxysporum spp., Alpha.ncmyces laevis, Phytophtora infestans, Botrytis spp., Sclerozinia sclerotiorum, Bacillus sp., Microdochium nivale, Thieiaviopsis basicola, Gaeumanomyces graminis a v principu všechny další choroby způsobované patogenními mikroorganismy (Erwinia carotovora, Saccharomyces cerevisiae, Xanthomonas vesicatoria, Pseudomonas syringae).
Pseudomonas aurantiaca ATTC č. 55169 je účinný proti řadě chorob uvedených výše na různých plodinách. Zejména výrazné je ochranné působení proti Rhizoctonia solaní na bavlníku, dýních, brukvo vitých zeleninách, pelargór.iích, netýkavce a poinsetii.
Přípravou klasických kapičkových granulovaných formulací (například Connik W. J. : Formulation of living biological control agents with alginate v American Chemical Society, ACS Symposium Series 1988, svazek 371, sr. 241 až 250; Fravel D. R., Marois J. J., Lumsden R. D., Connik W. J. ; Encapsulation of potential biocontrol agents in alginate z Phytopathology, 1935, sešit 75, str. 774 - 777; stormc K. Crawford R. L.: Preparation of er.capsulated micrcbial cells for environmental application v Appliad and Environmental Microbiology, 1992, str. 727 - 730) se získají granule, které jsou prakticky nerozpustné a rozpouští se pouze velmi pomalu dokonce i v pufrovacích roztocích, takže k uvolňování mikroorganismů dochází velmi pomalu nebo k němu nedochází vůbec.
S překvapením bylo zjištěno, že u granulí připravených způsobem podle vynálezu dochází k velmi rychlému uvolňování mikroorganismů. Formulace se rozkládá v pufru nebe ve vede, v závislosti na polymeru, během 0,5 až několika hodin, t.j. vrstva polymeru se oddělí nebo botná, takže se ceiý mikrobiální obsah v půdě uvolní během 24 hodin.
Dalším předmětem vynálezu je způsob přípravy granulované formulace obsahující jemně zrnitý substrát a vrstvu polymeru obsahující mikroorganismy, kterýmžto polymerem je
a) film tvořící, ve vodě rozpustný a v podstatě nezesítěr.ý polymer, a granulovaná formulace obsahuje ne méně než
b) prr (A) o;
0,5 % hmot. vody, vztaženo na uvedenou formulaci, nebo film tvořící, strukturně zesítěný polysacharid, který obsahuje karboxylové nebo sulfátové skupiny a botná ve vodě za přítomností draselných iontů, a granulovaná formulace obsahuje ne méně než 0,5 % hmot. vody, vztaženo na uvedenou formulaci, kterém se k přípravě granulí a) suspenduje nebo při teplotě ne vyšší než 95 ’C rozpustí film tvořící a ve vodě rozpustný polymer a mikroorganismus se suspenduje v této suspenzí nebo roztoku po ochlazení na teplotu místnosti, k přípravě granulí b) se suspenduje polysacharid obsahující karboxylové skupiny nebo sulfátové skupiny ve vodném pufrovacím roztoku obsahujícím draselné a v tomto roztoku se co;
suspencuje mu kroo rganu smus,
O) výsledné suspenze se nastříkají přímo na jemně zrnitý substrát nebo se uvedené suspenze míchají s jemně zrnitým substrátem, a odstraní se voda na koncentraci, která je ne nižší než 0,5 % hmot., vztaženo na granulovanou formulaci.
Pokud se pro přípravu granulované formulace a) použije suspenze film tvořícího a ve vodě rozpustného polymeru, potom se tato suspenze výhodně připravuje v teplotním rozmezí od 10 aC do 30 aC. 5ro příoravu roztoku film tvořícího a ve vodě rozpustného polymeru činí teplotní rozmezí od 25 v závislosti na týmu polymeru.
Přidávání mikroorganismu se provádí buď dc suspenze polymeru přu teplotě pod 40 eC nebo do ochlazeného roztoku polymeru při teplotě pod 40 eC, výhodné pod 30 ’c.
Podle další varianty způsobu se připraví granulovaná formulace b) rozpuštěním polysacharidu obsahujícího karboxylové skupiny nebo obsahujícího sulfátové skupiny ve vodném pufrovacím roztoku obsahujícím draselné ionty při zvýšené teplotě, například 70 eC, nebo rozpuštěním dvou polymerů, které navzájem interagují, stejným způsobem. Z těchto ochlazených roztoků se vytvoří tepelně reverzibilní gel. Přidání mikroorganismu se provede krátce před teplotou tuhnutí, při teplotě pod 40 ‘C.
Pufrem může být libovolná draslík obsahující sůl vícesytné kyseliny. Zejména výhodné jsou komerčně dostupné fosfátové pufrv. V závislosti na poměru dihydrogenfosfcrečnanu k monohydrogenfosforečnanu lze pH upravit na přibližně 5,5 až přibližně 7,5. Výhodné je pH 7.
Koncentrace pufru výhdoně činí cd 0,00001 mol/1 do 1 mol/1, nejvýhodněji od 0,005 mol/1 do 0,05 mol/1.
Veda se odstraňuje za co nejmírnějších podmínek, výhodně při teplotě místnosti nebo při mírně zvýšené teplotě dc přibližně 35 ’C.
Zařízení a způsoby pro odstraňování vody jsou o sobě známé. Nejlepší způsob závisí na viskozitě zpracovávaného vzorku. Granulované formulace podle vynálezu lze připraví pomocí známých způsobů za použití běžného zařízení. Pro míchání složek se při obalování účelně používají sprayové metody, typicky v reaktoru s fluidním ložem. Při této metodě se roztok nebo supenze polymeru a mikroorganismus nastříkají na substrát ve fluidním loži a tím se současně usuší.
Dalším provedením způsobu je příprava ncvých granulovaných formulací pomocí známých vytlačovacích metod. Při tem se všechny složky míchají v míchacím zařízení s poeřebným množstvím vody a směs se protlačí přes perforovanou desku. Granule lze poté rozmělnit na požadovanou velikost a vysušit.
Lze použít jednošnekové extrudéry, granuiátory, subgranulátory, perforované desky a podobně.
Způsobem podle vynálezu se získá granulovaná formulace, ve které je substrát obalen tenkou vrstvou polymeru, ve které jsou rozptýleny mikroorganismy. Obvykle se nezískají jednotlivé obalené částice, ale aglomeráty tvořené více částicemi substrátu neoravidelnéno tvaru.
V závislosti na vybraném způsobu mícháni a sušení se získají částice různého tvaru. Vytlačovacím postupem se tedy získají válcovité pelety, ve kterých. jsou substrát a mikroorganismy obalené polymerním materiálem v podstatě nezávisle na sobě, zatímco sprayovou metodou ve fluidním loži se získají aglomeráty substrátu, ve kterých jsou částice obaleny tenkou vrstvou polymeru obsahující mikroorganismy. Tato částicové forma je výhodná, jelikož z tenké vrstvy polymeru dochází k zejména rychlému uvolňování mikroorganismu .
Granulované formulace oodle wnáiezu ve vsecn případech pevné, volně tekoucí směsi, které lze použit prime jako granule k rozmetání (scattering granules). Jednoduše a bezpečně se s nimi manipuluje, jelikož je lze přímo plnit do mechanických zařízení pro polní aplikaci. Aplikační dávky mohou činit od 1 kg do 20 kg, v závislosti na typu mikroorganismu.
vynálezu lze použít k nebe stanoviště rostlin
Granulované formulace podle ošetření rostlin, částí rostlin (plodů, květů, listů, stonků, hlíz, kořenů, půdy: v případě různých různých užitkových rostlin, a plevel, škodlivý hmyz nebo choroby, které se tam vyskytují, mohou být inhibevány nebo zničenv.
Granulované formulace lze na plochy nebo rostliny které mají být ošetřeny, aplikovat současně nebo postupně s dalšími chemickými činidly. Dalšími chemickými činidly mohou být hnojivá, látky dodávající mikroprvky, jakož i další látky, které ovlivňují růst rostlin. Lze použít selektivní herbicidy, jakož i insekticidy, fungicidy, baktericidy, nematocidv, muloskocidy nebo jejich směsi.
užitkových rostlin a zahradnictví, zejména
Vynález se dále týká použití granulovaných formulací podle vynálezu k ochraně rostlin před infekcí chorobou nebo před poškozením hmyzem. Tato kontrola je zaměřena na choroby okrasných rostlin v zemědělství a pokud jde o obiloviny, bavlník, zeleninu, vinnou révu, ovoce, olejniny a květiny. Mezi příklady zejména významných zelenin patří dýně, brukvovité zeleniny a fazole, a jako květiny je třeba zmínit poinsetii, peiargonía a netýkavky.
Vynález ilustrují následující příklady.
Příklady provedení vynálezu
Příklad Ai x 250 ml vývaru (Luria Broth), inokulovaného Pseudomonas aurantiaca, ATTC č. 55165, se po 1S hodinách růstu buněk na třepačce odcentrifuguje a peleta se resuspenduje v 0,01M fosfátovém pufru (K3HP04 : KH3?O4 = = 1 : 0,78; pří = 7) na celkový objem 40 ml. 100 ml fosfátového pufru se zahřeje na teplotu 70 °C a přidá se 0,7 g κ-karagenanu, takže se vytvoří 0,7% roztok κ-karagenanu v 0,0121 fosfátovém pufru. Tento roztok se ochladí na teplotu právě nad teplotou tuhnutí a smíchá se se suspenzí mikroorganismů.
Tato směs se poté nastříká na 100 g vermikulitu ve fiuidním loži, čímž se získá granulovaná formulace následujícího složeni:
% zbytkové vody
1,5 % sušiny mikroorganismů
81,9 % vermikulitu
0,6 % x-karagenanu.
Počáteční koncentrace činí přibližně 1,1 x 1C13 CFU (jednotek tvořících kolonie) na gram.
Pro stanovení stability při skladovaní se ve vhodných intervalech určuje koncentrace. Získají se následující údaje:
Doba skladování ve dnech CFU/g při 4 *C CFU/g při teplete místností
0 1,1 x 101Q 1,1 x 10i0
20 1,2 x 10lfl 1,2 x IQ13
130 1,0 x 10*Q 9,1 x ÍC3
317 1,6 x 10’ 1,4 x ÍO5
Přiklad A2 g κ-karagenanu se míchá se 40 g 0,01M fosfátového pufru. Poté se přidá 10 g buněčných pelet (obsahujících 30 % sušiny) Pseudomonas aurantiaca, ATTC č. 55159, připravených v 50 1 fermentoru. Směs polymeru a mikroorganismu se současně
Λ smíchá se 120 g práškového vermikulitu a poté se vytlačí. Takto získané granule se vysuší na požadovaný obsah vody ve fluidním loži. Granulovaná formulace má následující složení:
% zbytkové vody
1,8 % sušiny mikroorganismů 77 % vermikulitu
3,2 % κ-karagenanu.
Počáteční koncentrace činí ořibližně 3,3 x
FU (jednotek tvořících kolonie) na gram.
Doba skladování ve dnech CFU/g při 4 eC CHJ/g při teplotě místnosti
0 3,3 x 10“ 3,3 x 10“
33 3,0 x 10“ 2,3 x 10“
123 6,7 x 10’ 1,6 x 10’
174 5,9 x 10’ 7,8 x 10’
Příklad A3
250 ml vývaru (Luria Broth) , inokulovaného Pseudomonas aurantiaca, ATTC č. 55169, se po 16 hodinách růstu buněk na třepačce odcentrifuguje a peleta se resuspenduje v Ο,ΟΙΜ fosfátovém pufru podle příkladu 1 na celkový objem 40 ml.
Suspenze mikroorganismu se smíchá se 100 ml 3% roztoku alginátů sodného v Ο,ΟΙΜ fosfátovém pufru podle příkladu 2 a nastříká se na 100 g vermikulitu ve fluidním loži.
Získá se granulovaná formulace následujícího složení:
% zbytkové vody
0,5 % sušiny mikroorganismů
35.5 % vermikulitu
2.5 % alginátů sodného.
Počáteční koncentrace činí přibližně 7,6 x 10’ CFU (jednotek tvořících kolonie) na gram.
Doba skladování ve dnech
CFU/g při 4 °C CFU/g při teplotě místnosti
0 7,6 x 10’ 7, 6 x 10’
20 3,3 x 10’ 2,7 x 10’
74 3,3 x 10a 1, 6 x 10’
V příkladech A4 a A5 se použije spontánní mutant Pseudomonas aurantiaca, ATTC č. 55169. Tento mutant se získá následovně: Pseudomonas aurantiaca, ATTC č. 55169, se nanese na desky agaru (Luria Agar) obsahujícího 0,00005 % rifampicinu a spontánně rezistentní mutanti se známým způsobem izolují a dále kultivují. Takto získaní mutanti rezistentní vůči rifampicinu se použijí pro následující pokusy A4 a A5.
Příklad A4
250 ml vývaru (Luria Broth), inokulovaného Pseudomonas aurantiaca, ATTC č. 55169 (rezistentním vůči rifampicinu), se po 16 hodinách růstu buněk na třepačce odcentriřuguje a peleta se resuspenduje v 0,01M fosfátovém pufru na celkovou hmotnost 42 g podle příkladu i. Suspenze mikroorganismu se smíchá se stejným množstvím roztoku polyvinylalkoholu (Mcwioi 40-33, 16%) a nastříká se na 100 g vermikuíitu ve fluidním loži.
Získá se granulovaná formulace následujícího složení:
% zbytkové vody
0,5 % sušiny mikroorganismů % vermikuíitu
5,5 % polyvinylalkoholu.
Počáteční koncentrace činí přibližné 1,1 χ 109 CPU (jednotek tvořících kolonie) na gram.
Doba skladování ve dnech CFU/g při 4 eC CFU/g při teplotě místnosti
0 1,1 χ 109 1,1 χ 109
70 3,3 χ 103 1,1 χ 103
120 7,0 x IQ3 5,3 x 10’
Příklad A5
250 ml vývaru (Luria Broth), inokulovaného Pseudomonas aurantiaca, A.TTC č. 55169 (rezistentním vůči rifampicinu), se po 16 hodinách růstu buněk na třepačce odcentrifuguje a peleta se resuspenduje v 0,01M fosfátovém pufru podle příkladu 1 na celkový objem 40 ml.
Suspenze mikroorganismu se smíchá se 100 ml 3% suspenze κ-karagenanu v 0,01M fosfátovém pufru podle příkladu 2 a nastříká se na 100 g vermikulitu.
Získá se granulovaná formulace následujícího složení:
% zbytkové vody
0,5 % sušiny mikroorganismů % vermikulitu
2,5 % κ-karagenanu.
Počáteční koncentrace činí přibližně 1,1 x 10’ CFU (jednotek tvořících kolonie) na gram.
Doba skladování ve dnech CFU/g při 4 °C CFU/g při teplotě místnosti
0 1,1 x 103 1,1 x 10*
90 3,1 x 10s 1,4 x 10’
211 5,3 x 103 5,2 x 10*
Příklad A5 g τ-karagenanu se míchá se 40 ml 0,01M fosfátového pufru. Poté se přidá 5 g centrifugovaných spor Fusarium nygamar, cementovaného v 50 1 fermentoru na Richardsově mediu po dobu 120 hodin. Směs polymeru a mikroorganismu se rovnoměrně promíchá se 120 g práškového vermikulitu a poté se vytlačí. Takto získaná granulovaná formulace se vysuší na požadovaný obsah vody ve fluidním loži.
Získá se formulace následujícího složení:
% zbytkové vody
0,5 % sušiny mikroorganismů % vermikulitu
5,5 % τ-karagenanu.
Doba skladování ve dnech CETJ/g pří 4 °C CETJ/g při teplotě místnosti
0 3,3 x 10’ 3,3 x 10’
43 2,4 x 10’ 2,3 x 10’
76 3,0 x 10’ 1,5 x 10’
119 4,2 x 10’
167 1,3 x 10’ 1,4 x 10’
210 1,3 x 10’ 1,6 x 10’
Příklad 31
Biologická kontrola
U granulované formulace připravené v příkladu Al se testuje ve skleníkových podmínkách její biologická účinnost po konkrétních dobách skladování při teplotě místnosti. Použijí se standardizované podmínky testu, přičemž je užitkovou rostlinou bavlník a patogenem Rhizoctcnia solani. Granulovaná formulace se přidává do substrátu v květináči v množství 16 g / 1 substrátu v květináči.
Po skladování po dobu 10 měsíců při teplotě místností se nezjistí žádná ztráta biologické účinnosti.

Claims (37)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Granulovaná formulace, vyznačujíc! se tím, že obsahuje jemně zrnitý substrát a vrstvu polymeru obsahující mikroorganismy, kterýmžto polymerem je a} film tvořící, va vodě rozpustný a v podstatě nezesítěný polymer, a granulovaná formulace obsahuje ne méně než 0,5 % hmot. vody, vztaženo na uvedenou formulaci, nebo
    b) film tvořící, strukturně zesítěný polysacharid, který obsahuje karboxylové nebo sulfátové skupiny a botná ve vodě za přítomností draselných iontu, a granulovaná formulace obsahuje ne méně než 0,5 % hmot. vody, vztaženo na uvedenou formulaci.
  2. 2. Granulovaná formulace podle nároku 1, vyznačující se tím, že obsahuje mikroorganismy v množství 0,1 až 10 % hmot., vztaženo na 1 kg uvedené formulace.
  3. 3. Granulovaná formulace podle nároku 1, vyznačující se tím, že obsahuje mikroorganismy v množství 0,3 až 5 % hmot., vztaženo na i kg uvedené formulace.
  4. 4. Granulovaná formulace podle nároku 1, vyznačující se tím , že obsahuje mikroorganismy v množství 0,5 až 3 % hmot., vztaženo na 1 kg uvedené formulace.
  5. 5. Granulovaná formulace podle nároku 1, vyznačující se tím, že obsahuje mikroorganismy v populační hustotě 1 x 105 až 1 x 10*1 CFU, jednotek tvořících kolonie, na g uvedené formulace.
    ne
  6. 6. Granulovaná formulace podle nároku 1, v y z n čující se tím, že zbytkový obsah vody činí méně než 1 % hmot., vztaženo na uvedenou formulaci.
  7. 7. Granulovaná formulace podle nároku 1, v y 2 n čující se tím, že zbytkový obsah vody činí méně než 3 % hmot., vztaženo na uvedenou formulaci.
  8. 8. Granulovaná formulace podle nároku 1, v y z n čující se tím, že zbytkový obsah vody činí méně než 5 % hmot., vztaženo na uvedenou formulaci.
  9. 9. Granulovaná formulace podle nároku 1, v y z n čující se tím, že maximální obsa?. vody činí více než 40 % hmot., vztaženo na uvedenou formulaci.
  10. 10. Granulovaná formulace podle nároku 1, v y z n čující se tím, že jemně zrnitý substrát průměrnou velikost částic 1 μπι až 0,8 cm.
  11. 11. Granulovaná formulace podle nároku 1, v y z n čující se tím, že jemně zrnitý substrát průměrnou velikost částic 10 pm až 0,5 cm.
  12. 12. Granulovaná formulace podle nároku 1, v y z n čující se tím, že jemně zrnitý substrát průměrnou velikost částic 20 pm až 0,2 cm.
  13. 13. Granulovaná formulace podle nároku 1, v y z n čující se tím, že substrátem nerozpustným vodě je anorganický nebo organický materiál.
  14. 14. Granulovaná formulace podle nároku 13, v y z n čující se tím, že substrátem nerozpustným vodě jsou rozmělněné otruby, sláma, piliny nebo celuiosa.
    ne ne ne a má a má a má a ve a ve
  15. 15. Granulovaná formulace podle nároku 13, vyznačující se tím, že anorganickým substrátem je ve vodě nerozpustný oxid kovu, sul kovu (oxid křemičitý, oxid hlinitý, síran barnatý, uhličitan vápenatý) , silikát nebo alurainosilikát alkalických kovů a kovů alkalických zemin.
  16. 16. Granulován čující se tem je minerální jíl infuzóriová hlinka, á formulace podle nároku 15, vyznáním, že ve vodě nerozpustným substrá, atapulgit, křemelina, práškový vápenec, wollastonit, olivín, mantmorillonit nebo ve rmikulit.
  17. 17. Granulovaná formulace podle nároku 15, vyznačující se tím, že ve vodě nerozpustným substrátem je vermikulit.
    13. Granulovaná formulace podle nároku 1, vyznačující se tím, že množství substrátu činí 50 až 99 % hmot., vztaženo na uvedenou formulaci.
  18. 19. Granulovaná formulace podle nároku 13, vyznačující se tím, že množství substrátu činí 65 až 95 % hmot., vztaženo na uvedenou formulaci.
  19. 20. Granulovaná formulace podle nároku 1, vyznačující se tím, že množství substrátu činí 75 až 90 % hmot., vztaženo na uvedenou formulaci.
  20. 21. Granulovaná formulace podle nároku 1, vyznačující se tím, že má průměrnou velikost částic 0,01 až 3 mm.
  21. 22. Granulovaná formulace podle nároku 21, vyznačující se tím, že má průměrnou velikost částic 0,2 až 4 mm.
  22. 23. Granulovaná formulace podle nároku 21, vyznačující se tím, že má průměrnou velikost částic 0,5 až 2 mm.
  23. 24. Granulovaná formulace podle nároku 1, vyznačující se tím , že film tvořícím, ve vodě rozpustným, a v podstatě nezesitěným polymerem je syntetický nebo přírodní polymer.
  24. 25. Granulovaná formulace podle nároku 1, vyznačující se tím , že film tvořícím, ve vodě rozpustným a v podstatě nezesitěným polymerem je homo- nebo kopolymer polyvinylalkoholu, polyethylenglykolu nebo polyvinyipyrrolidonu, nebo polyakryíamid.
    25. Granulovaná formulace podle nároku 1, vyznačující se tím , že film tvořícím, ve vodě rozpustným a v podstatě nezesitěným polymerem je polysacharid nebo derivatizovaný polysacharid.
  25. 27. Granulovaná formulace podle nároku 26, vyznačující se tím , že film tvořícím, ve vodě rozpustným a v podstatě nezesitěným polymerem je škrob, alginát, karagenan, κ-karagenan, τ-karagenan, xanthan, rohovníková pryskyřice nebo methylcelulosa, nebo jejich směs.
    23. Granulovaná formulace podle nároku 27, vyznačující se tím , že film tvořícím, ve vodě rozpustným a v podstatě nezesitěným polymerem je κ-karagenan, τ-karagenan nebo alginát.
  26. 29. Granulovaná formulace podle nároku 1, vyznačující se tím, že film tvořícím, strukturně zesítěným polymerem, který obsahuje karboxylové skupiny nebo sulfátové skupiny a botná ve vodě, je x-karagenan, τ-karagenan, xanthan nebo směs rohovníkové pryskyřice a xanthanu.
  27. 30. Granulovaná formulace podle nároku 1, vyznačující se tím, že film tvořícím, strukturně zesítěným polymerem, který obsahuje karboxylové skupiny nebo sulfátové skupiny a botná ve vodě, je κ-karagenan nebo τ-karagenan.
  28. 31. Granulovaná formulace podle nároku 1, vyznačující se tím, že obsahuje ve vodě rozpustný nebo ve vodě botnající polymer v množství 0,1 až 20 % hmot., vztaženo na uvedenou formulací.
  29. 32. Granulovaná formulace podle nároku 1, vyznačující se tím, že molární poměr draselných iontů ke karboxylovým skupinám nebo sulfátovým skupinám polymeru činí od 0,001 : 1 do 1 : 1.
  30. 33. Granulovaná formulace podle nároku 1, vyznačující se tím, že skupiny zahrnující Rhizobium Trichoderma, Strvptomyces, mikroorganismus je vybrán ze spp., Metharizium, Fusaríum, Giiocladíum, Penicillium,
    Talaromyces, Verticilíium nebo Colletotrichum, Pseudomonas spp., Serratia spp., Exserohilum spp., Bacilus spp., Agrobacter spp., Snterobacter spp. a Pseudomonas aurantiaca ATTC č. 55169.
    Čuj monas
  31. 34. Granulovaná formulace podle nároku 1, ící se tím, že mikroorganismem aurantiaca ATTC č. 55169.
    vyznáje Pseudo35. Způsob přípravy granulované formulace obsahující jemně zrnitý substrát a vrstvu polymeru obsahující mikroorganismy, kterýmžto polymerem je
    a) film tvořící, ve vodě rozpustný a v podstatě nezesítěný polymer, a granulovaná formulace obsahuje ne méně než 0,5 % hmot. vody, vztaženo na uvedenou formulaci, nebo
    b) film tvořící, strukturně zesítěný polysacharid, který obsahuje karboxylové nebo sulfátové skupiny a botná ve vodě za přítomností draselných iontů, a granulovaná formulace obsahuje ne méně než 0,5 % hmot. vody, vztaženo na uvedenou formulaci, vyznačující se tím, že se (A) k přípravě granulí a) suspenduje nebo při teplotě ne vyšší než 95 °C rozpustí film tvořící a ve vodě rozpustný polymer a mikroorganismus se suspenduje v této suspenzi nebo roztoku po ochlazení na teplotu místnosti, (3) k přípravě granulí b) se suspenduje polysacharid obsahující karboxylové skupiny nebo sulfátové skupiny ve vodném pufrovacím roztoku obsahujícím draselné ionty, a v tomto roztoku se poté suspenduje mikroorganismus, (C) výsledné suspenze se nastříkají přímo na jemně zrnitý substrát nebo se uvedené suspenze míchají s jemně zrnitým substrátem, a (D) odstraní se voda na koncentraci, která je ne nižší než 0,5 % hmot., vztaženo na granulovanou formulaci.
  32. 35. Způsob podle nároku 35, vyznačuj ící se t í m , že se v případě, že se použije suspenze film tvořícího a ve vodě rozpustného polymeru pro přípravu granulované formulace a), tato suspenze výhodně připravuje v teplotním rozmezí od 10 ’C do 30 eC.
  33. 37. Způsob podle se tím, že se v tvořícího a ve vodě granulované formulace a) teplotním rozmezí od 25 nároku 35, vyznačuj ící případě, že se použije roztok film rozpustného polymeru pro přípravu , tento roztok výhodně připravuje v ’C do 95 ’C.
  34. 38. Způsob podle nároku 35, se tím, že se mikroorganismus suspenzi polymeru při teplotě méně než vyznačuj ící přidá k roztoku nebo
    40 C.
  35. 39. Způsob podle nároku 35, vyznačující se tím, že se mikroorganismus přidá při teplotě méně než 30 ‘C.
  36. 40. Způsob podle nároku 35, vyznačující se tím , že se jako pufr použije směs dihydrogenfosforečnanu draselného a monohydrogenfosforečnanu draselného.
    s e 41. Způsob l. Z- m / ze podle nároku pK roztoku nebo s e 42. Způsob tím, že podle nároku koncentrace ou
    1 mol/1.
    40, vyznačuj íci suspenze činí 7.
    39, vyznačující ru činí od 0,00001 mol/1 do
  37. 43. Použití granulované formulace k ochraně před napadením chorobou nebo před poškozením hmyzem.
CZ9792A 1994-07-14 1995-07-03 Granulated formulation containing micro-organisms, process of its preparation and use CZ9297A3 (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CH225494 1994-07-14

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CZ9297A3 true CZ9297A3 (en) 1997-05-14

Family

ID=4229480

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ9792A CZ9297A3 (en) 1994-07-14 1995-07-03 Granulated formulation containing micro-organisms, process of its preparation and use

Country Status (21)

Country Link
US (1) US20020015988A1 (cs)
EP (1) EP0770126A1 (cs)
JP (1) JPH11505403A (cs)
KR (1) KR970704873A (cs)
CN (1) CN1090237C (cs)
AU (1) AU705188B2 (cs)
BG (1) BG101170A (cs)
BR (1) BR9508398A (cs)
CA (1) CA2192681A1 (cs)
CZ (1) CZ9297A3 (cs)
FI (1) FI970103A (cs)
HU (1) HU214917B (cs)
IL (1) IL114573A (cs)
NO (1) NO970136L (cs)
NZ (1) NZ289842A (cs)
PL (1) PL317965A1 (cs)
RU (1) RU2160990C2 (cs)
SK (1) SK280088B6 (cs)
TW (1) TW345486B (cs)
WO (1) WO1996002638A1 (cs)
ZA (1) ZA955830B (cs)

Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20050048056A (ko) * 2003-11-18 2005-05-24 (주)케이비피 경구용 소모 필름 조성물
US7374786B2 (en) * 2004-01-09 2008-05-20 Biosys Corporation Bioimmune-aggressin composition for suppression of xanthomonad infections in agriculture crops
NL2003797C2 (en) * 2009-11-12 2011-05-16 A J Zwart Beheer B V Improved soil supplement.
CO7200056A1 (es) * 2013-08-27 2015-02-27 Univ Antioquia Gelación iónica sobre sólidos
US9877486B2 (en) 2014-01-31 2018-01-30 AgBiome, Inc. Methods of growing plants using modified biological control agents
CN106170207B (zh) 2014-01-31 2019-12-27 农业生物群落股份有限公司 经修饰的生物防治剂及其用途
CN104004623A (zh) * 2014-06-09 2014-08-27 泰安生力源生物工程有限公司 一种固态发酵基质的传质传热改良方法
UA125897C2 (uk) 2015-09-11 2022-07-06 Новозімес Біоаґ А/С Стабільна композиція з інокулянтом і спосіб її одержання
CN106399290B (zh) * 2016-10-08 2019-09-13 上海明奥环保科技有限公司 一种利用多糖植物胶制备包埋微生物的方法
CN109438087A (zh) * 2018-12-27 2019-03-08 天津环微生物科技有限公司 一种速溶颗粒型农用微生物菌剂及制备方法和使用方法

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2646777B1 (fr) * 1989-05-12 1993-09-03 Bio Serae Lab Procede de preparation d'un produit particulaire antimicrobien, produit antimicrobien obtenu et applications
WO1991006638A1 (en) * 1989-10-31 1991-05-16 Genencor International, Inc. Dust-free coated enzyme formulation
JPH0739376A (ja) * 1993-08-04 1995-02-10 Kansai Paint Co Ltd 微生物固定化用担体

Also Published As

Publication number Publication date
IL114573A0 (en) 1995-11-27
AU2980495A (en) 1996-02-16
PL317965A1 (en) 1997-05-12
SK280088B6 (sk) 1999-08-06
EP0770126A1 (en) 1997-05-02
NO970136D0 (no) 1997-01-13
NZ289842A (en) 1998-12-23
ZA955830B (en) 1996-01-17
IL114573A (en) 1999-06-20
NO970136L (no) 1997-03-06
MX9700377A (es) 1998-06-28
AU705188B2 (en) 1999-05-20
JPH11505403A (ja) 1999-05-21
CA2192681A1 (en) 1996-02-01
RU2160990C2 (ru) 2000-12-27
WO1996002638A1 (en) 1996-02-01
US20020015988A1 (en) 2002-02-07
SK3197A3 (en) 1997-08-06
CN1152936A (zh) 1997-06-25
KR970704873A (ko) 1997-09-06
FI970103A0 (fi) 1997-01-10
FI970103A (fi) 1997-01-10
CN1090237C (zh) 2002-09-04
TW345486B (en) 1998-11-21
BG101170A (en) 1997-08-29
HUT76428A (en) 1997-08-28
HU214917B (hu) 1998-07-28
BR9508398A (pt) 1998-05-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US4859377A (en) Starch encapsulation of entomopathogens
JPH05502661A (ja) 殺虫剤の輸送系と昆虫誘引物質
Tay et al. Hydrogels: from controlled release to a new bait delivery for insect pest management
AU2016207758C1 (en) Agricultural composition
AU2016207759B2 (en) Agricultural composition
CZ9297A3 (en) Granulated formulation containing micro-organisms, process of its preparation and use
AU662756B2 (en) Methods and compositions of adherent starch granules for encapsulating pest control agents
Tripathi et al. Polymeric macroporous formulations for the control release of mosquitocidal Bacillus sphaericus ISPC-8
JPH02212406A (ja) 土壌病害の防除剤および土壌病害の防止方法
KR100734959B1 (ko) 생균력 증진을 위한 농업용 미생물제 미세캡슐화
JP2001078751A (ja) 微生物製剤および微生物の保存方法
CA1340319C (en) Bacterial sporangia encapsulated prior to lysis of the bacteria
JP3085895B2 (ja) エキセロヒルム・モノセラスに属する新規な菌株及びその用途
CN113662016B (zh) 一种颗粒剂、其制备方法及其应用
MXPA97000377A (en) Granular formulation containing microorganisms, a process for the preparation and use of the
JP2001072522A (ja) フザリウム属菌のデンプン製剤およびフザリウム属菌の保存方法
Saleena Microencapsulation of Trichoderma viride for management of major soil borne fungal pathogens
AU613069B2 (en) Starch encapsulation of biocontrol agents
WO1998025458A1 (en) Water soluble coated time release biocide tablets

Legal Events

Date Code Title Description
PD00 Pending as of 2000-06-30 in czech republic