CN105237633A - 一种绿原酸完全抗原及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种绿原酸完全抗原，所述绿原酸完全抗原为绿原酸通过化学键与载体蛋白连接形成的复合物。本发明还提供了一种绿原酸完全抗原的制备方法，包括以下步骤：(1)将绿原酸和二环己基碳二亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺溶于溶剂中，在室温条件下搅拌反应2-8h，制得第一反应液；绿原酸、二环己基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺的摩尔比为1:2-5:2-5；(2)将载体蛋白溶于缓冲液中，制得第二反应液；(3)将第一反应液滴加到第二反应液中，室温轻轻搅拌，反应2-8h，得到含有绿原酸完全抗原的混合液，经透析后，制得绿原酸完全抗原。本发明制备方法简单易操作，易于产业化生产。本发明还提供了一种绿原酸完全抗原在制备检测绿原酸的药物或试剂盒中的应用。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种绿原酸完全抗原及其制备方法和应用。
背景技术
绿原酸(Chlorogenicacid,CGA)是一种重要的中药小分子活性成分，广泛存在于杜仲科、忍冬科忍冬属和菊科嵩属植物中。绿原酸在茵陈、菊花、金银花、忍冬藤、鱼腥草、栀子、蒲公英和小蓟等中药材中含量较高，具有抗菌、抗病毒、抗氧化、清除自由基、调节血糖和兴奋中枢神经系统等多种生物活性，长期以来备受科学界关注，因此，寻找合适的绿原酸含量测定方法，成为这类中药材质量研究的重要环节。
高效液相色谱法(HPLC)是目前常用的绿原酸含量的检测方法，但HPLC法需要大型仪器且样品前处理复杂，因此具有局限性。免疫学分析方法灵敏度高，特异性强，检测速度快，操作简单，还可以进行高通量检测，成为生物医药领域的重要检测方法。但绿原酸属于小分子半抗原，具有反应原性但不具备免疫原性，不能直接刺激机体产生免疫反应。为了建立绿原酸定量分析的免疫学分析方法，有必要提供一种绿原酸完全抗原及其制备方法。
发明内容
为解决上述问题，本发明提供了一种绿原酸完全抗原，解决了上述技术问题；本发明还提供了一种绿原酸完全抗原的制备方法，该制备方法简单易操作，可以进行大规模生产；本发明还提供了该绿原酸完全抗原的应用。
本发明第一方面提供了一种绿原酸完全抗原，所述绿原酸完全抗原为绿原酸通过化学键与载体蛋白连接形成的复合物。
优选地，所述绿原酸与所述载体蛋白的摩尔比为10-200:1。
优选地，所述绿原酸完全抗原的结构式如P1所示：
式中，n为10-200，R为载体蛋白。
n为所述绿原酸完全抗原中所述绿原酸与所述载体蛋白的偶联比。
也可简写为
更优选地，所述载体蛋白为球蛋白、牛血清白蛋白、鸡卵清蛋白、钥孔血蓝蛋白、兔血清白蛋白、人血清白蛋白、甲状腺球蛋白、纤维蛋白原、兔丙种球蛋白或鸡的丙种球蛋白。
所述绿原酸分子和载体蛋白的偶联比n的取值范围为10-200，即每个载体蛋白分子上连接的绿原酸分子的平均数目为10-200，在该偶联比下得到的绿原酸完全抗原既不影响绿原酸分子的空间结构，使其具有良好的免疫原性，从而有利于将本发明的绿原酸完全抗原应用于各种免疫层析检测试剂盒中。
更优选地，n为10-20，该偶联比下得到的绿原酸完全抗原具有良好的免疫活性，适合用作免疫抗原制备抗体，制得的抗体效价良好，对绿原酸具有良好的识别检测性能。
本发明第一方面提供的绿原酸完全抗原为绿原酸通过化学键与载体蛋白连接形成的复合物，可用于特异性绿原酸抗体的制备，以该绿原酸完全抗原为免疫原制备的单克隆抗体和多克隆抗体对绿原酸具有较高的特异性和灵敏性，可以满足绿原酸免疫学分析方法建立的需要。
本发明第二方面提供了一种绿原酸完全抗原的制备方法，包括以下步骤：
(1)将绿原酸、二环己基碳二亚胺(DCC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)溶于溶剂中，在室温条件下搅拌反应2-8h，制得第一反应液；所述绿原酸、所述二环己基碳二亚胺和所述N-羟基琥珀酰亚胺的摩尔比为1:2-5:2-5；
(2)将载体蛋白溶于缓冲液中，制得第二反应液；
(3)将所述第一反应液滴加到所述第二反应液中，在室温条件下轻轻搅拌，反应2-8h，得到含有绿原酸完全抗原的混合液，经透析后，制得绿原酸完全抗原；所述绿原酸完全抗原为所述绿原酸通过化学键与所述载体蛋白连接形成的复合物。
优选地，步骤(3)中所述绿原酸与所述载体蛋白的摩尔比为10-200:1。
优选地，所述绿原酸完全抗原的结构式如P1所示：
式中，n为10-200，R为载体蛋白。
更优选地，所述n为10-20。
更优选地，所述载体蛋白为球蛋白、牛血清白蛋白、鸡卵清蛋白、钥孔血蓝蛋白、兔血清白蛋白、人血清白蛋白、甲状腺球蛋白、纤维蛋白原、兔丙种球蛋白或鸡的丙种球蛋白。
优选地，步骤(1)中所述溶剂为二甲基甲酰胺(DMF)。
优选地，步骤(2)中，所述缓冲液为pH为9.6的碳酸盐缓冲液。
优选地，步骤(3)中，所述透析的方法为：将所述含有绿原酸完全抗原的混合液转入透析袋中，然后将所述透析袋置于2LpH7.4的0.1mol/L磷酸盐缓冲液中，4℃轻轻搅拌，透析72h，收集所述透析袋中的液体，即得所述绿原酸完全抗原，将所述绿原酸完全抗原与等体积的甘油混合，分装后-20℃保存。
步骤(1)中所述绿原酸的结构式如A所示：
本发明中所述绿原酸的结构式也可简写为CGA-COOH。
也可简写为
步骤(1)中所述绿原酸与二环己基碳二亚胺(DCC)、N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)反应后，在绿原酸中引入了活性酯，步骤(1)的反应方程式如式Ⅰ和式Ⅱ所示：
步骤(3)中，步骤(1)得到的带有活性酯的绿原酸和含有氨基的载体蛋白质进行反应，从而使所述绿原酸分子和载体蛋白通过化学键连接、将绿原酸偶联到载体蛋白上制得绿原酸完全抗原，步骤(3)的反应方程式如式Ⅲ所示：
本发明第二方面提供的绿原酸完全抗原的制备方法，将绿原酸与DCC和NHS进行酯化反应后在绿原酸上引入活性酯，然后将带有活性酯的绿原酸和含有氨基的蛋白质进行反应，所述绿原酸分子和载体蛋白通过化学键进行连接，将绿原酸和蛋白质偶联制得绿原酸完全抗原，制备方法简单易操作，获得的绿原酸完全抗原纯度较高，可用于特异性绿原酸抗体的制备，以满足绿原酸免疫学分析方法建立的需要。
优选地，采用紫外分光光度法测定所述绿原酸完全抗原中的绿原酸与载体蛋白的偶联比。
更优选地，所述采用紫外分光光度法测定所述绿原酸完全抗原中的绿原酸与载体蛋白的偶联比的方法为：
(1)分别测定绿原酸和载体蛋白在327nm和278nm的摩尔吸光系数ε；
(2)根据朗伯比尔定律，按照以下方程式计算绿原酸半抗原和载体蛋白的
偶联比γ：
ACGA-R278＝εCGA278×CCGA×l+εR278×CR×l.........(I)
ACGA-R327＝εCGA327×CCGA×l+εR327×CR×l.........(Ⅱ)
式中，ACGA-R278代表绿原酸完全抗原在278nm的吸光度，ACGA-R327代表绿原酸完全抗原在327nm的吸光度，εCGA278代表绿原酸在278nm的摩尔吸光系数，εCGA327代表绿原酸在327nm的摩尔吸光系数，εR278代表载体蛋白在278nm的摩尔吸光系数，εR327代表载体蛋白在327nm的摩尔吸光系数，CR代表载体蛋白的摩尔浓度，l代表紫外吸收光程长；
将方程(I)除以方程(Ⅱ)，同时在等式的分子分母中同时除以CR，得到方程(Ⅲ)
ACGA-R278/ACGA-R327＝(εR278+εCGA278γ)/(εR327+εCGA327γ).........(Ⅲ)。
进一步优选地，所述摩尔吸光系数ε的测定方法如下：
配制0.512、0.256、0.128、0.064、0.032mg/ml绿原酸系列浓度溶液；配制5.12、2.56、1.28、0.64、0.32mg/ml载体蛋白系列浓度溶液；然后分别测定绿原酸和载体蛋白两个系列浓度在327nm和278nm处的吸光值，每个浓度做平行样；按下式分别计算绿原酸和载体蛋白在327nm和278nm的摩尔吸光系数ε：ε＝吸光值/摩尔浓度。
优选地，采用紫外分光光度法测定所述绿原酸完全抗原中的绿原酸与载体蛋白的偶联比为20。
本发明第三方面提供了一种绿原酸完全抗原的用途，所述绿原酸完全抗原在制备检测绿原酸的药物或试剂盒中的应用。
综上，本发明提供的一种绿原酸完全抗原及其制备方法和应用的有益效果包括以下几个方面：
(1)、本发明提供的绿原酸完全抗原包括绿原酸分子和载体蛋白，所述绿原酸分子和载体蛋白通过化学键进行连接，本发明提供的绿原酸完全抗原具有较好的免疫原性，可用于特异性绿原酸抗体的制备，以满足绿原酸免疫学分析方法建立的需要；
(2)、本发明提供的绿原酸完全抗原的制备方法简单易行，可以进行大规模生产，且生产成本低。
附图说明
图1为本发明实施例1制得的绿原酸完全抗原制备前后的紫外扫描图；
图2为本发明实施例1制得的绿原酸完全抗原的聚丙烯酰胺凝胶电泳图。
具体实施方式
以下所述是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也视为本发明的保护范围。
实施例1：
一种绿原酸完全抗原的制备方法，包括以下步骤：
(1)配制第一反应液：称取35mg绿原酸(CGA)、103mgDCC、57mgNHS溶于2mL二甲基甲酰胺(DMF)中，室温搅拌反应4h，制得第一反应液；
(2)配制第二反应液：称取20mg牛血清白蛋白(BSA)，溶于1.2mLpH9.6的碳酸盐缓冲液中，冰浴，制得第二反应液；
(3)冰浴条件下把0.6ml第一反应液逐滴加到第二反应液中，室温轻轻搅拌，反应4h，即得绿原酸完全抗原混合液。
透析袋处理：剪取10cm长的透析袋，用500ml含有质量百分浓度为2％的碳酸氢钠和1mmol/L的EDTA二钠溶液煮沸10分钟，去离子水洗净，用500ml1mmol/L的EDTA二钠溶液煮沸10分钟，去离子水洗净备用。
透析：将绿原酸完全抗原混合液转入透析袋中，置于2LpH7.4的0.1mol/L磷酸盐缓冲液中，4℃轻轻搅拌，透析72h，每天早晚各换透析液一次。收集透析袋中的液体，即得绿原酸完全抗原，与等体积的甘油混合，分装后-20℃保存。
根据紫外扫描结合对实施例1制得的绿原酸完全抗原中绿原酸和载体蛋白的偶联比进行测定。绿原酸完全抗原采用分光光度法鉴定其偶联结果，利用牛血清白蛋白标准液制备的标准曲线，从曲线上比对得到抗原溶液的蛋白浓度，计算摩尔吸光系数ε，测定绿原酸完全抗原的偶联比。
(1)摩尔消光系数ε测定：配制0.512、0.256、0.128、0.064、0.032mg/ml绿原酸系列浓度溶液；配制5.12、2.56、1.28、0.64、0.32mg/ml牛血清白蛋白系列浓度溶液；测定两个系列浓度在327nm和278nm处的吸光值，每个浓度做平行样；按下式分别计算绿原酸和牛血清白蛋白在327nm和278nm的摩尔吸光系数ε：ε＝吸光值/摩尔浓度。
(2)偶联比测定：根据朗伯比尔定律:
ACGA-BSA278＝εCGA278×CCGA×I+εBSA278×CBSA×I.........(I)
ACGA-BSA327＝εCGA327×CCGA×I+εBSA327×CBSA×I.........(Ⅱ)
方程(I)除以方程(Ⅱ)，同时等式分子分母同时除以CBSA,得方程(Ⅲ)
ACGA-BSA278/ACGA-BSA327＝(εBSA278+εCGA278γ)/(εBSA327+εCGA327γ).........(Ⅲ)
其中，γ＝CCGA/CBSA，即为半抗原和载体蛋白的偶联比。
摩尔消光系数ε测定：配制0.512、0.256、0.128、0.064、0.032mg/ml绿原酸系列浓度溶液,每个浓度做平行样；配制5.12、2.56、1.28、0.64、0.32mg/ml牛血清白蛋白系列浓度溶液；测定两个系列浓度在327nm和278nm处测吸光值，每个浓度做平行样；按下式分别计算绿原酸和牛血清白蛋白在327nm和278nm的摩尔吸光系数ε：ε＝吸光值/摩尔浓度。本实验计算得的摩尔吸光系数ε如下：
εCGA278＝9.1×103L·mol-1·cm-1；εCGA327＝1.9×104L·mol-1·cm-1；εBSA278＝4.29×104L·mol-1·cm-1；εBSA327＝1.9×103L·mol-1·cm-1。测偶联产物在278nm处的吸光值为ACGA-BSA278，在327nm处的吸光值为ACGA-BSA327，按照ACGA-BSA278/ACGA-BSA327＝(εBSA278+εCGA278γ)/(εBSA327+εCGA327γ)，本实验计算得γ≈13。
绿原酸、BSA分别在波长327、278处有最大吸收，根据绿原酸半抗原和载体蛋白的紫外吸收特征，本发明实施例分别对绿原酸(CGA表示)、牛血清白蛋白(BSA)以及绿原酸完全抗原(CGA-BSA表示)在波长250-450nm内进行紫外扫描。图1为绿原酸完全抗原制备前后紫外扫描图；如图1所示，CGA-BSA的吸收光谱与绿原酸、BSA相比，吸收峰发生了一定的位移，光谱特征具有BSA和CGA叠加的特点，紫外扫描图谱表明，绿原酸与载体蛋白偶联成功，本发明实施例成功制得绿原酸完全抗原。
本发明还对实施例1制得的绿原酸完全抗原进行了纯度及分子量检测，方法如下：
配制5％浓缩胶、10％分离胶，取实施例1制得的透析后的完全抗原稀释成20倍稀释液，将BSA配制成1mg/ml浓度，调节浓缩胶电压为70V，分离胶电压为100V，进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)电泳，考马斯亮蓝染色，脱色后扫描电泳图谱。图2为绿原酸完全抗原SDS-PAGE电泳图。图2中a为Maker，b为BSA，c为CGA-BSA。如图2所示，偶联物CGA-BSA的泳动速度比BSA单体略慢，分子量略大于BSA，表明绿原酸已经偶联到载体蛋白上，且载体蛋白之间没有发生偶联；偶联物CGA-BSA染色条带清晰，聚集度高，表明本发明合成的绿原酸完全抗原纯度较高。
本发明还对实施例1制得的完全抗原用考马斯亮蓝法进行蛋白含量的测定，方法如下：
绘制标准曲线：称取牛血清白蛋白适量，加水溶解并配制成1mg/ml的标准蛋白质溶液。称取100mg考马斯亮蓝G-250，加入95％乙醇50ml溶解，再加入85％(W/V)磷酸100ml，将溶液用水稀释至1000ml得蛋白试剂。试剂的终浓度为0.01％考马斯亮蓝G-250，4.7％乙醇和8.5％(W/V)磷酸。取标准蛋白质溶液5、10、20、50、100μL于小试管中，用水稀释至0.1ml，然后分别加入5ml蛋白试剂，充分振荡混合，2分钟后于595nm测定其吸光度值。以0.1ml水及5ml蛋白试剂作为空白对照。以蛋白浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线作为定量依据。
完全抗原含量测定：取含10-100mgCGA-BSA溶液于小试管中，加水稀释至0.1ml，然后加入5ml蛋白试剂，充分振荡混合，2分钟后于595nm测定其吸光度值。以0.1ml水及5ml蛋白试剂作为空白对照。根据吸光度值计算样品中蛋白质的含量。
测得牛血清白蛋白标准曲线为Y＝0.7785X-0.0552,r2＝0.9979，计算得到CGA-BSA的含量为13.5mg/ml。
本发明还用实施例1制得的完全抗原进行动物免疫，方法如下：
选取6周龄雌性Balb/c小鼠5只，4只用于免疫，1只作为阴性对照。灭菌两支5ml规格的玻璃注射器筒，将偶联成功的完全抗原CGA-BSA用0.9％氯化钠注射液稀释至0.6mg/ml，与等体积的弗氏完全佐剂混合，混合液吸到两支注射器中，用三通阀连接两个注射器筒，反复对推，使抗原和佐剂充分混合，直至推动时感到很大的阻力，滴1滴乳化物到水中，轻轻摇动水面，乳化物不分散即为乳化充分。首次免疫采用颈背部皮下多点注射，剂量为150μg/只，以后每隔2周免疫1次，剂量同首次免疫，乳化剂改用弗氏不完全佐剂，腹腔注射。于第四免疫10天后，小鼠采血，分离上层血清，采用间接ELISA方法进行效价测定。免疫血清(P)与阴性血清(N)OD450比值大于2.1时定义为阳性。抗血清效价用抗血清为阳性时的最大稀释倍数表示。
ELISA检测步骤：
1)包被：将包被抗原CGA-OVA用包被缓冲液(pH9.6的碳酸盐缓冲液)稀2000倍，100μl/孔加到酶标板，4℃冰箱中包被过夜。
2)封闭：将包被液弃去，每孔加入PBST300μl，放置3min后甩干，重复洗板3次，加入200μl/孔10％马血清，37℃孵育1h。
3)加一抗：将封闭液弃去，每孔加入PBST300μl，放置3min后甩干，重复洗板3次。将一抗(抗血清)进行梯度稀释，100μl/孔，同时做阴性小鼠血清对照，37℃孵育1h。
4)加二抗：将一抗弃去，每孔加入PBST300μl，放置3min后甩干，重复洗板3次。将二抗用稀释液稀释5000倍，100μl/孔，37℃孵育1h。
5)显色并测OD值：将显色液A和显色液B等体积混合，100μl/孔，暗处反应15min，100μl/孔加入2mol/LH2SO4终止反应。置于酶标仪中测450nm处的OD值。
小鼠的抗血清效价达到1:1×105，表明制备的绿原酸人工抗原具有免疫原性，刺激Balb/c小鼠产生了免疫应答，分泌了抗绿原酸的抗体。
实施例2：
一种绿原酸完全抗原的制备方法，包括以下步骤：
(1)配制第一反应液：称取35mgCGA、100mgDCC、50mgNHS溶于2mL二甲基甲酰胺(DMF)中，室温搅拌反应4h，制得第一反应液；
(2)配制第二反应液：7.5mg卵清白蛋白(OVA)，溶于1.2mLpH9.6的碳酸盐缓冲液中，冰浴，制得第二反应液；
(3)冰浴条件下把0.6ml的第一反应液逐滴加到第二反应液中，室温轻轻搅拌，反应4h，即得绿原酸完全抗原混合液。
透析袋处理：剪取10cm长的透析袋，用500ml含有质量百分浓度为2％的碳酸氢钠和1mmol/L的EDTA二钠溶液煮沸10分钟，去离子水洗净，用500ml1mmol/L的EDTA二钠溶液煮沸10分钟，去离子水洗净备用。
透析：将绿原酸完全抗原混合液转入透析袋中，置于2LpH7.4的0.1mol/L磷酸盐缓冲液中，4℃轻轻搅拌，透析72h，每天早晚各换透析液一次。收集透析袋中的液体，即得绿原酸完全抗原，与等体积的甘油混合，分装后-20℃保存。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (10)
1.一种绿原酸完全抗原，其特征在于，所述绿原酸完全抗原为绿原酸通过化学键与载体蛋白连接形成的复合物。
2.如权利要求1所述的绿原酸完全抗原，其特征在于，所述绿原酸完全抗原的结构式如P1所示：
式中，n为10-200，R为载体蛋白。
3.如权利要求2所述的绿原酸完全抗原，其特征在于，所述n为10-20。
4.如权利要求1或2所述的绿原酸完全抗原，其特征在于，所述载体蛋白为球蛋白、牛血清白蛋白、鸡卵清蛋白、钥孔血蓝蛋白、兔血清白蛋白、人血清白蛋白、甲状腺球蛋白、纤维蛋白原、兔丙种球蛋白或鸡的丙种球蛋白。
5.一种绿原酸完全抗原的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将绿原酸、二环己基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺溶于溶剂中，在室温条件下搅拌反应2-8h，制得第一反应液；所述绿原酸、所述二环己基碳二亚胺和所述N-羟基琥珀酰亚胺的摩尔比为1:2-5:2-5；
(2)将载体蛋白溶于缓冲液中，制得第二反应液；
(3)将所述第一反应液滴加到所述第二反应液中，在室温条件下轻轻搅拌，反应2-8h，得到含有绿原酸完全抗原的混合液，经透析后，制得绿原酸完全抗原；所述绿原酸完全抗原为所述绿原酸通过化学键与所述载体蛋白连接形成的复合物。
6.如权利要求5所述的绿原酸完全抗原的制备方法，其特征在于，步骤(3)中所述绿原酸与所述载体蛋白的摩尔比为10-200:1。
7.如权利要求5所述的绿原酸完全抗原的制备方法，其特征在于，所述绿原酸完全抗原的结构式如P1所示：
式中，n为10-200，R为载体蛋白。
8.如权利要求7所述的绿原酸完全抗原的制备方法，其特征在于，所述n为10-20。
9.如权利要求5或7所述的绿原酸完全抗原的制备方法，其特征在于，所述载体蛋白为球蛋白、牛血清白蛋白、鸡卵清蛋白、钥孔血蓝蛋白、兔血清白蛋白、人血清白蛋白、甲状腺球蛋白、纤维蛋白原、兔丙种球蛋白或鸡的丙种球蛋白。
10.如权利要求1所述的绿原酸完全抗原在制备检测绿原酸的药物或试剂盒中的应用。
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|---|---|---|---|---|
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Citations (1)
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| CN103601662A (zh) * | 2013-11-21 | 2014-02-26 | 深圳市药品检验所 | 一种褪黑素半抗原、褪黑素完全抗原及其制备方法和应用 |
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2015
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Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103601662A (zh) * | 2013-11-21 | 2014-02-26 | 深圳市药品检验所 | 一种褪黑素半抗原、褪黑素完全抗原及其制备方法和应用 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| SINGH K V等: "Synthesis and characterization of hapten-protein conjugates for antibody production against small molecules", 《BIOCONJUGATE CHEM》 * |
| 林辉等: "绿原酸人工抗原的合成及反应条件的优化", 《中国中药杂志》 * |
| 秦美蓉等: "活泼酯法合成绿原酸人工抗原及其鉴定", 《沈阳药科大学学报》 * |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112028989A (zh) * | 2020-09-11 | 2020-12-04 | 陕西理工大学 | 一种绿原酸人工抗原及其制备方法和应用 |
| CN112028989B (zh) * | 2020-09-11 | 2022-12-02 | 陕西理工大学 | 一种绿原酸人工抗原及其制备方法和应用 |
| CN113475620A (zh) * | 2021-07-19 | 2021-10-08 | 中国海洋大学 | 一种玉米醇溶蛋白-多酚共价复合物及其制备方法 |
| CN113475620B (zh) * | 2021-07-19 | 2023-05-26 | 中国海洋大学 | 一种玉米醇溶蛋白-多酚共价复合物及其制备方法 |
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