CN115219636A - 一种高通量同时测定水产品中5种真菌毒素的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种高通量同时测定水产品中5种真菌毒素的方法，属于水产品痕量检测技术领域，所述方法选用乙腈进行提取；将C18吸附剂与正己烷净化方法联合使用，先用C18吸附剂进行净化，再加入正己烷进行二次净化。本发明方法同时检测水产品中5种真菌毒素，在各自的响应范围内线性关系良好，相关系数(r)≥0.99，检出限为1.0μg/kg，定量限为2.0μg/kg，平均加标回收率60％～120％，相对标准偏差≤15％，准确性和稳定性好，适合于水产品样品中真菌毒素的多残留、高通量检测。

Description

一种高通量同时测定水产品中5种真菌毒素的方法
技术领域
本发明属于水产品痕量检测技术领域，具体涉及一种高通量同时测定水产品中5种真菌毒素的方法。
背景技术
玉米赤霉烯酮(ZEN)是谷物及饲料中常见的真菌毒素。交链孢酚(AOH)、交链孢霉烯(ALT)、交链孢毒素(ATXs)、腾毒素(TEN)为交链孢霉毒素，是由广泛分布于粮油作物和土壤中的交链孢霉(Alternaria spp.)产生的一种常见生物毒素，是交链孢霉菌的次级代谢产物，当谷物在潮湿和适宜的温度下，霉菌就会大量生长繁殖，并产生霉菌毒素。因此，ZEN和交链孢霉毒素普遍存在于粮食，饲料等基质中。我国谷物霉菌毒素阳性率在90％以上，每年约2100万吨谷物(约占粮食总产量的4.2％)受霉菌毒素的污染严重。交链孢霉是污染谷物的主要真菌，检出率极高。代永霞等(赤峰市售小麦粉交链孢霉毒素污染研究.[J].现代农业科技,2022(2):197-199.)采用液相色谱串联质谱法测定赤峰地区120份小麦粉中4种交链孢霉毒素的含量。结果表明：TEN检出率为100％，AOH的检出率为96.7％。由于作为饲料原料的粮谷存在极大的污染风险，因此水产品也存在被交链孢霉毒素及其他真菌毒素污染的风险。毒理学研究表明交链孢霉毒素对人畜健康均有影响，可能具有遗传毒性和生殖发育毒性。目前针对交链孢霉毒素的检测方法研究集中于玉米、小麦及水果等食品，国内外尚无水产品中交链孢霉毒素相应的检验方法，因此尚无法对其危害及污染现状进行科学评价。因此建立水产品中交链孢霉毒素和玉米赤霉烯酮同时测定的方法非常重要。
发明内容
本发明要解决的技术问题在于提供一种高通量同时测定水产品中5种真菌毒素的方法，选用恰当的提取溶剂乙腈进行提取；选用属于QuEChERS技术的C18吸附剂与基于液液萃取原理的正己烷净化方法联合使用，先用C18吸附剂进行净化，将C18吸附剂优势范围内的杂质很好的去除后，再加入正己烷进行二次净化。通过提取与净化技术的契合，获得良好的技术效果。
本发明是通过如下技术方案来实现的：
一种高通量同时测定水产品中5种真菌毒素的方法，所述方法包括如下步骤
(1)提取称取水产品肉糜样品于离心管中，加入2倍样品质量的无水硫酸钠，搅拌均匀，加入乙腈，涡旋混匀，超声提取30-40min，离心，移取上清液于离心管，用氮气吹至近干，用甲醇复溶；
(2)净化复溶液中加入终浓度为0.5g/mL的C18，涡旋混匀，离心，转移上清液，上清液中加入与复溶液等体积的正己烷，涡旋混匀，离心，弃上层正己烷层，下层甲醇层过0.22μm滤膜，供液相色谱-串联质谱仪分析。
(3)上机检测仪器工作条件包括色谱条件和质谱条件
3.1色谱条件：
色谱柱：C18柱100mm×2.1mm，1.7μm；流速：0.3mL/min；柱箱温度：40℃；进样量：5μL；流动相：A为甲醇，B为水，梯度洗脱程序见表1：
表1液相梯度洗脱程序表
Figure BDA0003729612330000021
Figure BDA0003729612330000031
3.2质谱条件：
离子源：电喷雾离子源(ESI源)。
扫描方式：负离子扫描。
检测方式：多反应监测(MRM)。
电喷雾电压：3000V。
离子传输管温度：320℃。
脱溶剂气温度：300℃。
母离子、定量离子、定性离子、RF Lens电压及碰撞能量等见表2。
表2多反应监测母离子、子离子、锥孔电压和碰撞能量
Figure BDA0003729612330000032
进一步，加入的乙腈的体积为5mL/g样品。
进一步，所述的乙腈和甲醇均为色谱纯溶液。
进一步，在氮气吹干上清液的时的温度为40-45℃。
进一步，C18的粒径为40μm～50μm。
本发明与现有技术相比的有益效果
水产品种毒素的检测关键技术特征之一在于样品溶液的制备，本发明方法通过优先以乙腈为提取溶剂时，5种霉菌毒素的回收率均能达到比较理想的效果，以超声提取的方式，多种真菌毒素的回收率、提取效果及样品间提取效果的平行性可达到最理想效果；对提取的溶液采用C18吸附剂和正己烷联合净化，能够最大化的去除水产品中的蛋白、脂肪等干扰物。采用甲醇和水作为流动相能够很好的洗脱5中毒素，因此，本发明方法提取、净化效果好，灵敏度高、准确性和稳定性好，适合于水产品样品中真菌毒素的多残留、高通量检测。
本发明方法能够高通量、同时检测水产品样中的交链孢酚(AOH)、交链孢霉烯(ALT)、交链孢毒素II(ATX II)、腾毒素(TEN)和玉米赤霉烯酮(ZEN)等5种真菌毒素，且5种真菌毒素在各自的响应范围内线性关系良好，相关系数(r)≥0.99，检出限(灵敏度，LOD)为1.0μg/kg，定量限(LOQ)为2.0μg/kg，平均加标回收率60％～120％(准确度，n＝6)，相对标准偏差(稳定性，RSD)≤15％。
附图说明
图1为不同提取溶剂对提取效率的影响；
图2为不同提取方式对回收率的影响；
图3为PSA和正己烷联合净化效果；
图4为C18和正己烷联合净化效果；
图5为乙腈和水(含0.1％甲酸的5mmol/L乙酸铵溶液)作为流动相
时标准溶液色谱图；
图6为乙腈和水(含0.1％甲酸)作为流动相时标准溶液色谱图；
图7为乙腈和超纯水作为流动相时标准溶液色谱图
图8为甲醇和水(含0.1％甲酸的5mmol/L乙酸铵溶液)作为流动相
时标准溶液色谱图；
图9为甲醇和水(含0.1％甲酸)作为流动相时标准溶液色谱图；
图10为以甲醇和超纯水作为流动相时5种真菌毒素的标准溶液色谱图(AOH:交链孢酚(641-38-3)；ALT:交链孢霉烯(29752-43-0)；ZEN:玉米赤霉烯酮(17924-92-4)；ATXII:交链孢毒素；TEN:腾毒素(28540-82-1))；
图11为水产品样品中5种真菌毒素加标样品色谱图(AOH:交链孢酚(641-38-3)；ALT:交链孢霉烯(29752-43-0)；ZEN:玉米赤霉烯酮(17924-92-4)；ATXII:交链孢毒素；TEN:腾毒素(28540-82-1))。
具体实施方式
下面通过实施例来对本发明的技术方案做进一步解释，但本发明的保护范围不受实施例任何形式上的限制。
本实施例所述的5种毒素分别为：AOH：交链孢酚(641-38-3)；ALT：交链孢霉烯(29752-43-0)；ZEN：玉米赤霉烯酮(17924-92-4)；ATX II：交链孢毒素II；TEN：腾毒素(28540-82-1)，购买于青岛普瑞邦生物工程有限公司。
实施例中所用的样品为大菱鲆成鱼的鱼肉。
实施例1提取溶剂的选择
本实施例分别以乙腈、甲醇、1％甲酸-乙腈(即乙腈溶液中含有体积比为1％的甲酸)、1％甲酸-甲醇(即甲醇溶液中含有体积比为1％的甲酸)、体积比70％乙腈水溶液和体积比84％乙腈水溶液等溶剂作为提取溶剂，以在空白鱼肉糜样品中进行加标实验的方式进行对比。
过程如下：①进行加标样品制备，称取5.0g(精确至±0.05g)鱼肉糜试样于50mL离心管中，加入浓度为1μg/mL的5种毒素的混合工作溶液25μL，3000r/min涡旋混匀30s，静置30min，待标准溶液与样品基质充分混匀。②加入无水硫酸钠10g，用玻棒搅拌均匀。试验共分6个组，各组加入不同的提取溶剂，其中组1加入乙腈、组2加入甲醇、组3加入1％甲酸-乙腈、组4加入1％甲酸-甲醇、组5加入70％乙腈水溶液，组6加入84％乙腈水溶液，提取溶剂的体积均为25mL，然后3000r/min涡旋混匀30s，超声提取30min，6000r/min离心10min，准确移取10mL上清液于15mL离心管，40℃氮吹至近干，用甲醇复溶并定容至1mL。③净化过程为：复溶液中加入0.5g C18，涡旋混匀30s，6000r/min离心10min，转移上清液，上清液中加入正己烷1mL，涡旋混匀30s，6000r/min离心10min，弃上层正己烷层，下层甲醇层过0.22μm滤膜。供液相色谱-串联质谱仪分析。
实验结果见图1和表3。可以看出，当采用乙腈为提取溶剂时，5种霉菌毒素的回收率均能达到比较理想的效果，因此采用乙腈作为提取溶剂为最优技术方案。
表3不同提取剂提取效率(％)
ALT ALTox AOH TEN ZEN
乙腈 90.2 87.5 74.6 88.5 89.2
甲醇 81.9 75.4 70.2 85.1 79.0
1％甲酸-乙腈 86.5 83.2 75.4 86.7 83.1
1％甲酸-甲醇 85.6 72.4 70.2 79.4 82.2
70％乙腈水溶液 82.0 78.8 68.9 83.6 81.4
84％乙腈水溶液 87.7 85.8 72.5 +88.1 87.9
实施例2提取技术的选择与最优化
本实施例对比了振荡2h提取、均质提取和超声30min提取，以在空白鱼肉糜中进行加标实验的方式进行对比，因提取方式不同，分为以下3个组：
组1采用振荡提取法：称取5.0g(精确至±0.05g)鱼肉糜试样于100mL离心管中，加标样品制备过程同实施例1中①所述。加入无水硫酸钠10g，用玻棒搅拌均匀。加入乙腈50mL，将离心管置于振荡器中(振荡速度320rpm)，振荡2h。视振荡器的位数，一般一台振荡器可实现6个样品同时振荡提取。
组2采用均质提取：称取5.0g(精确至±0.05g)鱼肉糜试样于50mL离心管中，加标样品制备过程同实施例1中①所述。加入无水硫酸钠10g，用玻棒搅拌均匀。加入乙腈25mL，用均质器(转速约30000rpm)对样品进行均质，以将样品充分打碎，并均匀的分布于提取溶液中为原则，此提取过程一次只能实现一个样品的提取，均质时间约30～45s。
组3采用超声提取：称取5.0g(精确至±0.05g)鱼肉糜试样于50mL离心管中，加标样品制备过程同实施例1中①所述。加入无水硫酸钠10g，玻棒搅拌均匀。加入乙腈25mL，将样品置于超声波清洗器中(600W)30min；
提取完成后，以6000r/min离心10min，组1振荡提取组准确移取20mL上清液，组2、组3准确移取10mL上清液于离心管，40℃氮吹至近干，用甲醇复溶并定容至1mL。经相同的净化过程后，供液相色谱-串联质谱仪分析。
实验结果见图2、表4所示。可以看出，3种提取方式均可获得比较理想的提取效果，其中采用振荡提取所需时间较长，且所需提取试剂多；采用均质提取时单个样品所需时间最短，但无法实现高通量，因此在进行批量检测时，总体提取时间会显著增加，不利于提高提取时间效率。而采用超声提取时，多种真菌毒素的回收率、提取效果及样品间提取效果的平行性可达到最理想效果，因此采用超声提取方式为最优技术方案。
表4不同提取方式对回收率的影响
ALT ALTox AOH TEN ZEN
超声提取 91.5 86.9 76.6 86.5 90.4
振荡提取 89.5 83.4 75.1 86.9 92.3
均质提取 90.6 88.1 74.3 85.7 89.6
实施例3净化方式的选择
水产品种类繁多，种类不同(如鱼、虾、蟹、海参等)、种属不同(如大菱鲆、草鱼、乌鳢、许氏平鮋等)、阶段不同(如幼苗、成鱼)，样品基质的主要成分所占比例差别巨大。因此对检测方法的前处理要求及其严格。所选择的提取溶剂必须同时满足：最大限度的提取目标化合物，最小可能的附带各种干扰杂质，然后结合高效的净化方式，实现目标化合物的准确、高效、灵敏、稳定的检测。
目前常用的净化方法有凝胶渗透色谱(GPC)法、固相萃取(SPE)法、液液萃取法和QuEChERS法等。凝胶渗透色谱(GPC)法对去除样品提取液中的脂类、蛋白等大分子物质效果较好，但具有对待净化溶液要求高、耗时长、试剂消耗量大等缺点。固相萃取(SPE)法是最常用的一种净化方法，其利用固体吸附剂将样品中的目标化合物吸附，然后再用洗脱液洗脱，达到分离和富集目标化合物的目的，但目前性能较为稳定的也是检测中常用的固相萃取柱多为国外品牌，价格贵，检测成果高。
QuEChERS(Quick、Easy、Cheap、Effective、Rugged、Safe)是一种快速前处理技术，其原理是利用吸附剂与基质中的杂质相互作用，对杂质进行吸附从而达到对样品进行除杂、净化的目的。液液萃取法是常用的去除脂类及色素的方法，常用的萃取剂有正己烷、石油醚(沸程40℃～60℃)等。
基于QuEChERS法的优势及提高净化效率的目的，本实施例选取C18吸附剂(粒径40μm～50μm)、PSA吸附剂(粒径40μm～60μm)、正己烷分别进行试验，通过对比发现，C18吸附剂、PSA吸附剂与正己烷对多种毒素均具有净化效果。但由于水产品样品的基质成分复杂，脂类和色素等杂质含量过高，在实验过程中发现单独使用某一种净化方式无法将样品提取液中的干扰杂质完全去除。
本实施例将属于QuEChERS技术的C18吸附剂、PSA吸附剂与基于液液萃取原理的正己烷净化方法联合使用。对联合使用效果进行验证，共设2个组：第1组为C18和正己烷联合；第2组是PSA和正己烷联合。加标样品制备同实施例1中①所述，提取过程按本技术的提取方法进行。净化过程分为2个组：
组1：在1mL甲醇复溶液中加入0.5g C18吸附剂；
组2：在1mL甲醇复溶液中加入0.5g PSA吸附剂。
2个组均涡旋混匀30s，6000r/min离心10min，转移上清液。上清液中加入正己烷1mL，涡旋混匀30s，6000r/min离心10min，弃上层正己烷层，下层甲醇层过0.22μm滤膜，供液相色谱-串联质谱仪分析。净化效果及回收率试验结果见表5及图3、图4所示，由图可见，C18吸附剂与正己烷联用的净化效果明显优于PSA与正己烷联用的效果。
表5不同净化条件回收率比较
ALT ALTox AOH TEN ZEN
C<sub>18</sub>+正己烷 89.9 84.1 77.5 86.3 92.4
PSA+正己烷 83.6 80.7 75.2 88.2 87.9
通过对不同净化方式回收率实验结果的分析，综合各实验条件下的净化效果，将0.5g C18吸附剂(粒径40μm～50μm)与正己烷净化联合使用，先经C18吸附剂净化，将C18吸附剂优势范围内的大部分色素、脂类及其它杂质很好的去除后，后加入正己烷进一步去除脂类等弱极性杂质，多种毒素的回收率和净化效果均达到满意效果。
实施例4仪器检测条件的确定
1)质谱分析条件的确定
本实施例采用多反应监测(MRM)的方式对样品进行定性和定量分析。其原理是在三重四级杆串联质谱中，通过第一个四级杆(Q1)对母离子进行选择，在第二个四级杆(Q2)中进行碰撞解离，通过第三个四级杆(Q3)对子离子进行选择离子检测，只对符合特定条件的离子进行检测。该模式能够有效排除本底干扰，具有较高的选择性、信噪比和灵敏度。
采用蠕动泵直接进样的方式进行质谱检测条件的优化。分别将5种真菌毒素配制成1.00μg/mL的溶液，在ESI-模式下进行一级质谱扫描，选择合适的母离子。再分别进行二级质谱分析，找出在二级质谱中两个信号较强的碎片离子，将信号最强的碎片离子作为定量离子，另一个碎片离子作为辅助定性离子。同时对锥孔电压、去溶剂气流速、喷雾电压等参数进行优化，得到完整的质谱条件。具体如下：
离子源：电喷雾离子源(ESI源)。
扫描方式：负离子扫描。
检测方式：多反应监测(MRM)。
电喷雾电压：3000V。
离子传输管温度：320℃。
脱溶剂气温度：300℃。
母离子、定量离子、定性离子、RF Lens电压及碰撞能量等见表2。
表2多反应监测母离子、子离子、锥孔电压和碰撞能量
Figure BDA0003729612330000101
2)液相色谱条件的确定
分别将甲醇和乙腈作为有机相，将超纯水、0.1％甲酸溶液和含有0.1％甲酸的5mmol/L乙酸铵溶液作为水相进行比较，通过实验发现，当采用甲醇作为有机相，超纯水作为水相时，分离效果和响应值最佳。选用BEH C18(100mm×2.1mm,1.7μm)、HSS T3(100mm×2.1mm,1.8μm)和HSS C18(100mm×2.1mm,1.7μm)色谱柱进行试验，发现BEH C18(100mm×2.1mm,1.7μm)色谱柱对5种霉菌毒素的分离效果及峰形最好。因此本标准选择BEH C18(100mm×2.1mm,1.7μm)色谱柱作为色谱分离柱。各种流动相条件下，标准溶液色谱图如图5～10所示，结果表明采用甲醇和超纯水作为流动相分离效果最佳。
通过对流动相、色谱柱等色谱条件以及质谱条件的选择以及各条件之间的匹配性调整，最终5种真菌毒素的标准溶液色谱图见图11所示。
实施例5水产品样品的测定
1、提取称取5.0g鱼肉糜(精确至±0.05g)试样于50mL离心管中，加入浓度为1μg/mL的5种真菌毒素的混合标准溶液25μL，3000r/min涡旋混匀30s，静止30min充分混匀。加入无水硫酸钠10g，用玻棒搅拌均匀，加入乙腈25mL，3000r/min涡旋混匀30s，超声提取30min，6000r/min离心10min，准确移取10mL上清液于15mL离心管，40℃氮吹至近干，用甲醇复溶并定容至1mL。
2、净化复溶液中加入0.5g C18，涡旋混匀30s，6000r/min离心10min，转移上清液，上清液中加入正己烷1mL，涡旋混匀30s，6000r/min离心10min，弃上层正己烷层，下层甲醇层过0.22μm滤膜，供液相色谱-串联质谱仪分析。
3、上机检测仪器工作条件包括色谱条件和质谱条件。
3.1色谱条件：
色谱柱：C18柱(100mm×2.1mm，1.7μm)或性能相当者；流速：0.3mL/min；柱箱温度：40℃；进样量：5μL；流动相：A为甲醇，B为水，梯度洗脱程序见表1：
表1液相梯度洗脱程序表
Figure BDA0003729612330000121
3.2质谱条件：
离子源：电喷雾离子源(ESI源)。
扫描方式：负离子扫描。
检测方式：多反应监测(MRM)。
电喷雾电压：3000V。
离子传输管温度：320℃。
脱溶剂气温度：300℃。
母离子、定量离子、定性离子、RF Lens电压及碰撞能量等见表2。
表2多反应监测母离子、子离子、锥孔电压和碰撞能量
Figure BDA0003729612330000122
Figure BDA0003729612330000131
*为定量离子
4、定性、定量
标准溶液的配制
(1)标准储备溶液(1.0mg/mL)：分别准确称取适量5种真菌毒素标准品，置于10mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，混匀，配制成1mg/mL的标准储备溶液，于-20℃避光密封保存；
(2)标准混合中间溶液(10.0μg/mL)：分别准确移取适量5种真菌毒素标准储备液，置于100mL容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，混匀，配制成5种真菌毒素浓度均为10.0μg/mL的混合标准中间溶液，于4℃避光密封保存；
(3)标准混合工作溶液(1.0μg/mL)：准确移取适量标准混合中间溶液，置于10mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，混匀，配制成5种真菌毒素浓度均为1.0μg/mL的混合标准工作液，于4℃避光密封保存，有效期为2周。
标准曲线制备
取空白鱼肉糜样品按照本实施例步骤1和2的提取、净化过程处理，制备空白基质溶液，准确移取适量标准混合工作溶液，用空白基质溶液稀释，配制成系列基质标准工作溶液，使交链孢酚(AOH)、交链孢霉烯(ALT)、玉米赤霉烯酮(ZEN)、交链孢毒素II(ATX II)和腾毒素(TEN)5种真菌毒素浓度分别为1.0μg/L、5.0μg/L、10.0μg/L、50.0μg/L、100μg/L，供液相色谱-串联质谱仪测定，使用时现配现用。以标准工作液中各组分特征离子峰面积为纵坐标，各组分浓度为横坐标绘制标准工作曲线。5种真菌毒素在各自的响应范围内线性关系良好，相关系数(r)≥0.99，如表6所示。
表6. 5种真菌毒素线性
曲线方程 R<sup>2</sup>
ALT Y＝-4255.15+2083.38*X 0.9950
ALXⅡ Y＝30996.1+6990.06*X 0.9976
AOH Y＝23303.3+6348.56*X 0.9960
TEN Y＝6279.94+2791.11*X 0.9955
ZEN Y＝35285.2+11526.6*X 0.9963
灵敏度(定量限)：采用在空白鱼肉糜样品中加标的方法来确定5种真菌毒素的定量限。在阴性的鱼肉糜样品中添加一定浓度的混合标准工作液，按照本实施例步骤1和2的前处理方法进行提取、净化，以信噪比(S/N≥3)确定检出限(LOD)，以信噪比(S/N≥10)确定定量限(LOQ)，最终确定5种真菌毒素的检出限均为1.0μg/kg，定量限为均2.0μg/kg。
准确度和稳定性：在5.0g空白鱼肉糜样品中添加混合标准工作液，加标浓度为5.0μg/kg，6个平行，测定3个批次。平均加标回收率72.2％～83.1％(准确度，n＝6，满足60％～120％要求)，变异系数(稳定性，n＝6，满足≤15％要求)5.01％～10.3％。因此，该方法提取、净化效果好，灵敏度高、准确性和稳定性好，见表7，适合于水产品样品中真菌毒素的多残留、高通量检测。
表7.准确度和稳定性实验结果
Figure BDA0003729612330000141
Figure BDA0003729612330000151

Claims (5)

1.一种高通量同时测定水产品中5种真菌毒素的方法，其特征在于所述方法包括如下步骤：
(1)提取称取水产品肉糜样品于离心管中，加入2倍样品质量的无水硫酸钠，搅拌均匀，加入乙腈，涡旋混匀，超声提取30-40min，离心，移取上清液于离心管，用氮气吹至近干，用甲醇复溶；
(2)净化复溶液中加入终浓度为0.5g/ml的C18，涡旋混匀，离心，转移上清液，上清液中加入与复溶液等体积的正己烷，涡旋混匀，离心，弃上层正己烷层，下层甲醇层过0.22μm滤膜，供液相色谱-串联质谱仪分析；
(3)上机检测仪器工作条件包括色谱条件和质谱条件
3.1色谱条件：
色谱柱为C18柱100mm×2.1mm，1.7μm；流速为0.3mL/min；柱箱温度40℃；进样量5μL；流动相A为甲醇，流动相B为水，梯度洗脱程序见表1：
表1液相梯度洗脱程序表
时间/min A体积分数/％ B体积分数/％ 0.00 10 90 2.00 10 90 4.00 95 5 8.00 95 5 8.10 10 90 10.00 10 90
3.2质谱条件：离子源为电喷雾离子源；扫描方式为负离子扫描；
检测方式为多反应监测；电喷雾电压3000V；离子传输管温度320℃；脱溶剂气温度300℃；
母离子、定量离子、定性离子、RF Lens电压及碰撞能量见表2；
表2多反应监测母离子、子离子、锥孔电压和碰撞能量
Figure FDA0003729612320000021
2.根据权利要求1所述的一种高通量同时测定水产品中5种真菌毒素的方法，其特征在于加入的乙腈的体积为5mL/g样品。
3.根据权利要求1所述的一种高通量同时测定水产品中5种真菌毒素的方法，其特征在于所述的乙腈和甲醇均为色谱纯溶液。
4.根据权利要求1所述的一种高通量同时测定水产品中5种真菌毒素的方法，其特征在于在氮气吹干上清液的时的温度为40-45℃。
5.根据权利要求1所述的一种高通量同时测定水产品中5种真菌毒素的方法，其特征在于所述C18的粒径为40μm～50μm。
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