CN114384181A - 改进的QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法测定大白菜中新烟碱类农药的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于杀虫剂检测技术领域，具体涉及一种改进的QuEChERS‑超高效液相色谱‑串联质谱法测定大白菜中新烟碱类农药的方法。所述方法包括以下步骤：(1)对大白菜经破碎研磨得到初样；(2)对初样中的新烟碱进行萃取、液液分配、分散固相萃取并离心分离得到分散液；(3)取分散液的上清液进行过滤得到待测样品；(4)将新烟碱的标准物质配制成系列混标溶液；(5)采用超高效液相色谱‑串联质谱法对待测样品和所述系列混标溶液进行检测，得到检测数据；(6)对检测数据进行定性分析和/或定量分析，得到所述大白菜中新烟碱类农药的含量。该方法前处理简单便捷，可以有效降低大白菜中基体的干扰，能够快速高效地对大白菜中新烟碱类农药进行分析检测。
Description
技术领域
本发明属于杀虫剂检测技术领域，具体涉及一种改进的QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法测定大白菜中新烟碱类农药的方法。
背景技术
新烟碱类杀虫剂是继有机磷、氨基甲酸酯和拟除虫菊酯之后的第四大类合成杀虫剂。随着近年来的广泛使用，新烟碱类杀虫剂已成为各种食品中检出最频繁的杀虫剂之一，长期接触新烟碱类杀虫剂会对人类健康造成很大的威胁。根据美国国立卫生研究院的报告，新烟碱类杀虫剂可以与哺乳动物中乙酰胆碱受体中的α4β2亚基结合，引起包括无脑儿和法洛四联症在内的严重的新生儿疾病。因此，在2018年，欧盟投票禁止在农业产品中使用三种新烟碱杀虫剂(吡虫啉、噻虫胺和噻虫嗪)。同年，法国在欧盟确立的基础上禁止销售和使用啶虫脒和噻虫啉。
大白菜是亚洲最常食用的蔬菜之一，富含碳水化合物、各种维生素、有机酸、蛋白质以及粗纤维等，是一类具有代表性的蔬菜。我国GB 2763-2021 国家标准中首次将氯噻啉和环氧虫啶纳入规定，在大白菜中吡虫啉和啶虫脒最大残留限量分别为0.2mg/kg和1.0mg/kg。在目前的研究中，还没有针对在大白菜中关于氯噻啉和环氧虫啶的检测方法。作为第四代新烟碱杀虫剂，氯噻啉和环氧虫啶具有更大的市场前景，并且对蚜虫、褐飞虱和地中海实蝇具有更高的活性，对蜜蜂的毒性较低。因此，针对大白菜中典型新烟碱的准确定量分析是非常有必要的。
目前，关于大白菜中多种新烟碱类杀虫剂同时检测的方法多采用QuEChERS前处理技术结合液相色谱-质谱联用，除此之外，部分研究者采用微波辅助萃取、固相萃取等前处理方法。与QuEChERS方法相比，微波辅助萃取法操作复杂且有一定的危险；固相萃取法存在萃取时间长、萃取柱易堵塞且寿命较短等缺陷。Shashi B.Singh等人公开了一种利用微波辅助萃取法对大白菜中噻虫嗪和吡虫啉的检测方法，该方法存在操作难度较大，且利用的萃取溶剂二氯甲烷用量大、毒性大的问题，对实验员的身体健康存在一定的威胁。LiuShaoying等人开发了一种利用液液萃取和固相萃取相结合的方法对大白菜中7种新烟碱(吡虫啉、啶虫脒、烯啶虫胺、呋虫胺、噻虫啉、噻虫胺和噻虫嗪)进行定量检测，该方法步骤较为繁琐，所耗用的乙腈较大。
QuEChERS方法(快速、简单、廉价、有效、坚固、安全)是在食品和农药样品分析中备受研究者欢迎的前处理技术之一，该方法特别适用于在蔬菜中多种农药的提取，并且具有良好的效果。在运用QuEChERS方法进行前处理之前，最重要的是针对QuEChERS各项参数进行针对性的优化，通过优化方法来提高分析物在基质中的萃取效率和净化效率，并最终获得最佳的分析结果。Zhang Ying等人开发了QuEChERS方法针对大白菜中呋虫胺、噻虫胺、噻虫啉和噻虫嗪进行定量分析，该方法优化部分较为粗糙，净化效果不佳，导致目标分析物的基质效应比较明显。
利用QuEChERS方法对农残进行分析时，通常需要优化的参数包括萃取剂的种类和用量、分散固相萃取所用的净化剂种类和用量、样品的pH值、离心时间和速度以及相分配盐的种类等。然而现有的测定大白菜中新烟碱方法存在分析物不全、前处理优化不够细致、测量准确度低的不足。本发明针对QuEChERS方法中的主要参数进行了详细的优化，相比较现有的方法，改进的方法目标分析物更加全面、操作步骤更加简单便捷、定量更加准确，为大白菜中典型新烟碱的定量分析提供了有利的借鉴。
发明内容
本发明针对现有技术不足，提供了一种改进的QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法测定大白菜中新烟碱类农药的方法，该方法前处理简单便捷，无需特殊设备，可以有效降低大白菜中基体的干扰，能够快速高效地对大白菜中新烟碱类杀虫剂进行分析检测。
为了实现上述目的，本发明提供一种改进的QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法测定大白菜中新烟碱类农药的方法，所述方法包括以下步骤：
(1)对大白菜进行破碎和研磨，得到大白菜初样；
(2)用乙腈对所述大白菜初样中的新烟碱进行萃取，得到萃取液；
(3)取所述萃取液进行液液分配并离心分离，得到分配液；所述液液分配所用的相分配盐为氯化钠和无水硫酸钠，二者的质量比为1：3.5-4.5；
(4)取所述分配液的上清液进行分散固相萃取并离心分离，得到分散液；
(5)取所述分散液的上清液进行过滤，得到待测样品；
(6)将所述新烟碱的标准物质配制成系列混标溶液；
(7)采用超高效液相色谱-串联质谱法对所述待测样品和所述系列混标溶液进行检测，得到检测数据；
(8)对所述检测数据进行定性分析和/或定量分析，得到所述大白菜中新烟碱的含量。
本发明的有益效果如下：
1)本发明使用无水硫酸钠(Na2SO4)和氯化钠(NaCl)作为液液分配过程中相分配盐，相比较无水硫酸镁(MgSO4)和无水氯化钙(CaCl2)，无水硫酸钠(Na2SO4)一方面可以避免无水硫酸镁(MgSO4)和无水氯化钙(CaCl2)引起的放热作用，防止目标分析物发生热解；另一方面无水硫酸钠(Na2SO4)可以避免盐的结块现象，防止目标分析物被凝结在相分配盐中。经无水硫酸钠(Na2SO4)处理后的目标分析物具有更好的响应。
2)本发明利用柱后灌流技术选取合适的净化剂，该技术通过对整个色谱运行时间内分析物受到的基质效应进行评估，而不是仅仅在分析物的保留时间内比较前处理的净化效果。本发明经过对比，在3-4min的色谱运行时间内，伯仲胺(PSA)的净化效果要好于石墨化炭黑(GCB)和C18；进一步的，当单位白菜样品使用的伯仲胺(PSA)的量超过50mg后，在3-4min的色谱运行时间内基质抑制现象明显改善。该技术在提高柱效、保护质谱的角度上提供了新的思路。
3)本发明选取伯仲胺(PSA)、石墨化炭黑(GCB)和无水硫酸镁(MgSO4) 作为分散固相萃取所用的净化剂，可以有效的除去大白菜样品中的有机酸、叶绿素以及残留的水分，并且不会对目标分析物产生吸附作用。
4)本发明利用HSS T3色谱柱进行分离，相比较C18色谱柱，T3色谱柱极性强，对新烟碱类农药有更强的保留作用，可以实现更好的分离效果，有利于准确定量。
本发明的其它特征和优点将在随后具体实施方式部分予以详细说明。
附图说明
通过结合附图对本发明示例性实施方式进行更详细的描述，本发明的上述以及其它目的、特征和优势将变得更加明显，其中，在本发明示例性实施方式中，相同的参考标号通常代表相同部件。
图1为大白菜样品的处理和分析流程图。
图2为新烟碱分离的色谱图。
图3为本发明涉及的萃取剂中添加剂对新烟碱信号响应值的影响图。
图4为本发明涉及的萃取时间对新烟碱信号响应值的影响图。
图5为本发明涉及的相分配盐对新烟碱信号响应值的影响图。
图6为本发明涉及的离心时间和离心速度对新烟碱信号响应值的影响图。
图7为本发明涉及的分散固相萃取所用的净化剂类型对新烟碱信号响应值的影响图。
图8为本发明涉及的使用GCB后和未使用样品对比图。
图9A和9B为本发明利用柱后灌流技术监测大白菜基质对于烯啶虫胺 (NTP)的影响图。
图10为本发明涉及的滤膜类型对新烟碱信号响应值的影响图。
具体实施方式
下面将更详细地描述本发明的优选实施方式。虽然以下描述了本发明的优选实施方式，然而应该理解，可以以各种形式实现本发明而不应被这里阐述的实施方式所限制。
术语说明
本发明中涉及的术语缩写含义如下：
ACE-啶虫脒，CLO-噻虫胺，THI-噻虫啉，IMI-吡虫啉，IMZ-氯噻啉， NTP-烯啶虫胺，TMX-噻虫嗪，CYP-环氧虫啶，ACN-乙腈，RT-保留时间， Formic acid-甲酸，Acetic acid-乙酸，Ammonia-氨水，Calcium chloride-氯化钙，Magnesium sulfate-硫酸镁，Sodiumsulfate-硫酸钠，PSA-伯仲胺，GCB- 石墨化炭黑，No filter-无过滤，GHP-亲水性聚丙烯，PTFE-聚四氟乙烯， PVDF-聚偏氟乙烯，MCE-混合纤维素，PES-聚醚砜，Nylon-尼龙，Relative abundance-相对丰度，Normalized signal intensity-归一化信号强度，Nameof compound-化合物名称，Sample blank-空白样品，Fortified sample-加标样品， Postcolumn infusion-柱后灌流。
本发明提供一种改进的QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法测定大白菜中新烟碱的方法，所述方法包括以下步骤：
(1)对大白菜进行破碎和研磨，得到大白菜初样；
(2)用乙腈对所述大白菜初样中的新烟碱进行萃取，得到萃取液；
(3)取所述萃取液进行液液分配并离心分离，得到分配液；所述液液分配所用的相分配盐为氯化钠和无水硫酸钠，二者的质量比为1：3.5-4.5；
(4)取所述分配液的上清液进行分散固相萃取并离心分离，得到分散液；
(5)取所述分散液的上清液进行过滤，得到待测样品；
(6)将所述新烟碱的标准物质配制成系列混标溶液；
(7)采用超高效液相色谱-串联质谱法对所述待测样品和所述系列混标溶液进行检测，得到检测数据；
(8)对所述检测数据进行定性分析和/或定量分析，得到所述大白菜中新烟碱的含量。
图1为大白菜样品的处理和分析流程图。
本发明考察不同相分配盐组合对于信号响应值的影响，分别考察了无水硫酸镁(MgSO4)和氯化钠(NaCl)、无水硫酸钠(Na2SO4)和氯化钠(NaCl)、无水氯化钙(CaCl2)和氯化钠(NaCl)对新烟碱信号响应值的影响，三种组合均可以完成液液分配，加入无水硫酸钠(Na2SO4)和氯化钠(NaCl) 后目标分析物的信号响应整体最强，且消除了无水硫酸镁(MgSO4)和无水氯化钙(CaCl2)的结块和放热效应。因此本发明选取无水硫酸钠(Na2SO4) 和氯化钠(NaCl)作为液液分配过程中的相分配盐。
根据本发明，所述方法的参数包括所述萃取的萃取时间、所述相分配盐、所述分散固相萃取所用的净化剂、所述过滤所用的滤膜、所述离心分离的离心时间和速度。
所述萃取时间为3-4min。
所述净化剂为石墨化炭黑、伯仲胺和无水硫酸镁的混合物，三者的质量比为2：4.5-5.5：28-32。
所述滤膜为聚偏氟乙烯、聚四氟乙烯中的任意一种。
所述离心时间和速度分别为3-5min和5000-8000rpm。
具体的，所述净化剂的最佳值通过柱后灌流方法得到，所述柱后灌流方法包括以下步骤：
(1)将空白样品的提取物通过所述超高效液相色谱的色谱柱进行液相分离；
(2)通过安装在所述色谱柱和离子源接口之间的T型连接器，以恒定流速注入新烟碱的混标溶液；
(3)所述串联质谱法的质谱仪在多反应监测模式下运行，产生所述提取物中新烟碱基质效应的色谱图；
(4)根据新烟碱在整个色谱运行时间内所述色谱图的信号响应波动来选择净化剂，所述信号波动最小对应的净化剂为最佳。
所述空白样品为不含所述新烟碱的大白菜样品；所述恒定流速为5-20 μL/min；所述新烟碱的混标溶液的浓度为400-600ng/g。
本发明考察不同类型和用量净化剂对于信号响应值的影响，分别考察了伯仲胺(PSA)、C18、石墨化炭黑(GCB)对于新烟碱信号响应值的影响，各目标分析物信号响应值的差异很小。因此，本发明使用柱后灌流技术来测试不同净化剂组合对样品的净化效率(伯仲胺(PSA)，C18，石墨化炭黑(GCB)，伯仲胺(PSA)+C18，伯仲胺(PSA)+石墨化炭黑(GCB)，伯仲胺(PSA)+C18+石墨化炭黑(GCB))。在该技术中，通过本发明优化的前处理方法进行处理，得到空白大白菜样品。随后，样品通过色谱柱进行正常的液相分离，然后通过安装在色谱柱和ESI接口之间的T型连接器，以恒定流速(10μL/min)注入新烟碱混标溶液(500ng/g)。质谱仪在正常的多反应监测模式(MRM)模式下运行，产生代表样品提取物中基质效应的色谱图。
经比较C18和石墨化炭黑(GCB)对于样品的净化无明显作用，但是石墨化炭黑(GCB)可以消除样品中的叶绿素等色素，一定程度上可以保护液相色谱柱和质谱，最终本发明选用伯仲胺(PSA)+石墨化炭黑(GCB) 组合作为净化剂。
根据本发明，除所述净化剂外其余参数的最佳值均通过信号响应法获得，所述信号响应法包括以下步骤：
(1)改变任意一个参数的值，其余参数保持不变；
(2)采用所述超高效液相色谱-串联质谱法检测不同参数的值的待测样品；
(3)根据所述待测样品的色谱图计算信号响应峰面积，所述峰面积的最大值即对应该参数的最优值；
所述待测样品的浓度为10-500ng/g。
本发明考察萃取剂中添加不同添加剂对信号响应值的影响，选取加标后的大白菜样品，分别向乙腈中加入1.0％甲酸、1.0％氨水和1.0％乙酸(v/v)。各分析物的信号响应变化随添加剂的添加变化很小，说明添加剂的加入对目标分析物的萃取影响很小，本发明选择利用纯乙腈进行萃取。
本发明考察萃取时间对信号响应值的影响，萃取时间不足会使乙腈无法充分萃取目标化合物，影响萃取效率。本发明考察了萃取时间为0、1、3、 5、10、20min时对新烟碱信号响应值的影响，萃取时间由0min增加到3 min，目标分析物信号值响应总体呈增加趋势，继续延长萃取时间，信号值响应趋于平稳，因此本发明选择萃取时间为3min。
离心时间和离心速度会影响乙腈提取溶剂和基质的分离效果。本发明通过设置不同的离心时间和离心速度(3min+5000rpm、5min+5000rpm、3 min+8000rpm、5min+8000rpm)进行比较，找出较佳的离心参数。经考察，离心时间和速度对分析信号强度的影响很小。短时间的前处理可以增加样品的通量，所以样品的分离以3min+5000rpm为宜。
为了防止色谱柱堵塞，必须使用滤膜从样品中除去沉淀物。然而，由于目标分析物化学性能的差异，个别新烟碱可能会被滤膜吸附，在定量过程中会引起误差。本发明通过比较混合纤维素(MCE)、亲水性聚丙烯(GHP)、聚偏氟乙烯(PVDF)、聚醚砜(PES)、聚四氟乙烯(PTFE)和尼龙(nylon) 6种滤膜，发现聚醚砜(PES)和尼龙(nylon)会对烯啶虫胺和环氧虫啶产生一定吸附。而聚偏氟乙烯(PVDF)和聚四氟乙烯(PTFE)在价格上更有优势，所以本发明选用聚偏氟乙烯(PVDF)和聚四氟乙烯(PTFE)。
优选地，所述新烟碱为吡虫啉、啶虫脒、噻虫胺、噻虫啉、噻虫嗪、烯啶虫胺、环氧虫啶和氯噻啉中的至少一种。
根据本发明的一种优选的实施方式，所述系列混标溶液由所述新烟碱的标准物质和乙腈混匀得到，所述系列混标溶液的浓度为1.0ng/g，2.0ng/g， 5.0ng/g，10.0ng/g，20.0ng/g，50.0ng/g，100.0ng/g，200.0ng/g，500.0ng/g， 1000.0ng/g。
具体的，所述超高效液相色谱-串联质谱法选择电喷雾离子源正离子模式和多反应监测模式。
质谱检测条件为：三重四极杆质谱仪器为Waters TS-Q，电喷雾离子源正离子模式(ESI+)参数如下：毛细管电压3000V，锥孔电压35V，source offset电压55V，源温度150℃，脱溶剂温度450℃，锥孔气流150L/h，解吸附气流900L/h。仪器采用多反应监测模式(MRM)检测模式，数据采集和处理软件为MassLynxTM 4.1。
优选地，所述超高效液相色谱-串联质谱法的质谱检测中所述新烟碱的保留时间、母离子、锥孔电压、定量离子、碰撞能量1、定性离子、碰撞能量2如下：
根据本发明，所述超高效液相色谱-串联质谱法的液相色谱分离仪器的色谱柱选为HSS T3。
所述超高效液相色谱-串联质谱法的液相色谱检测中的流动相A相为含甲酸的纯净水，B相为乙腈。
所述A相的溶液中甲酸的体积百分比浓度为0.1％。
所述新烟碱的梯度洗脱程序如下：
液相色谱条件为：液相色谱分离仪器采用的是Waters公司的ACQUITY UPLC，色谱柱为HSS T3(1.8μm粒径；2.1mm×100mm)，色谱柱的温度为30℃。样品室温度为10℃，进样体积为1.5μL。
根据本发明，所述检测数据为所述新烟碱的色谱图和质谱图。
所述定性分析为通过所述色谱图中保留时间对比和质谱图中母离子与子离子碎片对比来定性所述新烟碱。
所述定量分析为积分所述系列混标溶液的色谱图，得到每一种新烟碱的线性方程Y＝aX+b，Y代表该新烟碱响应峰面积，X代表该新烟碱的浓度，对所述待测样品进行所述超高效液相色谱-串联质谱法检测，得到所述待测样品的响应峰面积，根据所述线性方程计算出所述待测样品中新烟碱的浓度。
下面通过实施例、和测试例对本发明进行更详细的说明。
在实施例中，所用仪器与试剂如下。
破壁机(中国LR-8000)，离心机(德国Hettich UNIVERSAL 320R) 多管混合涡旋器(美国Scientific Industries)。
新烟碱标准品(烯啶虫胺(纯度98.84％)，环氧虫啶(纯度92.70％，噻虫嗪(纯度99.65％)，噻虫胺(纯度99.12％)，吡虫啉(纯度98.55％)，氯噻啉(纯度97.46％)，啶虫脒(纯度99.78％)和噻虫啉(纯度99.68％)) 均购自德国Dr.Ehrenstorfer公司。
乙腈为色谱纯购自德国Merck KGaA；氯化钠和无水氯化钙购自中国 Sinopharm；无水硫酸钠购自中国福晨化学试剂公司；无水硫酸镁购自中国 innochem公司；甲酸(色谱纯)、乙酸(色谱纯)和氨水均购自中国innochem 公司；甲酸(质谱纯)购自中国的Honeywell公司；纯净水购自中国的娃哈哈公司。
QuEChERS净化管(15mL,内含MgSO4+C18,MgSO4+PSA和 MgSO4+C18+PSA)购自美国Agilent公司；石墨化炭黑(GCB)购自美国 Agilent公司；六种滤膜，其中GHP购自美国PALL公司，其余五种PTFE, PVDF,MCE,PES和nylon均购自中国安谱公司。
实施例
本实施例用于说明本发明的改进的QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法测定大白菜中新烟碱的方法。
(1)大白菜样品和标准样品准备
准备一颗新鲜的大白菜，剥取大白菜外层烂叶并切去白菜根部，用刀将剩余部分切成大约3cm块状，并将整颗白菜加入到破壁机中，随后研磨机调至中速档位，工作时间大约10-15min；准确称量新烟碱标准物质配置成浓度为0.14mg/g的混合标准储备液，并吸取一定量混合标准储备液，用乙腈稀释配成一系列浓度分别为1.0、2.0、5.0、10.0、20.0、50.0、100.0、200.0、 500.0、1000.0ng/g的混合标准工作液。
(2)大白菜样品的前处理
取10g经匀浆后白菜样品于50mL离心管中，向离心管加入10mL乙腈，放置在多管涡流混合器涡旋3min；向每只离心管分别加入4g无水 Na2SO4和1g NaCl，放置在多管涡流混合器涡旋1min，随后在离心机中以 5000rpm转速离心3min；取2mL上清液加入到含 50mg PSA+20mg GCB+300mg MgSO4净化剂的离心管中，放置在多管涡流混合器涡旋3min，随后在离心机中以5000rpm转速离心3min；取1mL 上清液通过0.22μm滤膜，待测。
(3)UPLC-MS/MS检测
液相色谱方法为：液相色谱分离仪器采用的是Waters公司的ACQUITY UPLC,色谱柱为HSS T3(1.8μm粒径；2.1mm×100mm)，色谱柱的温度为30℃。样品室温度为10℃，进样体积为1.5μL。流动相A为含0.1％甲酸的纯净水，B相为乙腈，目标分析物的梯度洗脱程序如表1所示：
表1梯度洗脱条件
(4)质谱条件
离子源：电喷雾离子源正离子模式(ESI+)；毛细管电压3000V，锥孔电压35V，source offset电压55V，源温度150℃，脱溶剂温度450℃，锥孔气流150L/h，解吸附气流900L/h。采集方式：多反应监测模式 (MRM)；新烟碱的质谱条件如表2所示。数据采集和处理软件为 MassLynxTM 4.1。
表2新烟碱的质谱条件
测试例1
对改进的QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法测定大白菜中新烟碱的方法的线性范围、检出限和定量限进行测试，测试方法为：采用空白大白菜添加低浓度新烟碱混标的方法制备样品，用改进的QuEChERS方法前处理和上机检测，以3倍信噪比确定检出限，以10倍信噪比确定定量限；使用一定体积的标准储备液，配制与待测大白菜样品相同基质的混合标准系列工作液，使其浓度分别为1.0、2.0、5.0、10.0、20.0、50.0、100.0、200.0、500.0、1000.0ng/g，以选定的目标分析物的定量离子峰面积与浓度做标准曲线，结果表明所有新烟碱标准曲线线性范围均在2.0-200.0ng/g，线性关系均大于0.999，测试结果如表3所示。
测试例2
对改进的QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法测定大白菜中新烟碱的方法的准确度和精密度进行测试，测试方法为：向空白大白菜样品中加入新烟碱混合标准溶液，制备三个不同浓度水平样品(10.0ng/g，50.0 ng/g，200.0ng/g)，每个浓度每一批次进行5个平行试验，分别进行3个批次。按照本发明的样品前处理方法和色谱条件进行分析测定，采用基质匹配混合标准工作液进行外标定量，计算得到相对加标回收率为 78.96–108.36％，日内相对标准偏差和日间相对标准偏差分别小于5.07％和 5.00％，准确度和精密度均符合多农残检测要求，测试结果如表3所示。
测试例3
对改进的QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法测定大白菜中新烟碱类农药的方法的基质效应进行测试，测试方法为：采用提取后添加法，取空白大白菜样品，按照本发明的样品前处理方法处理样品，得到1mL上清液后进行氮吹，选取浓度分别为1.0、2.0、5.0、10.0、20.0、50.0、100.0、 200.0、500.0、1000.0ng/g的混标溶液进行复溶；上机测试后，计算空白大白菜复溶液与同浓度混合标准工作溶液峰面积比，来评价基质效应对结果影响；按照基质效应计算公式进行评价(如公式1所示)，计算得新烟碱基质效应范围为-2.40到-10.63％，表明基质效应比较微弱，在实际样品的测试中可以忽略不计，测试结果如表3所示。
表3方法的线性范围、检出限、定量限、准确度、精密度和基质效应
综上，本发明采用改进的QuEChERS前处理技术结合UPLC-MS/MS方法进行大白菜中8种新烟碱类农药残留分析检测。该方法快速、简单、灵敏度高、基质效应可以忽略不计；8种新烟碱在2.0-200.0ng/g范围内线性良好，且线性关系均大于0.999；方法的准确度和精密度均满足多农残分析的检测要求。为大白菜中新烟碱的检测研究提供了一种高效、快速的分析手段。
以上已经描述了本发明的各实施例，上述说明是示例性的，并非穷尽性的，并且也不限于所披露的各实施例。在不偏离所说明的各实施例的范围和精神的情况下，对于本技术领域的普通技术人员来说许多修改和变更都是显而易见的。
Claims (10)
1.一种改进的QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法测定大白菜中新烟碱类农药的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1)对大白菜进行破碎和研磨，得到大白菜初样；
(2)用乙腈对所述大白菜初样中的新烟碱进行萃取，得到萃取液；
(3)取所述萃取液进行液液分配并离心分离，得到分配液；所述液液分配所用的相分配盐为氯化钠和无水硫酸钠，二者的质量比为1：3.5-4.5；
(4)取所述分配液的上清液进行分散固相萃取并离心分离，得到分散液；
(5)取所述分散液的上清液进行过滤，得到待测样品；
(6)将所述新烟碱的标准物质配制成系列混标溶液；
(7)采用超高效液相色谱-串联质谱法对所述待测样品和所述系列混标溶液进行检测，得到检测数据；
(8)对所述检测数据进行定性分析和/或定量分析，得到所述大白菜中新烟碱的含量。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法的参数包括所述萃取的萃取时间、所述相分配盐、所述分散固相萃取所用的净化剂、所述过滤所用的滤膜、所述离心分离的离心时间和速度；
所述萃取时间为3-4min；
所述净化剂为石墨化炭黑、伯仲胺和无水硫酸镁的混合物，三者的质量比为2：4.5-5.5：28-32；
所述滤膜为聚偏氟乙烯、聚四氟乙烯中的任意一种；
所述离心时间和速度分别为3-5min和5000-8000rpm。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述净化剂的最佳值通过柱后灌流方法得到，所述柱后灌流方法包括以下步骤：
(1)将空白样品的提取物通过所述超高效液相色谱的色谱柱进行液相分离；
(2)通过安装在所述色谱柱和离子源接口之间的T型连接器，以恒定流速注入新烟碱的混标溶液；
(3)所述串联质谱法的质谱仪在多反应监测模式下运行，产生所述提取物中新烟碱基质效应的色谱图；
(4)根据新烟碱在整个色谱运行时间内所述色谱图的信号响应波动来选择净化剂，所述信号波动最小对应的净化剂为最佳；
所述空白样品为不含所述新烟碱的大白菜样品；所述恒定流速为5-20μL/min；所述新烟碱的混标溶液的浓度为400-600ng/g。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，除所述净化剂外其余参数的最佳值均通过信号响应法获得，所述信号响应法包括以下步骤：
(1)改变任意一个参数的值，其余参数保持不变；
(2)采用所述超高效液相色谱-串联质谱法检测不同参数的值的待测样品；
(3)根据所述待测样品的色谱图计算信号响应峰面积，所述峰面积的最大值即对应该参数的最优值；
所述待测样品的浓度为10-500ng/g。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述新烟碱为吡虫啉、啶虫脒、噻虫胺、噻虫啉、噻虫嗪、烯啶虫胺、环氧虫啶和氯噻啉中的至少一种。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述系列混标溶液由所述新烟碱的标准物质和乙腈混匀得到，所述系列混标溶液的浓度为1.0ng/g，2.0ng/g，5.0ng/g，10.0ng/g，20.0ng/g，50.0ng/g，100.0ng/g，200.0ng/g，500.0ng/g，1000.0ng/g。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述超高效液相色谱-串联质谱法选择电喷雾离子源正离子模式和多反应监测模式。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述超高效液相色谱-串联质谱法的质谱检测中所述新烟碱的保留时间、母离子、锥孔电压、定量离子、碰撞能量1、定性离子、碰撞能量2如下：
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述超高效液相色谱-串联质谱法的液相色谱分离仪器的色谱柱选为HSS T3；
所述超高效液相色谱-串联质谱法的液相色谱检测中的流动相A相为含甲酸的纯净水，B相为乙腈；
所述A相的溶液中甲酸的体积百分比浓度为0.1％；
所述新烟碱的梯度洗脱程序如下：
10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述检测数据为所述新烟碱的色谱图和质谱图；
所述定性分析为通过所述色谱图中保留时间对比和质谱图中母离子与子离子碎片对比来定性所述新烟碱；
所述定量分析为积分所述系列混标溶液的色谱图，得到每一种新烟碱的线性方程Y＝aX+b，Y代表该新烟碱响应峰面积，X代表该新烟碱的浓度，对所述待测样品进行所述超高效液相色谱-串联质谱法检测，得到所述待测样品的响应峰面积，根据所述线性方程计算出所述待测样品中新烟碱的浓度。
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