CN115181117B - 一种s构型手性分子化合物及其制备方法和作为疫苗佐剂的应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于生物制剂技术领域，具体涉及一种S构型手性分子化合物及其制备方法和作为疫苗佐剂的应用。本发明提供的S构型手性分子化合物具有式1所示结构。本发明以乙酰基作为连接子，以具有S构型的S‑4,12‑二羟基[2.2]对环芳烷作为手性框架将非手性的免疫调节分子雷西莫特修饰到手性框架中，得到的S构型手性分子化合物，不仅具有结构稳定性高的特点，且与常用铝佐剂相比，本发明提供的S构型手性分子化合物能够更好增强体液免疫应答效果，诱导引起更强烈的特异性抗体反应，产生更高水平的特异性IgG，同时拥有更强的交叉中和能力。

Description

一种S构型手性分子化合物及其制备方法和作为疫苗佐剂的 应用

技术领域

本发明属于生物制剂技术领域，具体涉及一种S构型手性分子化合物及其制备方法和作为疫苗佐剂的应用。

背景技术

研究证实，在疫苗的制备过程中，佐剂作为能同抗原一起或预先注射到机体内能增强免疫原性或改变免疫反应类型的物质，受到研究者在新型、高效疫苗复合物的研发中的重视。佐剂的生物作用包括以下几个方面：抗原物质混合佐剂注入机体后，改变了抗原的物理性状，可使抗原物质缓慢地释放，延长了抗原的作用时间；佐剂吸附了抗原后，增加了抗原的表面积，使抗原易于被抗原呈递细胞吞噬；佐剂能刺激抗原呈递细胞对抗原的处理；佐剂可促进淋巴细胞之间的接触，增强辅助T细胞的作用；可刺激致敏淋巴细胞的分裂和浆细胞产生抗体。

佐剂是疫苗生产中的重要组成成分，尤其对提高DNA疫苗和亚单位蛋白质疫苗的免疫效果有很大帮助。目前，市售的常用佐剂包括铝盐佐剂，但是铝盐佐剂在诱导新型冠状病毒免疫时，存在免疫应答效果不足，诱导产生的IgG抗体水平较低，且对新冠病毒突变株中和能力弱等多方面的问题。同时，市售的疫苗佐剂存在类型匮乏，且知识产权多数为国外公司企业所有，因此，开展新型疫苗佐剂研究，丰富国内疫苗佐剂的种类具有重要的市场意义和价值。

发明内容

本发明的目的在于提供一种S构型手性分子化合物及其制备方法和作为疫苗佐剂的应用，本发明提供的S构型手性分子化合物相较于铝佐剂具有更好增强体液免疫应答效果，同时拥有更强的交叉中和能力。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

本发明提供了一种S构型手性分子化合物，具有式1所示结构：

本发明提供了上述技术方案所述的S构型手性分子化合物的制备方法，包括以下步骤：

将S-4,12-二羟基[2.2]对环芳烷、卤代乙酸甲酯和无机碱催化剂溶解于极性有机溶剂中进行偶联反应，得到式2所示结构的第一中间产物；

将所述第一中间产物的醇溶液依次在碱性溶液和酸性溶液中进行水解反应，得到式3所示结构的第二中间产物；

将所述的第二中间产物、雷西莫特、有机缩合剂和有机胺催化剂溶解于有机溶剂中进行酰胺化反应，得到式1所示结构的手性分子化合物。

优选的，所述S-4,12-二羟基[2.2]对环芳烷和卤代乙酸甲酯的摩尔比为1:(5～10)。

优选的，所述第二中间产物和雷西莫特的摩尔比为1:(2～3)。

优选的，所述偶联反应的温度为50～70℃，所述偶联反应的保温时间为12～24h。

优选的，所述酰胺化反应的温度为室温，所述酰胺化反应的保温时间为18～24h。

本发明提供了上述技术方案所述的S构型手性分子化合物或上述技术方案所述的制备方法制备得到的S构型手性分子化合物作为疫苗佐剂在制备疫苗中的的应用。

优选的，所述疫苗为抗病毒疫苗。

优选的，所述抗病毒疫苗为抗新型冠状病毒疫苗。

本发明提供一种疫苗，包括疫苗活性成分和疫苗佐剂，所述疫苗佐剂为权利要求1上述技术方案所述的S构型手性分子化合物或上述技术方案所述的制备方法制备得到的S构型手性分子化合物。

本发明提供一种S构型手性分子化合物，具有式1所示结构：

本发明提供的S构型手性分子化合物，以乙酰基作为连接子(linker)，以具有S构型的S-4,12-二羟基[2.2]对环芳烷作为手性框架将非手性的免疫调节分子雷西莫特修饰到手性框架中，得到S构型手性分子化合物；其中S-4,12-二羟基[2.2]对环芳烷刚性分子结构具有手性强度高的特点，雷西莫特作为一种免疫调控分子，可作用于Toll样受体7和8，通过TLR7-MyD88依赖的信号通路诱导干扰素α以及其他细胞因子的合成，进而激活天然免疫系统，同时雷西莫特同样具有化学结构刚性的特点，从而，本发明得到的S-4,12-二羟基[2.2]对环芳烷修饰雷西莫特的S构型手性分子化合物不仅具有结构稳定性高的特点，且本发明提供的S构型手性分子化合物能够更好增强体液免疫应答效果，诱导引起更强烈的抗体反应，产生更高水平的IgG，同时拥有更强的交叉中和能力。

本发明提供上述技术方案所述的S构型手性分子化合物的制备方法，包括以下步骤：将S-4,12-二羟基[2.2]对环芳烷、卤代乙酸甲酯和无机碱催化剂溶解于极性有机溶剂中进行偶联反应，得到式2所示结构的第一中间产物；将式2所示结构的第一中间产物的醇溶液依次在碱性溶液和酸性溶液中进行水解反应，得到式3所示结构的第二中间产物；将所述第二中间产物、雷西莫特、有机缩合剂和有机胺催化剂溶解于有机溶剂中进行酰胺化反应，得到式1所示结构的手性分子化合物。本发明提供的制备方法通过依次进行偶联反应、水解反应和酰胺化反应成功通过手性修饰制备得到S-4,12-二羟基[2.2]对环芳烷修饰雷西莫特的S构型手性分子化合物，本发明提供的制备方法过程简单，可操作性强，适宜工业化生产。

附图说明

图1为本发明实施例1提供的S构型手性分子化合物的制备流程图；

图2为本发明实施例1制备的第二中间产物的质谱图；

图3为本发明实施例1制备的S构型手性分子化合物的质谱图；

图4为本发明对比例1提供的R构型手性分子化合物的制备流程图；

图5为本发明对比例1制备的第四中间产物的质谱图；

图6为本发明对比例1制备的R构型手性分子化合物的质谱图；

图7为本发明实施例1和对比例1使用的原料和制备的S/R构型手性分子化合物圆二色谱结果；

图8为本发明实施例1和对比例1制备的S/R构型手性分子化合物ELISA实验结果；

图9为本发明实施例1和对比例1制备的S/R构型手性分子化合物Wuhan株中和结果；

图10为本发明实施例1和对比例1制备的S/R构型手性分子化合物Alpha株中和结果；

图11为本发明实施例1和对比例1制备的S/R构型手性分子化合物N501Y株中和结果；

图12为本发明实施例1和对比例1制备的S/R构型手性分子化合物Delta株中和结果；

图13为本发明实施例1和对比例1制备的S/R构型手性分子化合物Omicron株中和结果。

具体实施方式

本发明提供了本发明提供了一种S构型手性分子化合物，具有式1所示结构：

本发明提供的S构型手性分子化合物，以乙酰基作为连接子(linker)，以具有S构型的S-4,12-二羟基[2.2]对环芳烷作为手性框架将非手性的免疫调节分子雷西莫特修饰到手性框架中，得到的S构型手性分子化合物不仅具有结构稳定性高的特点，且本发明提供的S构型手性分子化合物能够更好增强体液免疫应答效果，诱导引起更强烈的抗体反应，产生更高水平的IgG，同时拥有更强的交叉中和能力。

本发明提供了上述技术方案所述的S构型手性分子化合物的制备方法，包括以下步骤：

将S-4,12-二羟基[2.2]对环芳烷、卤代乙酸甲酯和无机碱催化剂溶解于极性有机溶剂中进行偶联反应，得到式2所示结构的第一中间产物；

将所述第一中间产物的醇溶液依次在碱性溶液和酸性溶液中进行水解反应，得到式3所示结构的第二中间产物；

将所述第二中间产物、雷西莫特、有机缩合剂和有机胺催化剂溶解于有机溶剂中进行酰胺化反应，得到式1所示结构的手性分子化合物。

在本发明中，若无特殊说明，所有制备原料/组分均为本领域技术人员熟知的市售产品。

本发明将S-4,12-二羟基[2.2]对环芳烷、卤代乙酸甲酯和无机碱催化剂溶解于极性有机溶剂中进行偶联反应，得到式2所示结构的第一中间产物；

在本发明中，所述S-4,12-二羟基[2.2]对环芳烷的具体结构如式4所示：

在本发明中，所述S-4,12-二羟基[2.2]对环芳烷的化学式为C₁₆H₁₆O₂。

在本发明中，所述S-4,12-二羟基[2.2]对环芳烷的的相对分子质量为240.12。

在本发明中，所述卤代乙酸甲酯具体优选为氯代乙酸甲酯。

在本发明中，所述无机碱催化剂具体优选为碳酸铯。

在本发明中，所述极性有机溶剂具体优选为N,N-二甲基甲酰胺(DMF)。

在本发明中，所述S-4,12-二羟基[2.2]对环芳烷和所述卤代乙酸甲酯的摩尔比优选为1:(5～10)，更优选为1:6.02。

在本发明中，所述S-4,12-二羟基[2.2]对环芳烷和所述无机碱催化剂的摩尔比优选为1:(5～10)，更优选为1:6.02。

本发明对所述极性有机溶剂的用量没有特殊要求，将所述S-4,12-二羟基[2.2]对环芳烷、卤代乙酸甲酯和无机碱催化剂完全溶解即可。

本发明对S-4,12-二羟基[2.2]对环芳烷、卤代乙酸甲酯和无机碱催化剂溶解于极性有机溶剂中的具体实施过程没有特殊要求。

在本发明中，所述偶联反应的温度优选为50～70℃，更优选为60℃。

在本发明中，所述偶联反应的保温时间优选为12～24h，更优选为20h。

在本发明中，所述偶联反应得到偶联反应液，本发明优选对所述偶联反应液进行后处理，得到式2所示结构的第一中间产物。在本发明中，所述后处理优选包括：依次进行固液分离、除去极性有机溶剂、加水复溶后萃取和除去有机萃取剂。本发明优选对降温至室温的偶联反应液进行固液分离，在本发明中，所述固液分离具体优选为过滤，本发明优选通过所述固液分离去除固态的无机碱催化剂。本发明优选通过旋转蒸发去除所述极性有机溶剂，本发明对所述旋转蒸发的具体实施过程没有特殊要求。在本发明中，所述萃取使用的萃取剂具体优选乙酸乙酯，本发明优选通过旋转蒸发去除萃取后的有机相中的有机萃取剂。本发明对所述旋转蒸发的具体实施过程没有特殊要求。

得到式2所示结构的第一中间产物后，本发明所述第一中间产物的醇溶液依次在碱性溶液和酸性溶液中进行水解反应，得到式3所示结构的第二中间产物；

在本发明中，所述第一中间产物的醇溶液具体优选为第一中间产物的乙醇溶液。

本发明对所述第一中间产物的醇溶液中第一中间产物的质量含量没有特殊要求。

在本发明中，所述碱性溶液具体优选为NaOH溶液。

在本发明中，所述第一中间产物的醇溶液在碱性溶液中进行水解反应时的pH值优选为12。

在本发明中，所述第一中间产物的醇溶液在NaOH溶液中发生水解反应，生成醇钠。

在本发明中，所述第一中间产物的醇溶液在碱性溶液中进行水解反应得到碱性水解反应液，本发明优选对所述碱性水解反应液进行除去水解反应溶剂(水和乙醇)，得到碱性水解产物，将所述碱性水解产物加水复溶后加入乙酸乙酯萃取，保留水相并在酸性溶液中水解反应。本发明优选通过旋转蒸发去除水解反应溶剂，本发明对所述旋转蒸发的具体实施过程没有特殊要求。

在本发明中，所述碱性水解产物加水复溶后在酸性溶液中水解反应时的pH值优选为2。在本发明中，所述酸性溶液具体优选为硫酸溶液。

在本发明中，在酸性溶液中水解反应后得到酸性水解液，本发明优选对所述酸性水解液进行后处理，得到式3所示结构的第二中间产物。在本发明中，所述后处理优选包括：依次进行二次萃取得到有机相和除去有机萃取剂。在本发明中，所述二次萃取的的萃取剂优选为乙酸乙酯。本发明优选通过旋转蒸发去除萃取后的有机相中的有机萃取剂。本发明对所述旋转蒸发的具体实施过程没有特殊要求。

本发明由式2所示结构的第一中间产物制备式3所示结构的第二中间产物时，采用先在碱性溶液中进行水解反应得到醇钠，然后在酸性溶液中进行水解反应得到-OH，能够有效提高式3所示结构的第二中间产物的产率。

得到式3所示结构的第二中间产物后，本发明将所述第二中间产物、雷西莫特、有机缩合剂和有机胺催化剂溶解于有机溶剂中进行酰胺化反应，得到式1所示结构的手性分子化合物。

在本发明中，所述雷西莫特具有式5所示结构：

在本发明中，所述雷西莫特的化学式为C₁₇H₂₂N₄O₂。

在本发明中，所述雷西莫特的相对分子质量为314.39。

在本发明中，所述有机缩合剂具体优选为2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)。

在本发明中，所述有机胺催化剂具体优选为N,N-二异丙基乙胺(DIPEA)。

在本发明中，所述有机溶剂具体优选为DMF。

在本发明中，所述第二中间产物和雷西莫特的摩尔比优选为1:(2～3)，更优选为1:2。

在本发明中，所述第二中间产物和有机缩合剂的摩尔比优选为1:3。

在本发明中，所述第二中间产物和有机胺催化剂的摩尔比优选为1:6。

本发明对所述有机溶剂的用量没有特殊要求，能够确保所述第二中间产物、雷西莫特、有机缩合剂和有机胺催化剂完全溶解即可。

在本发明中，所述酰胺化反应的温度优选为室温。

在本发明中，所述酰胺化反应的保温时间优选为18～24h。

在本发明中，所述酰胺化反应后得到酰胺化反应液，本发明优选对所述酰胺化反应液进行后处理，得到式1所示结构的手性分子化合物。在本发明中，所述后处理优选包括依次进行：萃取和干燥。在本发明中，所述萃取优选将所述酰胺化反应液、乙酸乙酯和水混合进行萃取得到萃取有机相。本发明优选对所述有机相进行干燥，在本发明中，所述干燥具体优选为无水硫酸钠干燥，本发明所述无水硫酸钠干燥的具体实施过程没有特殊要求。

本发明提供了上述技术方案所述的S构型手性分子化合物或上述技术方案所述的制备方法制备得到的S构型手性分子化合物作为疫苗佐剂在制备疫苗中的应用。

在本发明中，所述疫苗具体优选为抗病毒疫苗。

在本发明中，所述抗病毒疫苗具体优选为抗新型冠状病毒疫苗。

在本发明中，所述抗新型冠状病毒疫苗具体优选为新型冠状病毒RBD蛋白疫苗。

在本发明的具体实施例中，所述新型冠状病毒RBD蛋白疫苗具体为新冠病毒重组蛋白疫苗。

本发明提供了一种疫苗，包括免疫活性成分和疫苗佐剂，所述疫苗佐剂为上述技术方案所述的S构型手性分子化合物或上述技术方案所述的制备方法制备得到的S构型手性分子化合物。

在本发明中，所述疫苗中，所述免疫活成成分和疫苗佐剂的质量比具体优选为10:13。

在本发明中，所述疫苗中，所述免疫活成成分具体优选为新型冠状病毒RBD蛋白。

在本发明中，所述疫苗优选进行肌肉注射免疫。

为了进一步说明本发明，下面结合附图和实施例对本发明提供的上述技术方案进行详细地描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。

在本发明中，实施例中使用的原料的种类及来源为：R/S-4,12-二羟基[2.2]对环芳烷购自大赛璐公司；Cs₂CO₃、氯乙酸甲酯、NaOH、H₂SO₄、雷西莫特、HATU、DIPEA、DMF等购自上海泰坦科技有限公司；PBS购自美国Gibco公司。

实施例1

按照图1所述的合成路线图，将20.00mg S-4,12-二羟基[2.2]对环芳烷(0.083mmol)、54.19mg氯代乙酸甲酯S-4,12-二羟基[2.2]对环芳烷和162.70mg碳酸铯(0.499mmol)加入25mL圆底烧瓶中，加入DMF中，溶解，60℃油浴反应20h，反应结束后首先过滤除去碳酸铯，之后旋干，再用乙酸乙酯萃取，最后再旋干，得到式2所述结构的第一中间产物；

将式2所述结构的第一中间产物用乙醇复溶，之后向其中加入氢氧化钠溶液至pH＝12，然后旋干，加入水复溶并加入乙酸乙酯萃取，保留水相；向水相中加入硫酸调节pH为2，加入乙酸乙酯萃取，保留油相、旋干油相中的乙酸乙酯，得到式3所示结构的第二中间产物S-ACIDP，质谱图如图2所示；

将5.60mg式3所示结构的第二中间产物(0.015mmol)、9.72mg雷西莫特(0.030mmol)、17.62mg HATU(0.045mmol)和11.98mg DIPEA(0.090mmol)依次加入10mL圆底烧瓶中，并加入DMF溶解，室温反应24h后终止反应，首先加入乙酸乙酯和水进行萃取，保留油相，通过无水硫酸钠干燥，之后旋干油相去除溶剂，得到产物式1所示结构的S构型手性分子化合物，记为S-ResP，质谱图如图3所示；

对比例1

按照图4所述的合成路线图，将20.00mg R-4,12-二羟基[2.2]对环芳烷(0.083mmol)、54.19mg氯代乙酸甲酯S-4,12-二羟基[2.2]对环芳烷和162.70mg碳酸铯(0.499mmol)加入25mL圆底烧瓶中，加入DMF中，溶解，60℃油浴反应20h，反应结束后首先过滤除去碳酸铯，之后旋干，再用乙酸乙酯萃取，最后再旋干，得到式7所述结构的第三中间产物；

其中，R-4,12-二羟基[2.2]对环芳烷的结构式如式6所示：

将式7所述结构的第三中间产物用乙醇复溶，之后向其中加入氢氧化钠溶液至pH＝12，然后旋干，加入水复溶并加入乙酸乙酯萃取，保留水相；向水相中加入硫酸调节pH为2，加入乙酸乙酯萃取，保留油相、旋干油相中的乙酸乙酯，得到式8所示结构的第四中间产物S-ACIDP，质谱图如图5所示；

将5.60mg式8所示结构的第四中间产物(0.015mmol)、9.72mg雷西莫特(0.030mmol)、17.62mg HATU(0.045mmol)和11.98mg DIPEA(0.090mmol)依次加入10mL圆底烧瓶中，并加入DMF溶解，室温反应24h后终止反应，首先加入乙酸乙酯和水进行萃取，保留油相，通过无水硫酸钠干燥，之后旋干油相去除溶剂，得到产物式9所示结构的R构型手性分子化合物，记为R-ResP，质谱图如图6所示。

测试例1

用圆二色谱仪表征同等浓度(0.068mmol/L)下的手性框架R/S-4,12-二羟基[2.2]对环芳烷及产物R/S-ResP的手性特征，结果如7所示，图7中，R-ResP即产物R-ResP，S-ResP即产物S-ResP。由图7可以得出图：R-ResP与S-ResP、R-4,12-二羟基[2.2]对环芳烷与S-4,12-二羟基[2.2]对环芳烷的圆二色谱图呈镜面对称，表明R-ResP与S-ResP、R-4,12-二羟基[2.2]对环芳烷与S-4,12-二羟基[2.2]对环芳烷为两对手性异构分子；手性框架R/S-4,12-二羟基[2.2]对环芳烷与产物R/S-ResP的圆二色谱信号强度基本相同，表明通过手性修饰并未削弱手性框架分子的手性强度。

测试例2

利用新型冠状病毒免疫蛋白疫苗与手性佐剂R/S-ResP免疫动物，检测S构型的手性佐剂S-ResP提高新型冠状蛋白疫苗的体液免疫应答实；

动物免疫的具体方法：利用新型冠状病毒RBD蛋白作为作新型冠状病毒疫苗，上述实施例1和对比例1中合成的手性小分子S-ResP、RR/作为疫苗佐剂，免疫SPF级、6～8周的BALB/c小鼠，每组4只。具体的动物实验分组：第一组：R-ResP佐剂(13μg)+新型冠状病毒RBD蛋白(10μg)---(R-ResP+RBD)组；第二组：S-ResP佐剂(13μg)+新型冠状病毒RBD蛋白(10μg)---(S-ResP+RBD)组；第三组：铝佐剂(35μg)+新型冠状病毒RBD蛋白(10μg)---(Al+RBD)组；第四组：新型冠状病毒RBD蛋白(10μg)---(RBD)组。上述免疫小鼠佐剂与RBD蛋白的量为每只小鼠的用量，每组4只小白鼠，佐剂与新型冠状病毒RBD蛋白混合后肌肉注射。上述四组动物免疫时间间隔为0、2、4周，最后一次免疫后一周采血做ELISA检测与假病毒中和实验。

所有动物实验经中国医学科学院医学生物学研究所动物实验伦理委员会批准，严格按照云南省实验室动物福利与伦理委员会规定操作。

测试例3

多肽佐剂提高新型冠状病毒蛋白疫苗的体液免疫应答---ELISA检测

由抗原刺激机体产生的特异性抗体的免疫反应称为体液免疫，主要通过检测抗体的滴度的水平(主要是IgG)来体现体液免疫应答的强度与中和抗体实验来验证抗体的有效性。

将测试例2中的四组所有BALB/c小鼠在最后一次免疫后一周采血做ELISA检测；

具体步骤：用抗原稀释液(0.012mol/L Na₂CO₃，0.03mol/L NaHCO₃，pH 9.6)稀释新型冠状病毒蛋白至浓度为5μg/ml，包被于96孔板，于4℃孵育过夜；弃掉抗原包被液，于96孔板中加入封闭液(含2％BSA的PBS)封闭，在37℃孵育2h；弃掉封闭液，PBST洗板3次，之后用含2％BSA的PBS依次稀释小鼠血清至不同浓度梯度，每孔加入100μL，37℃孵育1h；弃掉小鼠血清，PBST洗板3次，并按1:5000比例加入HRP标记的羊抗鼠IgG二抗稀释液，37℃孵育1h；弃掉二抗稀释液，PBST洗板3次，加入TMB显色液，100μL/孔，显色15min；用2M H₂SO₄终止反应，100μL/孔，然后在波长450nm、630nm下用酶联免疫检测仪检测OD值。

ELISA实验结果如图8所示，由图8可以得出：相较于R构型的佐剂(R-ResP)，加入S构型的佐剂(S-ResP)可诱导更高水平的IgG，且均显著高于加入铝佐剂组及不加佐剂组，引起更强烈的抗体反应。且通过ELISA实验，相同的IgG抗体水平，S-ResP组别的血清稀释倍数更大，说明S-ResP组小鼠血清中含有的特异性IgG抗体的水平更高。

测试例4

S构型的手性佐剂S-ResP提高新型冠状病毒蛋白疫苗的保护效率

上述测试例2中的四组BALB/c小鼠在最后一次免疫后一周采血做中和抗体检测；

具体步骤：于96孔圆底板中加入293T ACE2转基因细胞，使每孔细胞数为2×10⁴个/孔，100μL/孔，37℃孵育，待细胞长成单层后；将待测血清按20、100、500倍的稀释度稀释好100μL/孔加入一块新的96孔U底板(最终体系：50μL血清稀释液+25μL培养基(含32μg/ml，最终浓度为8μg/mL的polybrene)+25μL假病毒)，培养箱孵育1h。孵育结束后，将最终感染液加入细胞培养板中，24h后换新鲜培养基，48h后进行检测。检测前将10mL LuciferaseAssay Buffer(-20℃保存，需提前放置在4℃冰箱溶化)加入1瓶Luciferase AssaySubstrate(lyophilized)，平衡至室温；将Luciferase Cell Culture Lysis 5X Reagent(CCLR)用ddH₂O稀释到1×，平衡至室温。弃掉培养基，加入1×CCLR 20μL/孔，摇晃培养板，确保CCLR完全覆盖细胞。将培养板带到仪器前，调好仪器参数，加入100μL/孔的LuciferaseAssay System试剂，检测，保存数据。

测试结果如图9所示，由图9可以得出：对于Wuhan株，S构型佐剂(S-ResP)组的中和能力是R构型佐剂(R-ResP)组的1.5倍，且高于铝佐剂组(1.4倍)。

测试例5

与测试例4的方法基本相同，不同之处在于：采用Alpha株进行测试。

测试结果如图10所示，由图10可以得出：对于Alpha株，S构型佐剂(S-ResP)组的中和能力是R构型佐剂(R-ResP)组的4.5倍，且高于铝佐剂组(3.2倍)。

测试例6

与测试例4的方法基本相同，不同之处在于：采用N501Y株进行测试。

测试结果如图11所示，由图11可以得出：对于N501Y株，S构型佐剂(S-ResP)组的中和能力是R构型佐剂(R-ResP)组的10.6倍，且高于铝佐剂组(4.8倍)。

测试例7

与测试例4的方法基本相同，不同之处在于：采用Delta株进行测试。

测试结果如图12所示，由图12可以得出：对于Delta株，S构型佐剂(S-ResP)组的中和能力是R构型佐剂(R-ResP)组的4.3倍，且高于铝佐剂组(2.1倍)。

测试例8

与测试例4的方法基本相同，不同之处在于：采用Omicron株进行测试。

测试结果如图13所示，由图13可以得出：对于Omicron株，S构型佐剂(S-ResP)组的中和能力是R构型佐剂(R-ResP)组的9倍，且高于铝佐剂组(3.9倍)。

尽管上述实施例对本发明做出了详尽的描述，但它仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部实施例，还可以根据本实施例在不经创造性前提下获得其他实施例，这些实施例都属于本发明保护范围。

Claims (10)

1.一种S构型手性分子化合物，其特征在于，具有式1所示结构：

2.权利要求1所述的S构型手性分子化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

将S-4,12-二羟基[2.2]对环芳烷、卤代乙酸甲酯和无机碱催化剂溶解于极性有机溶剂中进行偶联反应，得到式2所示结构的第一中间产物；

将所述第一中间产物的醇溶液依次在碱性溶液和酸性溶液中进行水解反应，得到式3所示结构的第二中间产物；

将所述第二中间产物、雷西莫特、有机缩合剂和有机胺催化剂溶解于有机溶剂中进行酰胺化反应，得到式1所示结构的手性分子化合物。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述S-4,12-二羟基[2.2]对环芳烷和卤代乙酸甲酯的摩尔比为1:(5～10)。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述第二中间产物和雷西莫特的摩尔比为1:(2～3)。

5.根据权利要求2或3所述的制备方法，其特征在于，所述偶联反应的温度为50～70℃，所述偶联反应的保温时间为12～24h。

6.根据权利要求2或4所述的制备方法，其特征在于，所述酰胺化反应的温度为室温，所述酰胺化反应的保温时间为18～24h。

7.权利要求1所述的S构型手性分子化合物或权利要求2～6任一项所述的制备方法制备得到的S构型手性分子化合物作为疫苗佐剂在制备疫苗中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述疫苗为抗病毒疫苗。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述抗病毒疫苗为抗新型冠状病毒疫苗。

10.一种疫苗，其特征在于，包括免疫活性成分和疫苗佐剂，所述疫苗佐剂为权利要求1所述的S构型手性分子化合物或权利要求2～6任一项所述的制备方法制备得到的S构型手性分子化合物。