CN115287232A - 一株戊糖片球菌及其在南酸枣乳酸菌饮料发酵中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一株戊糖片球菌及其在南酸枣乳酸菌饮料发酵中的应用，属于生物工程发酵技术领域。戊糖片球菌BSDT336，分类学命名为Pediococcus Pentosaceus，于2022年7月8日保藏于湖北省武汉市武昌区八一路299号的中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M 20221069。该戊糖片球菌为适宜pH为3.0‑4.6的高酸条件以及18‑22℃的低温环境的发酵乳酸菌，用于南酸枣乳酸菌饮料制备工艺中，能最大程度保留南酸枣中营养物质的含量并减少了总酚、黄酮以及维生素C在热灭菌及常温发酵过程中的损失。
Description
技术领域
本发明属于生物工程发酵技术领域，涉及一种适宜于南酸枣饮料低温发酵的菌株及其发酵方法，具体为一株戊糖片球菌及其在南酸枣乳酸菌饮料发酵中的应用。
背景技术
南酸枣[Choerospondias axillaris(Roxb.)Burtt et Hill]隶属于漆树科、南酸枣属，又名山枣子、五眼果、鼻涕果等，果实为浆果椭圆形。我国主产于“两湖”、“两广”及浙江、福建、江苏、贵州等长江流域及长江以南等气候温和、水域丰沛的地区。南酸枣果实含有维生素、酚类和黄酮等生物活性物质及多种有机酸、氨基酸、矿物质等。其中酚类物质、黄酮类物质等能有效提高自由基清除率，与抗氧化活性密切相关，而维生素则是人体所必需的微量元素，能够维持人体生长发育。研究表明乳酸菌在南酸枣饮料发酵过程中可释放多种酶使结合态的酚转化为游离态，有效提高南酸枣饮料中的总酚、黄酮含量，同时保留其生物活性。经乳酸菌发酵后的南酸枣饮料中的总酚、黄酮含量以及抗氧化活性均高于未发酵前。
但是在现有的一些南酸枣饮料的研究中大多使用常温发酵，且在前处理及杀菌过程中有蒸煮、漂烫灭酶、果仁烘干粉碎、超高压热杀菌等步骤，营养物质损耗较大，目前还未曾有适宜低温发酵南酸枣饮料的菌株及其发酵方法的相关研究。
发明内容
本发明的第一个发明目的是提供一株耐酸、耐低温的戊糖片球菌，该菌株编号为BSDT336，分类学命名为Pediococcus Pentosaceus，已于2022年7月8日保藏在位于湖北省武汉市武昌区八一路299号的中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M 20221069。
该戊糖片球菌BSDT336耐酸、耐低温，所述的低温为18-22℃，pH值为3.0-4.6。
本发明的第二个目的是提供戊糖片球菌BSDT336的应用，该菌株用于南酸枣饮料低温发酵环境中，经过该菌株发酵后的南酸枣饮料增加了黄酮、总酚含量以及抗氧化活性。此外，该戊糖片球菌(Pediococcus Pentosaceus)还具有耐酸、耐胆碱的特点，可大大缩短发酵周期、提高发酵中酚类物质的增加率，对于南酸枣类加工制品的应用有着广阔的前景。
本发明的第三个发明目的是为了解决目前商用南酸枣乳酸菌饮料杀菌、发酵工艺容易致使营养物质损耗的问题，将耐酸、耐低温的戊糖片球菌用于南酸枣饮料低温发酵；利用该戊糖片球菌发酵，能减少南酸枣饮料低温发酵过程中营养物质的损耗。
为了实现以上发明目的，本发明的具体技术方案为：
一种减少营养物质损耗的南酸枣饮料低温发酵方法，所述方法步骤中使用了戊糖片球菌BSDT336进行发酵，发酵条件为18-22℃，pH值为3.0-4.6；
该方法具体包括以下步骤：
S1、原料处理：选用成熟饱满的南酸枣果实用饮用水进行冲洗，除去果实表面污染物，减少微生物及农药残留；
S2、破碎：将清洗好的南酸枣果实去皮去核，将果肉放入破碎机中进行破碎；
S3、微波灭菌：将破碎后的南酸枣粗浆放置在微波杀菌装置中处理后取出；
S4、冷打浆：通过打浆机将预破碎的南酸枣样品加无菌蒸馏水打成细浆；
S5、过滤：将S4中得到的浆液进行离心，取上清液后用滤纸过滤；
S6、杀菌：将南酸枣汁放入瞬时灭菌器中灭菌后装入无菌发酵罐中备用；
S7、戊糖片球菌接种液制备：①将筛选出的戊糖片球菌接种于MRS琼脂培养基进行活化，划线培养；②取单菌落接种于MRS肉汤培养基中传代培养；③将②中传代培养后的种子液移离心弃去上清液，水洗后加入生理盐水制成菌悬液备用；
S8、低温发酵：将S6中处理好的南酸枣汁中加入经过无菌处理的蔗糖，混匀后制成样品，再加入S7中的戊糖片球菌接种液。装罐密封后放置在恒温培养箱中发酵，经澄清、灭菌后即为南酸枣发酵饮料。
作为本申请中一种较好的实施方式，S1原料处理中：冲洗南酸枣果实用的饮用水的流速为40m3/h，能较好的除去果实表明的泥沙、杂质污染，减少微生物及农药残留。
作为本申请中一种较好的实施方式，S3微波灭菌是指将破碎后的南酸枣粗浆放置在540-560w，70-90℃的微波杀菌装置中处理100-120s。
作为本申请中一种较好的实施方式，S4冷打浆步骤中预破碎的南酸枣样品为100g，无菌蒸馏水为800mL。
作为本申请中一种较好的实施方式，S5中的过滤是指在条件为4℃、10000r/min的条件下离心15-20min。
作为本申请中一种较好的实施方式，S6中杀菌温度为95℃，灭菌时间为30s。
作为本申请中一种较好的实施方式，S7戊糖片球菌接种液的具体制备步骤为：①将筛选出的戊糖片球菌接种于MRS琼脂培养基进行活化，划线培养2次；②取单菌落接种于MRS肉汤培养基，在温度37℃条件下培养18-24h，传代3次；③将②中传代培养后的种子液移取400-500mL离心弃去上清液，水洗2-3次后加入0.85％的生理盐水制成1×10-8CFU/mL的菌悬液备用。
作为本申请中一种较好的实施方式，S8低温发酵的具体操作为：将S6中处理好的南酸枣汁中加入200g经过无菌处理的蔗糖，混匀后制成1L的样品，加入40mL S7的戊糖片球菌接种液中；装罐密封后放置在温度为18-22℃的恒温培养箱中发酵3-7h，发酵液pH值为3.0-4.6。
采用以上任一方法得到的所述南酸枣饮料，能更大程度的保留原料中的营养物质，维生素C、总酚、黄酮含量均高于常温发酵，其中维生素C含量比常温发酵高1倍，总酚含量比常温发酵高0.6倍。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
(一)本发明筛选的戊糖片球菌BSDT336，能够在18-22℃的低温条件下良好生长。
(二)由于维生素C易在微生物发酵过程中被利用和损耗，并且温度越高损耗越大。因此相比于常温发酵，本发明使用的低温发酵以及前处理技术更有利于南酸枣鲜果中的维生素C含量的保存。
(三)经过戊糖片球菌BSDT336发酵后的南酸枣饮料增加了黄酮、总酚含量以及抗氧化活性，口感也得到极大的提升。
附图说明
图1为实施例3、实施例4、实施例5所述一种减少营养物质损耗的南酸枣饮料低温发酵方法的流程图；
图2为实施例1中的菌株生长曲线；
图3为实施例1中的菌株pH曲线；
图4为LPCY-B5菌株基于16S rDNA基因序列建立的系统发育树；
图5为LPCY-B5菌株的电子显微镜图；
图6为对比例1中的菌株生长曲线。
具体实施方式
以下通过具体实例说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。本发明还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本发明的精神下进行各种修饰或改变。需说明的是，在不冲突的情况下，以下实施例及实施例中的特征可以相互组合。
需要说明的是，为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。
因此，以下对本发明的实施例的详细描述并非旨在限制要求保护的本发明的范围，而是仅仅表示本发明的选定实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明中所用过程、条件、试剂、实验方法等，若无特殊说明，均为本领域的普遍知识和公知常识，本发明没有特别限制的内容。
MRS固体培养基(g/L)：蛋白胨10.0，牛肉浸粉8.0，酵母浸粉4.0，葡萄糖20.0，磷酸氢二钾2.0，柠檬酸氢二铵2.0，乙酸钠5.0，硫酸镁0.2，硫酸锰0.04，琼脂14.0，吐温1.0，碳酸钙2.5。
本发明实施例中所用的乳酸菌菌粉通过商业途径购买获得。
一株戊糖片球菌BSDT336，分类学命名为Pediococcus Pentosaceus，已于2022年7月8日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M 20221069，保藏地址为湖北省武汉市武昌区八一路299号。
实施例1、戊糖片球菌的分离、筛选和鉴定：
一、分离
(1)源菌的收集：将6份从市场购买(采集)到的芽菜样品混匀、研磨成浆状，加入无菌蒸馏水过滤后作为取样作为源菌。
(2)菌种的分离纯化：将源菌样品用0.85％的生理盐水稀释到适宜的浓度后，用MRS固体培养基进行平板倾注37℃培养48h，挑取溶钙圈直径较大且明显的单菌落，进行多次平板划线纯化。
(3)菌种的保藏：将分离纯化好的菌株接种到MRS固体培养基中，于37℃培养48h，挑取生长情况较好的单菌落接种于MRS肉汤培养基中，于37℃培养24h，将所得菌液加入30％的甘油中在-20℃保存。经过分离得到7株乳酸菌。其菌株编号分别为LPYC-C1、LPYC-C4、LPYC-C5、LPYC-C6、LPYC-B5、LPYC-B9、LPYC-A16。
二、筛选
以耐酸性为指标，对上述7株乳酸菌进行筛选，以期得到耐南酸枣汁等高酸性食品的菌株。具体方法为将上述分离出的菌株活化2次，接种到MRS肉汤中，于37℃、150r/min培养24h，取10mL菌液于6000r/min离心10min，无菌生理盐水洗涤2次后，以单菌落分别加入10mL pH为2.5的MRS肉汤，在37℃、150r/min培养3h，测定其菌株存活率。筛选结果如表1所示：
表1：单株菌发酵耐酸性检测结果
由表1可知，在7株乳酸菌中LPYC-C4、LPYC-C1、LPYC-B5这三株菌的存活率最高，均大于90％。
活化菌种，制备种子液，按体积分数为1％的接种量将菌株(LPYC-C4、LPYC-C1、LPYC-B5)接种到MRS肉汤培养基中，20℃条件下培养。分别在0-48h每隔2h取5mL发酵液测OD600值和pH值，分别以OD600值和pH值为纵坐标，以时间为横坐标，绘制菌株生长曲线及pH曲线(见图2、图3)。从图中可知，在4℃条件下，菌株LPYC-B5的长势最好、产酸最多。
三、鉴定
取甘油保藏的菌株LPYC-B5于10mL MRS肉汤培养基中，37℃培养24h。取适量培养液离心10min(6000r/min)，弃去上清，采用DNA提取试剂盒提取菌体DNA，进行PCR扩增，PCR产物用2.0％琼脂糖凝胶电泳检测，并进行测序，获得16S rDNA片段的基因序列。通过NCBI的BLAST比对，并构建系统发育树(见图4)，将菌株LPYC-B5鉴定为戊糖片球菌(PediococcusPentosaceus)，其与Pediococcus Pentosaceus KNUC22处于一个分支，将其进行保藏，于2022年7月8日保藏在位于湖北省武汉市武昌区八一路299号的中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M 20221069，保藏时的培养物名称为Pediococcus PentosaceusBSDT336。
实施例2：戊糖片球菌LPCY-B5的生长特性
将戊糖片球菌LPCY-B5接种于MRS琼脂培养基，置于37℃倒置培养48h，观察菌落形态；挑取单菌落于载玻片上，经过适当稀释后，滴加1-2滴革兰氏染色剂，盖上盖玻片，静置5min后镜检，记录其细胞形态。
高倍镜下观察到的戊糖片球菌LPCY-B5呈椭球状，经革兰氏染色后呈蓝紫色，说明该菌为革兰氏阳性菌。该菌株在MRS琼脂培养基上生长时的菌落呈乳白色，边缘光滑，菌体凸起(见图5)。
实施例3：戊糖片球菌LPCY-B5低温发酵南酸枣饮料
一种减少营养物质损耗的南酸枣饮料低温发酵方法，具体流程见图1，制备方法包括以下步骤：
(1)原料处理：选用成熟饱满的南酸枣果实用流速40m3/h的饮用水冲洗，除去果实表明的泥沙、杂质污染，减少微生物及农药残留；
(2)破碎：将清洗好的南酸枣果实去皮去核，将果肉放入破碎机中破碎；
(3)微波灭菌：将破碎后的南酸枣粗浆放置在540w、90℃的微波杀菌装置中处理120s后取出；
(4)冷打浆：通过打浆机将100g预破碎的南酸枣样品加800mL无菌蒸馏水打成细浆；
(5)过滤：在条件为4℃、10000r/min的条件下离心15min取上清液后用滤纸过滤；
(6)杀菌：将南酸枣汁放入瞬时灭菌器中95℃灭菌30s后装入无菌发酵罐中备用。
(7)戊糖片球菌LPCY-B5接种液制备：①将筛选出的戊糖片球菌LPCY-B5接种于MRS琼脂培养基进行活化，划线培养2次；②取单菌落接种于MRS肉汤培养基，在温度37℃条件下培养18h，传代3次；③将②中传代培养后的种子液移取400mL离心弃去上清液，水洗3次后加入0.85％的生理盐水制成1×10-8CFU/mL的菌悬液备用。
(8)低温发酵：将(6)中处理好的南酸枣汁中加入200g经过无菌处理的蔗糖，混匀后制成1L的样品，加入40mL(7)的接种液中。装罐密封后放置在温度为18℃的恒温培养箱中发酵7h，经澄清、灭菌后即为南酸枣发酵饮料。
实施例4：戊糖片球菌LPCY-B5低温发酵南酸枣饮料
一种减少营养物质损耗的南酸枣饮料低温发酵方法，具体流程见图1，制备方法包括以下步骤：
(1)原料处理：选用成熟饱满的南酸枣果实用流速40m3/h的饮用水冲洗，除去果实表明的泥沙、杂质污染，减少微生物及农药残留；
(2)破碎：将清洗好的南酸枣果实去皮去核，将果肉放入破碎机中破碎；
(3)微波灭菌：将破碎后的南酸枣粗浆放置在550w、80℃的微波杀菌装置中处理110s后取出；
(4)冷打浆：通过打浆机将100g预破碎的南酸枣样品加800mL无菌蒸馏水打成细浆；
(5)过滤：在条件为4℃、10000r/min的条件下离心17min取上清液后用滤纸过滤；
(6)杀菌：将南酸枣汁放入瞬时灭菌器中95℃灭菌30s后装入无菌发酵罐中备用。
(7)戊糖片球菌LPCY-B5接种液制备：①将筛选出的戊糖片球菌LPCY-B5接种于MRS琼脂培养基进行活化，划线培养2次；②取单菌落接种于MRS肉汤培养基，在温度37℃条件下培养18h，传代3次；③将②中传代培养后的种子液移取400mL离心弃去上清液，水洗3次后加入0.85％的生理盐水制成1×10-8CFU/mL的菌悬液备用。
(8)低温发酵：将(6)中处理好的南酸枣汁中加入200g经过无菌处理的蔗糖，混匀后制成1L的样品，加入40mL(7)的接种液中。装罐密封后放置在温度为20℃的恒温培养箱中发酵5h，经澄清、灭菌后即为南酸枣发酵饮料。
实施例5：戊糖片球菌LPCY-B5低温发酵南酸枣饮料
一种减少营养物质损耗的南酸枣饮料低温发酵方法，具体流程见图1，制备方法包括以下步骤：
(1)原料处理：选用成熟饱满的南酸枣果实用流速40m3/h的饮用水冲洗，除去果实表明的泥沙、杂质污染，减少微生物及农药残留；
(2)破碎：将清洗好的南酸枣果实去皮去核，将果肉放入破碎机中破碎；
(3)微波灭菌：将破碎后的南酸枣粗浆放置在560w、70℃的微波杀菌装置中处理100s后取出；
(4)冷打浆：通过打浆机将100g预破碎的南酸枣样品加800mL无菌蒸馏水打成细浆；
(5)过滤：在条件为4℃、10000r/min的条件下离心20min取上清液后用滤纸过滤；
(6)杀菌：将南酸枣汁放入瞬时灭菌器中95℃灭菌30s后装入无菌发酵罐中备用。
(7)戊糖片球菌LPCY-B5接种液制备：①将筛选出的戊糖片球菌LPCY-B5接种于MRS琼脂培养基进行活化，划线培养2次；②取单菌落接种于MRS肉汤培养基，在温度37℃条件下培养18h，传代3次；③将②中传代培养后的种子液移取400mL离心弃去上清液，水洗3次后加入0.85％的生理盐水制成1×10-8CFU/mL的菌悬液备用。
(8)低温发酵：将(6)中处理好的南酸枣汁中加入200g经过无菌处理的蔗糖，混匀后制成1L的样品，加入40mL(7)的接种液中。装罐密封后放置在温度为22℃的恒温培养箱中发酵3h，经澄清、灭菌后即为南酸枣发酵饮料。
对比例1：商业植物乳杆菌菌粉低温发酵南酸枣饮料
(7)商业植物乳杆菌菌粉接种液制备：①取商业植物乳杆菌菌粉3g接种于100mL液体培养基于37℃恒温培养箱静置培养24h；②取10mL接种于MRS肉汤培养基，在温度37℃条件下培养18h，传代3次；③将②中传代培养后的种子液移取400mL离心弃去上清液，水洗3次后加入0.85％的生理盐水制成1×10-8CFU/mL的菌悬液备用。
(植物乳杆菌菌粉的生长曲线见图6，条件与图2相同)
其余步骤同实施例3。
对比例2：商业嗜酸乳杆菌菌粉低温发酵南酸枣饮料
(7)商业嗜酸乳杆菌菌粉接种液制备：①取商业嗜酸乳杆菌菌粉3g接种于100mL液体培养基于37℃恒温培养箱静置培养24h；②取10mL接种于MRS肉汤培养基，在温度37℃条件下培养18h，传代3次；③将②中传代培养后的种子液移取400mL离心弃去上清液，水洗3次后加入0.85％的生理盐水制成1×10-8CFU/mL的菌悬液备用。
其余步骤同实施例3。
对比例3：商业副干酪乳杆菌菌粉低温发酵南酸枣饮料
(7)商业副干酪乳杆菌菌粉接种液制备：①取商业副干酪乳杆菌菌粉3g接种于100mL液体培养基于37℃恒温培养箱静置培养24h；②取10mL接种于MRS肉汤培养基，在温度37℃条件下培养18h，传代3次；③将②中传代培养后的种子液移取400mL离心弃去上清液，水洗3次后加入0.85％的生理盐水制成1×10-8CFU/mL的菌悬液备用。
其余步骤同实施例3。
对比例4：植物乳杆菌LPCY-A16低温发酵南酸枣饮料
(7)植物乳杆菌LPCY-A16接种液制备：①将从芽菜中筛选出的植物乳杆菌LPCY-A16接种于MRS琼脂培养基进行活化，划线培养2次；②取单菌落接种于MRS肉汤培养基，在温度37℃条件下培养18h，传代3次；③将②中传代培养后的种子液移取400mL离心弃去上清液，水洗3次后加入0.85％的生理盐水制成1×10-8CFU/mL的菌悬液备用。
其余步骤同实施例3。
对比例5：戊糖片球菌LPCY-C4低温发酵南酸枣饮料
(7)戊糖片球菌LPCY-C4接种液制备：①将从芽菜中筛选出的戊糖片球菌LPCY-C4接种于MRS琼脂培养基进行活化，划线培养2次；②取单菌落接种于MRS肉汤培养基，在温度37℃条件下培养18h，传代3次；③将②中传代培养后的种子液移取400mL离心弃去上清液，水洗3次后加入0.85％的生理盐水制成1×10-8CFU/mL的菌悬液备用。
其余步骤同实施例3。
对比例6：戊糖片球菌LPCY-B5常温发酵南酸枣饮料
(8)常温发酵方法如下：将处理好的南酸枣汁加入200g经过无菌处理的蔗糖，混匀后制成1L的样品，加入40mL(7)中的接种液。装罐密封后放置在温度为37℃的恒温培养箱中发酵7h，经澄清、灭菌后即为南酸枣发酵饮料。
其余步骤同实施例3。
对比例7：戊糖片球菌LPCY-B5低温发酵南酸枣饮料(普通前处理)
(1)原料处理：选用成熟饱满的南酸枣果实用流速40m3/h的饮用水冲洗，除去果实表明的泥沙、杂质污染，减少微生物及农药残留；
(2)冷打浆：将清洗好的100g南酸枣果实去皮去核并加入800mL无菌蒸馏水，将果肉放入打浆机中打成均浆；
(3)过滤：在条件为4℃、10000r/min的条件下离心15min取上清液后用滤纸过滤；
(4)杀菌：将南酸枣汁放入水浴锅中95℃灭菌10min后将南酸枣汁装入无菌发酵罐中备用。
(5)戊糖片球菌LPCY-B5接种液制备：①将筛选出的戊糖片球菌LPCY-B5接种于MRS琼脂培养基进行活化，划线培养2次；②取单菌落接种于MRS肉汤培养基，在温度37℃条件下培养18h，传代3次；③将②中传代培养后的种子液移取400mL离心弃去上清液，水洗3次后加入0.85％的生理盐水制成1×10-8CFU/mL的菌悬液备用。
(6)低温发酵：将(4)中处理好的南酸枣汁中加入200g经过无菌处理的蔗糖，混匀后制成1L的样品，加入40mL(5)的接种液中。装罐密封后放置在温度为18℃的恒温培养箱中发酵7h，经澄清、灭菌后即为南酸枣发酵饮料。
对比例8：未发酵原料
去除实施例3中的(7)戊糖片球菌LPCY-B5接种液制备以及(8)低温发酵步骤，其余步骤与实施例3相同，在(6)杀菌步骤后加入200g经过无菌处理的蔗糖，经澄清、灭菌后直接测定理化指标。
将实施例3-5及对比例1-8中制备得到的发酵南酸枣饮料进行理化测定。
具体结果见表2：
表2：实施例3-5与对比例1-8所述方法制备得到的发酵南酸枣饮料的VC、总酚、黄酮含量的结果表示如表2所示。
将实施例3-5及对比例7-8的结果对比可知，低温前处理能更大程度的保留原料中的营养物质，特别是维生素C含量高于普通前处理的6倍，仅比发酵前损失了6.6％。对比实施例3-5和对比例1-5可知，戊糖片球菌LPCY-B5具有的耐酸耐低温特性更适应于南酸枣饮料的高酸性发酵体系，在相同前处理及发酵条件下，其维生素C含量高于商业菌粉17.24-13.2％，高于植物乳杆菌LPCY-A16 8.18％，高于戊糖片球菌LPCY-C4 6.94％；总酚及黄酮含量均高于商业菌粉及植物乳杆菌LPCY-A16、戊糖片球菌LPCY-C4的0.3倍左右。对比实施例3-5和对比例6、对比例8可知，戊糖片球菌LPCY-B5更适应于低温发酵条件，在低温发酵条件下其维生素C、总酚、黄酮含量均高于常温发酵，其中维生素C含量比常温发酵高1倍，总酚含量比常温发酵高0.6倍。
以上所述仅为本发明的典型实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.戊糖片球菌BSDT336，分类学命名为Pediococcus Pentosaceus，于2022年7月8日保藏于湖北省武汉市武昌区八一路299号的中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M20221069。
2.如权利要求1所述戊糖片球菌BSDT336，其特征在于：该戊糖片球菌BSDT336耐酸、耐低温，所述的低温为18-22℃，pH值为3.0-4.6。
3.如权利要求1或2所述戊糖片球菌BSDT336的应用，其特征在于：该菌株用于南酸枣饮料低温发酵环境中，经过该菌株发酵后的南酸枣饮料增加了黄酮、总酚含量以及抗氧化活性。
4.一种减少营养物质损耗的南酸枣饮料低温发酵方法，其特征在于：在方法步骤中使用了戊糖片球菌BSDT336进行耐酸、耐低温发酵，低温为18-22℃，pH值为3.0-4.6。
5.如权利要求4所述减少营养物质损耗的南酸枣饮料低温发酵方法，其特征在于包括以下步骤：
S1、原料处理：选用成熟饱满的南酸枣果实用饮用水进行冲洗，除去果实表面污染物，减少微生物及农药残留；
S2、破碎：将清洗好的南酸枣果实去皮去核，将果肉放入破碎机中进行破碎；
S3、微波灭菌：将破碎后的南酸枣粗浆放置在微波杀菌装置中处理后取出；
S4、冷打浆：通过打浆机将预破碎的南酸枣样品加无菌蒸馏水打成细浆；
S5、过滤：将S4中得到的浆液进行离心，取上清液后用滤纸过滤；
S6、杀菌：将南酸枣汁放入瞬时灭菌器中灭菌后装入无菌发酵罐中备用；
S7、戊糖片球菌接种液制备：①将筛选出的戊糖片球菌接种于MRS琼脂培养基进行活化，划线培养；②取单菌落接种于MRS肉汤培养基中传代培养；③将②中传代培养后的种子液移离心弃去上清液，水洗后加入生理盐水制成菌悬液备用；
S8、低温发酵：将S6中处理好的南酸枣汁中加入经过无菌处理的蔗糖，混匀后制成样品，再加入S7的戊糖片球菌接种液中。装罐密封后放置在恒温培养箱中发酵，经澄清、灭菌后即为南酸枣发酵饮料。
6.如权利要求5所述减少营养物质损耗的南酸枣饮料低温发酵方法，其特征在于:S1原料处理中：冲洗南酸枣果实用的饮用水的流速为40m3/h；S3微波灭菌是指将破碎后的南酸枣粗浆放置在540-560w、70-90℃的微波杀菌装置中处理100-120s。
7.如权利要求5所述减少营养物质损耗的南酸枣饮料低温发酵方法，其特征在于：S4冷打浆步骤中预破碎的南酸枣样品为100g，无菌蒸馏水为800mL；S5中的过滤是指在条件为4℃、10000r/min的条件下离心15-20min；S6中杀菌温度为95℃，灭菌时间为30s。
8.如权利要求5所述减少营养物质损耗的南酸枣饮料低温发酵方法，其特征在于:S7戊糖片球菌接种液的具体制备步骤为：①将筛选出的戊糖片球菌接种于MRS琼脂培养基进行活化，划线培养2次；②取单菌落接种于MRS肉汤培养基，在温度37℃条件下培养18-24h，传代3次；③将②中传代培养后的种子液移取400-500mL离心弃去上清液，水洗2-3次后加入0.85％的生理盐水制成1×10-8CFU/mL的菌悬液备用。
9.如权利要求5所述减少营养物质损耗的南酸枣饮料低温发酵方法，其特征在于S8低温发酵的具体操作为：将S6中处理好的南酸枣汁中加入200g经过无菌处理的蔗糖，混匀后制成1L的样品，加入40mL S7的戊糖片球菌接种液中；装罐密封后放置在温度为18-22℃的恒温培养箱中发酵3-7h，发酵液pH值为3.0-4.6。
10.如权利要求5-9中任一方法得到的所述南酸枣饮料，其特征在于:能更大程度的保留原料中的营养物质，维生素C、总酚、黄酮含量均高于常温发酵，其中
维生素C含量比常温发酵高1倍，总酚含量比常温发酵高0.6倍。
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