JPS59144720A - 仮性狂犬病ワクチン - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は仮性狂犬病ワクチンに関する。

仮性狂犬病ウィルス（ＰＲＶ）は、はとんどの家畜動物
に感染しうるヘルペスウィルスであって、嘔吐、下痢、
発熱、呼吸障害、神経障害、流産にわたる臨床症状をひ
きおこし、ついには、一般に宿主動物を死に至らせる。

仮性狂犬病はアライエスキー病（Ａｕｊｅｓｚｋｙ’５
ｄｉｓｅａｓｅ　）、マッド・イッチ（ｍａｄ　１ｔｃ
ｈ　）および球麻痺として知られている。ＰＲＶかブタ
（こ感染した場合、農業床は重大な経済的損害を被る。

非常に若いブタは死亡し、一方、より年をとったブタは
病気番こなり、体重か減少する。妊娠した酸フタは、Ｐ
ＲＶに感染すると流産する。したがって、ブタ（こおけ
るＰＲＶの根絶のための有効なプログラムか緊急に要求
されている。

ヘルペスウィルスは、とりわけ複雑な動物ウィルスで、
少なくとも５０個のウィルス特異性タンパク合成の遺伝
暗号付けを行なう。ヘルペスウィルスの免疫学的にもつ
とも反応性のタンパクはピリオン膜および感染細胞の膜
において見出された糖タンパクである。仮性狂犬病糖タ
ンパクζこ関する文献（Ｈｅｎ−ＰｏｒａＬ、　−１−
、、ａｎｄ　Ｋａｐｌｉｎ、　Ａ、Ｓ、　（ｌ　９７０
　）　Ｖｉｒｏｌｏｇｙ、４１　、２６５〜２７３　；
Ｋａｐｌａｎ、　Ａ、　Ｓ、　。

ａｎｄ　Ｂｅｎ−ＰｏｒａＬ　、　Ｔ、（ｌ　９７　Ｑ
　）　Ｐｒｏｃ、　Ｎａ【’ｌ。

Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、ＵＳＡ、６６．７９９〜８０６）　
　は、少なくとも４個のウィルス性糖タンパクが感染細
胞およびピリオン（こ存在すると報告している。

単純ヘルペスウィルス（Ｋａｐｌａｎ　、　Ａ、Ｓ、、
　Ｅｒ１ｃｋｓｏｎ。

Ｊ、Ｓ、、　ａｎｄ　１）ｅｎ−Ｐｏｒａｔ、　Ｔ、（
ｉ　９７５　）　Ｐｒｏｇ、　Ｍｅｄ。

Ｖｉｒｏｌ、、　２］　、１〜１２）、ヘルペスサイミ
リウィルス（ｈｅｒｐｅｓ　　ｓａｉｍｉｒｉ　　ｖｉ
ｒｕｓ　）（Ｒａｎｃｌｏ！、　Ｒ，Ｆ、、、　ａｎｄ
Ｈｏｎｅｓｓ、　Ｒ，Ｗ、（１９８０）　Ｊ、Ｇｅｎ、
　Ｖｉｒｏｌ、、　５１　、４４５〜４４９）、マレク
病ウィルス（Ｍａｒｅｋ’ｓ　ｄｉｓｅａｓｅｖｉｒｕ
ｓ　）（Ｖａｎ７．ａａｎｅ、　ｌ’）、、　Ｂｒ１ｎ
ｋｈｏｆ　、　Ｊ、Ｍ、。

Ｗｅｓｔｅｎｂｒｉｎｋ　、　Ｆ、、　ａｎｄ　Ｇｉｅ
ｌｋｅｎｓ　、　Ａ、Ｌ、　（１９８１）Ｖｉｒｏ！ｏ
ｇｙ、１２１．１１６〜１３２）および仮性狂犬病ウイ
／Ｌ７ス（Ｅｒ１ｃｋｓｏｎ、　Ｊ、Ｓ、、　ａｎｄ　
Ｋａｐｌａｎ、　Ａ、Ｓ、（１９７３）　Ｖｉｒｏｌｏ
ｇｙ、　５５．９４〜１０２）を含め、数種のヘルペス
ウィルスについて糖タンパクの培地中への分泌が報告さ
れている。ＰＲＶを除いて、これらの各々の場合におい
て、分泌された糖タンパクは、ピリオン糖タンパクのサ
フセットであると報告されている。前記のペンーポラッ
トおよびカプランノ報告（Ｂｅｎ−Ｐｏｒａｔ　ａｎｄ
　Ｋａｐｌａｎ、　１ｇ７０）は、ＰＲＶ分泌糖タンパ
クかピリオン糖タンパクとは異なることを開示している
。

本発明において用いる該分泌糖タンパクを、本明細書に
おいてはｇＸとして示す。この糖タンパクは先行文献に
おいて３３として知られている（前記Ｅｒ１ｃｋｓｏｎ
　ａｎｄ　Ｋａｐｌａｎ、　１９７３　、参照）。

ＰＲＶ−感染細胞から採取した糖タンパクｇＸはつぎの
特徴を有する。

（１）　Ｐ　ＲＶ感染動物細胞培養の培地における優勢
なタンパクである。

（２）糖タンパクである。

（：３）標準的Ｓ　ｌ）　Ｓポリアクリルアミドゲル電
気泳動（ＤＡＴＤ架橋ゲル）によると約９５十ロダルト
ンの分子量を有する。

（４）硫酸化タンパクである。

（５）約１％過塩素酸に溶解する。

（６）標準的実験用マウス（こおいて免疫原性である。

および （７）動物宿主における免疫応答を高め、この応答がＰ
ＲＶビルレント株の致死攻撃に対する防御となる。

本発明は、ＰＲＶに感染しやすい動物宿主を保護するた
めの糖タンパクｇＸの新規な使用（こ関する。このよう
な方法でのｇＸの使用は、従来、感染しやすい動物宿主
における防御免疫応答を向」二できるものとしてはピリ
オンタンパクだけであるとされている先行技術からみて
、意外なことである。前記したような先行技術では、ｇ
Ｘをピリオンタンパクとしては認識していない。動物の
処置のためのｇＸまたはその免疫原性フラグメントの使
用は、本明細書に開示する、または当該分野で知られた
種々のワクチン処方の形で達成できる。

ＰＲＶに感染しやすい動物は大部分の哨乳類である。経
済的見地から、多分、ブタが最も重要である。他の宿主
は、反すう動物、例えば、ウシ、ヒツジおよびヤギなら
びにその仲間および他の動物、例えば、イヌ、ネコなど
である。

糖タンパクｇＸは、本明細書に開示する方法および文献
記載の方法番こよって調製することができる（　Ｅｒ１
ｃｋｓｏｎ、　Ｊ、Ｓ、、　Ｖｉｒｏｌｏｇｙ、　７１
，５９８〜６Ｑｌ（１９７６）参照）。前記したよう（
こ、ｇＸは、先行技術において３ａとして知られている
。ｇＸの特徴は前記したとおりである。

ｇＸまたはｇＸのフラグメントと抗原的に等しいタンパ
クまたはペプチドを調製できる方法はよく知られている
。かかる方法には、組換型ＤＮＡを用いて細菌、酵母ま
たは哨乳類の細胞中でｇＸまたはｇＸのフラグメントを
産生させるか、または抗原性ペプチドを化学的に合成す
る方法が包含される。本発明は、その由来番こか−がわ
りなく　、ｇＸまたはｇＸのフラグメントを、ＰＲＶワ
クチンとして使用することを包含する。

また、本発明は、ＰＲＶに感染しやすい動物宿主の処置
のため（こ、抗生物質と共にまたはなしに、ｇＸを他の
免疫剤と組合せて使用することも包含する。かかる他の
免疫剤としては、例えば、伝染性ウシ鼻気管炎、ハライ
ンフルエンザ、ヘモフィラス性睡眠、パスツレラ・ヘモ
リチカ（ＰａｓＬｅｕｒｅｌｌａｈａｅｍｏｌｙｔｉｃ
ａ　）　オヨびパスツレラ・マルトシタ（Ｐａｓｔｅｕ
ｒｅｌｌａ　ｍｕｌｔｏｃｉｄａ　）バクテリンなどに
対する薬剤が挙げられる。糖タンパクｇＸは、また、他
のＰＲＶウィルス性タンパクと共に用いてＰＲＶに感染
しやすい動物宿主を保護することができる。

さら番こ、本明細書に記載のごとく、ｇＸの合成ペプチ
ド部分も、ｇＸと同様な方法で用いることができる。

つぎ（こ、本発明の生成物および方法を説明するが、こ
れに限定されるものではない。以下、特に断らない限り
、「％」は全て重量％を意味し、溶媒混合物割合は全て
容量を意味する。

細胞およびウィルス ウィルスの増殖およびタンパクの産生のために用いた細
胞はアフリカミドリザル（Ｃ１ａｅｔｈｉｏｐｓ　）の
腎細胞（ＡＴＣＣｃｃｔＢ　ｌ　；−Ｖｅｒｏ　）であ
る。細胞ヲ、ペニシリン１００単位／ｌｌｌ１、ストレ
プトマイシン１００　ｐ９／ｍｌ、　ＨＥＰＥＳ　Ｉ　
ＱｍＭ　（ｐＨ７，４）、グルタミン２ｍＭおよび１０
％ウシ胎児血清（ＫＣＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ　）で補足
したダ／ｌ／／＜　７−ｙ　（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ　）の
改変イーグル培地（ＧＩＢＣＯ，Ｇｒａｎｄ、　ｌ５ｌ
ａｎｄＮ、Ｙ）中で維持する。

仮性狂犬病ウィルスは、ブタにおいて天然に発生したＰ
ＲＶから単離する。保存ウィルスは、Ｖｅｒｏ　　また
はウサギ腎細胞のいずれかを、低多重度（≦０．０１）
で感染させて調製する。

糖タンパクｇＸの精製 ＰＲＶ糖タンパクｇＸを、感染後期に細胞の組織培養上
澄液から精製する。精製は、血清非含有培地を用い、汚
染タンパクの量を減少させることにより容易に行なえる
。８５０ｄのローラ瓶中で増殖させたＶｅｒｏ細胞に、
１％ウシ胎児血清加培地１９９中、１細胞当り５〜１０
ブラック形成単位で感染させる。感染後１０〜１２時間
して、培地を注意して除き、細胞を、全く血清を補足し
ていないダルベツコの改変イーグル培地で穏やかに洗浄
する。この血清非含有培地３０１をローラー瓶に入れ、
３７℃で４時間インキュベートする。上澄液を集め、遠
心分離して（５分間、５００Ｘｇ、室温）浮遊細胞およ
び他の大きな破片を分離して清澄番こする。この培地を
、１０％ショ糖／２０ｍＭトリスＨＣ１（ｐＨ７，４）
クッション上で超遠心分離して（１２５０００Ｘｇ、５
Ｗ２８０−ター、４℃、３時間）細胞の破片を除去し、
さらに清澄にする。

この清澄化で得られた上澄液を過塩素酸の最終濃度が１
％となるようにし、氷上で１０分間インキュベートする
。過塩素酸で沈殿する物質を遠心分離（１０分間、１６
０００Ｘｇ、４℃）によって除去する。生じたペレット
を分離し、上澄液中のタンパクをトリス塩基で中和し、
−２０℃で１２時間インキュベートした冷アセトン１０
容で沈殿させる。糖タンパクｇＸはこれらの条件下で数
種の他のタンパクと共に沈殿し、これを過塩素酸沈殿物
を集めたと同様な条件で遠心分離して集める。得られた
ペレット状物質を真空下で乾燥する。

電気泳動 ＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動は、ＤＡＴＤ架
橋剤を含有する９、７５％ポリアクリルアミドケル中で
、モース・エル、ペライラ・エル、ロイズマン・ビイお
よびシャファー・ビイ・エイの記載する方法（Ｍｏｒｓ
ｅ　、　Ｌ、　Ｐｅｒｅｉｒａ　、　Ｌ、、Ｒｏｉｚｍ
ａｎ　。

Ｂ、、　ａｎｄ　５ｃｈａｆｆｅｒ、　Ｐ、Ａ、、Ｊ、
Ｖｉｒｏｌ、、　２６　、３６ｇ　〜４１０（１９７８
））に従って行なう。

動物 免疫原性実験には、標準的な雌ＣＢＡマウス（４〜６個
令）を用いる。ビルレントＰＲＶによる攻撃を含む試験
には、標準的ＣＩ＝’　Ｉ成熟マウスを用いる。後記の
第２表（試験例１）に示す最適接種物サイズを決定する
ｒ’ＲＶ力価測定のためには２０匹のマウスを用いる。

残りのマウスは、第３表（試験例２）（こ示すｇＸ調製
物のＰＲＶ感染からマウスを保護する効果を判定するた
めに用いる。

マウスは、市販のマウス用飼料で飼育する。該調製物は
、実質的に、ｇＸを主要ウィルス成分としてなる。

免疫 ８５０ｃβローラ瓶１つの感染細胞からのタンパク抽出
物を生理食塩水１ｍ／ｌこ再懸濁さぜる。最初の免疫（
第１回目）のため、該懸濁液を等音量の完全フロインド
アジュバント（１）ｉｆｃｏ　）とｉＪｌする。抗原性
実験においては、最初の免疫は、鼠径部に対スるエマル
ジョン０．３　ｍｌの皮下投与（ＳＣ）からなり、保護
実験においては、免疫は、０．１　ｍｅの腹腔内投与（
ＩＰ）および０．１　ｍｌの皮下投与で付与する。第２
回目の免疫は、抗原性実験については第２０日日に、ま
た、保護実験については第２２日日に付与する。第２回
目の抗原の投与は、生理食塩水中で与え、免疫原性実験
については０．２　ｍｌの皮下投与、保護実験について
は各々、０．１．　ｍｌつつの腹腔内および皮下投与と
する。第２７日日に免疫原性実験の動物の尾から採血し
、血清抗ＰＲＶ抗体を試験する。保護実験（こお（プる
動物には、第２９０目（こウィルスでの攻撃を行なう。

抗ＰＲＶ抗体についてのエライザ（ＥＩｊＳＡ）Ｖｅ　
ｒｏ細胞の融合１５０ｃＪフラスコを、■細胞当り、Ｉ
）　ＲＶ−ライス株（Ｒｉｃｅ　）　０．１〜１ブラッ
ク形成単位で感染させてウィルス感染細胞を調製する。

感染後１６〜２０時間してフラスコを振とうし、細胞を
培地から遠心分離して感染細胞を採取する。この細胞を
、リン酸塩緩衝食塩水中で遠心分離法にて３回洗浄する
。

エライザ・アッセイにおいて用いる抗体および試薬は、
特に断らない限り、ニューイングランド・ニューフレ７
　（Ｎｅｗ　Ｅｎｇｌａｎｄ　Ｎｕｃｌｅａｒ　）から
得たものである。本明細書に記載する方法はケネツト・
アール・エッチ（Ｋｅｎｎｅｔ、　Ｒ，Ｔ−１，、Ｍｏ
ｎｏｃｌｏｎａｌＡｎｔｉｌ）ｏｄｉｃｓ　：　Ｈｙｌ
）ｒｉｄｏｍａｓ　、　Ａ　Ｎｅｗ　Ｉ）ｉｍｅｎｓｉ
ｏｎ　ｉｎＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ　　Ａｎａｌｙｓｅｓ
　、　　Ｐｌｅｕｍ　Ｐｒｅｓｓ　、　　ＮＹ、　ｐｐ
　３７６〜３７７　（１−９８０）　）　　の方法の変
法である。該エライザ・アッセイの工程はつきのとおり
である。

（１）　０．０１１％　／　ｍｅのポリーＬ−リジン０
．０５　ｍｌをマイクロタイターの各ウェル（ｗｅｌ　
Ｉ　）に加え、３７℃で３０分間インキュベートして支
持マトリックスとして作用させる。インキュベーション
後、マイクロタイタープレー１・を軽く振って過剰のポ
リーＬ−リジンを除く。

（２）ウィルス感染細胞０．　］、　ｍｅを各ウェルに
加える。

融合１５０ｃｆ１フラスコの等置物を各々、９６ウエル
・マイクロタイタープレートに加える。プレートを遠心
分離して（マイクロタイター・プレート・キャリヤーを
有するベックマン］”Ｊ−５遠心分離機中、４００Ｘｇ
）細胞を平らなマイクロタイター・ウェル」−に成層さ
せる。

（刃つきに　Ｐ’ＢＳ中０．５％グルタルアルデヒド０
、１　ＩＩ＋１’を加え、室温で３０分間、細胞を固定
する。

プレートをＰＢＳｏ、２ｍｌ／ウェルで３回洗浄する。

（４）ポリスチレンに対する材料の非特異性結合の未反
応部位を、１０％胎児ウシ血清（ＦＣ８）含有ＰＢＳを
用いて室温で３０〜６０分間遮断する。

ついで、プレートをｐｐ、ｓｏ、２ｍｌ／ウェルで１回
洗浄する。

（５）第１回目のインキュベーションにおいて、テスト
サンプル（すなわち、マウス面清ザンプル希釈物）０．
０５ｍ／！を一対のウェルに加え、４℃で１６〜１８時
間インキュベートする。ついで、プレートをＰＢＳ０．
２ｍｌ／ウェルで３回洗浄する。

（６）第２回目のインキュベーションにおいて、１％Ｆ
Ｃ８を含有するＰＢＳ　（ｐＨ７，４）中のワサビペル
オキシダーゼ結合ヒツジＦ　（ａｔ）’）２抗−マウス スイムノグロプリン抗体０．１　ｍｌを、該ウェルに加
え、３７℃で９０〜１２０分間インキュベートする。

ついで、プレートをＰＢＳ０．２ｍｌ／ウェルで３回洗
浄する。

（７）最後のインキュベーションでワサビペルオキシダ
ーゼｌこ対して特異的な基質０，１コを添加する。

０−フェニレンジアミン（シグマ社）ヲ、０．０２％■
］２０２含有１７ｍＭクエン酸−５５ｍＭリン酸塩（ｐ
Ｈ６，３）中、濃度１■／ｍｅとする。黄褐色がかった
色によって示される酵素基質の変換が１０〜６０分間で
現われ、光学的密度の値を分光光度計セット（Ｔｉｔｅ
ｒ−Ｔｅｋマイクロタイター・プレート・リーダー）を
用い、４５　Ｑ　ｎｍで測定する。

通常、ウェル当り、０．５　Ｎ１（２８０４０，０５ｍ
’を加えて該酵素反応を停止させる。

ｇＸ調製物の免疫原性 該ｇＸ調製物をマウスに注射し、このマウスの血清を、
ｌ）　ＲＶ−感染細胞に反応性のマウス抗体を検知する
ように設計されたエライザ・アッセイによって分析する
。第１表から明らかなように、偽調製物またはＰＲＶ−
感染細胞からの調製物を受けた動物について抗−ｐｋｖ
ｇ度における明確な量的差異を見出すことができる。該
分泌糖タンパクの偽調製物を受けた動物は、正常なマウ
ス血清よりもわずかに反応性である。この反応性は、偽
免疫マウス血清が実質的に正常なマウス血清と同様に反
応するウサギ腎細胞を用いる第２の分析において確認さ
れるようにＶｅｒｏ　細胞付随抗原に対する抗体の存在
を反映している。該ｇＸ調製物を受けた動物は、ＰＲＶ
−感染Ｖｅｒｏ　細胞に反応性の抗体レベルがより高い
ことを示している。超免疫供給体からの血清は、もつと
も高い反応性抗体力価を与え、免疫をくり返した後の野
生型ウィルスの免疫原性を反映している。

ｇＸ調製物を用いるマウスの保護免疫 ｇＸ調製物の、致死量のビルレン）ＰＲＶ投与からの保
護を与えるマウスにおける免疫応答発揮の能力を試験す
る。２つの試験例の結果を示す。

試験例１は、マウスにおけるＰＲＶ−ライス株の適当な
攻撃用量を決定するための予備的な実験である。試験例
２は、非感染細胞からの粗タンパク調製物（偽調製物と
称する）またはＰＲＶ−感染細胞からの粗タンパク調製
物（ｇＸ調製物と称する）の保護効果の盲検比較である
。

試験例１ マウスを任意に各群４匹づつ５群に分ける。マウスにウ
ィルス接種物０．１　ｍｌ！を接種する（ＩＰ）。

該マウスを毎日観察し、死亡数を記録する。

ウィルス力価測定から得られた結果を第２表に示す。１
０４ＰＦｔＪで接種したマウスは全て３〜４日以内に死
亡し、死亡平均日数（Ｍｌ）Ｄ）は３，０〜３．７５で
あった。１０３Ｐ　Ｆ　Ｕ　／ａｌで接種した４匹のマ
ウスのうち３匹が死亡し、ＭＤＤは４．６７であった。

試験例２用の攻撃用量は１０４ＰＦＵ／ｓｌである。

試験例２ ３群のマウスを用いて、ｇＸ調製物がＰＲＶ感染感染対
してマウスを保護できるか否かを判定する。

８匹のマウスからなる第１群をｇＸ調製物で２回処理し
た。第２群は９匹のマウスからなり、偽調製物で２回処
理した。第３群は、８匹のマウスからなる非処理対照群
Ａである。さらに、４匹のマウスを非処理対照群Ｂとし
て加える。第１群および第２群のマウスを、まずｇＸま
たは偽調製物のアジュバント懸濁液で処理し、３週間後
、該マウスにその生理食塩水懸濁液を増強注射する。後
者の注射１週間後、全てのマウスに　１０ＰＦＵ／□ｌ
　ＰＲＶ　０．１　ｔｒｔｌを攻撃投与する（ＩＰ）。

該マウスの死亡数を毎日観察し、ウィルス攻撃投与８日
後に試験を終わる。

マウスにおけるＰＲＶ感染に対するｇＸの効果から得ら
れたデータを第４表に示す。死亡数は、非処理対照群Ａ
マウスでは８匹中６匹（７５％）、非処理対照群Ｂマウ
スでは４匹中４匹（１００％）、偽調製物処理マウスで
は９匹中８匹（８８，９％）およびｇＸ調製物処理マウ
スでは８匹中１匹（１２，５％）記録され、ＭＤＤ／群
は、各々、３．６．３，０．４．０および５．０であっ
た。これらのデータは、マウスに与えたｇＸ調製物が、
死亡数の減少に反映しているようにＰＲＶ感染に対しす
る保護を与えることかできることを示している。第４表
にこの試験例からの死亡数データを示す。

第１表 第１表は、免疫したマウスにおける抗−ＰＲＶ抗体につ
いてのエライザ・アッセイのデータの概要である。エラ
イザ・アッセイは前記のとおり行なった。該表中の数値
は、変換されたワサビペルオキソダーゼ基質の量、した
がって、抗−ＰＲＶ抗体濃度を測定する光学的密度の読
みを表わしている。数値は２回のアッセイの平均を示す
。超免疫マウスは、ビルレント性の少ないヨードデオキ
シウリジン抵抗性ＰＲＶ変異株で免疫し、ついで、ビル
レン）ＰＲＶ株での攻撃を繰り返した。偽またはｇＸ動
物は、各々、非感染またはＰＲＶ感染Ｖｅ　ｒｏ細胞か
らのタンパク質調製物を受けたものである。

第　　２　表 仮性狂犬病ウィルス（ライス株）を種々の接種物サイズ
で腹腔内接種（０，１，ｍｌ　、／マウス）した後のマ
ウスの死亡数 米：のちの攻撃試験において非処理群Ｂとして使用する
（第３表および第４表参照）。

第３表 ＰＲＶ感染感染対してマウスを保護するｇＸ調製物の効
果を判定するための実験計画 ａ：完全アジュバント懸濁液を腹腔内および皮下（こ、
各々、０、ｌ　ｍｅづつ注射する。

ｂ：生理食塩水懸濁液を筋肉内および皮下（こ、各々、
０．１　ｍｌづつ注射する。

ｃ　：　Ｐ　ＲＶ　Ｏ，１ｍｌを腹腔内接種する。

第４表 仮性狂犬病ウィルス感染に対してマウスを保護本発明に
より製造される免疫原ｇＸは、好ましくは、ＰＲＶウィ
ルスを含まない。すなわち、本発明のワクチン免疫原は
、実質的に完全に所望の免疫原性タンパクからなる。

該免疫原は、公知の方法でワクチン投与形に製造するこ
とができる。筋肉内注射のような非経口投与のためには
、該免疫原は、適当なアジュバント、例えば、水酸化ア
ルミニウムと合してもよい。

かかるアジュバントは、種々の所から商業的に入手でき
、例えば、メルク・アジュバント（ＭｅｒｋＡｊｕｖａ
ｎｔ　　）　５５　（Ｍ’ｅｒｋ　ａｎｄ　Ｃｏｍｐａ
ｎｙ、　　ＩｎｃｌＲａｈｗａｙ　、Ｎ、Ｊ　、　）が
挙げられる。他の適当なアジュバント（こは、不完全フ
ロインドアジュバント（Ｄｉ　ｆｃ。

Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ　、　Ｄｅｔｒｏｉ　ｔ　、
　Ｍｉｃｈｉｇａｎ　）である。免疫原とアジュバント
の比率は、両方が効果的な量で存在できる限り広範な範
囲にわたって変化できる。

例えば、水酸化アルミニウムは、ワクチン混合物の約０
．５％（Ａ１２０３として）の量で存在させることがで
きる。投与単位当り、該免疫原の濃度は、１．０〜以上
、約４．０■までの範囲とすることができる。好ましい
範囲は、投与単位当り、約１．０〜３．０■である。適
当な投与単位サイズは約１１Ｒ１である。したがって、
筋肉内注射用量は、０５％水酸化アルミニウムを添加、
混合した免疫原１．０ｑを含有する１　ｍｌとすること
ができる。匹敵する投与形が子ブタに対する非経口投与
用に製造できるが、投与単位当りの免疫原の量はより少
ない量、例えば、投与単位当り、約０．２５〜約１，０
〜とする。該免疫原は、また、腸溶被経ロワクチン形、
例えば、米国特許第３８２３２２８号に記載されている
ような形に製造できる。

雌ブタのワクチン接種については、有利には、２回投与
法を用いることができる。第１回目の投与は、出産の約
数カ月から約５〜７週間前（こ与えることができる。例
えば、雌ブタに、秋、例えば、１１月のほぼ第１週にワ
クチン接種できる。ワクチンの第２回目の投与は、第１
回目の投与の数週間後、例えば、約２〜４週後に投与す
べきであるが、該ワクチンは、出産前までは投与できる
。別法として、該免疫原は、例えば、出産の約５〜７週
間前に、２Ｉｌｌｌの１回投与で与えることかできる。

しかし、子ブタの最も効果的な免疫付与については、前
記の２回投与法が好ましいと考えられる。

半年ごとの再ワクチン接種が繁殖動物について推奨され
る。雄ブタはいずれ“の時期にも再ワクチン接種できる
。また、雌ブタは繁殖前に再ワクチン接種できる。全て
のワクチン投与は、筋肉内注射によって行なうことがで
きる。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （］）ｇＸまたはその免疫原性フラグメントからなるワ
   クチンであって、該ｇＸが、 （ａ）糖タンパクであること、 （１１）標準的Ｓ　Ｄ　Ｓポリアクリルアミドゲル電気
   泳動（ＤＡ、ＴＩ）架橋ゲル）によると、約９５キロダ
   ルトンの分子量を有すること、 （ｃ）　（ｍ酸化タンパクであること、（ｄ）約１％過
   塩素酸に溶解すること、（ｅ）標準的実験用マウス（こ
   おいて免疫原性であること、および （ｆ）動物宿主における免疫応答を高め、この応答が仮
   性狂犬病ウィルス（ＰＲＶ）のビルレント株の致死攻撃
   に対する防御となること、 を特徴とするＰＲＶ感染に感染しゃすい動物宿主保護用
   のワクチン。 （２）該動物宿主がブタである前記第１項のワクチン。 （３ＪｇＸまたはその免疫原性フラグメントと、他の免
   疫剤を組合せてなる動物宿主保護用ワクチン。 （４）ｇＸまたはその免疫原性フラグメントと、他のＰ
   ＲＶ−ウィルス性タンパクを組合せてなるＰＲＶ（こ感
   染しやすい動物宿主保護用ワクチン。 （５）　Ｐ　ＲＶに感染しやすい動物宿主にｇＸまたは
   その免疫原性フラグメントからなるワクチンを投与する
   ことを特徴とするＰＲＶに感染しやすい動物宿主を保護
   する方法。 （６）該動物宿主がブタである前記第（５）項の方法。