CN110940744A - 一种洛索洛芬或其钠盐中遗传毒性杂质的检测方法 - Google Patents

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董红光
綦秀杰
连捷
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Abstract

一种洛索洛芬或其钠盐中遗传毒性杂质的检测方法，属于药物分析技术领域，包括如下步骤：1)制备衍生剂：取哌啶至容量瓶中，用DMSO稀释至刻度，摇匀作为衍生剂；2)制备供试品溶液：另取洛索洛芬钠原料用DMSO溶解，加入衍生剂，摇匀，作为供试品溶液；3)制备对照品溶液：另取杂质A加DMSO使溶解并稀释至刻度加入衍生剂，摇匀即得作为对照品溶液；4)检测过程：依次将空白溶液、对照品溶液、供试品溶液注入LC‑MS系统，记录对照品溶液主峰峰面积、供试品溶液中与对照品溶液保留时间一致的峰面积，采用外标法计算供试品中的杂质A/B的含量。

Description

一种洛索洛芬或其钠盐中遗传毒性杂质的检测方法
技术领域
本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种洛索洛芬或其钠盐中遗传毒性杂质的检测方法。
背景技术
洛索洛芬钠由日本第一三共株式会社首先研制，该品已列入国家九五和2010年新品开发推荐试制品种之一。洛索洛芬钠为丙烯酸类前体型非甾体抗炎药，其本身不具有药物活性，经皮或口服给药吸收后，在人体内转化为活性代谢物反式-OH体，其活性代谢物通过抑制前列腺素的合成而发挥镇痛、抗炎及解热作用。
与临床上同类药物相比，其特点主要体现在：更强(临床效果好)、更快(口服30分钟血浆浓度即达峰值)、更安全(副作用小)。另一类特点是适应症广，临床上可广泛用于类风湿性关节炎、腰痛、肩周炎、颈肩腕综合症等的抗炎镇痛以及手术、外伤后及拔牙后的镇痛消炎和急性上呼吸道炎症的解热镇痛等。国内外已经上市的剂型有片剂、胶囊、颗粒剂、贴膏剂、贴剂、凝胶等。
中国专利CN110261531A公布了一种洛索洛芬或其钠盐中有关物质的检测方法，此发明的有关物质是降解杂质DP-3，所述方法为液相色谱法，利用此方法能实现对杂质DP-3的有效检测。但此方法不适用于控制限度极低(7.3ppm)的遗传毒性杂质检测,因此，研发出一种能够有效检测出遗传毒性杂质A和B，且符合操作简单、试剂易得、重现性、线性和回收率好，环境污染小的方法非常有意义。
遗传毒性杂质的化学结构如下：
杂质名称 杂质A 杂质B
化学名称 2-(4-溴甲基苯基)丙酸 2-(4-氯甲基苯基)丙酸
化学结构式
分子式 C10H11BrO2 C10H11ClO2
分子量 243.10 198.65
化学文摘号 111128-12-2 80530-55-8
目前，国内外文献尚未见到洛索洛芬或其钠盐中遗传毒性杂质检测方法报道。
发明内容
本申请的主要目的是提供一种洛索洛芬或其钠盐中遗传毒性杂质的检测方法。
本发明所检测的遗传毒性杂质是洛索洛芬生产工艺过程产生的杂质，其在原料药和制剂中普遍存在，但因其含量小于0.10％且此前未列入遗传毒性杂质而未受关注，为安全用药带来潜在风险，因此，使得检测出这种杂质的意义很大。
洛索洛芬或其钠盐中遗传毒性杂质包括杂质A和杂质B，杂质A和杂质B的化学结构如下：
(杂质A)， (杂质B)
因杂质A为溴代物，活性高于杂质B，故在整个分析过程中，采用杂质A作为对照，检测结果为杂质A和杂质B的总量。但现有的HPLC的检测方法无法达到ppm痕量的检测限，本发明通过加入衍生剂使杂质A/B均转化为衍生物，通过检测衍生物的含量，确定产品中含杂质A/B的总量。在HPLC的检测方法中常有加入衍生剂辅助检测的，衍生剂的种类繁多，本发明通过大量实验发现哌啶可作为杂质A和杂质B的衍生剂，其衍生原理如下：
反应机理：
本发明采用如下技术方案实现本发明目的：
一种洛索洛芬或其钠盐中遗传毒性杂质A和B的检测方法，包括如下步骤：
1)制备衍生剂：取哌啶至容量瓶中，用DMSO稀释至刻度，摇匀作为衍生剂；
2)制备供试品溶液：另取洛索洛芬钠原料用DMSO溶解，加入衍生剂，摇匀，作为供试品溶液；
3)制备照品溶液：另取杂质A加DMSO使溶解并稀释至刻度加入衍生剂，摇匀,作为对照品溶液；
4)检测过程：依次将空白溶液、对照品溶液、供试品溶液注入LC-MS系统，记录对照品溶液主峰峰面积、供试品溶液中与对照品溶液保留时间一致的峰面积(At)，采用外标法计算供试品中的杂质A/B的含量。
在一些实施例中，对照品溶液检测3次，对照品溶液主峰峰面积分别为As1、As2、As3，平均值为As；
在一些实施例中，所述LC-MS系统的色谱条件如下，色谱柱选自Waters X-BridgeTMC18，流动相由C相和D相组成，C相为乙腈；D相为0.2％甲酸水溶液；采用梯度洗脱，梯度洗脱程序为：以体积比计，0至9分钟，流动相C为10％，流动相D为90％；10至14分钟，流动相C相为90％，流动相D相为10％。
或者表示为如下表所示形式:
梯度洗脱程序如下：
Figure BDA0002267144930000031
Figure BDA0002267144930000041
本发明的质谱条件如下：离子源为API-ES，离子模式为正离子
离子源 API-ES 离子源温度 N/A
离子模式 正离子 干燥气温度 350℃
干燥气流速 12L/min 雾化器压力 2329Torr
毛细管电压 3500V(±) 扫描模式：SIM m/z＝248
碰撞诱导解离 70 增益因子 1.00
溶剂延迟 4min MS停止时间 9min
本发明取得如下有益效果：本发明通过选取特定的衍生剂将供试品衍生化后，采用LC-MS方法，在本发明开发的色谱和质谱条件下，实现洛索洛芬或其钠盐中遗传毒性杂质的有效检测，该方法的准确度、精密度、重现性均符合要求。能降低遗传毒性杂质对人体的危害，为安全用药提供保障。首次采用高效液相色谱质谱连用技术检测出洛索洛芬或其钠盐中遗传毒性杂质A和B，检测限达到7.3ppm。
附图说明
图1是本发明实施例对照品溶液离子色谱图；
图2是本发明实施例供试品溶液的离子色谱图。
具体实施方式:
为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面进一步披露一些非限制实施例对本发明作进一步的详细说明。
实施例1
洛索洛芬或其钠盐中遗传毒性杂质A和B的检测方法，包括如下步骤：
1.1仪器、试剂、对照品及供试品
仪器：十万分之一电子天平，液相-质谱联用仪(LC-MS)；
试剂：乙腈(HPLC)、甲酸(色谱纯)、超纯水(电阻率≥18.2MΩ)、杂质A(AR)、哌啶(AR)；
供试品：洛索洛芬钠(批号：181101)
1.2溶液配制
(1)衍生剂：取1.0ml哌啶至100ml容量瓶中，用DMSO稀释至刻度，摇匀即得；
(2)空白溶液：取1.0mlDMSO至5mlEP管中，加入1.0ml衍生剂，摇匀即得；
(3)对照品母液：取杂质A约36.5mg(Ws)至50ml容量瓶中，加DMSO适量使溶解并稀释至刻度，摇匀；移取1.0ml至100ml容量瓶中，用DMSO稀释至刻度，摇匀；移取1.0ml至50ml容量瓶中，用DMSO稀释至刻度，摇匀，取1.0ml至5mlEP管中，加入1.0ml衍生剂，摇匀即得；
(4)供试品溶液：取供试品约20mg(Wt)，精密称定，至5mlEP管中，加入1.0mlDMSO，溶解，再加入1.0ml衍生剂，摇匀即得；
(5)依次将空白溶液、对照品溶液(3次)、供试品溶液注入LC-MS系统，记录对照品溶液主峰峰面积(As1、As2、As3，平均值为As)、供试品溶液中与对照品溶液保留时间保留时间一致的峰面积(At)，采用外标法计算供试品中的杂质A/B的含量。
采用液相色谱质谱联用技术，色谱条件如下，色谱柱选自Waters X-Bridge TMC18，流动相由C相和D相组成，C相为乙腈；D相为0.2％甲酸水溶液；采用梯度洗脱，梯度洗脱程序为：以体积比计，0至9分钟，流动相C为10％，流动相D为90％；10至14分钟，流动相C相为90％，流动相D相为10％。
或者表示为如下表所示形式:
梯度洗脱程序如下：
Figure BDA0002267144930000061
本发明的质谱条件如下：离子源为API-ES，离子模式为正离子
离子源 API-ES 离子源温度 N/A
离子模式 正离子 干燥气温度 350℃
干燥气流速 12L/min 雾化器压力 2329Torr
毛细管电压 3500V(±) 扫描模式：SIM m/z＝248
碰撞诱导解离 70 增益因子 1.00
溶剂延迟 4min MS停止时间 9min
1.3测定结果计算
将色谱数据代入计算公式如下:
Figure BDA0002267144930000062
St:供试品中杂质A/B总含量(ppm)
At:供试品溶液中与对照品溶液保留时间一致的峰面积
As：对照品溶液主峰峰面积(3次平均值)
Ws:供试品洛索洛芬钠的称样量(mg)
Wt:对照品杂质A的称样量(mg)
Figure BDA0002267144930000071
采用本发明的方法可以检测出洛索洛芬或其钠盐中遗传毒性杂质A和B的含量，本发明实施例表明本批次的洛索洛芬钠原料药中含851ppm遗传毒性杂质A和B。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (4)

1.一种洛索洛芬或其钠盐中遗传毒性杂质A和B的检测方法，包括如下步骤：
Figure FDA0002267144920000011
1)制备衍生剂：取哌啶至容量瓶中，用DMSO稀释至刻度，摇匀作为衍生剂；
2)制备供试品溶液：另取洛索洛芬钠原料用DMSO溶解，加入衍生剂，摇匀，作为供试品溶液；
3)制备对照品溶液：另取杂质A加DMSO使溶解并稀释至刻度加入衍生剂，摇匀,作为对照品溶液；
4)检测过程：依次将空白溶液、对照品溶液、供试品溶液注入LC-MS系统，记录对照品溶液主峰峰面积、供试品溶液中与对照品溶液保留时间一致的峰面积，采用外标法计算供试品中的杂质A/B的含量。
2.如权利要求1所述洛索洛芬或其钠盐中遗传毒性杂质A和B的检测方法，其特征在于所述LC-MS系统的色谱条件如下，色谱柱选自Waters X-BridgeTM C18，流动相由C相和D相组成，C相为乙腈；D相为0.2％甲酸水溶液。
3.如权利要求2所述洛索洛芬或其钠盐中遗传毒性杂质A和B的检测方法，其特征在于所述流动相采用梯度洗脱，梯度洗脱程序为：以体积比计，0至9分钟，流动相C为10％，流动相D为90％；10至14分钟，流动相C相为90％，流动相D相为10％。
4.如权利要求1所述洛索洛芬或其钠盐中遗传毒性杂质A和B的检测方法，其特征在于所述LC-MS系统的质谱条件如下：离子源为API-ES，离子模式为正离子，干燥气流速12L/min。
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《简明化学试剂手册》编写组: "《简明化学试剂手册》", 31 January 1991 *

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