CN110940751B - 一种泰地罗新原料药及其制剂中有关物质的检测方法 - Google Patents

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Abstract

一种泰地罗新原料药及其制剂中有关物质的检测方法，包括如下步骤：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，选用酸性物质水溶液：乙腈=（80‑100）：（0‑20）为流动相A，酸性物质水溶液：乙腈=（0‑20）：（80‑100）为流动相B，酸性物质水溶液与乙腈的添加比例之和为100，流动相A和流动相B按比例混合；流速为0.8~1.2mL/min，检测波长为285nm；溶液配制过程中避光操作；供试品溶液的配制：取泰地罗新原料药或其制剂置棕色量瓶中，加乙腈溶解，并用稀释液，作为供试品溶液；对照溶液的配制：精密量取供试品溶液1mL置100mL棕色量瓶中，用稀释液稀释，作为对照溶液；通过梯度洗脱分离。本发明方法采用液相色谱法分离出泰地罗新及其异构体，并将有关物质很好的分离。

Description

一种泰地罗新原料药及其制剂中有关物质的检测方法
技术领域
本发明涉及一种泰地罗新原料药及其制剂中有关物质的检测方法，属于化学药品检测技术领域。
背景技术
泰地罗新原料药及其注射液作为一种新兽药，主要活性成分为泰地罗新及其异构体。泰地罗新(Tildipirosin)是一种新型十六元环动物专用的大环内酯类半合成抗生素，其结构如下结构式Ⅰ所示。泰地罗新具有高效、广谱的抗菌活性，其对胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌、支气管败血波氏杆菌和副猪嗜血杆菌引起的猪呼吸道疾病及溶血性曼氏杆菌、多杀性巴氏杆菌、睡眠嗜组织菌引起的牛呼吸道疾病具有很好的疗效。泰地罗新注射液是由泰地罗新原料药与适宜的辅料制成的无菌溶液。由于该原料药及其制剂在中国兽药典、国家其他法定标准中无收载，国外药典例如美国药典、欧洲药典等药典中也均无该标准的收载，并且，由于泰地罗新原料药合成工艺中的原料、中间体、副产物及原料合成中均会引入杂质、原料及注射液储存放置过程中会产生降解产物，因此，需要建立适宜的色谱条件并准确的检测出可能存在的各种有关物质的量，很好的控制样品的质量。
Figure BDA0002316387330000011
发明内容
本发明针对现有技术存在的问题，提供一种泰地罗新原料药及其制剂中有关物质的检测方法，本发明方法采用液相色谱法分离出泰地罗新及其异构体，并将有关物质很好的分离。
本发明所述的技术问题是以如下技术方案解决的：
一种泰地罗新原料药及其制剂中有关物质的检测方法，所述检测方法为液相色谱法，利用梯度洗脱的方式将泰地罗新、异构体及杂质的色谱峰分离，所述检测方法包括如下步骤：
a、液相色谱条件的选定：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，选用酸性物质水溶液：乙腈＝(80-100)：(0-20)为流动相A，酸性物质水溶液：乙腈＝(0-20)：(80-100)为流动相B，酸性物质水溶液与乙腈的添加比例之和为100，流动相A和流动相B按比例混合，以梯度洗脱的方式分离；流速为0.8～1.2mL/min，检测波长为285nm；
b、溶液的配制：溶液配制过程中避光操作；
供试品溶液的配制：取泰地罗新原料药或其制剂置棕色量瓶中，加乙腈溶解，并用稀释液，稀释制成每1mL供试品溶液中包含0.2-2mg的泰地罗新的溶液，作为供试品溶液；
对照溶液的配制：精密量取供试品溶液1mL置100mL棕色量瓶中，用稀释液稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液；
c、样品的测定：分别取对照溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪进行梯度洗脱，以自身稀释对照法计算供试品溶液中各杂质的量。
上述泰地罗新原料药及其制剂中有关物质的检测方法，所述酸性物质为三氟乙酸、甲酸、乙酸、磷酸、磷酸二氢钾或磷酸二氢钠中的一种或多种。
上述泰地罗新原料药及其制剂中有关物质的检测方法，所述酸性物质优选为三氟乙酸。
上述泰地罗新原料药及其制剂中有关物质的检测方法，所述流动相A中三氟乙酸水溶液：乙腈＝90：10，流动相B中三氟乙酸水溶液：乙腈＝10：90。
上述泰地罗新原料药及其制剂中有关物质的检测方法，所述三氟乙酸水溶液的浓度为0.01-0.5％。
上述泰地罗新原料药及其制剂中有关物质的检测方法，所述三氟乙酸水溶液的浓度为0.1％。
上述泰地罗新原料药及其制剂中有关物质的检测方法，所述稀释液为流动相A与流动相B按(50-100)：(0-50)的比例混合制成的稀释液，两者比例之和为100，优选的为流动相A：流动相B＝90：10。
上述泰地罗新原料药及其制剂中有关物质的检测方法，所述步骤b中，供试品溶液的浓度为1mg/mL。
上述泰地罗新原料药及其制剂中有关物质的检测方法，所述c中，梯度洗脱与流动相A和流动相B的比例关系为：洗脱开始，流动相A与流动相B的比例为(90-100)：(0-10)；洗脱20-25min时，流动相A与流动相B的比例为(80-85)：(15-20)；洗脱30-35min时，流动相A与流动相B的比例为(65-70)：(30-35)；洗脱40min时，流动相A与流动相B的比例为(50-60)：(40-50)；洗脱45min时，流动相A与流动相B的比例为(90-100)：(0-10)；洗脱50min时，流动相A与流动相B的比例为(90-100)：(0-10)。
本发明利用液相色谱方法，将流动相A与流动相B的组成配比与对应的梯度洗脱方法结合使用，能使色谱图的基线平稳，各有关物质的色谱峰全部检出，且各有关物质峰的峰形良好、分离度良好，专属性强，准确度高，能够很好的控制泰地罗新原料药及其制剂中有关物质的量，进而控制产品的质量。
附图说明
图1为泰地罗新原料药供试品溶液色谱图；
图2为泰地罗新原料药对照品溶液色谱图；
图3为泰地罗新注射液供试品溶液色谱图；
图4为泰地罗新注射液对照品溶液色谱图；
图5为混合对照品溶液的液相色谱图；
图6为验证对照溶液的液相色谱图；
图7为验证供试品溶液的液相色谱图；
图8-12为原料不同条件强制降解后的液相色谱图；
图13为各杂质的定量限液相色谱图；
图14为各杂质的检测限液相色谱图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细地说明。
本发明所述的泰地罗新原料药及其制剂中的有关物质是指泰地罗新原料药合成工艺中的原料、中间体、副产物及原料合成引入的已知和未知杂质、原料及注射液储存放置过程中的降解产物。
所述已知杂质为：杂质B：23-羟基-20-哌啶基-5-O-碳霉胺糖基-泰乐内酯(泰乐菌素-上哌啶脱二糖)，简称：ZZB；
杂质C：23-O-(6-脱氧-2，3-二-D-阿洛糖基)-20-哌啶基-5-O-碳霉胺糖基-泰乐内酯(泰乐菌素-上哌啶脱一糖)，简称：ZZC；
杂质D：23-O-(6-脱氧-2，3-二-D-阿洛糖基)-20-哌啶基-5-O-碳霉胺糖基-4’-碳霉糖基-泰乐内酯(上哌啶-泰乐菌素)，简称：ZZD；
杂质E：23-O-(6-脱氧-2，3-二-D-阿洛糖基)-20-羟基-5-O-碳霉胺糖基-4’-碳霉糖基-泰乐内酯(雷诺菌素)，简称：ZZE；
杂质F：20-哌啶基-23-溴-5-O-碳霉胺糖基-泰乐内酯(泰乐菌素-上哌啶脱二糖溴代物)，简称：ZZF；
杂质G：23-O-(6-脱氧-2，3-二-D-阿洛糖基)-20-醛基-5-O-碳霉胺糖基-4’-碳霉糖基-泰乐内酯(泰乐菌素)，简称：ZZG。
实施例1
具体液相色谱检测过程为：
a、液相色谱条件的选定：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，选用0.1％三氟乙酸水溶液：乙腈＝90：10为流动相A，0.1％三氟乙酸水溶液：乙腈＝10：90为流动相B；检测波长为285nm；
b、溶液的配制：溶液配制过程中避光操作；
供试品溶液的配制：取泰地罗新原料药或其制剂置于棕色容量瓶中，加入乙腈溶解，并用稀释液(流动相A：流动相B＝90：10)，稀释制成每1mL供试品溶液中包含1mg的泰地罗新的溶液，作为供试品溶液；
对照溶液的配制：精密量取供试品溶液1mL置100mL棕色量瓶中，用稀释液稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液；
c、样品的测定：分别取对照溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪进行梯度洗脱，流动相A与流动相B的组成配比与对应的梯度洗脱方法结合使用，以自身稀释对照法计算供试品溶液中各杂质的量。梯度洗脱具体为：
洗脱时间(min) 流动相A(％) 流动相B(％)
0 95 5
25 85 15
30 70 30
40 60 40
45 95 5
50 95 5
参看图1和图2，通过以上液相色谱条件即可将泰地罗新原料药中的可能存在的有关物质和异构体全部检测出来，并且样品中存在的杂质峰、异构体峰与主峰能够很好的分离，各杂质峰的分离度良好。图3和图4为泰地罗新注射液的检测色谱图，各杂质峰的分离度良好。此批次的泰地罗新原料及注射液中均未检出ZZB、ZZC、ZZD、ZZE、ZZF、ZZG，检测结果如表1和表2.
表1泰地罗新原料有关物质检测结果(％)
Figure BDA0002316387330000051
表2泰地罗新注射液有关物质检测结果(％)
Figure BDA0002316387330000052
注：方法能很好的分离泰地罗新、异构体及其它各杂质，但异构体不算入总杂其中的杂质I和杂质II经结构确认分别为：
杂质I：(10E，12E)-5-O-碳霉胺糖基-3，15二羟基-4，8，12-三甲基-9-氧代-6-(2-(哌啶-1-基)乙基)-14-(哌啶-1-基甲基)十七碳-10，12-二烯酸。
杂质II：(10Z，12E)-20，23-二哌啶基-5-O-碳霉胺糖基-泰乐内酯。
实施例2
具体液相色谱检测过程为：
a、液相色谱条件的选定：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，选用0.1％三氟乙酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B；检测波长为285nm；
b、溶液的配制：溶液配制过程中避光操作；
供试品溶液的配制：取泰地罗新原料药或其制剂置于棕色容量瓶中，加入乙腈溶解，并用稀释液(流动相A：流动相B＝90：10)，稀释制成每1mL供试品溶液中包含1mg的泰地罗新的溶液，作为供试品溶液；
对照溶液的配制：精密量取供试品溶液1mL置100mL棕色量瓶中，用稀释液稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液；
c、样品的测定：分别取对照溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪进行梯度洗脱，流动相A与流动相B的组成配比与对应的梯度洗脱方法结合使用，以自身稀释对照法计算供试品溶液中各杂质的量。梯度洗脱具体为：
洗脱时间(min) 流动相A(％) 流动相B(％)
0 95 5
25 85 15
30 70 30
40 60 40
45 95 5
50 95 5
通过以上液相色谱条件可将泰地罗新原料药和注射液中的可能存在的有关物质和异构体全部检测出来，并且样品中存在的杂质峰、异构体峰与主峰能够很好的分离，各杂质峰的分离度良好。检测结果如表3和表4。
表3泰地罗新原料有关物质检测结果(％)
Figure BDA0002316387330000061
表4泰地罗新注射液有关物质检测结果(％)
Figure BDA0002316387330000071
实施例3
具体液相色谱检测过程为：
a、液相色谱条件的选定：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，选用0.1％三氟乙酸水溶液：乙腈＝90：10为流动相A，0.1％三氟乙酸水溶液：乙腈＝10：90为流动相B；检测波长为285nm；
b、溶液的配制：溶液配制过程中避光操作；
供试品溶液的配制：取泰地罗新原料药或其制剂置于棕色容量瓶中，加入乙腈溶解，并用稀释液(流动相A：流动相B＝90：10)，稀释制成每1mL供试品溶液中包含1mg的泰地罗新的溶液，作为供试品溶液；
对照溶液的配制：精密量取供试品溶液1mL置100mL棕色量瓶中，用稀释液稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液；
c、样品的测定：分别取对照溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪进行梯度洗脱，流动相A与流动相B的组成配比与对应的梯度洗脱方法结合使用，以自身稀释对照法计算供试品溶液中各杂质的量。梯度洗脱具体为：
洗脱时间(min) 流动相A(％) 流动相B(％)
0 90 10
25 85 15
30 70 30
40 60 40
45 90 10
50 90 10
通过以上液相色谱条件可将泰地罗新原料药和注射液中的可能存在的有关物质和异构体全部检测出来，并且样品中存在的杂质峰、异构体峰与主峰能够很好的分离，各杂质峰的分离度良好。检测结果如表5和表6。
表5泰地罗新原料有关物质检测结果(％)
Figure BDA0002316387330000081
表6泰地罗新注射液有关物质检测结果(％)
Figure BDA0002316387330000082
本发明检测方法验证：
稀释液为流动相A(0.1％三氟乙酸水溶液：乙腈＝90：10)与流动相B(0.1％三氟乙酸水溶液：乙腈＝10：90)混合比为90：10的混合液。泰地罗新对照品为自制对照品，由泰地罗新原料精制而得。
溶液制备：
杂质贮备液(定位溶液)的制备：分别取杂质ZZB、ZZC、ZZD、ZZE、ZZF、ZZG，精密等量称定，分别加稀释液溶解并稀释制成1mL中含0.1mg的各杂质贮备液。
混合对照品溶液：称取50mg泰地罗新对照品加稀释液溶解，分别取ZZB、ZZC、ZZD、ZZE、ZZF、ZZG杂质储备液适量，加稀释液稀释制成含有泰地罗新1mg/mL，ZZB、ZZC、ZZD、ZZE、ZZF、ZZG含量为1μg/mL的杂质混合溶液。
验证供试品溶液的制备：取泰地罗新对照品50mg，置于50mL棕色量瓶中，加稀释液溶解并稀释制成1mL中含1mg泰地罗新的供试品溶液。
验证对照溶液：精密量取供试品溶液1mL，置于100mL棕色量瓶中，加稀释液定容至刻度，摇匀。
(一)关于本发明方法的专属性
取空白溶剂、混合对照品溶液、验证对照溶液、验证供试品溶液及上述各杂质贮备液(定位溶液)，按确定的有关物质条件进行液相色谱检测，结果见表7所示：
表7专属性试验结果
Figure BDA0002316387330000091
空白溶剂不干扰各杂质和泰地罗新的测定，此外，各杂质间以及泰地罗新均能很好分离，最小分离度为1.906，混合对照品溶液的图谱见图5，验证对照溶液图谱见图6，验证供试品溶液图谱见图7。
泰地罗新样品在酸、碱、氧化、强光照、高温条件下均有不同程度的降解产物产生。DAD检测结果显示各条件主峰纯度均合格，且对各种条件下破坏前后进行物料平衡，结果均在0.9～1.1之间，表明物料守恒，进一步说明本色谱条件的专属性强。各液相色谱图见图8～图12，依次分别为酸破坏、碱破坏、氧化降解、强光照破坏和高温固体破坏后得到高效液相色谱图。
(二)系统适用性
取混合对照品溶液连续进样6次(低温操作)，记录泰地罗新和各杂质峰面积，计算峰面积的RSD％，结果如上表8所示。
表8系统适用性试验结果
Figure BDA0002316387330000101
由进样结果可知，连续进样6针，各物质的峰面积的RSD值均符合要求，各杂质与主峰的分离度均符合规定，适合有关物质的检查，可以有效的对杂质控制，本方法的系统适用性良好。
(三)定量限与检测限
取泰地罗新对照品适量，取ZZB、ZZC、ZZD、ZZE、ZZF、ZZG贮备液各适量，分别加稀释剂溶解并稀释，制成系列浓度的溶液，精密量取溶液10μL，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，当信噪比约为10时，即为定量限；当信噪比约为3时，即为检测限。测定结果见下表所示，色谱图见图13～14。
表9定量限与检测限试验结果
Figure BDA0002316387330000102
(四)线性与范围
为准确测定本品各杂质的量，对各杂质进行线性考察，即考察各物质在一定范围内峰面积与浓度之间的关系，各线性浓度均从定量限浓度开始试验，具体如下：取泰地罗新对照品适量和各杂质适量，精密称定，分别加稀释液溶解并稀释制成一系列浓度的各对照品溶液，照上述方法进行测定，记录色谱图，以各对照品溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，做线性回归曲线，结果如下表10所示：
表10各物质线性与范围试验结果
Figure BDA0002316387330000111
由各杂质的线性方程的斜率和泰地罗新的斜率可得，各物质的相对校正因子分别为：ZZB为1.00，ZZC为1.00，ZZD为1.51，ZZE为1.29，ZZF为1.20，ZZG为1.32。
(五)准确度试验
配制含有泰地罗新1mg/mL、各杂质为1μg/mL的混合溶液作为混合对照溶液，及含泰地罗新1mg/mL、各杂质分别为0.5μg/mL、1μg/mL、1.5μg/mL的50％、100％、150％的供试品溶液，每个浓度平行配制三份样品进行测定。
按上述色谱条件进样，计算样品中各杂质的回收率，结果见表11～16。
表11 ZZB回收率试验结果
Figure BDA0002316387330000121
表12 ZZC回收率试验结果
Figure BDA0002316387330000122
表13 ZZD回收率试验结果
Figure BDA0002316387330000131
表14 ZZE回收率试验结果
Figure BDA0002316387330000132
表15 ZZF回收率试验结果
Figure BDA0002316387330000133
表16 ZZG回收率试验结果
Figure BDA0002316387330000141
结论：试验结果表明，各物质的回收率均在90％～108％之间，回收率相对标准偏差均小于2.0％，该方法准确度高。
(六)重复性试验
配制含泰地罗新1mg/mL的供试品溶液；精密量取供试品溶液1mL，置100mL棕色量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。照此方法平行配制六份样品，记录色谱图，用自身对照法计算各杂质的量。试验结果见表17。
表17有关物质重复性考察结果
Figure BDA0002316387330000142
结论：平行试验六份样品的有关物质测定结果基本一致，供试品溶液及对照溶液的峰面积的相对标准偏差均小于3.0％，6份样品中检测出的未知杂质含量的相对标准偏差均小于3.0％。试验结果表明，该方法重复性好。
(七)中间精密度试验
按照“重复性试验”项下方法测定，由不同的操作人员使用不同的仪器在不同的日期进行测定。分别平行配制6份相同浓度的供试品溶液，进样并计算结果。结合重复性试验结果，统计分析12份样品检测结果。结果见下表18。
表18泰地罗新有关物质中间精密度试验结果
Figure BDA0002316387330000151
结论：平行试验六份样品的有关物质测定结果基本一致，供试品溶液及对照溶液的峰面积的相对标准偏差均小于3.0％，12份样品中检测出的未知杂质含量的相对标准偏差为3.0％。试验结果表明，本方法中间精密度良好。
(八)溶液稳定性
配制含泰地罗新1mg/mL的供试品溶液和1％的对照溶液置在室温下放置，分别于配制后0、2、4、6、8h精密量取10μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。试验结果见表19。
表19泰地罗新溶液稳定性试验结果-供试品溶液杂质含量(％)(面积归一化法)
杂质I 异构体 最大未知单杂 总杂％
0h 0.074 0.205 0.214 0.289
2h 0.072 0.207 0.220 0.292
4h 0.073 0.210 0.219 0.292
6h 0.073 0.206 0.218 0.291
8h 0.072 0.205 0.220 0.293
均值 0.073 0.206 0.218 0.291
RSD％ 1.17 0.91 1.09 0.55
结论：试验数据表明，供试品溶液在室温条件下8h内各杂质含量的RSD均小于2.0％，故供试品溶液在室温条件下8h内稳定。
(九)耐用性
考察色谱条件进行微小变化，测定结果不受影响的程度，本方法可用于常规检查提供依据。本品耐用性考察主要针对本品色谱条件中流速、柱温、流动相比例进行试验，结果表明：分别将流速调整为0.8mL/min和1.2mL/min、流动相起始比例上下调整2％、柱温微小改变而其他色谱条件不变，对检测结果无明显影响，说明方法的耐用性良好。
以上验证结果表明，采用本发明液相色谱法确实可以将泰地罗新与其异构体及有关物质分离，且其分离度良好。

Claims (9)

1.一种泰地罗新原料药及其制剂中有关物质的检测方法，其特征在于：所述检测方法为液相色谱法，利用梯度洗脱的方式将泰地罗新、异构体及杂质的色谱峰分离，所述检测方法包括如下步骤：
a、液相色谱条件的选定：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，选用酸性物质水溶液：乙腈=（80-100）：（0-20）为流动相A，酸性物质水溶液：乙腈=（0-20）：（80-100）为流动相B，酸性物质水溶液与乙腈的添加比例之和为100，流动相A和流动相B按比例混合，以梯度洗脱的方式分离；流速为0.8~1.2mL/min，检测波长为285nm；
b、溶液的配制：溶液配制过程中避光操作；
供试品溶液的配制：取泰地罗新原料药或其制剂置棕色量瓶中，加乙腈溶解，并用稀释液，稀释制成每1mL供试品溶液中包含0.2-2 mg的泰地罗新的溶液，作为供试品溶液；
对照溶液的配制：精密量取供试品溶液1mL置100mL棕色量瓶中，用稀释液稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液；
c、样品的测定：分别取对照溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪进行梯度洗脱，以自身稀释对照法计算供试品溶液中各杂质的量；
所述杂质为：杂质B：23-羟基-20-哌啶基-5-O-碳霉胺糖基-泰乐内酯，简称：ZZB；
杂质C：23-O-（6-脱氧-2，3-二-D-阿洛糖基）-20-哌啶基-5-O-碳霉胺糖基-泰乐内酯，简称：ZZC；
杂质D：23-O-（6-脱氧-2，3-二-D-阿洛糖基）-20-哌啶基-5-O-碳霉胺糖基-4’-碳霉糖基-泰乐内酯，简称：ZZD；
杂质E：23-O-（6-脱氧-2，3-二-D-阿洛糖基）-20-羟基-5-O-碳霉胺糖基-4’-碳霉糖基-泰乐内酯，简称：ZZE；
杂质F：20-哌啶基-23-溴-5-O-碳霉胺糖基-泰乐内酯，简称：ZZF；
杂质G：23-O-（6-脱氧-2，3-二-D-阿洛糖基）-20-醛基-5-O-碳霉胺糖基-4’-碳霉糖基-泰乐内酯，简称：ZZG；
杂质
Figure 250282DEST_PATH_IMAGE001
：(10E，12E)-5-O-碳霉胺糖基-3，15二羟基-4，8，12-三甲基-9-氧代-6-(2-(哌 啶-1-基)乙基)-14-(哌啶-1-基甲基)十七碳-10，12-二烯酸；
杂质
Figure 72744DEST_PATH_IMAGE002
：(10Z，12E)-20，23-二哌啶基-5-O-碳霉胺糖基-泰乐内酯；
所述检测方法中，酸性物质水溶液：乙腈＝90: 10为流动相A，酸性物质水溶液：乙腈＝10: 90为流动相B，梯度洗脱与流动相A和流动相B的比例关系为：0min时，流动相A与流动相B的比例为（90-95)：(5-10）；洗脱25min时，流动相A与流动相B的比例为85：15；洗脱30min时，流动相A与流动相B的比例为70：30；洗脱40min时，流动相A与流动相B的比例为60：40；洗脱45min时，流动相A与流动相B的比例为（90-95)：(5-10)；洗脱50min时，流动相A与流动相B的比例为（90-95)：(5-10)；
或酸性物质水溶液：乙腈＝100：0为流动相A，酸性物质水溶液：乙腈＝0：100为流动相B，梯度洗脱与流动相A和流动相B的比例关系为：0min时，流动相A与流动相B的比例为95：5；洗脱25min时，流动相A与流动相B的比例为85：15；洗脱30min时，流动相A与流动相B的比例为70：30；洗脱40min时，流动相A与流动相B的比例为60：40；洗脱45min时，流动相A与流动相B的比例为95：5；洗脱50min时，流动相A与流动相B的比例为95：5。
2.根据权利要求1所述的泰地罗新原料药及其制剂中有关物质的检测方法，所述酸性物质为三氟乙酸、甲酸、乙酸、磷酸、磷酸二氢钾或磷酸二氢钠中的一种或多种。
3.根据权利要求2所述的泰地罗新原料药及其制剂中有关物质的检测方法，所述酸性物质优选为三氟乙酸。
4.根据权利要求3所述的泰地罗新原料药及其制剂中有关物质的检测方法，所述流动相A中三氟乙酸水溶液：乙腈=90：10，流动相B中三氟乙酸水溶液：乙腈=10：90。
5.根据权利要求4所述的泰地罗新原料药及其制剂中有关物质的检测方法，所述三氟乙酸水溶液的浓度为0.01-0.5%。
6.根据权利要求5所述的泰地罗新原料药及其制剂中有关物质的检测方法，所述三氟乙酸水溶液的浓度为0.1%。
7.根据权利要求6所述的泰地罗新原料药及其制剂中有关物质的检测方法，所述稀释液为流动相A与流动相B按（50-100）：（0-50）的比例混合制成的稀释液，两者比例之和为100。
8.根据权利要求7所述的泰地罗新原料药及其制剂中有关物质的检测方法，所述稀释液优选为流动相A：流动相B=90：10。
9.根据权利要求8所述的泰地罗新原料药及其制剂中有关物质的检测方法，所述步骤b中，供试品溶液的浓度为1mg/mL。
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