CN115236255A

CN115236255A - 一种洛索洛芬钠有关物质检测方法

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Publication number: CN115236255A
Application number: CN202210931843.8A
Authority: CN
Inventors: 杨德斌; 苏亮
Original assignee: Disha Pharmaceutical Group Co Ltd
Current assignee: Disha Pharmaceutical Group Co Ltd
Priority date: 2022-08-04
Filing date: 2022-08-04
Publication date: 2022-10-25
Anticipated expiration: 2042-08-04
Also published as: CN115236255B

Abstract

本发明属于药物检测技术领域，具体涉及一种洛索洛芬钠有关物质检测方法。本发明的技术方案是采用高效液相法，流动相由加入磷酸调节pH值为2.3～2.7的磷酸水溶液和乙腈组成，并进行梯度洗脱，可以有效地同时检测出8种有关物质，为原料的检测带来了极大的方便。

Description

一种洛索洛芬钠有关物质检测方法

技术领域

本发明属于药物检测技术领域，具体涉及一种洛索洛芬钠有关物质检测方法。

背景技术

洛索洛芬钠由日本三共株式会社研制，并于1986年以Loxonin为商品名获准上市。洛索洛芬钠与临床上同类药物相比，其特点主要体现在：临床效果好，副作用小。另一类特点是适应症广，临床上可广泛用于类风湿性关节炎、腰痛、肩周炎、颈肩腕综合症等的抗炎镇痛、手术、外伤后及拔牙后的镇痛消炎和急性上呼吸道炎症的解热镇痛等。

洛索洛芬钠化学名称：2-[4-(2-氧代环戊基甲基)苯基]丙酸钠二水合物，属于苯丙酸类非甾体消炎药。其在合成过程中，可能含有以下杂质：

杂质名称	杂质结构	杂质来源
			杂质A	副产物、降解杂质
杂质B		副产物
			杂质C	副产物
杂质D		降解杂质
			杂质M1	中间体
杂质M2		中间体
			杂质Q1	引入杂质
对甲苯苯磺酸		催化剂

目前，各国药典并未收载洛索洛芬钠有关物质检测方法，陆步实等人在《反相高效液相色谱法测定洛索洛芬钠的含量及其有关物质》中采用乙腈-水（40:60）（pH=3.5）为流动相进行等度洗脱，使用杂质A和杂质B定位溶液进行考察时发现，该方法不能有效检测洛索洛芬钠中杂质B。因此，本申请提供一种对洛索洛芬钠中8个杂质均适用的检测方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种洛索洛芬钠有关物质检测方法，能够有效检测洛索洛芬钠中含有的杂质。

本发明具体技术方案如下：

本发明采用高效液相色谱法进行测定，色谱条件如下：

色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；

流动相A：磷酸水溶液（pH2.3~pH2.7）；

流动相B：乙腈；

柱温：35~45℃；

检测波长：220~224nm；

流速：0.8~1.2ml/min；

溶剂：乙腈-水（20:80）；

采用梯度洗脱；

时间（分钟）	流动相A（%）	流动相B（%）
			0	80	20
15	72	28
			24	35	65
30	35	65
			34	80	20
40	80	20

进一步优选，色谱柱为Waters Xbridge Shield RP18（4.6*150mm,3.5μm）；

进一步优选，流动相A为磷酸水溶液（pH2.5）；

进一步优选，柱温为40℃；

进一步优选，检测波长为222nm；

进一步优选，流速为1.0ml/min；

一种洛索洛芬钠有关物质检测方法，包括如下步骤:

1）供试品溶液的制备：取洛索洛芬钠适量，加溶剂乙腈水溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.5mg的溶液；

2）对照品溶液的制备：精密量取供试品溶液适量，用溶剂乙腈水定量稀释制成每1ml中约含0.5μg的溶液；

3) 系统适用性溶液的制备：取杂质A、杂质B、杂质D与洛索洛芬钠适量，加溶剂乙腈水溶解并稀释制成每1ml中含有杂质A 0.75μg、杂质B 0.75μg、杂质D 0.5μg与洛索洛芬钠0.5mg的混合液；

4）测定：采用高效液相色谱法，色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相A为磷酸调节pH值为2 .3～2.7的磷酸水溶液、流动相B为乙腈，流速为1.0ml/min，洗脱方式为梯度洗脱。

有益效果：本发明提供的方法能够有效检出洛索洛芬钠降解杂质A和杂质D，有效检出工艺杂质B、杂质C、杂质M1、杂质M2、杂质Q1、对甲苯磺酸，同时分析方法专属性强，灵敏度高，重现性好，能够有效控制洛索洛芬钠及其制剂的质量。

附图说明

图1是空白溶剂色谱图。

图2是系统适用性溶液色谱图。

图3是供试品溶液色谱图。

图4是混合对照溶液色谱图。

具体实施方式

以下实施例用于说明本方法，但不用来限制本发明的范围。

实施例1

本实施例提供一种高效液相色谱法测定洛索洛芬钠有关物质，采用色谱条件如下：

色谱柱：Waters Xbridge Shield RP18（4.6*150mm,3.5μm）；

流动相A：磷酸水溶液（pH2.5）；流动相B：乙腈；

柱温：40℃；检测波长：222nm；流速：1.0ml/min；溶剂：乙腈-水（20:80）；

梯度洗脱程序为：

供试品溶液的制备：取洛索洛芬钠约12.5mg，置于25ml量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

对照品溶液（0.1%）的制备：精密量取供试品溶液1.0ml于100ml量瓶中，加溶剂稀释并定容至刻度；再精密量取上述溶液1.0ml于10ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀，即得。

系统适用性溶液的制备：取杂质A、杂质B、杂质D与洛索洛芬钠适量，加溶剂溶解并稀释制成每1ml中约含杂质A 0.75μg、杂质B 0.75μg、杂质D 0.5μg与洛索洛芬钠0.5mg的混合溶液。

测定：精密量取上述溶液各20μl，注入液相色谱仪，运行梯度程序，记录色谱图。空白溶剂色谱图见图1，系统适用性溶液色谱图见图2，供试品溶液色谱谱图见图3。

实施例2

采用与实施例1相同的步骤，唯一不同的地方是将流动相A改为磷酸水溶液（pH2.3），柱温：35℃；检测波长：220nm；流速：0.8ml/min；

实施例3

采用与实施例1相同的步骤，唯一不同的地方是将流动相A改为磷酸水溶液（pH2.7），柱温：45℃；检测波长：224nm；流速：1.2ml/min；

本发明对洛索洛芬钠有关物质的检测方法进行了实验例1-5的验证

实验例1系统适用性试验

溶剂：乙腈-水（20:80）。

各杂质定位溶液的制备：精密称取杂质A和杂质B各18.7mg、杂质C、杂质D、杂质M1、杂质M2、杂质Q1、对甲苯磺酸和洛索洛芬钠各约12.5mg，分别置25ml量瓶中，用溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为杂质对照品贮备液（1），精密量取1ml各贮备液（1）分别置100ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，作为杂质对照品贮备液（2），再精密量取贮备液（2）各1ml，分别置10ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，即得各杂质定位溶液。

混合对照溶液的制备：取洛索洛芬钠约12.5mg置25ml量瓶中，精密加入贮备液（2）各2.5ml，置于上述25ml量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

系统适用性溶液制备：取洛索洛芬钠约12.5mg置25ml量瓶中，精密加入杂质A、杂质B、杂质D对照品贮备液（2）各2.5ml，置于上述25ml量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

供试品溶液的制备：取洛索洛芬钠约12.5mg，置于25ml量瓶中，加溶剂溶解并定量稀释至刻度，摇匀，即得。

对照品溶液（0.1%）的制备：精密量取供试品溶液1.0ml于100ml量瓶中，加溶剂稀释并定容至刻度；再精密量取上述溶液1.0ml于10ml量瓶中，用溶剂稀释并定容至刻度，摇匀，即得。

测定：流动相A：磷酸水溶液（pH2.5）；流动相B：乙腈；柱温：40℃；检测波长：222nm；流速：1.0ml/min。

梯度洗脱：

精密量取上述溶液各20μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，结果见表1，混合对照色谱图见附图4。

表1 专属性-定位实验结果

结论：空白溶剂不干扰杂质检测，各杂质均能有效检出，杂质与主峰之间的分离度满足测定要求，杂质C和对甲苯磺酸作为工艺杂质，在多批原料中均未检出，此处对其分离度不进行要求。

实验例2 检测限和定量限试验

取实验例1中各杂质对照品贮备液进行逐步稀释，当信噪比（S/N）约为3～5时，对应浓度为最小检测浓度，其进样质量为检测限；取洛索洛芬钠、杂质A、杂质B、杂质D对照品贮备液逐步稀释，当信噪比（S/N）约为10时，对应浓度为最小定量浓度，其进样质量为定量限。结果见表2。

表2检测限和定量限

实验例3 线性与范围试验

溶剂：乙腈-水（20:80）。

线性样品溶液：取杂质A、杂质B对照品各约18.7mg，取杂质D、洛索洛芬钠对照品各约12.5mg，分别置25ml量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度。精密量取适量，用溶剂稀释成一系列线性样品溶液，即得。

精密量取上述各溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果见表3。

表3 线性与范围试验结果

结论：（1）洛索洛芬钠在0.15μg/ml～1.05μg/ml范围内，线性回归方程为y=0.2676x+0.0022，r=0.9999，线性回归显著。

（2）杂质A在0.15μg/ml～1.05μg/ml范围内，线性回归方程为y=0.2673x+0.004，r=1，线性回归显著。

（3）杂质B在0.15μg/ml～1.05μg/ml范围内，线性回归方程为y=0.3951x+0.0039，r=1，线性回归显著。

（4）杂质D在0.10μg/ml～0.70μg/ml范围内，线性回归方程为y=0.2999x+0.0026，r=0.9998，线性回归显著。

实验例4 回收率试验

溶剂：乙腈-水（20:80）。

对照品贮备液：取杂质A、杂质B对照品各约18.7mg，取杂质D对照品约12.5mg，置25ml量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，精密量取1ml置100ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。

回收率对照品溶液：精密量取对照品贮备液各12ml、10ml、8ml，分别置100ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，分别作为120%、100%、80%的对照品溶液。

回收率供试品溶液：精密称取原料药约12.5mg置于25ml量瓶中，分别加120%、100%、80%对照品溶液溶解并定容至刻度，摇匀。同法各制作三份，作为120%、100%、80%回收率供试品溶液。

精密量取上述各溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果见表4。

表4 回收率结果

结论：杂质A、杂质B、杂质D平均回收率分别为102.3%、99.4%、98.9%，均在90%~108%之间，符合验证要求，表明本方法准确度良好。

实验例5 耐用性试验

溶剂：乙腈-水（20:80）。

系统适用性溶液：取取洛索洛芬钠约12.5mg置25ml量瓶中，精密加入杂质A、杂质B、杂质D对照品贮备液（2）各2.5ml，置于上述25ml量瓶中，加溶剂定容。

供试品溶液：取洛索洛芬钠约12.5mg，置于25ml量瓶中，加溶剂溶解并定量稀释至刻度。

对照品溶液（0.1%）：精密量取供试品溶液1.0ml于100ml量瓶中，加溶剂稀释并定容至刻度；再精密量取上述溶液1.0ml于10ml量瓶中，用溶剂稀释并定容至刻度。

精密量取上述各溶液20μl，分别在流动相pH值（2.3、2.5、2.7）、流动相初始比例（A相-B相（82:18）、A相-B相（80:20）、A相-B相（78:22））、柱温（35℃、40℃、45℃）、流速（0.8ml/min、1.0ml/min、1.2ml/min）、检测波长（220nm、222nm、224nm)、不同批号色谱柱的条件下，注入液相色谱仪，记录色谱图，结果见表5~6。

表5耐用性-系统适用性考察结果

表6耐用性-供试品溶液考察结果

结论：由试验结果可知，在流动相pH、初始比例、流速、柱温、检测波长及不同批次色谱柱发生微小变化时，各已知杂质，杂质个数及总杂没有显著变化，且无新杂质产生，各系统适用性溶液符合要求。结果表明，本色谱条件的耐用性良好。

以上所述的实施例和实验例仅为更好描述本发明的使用，并非因此而限制本发明的专利范围，在本发明的基础上，进行的一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围内。

Claims

1.一种洛索洛芬酸或其钠盐中有关物质的检测方法，其中有关物质为杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质M1、杂质M2、杂质Q1、对甲苯磺酸，其中方法为高效液相色谱法，其特征在于，色谱柱选用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂高效液相色谱柱，流动相A为用磷酸调节pH值为 2 .3～2.7的磷酸水溶液、流动相B为乙腈，并进行梯度洗脱, 梯度洗脱程序为:

时间（分钟）流动相A（%）流动相B（%） 0 80 20 15 72 28 24 35 65 30 35 65 34 80 20 40 80 20

检测波长为220-224nm；检测柱温35-45℃；检测流速为0.8-1.2ml/min。

2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，色谱柱的规格为 waters xbridgeshield RP18,4.6*150mm，3.5μm。

3.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，色谱柱柱温为40℃。

4.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，色谱柱的流速为1.0ml ml/min。

5.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）供试品溶液的配置：取洛索洛芬钠适量，加溶剂乙腈水溶解并定量稀释制成每1ml中含0.5mg的溶液；

2）对照品溶液的配置：精密量取供试品溶液，用溶剂乙腈水定量稀释成每1ml中含有0.5μg的溶液；

3）系统适用性溶液的制备：取杂质A、杂质B、杂质D与洛索洛芬钠适量，加溶剂乙腈水溶解并稀释制成每1ml中含有杂质A 0.75μg、杂质B 0.75μg、杂质D 0.5μg与洛索洛芬钠0.5mg的混合液；

4）测定：精密量取上述溶液各20μl，注入色谱仪，运行梯度程序，记录色谱图。