CN115282217A - 一种香灰菌发酵茶的降血脂和保护肝脏的作用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种香灰菌发酵茶的制备方法及其降血脂和保护肝脏的作用。本发明研制了一种香灰菌发酵茶，并通过实验发现此款菌茶能显著性提高高血脂小鼠的HDL‑C水平，显著性降低高血脂小鼠血脂的TG、TC、LDL‑C含量，对高血脂症有良好降血脂效果；还发现香灰菌发酵茶能显著性降低高血脂小鼠血清中ALT、AST含量，对脂毒性引起的肝细胞损伤具有保护作用。上述结果表明，香灰菌发酵茶具有降血脂和保护肝细胞损伤的作用，在降血脂和保护肝脏等方面具有较高的应用价值；本发明将为深入研究与开发香灰菌发酵茶提供了理论依据，为开发出新的具有改善高血脂症的产品奠定了基础。

Description

一种香灰菌发酵茶的降血脂和保护肝脏的作用
技术领域
本发明属于食品加工技术及应用领域，尤其涉及香灰菌发酵茶的降血脂和保护肝脏的应用。
背景技术
香灰菌(Annulohypoxylon stygium)资源丰富，遗传差异大，目前关于香灰菌的分类地位尚未完全确立。有学者认为香灰菌可能是绿粘帚霉，是炭团菌属的无性阶段。香灰菌含有蛋白质、多糖、矿物元素、氨基酸、粗纤维等物质，特别是当菌丝生长到一定阶段后，有大量真菌黑色素生成，营养价值高，具有抗氧化、抗衰老、抗病毒、降血糖、降血脂、免疫调节等功效。
高血脂症与遗传、饮食以及一些中间原发疾病等因素具有紧密联系，人体的蛋白质、碳水化合物、脂肪等物质发生代谢紊乱会引起代谢综合症，其病理基础是肥胖尤其是中心性肥胖造成的胰岛素抵抗。代谢综合症引发的肥胖、血脂代谢紊乱和饮食因素为大多数高血脂症的主要发病原因，高血脂会使得脂代谢紊乱，其直接危害是加速全身动脉粥样硬化，供血不足、缺氧等，严重危害人类健康。
茶叶在日常生活被人们广泛饮用，富含对人体有益的茶多酚、茶氨酸、儿茶素等物质，同时具有降脂、消食和降胆固醇等功效。发酵是茶叶生产过程中的关键因素，经过发酵会改变茶叶的化学成分，影响了茶叶的感官和品质。另外，在发酵过程中，微生物可以提高茶叶的撕裂速度和质量稳定性，产生有益于健康的新的次生代谢产物。
目前，未见香灰菌发酵茶对高血脂症及由高血脂导致的肝损伤有保护作用的报道。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种香灰菌发酵茶在降血脂和保护肝脏的应用。
菌株来源：香灰菌株为暗色环纹炭团菌(Annulohypoxylon stygium)Gxun.10030，于2021年11月19日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCCNO.23847。
一种香灰菌发酵茶的制备方法，是将驯化的香灰菌与茶叶在一定的培养条件下共发酵培养而得。
上述香灰菌发酵茶的提取物可在降血脂和保护肝脏的药物、保健品或食品中进行应用。
上述一种香灰菌发酵茶的提取物按以下操作制备：取香灰菌发酵茶加入蒸馏水，茶叶与蒸馏水重量比为1∶100，于100℃下提取15～20min，过滤得滤液，重复三次上述提取过程，合并三次滤液，将滤液浓缩即得。
上述一种香灰菌发酵茶的制备方法：是将驯化培养获得的香灰菌菌丝挑至茶叶培养基中培养，待菌丝完全覆盖茶叶培养基，晾干即得香灰菌发酵茶。
经驯化获得的香灰菌菌丝按以下操作获得：将香灰菌菌种使用改良的GPY培养基活化，再利用茶、水和蔗糖培养基对上述香灰菌进行生长驯化，通过逐步降低培养基中蔗糖的含量，使香灰菌能够在只有茶叶和水的培养基上生长良好，从而得到驯化的香灰菌。
上述一种香灰菌发酵茶的制备方法如下：称取茶叶放于培养瓶中，在茶叶中加入茶叶干重的30％～90％的蒸馏水，121℃条件下灭菌30min，将驯化的香灰菌菌丝挑至茶叶培养基中，并于20～32℃培养箱中培养，待香灰菌菌丝完全覆盖茶叶培养基，晾干即得香灰菌发酵茶。
上述一种香灰菌发酵茶的提取方法如下：准确称取香灰菌发酵茶，量取200mL的蒸馏水煎煮20min，过滤，茶渣继续重复上述操作2次，合并滤液，加热浓缩滤液，并定容配制成香灰菌发酵茶提取物。
茶叶为绿茶、红茶、白茶、黄茶、代用茶。
为充分利用食药两用真菌以及茶叶的生物活性，丰富茶叶新品种和深加工的需求，发明人首次将驯化的香灰菌与茶叶在一定的培养条件下共发酵培养制得一种香灰菌发酵茶。通过香灰菌与茶叶的共发酵培养，可充分的将二者的次生代谢产物在发酵过程中充分融合、转化，形成香灰菌发酵茶特有的活性成分，赋予此菌茶更丰富的生物活性和更佳的口感。进一步的研究表明，香灰菌发酵茶能显著性升高高血脂模型小鼠HDL-C(高密度脂蛋白胆固醇)含量，显著性降低由高脂饮食诱发的高血脂模型小鼠血脂中的TG(甘油三酯)、TC(总胆固醇)、LDL-C(低密度脂蛋白)含量，并且可以显著性降低ALT、AST含量，减轻脂毒性肝损伤，保护肝细胞，对降血脂和降低肝损伤有良好效果。由上述结果可知，香灰菌发酵茶具有优于香灰菌和茶叶的双重功效，具有优于香灰菌和茶叶的降血脂和降低肝损伤的作用，这为深入研究和开发新型功能菌茶，阐明香灰菌发酵茶降血脂和降低肝损伤的作用提供了理论依据。
实施例1：一种香灰菌发酵绿茶的降血脂和保护肝脏的作用
一、一种香灰菌发酵绿茶的制备
(1)香灰菌菌种的驯化：将香灰菌菌种使用改良的GPY培养基(蔗糖10g、蛋白胨3g、酵母浸粉10g，琼脂20g，加热溶解于1000mL浓度为0.1g/mL的绿茶水)中，于25℃温度条件下避光活化培养3天；然后将上述活化的香灰菌接种在绿茶、水和蔗糖的培养基(蔗糖10g，加热溶解于1000mL水，1650g的绿茶)中，于25℃、避光条件下继续对香灰菌进行生长驯化培养10天，并不断减少蔗糖的比例，绿茶水蔗糖培养基中蔗糖占比按照2％、1.6％、1.2％、0.8％、0.4％、0.2％、0％逐渐减少，最终使香灰菌能够在只有绿茶和水的培养基上生长良好，从而得到驯化的香灰菌。
(2)一种香灰菌发酵绿茶的制备：称取绿茶放于培养瓶中，在绿茶中加入绿茶干重的60％的蒸馏水，121℃条件下灭菌30min，将驯化后的香灰菌菌丝挑至上述绿茶培养基中，并于25℃条件下避光培养7天，待香灰菌菌丝完全覆盖茶叶培养基，晾干即得香灰菌固体发酵绿茶。
二、实验动物
SPF级昆明雄性小鼠，体质量20±2g，雌雄各半，由广西医科大学实验动物中心提供，生产许可证号：201609001，实验动物合格证号：SCXK(桂)2014-0002。饲养温度25±1℃，相对湿度60±5％，光照昼夜各12h，自由采食和饮水，每天定时增添饲料与水。
三、高血脂小鼠模型的建立及分组
取体质量为18-22g的KM小鼠适应性喂养3d后。使用高脂饲料(实验基础饲料78.8％、猪油10％、市售胆固醇1％、猪胆盐0.2％、蛋黄10％)饲养35d，尾静脉取血，检测血清中TC、TG、HDL-C、LDL-C、ALT、AST的含量，用SPSS 21.0统计学软件(单因素方差分析)处理数据，若模型组与正常组相比，上述四项指标都具有显著性差异，则证明高血脂小鼠造模成功，成功后进行灌胃给药，且继续使用高脂饲料喂养。
随机将上述小鼠分正常对照组、模型组、熊果酸阳性对照组、绿茶组、香灰菌提取物组、香灰菌发酵茶高剂量组(简称高剂量组)、香灰菌发酵茶中剂量组(简称中剂量组)、香灰菌发酵茶低剂量组(简称低剂量组)，每组10只。每天灌胃给药1次，灌胃体积为10mL/kg(kg为小鼠体重)正常对照组和模型组小鼠则灌胃双蒸水。
各组给药浓度：熊果酸组为20mg/mL；
绿茶组为40mg/mL；
香灰菌提取物组40mg/mL；
高剂量组为40mg/mL；
中剂量组为20mg/mL；
低剂量组为10mg/mL。
四、灌胃液的配置
1、香灰菌发酵茶灌胃液的配置：准确称取2g香灰菌发酵茶，量取200mL的蒸馏水煎煮20min，过滤，茶渣继续重复上述操作2次，合并滤液，加热浓缩滤液，并定容至50mL，从而配制成浓度为40mg/mL的香灰菌发酵茶高剂量组灌胃液；同法制备浓度为40mg/mL的香灰菌发酵茶20mL与蒸馏水按1∶1混合制作成浓度为20mg/mL的香灰菌发酵茶中剂量组灌胃液；最后将配制好的香灰菌发酵茶中剂量组灌胃液取出20mL与蒸馏水按1∶1混合制作成浓度为10mg/mL的香灰菌发酵茶低剂量组灌胃液。
2、绿茶灌胃液的配置：准确称取2g绿茶，量取200mL的蒸馏水煎煮20min，过滤，茶渣继续重复上述操作2次，合并滤液，加热浓缩滤液，并定容至50mL，从而配制成浓度为40mg/mL的绿茶组灌胃液；
3、熊果酸灌胃液的配置：准确称取熊果酸0.4g，加入提前配制好的0.5％羧甲基纤维素钠溶液至20mL，得到20mg/mL的熊果酸灌胃液。
4、香灰菌提取物的制备：配制GPY培养基加入蒸馏水中溶解，分装，121℃高压灭菌20min备用；在无菌条件下挑取适量香灰菌于液体培养基中，于25℃、155r/min摇床培养7d，得到香灰菌发酵液，将菌丝体过滤，滤液浓缩成浸膏备用。将香灰菌发酵液浸膏与蒸馏水按40mg∶1mL制作浓度为40mg/mL的香灰菌提取物组灌胃液。
五、给药
将造模成功的高血脂小鼠模型随机分组标记，正常组和模型组灌胃等体积的蒸馏水，各个给药组灌胃不同的药物(即香灰菌发酵茶高剂量组灌胃浓度为40mg/mL，香灰菌发酵茶中剂量组灌胃浓度为20mg/mL，香灰菌发酵茶低剂量组灌胃浓度为10mg/mL，熊果酸阳性对照组灌胃浓度为20mg/mL，绿茶组灌胃浓度为40mg/mL，香灰菌提取物组灌胃浓度为40mg/mL)，每只小鼠的灌胃剂量按照10mL/kg进行灌胃给药，给药期间，正常组喂基础饲料，其余喂高脂饲料，连续灌胃5周。
六、标本采集与检测
1、血清：高血脂小鼠灌胃给药5周后，眼球取血后脱颈处死，测定血清中TC、TG、HDL-C、LDL-C、ALT、AST含量。
2、脏器：小鼠处死后分离肝脏并称重，置于-80℃冰箱备用。
七、数据处理
采用SPSS 21.0统计学软件进行数据统计，多组间比较使用单因素方差分析(ANOVA)，两两比较使用LSD法，组内、组间比较使用t检验，实验结果以
Figure BSA0000259577520000051
表示，以P＜0.05为差异具有统计学意义。
八、实验结果与分析
如表1所示，与正常组相比，模型组的TC、TG、LDL-C含量极显著性升高(P＜0.01)，HDL-C含量极显著性降低(P＜0.01)，证明由饮食引起的高血脂小鼠造模成功。与模型组相比，香灰菌发酵茶高剂量组、中剂量组和低剂量组均能显著(P＜0.01或P＜0.05)降低高血脂小鼠TC和LDL-C的含量，升高HDL-C含量，且香灰菌发酵茶高剂量组能极显著性(P＜0.01)降低高血脂小鼠TC、TG和LDL-C的含量，升高HDL-C含量，且效果优于阳性组、绿茶组和香灰菌提取物组；与模型组相比，香灰菌发酵茶中剂量组可显著性(P＜0.05)降低高血脂小鼠TC，极显著性(P＜0.01)降低TG和LDL-C含量，升高HDL-C含量；香灰菌发酵茶低剂量组可显著性(P＜0.05)降低高血脂小鼠TC和LDL-C含量，升高HDL-C含量；与模型组相比，绿茶组和香灰菌提取物组可降低高血脂小鼠TG和LDL-C的含量，升高HDL-C含量，且具有极显著性(P＜0.01)差异，但效果不及香灰菌发酵茶高剂量组好。上述结果表明，香灰菌发酵茶具有较好的降血脂作用，可以改善饮食诱导的高血脂症。
表1香灰菌发酵茶对高血脂小鼠血清血脂指标的影响结果(x±s，n＝10)
Figure BSA0000259577520000052
与正常组相比较，#P＜0.05，##P＜0.01；与模型组相比较，*P＜0.05，**P＜0.01
如表2所示，与正常组相比，模型组的ALT、AST含量显著性升高(P＜0.01)，证明由饮食引起的高血脂小鼠肝细胞损伤严重；与模型组相比，香灰菌发酵茶高剂量组、中剂量组和低剂量组均能显著性(P＜0.01或P＜0.05)降低高血脂小鼠ALT和AST含量，其中香灰菌发酵茶高剂量组和中剂量组均能极显著(P＜0.01)降低ALT和AST含量，且效果优于阳性药组、绿茶组和香灰菌提取物组；上述结果表明，香灰菌发酵茶可以降低饮食诱导的脂毒性肝损伤，具有保护肝细胞的作用。
表2香灰菌发酵茶对高血脂小鼠ALT、AST含量的影响结果(x±s，n＝10)
Figure BSA0000259577520000061
与正常组相比较，#P＜0.05，##P＜0.01；与模型组相比较，*P＜0.05，**P＜0.01
综上，香灰菌发酵绿茶具有降低血脂，降低肝损伤的作用，可作为降血脂、护肝药物、保健品或食品进行进一步研究和开发。
实施例2：一种香灰菌发酵红茶的降血脂和保护肝脏的作用
一、一种香灰菌发酵红茶的制备
(1)香灰菌菌种的驯化：将香灰菌菌种使用改良的GPY培养基(蔗糖20g、蛋白胨6g、酵母浸粉5g，1.8g琼脂，加热溶解于1000mL浓度为0.08g/mL的红茶水)，并在25℃的温度条件下、避光活化培养4天；然后将上述活化的香灰菌接种在红茶、水和蔗糖的培养基(蔗糖15g，加热溶解于1000mL水，1420g的红茶)上，于25℃的温度条件下避光培养13天，并不断减少蔗糖的比例，红茶水蔗糖培养基中蔗糖占比按照2％、1.6％、1.2％、0.8％、0.4％、0.2％、0％逐渐减少，最终使香灰菌能够在只有红茶和水的培养基上生长良好，从而得到驯化的香灰菌。
(2)一种香灰菌发酵红茶的制备：称取红茶放于培养瓶中，在红茶中加入红茶干重的70％的蒸馏水，121℃条件下灭菌30min，将驯化后的香灰菌菌丝挑至上述红茶培养基中，并于25℃温度条件下避光培养；待香灰菌菌丝完全覆盖茶叶培养基，晾干即得香灰菌固体发酵红茶。
二、实验动物
SPF级昆明雄性小鼠，体质量20±2g，雌雄各半，由广西医科大学实验动物中心提供，生产许可证号：201609001，实验动物合格证号：SCXK(桂)2014-0002。饲养温度25±1℃，相对湿度60±5％，光照昼夜各12h，自由采食和饮水，每天定时增添饲料与水。
三、高血脂小鼠模型的建立与分组
取体质量为18-22g的KM小鼠适应性喂养3d后。使用高脂饲料(实验基础饲料78.8％、猪油10％、市售胆固醇1％、猪胆盐0.2％、蛋黄10％)饲养35d，尾静脉取血，检测血清中TC、TG、HDL-C、LDL-C的含量，用SPSS 21.0统计学软件(单因素方差分析)处理数据，若模型组与正常组相比，上述四项指标都具有显著性差异，则证明高血脂小鼠造模成功，成功后进行灌胃给药，且继续使用高脂饲料喂养。
随机将上述小鼠分正常对照组、模型组、熊果酸阳性对照组、红茶组、香灰菌发酵茶高剂量组(简称高剂量组)、香灰菌发酵茶中剂量组(简称中剂量组)、香灰菌发酵茶低剂量组(简称低剂量组)，每组10只。每天同一时间段灌胃给药1次，灌胃体积为10mL/kg(kg为小鼠体重)正常对照组和模型组小鼠则灌胃双蒸水。
各组给药浓度：熊果酸组为20mg/mL；
红茶组为40mg/mL；
香灰菌提取物组为40mg/mL；
高剂量组为40mg/mL；
中剂量组为20mg/mL；
低剂量组为10mg/mL。
四、灌胃液的配置
1、香灰菌菌茶灌胃液的配置：准确称取2g香灰菌发酵红茶，量取200mL的蒸馏水煎煮20min，过滤，茶渣继续重复上述操作2次，合并滤液，加热浓缩滤液，并定容至50mL，从而配制成浓度为40mg/mL的香灰菌发酵茶高剂量组灌胃液；同法制备浓度为40mg/mL的香灰菌发酵茶20mL与蒸馏水按1∶1混合制作成浓度为20mg/mL的香灰菌发酵茶中剂量组灌胃液；最后将配制好的香灰菌发酵茶中剂量组灌胃液取出20mL与蒸馏水按1∶1混合制作成浓度为10mg/mL的香灰菌发酵茶低剂量组灌胃液。
2、红茶灌胃液的配置：准确称取2g红茶，量取200mL的蒸馏水煎煮20min，过滤，茶渣继续重复上述操作2次，合并滤液，加热浓缩滤液，并定容至50mL，从而配制成浓度为40mg/mL的红茶组灌胃液；
3、熊果酸灌胃液的配置：准确称取熊果酸0.4g，加入提前配制好的0.5％羧甲基纤维素钠溶液至20mL，得到20mg/mL的熊果酸灌胃液。
4、香灰菌提取物的制备：配制GPY培养基加入蒸馏水中溶解，分装，121℃高压灭菌20min备用；在无菌条件下挑取适量香灰菌于液体培养基中，于25℃、155r/min摇床培养7d，得到香灰菌发酵液，将菌丝体过滤，滤液浓缩成浸膏备用。将香灰菌发酵液浸膏与蒸馏水按40mg∶1mL制作浓度为40mg/mL的香灰菌提取物组灌胃液。
五、给药
将造模成功的高血脂小鼠模型随机分组标记，正常组和模型组灌胃等体积的蒸馏水，各个给药组灌胃不同的药物(即香灰菌发酵红茶高剂量组灌胃浓度为40mg/mL，香灰菌发酵红茶中剂量组灌胃浓度为20mg/mL，香灰菌发酵红茶低剂量组灌胃浓度为10mg/mL，熊果酸阳性对照组灌胃浓度为20mg/mL，绿茶组灌胃浓度为40mg/mL，香灰菌提取物组灌胃浓度为40mg/mL)，每只小鼠的灌胃剂量按照10mL/kg进行灌胃给药，给药期间，正常组喂基础饲料，其余喂高脂饲料，连续灌胃5周。
六、标本采集与检测
1、血清：造模5周后，尾静脉取血，4000r/min离心10min，分离血清，测定TC、TG、HDL-C、LDL-C的含量；灌胃给药5周后，眼球取血并脱颈处死小鼠，按上述方法分离血清，测定TC、TG、HDL-C、LDL-C、ALT、AST水平。
2、脏器：小鼠处死后分离肝脏并称重，置于-80℃冰箱备用。
七、数据处理
采用SPSS 21.0统计学软件进行数据统计，多组间比较使用单因素方差分析(ANOVA)，两两比较使用LSD法，组内、组间比较使用t检验，实验结果以
Figure BSA0000259577520000081
表示，以P＜0.05为差异具有统计学意义。
八、实验结果与分析
如表3所示，与正常组相比，模型组小鼠血清中TC、TG、LDL-C含量极显著性升高(P＜0.01)，HDL-C极显著降低(P＜0.01)，证明由饮食引起的高血脂小鼠造模成功。与模型组相比，香灰菌发酵红茶各低剂量组均能降低TC、TG和LDL-C含量，升高HDL-C含量，其中香灰菌发酵茶高剂量组降低高血脂小鼠TC、TG和LDL-C含量，升高HDL-C含量，且具有极显著性(P＜0.01)差异，降血脂效果优于阳性对照组、红茶组和香灰菌提取物组；与模型组相比，香灰菌发酵茶中剂量组和低剂量组可显著性(P＜0.01或P＜0.05)降低TC、TG和LDL-C含量，且随着香灰菌发酵茶浓度的降低，血脂指标呈下降趋势，证明香灰菌发酵茶降血脂作用具有剂量依赖性；与模型组相比，红茶组可显著性降低(P＜0.05)高血脂小鼠TC含量，升高HDL-C含量，极显著性(P＜0.01)降低TG和LDL-C含量，但红茶组降血脂效果不及香灰菌发酵红茶的高、中剂量组。与模型组相比，香灰菌提取物组可极显著性降低(P＜0.01)高血脂小鼠TC、TG和LDL-C含量，显著性(P＜0.05)升高HDL-C含量，但降血脂效果不及香灰菌发酵红茶的高、中剂量组。上述结果表明，香灰菌发酵茶具有良好的降血脂作用，可以改善饮食诱导的高血脂症。
表3香灰菌发酵红茶对高血脂小鼠血清血脂指标的影响结果(x±s，n＝10)
Figure BSA0000259577520000091
与正常组相比较，#P＜0.05，##P＜0.01；与模型组相比较，*P＜0.05，**P＜0.01
如表4所示，与正常组相比，模型组的ALT、AST含量显著性升高(P＜0.01)，证明由饮食引起的高血脂小鼠肝细胞损伤严重；与模型组相比，香灰菌发酵红茶各剂量组均能显著(P＜0.01或P＜0.05)降低ALT和AST含量，且香灰菌发酵红茶高、中剂量组效果优于阳性药组、红茶组和香灰菌提取物组；上述结果表明，香灰菌发酵茶可以降低饮食诱导的脂毒性肝损伤，具有保护肝细胞的作用。
表4香灰菌发酵红茶对高血脂小鼠ALT、AST含量的影响结果(x±s，n＝10)
Figure BSA0000259577520000092
由于其它各组香灰菌发酵茶(白茶、黄茶、代用茶(荷叶))样品降血脂实验与上述实施例1、2效果相当，在此不再赘述。
综合上述数据表明，不同茶叶经过香灰菌发酵制成的香灰菌发酵茶能够减少体内高脂饮食诱导小鼠血液中总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白和高密度脂蛋白水平，可以降低谷丙转氨酶、谷草转氨酶含量，可以减轻脂毒性肝损伤，保护肝细胞，对降血脂和降低肝损伤有良好效果。可用于进一步研究相关降血脂药物、保健品或食品。
以上仅是本发明的优选实施方式，而不是全部的实施方式，应当指出的是，上述优选实施方式不应视为对本发明的限制，本发明的保护范围应当以权利要求所限定的范围为准。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

Claims (8)

1.一种香灰菌发酵茶的制备方法及其在降血脂药物中的应用。
2.降血脂和保护肝脏的作用，其特征在于根据权利要求1所述的应用是针对代谢综合症或高脂饮食所致的高血脂症和肝脏损伤。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述香灰菌发酵茶提取物按以下操作制备：取香灰菌发酵茶加入蒸馏水，茶叶与蒸馏水重量比为1∶100，于100℃下提取15～20min，过滤得滤液，重复三次上述提取过程，合并三次滤液，滤液浓缩即得。
4.权利要求1所述香灰菌发酵茶的制备方法，其特征在于将驯化后的香灰菌与茶叶在一定的培养条件下共发酵而得。
5.根据权利要求4所述香灰菌发酵茶的制备方法，其特征在于经培养驯化后获得的香灰菌按以下操作获得：将香灰菌菌种使用改良的GPY培养基在25℃、避光条件下活化，再利用茶水蔗糖培养基(含30％～90％的一定浓度蔗糖水的茶叶培养基，蔗糖水的浓度为1.2～2％)于21℃～30℃、避光条件下继续对香灰菌进行生长驯化培养7～20天，并通过逐步降低培养基中蔗糖的含量，使香灰菌能够在只有茶叶和水的培养基上生长良好。
6.根据权利要求5所述的一种香灰菌发酵茶的制备方法，其特征在于：称取茶叶放于培养瓶中，在茶叶中加入一定量的蒸馏水(茶叶干重的30％～90％的蒸馏水)，将驯化后的香灰菌菌丝挑至茶叶培养基中，置于20～32℃条件下进行培养，待香灰菌菌丝完全覆盖茶叶培养基，晾干即得香灰菌发酵茶。
7.根据权利要求6所述的一种香灰菌发酵茶的提取方法，其特征在于：准确称取香灰菌发酵茶，量取200mL的蒸馏水煎煮20min，过滤，茶渣继续重复上述操作2次，合并滤液，加热浓缩滤液，并定容配制成香灰菌发酵茶提取物。
8.根据权利要求7所述一种香灰菌发酵茶的制备方法，其特征在于：所述茶叶为绿茶、红茶、白茶、黄茶、代用茶。
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