CN110208430B - 一种药物中残留环氧氯丙烷的检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种药物中残留环氧氯丙烷的检测方法，所述的检测方法采用顶空气相色谱法，药物的稀释剂为苯氧乙醇。采用该检测方法可以有效地检测药物例如奥硝唑、或左奥硝唑中可能存在环氧氯丙烷的残留情况。

Description

一种药物中残留环氧氯丙烷的检测方法

技术领域

本发明属于药物分析技术领域，更具体地说，涉及一种药物中残留环氧氯丙烷的检测方法。

背景技术

左奥硝唑，化学名为：S-(-)-(3-氯-2-羟基丙基)-2-甲基-5-硝基咪唑，化合物结构为：

目前，在国内以左奥硝唑为活性成分上市销售的制剂仅有左奥硝唑氯化钠注射液，该药属硝基咪唑衍生物类抗厌氧菌药，为奥硝唑的左旋体。临床试验结果表明，左奥硝唑氯化钠注射液与奥硝唑氯化钠注射液相比，在减少头晕、嗜睡不良反应发生率方面，具有临床统计学意义。

S-环氧氯丙烷是合成左奥硝唑的起始原料，具有遗传毒性警示结构，一定剂量的环氧氯丙烷对小鼠、大鼠致癌致畸，对DNA一定程度的诱变作用，AMS试验呈阳性，ICH M7分类为1类基因毒性杂质，可能成为引发癌症的诱因，因此，能够检测左奥硝唑氯化钠注射液中活性成分中残留环氧氯丙烷的方法对于控制临床用药的安全性具有非常重要的意义。

S-(-)环氧氯丙烷与R-(+)环氧氯丙烷是基础化工原料，广泛应用于药物原料制备合成中。其作为潜在的代谢调节剂，用以合成脂肪酸氧化抑制剂；用于Macquarimicins的全合成和大环内酯RK-397的全合成；用于对映选择性合成羟基异噁唑烷和(+)-顺式-sylvaticin(一种有潜力的抗肿瘤剂)的手性结构单元；药物例如抗感染类药物(左奥硝唑、奥硝唑)、前体4-氯-3-羟基丁酸酯(阿伐他汀)、β-肾上腺素拮抗剂(阿替洛尔)、左旋肉碱、反射致敏剂类药物(血管发生抑制剂39a～39c)、其它药物(麻醉剂巴氯芳)等(“手性环氧氯丙烷的制备及其药物应用”，《有机化学》2009年第29卷第8期，p1209-1216)在合成中均涉及S-(-)环氧氯丙烷或R-(+)环氧氯丙烷的使用。

发明内容

本发明提供了一种药物中残留环氧氯丙烷的检测方法，所述的检测方法采用顶空气相色谱法，药物的稀释剂为苯氧乙醇。该检测方法可以客观、全面、准确的评价左奥硝唑的质量，对控制左奥硝唑氯化钠注射剂活性成分左奥硝唑的质量和临床用药安全性具有重要意义。

本发明提供了一种药物中残留环氧氯丙烷的检测方法，所述的检测方法采用顶空气相色谱法，药物的稀释剂为苯氧乙醇。

本发明提供了一种药物中残留环氧氯丙烷的检测方法，所述的检测方法采用顶空气相色谱法，并按照如下检测条件和操作进行检测：

检测条件包括：

色谱柱：以硝基对苯二酸改性的聚乙二醇为固定液的毛细管柱(DB-FFAP 30m×0.53mm×1.5μm)

载气：氮气

载气流速：3ml/min～5ml/min，优选地，每分钟4.0ml

检测器：氢火焰离子化检测器(FID)

检测器温度：250℃～300℃，优选地，280℃

进样口温度：210℃～280℃，优选地，230℃

柱温：起始温度为80℃，维持3分钟，以每分钟12℃的速率升至160℃，维持0分钟，然后以每分钟30℃的速率升至220℃，维持10分钟；

顶空条件：顶空瓶平衡温度为135℃，定量环温度为140℃，传输线温度为145℃，平衡时间为20分钟，进样持续时间1.0分钟；

取所述药品，用苯氧乙醇溶解，作为供试品溶液；取环氧氯丙烷，用苯氧乙醇溶解，作为对照品溶液；

取对照品溶液进样，记录色谱图；再取供试品溶液和对照品溶液进样，记录色谱图。

在本发明的一些实施方案中，所述检测条件包括：

色谱柱：DB-FFAP 30m×0.53mm×1.5μm

载气：高纯氮气

载气流速：每分钟4.0ml

检测器：氢火焰离子化检测器(FID)

检测器温度：280℃

进样口温度：230℃

柱温：起始温度为80℃，维持3分钟，以每分钟12℃的速率升至160℃，维持0分钟，然后以每分钟30℃的速率升至220℃，维持10分钟；

顶空条件：顶空瓶平衡温度为135℃，定量环温度为140℃，传输线温度为145℃，平衡时间为20分钟，进样持续时间1.0分钟；

(1)供试品溶液配制：取所述药品约0.6g，精密称定，置20ml顶空瓶中，精密加入苯氧乙醇2.0ml，再精密量取水0.1ml，密封压盖，摇匀，作为供试品溶液；

(2)对照品溶液的配制：取环氧氯丙烷适量，精密称定，加苯氧乙醇溶解并定量稀释制成每1ml中约含环氧氯丙烷0.591μg的溶液，精密的量取2.0ml和水0.1ml，置20ml的顶空瓶中，密封压盖，摇匀，作为对照品溶液；

(3)取对照品溶液进样，记录色谱图；再取供试品溶液和对照品溶液进样，记录色谱图。

在本发明的一些实施方案中，所述的药物为奥硝唑或左奥硝唑、利伐沙班、阿伐他汀、阿替洛尔、或者左旋肉碱等。优选地，为左奥硝唑原料药、或者奥硝唑原料药。

在本发明的一些实施方案中，所述的环氧氯丙烷为R-环氧氯丙烷、S-环氧氯丙烷或(±)-环氧氯丙烷。

在本发明的一些实施方案中，所述的溶液配制：取奥硝唑约0.6g，精密称定，置20ml顶空瓶中，精密加入苯氧乙醇2.0ml，再精密量取水0.1ml，密封压盖，摇匀，作为供试品溶液。

在本发明的一些实施方案中，其中对照品溶液的配制为：取环氧氯丙烷适量，精密称定，加苯氧乙醇溶解并定量稀释制成每1ml中约含环氧氯丙烷0.591μg的溶液，精密的量取2.0ml和水0.1ml，置20ml的顶空瓶中，密封压盖，摇匀，作为对照品溶液。

在本发明的一些实施方案中，所述的气相色谱仪为安捷伦7890型气相色谱仪、7697A型顶空自动进样器。

在本发明的一些实施方案中，所述气相色谱法应用分流进样，分流比优选地为2:1。

在本发明的一些实施方案中，所述的色谱柱为以硝基对苯二酸改性的聚乙二醇为固定液的毛细管柱(DB-FFAP毛细管柱)。

在本发明的优选实施方案中，本发明提供了一种奥硝唑中残留氯丙烯化合物的检测方法，所述的检测方法采用顶空气相色谱法，并按照如下检测条件和操作进行检测：

色谱条件

色谱柱：以硝基对苯二酸改性的聚乙二醇为固定液的毛细管柱(DB-FFAP 30m×0.53mm×1.5μm)；

载气：高纯氮气；

载气流速：每分钟4.0ml，分流进样，分流比2:1；

检测器：氢火焰离子化检测器(FID)；

检测器温度：280℃；

进样口温度：230℃；

柱温：起始温度为80℃，维持3分钟，以每分钟12℃的速率升至160℃，维持0分钟，然后以每分钟30℃的速率升至220℃，维持10分钟；

顶空条件：顶空瓶平衡温度为135℃，定量环温度为140℃，传输线温度为145℃，平衡时间为20分钟，进样持续时间1.0分钟

(1)奥硝唑供试品溶液配制：取奥硝唑约0.6g，精密称定，置20ml顶空瓶中，精密加入苯氧乙醇2.0ml，再精密量取水0.1ml，密封压盖，摇匀，作为供试品溶液；

(2)对照品溶液的配制：取环氧氯丙烷适量，精密称定，加苯氧乙醇溶解并定量稀释制成每1ml中约含环氧氯丙烷0.591μg的溶液，精密的量取2.0ml和水0.1ml，置20ml的顶空瓶中，密封压盖，摇匀，作为对照品溶液；

(3)取对照品溶液进样，记录色谱图；再取供试品溶液和对照品溶液进样，记录色谱图；

而且，取对照品溶液进样，记录色谱图，各成分峰之间的分离度应符合规定，理论塔板数应大于5000，再取供试品溶液和对照品溶液进样，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，环氧氯丙烷不得过0.000197％。

在本发明的优选实施方案中，所述奥硝唑可以是左奥硝唑。

环氧氯丙烷的沸点为117.9℃，为了严格控制好左奥硝唑的质量，能高效的检测左奥硝唑氯化钠注射液活性成分左奥硝唑中环氧氯丙烷的残留量，本发明经过大量实验对进样方式、检测器类型、稀释溶剂、加样体积、顶空条件及色谱柱进行对比：

1.本发明对进样方式分别考察了顶空进样和直接进样两种方式。结果表明，顶空进样时的响应显著较大，灵敏度满足测定。

2.本发明对检测器进行了筛选，分别考察氢火焰离子化检测器(FID)和电子捕获检测器(ECD)。结果表明，环氧氯丙烷在氢火焰离子化检测器(FID)上灵敏度较高。因此，选择氢火焰离子化检测器(FID)。

3.本发明对稀释溶剂分别考察了N,N-二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮、苯氧乙醇。结果表明，以苯氧乙醇做溶剂时响应最大，并且没有溶剂杂质存在的干扰。

4.本发明对加样体积分别考察了加样体积为1.0ml、2.0ml、3.0ml、5.0ml。结果表明，随着加样体积的增长，峰面积及峰高有较小的增大。为增大灵敏度，考虑到环氧氯丙烷的疏水性，由于苯氧乙醇与水不能混溶，在配制对照时，分别精密量取2.0ml限度对照溶液至20ml顶空瓶，再加100μl水。

5.本发明对顶空条件进行了筛选，分别考察了平衡温度分别为120℃～150℃，平衡时间15～30分钟。结果表明，平衡时间15-25分钟范围内，环氧氯丙烷峰面积基本持平，从30min开始峰面积有所减小，说明平衡时间过长，顶空瓶气密性能下降。炉温110℃～150℃范围内，峰面积响应不断增大。因此，选择平衡时间20分钟，平衡温度135℃。

6.本发明对色谱柱分别考察了DB-624柱(60m×0.53mm×3.0μm)、HP-INNOWAX柱(60m×0.32mm×0.5μm)、DB-FFAP柱(30m×0.53mm×1.5μm)色谱柱。结果表明，以安捷伦DB-FFAP柱(30m×0.53mm×1.5μm)的灵敏度、拖尾因子符合要求。因此，本发明以安捷伦DB-FFAP柱(30m×0.53mm×1.5μm)作为分析柱。

有益效果：本发明提供的左奥硝唑中环氧氯丙烷的质量控制方法具有以下优点：

本发明根据左奥硝唑中杂质成分的结构性质特点，通过大量实验筛选出最佳的进样方式、检测器类型、稀释溶剂、加样体积、顶空条件、色谱柱等分析条件，经多次实验验证表明，本发明提供的左奥硝唑中环氧氯丙烷的质量控制方法的稳定性好、对各分析成分的分离度好，可以灵敏准确的定量检测分析各化合物。因此，本发明提供的左奥硝唑中环氧氯丙烷的质量控制方法可以客观、全面、准确的评价左奥硝唑氯化钠注射剂的活性成分左奥硝唑的质量，对控制左奥硝唑的质量和保证临床用药安全具有重要意义。

附图说明

图1为实施例1的环氧氯丙烷对照品的气相色谱检测分析图。

图2为实施例1的左奥硝唑样品的气相色谱检测分析图。

图3为实施例1的左奥硝唑样品加标的气相色谱检测分析图。

具体实施方式

下面通过具体的实施例来进一步说明本发明的实施方案。在本发明的教导下，本领域技术人员可以采用等同替换等方式进行改进，仍属于本发明保护范围。

实施例1

下面结合具体实施例进一步阐明本发明，应理解这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，在阅读了本发明之后，本领域技术人员对本发明的各种等价形式的修改均落于本申请所附权利要求所限定的范围。

实施例1

左奥硝唑中环氧氯丙烷的质量控制方法，包括以下步骤：

(1)左奥硝唑样品溶液配制：取由江苏云阳集团药业有限公司生产的左奥硝唑5批(YF02-FP-01批、YF02-FP-02批、YF02-FP-03批、YF02-FP-04批、YF02-FP-05批)约0.6g，精密称定，置20ml顶空瓶中，精密加入苯氧乙醇2.0ml，再精密量取水0.1ml，密封压盖，摇匀，作为供试品溶液。

(2)对照品溶液的配制：取环氧氯丙烷适量，精密称定，加苯氧乙醇溶解并定量稀释制成每1ml中约含环氧氯丙烷0.591μg的溶液，精密的量取2.0ml和水0.1ml，置20ml的顶空瓶中，密封压盖，摇匀，作为对照品溶液。

(3)供试品加标溶液的配制：取左奥硝唑约0.6g，精密称定，置20ml顶空瓶中，加入限量对照溶液2.0ml，再精密量取0.1ml水，密封压盖，作为样品加标溶液。

(4)取对照品溶液进样，记录色谱图；再取供试品溶液、供试品加标溶液和对照品溶液进样，记录色谱图(对照品如图1，供试品如图2，供试品加标的如图3)。色谱条件：色谱柱：以硝基对苯二酸改性的聚乙二醇为固定液的毛细管柱(DB-FFAP 30m×0.53mm×1.5μm)；载气：高纯氮气；载气流速：每分钟4.0ml，分流进样，分流比2:1；检测器：氢火焰离子化检测器(FID)；检测器温度：280℃；进样口温度：230℃；柱温：起始温度为80℃，维持3分钟，以每分钟12℃的速率升至160℃，维持0分钟，然后以每分钟30℃的速率升至220℃，维持10分钟；顶空条件：顶空瓶平衡温度为135℃，定量环温度为140℃，传输线温度为145℃，平衡时间为20分钟，进样持续时间1.0分钟。

实验结果表明，本发明提供的检测方法，目标物具有较好的分离度、精密度、稳定性、准确度，本发明提供的检测方法，可以检测到左奥硝唑环氧氯丙烷，且本发明配制的左奥硝唑样品中，杂质环氧氯丙烷检出量均小于0.000197％，也表明本发明样品的质量可靠性，临床用药安全可控。

通过以上分析，各化合物的精密度、灵敏度。因此本发明提供的分析方法，准确可靠，可以灵敏准确的定性、定量检测左奥硝唑，为左奥硝唑的质量控制提供科学依据。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (9)

1.一种药物中残留环氧氯丙烷的检测方法，其特征在于：所述的检测方法采用顶空气相色谱法，并按照如下检测条件和操作进行检测：

检测条件包括：

色谱柱：以硝基对苯二酸改性的聚乙二醇为固定液的毛细管柱DB-FFAP

载气：氮气

载气流速：3ml/min～5ml/min

检测器：氢火焰离子化检测器

检测器温度：250～300℃

进样口温度：210～280℃

顶空条件：顶空瓶平衡温度为135℃，定量环温度为140℃，传输线温度为145℃，平衡时间为20分钟，进样持续时间1.0分钟；

柱温：起始温度为80℃，维持3分钟，以每分钟12℃的速率升至160℃，维持0分钟，然后以每分钟30℃的速率升至220℃，维持10分钟；

取所述药物，用苯氧乙醇溶解，作为供试品溶液；取环氧氯丙烷，用苯氧乙醇溶解，作为对照品溶液；

取对照品溶液进样，记录色谱图；再取供试品溶液和对照品溶液进样，记录色谱图。

2.如权利要求1所述的检测方法，其中，所述供试品溶液的配制为：取药物约0.6g，精密称定，置20ml顶空瓶中，精密加入苯氧乙醇2.0ml，再精密量取水0.1ml，密封压盖，摇匀，作为供试品溶液。

3.如权利要求1所述的检测方法，其中，所述对照品溶液的配制为：取环氧氯丙烷适量，精密称定，加苯氧乙醇溶解并定量稀释制成每1ml中含环氧氯丙烷0.591μg的溶液，精密的量取2.0ml和水0.1ml，置20ml的顶空瓶中，密封压盖，摇匀，作为对照品溶液。

4.如权利要求1至3中任一项所述的检测方法，其中，所述的药物为奥硝唑、左奥硝唑、利伐沙班、阿伐他汀、阿替洛尔或者左旋肉碱。

5.如权利要求4所述的检测方法，其中，所述的药物为奥硝唑原料药或者左奥硝唑原料药。

6.如权利要求1至3中任一项所述的检测方法，其中，所述顶空气相色谱法应用分流进样。

7.如权利要求6所述的检测方法，其中，所述分流进样的分流比为2:1。

8.一种奥硝唑中残留环氧氯丙烷化合物的检测方法，所述的检测方法采用顶空气相色谱法，并按照如下检测条件和操作进行检测：

取奥硝唑约0.6g，精密称定，置20ml顶空瓶中，精密加入苯氧乙醇2.0ml，再精密量取水0.1ml，密封压盖，摇匀，作为供试品溶液；另取环氧氯丙烷适量，精密称定，加苯氧乙醇溶解并定量稀释制成每1ml中含环氧氯丙烷0.591μg的溶液，精密的量取2.0ml和水0.1ml，置20ml的顶空瓶中，密封压盖，摇匀，作为对照品溶液；

以硝基对苯二酸改性的聚乙二醇为固定液的毛细管柱DB-FFAP30m×0.53mm×1.5μm为色谱柱，起始温度为80℃，维持3分钟，以每分钟12℃的速率升至160℃，维持0分钟，然后以每分钟30℃的速率升至220℃，维持10分钟；进样口温度为230℃；氢火焰离子化检测器，检测器温度为280℃，载气为高纯氮气，流速每分钟4.0ml，分流比2:1；

顶空瓶平衡温度为135℃，定量环温度为140℃，传输线温度为145℃，平衡时间为20分钟，进样持续时间1.0分钟；

取对照品溶液进样，记录色谱图，各成分峰之间的分离度应符合规定，理论塔板数应大于5000，再取供试品溶液和对照品溶液进样，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，环氧氯丙烷不得过0.000197％。

9.如权利要求8所述的检测方法，其中，所述奥硝唑是左奥硝唑。

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