CN115232202A - 伏马毒素人工抗原及其制备方法与应用 - Google Patents
伏马毒素人工抗原及其制备方法与应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN115232202A CN115232202A CN202210952471.7A CN202210952471A CN115232202A CN 115232202 A CN115232202 A CN 115232202A CN 202210952471 A CN202210952471 A CN 202210952471A CN 115232202 A CN115232202 A CN 115232202A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- fumonisin
- artificial antigen
- solution
- buffer solution
- reaction membrane
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 239000003008 fumonisin Substances 0.000 title claims abstract description 102
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title claims abstract description 57
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title claims abstract description 57
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title claims abstract description 57
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 23
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 40
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 39
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims abstract description 33
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 claims abstract description 26
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 claims abstract description 26
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims abstract description 11
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 9
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 claims abstract description 7
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 claims abstract description 7
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 claims abstract description 6
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims abstract description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 54
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 40
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 37
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 25
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 18
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 claims description 18
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 claims description 18
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 17
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 claims description 15
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 claims description 13
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 claims description 10
- 238000000576 coating method Methods 0.000 claims description 10
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 9
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 8
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 8
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 8
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 8
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 8
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 7
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims description 7
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 claims description 6
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 claims description 6
- 229920002538 Polyethylene Glycol 20000 Polymers 0.000 claims description 5
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 108060003552 hemocyanin Proteins 0.000 claims description 5
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims description 4
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 claims description 3
- 239000012496 blank sample Substances 0.000 claims description 3
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 claims description 3
- 238000011068 loading method Methods 0.000 claims description 3
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 claims description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 3
- 238000002791 soaking Methods 0.000 claims description 3
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 2
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 claims description 2
- 241001529936 Murinae Species 0.000 claims description 2
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 claims description 2
- 229940092253 ovalbumin Drugs 0.000 claims description 2
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 abstract description 3
- 238000005580 one pot reaction Methods 0.000 abstract description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 20
- 238000003317 immunochromatography Methods 0.000 description 12
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 11
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 10
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 9
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 6
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 5
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 5
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 4
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 3
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 3
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 3
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 description 3
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 2
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 2
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 2
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 2
- 238000005251 capillar electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 231100000357 carcinogen Toxicity 0.000 description 2
- 239000003183 carcinogenic agent Substances 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 2
- 239000000385 dialysis solution Substances 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 238000002290 gas chromatography-mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 238000004895 liquid chromatography mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 2
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 2
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 2
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000031295 Animal disease Diseases 0.000 description 1
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 101100406366 Caenorhabditis elegans pad-2 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000003643 Callosities Diseases 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 1
- 208000000461 Esophageal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241000233732 Fusarium verticillioides Species 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 206010020649 Hyperkeratosis Diseases 0.000 description 1
- 231100000678 Mycotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 206010030155 Oesophageal carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 231100000766 Possible carcinogen Toxicity 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 206010037423 Pulmonary oedema Diseases 0.000 description 1
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 1
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 1
- MUUGCDGGIVCSDT-UHFFFAOYSA-N [NH4+].[NH4+].[O-]S([O-])(=O)=O.CCCCCCCC(O)=O Chemical compound [NH4+].[NH4+].[O-]S([O-])(=O)=O.CCCCCCCC(O)=O MUUGCDGGIVCSDT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 238000003453 ammonium sulfate precipitation method Methods 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000000711 cancerogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003965 capillary gas chromatography Methods 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 231100000315 carcinogenic Toxicity 0.000 description 1
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001066 destructive effect Effects 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 238000003113 dilution method Methods 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 230000001804 emulsifying effect Effects 0.000 description 1
- 201000004101 esophageal cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000004817 gas chromatography Methods 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 239000002636 mycotoxin Substances 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 208000005333 pulmonary edema Diseases 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 238000007086 side reaction Methods 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 239000012089 stop solution Substances 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000009461 vacuum packaging Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/76—Albumins
- C07K14/765—Serum albumin, e.g. HSA
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/107—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length by chemical modification of precursor peptides
- C07K1/1072—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length by chemical modification of precursor peptides by covalent attachment of residues or functional groups
- C07K1/1077—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length by chemical modification of precursor peptides by covalent attachment of residues or functional groups by covalent attachment of residues other than amino acids or peptide residues, e.g. sugars, polyols, fatty acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/76—Albumins
- C07K14/77—Ovalbumin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/795—Porphyrin- or corrin-ring-containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/44—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material not provided for elsewhere, e.g. haptens, metals, DNA, RNA, amino acids
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/5308—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for analytes not provided for elsewhere, e.g. nucleic acids, uric acid, worms, mites
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/558—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor using diffusion or migration of antigen or antibody
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/577—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor involving monoclonal antibodies binding reaction mechanisms characterised by the use of monoclonal antibodies; monoclonal antibodies per se are classified with their corresponding antigens
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
- G01N33/582—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with fluorescent label
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明公开了一种伏马毒素人工抗原及其制备方法与应用，旨在提供一种制备简单、避免使用有机溶液、一步反应可实现、同时小分子与载体蛋白通过稳定的酰胺键连接、提高了抗原免疫原性的伏马毒素人工抗原及其制备方法，其技术方案：1）将载体蛋白采用EDC和NHS活化，制备载体蛋白活化酯溶液；2）将伏马毒素溶于甲醇缓冲溶液中，形成小分子溶液；3）将步骤2）制备的小分子溶液加至载体蛋白活化酯溶液中，室温下搅拌16～24h；4）反应结束后室温透析，去除未反应的小分子物质，即可得到所述的伏马毒素人工抗原；属于免疫化学技术领域。
Description
技术领域
本发明属于免疫化学技术领域，更具体地说，涉及伏马毒素人工抗原，本发明还是涉及该抗原的制备方法与应用。
背景技术
伏马菌素(fumonisin)主要是由串珠镰刀菌属产生的一类有毒害和致癌性的真菌毒素，主要污染玉米、小麦、稻米等粮食作物及其制品，伏马毒素为自然产生，食用含有伏马毒素的食品后可引起人类或动物的脑白质软化症、肺水肿症候群以及人类食道癌等人畜疾病有关。另外，伏马毒素还是一种慢性促癌剂，能引起灵长类动物的动脉粥样硬化样改变。国际癌症研究中心(IARC）将伏马毒素列为2B 类致癌物质(即人类可能致癌物），并对其在饲料及食品中含量做了限量(1～3 mg/kg)规定。
国内外已建立了多种伏马毒素的检测方法，已经应用的有高效液相色谱（HPLC）、毛细管气相色谱法（GC）、毛细管电泳技术（CE）、液质联用（LC/MS）、气质联用（GC/ MS）及酶联免疫吸附检测（ELISA）等方法。其中高效液相色谱法（HPLC），灵敏度高，在全球范围内的玉米及其制品的调查中，90% 以上的实验室用的都是HPLC 法，其检测限可以达到 0.05～0.1 mg/kg。但是，该法需要对检测样品进行严格的预处理，仪器化程度高且价格昂贵，分析速度慢，同时要求有专业的操作人员，不利于在基层推广使用及大量样本筛选。
免疫学技术具有敏感、特异、简便的特点，近年来已被应用于伏马毒素的残留检测。而胶体金法虽然具备操作简单、检测时间短和无需专业技术人员操作等优点，但其灵敏度相对不足，加大了样本干扰，同时定量也相对较差。因此开发高灵敏、可定量、操作更加简便的检测方法并推广应用，具有十分重要的意义。
中国专利CN201210433003.5公开了 检测伏马毒素的ELISA试剂盒的制备及检测方法，其包括酶标板、伏马毒素标准品、伏马毒素抗体工作液、伏马毒素酶标二抗工作液、底物液A、底物液B、终止液和浓缩洗涤液，该检测方法特异性和灵敏性不够高，操作过程比较繁琐。
另外，伏马毒素人工抗原目前主要采用戊二醛法跟胺基偶联，但此法不可控，可能发生的副反应很多，可以形两个小分子间反应，两个载体蛋白间反应，可能会出现每次出来的结果不一样，所以此法重复性非常差。而本发明提供的合成方案，只有一种反应可能，那就是载体蛋白上面的羧基经活化后，只能单一的伏马毒素上的胺基反应生成稳定的酰胺键结构。
发明内容
针对上述问题，本发明的目的第一个目的是提供一种人工抗原操作简单，避免了有机溶液的使用，一步反应可实现，同时全抗原结构中完整地保留了小分子的结构，提高了抗原的免疫原性的伏马毒素人工抗原及其制备方法。
本发明的第二个目的是含上述伏马毒素抗原为免疫原，采用杂交瘤技术进行制备得到的单克隆抗体。
本发明的第三个目的是提供将伏马毒素人工抗原的应用。主要是用于时间分辨荧光定量免疫层析技术，可快速、便捷地实现伏马毒素的检测的试纸条以及制备方法。
为此，本发明提供的第一个技术方案是这样的：
一种伏马毒素人工抗原，所述人工抗原的结构如式Ⅰ所示：
其中，protein为蛋白质载体，n代表伏马毒素与蛋白质载体的连接数量，可能为10-40之间的任一数字。
进一步的，上述的伏马毒素人工抗原，所述蛋白质载体为牛血清白蛋白、卵清蛋白、人血清白蛋白或血蓝蛋白中的任意一种。
本发明提供的第二个技术方案是这样的：上述伏马毒素人工抗原的方法，依次包括下述步骤：
1）将载体蛋白采用EDC和NHS进行活化，制备载体蛋白活化酯溶液；
2）将伏马毒素溶于磷酸缓冲溶液中，形成小分子溶液；
3）再将步骤2）制备的小分子溶液加至载体蛋白活化酯溶液中，室温下搅拌16～24h；
4）带反应结束后室温透析，去除未反应的小分子物质，即可得到所述的伏马毒素人工抗原；
步骤3）所述的载体蛋白和伏马毒素质量比为30-150:30。
其合成路线如下：
进一步的，上述的伏马毒素人工抗原的制备方法，所述缓冲溶液为磷酸缓冲溶液；所述透析采用的透析液为磷酸缓冲溶液；所述透析采用的透析液为磷酸缓冲溶液，透析时间为3天，每天换3次透析液。
本发明还有一个技术方案是这样的：
一种伏马毒素单克隆抗体，以第一个技术方案所述的伏马毒素抗原为免疫原，采用杂交瘤技术进行制备得到的单克隆抗体。
第一个技术方案所述的伏马毒素人工抗原在制备伏马毒素时间分辨荧光免疫层析试纸条中的应用。
本发明还有一个技术方案，一种伏马毒素时间分辨荧光免疫层析试纸条，所述纸条中的反应膜包被有第一个技术方案所述的伏马毒素人工抗原和鼠IgG。
进一步的，上述的一种伏马毒素时间分辨荧光免疫层析试纸条，包括PVC板，所述的PVC板中部叠置包被有上述制备的伏马毒素人工抗原和鼠IgG的反应膜，两端分别叠置样品垫和吸水垫，所述的反应膜和吸水垫、样品垫相搭连，检测区靠近样品垫，质控区靠近吸水垫。
上述的伏马毒素时间分辨荧光免疫层析试纸条的制备方法，依次包括下述步骤：
1）制备包被有人工抗原和鼠IgG的反应膜
以NC膜为反应膜，将NC膜固定粘贴在PVC背衬的中间部位，将载体蛋白为牛血清白蛋白的伏马毒素人工抗原用包被缓冲液调节浓度至0.1~0.5mg/mL，并将鼠IgG用包被缓冲液也调节浓度至0.5~1mg/mL，按照 0.8~1.2µL/cm的膜液量，将抗原和鼠IgG划线到反应膜对应的检测区和质控区，检测区和质控区之间间隔为5 mm，放置 40~45℃烘箱处理48小时以，置于恒温恒湿保藏箱里备用，所用包被缓冲液为含有0.5% PEG20000、1%蔗糖、0.5%BSA、0.05%叠氮化钠的0.01 M PBS缓冲液；
2）制备样品垫
将裁剪好的空白样品垫浸泡在样品本处理液中，浸泡5 min后，取出在37℃干燥24h以上，置于恒温恒湿保藏箱里备用，所用样品垫处理液为含有0.05% 吐温20、1% 蔗糖、0.5% BSA、0.05%叠氮化钠的0.05M PBS缓冲液；
3）时间分辨荧光免疫层析试纸条的组装：
在PVC板背衬中部叠置步骤1）制得的反应膜，两端分别叠置步骤2）制得的样品垫和吸水垫，反应膜和吸水垫、样品垫相搭连，检测区靠近样品垫，质控区靠近吸水垫，得到试纸板，将试纸板切割成试纸条，将试纸条装载于试纸卡内，得时间分辨荧光免疫层析试纸条。
上述的伏马毒素时间分辨荧光免疫层析试纸条用于定量检测伏马毒素。
与现有技术相比，本发明提供的技术方案具有如下技术优点：
1、本发明合成的人工抗原操作简单，避免了有机溶液的使用，一步反应可实现，同时全抗原结构中完整地保留了小分子的结构，提高了抗原的免疫原性；
2、将伏马毒素人工抗原结合ELISA检测技术，对伏马毒素的IC50值可达88ng/ml；
3、将伏马毒素人工抗原用于时间分辨荧光定量免疫层析技术，可快速、便捷地实现伏马毒素的检测，本发明中制备的伏马毒素时间分辨荧光免疫层析试剂卡对伏马毒素的检测灵敏度可达34.27 ng/ml，另外该试纸条精密度高，且可在室温下稳定保存一年以上，可以满足市场在保存和运输过程中的要求。
附图说明
图1为时间分辨荧光免疫层析试纸条的性能评价标准曲线图；
图2是本发明提供的伏马毒素时间分辨荧光免疫层析试纸条检测原理示意图。
图中符合代表的组件及其类似组件如下：
PVC底板-1；样品垫-2、结合垫-3；反应膜-4；吸水纸垫-5；检测T线-T；质控C线-C。
具体实施方式
具体实施方式，对本发明的权利要求作进一步的详细说明，但不构成对本发明的任何限制，任何人在本发明权利要求范围之内所做的有限次的修改，仍在本发明的权利要求保护范围之内。
除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。
实施例1 载体蛋白为牛血清蛋白的伏马毒素人工抗原的合成方法如下：
载体蛋白为牛血清蛋白的伏马毒素人工抗原的合成方法如下：
（1）称取100 mg牛血清白蛋白（BSA），使其充分溶解在5 ml的超纯水中，加入35mgNHS，充分溶解后再分批加入60mg EDC（每次加入10mg，每次间隔时间为10-15min），并在常温下搅拌2h，形成载体蛋白活化酯溶液，
（2）取3 mg伏马毒素，使其充分溶解在0.5 ml浓度为0.05 mol/L的PBS溶液中，形成小分子溶液，在搅拌下加入0.5ml步骤（1）所述的载体蛋白活化溶液，并在室温下搅拌20h；
（3）步骤（2）制得的溶液用0.01 mol/L的 PBS 室温透析3天，每天换3次透析液，以除去未反应的小分子物质；
（4）分装，于4℃保存备用。
实施例2 载体蛋白为血蓝蛋白的伏马毒素人工抗原的合成方法如下：
（1）称取50 mg血蓝蛋白（KLH），使其充分溶解在2.5 ml的超纯水中，加入18mgNHS，充分溶解后再分批加入30mg EDC（每次加入5mg，每次间隔时间为10-15min），并在RT下搅拌2h，形成载体蛋白活化溶液，
（2）取3 mg伏马毒素，使其充分溶解在0.5 ml浓度为0.05 mol/L的PBS溶液中，形成小分子溶液，在搅拌下加入0.5ml步骤（1）所述的载体蛋白活化溶液，并在室温下搅拌16~24 h；
（3）步骤（2）制得的溶液用0.01 mol/L的 PBS 室温透析3天，每天换3次透析液，以除去未反应的小分子物质；
（4）分装，于4℃保存备用。
实施例3 伏马毒素单克隆抗体的制备
以实施例2制备的载体蛋白为血蓝蛋白的伏马毒素人工抗原为免疫原，与等体积弗氏佐剂乳化后，免疫BALB/C小鼠。每只鼠免疫剂量为50~100 µg，免疫间隔2周，免疫3次后，采小鼠尾部静脉血检测血清效价。如抗体效价不达要求，需加强免疫，待抗体效价不再升高后，以100 µg全抗原进行皮下加强免疫，5天后取小鼠脾细胞与SP20细胞融合。融合后的细胞在HAT培养基中筛选，5天后以完全培养基替换成HAT培养基进行培养。用ELISA对细胞上清进行检测，将检测结果为强阳性的孔内细胞进行有限稀释法克隆培养，经3次克隆培养检测后，均呈阳性的孔内细胞即为分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞。将杂交瘤细胞放大培养后，接种至小鼠腹腔，产生含抗体的腹水。用辛酸-硫酸铵沉淀法纯化腹水，即可得到高纯度、高特异性的单克隆抗体，用含0.05%叠氮钠，pH7.4的磷酸盐缓冲液，将单克隆抗体稀释至0.05 µg/ml，4℃保存。
实施例4 伏马毒素人工抗原在ELISA中的应用与效果评价
ELISA检测中使用的伏马毒素人工抗原的载体蛋白为牛血清白蛋白。
用pH9.6的碳酸盐缓冲液作包被稀释液，将伏马毒素人工抗原稀释至0.1 µg/ml，按100µL/孔加入聚苯乙烯微孔板中，4℃包被过夜，甩干，按250 µL/孔加入1%BSA，磷酸盐缓冲液中37℃封闭1 h，甩干，干燥后真空包装保存。
向包被有伏马毒素人工抗原的微孔酶标板中加入伏马毒素系列标准溶液20µL/孔，再加入浓度为0.05 µg/m的伏马毒素单克隆抗体溶液100 µL/孔，37℃反应0.5 h；甩干后，加入洗液300 µL/孔，洗涤3次后拍干；再加入酶标二抗100 µL/孔，37℃反应0.5 h；再次洗涤3次后拍干，分别加入50 µL/孔的显色液A和显色液B，37℃反应15 min；加入2 M 硫酸50µL/孔终止，设定酶标仪于450 nm波长测定每孔的OD值。结果如表1。
表1
通过表1数据，采用ELISA Calc软件进行四参数Logistic曲线拟合绘制标准曲线（如图1所示），伏马毒素的线性方程为：y =(A-D)/[1+(x/C)^B]+D，r2=0.997，A=2.40，B=0.89，C=73.46，D=0.20，x表示待测物浓度，y表示OD值，通过计算得到IC50值为88 ng/ml，在50~4050 ng/ml呈线性关系。
实施例5 时间分辨荧光免疫层析试纸条及其制备
本申请提供的时间分辨荧光免疫层析试纸条的制备方法如下：
1）制备包被有人工抗原和鼠IgG的反应膜：
以硝酸纤维素膜（NC膜）为反应膜，将NC膜固定粘贴在PVC背衬的中间部位，将载体蛋白为牛血清白蛋白的伏马毒素人工抗原用包被缓冲液调节浓度至0.1~0.5mg/mL，并将鼠IgG用包被缓冲液也调节浓度至0.5~1mg/mL，按照 0.8~1.2µL/cm的膜液量，将抗原和鼠IgG喷到反应膜对应的检测区和质控区，检测区和质控区之间间隔为5 mm，放置 40~45℃烘箱处理48小时以，置于恒温恒湿保藏箱里备用，所用包被缓冲液为含有0.5% PEG20000、1%蔗糖、0.5% BSA、0.05%叠氮化钠的0.01 M PBS缓冲液。
2）制备样品垫
将裁剪好的空白样品垫浸泡在样品本处理液中，浸泡5 min后，取出在37℃干燥24h以上，置于恒温恒湿保藏箱里备用，所用样品垫处理液为含有0.05% 吐温20、1% 蔗糖、0.5% BSA、0.05%叠氮化钠的0.05M PBS缓冲液。
3)时间分辨荧光免疫层析试纸条的组装：
在PVC板1背衬中部叠置步骤1)制得的反应膜3，两端分别叠置步骤2)制得的样品垫2和吸水垫5，反应膜3和吸水垫5、样品垫2相搭连，检测区靠近样品垫，质控区靠近吸 水垫，得到试纸板，将试纸板切割成试纸条，将试纸条装载于试纸卡内，得时间分辨荧光免 疫层析试纸条，如图2所示。
为了证明本申请提供的技术方案的技术优点，下面给出本申请提供的时间分辨荧光免疫层析试纸条性能评价、稳定性研究和精密度测试实验。
1、时间分辨荧光免疫层析试剂卡的性能评价
（1）时间分辨荧光微球标记的伏马毒素单克隆抗体的制备：取1L时间分辨荧光微球溶液（荧光微球固含量1%，即含微球5 mg），并经超声波处理；搅拌下分别加入10 mg NHS和5 mg DEC，控制微球溶液的温度为4~10℃，并在此温度下活化90 min；活化完后，反应液在10000 rpm下离心10 min，除去上清，该操作重复3次，最后一次离心，除上清后，加入1 mL0.01M的PBS缓冲液重悬微球；加入0.3 mg伏马毒素单克隆抗体，充分混匀后，在室温下搅拌8 h以上；偶联完成后，反应液在10000 rpm下离心10 min，除去上清，加入1 mL荧光缓冲液，超声重悬后，离心、除去上清，该操作重复3次，最后一次离心，除上清后，加入1 mL荧光缓冲液超声重悬荧光微球，2~8℃冰箱保存备用，所用荧光缓冲液为含有0.5% PEG20000、2%蔗糖、0.1%吐温20，0.5% BSA、0.05% 叠氮化钠的0.01 M PBS缓冲液。
（2）时间分辨荧光微球标记的伏马毒素单克隆抗体检测液的制备：将上述荧光微球标记的伏马毒素单克隆抗体取出放置至室温，用荧光缓冲液稀释100~1000倍成荧光微球标记的伏马毒素单克隆抗体检测液，荧光缓冲液为含有0.5% PEG20000、2% 蔗糖、0.1%吐温20，0.5% BSA、0.05% 叠氮化钠的0.01M PBS缓冲液，然后置于2~8℃冰箱保存备用。
（3）用0.01 M磷酸盐缓冲液PBS配备一系列不同浓度的伏马毒素的标准溶液，然后取上述制备的荧光微球标记的伏马毒素单克隆抗体检测液20 µL和100 µL配制好的系列标准品溶液混合1 min后，取80 µL滴加到时间分辨荧光免疫层析试剂卡上，15 min后，用荧光定量检测仪读取T/C的荧光信号值比值，检测试验设置3组重复。再通过系列标品浓度对应的T/C值建立四参数Logistic曲线，曲线所得的四个参数值录入荧光定量检测仪的标定软件，即可实现时间分辨荧光免疫层析试剂卡在荧光免疫层析分析仪上的快速定量检测，测点结果如表2所示。
表2
通过对不同伏马毒素浓度的T/C值进行了测定，并计算了B/B0（不同浓度的标准品测试卡T/C值与含量为0 ng/ml的标准品测试卡T/C值的比值），结果如上表所示。从表中可看出，当伏马毒素的含量为78.0 ng/ml时，其B/B0值为0.64，说明此浓度下检测的T/C值与含0 µg/L浓度的伏马毒素的时间分辨荧光免疫层析试剂卡的T/C值有明显差异。含量为0的标准品，测试20次，T/C均值为6.48，T/C标准差(SD）为0.51，T/C均值-2SD = 5.46,代入表2的标准曲线，得到浓度为34.27ng/ml，故时间分辨荧光免疫层析试剂卡对伏马毒素的检测灵敏度可达34.27ng/ml。
通过上表数据，采用ELISA Calc软件进行四参数Logistic曲线拟合绘制标准曲线（如下图2所示），所得曲线的线性方程为：y=(A-D)/[1+(x/C)^B]+D，r2=0.9996，A=5.32，B=-2.53，C=126.64，D=0.043，线性方程中x表示待测物浓度，y表示T/C值。在荧光免疫层析分析仪的定量曲线设置界面当中，分别将A、B、C、D的值录入时间分辨荧光免疫层析分析仪的标定软件，即可实现时间分辨荧光免疫层析试剂卡的快速定量检测。
2、时间分辨荧光免疫层析试剂卡的稳定性研究
时间分辨荧光免疫层析试剂卡保存的条件为室温，为了确保试纸条的稳定性，对试纸条进行了加速破坏性实验，分别在室温、45℃条件下连续放置60天，并在第3天，第6天，第15天，第30天和第60天分别检测含量为156 ng/ml的标准品的荧光信号值，T值为检测区荧光信号值，C值为质控区荧光信号值，试验设置3组重复，结果参见表4和表5。
表3
由上表可知，在常温和45℃下密封保存的时间分辨荧光免疫层析试剂卡60天后，T线、C线和T/C值均无明显变化，T值、C值、T/C值的变异系数（CV%）均小于6.5%，说明时间分辨荧光免疫层析试剂卡在加速实验45℃下最少可稳定保存60天。因此，时间分辨荧光免疫层析试剂卡可在室温下稳定保存一年以上，完全可以满足市场在保存和运输过程中的要求。
3、时间分辨荧光免疫层析试剂卡的精密度测试
以试纸条的检测区、质控区和T/C值的板内误差和板间误差来表示该方法的精密度，并分别以板内变异系数和板间变异系数来体现板内误差和板间误差；标准品选择检测156 ng/ml。板内变异系数的测定是对同一大板的10条时间分辨荧光免疫层析试剂卡的检测区和质控区信号值，以及T/C值的数据，并对这些数据进行离散程度分析。板间变异系数的测定是对不同大板的10条时间分辨荧光免疫层析试剂卡的检测区和质控区信号值，以及T/C值的数据，并对这些数据进行离散程度分析。按变异系数公式CV％=[标准偏差SD值/平均值]×100％即可分别计算出时间分辨荧光免疫层析试剂卡的板内变异系数和板间变异系数。
表4
由上表可知，通过同板内的10张时间分辨荧光免疫层析试剂卡的测试，检测区和质控区位置的荧光信号数值以及T/C值的范围分别为282367~312510，97862~108138和2.63~3.16。通过变异系数计算公式得出这10张时间分辨荧光免疫层析试剂卡的T值，C值和T/C值的板内变异系数分别为4.21%，4.48%和4.99%，说明试纸条的板内变异系数小，精密度高，可满足试纸条的定量的要求。
表5
由上表可知，通过对不同板内的10张时间分辨荧光免疫层析试剂卡的测试，检测区和质控区位置的荧光信号数值以及T/C值的范围分别为280503~311821，87875~98151和2.89~3.52。通过变异系数计算公式得出这10张试纸条的T值，C值和T/C值的板间变异系数分别为4.85%，4.96%和4.81%，说明试纸条的板间变异系数小，精密度高，可满足试纸条的定量的要求。
Claims (10)
1.一种伏马毒素人工抗原，其特征在于，所述人工抗原的结构如式Ⅰ所示：
其中，protein为蛋白质载体，n代表伏马毒素与蛋白质载体的连接数量，为10-40之间的任一数字。
2.根据权利要求1所述的伏马毒素人工抗原，其特征在于，所述蛋白质载体为牛血清白蛋白、卵清蛋白、人血清白蛋白或血蓝蛋白中的任意一种。
3.权利要求1所述的伏马毒素人工抗原的制备方法，其特征在于，依次包括下述步骤：
1)将载体蛋白采用EDC和NHS进行活化，制备载体蛋白活化酯溶液；
2)将伏马毒素溶于缓冲溶液中，形成小分子溶液；
3)再将步骤2）制备的小分子溶液加至载体蛋白活化酯溶液中，室温下搅拌16～24h；
4）待反应结束后室温透析，去除未反应的小分子物质，即可得到所述的伏马毒素人工抗原；
步骤3）所述的载体蛋白和伏马毒素质量比为30-150:30。
4.根据权利要求3所述的伏马毒素人工抗原的制备方法，其特征在于，所述缓冲溶液为磷酸缓冲溶液；所述透析采用的透析液为磷酸缓冲溶液。
5.一种伏马毒素单克隆抗体，其特征在于，以权利要求1所述的伏马毒素人工抗原为免疫原，采用杂交瘤技术进行制备得到的单克隆抗体。
6.权利要求1所述的伏马毒素人工抗原在制备伏马毒素时间分辨荧光免疫层析试纸条中的应用。
7.一种伏马毒素时间分辨荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述纸条中的反应膜包被有权利要求1所述的伏马毒素人工抗原和鼠IgG。
8.根据权利要求7所述的一种伏马毒素时间分辨荧光免疫层析试纸条，其特征在于，包括PVC板，所述的PVC板中部叠置包被有权利要求1所述的伏马毒素人工抗原和鼠IgG的反应膜，两端分别叠置样品垫和吸水垫，所述的反应膜和吸水垫、样品垫相搭连，检测区靠近样品垫，质控区靠近吸水垫。
9.权利要求8所述的伏马毒素时间分辨荧光免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，依次包括下述步骤：
1）制备包被有人工抗原和鼠IgG的反应膜
以NC膜为反应膜，将NC膜固定粘贴在PVC背衬的中间部位，将载体蛋白为牛血清白蛋白的伏马毒素人工抗原，用包被缓冲液调节浓度至0.1~0.5mg/mL，并将鼠IgG用包被缓冲液也调节浓度至0.5~1mg/mL，按照 0.8~1.2µL/cm的膜液量，将抗原和鼠IgG划线到反应膜对应的检测区和质控区，检测区和质控区之间间隔为5 mm，放置 40~45℃烘箱处理48小时，置于恒温恒湿保藏箱里备用，所用包被缓冲液为含有0.5% PEG20000、1%蔗糖、0.5% BSA、0.05%叠氮化钠的0.01 M PBS缓冲液；
2）制备样品垫
将裁剪好的空白样品垫浸泡在样品本处理液中，浸泡5 min后，取出在37℃干燥24 h以上，置于恒温恒湿保藏箱里备用，所用样品垫处理液为含有0.05% 吐温20、1% 蔗糖、0.5%BSA、0.05%叠氮化钠的0.05M PBS缓冲液；
3）时间分辨荧光免疫层析试纸条的组装：
在PVC板背衬中部叠置步骤1）制得的反应膜，两端分别叠置步骤2）制得的样品垫和吸水垫，反应膜和吸水垫、样品垫相搭连，检测区靠近样品垫，质控区靠近吸水垫，得到试纸板，将试纸板切割成试纸条，将试纸条装载于试纸卡内，得到时间分辨荧光免疫层析试纸条。
10.权利要求7所述的伏马毒素时间分辨荧光免疫层析试纸条用于定量检测伏马毒素。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210952471.7A CN115232202A (zh) | 2022-08-09 | 2022-08-09 | 伏马毒素人工抗原及其制备方法与应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210952471.7A CN115232202A (zh) | 2022-08-09 | 2022-08-09 | 伏马毒素人工抗原及其制备方法与应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN115232202A true CN115232202A (zh) | 2022-10-25 |
Family
ID=83679650
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202210952471.7A Pending CN115232202A (zh) | 2022-08-09 | 2022-08-09 | 伏马毒素人工抗原及其制备方法与应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN115232202A (zh) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103792356A (zh) * | 2012-11-04 | 2014-05-14 | 江苏维赛科技生物发展有限公司 | 检测伏马毒素的elisa试剂盒的制备及检测方法 |
| CN109085336A (zh) * | 2018-08-29 | 2018-12-25 | 郑州工程技术学院 | 一种检测伏马菌素b1的免疫层析试纸 |
| CN112939954A (zh) * | 2021-01-28 | 2021-06-11 | 广东农工商职业技术学院 | 一种罗丹明b人工抗原和试纸条及其制备方法与应用 |
-
2022
- 2022-08-09 CN CN202210952471.7A patent/CN115232202A/zh active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103792356A (zh) * | 2012-11-04 | 2014-05-14 | 江苏维赛科技生物发展有限公司 | 检测伏马毒素的elisa试剂盒的制备及检测方法 |
| CN109085336A (zh) * | 2018-08-29 | 2018-12-25 | 郑州工程技术学院 | 一种检测伏马菌素b1的免疫层析试纸 |
| CN112939954A (zh) * | 2021-01-28 | 2021-06-11 | 广东农工商职业技术学院 | 一种罗丹明b人工抗原和试纸条及其制备方法与应用 |
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| 刘仁荣;谢少霞;裘雪梅;涂顺;吴前辉;: "伏马菌素B2人工抗原的制备研究", 食品与机械, no. 05 * |
| 李复辉等: "伏马菌素B_1人工抗原的制备及其鉴定", 中国粮油学报, no. 11 * |
| 王莹等: "伏马菌素B_1单克隆抗体的制备及鉴定", 《中国农业科学》, vol. 44, no. 20, pages 4303 * |
| 董国良: "玉米赤霉烯酮类和伏马菌素类广谱单克隆抗体的制备及ELISA方法的建立", 《华中农业大学 硕士学位论文》, pages 6 - 2 * |
| 邢淑婕;刘开华;: "伏马菌素B_1人工抗原的构建", 信阳农业高等专科学校学报, no. 02 * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Zhang et al. | Development of a new broad-specific monoclonal antibody with uniform affinity for aflatoxins and magnetic beads-based enzymatic immunoassay | |
| CN110618263B (zh) | 一种c反应蛋白全程检测的方法以及相应的试剂盒 | |
| CN108640850B (zh) | 一种孔雀石绿半抗原、人工抗原及其在荧光定量免疫层析中的应用 | |
| CN105891508A (zh) | 一种快速定量检测h-fabp的时间分辨荧光免疫层析试剂及制备方法 | |
| CN113391076A (zh) | 一种25-羟基维生素d的免疫检测方法及其应用 | |
| Grandke et al. | Quality assurance in immunoassay performance—comparison of different enzyme immunoassays for the determination of caffeine in consumer products | |
| EP1887358A1 (en) | Method of immunologically analyzing plasmin degradation product of stabilized fibrin | |
| CN108700576A (zh) | 制备抗体对的方法、试剂盒及试剂盒的应用和制备抗体对的系统 | |
| JP4484924B2 (ja) | 結合対の特異的な結合反応の媒体として使用するための水溶液 | |
| Pei et al. | Colorimetric ELISA with an acid–base indicator for sensitive detection of ochratoxin A in corn samples | |
| JPH0670629B2 (ja) | 免疫反応の反応成分を測定するための方法及び試薬 | |
| CN110240576B (zh) | 氢氯噻嗪半抗原和人工抗原及其制备方法和应用 | |
| CN112939954A (zh) | 一种罗丹明b人工抗原和试纸条及其制备方法与应用 | |
| CN110938040B (zh) | 三聚氰胺半抗原和人工抗体及其制备方法与应用 | |
| CN115232202A (zh) | 伏马毒素人工抗原及其制备方法与应用 | |
| CN113024669A (zh) | 含氨基或羧基基团物质标记的rbp抗体、人rbp免疫层析检测试剂盒及其制备方法 | |
| US20210096075A1 (en) | Kit for quickly detecting cadmium content in sample | |
| US10605803B2 (en) | Composition for enzyme immunoassay using immunofluorescence and uses thereof | |
| CN116083372A (zh) | 一种杂交瘤细胞株及其分泌的单克隆抗体和应用 | |
| CN111320697A (zh) | 一种酶标二抗HRP/羊抗鼠IgG@ZIF-L及其制备方法和应用 | |
| CN114014831B (zh) | 一种赭曲霉毒素a半抗原、人工抗原及其制备方法与应用 | |
| CN110117286B (zh) | 一种杂环胺8-MeIQx半抗原、抗体及其制备方法和应用 | |
| CN114044782B (zh) | 一种黄曲霉毒素b1半抗原、人工抗原及其制备方法与应用 | |
| CN113109325A (zh) | 一种胃蛋白酶原i酶促化学发光检测试剂盒及其制备方法与应用 | |
| CN109444431A (zh) | 一种心脏肌球蛋白结合蛋白c的定量检测方法及检测试剂盒 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |