CN115184246B - 一种利用cd155评价间充质干细胞生物学效力的方法 - Google Patents
一种利用cd155评价间充质干细胞生物学效力的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN115184246B CN115184246B CN202211113993.4A CN202211113993A CN115184246B CN 115184246 B CN115184246 B CN 115184246B CN 202211113993 A CN202211113993 A CN 202211113993A CN 115184246 B CN115184246 B CN 115184246B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- mesenchymal stem
- stem cells
- cells
- cell
- biological efficacy
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 110
- 102100029740 Poliovirus receptor Human genes 0.000 title claims abstract description 72
- 108010048507 poliovirus receptor Proteins 0.000 title claims abstract description 71
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 34
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 claims abstract description 31
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 claims abstract description 8
- 238000002372 labelling Methods 0.000 claims abstract description 5
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims abstract description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 86
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 26
- 210000003954 umbilical cord Anatomy 0.000 claims description 16
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 14
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 11
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 10
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 claims description 9
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 8
- GOZMBJCYMQQACI-UHFFFAOYSA-N 6,7-dimethyl-3-[[methyl-[2-[methyl-[[1-[3-(trifluoromethyl)phenyl]indol-3-yl]methyl]amino]ethyl]amino]methyl]chromen-4-one;dihydrochloride Chemical compound Cl.Cl.C=1OC2=CC(C)=C(C)C=C2C(=O)C=1CN(C)CCN(C)CC(C1=CC=CC=C11)=CN1C1=CC=CC(C(F)(F)F)=C1 GOZMBJCYMQQACI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 230000028327 secretion Effects 0.000 claims description 6
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 5
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 5
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 claims description 4
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 4
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 4
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 claims description 3
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 claims description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 abstract description 18
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 abstract description 17
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 abstract description 17
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 abstract description 13
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 abstract description 13
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 abstract description 12
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 abstract description 8
- 108010047620 Phytohemagglutinins Proteins 0.000 description 13
- 230000001885 phytohemagglutinin Effects 0.000 description 13
- 210000004271 bone marrow stromal cell Anatomy 0.000 description 10
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 10
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 9
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 9
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 7
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 7
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 6
- 238000010219 correlation analysis Methods 0.000 description 6
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 6
- 230000003076 paracrine Effects 0.000 description 6
- OZFAFGSSMRRTDW-UHFFFAOYSA-N (2,4-dichlorophenyl) benzenesulfonate Chemical compound ClC1=CC(Cl)=CC=C1OS(=O)(=O)C1=CC=CC=C1 OZFAFGSSMRRTDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000012591 Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline Substances 0.000 description 5
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 5
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 5
- 101000831007 Homo sapiens T-cell immunoreceptor with Ig and ITIM domains Proteins 0.000 description 4
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 4
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 102100024834 T-cell immunoreceptor with Ig and ITIM domains Human genes 0.000 description 4
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 4
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 4
- 210000002536 stromal cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 3
- BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N Phenolsulfonephthalein Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1(C=2C=CC(O)=CC=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 3
- 238000007600 charging Methods 0.000 description 3
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 description 3
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 3
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 3
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 3
- 230000003832 immune regulation Effects 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 229960003531 phenolsulfonphthalein Drugs 0.000 description 3
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 3
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 2
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 2
- 101000599940 Homo sapiens Interferon gamma Proteins 0.000 description 2
- 108091008036 Immune checkpoint proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000037982 Immune checkpoint proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 2
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 230000008614 cellular interaction Effects 0.000 description 2
- 239000003636 conditioned culture medium Substances 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- XEYBRNLFEZDVAW-ARSRFYASSA-N dinoprostone Chemical compound CCCCC[C@H](O)\C=C\[C@H]1[C@H](O)CC(=O)[C@@H]1C\C=C/CCCC(O)=O XEYBRNLFEZDVAW-ARSRFYASSA-N 0.000 description 2
- 229960002986 dinoprostone Drugs 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 210000003953 foreskin Anatomy 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 239000006210 lotion Substances 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 2
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 2
- XEYBRNLFEZDVAW-UHFFFAOYSA-N prostaglandin E2 Natural products CCCCCC(O)C=CC1C(O)CC(=O)C1CC=CCCCC(O)=O XEYBRNLFEZDVAW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 2
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 2
- 108010074708 B7-H1 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 102000000802 Galectin 3 Human genes 0.000 description 1
- 108010001517 Galectin 3 Proteins 0.000 description 1
- 101000586618 Homo sapiens Poliovirus receptor Proteins 0.000 description 1
- 101000699781 Homo sapiens Retrotransposon Gag-like protein 4 Proteins 0.000 description 1
- 101000831496 Homo sapiens Toll-like receptor 3 Proteins 0.000 description 1
- 101000669447 Homo sapiens Toll-like receptor 4 Proteins 0.000 description 1
- 101000611183 Homo sapiens Tumor necrosis factor Proteins 0.000 description 1
- 108091008028 Immune checkpoint receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000037978 Immune checkpoint receptors Human genes 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 108010064593 Intercellular Adhesion Molecule-1 Proteins 0.000 description 1
- 102100037877 Intercellular adhesion molecule 1 Human genes 0.000 description 1
- 102000003812 Interleukin-15 Human genes 0.000 description 1
- 108090000172 Interleukin-15 Proteins 0.000 description 1
- 101100407308 Mus musculus Pdcd1lg2 gene Proteins 0.000 description 1
- 206010061309 Neoplasm progression Diseases 0.000 description 1
- 102100026466 POU domain, class 2, transcription factor 3 Human genes 0.000 description 1
- 101710084413 POU domain, class 2, transcription factor 3 Proteins 0.000 description 1
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108700030875 Programmed Cell Death 1 Ligand 2 Proteins 0.000 description 1
- 102100024216 Programmed cell death 1 ligand 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100024213 Programmed cell death 1 ligand 2 Human genes 0.000 description 1
- 102100029131 Retrotransposon Gag-like protein 4 Human genes 0.000 description 1
- 238000012352 Spearman correlation analysis Methods 0.000 description 1
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 102100024324 Toll-like receptor 3 Human genes 0.000 description 1
- 102100039360 Toll-like receptor 4 Human genes 0.000 description 1
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 1
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 1
- 108010000134 Vascular Cell Adhesion Molecule-1 Proteins 0.000 description 1
- 102100023543 Vascular cell adhesion protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 108070000030 Viral receptors Proteins 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 1
- 235000011089 carbon dioxide Nutrition 0.000 description 1
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 239000002771 cell marker Substances 0.000 description 1
- 230000009087 cell motility Effects 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 230000017188 evasion or tolerance of host immune response Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000007365 immunoregulation Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 235000015110 jellies Nutrition 0.000 description 1
- 239000008274 jelly Substances 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000000207 lymphocyte subset Anatomy 0.000 description 1
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 210000005105 peripheral blood lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 238000001303 quality assessment method Methods 0.000 description 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 1
- 238000013441 quality evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 208000037816 tissue injury Diseases 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000005751 tumor progression Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
- G01N15/10—Investigating individual particles
- G01N15/14—Optical investigation techniques, e.g. flow cytometry
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56966—Animal cells
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- G01N2333/70596—Molecules with a "CD"-designation not provided for elsewhere in G01N2333/705
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2469/00—Immunoassays for the detection of microorganisms
- G01N2469/10—Detection of antigens from microorganism in sample from host
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Pathology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Virology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了一种利用CD155评价间充质干细胞生物学效力的方法,使用荧光标记的抗体标记间充质干细胞表面的膜蛋白CD155,并采用流式细胞仪检测细胞CD155的阳性率和平均荧光强度MFI,通过检测间充质干细胞表面CD155的表达水平来评价该间充质干细胞的生物学效力,所述生物学效力是指间充质干细胞的免疫抑制活性,通过间充质干细胞与活化外周血单个核细胞共培养,对外周血单个核细胞分泌IFN‑γ和TNF‑α的抑制能力,本发明不同于以往通过ELISA检测细胞因子或蛋白来评估间充质干细胞生物学效力的方法,本发明通过流式细胞仪检测间充质干细胞表面CD155的表达水平即可快速判断该细胞的生物学效力,简便快捷,具有较好的应用前景,有利于推广应用。
Description
技术领域
本发明涉及生物医学技术领域,尤其涉及一种利用CD155评价间充质干细胞生物学效力的方法。
背景技术
间充质干细胞是一群具有自我更新、多向分化的异质性的亚全能干细胞。已知的间充质干细胞具有免疫调控、促进血管新生、促进组织损伤修复等作用,其免疫调控主要通过旁分泌和直接接触介导,但具体机制尚不明确。目前已知的间充质干细胞介导免疫调控主要通过旁分泌的细胞因子完成,如PGE2,IDO,IL-10,TGF-beta等,同时其细胞表面的膜蛋白也被报道参与免疫调控过程,如ICAM-1,VCAM-1,TLR3,TLR4,PD-L1和PD-L2等(Mesenchymal stem cell immunomodulation: mechanisms and therapeuticpotential. Trends Pharmacol Sci.2020 Sep;41(9):653-664)。鉴于间充质干细胞的多种生物学功能,其具备药物属性,但由于其介导免疫调控的作用机理非常复杂并且难以确定标准品,而使得其生物效力评价成为其质量控制的难题。目前对于间充质干细胞药物的质量评价方法主要是检测其对活化外周血单个核细胞的增殖抑制和分泌TNF-α的抑制水平,以及对特定淋巴细胞亚群的检测(Th1/Treg/Th17),操作内容复杂且造价很高。考虑到间充质干细胞药物的批量检测的高额成本,企业和学校的科研工作者尝试使用替代性的功能指标来对间充质干细胞的生物学效力进行评估,即用其自身表达的关键的细胞因子或蛋白与其生物学效力建立联系,并以此作为其质量评价的方法。目前已知的用于评价间充质干细胞生物学效力的替代性标志物,包括公开号为CN109576334A的发明专利公开的PGE2,公开号为CN110938668的发明专利公开的TNFRI,公开号为CN102643909B的发明专利公开的Galectin-3等。但细胞因子的ELISA检测存在诸多问题,如细胞培养和细胞因子收集过程需要较长时间,且人为操作较多,步骤繁琐容易污染,细胞因子自身不稳定极容易降解,ELISA试剂盒的批间差异等。根据国际细胞治疗协会的建议,间充质干细胞免疫抑制活性可以作为其生物学效率的检测方法。为了缩短检测时间,减少误差,我们开发了本方法,通过流式细胞仪检测细胞表面的关键膜蛋白CD155来直接判断其生物学效力,方便快捷。
CD155(PVR)是Nectin样分子家族中的第五个成员,起着脊髓灰质炎病毒受体的作用,也被称为necl-5或PVR(脊髓灰质炎病毒受体)。CD155是作为免疫球蛋白样的粘附分子,被报道参与细胞运动、自然杀伤细胞(NK cells)和T细胞介导的免疫(Poliovirusreceptor: More than a simple viral receptor. Virus Res. 2017 Oct 15;242:1-6.)。最新的研究表明,CD155/TIGIT也是一个新的人类癌症的免疫检查点(CD155/TIGIT,anovel immune checkpoint in human cancers (Review). Oncol Rep.2021 Mar;45(3):835-845)。CD155在肿瘤进展过程中被上调,通过作用表达在自然杀伤 (NK)、CD8+ T、CD4+ T和调节性 T (Treg) 细胞上的抑制性检查点受体TIGIT,抑制T细胞和NK细胞的功能(Tightin cancer immunotherapy. J Immunother Cancer.2020 Sep;8(2):e000957),促进肿瘤细胞的增殖和迁移(The CD155/TIGIT axis promotes and maintains immune evasionin neoantigen-expressing pancreatic cancer. Cancer Cell. 2021 Oct11;39(10):1342-1360.)。
有意思的是,不同组织来源的间充质干细胞也被报道表达CD155,如骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stromal cells of the bone marrow and natural killer cells:cell interactions and cross modulation. J Cell Commun Signal. 2018 Dec;12(4):673-688),脐带间充质干细胞(Immunological impact of Wharton’s Jelly mesenchymalstromal cells and natural killer cell co-culture. Mol Cell Biochem. 2018 Oct;447(1-2):111-124),包皮间充质干细胞(Immunomodulatory effects of foreskinmesenchymal stromal cells on natural killer cells. J Cell Physiol. 2018 Jul;233(7):5243-5254),脂肪间充质干细胞(The impact of cell-expansion andinflammation on the immune-biology of human adipose tissue-derivedmesenchymal stromal cells. J Clin Med. 2020 Mar4;9(3):696.),但诸多研究主要集中于细胞表型的探索。仅有一篇研究论文表明MSC与IL2/IL15活化的NK细胞共培养时,CD155的表达可被下调,提示可能参与到MSC对NK细胞生物学活性的调控中(Mesenchymalstem cell-natural killer cell interactions: evidence that activated NK cellsare capable of killing MSCs, whereas MSCs can inhibit IL-2-induced NK-cellproliferation. Blood.2006 Feb15;107(4):1484-90)。
基于目前对于CD155在间充质干细胞中的研究及应用并不多,主要集中在间充质干细胞的表型研究上以及间充质干细胞对NK细胞的作用方面,而CD155用于评价间充质干细胞生物学效力尚未有相关报道,且用流式细胞术分析CD155的阳性率(positive rate)和平均荧光强度(MFI)来评估间充质干细胞生物学效力尚未有相关报道。MFI高低代表靶抗原表达丰度的高低,通过流式检测,比常规ELISA检测更方便。
有鉴于此,特提出本发明。
发明内容
本发明的目的是提供一种利用CD155评价间充质干细胞生物学效力的方法,不同于以往通过ELISA检测细胞因子或蛋白来评估间充质干细胞生物学效力,本发明通过流式细胞仪检测间充质干细胞表面CD155的表达水平即可快速判断该细胞的生物学效力,简便快捷,具有广阔的应用前景,有利于推广应用。
为了实现上述目的,本发明提供的一种利用CD155评价间充质干细胞生物学效力的方法,使用抗体标记间充质干细胞表面的膜蛋白CD155,并采用流式细胞仪检测细胞CD155的阳性率和平均荧光强度MFI,通过检测间充质干细胞表面CD155的表达水平来评价该间充质干细胞的生物学效力,所述生物学效力是指间充质干细胞的免疫抑制活性,通过间充质干细胞与活化的外周血单个核细胞共培养,对外周血单个核细胞分泌TNF-α和IFN-γ的抑制能力。
优选地,所述间充质干细胞为脐带、骨髓、胎盘或脂肪来源的间充质干细胞。
优选地,所述间充质干细胞为脐带来源的间充质干细胞。
优选地,具体包括如下步骤:
S1:收集待测细胞:消化收集培养的间充质干细胞,细胞计数后转至流式管中;
S2:标记流式抗体:将细胞悬液离心,去掉上清液,向细胞沉淀中分别加入荧光标记的抗体,涡旋混匀后放置于室温避光孵育或4℃冰箱内孵育,加入流式细胞洗液洗掉未结合的抗体,离心后加入流式细胞洗液重悬细胞,利用过滤膜过滤掉细胞团块后等待检测;
S3:流式细胞仪检测:利用流式细胞仪检测间充质干细胞表面CD155的阳性率和MFI;
S4:当间充质干细胞表面CD155的阳性率>90%且CD155 MFI>228时,判定该细胞具有免疫抑制的生物学效力。
优选地,所述S2中,细胞悬液的离心转速为1000-2500 rpm/5-10 min。
优选地,所述S2中,细胞悬液的离心转速为2000rpm/5min。
优选地,所述S2中,流式细胞洗液为添加2% FBS或2%白蛋白的PBS或DPBS。
优选地,所述S2中,清洗抗体后的离心转速为1000-2500 rpm/5-10 min。
优选地,所述S2中,清洗抗体后的离心转速为2000rpm/5min。
优选地,所述S2中,室温避光孵育时间为20-60min,4℃冰箱内孵育时间为30min-60min或过夜。
优选地,所述S2中,4℃冰箱内孵育时间为30min。
本发明提供的一种利用CD155评价间充质干细胞生物学效力的方法,具有如下有益效果。
1.相比于以往收集细胞分泌的上清,再用ELISA方法检测上清中细胞因子的方法,本发明直接消化收集细胞标记CD155抗体就可以进行流式检测获得CD155的阳性率和MFI。本发明省略了细胞培养、收集培养上清、分装冻存再复融、ELISA检测等步骤,避免了因为细胞因子不稳定容易降解的问题,操作步骤更加简便快捷,省时节力,在时间上更加经济高效,同时避免了可能存在的人为污染问题,且膜蛋白指标比细胞因子指标更加稳定,不易降解,容易检测。该方法可以应用在主细胞库、工作细胞库和成品阶段,直接检测抽样的样品,检测结果可以代表样本的真实情况。
2.本发明首次阐明间充质干细胞表面CD155的表达水平在一定范围内与其生物学效力水平(对外周血活化淋巴细胞分泌TNF-α和IFN-γ的抑制水平)呈显著正相关,并首次采用流式细胞术检测CD155阳性率和MFI的方法来评价间充干细胞的生物学效力。
附图说明
图1为对多样本间充质干细胞生物学效力和其基因转录组水平的FPKM值(FPKM即每千个碱基的转录每百万映射读取的碎片)进行相关性分析图;
图2 为对多样本脐带间充质干细胞进行CD155阳性率和平均荧光强度的流式细胞检测和分析示意图;
图3 为满足优选条件的多样本脐带间充质干细胞生物学效力和CD155表达量的相关性分析示意图(CD155阳性率>90%且CD155 MFI>228时,可以保证该间充质干细胞对活化PBMC分泌IFN-γ和TNF-α的抑制水平均超过70%)。
具体实施方式
下面结合具体实施例和附图对本发明做进一步说明,以助于理解本发明的内容。
本发明提供的一种利用CD155评价间充质干细胞生物学效力的方法,使用抗体标记间充质干细胞表面的膜蛋白CD155,并采用流式细胞仪检测细胞CD155的阳性率和平均荧光强度MFI,通过检测间充质干细胞表面CD155的表达水平来评价该间充质干细胞的生物学效力,所述生物学效力是指间充质干细胞的免疫抑制活性,通过间充质干细胞与活化的外周血单个核细胞共培养,对外周血单个核细胞分泌IFN-γ和TNF-α的抑制能力。所述间充质干细胞为脐带、骨髓、胎盘或脂肪来源的间充质干细胞。优选地,所述间充质干细胞为脐带来源的间充质干细胞。
具体包括如下步骤:
S1:收集待测细胞:消化收集培养的间充质干细胞,细胞计数后转至流式管中;
S2:标记流式抗体:将细胞悬液离心,去掉上清液,向细胞沉淀中分别加入PE-IgG和PE-CD155抗体,涡旋混匀后放置于室温避光孵育或4℃冰箱内孵育,加入流式细胞洗液洗掉未结合的抗体,离心后加入流式细胞洗液重悬细胞,利用过滤膜过滤掉细胞团块后等待检测;细胞悬液的离心转速为1000-2500 rpm/5-10 min。优选地,细胞悬液的离心转速为2000rpm/5min。流式细胞洗液为添加2% FBS或2%白蛋白的PBS或DPBS。清洗抗体后的离心转速为1000-2500 rpm/5-10 min。优选地,清洗抗体后的离心转速为2000rpm/5min。室温避光孵育时间为20-60min,4℃冰箱内孵育时间为30min-60min或过夜。优选地,4℃冰箱内孵育时间为30min。
S3:流式细胞仪检测:利用流式细胞仪检测间充质干细胞表面CD155的阳性率和MFI;
S4:当间充质干细胞表面CD155的阳性率>90%且CD155 MFI>228时,判定该细胞具有免疫抑制的生物学效力。
实施例1
对多样本间充质干细胞进行转录组测序及旁分泌生物学效力检测(n=20),具体实施方法为:
(1)准备24h条件培养基(24h-MSC-CM):按照2.67×104/cm2将细胞种于T75,待细胞贴壁后分别给予不同处理:不刺激组和刺激组(用细胞因子组合刺激24h)。收集培养上清,离心2000 rpm/10 min去掉细胞碎片后,将上清分装后冻存于-80 ℃;
(2)旁分泌效力检测:将制备的条件培养基预先放至4 ℃环境融化。用DF12无酚红完全培养基将外周血淋巴细胞(PBMCs)悬成106/ml的细胞悬液。按照100 μl PBMCs悬液混合100 μl 24h-MSC-CM种于96孔板后混匀放置于二氧化碳培养箱培养24h。取部分未加PHA刺激的PBMC悬液作为阴性对照,剩余PBMC细胞悬液加入一定浓度的PHA刺激使其终浓度为10μg/ml。收取24h培养的上清,按照2000 rpm/10 min离心去掉细胞碎片,将上清分装后冻存于-80 ℃待测。阴性对照组为单纯PBMC未加刺激,阳性对照组为植物凝集素(PHA)刺激的PBMC,实验组为多样本MSC的24h分泌组培养的经PHA活化的PBMC。
(3)用人IFN-γELISA试剂盒检测培养上清中的IFN-γ含量,并根据如下公式计算MSC 24h旁分泌组对PHA活化PBMC分泌IFN-γ的抑制程度,以抑制率(%)表示。
IFN-γ 抑制率(%)=[1- IFN-γ(MSC组)/ IFN-γ(PHA组)]*100%
(4)转录组测序:分别取不刺激组和刺激组约2×106 的间充质干细胞,用DPBS清洗后,分别用1ml Trizol充分裂解后,冻存并以干冰寄送测序。
(5)对多样本间充质干细胞生物学效力和其基因转录组水平的FPKM值进行相关性分析,分析结果如图1所示。
由图1可知:对多样本间充质干细胞生物学效力和其基因转录组水平的FPKM值进行相关性分析,发现不论在不刺激组还是刺激组,基因CD155的转录组水平的FPKM值均与其旁分泌生物学效力呈显著正相关。该结果从转录水平提示基因CD155是评估间充质干细胞生物学效力的潜在指标。
实施例2
检测来源于不同人的脐带间充质干细胞表面CD155的阳性率及其平均荧光强度水平,具体实施步骤如下:
对多样本间充质干细胞表面CD155的表达水平进行流式细胞检测:
消化收集脐带间充质干细胞,按照2×105细胞/每管转至流式管中,每种细胞准备两管。以2000 rpm/5 min离心后留细胞沉淀,加入流式细胞洗液(DPBS+2% FBS)洗细胞,再次离心后加入PE-IgG抗体和PE-CD155抗体(Biolgend),并涡旋混匀,放置于室温避光孵育20 min或4度冰箱避光孵育30min。加入流式细胞洗液清洗细胞,2000 rpm/5 min离心后加流式细胞洗液重悬后,滤膜过滤细胞团块后,采用流式细胞仪检测CD155的阳性率并计算MFI和二者相关性,结果如图2所示。
由图2可知:对多个不同人来源间充质干细胞的CD155的阳性率和MFI(A)进行流式检测和分析。结果显示不同个体来源脐带间充质干细胞表达CD155水平存在显著个体差异性,CD155的平均阳性率在92.68%±7.2%,CD155的MFI在286.6±92.9 。且对细胞表面CD155的阳性率和MFI进行Spearman相关性分析(B),结果提示二者呈显著正相关(r=0.6961,****p<0.0001)。
实施例3
对满足优选条件的多样本脐带间充质干细胞进行生物学效力评价,并结合其CD155的表达水平进行相关性分析。优选条件为间充质干细胞需满足CD155阳性率>90%且CD155 MFI>228时,具体实施方法为:
(1)对多样本间充质干细胞表面CD155的表达水平进行流式细胞检测:
消化收集脐带间充质干细胞,按照2×105细胞/每管转至流式管中,每种细胞准备两管。以2000 rpm/5 min离心后留细胞沉淀,加入流式细胞洗液(DPBS+2% FBS)洗细胞,再次离心后加入PE-IgG抗体和PE-CD155抗体(Biolgend),并涡旋混匀,放置于室温避光孵育20 min或4度冰箱避光孵育30min。加入流式细胞洗液清洗细胞,2000 rpm/5 min离心后加流式细胞洗液重悬后,滤膜过滤细胞团块后,采用流式细胞仪检测CD155的阳性率和MFI;
(2)对多样本细胞进行生物学效力检测:
共培养实验:消化计数脐带间充质干细胞,用DF12完全培养基(无酚红)将其重悬,按照每孔1×104细胞/100ul 铺96孔板。显微镜观察,轻轻拍动96孔板,使细胞均匀分布后,放置于二氧化碳培养箱培养。用DF12完全培养基(无酚红)重悬新鲜的外周血单个核细胞(PBMCs)。取部分未加刺激的细胞用于阴性对照,剩余细胞加入PHA促使其活化。待4-6小时,间充质干细胞贴壁后,按照每孔1×105细胞/100μl 将PBMCs悬液加入MSCs中,再次混匀。阴性对照组为未活化的PBMC,阳性对照组为PHA活化的PBMC,实验组为间充质干细胞和经PHA活化的PBMC共培养。培养72h后收集上清,并按照2000rpm/10min离心,吸取细胞培养上清,并将上清分装冻存于-80 ℃,准备检测上清中IFN-γ和TNF-α的含量。
用人IFN-γ和TNF-αELISA试剂盒(欣博盛)检测上清中的表达水平并根据如下公式计算抑制率(%):
IFN-γ抑制率 (%)=[1-IFN-γ(MSC组)/IFN-γ(PHA组)]*100%
TNF-α抑制率 (%)=[1-TNF-α(MSC组)/TNF-α(PHA组)]*100%
(3)对多样本间充质干细胞的CD155表达量与其对活化PBMC分泌IFN-γ和TNF-α的抑制率进行相关性分析,分析结果如图3所示。
由图3可知:对满足优选条件,即CD155阳性率>90%且CD155 MFI>228的多个不同人来源间充质干细胞的CD155的阳性率(A)进行检测并对MFI(B)进行分析。将多个样本间充质干细胞分别与活化PBMC共培养72小时,收集共培养上清检测其中TNF-α 和IFN-γ的含量并计算其对活化PBMC分泌TNF-α(C)和IFN-γ(E)的抑制率。通过对多个样本间充质干细胞CD155MFI和其对活化PBMC分泌IFN-γ和TNF-α的抑制率进行spearman相关性分析后发现,CD155MFI分别与TNF-α抑制率(D)和IFN-γ抑制率(F)呈显著正相关。同时,满足该优选条件的间充质干细胞对活化PBMC分泌TNF-α(C)和IFN-γ(E)的抑制水平超过70%。
本发明是在间充质干细胞基础研究的过程中,通过转录组测序,生物学效力分析以及流式细胞检测偶然发现的。
(1)通过流式细胞术检测多个不同个体来源的脐带间充质干细胞样本,均发现CD155在细胞表面高表达,这与其普遍具备的免疫调节功能相对应;
(2)转录组测序结合生物学效力进行相关性分析,从基因的转录水平发现间充质干细胞基因CD155的转录水平与其生物学效力呈显著正相关。
(3)对多样本的脐带间充质干细胞进行流式检测,结果提示CD155的MFI与其阳性率呈显著正相关。
(4)当CD155阳性率>90%且CD155 MFI>228时,该间充质干细胞与PHA活化PBMC共培养72小时,可以显著抑制其分泌IFN-γ和TNF-α超过70%以上。
本发明首次阐明间充质干细胞表面CD155的表达水平与其生物学效力水平(对外周血活化PBMC分泌IFN-γ和TNF-α的抑制水平)呈显著正相关,并首次采用流式细胞术检测关键膜蛋白CD155的MFI来评价间充干细胞的生物学效力。相比于以往培养细胞,收集培养上清、分装、冻存、融化,再用ELISA方法检测上清中的细胞因子,本发明取新鲜细胞后直接标记抗体检测,省略了收集培养上清、分装、冻存、融化和ELISA检测等多个步骤,直接使用抗体标记细胞表面的膜蛋白CD155后即可采用流式细胞仪检测,操作步骤更加简便快捷,省时节力,在时间上更加经济高效,同时避免了可能存在的人为污染问题,且膜蛋白指标比细胞因子指标更加稳定,不易降解,容易检测。
本文中应用了具体个例对发明构思进行了详细阐述,以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的核心思想。应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离该发明构思的前提下,所做的任何显而易见的修改、等同替换或其他改进,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (4)
1.一种利用CD155评价间充质干细胞生物学效力的方法,其特征在于,使用荧光标记的抗体标记间充质干细胞表面的膜蛋白CD155,并采用流式细胞仪检测细胞CD155的阳性率和平均荧光强度MFI,通过检测间充质干细胞表面CD155的表达水平来评价该间充质干细胞的生物学效力,所述生物学效力是指间充质干细胞的免疫抑制活性,通过间充质干细胞与活化的外周血单个核细胞共培养,对外周血单个核细胞分泌TNF-α和IFN-γ的抑制能力。
2.据权利要求1所述的一种利用CD155评价间充质干细胞生物学效力的方法,其特征在于,所述间充质干细胞为脐带、骨髓、胎盘或脂肪来源的间充质干细胞。
3.根据权利要求2所述的一种利用CD155评价间充质干细胞生物学效力的方法,其特征在于,具体包括如下步骤:
S1:收集待测细胞:消化收集培养的间充质干细胞,细胞计数后转至流式管中;
S2:标记流式抗体:将细胞悬液离心,去掉上清液,向细胞沉淀中分别加入荧光标记的抗体,涡旋混匀后放置于室温避光孵育或4℃冰箱内孵育,加入流式细胞洗液洗掉未结合的抗体,离心后加入流式细胞洗液重悬细胞,利用过滤膜过滤掉细胞团块后等待检测;
S3:流式细胞仪检测:利用流式细胞仪检测间充质干细胞表面CD155的阳性率和MFI;
S4:当间充质干细胞表面CD155的阳性率>90%且CD155 MFI>228时,判定该细胞具有免疫抑制的生物学效力。
4.权利要求1-3任一所述的一种利用CD155评价间充质干细胞生物学效力的方法,其特征在于,用于细胞库及细胞注射液质量检测标准的制定。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202211113993.4A CN115184246B (zh) | 2022-09-14 | 2022-09-14 | 一种利用cd155评价间充质干细胞生物学效力的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202211113993.4A CN115184246B (zh) | 2022-09-14 | 2022-09-14 | 一种利用cd155评价间充质干细胞生物学效力的方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN115184246A CN115184246A (zh) | 2022-10-14 |
CN115184246B true CN115184246B (zh) | 2023-07-04 |
Family
ID=83524216
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202211113993.4A Active CN115184246B (zh) | 2022-09-14 | 2022-09-14 | 一种利用cd155评价间充质干细胞生物学效力的方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN115184246B (zh) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN115356487B (zh) * | 2022-10-19 | 2023-06-16 | 天津昂赛细胞基因工程有限公司 | 一种利用cd276评价间充质干细胞生物学效力的方法 |
Family Cites Families (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
AU2003901668A0 (en) * | 2003-03-28 | 2003-05-01 | Medvet Science Pty. Ltd. | Non-haemopoietic precursor cells |
WO2005056777A1 (ja) * | 2003-12-10 | 2005-06-23 | Hitachi Medical Corporation | 接着性幹細胞分画並びにその分離方法、品質管理方法及び品質管理装置 |
CN101525594B (zh) * | 2009-04-17 | 2011-04-20 | 中国医学科学院血液学研究所 | 一种培养间充质干细胞的低血清浓度完全培养基和利用该培养基培养间充质干细胞的方法 |
CN104357383A (zh) * | 2014-10-11 | 2015-02-18 | 张炳强 | 人脂肪间充质干细胞制备方法及其在制备疾病药物的应用 |
WO2016179288A1 (en) * | 2015-05-04 | 2016-11-10 | University Of Florida Research Foundation, Inc. | Novel regulatory-cells, method for their isolation and uses |
US11505782B2 (en) * | 2018-06-04 | 2022-11-22 | Calidi Biotherapeutics, Inc. | Cell-based vehicles for potentiation of viral therapy |
JP2022529280A (ja) * | 2019-04-17 | 2022-06-20 | チャ バイオテック カンパニー リミテッド | 抗癌活性が増大されたナチュラルキラー細胞、及びその免疫治療用途 |
CN113584116A (zh) * | 2021-08-19 | 2021-11-02 | 深圳科诺医学检验实验室 | 一种间充质干细胞免疫调控功能的检测方法 |
-
2022
- 2022-09-14 CN CN202211113993.4A patent/CN115184246B/zh active Active
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN115184246A (zh) | 2022-10-14 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Mareschi et al. | Immunoregulatory effects on T lymphocytes by human mesenchymal stromal cells isolated from bone marrow, amniotic fluid, and placenta | |
Bárcia et al. | What makes umbilical cord tissue‐derived mesenchymal stromal cells superior immunomodulators when compared to bone marrow derived mesenchymal stromal cells? | |
CN110675914A (zh) | 一种筛选肿瘤特异性t细胞及tcr的方法 | |
CN115184246B (zh) | 一种利用cd155评价间充质干细胞生物学效力的方法 | |
CN101643719A (zh) | 一种简化的脐带间充质干细胞分离培养方法及其在类风湿关节炎治疗中的应用 | |
CN111484972B (zh) | 一种从儿童包皮培养获得具备多向分化潜能和免疫调节功能间充质干细胞的方法 | |
CN116376828B (zh) | 一种诱导CD4+T细胞生成Treg细胞的方法及应用 | |
CN114940969A (zh) | 一种用于提高间充质干细胞抗炎和免疫抑制功能的组合物 | |
CN114958766A (zh) | 一种衰老细胞模型的构建方法 | |
Conboy et al. | Preparation of adult muscle fiber-associated stem/precursor cells | |
CN112094804B (zh) | 一种异质性干细胞群、其制备方法及用途 | |
CN115651076A (zh) | 人骨髓间充质干细胞来源凋亡囊泡的表面标志物及其应用 | |
Ferreira et al. | Reprogramming Cancer Cells to Antigen-presenting Cells | |
CN112159790B (zh) | 从围产期组织中纯化多能血管祖细胞的方法 | |
CN115356487B (zh) | 一种利用cd276评价间充质干细胞生物学效力的方法 | |
CN1673358A (zh) | 一种从骨实质中分离间充质干/祖细胞的方法 | |
WO2021197459A1 (zh) | 从人经血中获得宫内膜间充质干细胞的方法 | |
EP3129469B1 (en) | Cell-surface marker of early msc aging | |
CN111979186B (zh) | 一种快速高效体外扩增人间充质干细胞的方法及应用 | |
CN109609463B (zh) | 一种宫颈癌肿瘤原代细胞分离及培养方法 | |
CN117949372A (zh) | 利用cd273评价间充质干细胞生物学效力的方法 | |
CN110904052A (zh) | 一种snk细胞的培养方法 | |
CN116064545B (zh) | 一种调控sle患者b淋巴细胞活化或增殖的生物标志物及应用 | |
CN109735566B (zh) | 一种增强腺病毒载体生物制品感染靶细胞的方法 | |
CN108753685B (zh) | 一种表达c-Kit的人主动脉血管壁干细胞的分离、筛选、培养及功能鉴定方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |