KR101370464B1

KR101370464B1 - 다가 조류 인플루엔자 백신

Info

Publication number: KR101370464B1
Application number: KR1020077009400A
Authority: KR
Inventors: 주안 플라나-두란; 러트 빌라-퀸타나; 조르디 타레스-콜; 마헤쉬 쿠마
Original assignee: 조에티스 더블유 엘엘씨
Priority date: 2004-10-07
Filing date: 2005-10-06
Publication date: 2014-03-06
Also published as: MX2007004004A; AU2005294322A1; BRPI0516542A; CN101035559A; TWI365074B; AR051636A1; AP2007003955A0; ZA200702876B; CA2581355C; NZ553975A; US20060204976A1; KR20070059180A; CA2581355A1; MY153290A; ES2467094T3; JP2008515906A; JP5105524B2; AP2167A; EP1796720A2; US8067013B2

Abstract

본 명세서에서는 조류 인플루엔자 바이러스 감염을 예방하거나 개선하는 데 효과적인 백신 조성물 및 방법에 관해 기술한다. 상기 백신은 2종 이상의 조류 인플루엔자 바이러스 불활성 균주를 포함하는 백신으로서, 헤마글루티닌(HA)의 총 합량이 상기 백신 조성물 용량당 적어도 약 200 HA이고, 상기 균주 각각은 용량당 적어도 약 128 HA/용량을 나타내며, 또한, 상기 균주 중 1종은 공격 바이러스와 동일한 HA 아형을 갖고, 상기 균주 중 적어도 1종은 공격 바이러스와 다른 NA 아형을 갖는다.

Description

다가 조류 인플루엔자 백신{MULTIVALENT AVIAN INFLUENZA VACCINES}

본 발명은 질병 발발시 감수성이 있는 조류에 백신을 접종하는 데 유용한 신규 다가 조류 인플루엔자 백신에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 가금류에서의 조류 인플루엔자 바이러스성 질병을 예방하거나 개선하기 위한 새로운 방법에 관한 것이다.

"AI"라고도 불리는 조류 인플루엔자는 닭과 다른 가금류에 대한 고전염성의 급성 바이러스성 감염이다. AI는 인플루엔자 바이러스로서, 계절마다 "재분류" 또는 "돌연변이"되는, 헤마글루티닌(haemoagglutinin, HA; H로 약기할 수도 있음)과 뉴라미니다제(neuroaminidase, NA; N으로 약기할 수도 있음) 분자에서의 항원 차이를 기초로 하여 아형으로 분류된다. AI는 끊임없이 돌연변이하기 때문에, 어떠한 균주가 다음 계절에 재출현할 것인지에 대해 예측이 불가능하므로 백신 제조가 어렵다. 백신 제조에 이용되는 균주는 대개 제조 조건하에서는 매우 빠른 속도로 번식하지 않으므로, 특정 균주의 출현을 기다렸다가 그 균주를 예방하는 정확한 백신을 제조하는 것은 실행 가능한 선택이 아니다. 일반적으로, 특정 균주의 유행은 수 개월 동안 지속되며, 그 후 아마도 수 년에 걸쳐 사라질 것이다.

박멸은 두드러진 경제적 불이익 없이 조류의 질병을 제어하기 위한 주된 방 법이나, 신속한 면역 반응을 개시하는 백신을 생산할 수 있다면, 그러한 제품은 전체 무리의 대량 살처분에 대한 실용적인 대안책이 될 것이다.

인플루엔자 바이러스는 바이러스가 보유하는 군 항원에 따라서, 다양한 A, B, C 토폴로지로 분류할 수 있는 것으로 알려져 있다. 상기 A, B, C형의 인플루엔자 바이러스는 바이러스의 뉴클레오캡시드(NP)와 기질(M) 단백질에서 발견될 수 있는 항원 차이를 기초로 하여 상호 구별될 수 있다. 특히, A형 인플루엔자 바이러스는 헤마글루티닌(HA)과 뉴라미니다제(NA) 분자에서의 항원 차이를 기초로 하여 아형들로 분류될 수 있다. 현재까지 NA1 ~ NA9로 명명되는 뉴라미니다제 NA 단백질의 아형 9종과 HA1 ~ HA15로 명명되는 혈청 헤마글루티닌 HA 단백질의 다양한 아형 15종이 확인되었다. 조류에서는, 임의의 다양한 HA(또는 H)와 NA(또는 N) 아형을 보유하는 바이러스가 분리되었다.

HA는 약 560개의 아미노산을 포함하는 바이러스의 표면 당단백질이며 전체 바이러스 단백질 중 25종에 해당한다. HA는 감염 초기 단계에서 숙주 세포에 대한 바이러스 입자의 유착과 바이러스 입자가 상기 숙주 세포로 관통하는 데 주로 관여한다. 바이러스 단백질 중에서 헤마글루티닌은 번역후 재배열에 가장 영향을 받기 쉬운 단백질이다. 헤마글루티닌의 합성이 종료된 후, 이 분자는 숙주 세포의 5가지의 세포외 유출 경로를 따라 이행하며, 이 과정에서 HA는 폴딩되고 삼량체로 조합되며 글리코실화된다. 최종적으로는 2개의 서브 유닛 H1과 H2로 분열된다; 이러한 분열 단계는 상기 분자의 활성화 및 비리온(virion)에 의한 감염 능력 획득에 있어서 핵심적 단계이다.

실제로, 염기성 아미노산 잔기와 관련된, 분열 부위의 다양한 조성이 국소 감염 또는 증상이 있는 감염을 일으키거나, 또는 역으로 많은 조류 종에 대해 치명적인 결과를 초래하는 전신 감염을 일으킬 수 있는 조류 인플루엔자 바이러스의 능력으로 이어진다는 것이 잘 알려져 있다. 그러므로, 이러한 사실은 바이러스의 병원성 뿐만 아니라 기관 향성, 숙주 특이성에 영향을 끼칠 수 있음이 제기되었다. 바이러스의 병원성과 관련하여, 다중 기반 부위(multibase-site) HA를 갖는 균주에는 HA 분자를 여러 세포 유형에서 활성 형태인 H1과 H2로 절단하는 프로테아제가 존재하며, 이로 인하여 25종의 감염성 바이러스 입자를 대량 생산하는 다중 감염 사이클이 초래되고, 단기간 내에 전 지역에 걸쳐서 감염이 만연된다(HPAI 균주). 상기 감염은 결과적으로 치사율이 매우 높은 급성-초급성 진행을 갖게 될 것이다.

뉴라미니다제(NA)는 인플루엔자 A형 바이러스의 제2의 막 당단백질에 해당한다. 이것은 413개의 아미노산 펩티드를 암호화하는 1,413개의 뉴클레오타이드 길이의 유전자(바이러스 RNA의 분절 6)에 의해 암호화된다. 상기 단백질은 적어도 2가지의 중요한 기능, 즉, 시알산 분자와 헤마글루티닌 사이를 절단하여 바이러스성 헤마글루티닌에 대한 세포 수용체를 파괴하는 기능을 갖는다. 이러한 방식으로, 새롭게 형성된 바이러스 입자가 세포막을 따라 축적되는 것을 방지할 뿐만 아니라 점막 표면에 존재하는 점액을 통해 바이러스의 이동을 촉진함으로써 바이러스 자손(progeny)의 유리를 용이하게 할 수 있는 것으로 추정된다. 또한, NA는 항원 변이에 영향을 받는 중요한 항원 결정 인자에 해당한다.

현재 당해 기술 분야에서는 감염된 무리를 박멸시키는 것의 유용한 대안이 될 수 있는 조류 인플루엔자 백신이 필요한 실정이다. 상기 백신은 백신을 접종한 조류에 대해 신속한 면역 반응을 유도해야 하며, 백신을 접종한 조류가 감염된 조류와 구별될 수 있도록 하는 것이 바람직하다. 2가 또는 다가 인플루엔자 백신은 백신을 접종한 조류와 감염된 조류를 구별하는 수단을 제공하기 위해 백신 접종의 대상이 되는 균주와 다른 N을 갖는 백신을 투여하는, 소위 "DIVA" 기법으로 이용하도록 요구되었다. 본 명세서에서 그 전문을 참고문헌으로 인용하는 공개 공보 PCT WO 03/086453은 DIVA 기법 및 상기 기법에 이용될 수 있는 몇몇의 대표적인 백신을 기술하고 있다.

혼합 또는 다가 백신은 1가 백신에 비해 다수의 분명한 이점을 제공한다. 다가 백신의 한 가지 이점은 더 적은 양의 백신 접종이 요구된다는 점이다. 단일 제제가 1회 접종으로 투여될 수 있고 여러 질병 또는 단일 질병의 균주에 대해 효과적이다. 잠재성 바이러스 균주의 범위가 증가함에 따라, 접종 횟수를 최소화하기 위하여 혼합 백신이 더욱 더 필요하게 되었다. 백신을 혼합하는 경우 필요한 접종 횟수의 감소는 백신 접종 계획에 대한 순응성 증가로 이어질 수 있다. 이는 백신 적용 범위의 증가로 이어져, 궁극적으로 질병을 더 잘 제어할 수 있게 된다.

최근에는 혼합 백신의 예기치 못한 문제점으로서, 혼합 백신에서 1종의 백신이 다른 백신에 미칠 수 있는 부정적인 영향, 소위 "항원 간섭(antigen interference)" 효과가 확인되었다. 기존의 백신 2종을 단순히 혼합할 경우, 1종 또는 2종 모두 그 효능을 상실할 수 있음이 밝혀졌다(Andre, F.E., "Development of Combined Vaccines: Manufacturers' Viewpoint," Biologicals 22:317-321 (1994); Hadler, S.C., "Cost benefit of combining antigens," Biologicals 22:415-418 (1994); Goldenthal. K,L. et al., Overview - Combination Vaccines and Simultaneous Administration. Past, Present, and Future." In: Combined Vaccines and Simultaneous Administration, Current Issues and Perspectives (Eds. Williams, J.C. et al.) The New York Academy of Sciences, New York, pp. 1 XI-XV (1995); Clemens, J., et al., "Interactions between PRP-T Vaccine against Hemophilus influenzae Type b and Conventional Infant Vaccines Lessons for Future Studies of Simultaneous Immunization and Combined Vaccines." In: Combined Vaccines and Simultaneous Administration. Current Issues and Perspectives (Eds. Williams, J.C. et al.) The New York Academy of Sciences, New York, pp. 255-266 (1995); Insel, R.A., "Potential Alterations in lmmunogenicity by Combining or Simultaneously Administering Vaccine Component." In: Combined Vaccines and Simultaneous Administration. Current Issues and Perspectives (Eds. Williams. J.C. et al.) The New York Academy of Sciences, New York, pp. 35-47 (1995)).

불행히도, 현재 확립된 실험실에서의 효능 테스트를 이용하여 개개의 백신 성분들이 그 효능을 유지할 것인지를 항상 예측할 수 있는 것은 아니다. 예를 들어, 몇몇의 독립적 연구에서는, Hib 백신을 전체 세포 백일해 백신과 혼합하는 경우 상기 2종의 백신 간에 어떠한 간섭도 일어나지 않지만, Hib 백신을 무세포 백일해 백신과 혼합하는 경우 Hib 면역원성에 상당한 손실이 있다고 보고하였다. Hib가 DTaP와 혼합될 경우 별개의 부위에 투여한다면 이것은 그 면역원성을 유지하는 반면, 동일한 부위에 백신을 혼합 투여할 때 상기 면역원성은 5 ~ 15배 더 낮아지는 것으로 확인되었다. 이러한 예기치 못한 결과는, 기존의 백신 2종을 혼합하는 것이 간단하거나 일상적인 과정이 아닐 수 있으며, 그러한 혼합은 종종 초기 연구 과정에서 검출되지 않은 전혀 예측할 수 없었던 결과를 제공함을 확인시켜 준다. 비간섭을 증명하기 위해 필요한 연구는 대개 비간섭 및 이용 적합성을 증명하기 위해 추가로 수개월 또는 수년간의 연구를 더한다.

2가 조류 인플루엔자 백신, 예를 들어 Merial사에 의해 시판되는 Fluvac®으로 알려진 백신 등은 시장에서 입수할 수 있지만, 신속한 면역 반응 및 더 높은 역가 반응을 일으키고, 이에 따라 조류 인플루엔자 발발시 조류를 신속하게 보호하기 위해 이용될 수 있는 개선된 2가 또는 다가 조류 인플루엔자 백신에 대한 필요성이 여전히 존재한다.

발명의 요약

일 양상에서, 본 발명은 조류 인플루엔자를 예방하거나 개선하는 데 효과적이고, DIVA 기법으로 이용할 수 있으며, 또한 신속한 면역 반응을 개시하도록 한다는 이점을 나타내고, 용량당 HA의 비율을 약 200 HA/용량 이상, 가장 바람직하게는 약 250 ~ 300 HA/용량으로 포함하는 백신 조성물을 제공한다.

따라서, 본 발명은 용량당 HA의 합량이 약 200 HA/용량 이상, 바람직하게는 약 250 ~ 300 HA/용량인 2종 이상의 조류 인플루엔자 균주를 포함하는 백신 조성물을 제공한다. 각각의 조류 인플루엔자 균주의 용량당 HA의 양은 다양할 수 있으 나, 통상적으로 적어도 약 75 HA/용량, 가장 바람직하게는 약 128 HA/용량 이상이다.

본 발명의 2가 또는 다가 백신에 적용하기 위해 선택되는 특정 조류 인플루엔자 균주는 상기 백신을 투여해야 하는 지역에서 유행하는 특정 균주에 좌우된다. DIVA 기법을 이용할 수 있도록, 균주 중 1종은 유행 또는 공격(challenge) 균주의 HA 아형과 동일한 HA 아형 및 상이한 N 성분을 갖는 것이 가장 바람직하다. 추가 균주는 처리하려는 지역에서 소정의 발생률을 나타내는 다른 HA 아형을 가지며, 또한 바람직하게는 상이한 N 아형을 갖는 균주로부터 선택할 수 있다.

본 발명의 또 다른 일부로서, 본 발명은 조류 인플루엔자 바이러스 감염을 예방하거나 개선하는 데 효과적이고, 2종 이상의 조류 인플루엔자 바이러스 불활성 균주를 포함하는 백신 조성물로서, 헤마글루티닌(HA)의 총 합량이 상기 백신 조성물 용량당 적어도 약 200 HA이고, 상기 균주 각각은 용량당 적어도 약 128 HA를 나타내며, 또한, 상기 균주 중 1종은 공격 바이러스와 동일한 HA 아형을 갖고, 상기 균주 중 적어도 1종은 공격 바이러스와 다른 NA 아형을 갖는 백신 조성물을 제공한다.

또한 본 발명은 2종 이상의 조류 인플루엔자 바이러스 불활성 균주를 포함하는 백신 조성물을 가금류 구성원에게 투여하는 단계를 포함하는 조류 인플루엔자 바이러스 감염의 발발을 예방하거나 개선하는 방법으로서, 헤마글루티닌(HA)의 총 합량이 상기 백신 조성물 용량당 적어도 약 200 HA이고, 상기 균주 각각은 용량당 적어도 약 128 HA를 나타내며, 또한, 상기 균주 중 1종은 공격 바이러스와 동일한 HA 아형을 갖고, 상기 균주 중 적어도 1종은 공격 바이러스와 다른 NA 아형을 갖는 방법을 제공한다.

또한 본 발명은 조류 인플루엔자 바이러스 감염을 예방하거나 개선하는 데 효과적이고, 2종 이상의 조류 인플루엔자 바이러스 불활성 균주를 포함하는 백신 조성물로서, 헤마글루티닌(HA)의 총 합량이 상기 백신 조성물 용량당 적어도 약 250 HA이고, 상기 균주 각각은 용량당 적어도 약 150 HA를 나타내며, 또한, 상기 균주 중 1종은 공격 바이러스와 동일한 HA 아형을 갖고, 상기 균주 중 적어도 1종은 공격 바이러스와 다른 NA 아형을 가지며, 또한 필수적으로 솔비탄 올레이트 에스테르로 구성되는 2종의 계면활성제를 포함하는 백신 조성물을 제공한다.

본 발명의 상기 및 기타 실시형태, 특징 및 이점은 본 명세서에서 후술하는 상세한 설명 및 첨부된 청구 범위로부터 명백해진다.

일 양상에서, 본 발명은 HA 총 함량이 용량당 약 200 HA 이상인 신규 다가 조류 인플루엔자 백신에 관한 것이다.

본 발명의 백신에 있어서 유용한 조류 인플루엔자 분리물은 당해 기술 분야에서 이용 가능한 기법을 사용하여 분리할 수 있다. 예를 들면, 감염된 닭의 조직 또는 혈청은 상업용 육용계로부터 입수할 수 있다. 그 후 바이러스를 조직 또는 다른 적절한 배지 중에서 계대 배양하여 종균(master seed) 바이러스를 확립할 수 있다. 또한 당업자가 이용 가능한 방법을 사용하여 추가 특성 분석을 실시할 수 있다. 바이러스는 예를 들면, 열 처리 및 화학적 처리와 같은 이용 가능한 방법을 사용하여 불활성화시킬 수 있다.

본 발명의 또 다른 양상에서, 본 발명은 또한 2종 이상의 조류 인플루엔자 균주를 함유하는 백신 조성물을 포함한다.

본 발명의 백신 조성물은 이용 가능한 기법을 이용하여, 바람직하게는 약학적으로 허용가능한 담체와 함께 제형화할 수 있다. 예를 들면, 일 실시형태에서 수성 제형이 고려된다. 상기 제형은 물, 염수, 또는 인산염 또는 다른 적절한 버퍼를 이용한다. 또 다른 실시형태에서, 백신 조성물은 유중수형(water-in-oil) 또는 수중유형(oil-in-water) 에멀젼인 것이 바람직하다. 또한, 종종 수중유중수형(water-in-oil-in-water) 에멀젼으로 간주되는 이중 에멀젼이 고려된다. 오일은 상기 제형을 안정화하고 또한 보조제(adjuvant) 또는 인핸서(enhancer)로서 작용하는 데 도움을 줄 수 있다. 적절한 오일로는 천연산이든 또는 합성산이든 백유, 드레이크 오일(Drake oil), 스쿠알란 또는 스쿠알렌 뿐만 아니라 다른 동물성 오일, 식물성 오일 또는 미네랄 오일을 들 수 있으며, 이에 한정되지 않는다.

또한, 상기 백신 조성물은 당해 기술 분야에서 이용 가능한 다른 적절한 보조제를 포함할 수 있다. 이들은 예를 들면, 수산화알루미늄 및 인산알루미늄 뿐만 아니라 다른 금속염을 포함할 수 있다.

또한 상기 백신 조성물은 계면활성제 또는 다른 습윤제 또는 제형 보조제와 같은 추가적인 부형제를 포함할 수 있다. 계면활성제는 솔비탄 모노-올레이트 에스테르(TWEEN^® 시리즈), 산화에틸렌/산화프로필렌 블록 공중합체(PLURONIC^® 시리즈), 뿐만 아니라 당해 기술 분야에서 이용 가능한 다른 것들을 포함할 수 있다. 안정제 또는 방부제로서 간주되는 다른 화합물 역시 백신에 포함될 수 있다. 이들 화합물의 예로는 방부제 포르말린 뿐만 아니라 솔비톨, 만니톨, 녹말, 자당, 덱스트린 또는 포도당 등의 탄수화물을 들 수 있으며, 이에 한정되지 않는다.

또한 상기 백신 조성물은 실질적으로 외인성 수분이 없는 건조 분말로서 제형화될 수 있으며, 그 후 투여 전 최종 이용자에 의해 재구성될 수 있다.

상기 백신 조성물은 사멸 또는 불활성화된 바이러스를 이용하여 제형화하는 것이 가장 바람직하다. 또한 총 HA 함량이 약 200 이상이 되도록 하는 데 필요한 수준으로 요구되는 HA 단백질을 발현하는 재조합 백신이 본 발명에 사용될 수 있는 것으로 고려된다.

본 발명의 백신 조성물은 인플루엔자 바이러스 성분 유래의 HA를 최소 약 200 HA의 총량으로 포함하는 것이 바람직하다. 본 발명의 일 실시형태에서, 백신은 각각의 균주로부터 약 128 HA/용량, 더 바람직하게는 각각의 균주로부터 약 192 HA/용량을 포함한다.

또한 본 발명의 백신 조성물은 다른 질병에 대한 다른 가금류 항원을 포함시켜 투여할 수 있다. 예를 들면, 닭 허피스 바이러스, 닭 빈혈 바이러스(CAV), 뉴캐슬병 바이러스 및 전염성 기관지염(IB) 바이러스에 대한 백신 항원 뿐만 아니라 레오바이러스 항원은 본 발명의 백신 조성물의 일부로 포함될 수 있다. 1종 이상의 레오바이러스 항원은 본 발명의 백신 조성물의 일부로 특히 바람직하다.

또한 본 발명은 조류 인플루엔자 바이러스 감염 예방을 유도하는 방법을 제공한다. 상기 방법은 HA 합량이 약 200 HA/용량 이상, 특히 바람직하게는 250 ~ 300 HA/용량인 2종 이상의 조류 인플루엔자 바이러스 균주를 포함하는 백신 조성물을 가금류 동물에게 투여하는 단계를 포함한다.

투여 방법은 당업자가 선택할 수 있다. 예를 들면, 백신 조성물은 식수, 살포 또는 점안을 통해 부화 후의 어린(수일령 내지 수주령) 병아리에 투여할 수 있다. 본 발명에서는 난내(in ovo) 투여를 고려한다. 예를 들면, 대개 약 18 ~ 19일째에 수정란에 접종할 수 있다. 또한 본 발명의 백신 조성물을, 질병 유발성 조류 인플루엔자 바이러스의 병원체에 노출될 가능성이 있는 것으로 예측되는 시기에 따라 결정될 수 있는 계획에 준하여 유효량으로, 비경구, 피하, 복강내, 경구, 비강내로, 또는 기타 이용 가능한 수단으로, 바람직하게는 비경구 경로로, 보다 바람직하게는 근육내로 투여하는 기타 방법들도 본 발명의 범주에 속한다.

용량은 통상적으로 가금류 동물당 약 0.25 mL ~ 약 2.0 mL, 더 바람직하게는 동물당 약 0.5 mL ~ 약 1.0 mL의 범위 이내이다. 따라서, 본 발명에서는 1회, 2회 또는 그 이상의 용량이 고려되며, 가능한 한 투여 횟수가 적은 것이 특히 바람직하다.

전술한 바와 같이, 본 발명은 신규 조류 인플루엔자 백신 조성물 및 가금류에 상기 백신을 사용하는 방법에 관한 것이다. 용어 "가금류"는 닭, 오리, 거위, 칠면조, 공작, 당닭(이에 한정되지 않음) 등을 비롯하여 상업적으로 사육되는 모든 가금류 동물을 포함하는 것을 의미한다.

하기 실시예는 본 발명의 다양한 바람직한 양상을 설명하지만, 본 발명의 전 범위를 어떤 식으로도 제한하는 것은 아니다.

실시예 1

제품의 조성(용량당)

성분명	양	기능
활성 성분(들) 불활성 조류 인플루엔자 바이러스 H5N9 균주 A/CK/이탈리아/22A/H5N9/1998 불활성 조류 인플루엔자 바이러스 H7N1 균주 A/CK/이탈리아/1067/H7N1/1999 보조제의 구성 성분 경질 미네랄 오일 솔비탄 세스퀴올레이트 (식물성) 폴리솔베이트 80 (식물성) 부형제의 구성 성분 티오머살 인산염 완충 염수	≥ 128 HA ≥ 128 HA 230 mg 22.5 mg 4.3 mg 0.02 mg Ad 0.5 ml	활성 성분 활성 성분 보조제 유화제 유화제 방부제 희석액

개발 약제

POULVAC ^® i- AI H5N9 , H7N1 에 포함된 균주

POULVAC^® i-AI H5N9, H7N1에 대한 균주, 조류 인플루엔자 바이러스 H5N9 및 조류 인플루엔자 바이러스 H7N1은 현지에서의 유행성에 기초하여 선택하였다. 양 균주는 이탈리아에 소재하는 주프로필라티코 스퍼리멘탈 델레 베네지에 연구소[Instituto Zooprofilattico Sperimentale delle Venezie (IZS)]로부터 제공받았다. 그 효능은 닭의 혈청 전환에 의해 입증하였다.

POULVAC ^® i- AI H5N9 , H7N1 에 포함된 보조제

상기 보조제는 유중수형(W/O) 에멀젼으로 제형화된, 면역 자극 효과가 잘 입증된 미네랄 오일 에멀젼에 기초하여 선택하였다. 의약품 등급의 경질 미네랄 오일 (NF) Drakeol 5를 제형화에 이용하였다.

안정한 유중수형 에멀젼(W/O)을 얻기 위해서는, 계면활성제를 이용할 필요가 있다. 유화성으로 인해 계면활성제 솔비탄 세스퀴올레이트(식물성), 소수성 계면활성제, 및 폴리솔베이트 80(식물성), 친수성 계면활성제를 선택하였다. 이들 계면활성제의 조합물을 이용하면 안정한 에멀젼이 형성되는 것으로 확인되었다.

Arlacel 83V = 솔비탄 세스퀴올레이트, 모노에스테르와 디에스테르의 등몰 혼합물;

CAS 번호 = 8007-43-9. 이것은 크림, 에멀젼 및 연고의 제조시 이용된다.

Tween 80V = 폴리솔베이트 80 = 폴리옥시에틸렌 20 솔비탄 모노올레이트;

CAS 번호 = 9005-65-6. 이것은 안정한 수중유형 에멀젼의 제조시 이용된다.

Arlacel 83V와 같은 솔비탄 에스테르는 안정한 W/O 에멀젼을 생성하나, 종종 다양한 비율의 Tween 80V와 같은 폴리솔베이트와 함께 이용함으로써 W/O 에멀젼을 생성한다.

제품을 제형화하는 데 이용되는 Arlacel 83V와 Tween 80V는 둘 다 식물성 기원이다.

용량 및 백신 접종 계획

가금류 산업에서 이용되는 용량은 통상 0.5 ml이다.

POULVAC ^® i- AI H5N9 , H7N1

혈청학적 연구를 기초로 한 효능

1. 탐색적 용량 반응 연구

다양한 항원 HA 수준에 대한 항체 반응을 추정하기 위해 탐색적 용량 적정 연구를 수행하였다. 256, 128, 64 또는 32 HA 유닛의 항원 농도를 포함하는 4종의 실험용 백신을 제조하였고 각각의 백신을 이용하여 2주령 및 4주령의 SPF 닭 10마리의 근육내로 백신 접종하였다. 동종의 닭 10마리로 이루어진 군은 대조군으로서 백신 접종을 하지 않고 방치하였다. 각각의 백신 접종을 하기 전, 그리고 2차 백신 접종을 한 지 2주, 6주 및 10주 후에 혈액 샘플을 채취하여 혈청 반응을 모니터하였다. 혈청 샘플은 자체 실험실 내에서 혈구 응집 억제 시험(haemagglutination inhibition, HI 시험)을 이용하여 평가하였으며, 또한 주프로필라티코 스퍼리멘탈 연구소(IZS)에서도 HI 시험으로 평가하였다.

혈청학적 데이타는 모든 조류가 백신 접종 전에 2종의 조류 인플루엔자 균주에 대해 혈청 반응이 음성이었음과 백신을 접종하지 않은 모든 조류는 본 연구 전반에 걸쳐 혈청 반응 음성으로 유지되었음을 나타내었다.

H5N9 혈청학적 결과

본 발명자들의 실험실에서 얻은 결과는 IZS에서 얻은 결과보다 대체로 더 높았으나 2 ~ 4배의 희석률 이내였다(하기 표 1 참조). 128 또는 256 HA 유닛을 포함 하는 백신으로 1차 백신 접종을 한 지 2주 후에 백신을 접종한 10마리 모두는 적어도 16 HI 유닛(본 발명자들의 데이타) 및 4 HI 유닛(IZS)의 역가를 나타내었다. 2차 백신 접종은 모든 닭에서 H5N9에 대한 강한 2차 면역 반응(anamnestic response)을 유도하였고, 2주 후에 더 높은 역가의 백신을 투여한 모든 조류에서 적어도 64 HI 유닛의 역가가 관찰되었다.

H7N1 혈청학적 결과

본 발명자들의 실험실에서 얻은 결과는 IZS에서 얻은 결과보다 대체로 더 높았으나 H5N9에 대한 결과보다 3 ~ 8배의 차이로 더 높았다. 여하튼, IZS 결과로부터 보존성이 더 큰 역가를 취하였을 때, 1차 백신 접종을 한 지 2주 후에 128 또는 256 HA 유닛을 포함하는 백신을 투여한 닭은 모두 적어도 8 HI 유닛의 역가를 나타내었음이 분명하였다. 2차 백신 접종은 모든 닭에서 H7N1에 대한 매우 강한 2차 면역 반응을 유도하였고 2주 후에 더 높은 역가의 백신을 투여한 모든 조류에서 적어도 512 HI 유닛의 역가가 관찰되었다.

이들 결과는 POULVAC^® i-AI H5N9, H7N1이 유럽 이사회(이사회 지침 92/40/EEC)가 방어성이 있다고 간주하는 1:16의 수준 이상으로 H5N9 및 H7N1에 대한 역가를 유도할 수 있음을 보여준다.

포트 다지 수의학 연구소(Fort Dodge Veterinaria S.A.; FD)와 주프로필라티코 스퍼리멘탈 델레 베네지에 연구소(IZSV) 사이의 HI 역가 요약 비교
항원 농도	주령	HI 역가
		H5N9		H7N1
		FD	IZSV	FD	IZSV
각각의 아형에 대해 256 HAu	2w	1	1	1	1
	4w	59.7	27.9	274.4	52
	6w	1910.8	388	8780	1910.8
	10w	73.5	PR	274.4	PR
	14w	26	PR	168.9	PR
각각의 아형에 대해 128 HAu	2w	1	1	1	1
	4w	39.4	13	274.4	32
	6w	831.8	256	4390	831.8
	10w	69.1	PR	276.5	PR
	14w	50.8	PR	74.7	PR
각각의 아형에 대해 64 HAu	2w	1	1	1	1
	4w	19.7	4.3	90.5	8
	6w	861	207.9	2786.9	338
	10w	42.2	PR	111.4	PR
	14w	34.3	PR	64	PR
각각의 아형에 대해 32 HAu	2w	1	1	1	1
	4w	4.6	1.87	13	2.1
	6w	445.7	111.4	2048	157.6
	10w	34.6	PR	52	PR
	14w	27.4	PR	47	PR
백신 접종 하지 않음	2w	1	1	1	1
	4w	1	1	1	1
	6w	1	1	1	1
	10w	1	PR	1	PR
	14w	1	PR	1	PR
FD: 포트 다지 수의학 연구소에서 얻은 HI 역가 IZSV: 주프로필라티코 스퍼리멘탈 델레 베네지에 연구소에서 얻은 HI 역가 2W: 1차 백신 접종 및 채혈시 주령 4W: 2차 백신 접종 및 채혈시 주령 6W: 2차 백신 접종 및 채혈 후 2주, 6주, 10주 또는 14주 PR: 미결정 결과 계산을 위해, 혈청이 역가를 전혀 나타내지 않는다면, 역가 1을 나타내는 것으로 간주하였다.

2. 효능 연구

닭에서의 POULVAC^® i-AI H5N9, H7N1의 효능은 하기 절차로 평가하였다.

110-A1-E-14-04. 2주령의 SPF 닭 20마리에게 2종의 항원 모두에 대해서 최소의 역가(128 HA 유닛)로 제형화된 1회 용량 0.5 ml를 근육내로 백신 접종하였다. 3주 후, 상기 조류가 5주령이 되었을 때 2차 백신 접종을 실시하였다. 동종의 닭 20마리를 비교를 위한 비접종 대조군으로서 유지하였다. 매회 백신 접종 전과 2차 백신 접종을 한 지 3주 후에 혈액 샘플을 채취하여 혈청 반응을 모니터하였다. 혈청 샘플은 자체 실험실에서 혈구 응집 억제 테스트(HI 테스트)를 이용하여 평가하였으며, 또한 주프로필라티코 스퍼리멘탈 연구소(IZS)에서도 HI 테스트로 평가하였다.

혈청학적 데이타는 모든 조류가 백신 접종 전에 2종의 조류 인플루엔자 균주에 대해 혈청 반응이 음성이었음과 백신을 접종하지 않은 모든 조류는 본 연구 전반에 걸쳐 혈청 반응이 음성이었음을 나타내었다.

H5N9 혈청학적 결과

본 발명자들의 실험실에서 얻은 결과는 IZS에서 얻은 결과보다 대체로 더 높았으나 2 ~ 4배의 희석률 이내였다(하기 표 2 참조). 1차 백신 접종을 한 지 3주 후에, 백신을 접종한 20마리 모두는 적어도 128 HA 유닛(본 발명자들의 데이타) 및 64 HA 유닛(IZS)의 역가를 나타내었다. 이는 단일 용량의 POULVAC^® i-AI H5N9, H7N1이 유럽 이사회(이사회 지침 92/40/EEC)가 방어성이 있다고 간주하는 1:16의 수준 이상으로 H5N9에 대한 역가를 유도할 수 있음을 보여준다.

2차 백신 접종은 모든 닭에서 H5N9에 대한 강한 2차 면역 반응을 유도하였고, 이것은 또한 공격 바이러스에 대한 우수한 방어력이 관찰될 것임을 나타내는 것이다.

H7N1 혈청학적 결과

본 발명자들의 실험실에서 얻은 결과는 IZS에서 얻은 결과보다 대체로 더 높았으나 H5N9에 대한 결과보다 3 ~ 8배의 차이로 더 높았다. 테스트에서의 이러한 차이가 왜 그렇게 큰 지는 아직 알려지지 않았다. 여하튼, IZS 결과로부터 보존성이 더 큰 역가를 취하였을 때, 1차 백신 접종을 한 지 3주 후에, 백신을 투여한 20마리는 모두 적어도 128 HA 유닛의 역가를 나타내었음이 분명하였다. 이는 1회 용량의 POULVAC^® i-AI H5N9, H7N1이 유럽 이사회(이사회 지침 92/40/EEC)가 방어성이 있다고 간주하는 1:16의 수준 이상으로 유의하게 H7N1에 대한 역가를 유도할 수 있음을 보여준다.

2차 백신 접종은 모든 닭에서 H7N1에 대한 매우 강한 2차 면역 반응을 유도하였고, 또한 공격 바이러스에 대한 우수한 방어력이 관찰될 것임을 나타내는 것이다.

포트 다지 수의학 연구소(FD)와 주프로필라티코 스퍼리멘탈 델레 베네지에 연구소(IZSV) 사이의 HI 역가 요약 비교 기하 평균 역가로서 표현된 HI
항원 농도	주령	조류 인플루엔자 아형
		H5N9		H7N1
		FD	IZSV	FD	IZSV
군 1 (백신접종)	2w	1	1	1	1
	5w	374.8	163.1	955.4	304.4
	8w	1351.2	588.1	14263.1	1782.9
군 2 (대조군)	2w	1	1	1	1
	5w	1	1	1	1
	8w	1	1	1	1
계산을 위해, 혈청이 역가를 전혀 나타내지 않는다면, 역가 1을 나타내는 것으로 간주하였다.

비교예 2

이 실시예를 위해, 2개의 간행물을 참조한다: 참조 문헌 1: Capua et al., Developments of a DIVA (Differentiating Infected from Vaccinated Animals) Strategy Using a Vaccine Containing a Herterologous Neuraminidase for the Control of Avian Influenza; Avian Pathology 32, 47-55 (2003); 및 참조 문헌 2: Ellis et al., Vacination of Chickens Against H5N1 Avian Influenza in the Face of an Outbreak Interrupts Virus Transmission. 참조 문헌 1은 2회 용량의 경쟁자의 백신 H7N3을 접종한 2주령 또는 4주령의 조류가 HI로 측정시 6주째 기하 평균 역가가 45인 혈청 반응을 나타내었고, 조류 13마리 중 11마리가 1:16 HI 이상의 역가를 나타내었음(방어성이 있는 것으로 간주)을 언급한다. 1회 백신을 접종한 3주령의 조류는 HI로 측정시 6주째 기하 평균 역가가 19인 혈청 반응을 나타내었다. 이 경우에, 조류 13마리 중 8마리만이 1:16 이상의 HI 역가를 나타내었다. 반대로, 본 명세서에 기재된 H7N1 부분 결과는 1회 투여 프로그램과 2회 투여 프로그램 모두에서 이보다 상당히 높았다. 참조 문헌 2는 56 ~ 99일령의 조류에서 1회 용량의 또 다른 경쟁자의 인플루엔자 백신을 접종하였음을 언급한다. 백신 접종 15일 후, 기하 평균 역가는 HI로 측정시 11.7이었으며, 조류 60마리 중 32마리가 1:16 또는 그 이상의 HI 역가를 나타내었다. 백신 접종 22일 후, 기하 평균 역가는 HI로 측정시 33.9였으며, 조류 60마리 중 49마리가 1:16 또는 그 이상의 HI 역가를 나타내었다. 그러나, 본 발명에서 얻은 결과는 보다 더 큰 효능을 나타낼 것으로 보인다.

실시예 3

칠면조에서의 예방 백신 접종을 위한 POULVAC XXX 효능 시험

결과의 핵심 요약

일반적인 정보

· 국제 수역 사무국(OIE) 및 AI 및 ND에 대한 국내 표준 실험실인, 이탈리아 파도바에 소재하는 주프로필라티코 스퍼리멘탈 델레 베네지에 연구소에서 수행하였다.

· 시험은 이전 작업을 기초로 하였으나, 하기에 대한 예방 백신 접종을 위한 수단으로서 POULVAC XXX의 효능을 테스트하도록 개발하였다:

- 고도로 적응된 바이러스의 재출현(A/Ty/이탈리아/8000/H7N3/2002)

- 가축 숙주에 대한 적응도가 낮은 신규 균주의 출현(A/ty/이탈리아/H5N2/1980)

- 시험은 다양한 감염 용량으로 닭과 칠면조에서 수행하였다.

실험적 시험

칠면조

· 8일, 34일, 60일령에 POULVAC XX, 0.5 ㎖/SC로 백신 접종

· 4개의 실험군, 2개의 백신 접종군 및 2개의 백신 비접종군, 3차 백신 접종 21일 후에 10 ㎕의 10⁴ EID/50으로 비강내 투여로 항원 공격

- LPAI A/ty/이탈리아/8000/2002/H7N3

- LPAI A/ty/이탈리아/H5N2/1980

· 백신을 접종하지 않은 1개의 대조군

· 발산(shedding)(3, 5, 7, 10, 14, 20일째 수거한 기관지 및 배설강 면봉 채취물), 혈청학 및 임상적 징후를 검토하였다.

방법

· EU 지침 92/40/EC에 따른 바이러스 분리

· EU 지침 92/40/EC에 따른 혈구 응집 억제 테스트

· 문헌 [CATTOLI ET AL., (2004), AVIAN PATHOLOGY, 33(4), PP. 432-437]에 따른 실시간 RT-PCR

· 문헌 [CAPUA ET AL., (2003) AVIAN PATHOLOGY 32 (1), 47-55]에 따른 항 N 항체 검출 테스트인 "DIVA" 테스트

정의 및 통계학적 테스트

· 감염: RRT-PCR(기관지 또는 배설강) 및 혈청 전환에 의한 바이러스 양성률과 "DIVA" 테스트에 대한 양성률의 조합

· 혈청 전환: 적어도 4 log의 증가(항원 공격 전 및 후의 역가)

· 백신 접종군과 백신 비접종군 간의 발산 비교: 피셔의 정확 검정 확률(P)(Fisher's exact P)

· 항원 공격 전 및 후의 역가의 비교: 비모수적 부호 검정(동일한 군 내에서의 전-후) 및 윌콕슨(맨-휘트니)의 2가지 샘플 검정(상이한 군 간의 역가 증가의 비교는 항원 공격 후 백신 접종군과 백신 비접종군 간에 역가 증가의 차이가 있는지 입증하기 위한 것임)

결과

칠면조 H5N2 10 ⁴ EID /50 항원 공격

1. 백신 접종 조류 대 백신 비접종 조류 간의 감염 유발 지표의 비교

피셔의 정확 검정 확률(P) = 0.0005 (< 0.01)

유의 수준: 백신 접종 조류 대 백신 비접종 조류에서 감염이 유발된 조류의 수 간에 통계적으로 유의한 차이가 있었다.

	양성	음성	총계
백신 접종	1	9	10
백신 비접종	9	1	10

2. 백신 접종 조류 대 백신 비접종 조류에서의 발산 수준(배설강 및 기관지 면봉 채취물) 간의 비교

피셔의 정확 검정 확률(P) = 0.0005 (< 0.01)

유의 수준: 백신 접종 조류에서의 발산 수준이 백신 비접종 조류보다 유의하게 더 낮았다.

	양성	음성	총계
백신 접종	44	96	140
백신 비접종	57	69	126

3. 백신 접종 조류 대 백신 비접종 조류에서의 항원 공격 전 및 후의 HI 역가의 비교

비모수적 부호 검정:

백신 비접종: H5N2 : P = 0.0039 (< 0.01); H5N9 : P = 0.0039 (< 0.01)

백신 접종: H5N2 : P = 0.1797 (> 0.05); H5N9 : P = 0.0039 (< 0.01)

유의 수준: 백신 접종 조류에서의 공격 바이러스에 대한 혈청 역가 상승은 유의하지 않았다. 반면에 백신 비접종 조류에서는 유의한 역가 상승이 있었다.

	H5N2 항원 공격전	H5N2 항원 공격후	H5N9 항원 공격전	H5N9 항원 공격후
백신 접종	7.2^*	9.6	6.0	6.9
백신 비접종	0	8.5	0	6.2
* log 2

칠면조 H7N3 1 O ⁴ EID /5O 항원 공격

1. 백신 접종 조류 대 백신 비접종 조류 간의 감염 유발 지표의 비교

피셔의 정확 검정 확률(P) = 0.0001 (< 0.01)

유의 수준: 백신 접종 조류 대 백신 비접종 조류에서 감염 유발 간에 통계적으로 유의한 차이가 있었다.

	양성	음성	총계
백신 접종	1	9	10
백신 비접종	9	1	10

피셔의 정확 검정 확률(P) = 0.0000 (< 0.01)

	양성	음성	총계
백신 접종	21	119	140
백신 비접종	63	63	126

비모수적 부호 검정:

백신 비접종: H7N1 : P = 0.0039 (< 0.01); H7N3 : P = 0.0039 (< 0.01)

백신 접종: H7N1 : P = 0.0020 (< 0.01); H7N3 : P = 0.0215 (< 0.05)

비유의 수준: 백신 접종 조류에서는 백신 비접종 조류에서 관찰된 것과 유사한 정도로 공격 바이러스에 대한 혈청 역가의 유의한 상승이 있었다.

	H7N1 항원 공격전	H7N1° 항원 공격후	H7H3 항원 공격전	H7N3 항원 공격후
백신 접종	8.4^*	10.6	5.3	7.1
백신 비접종	0	9	0	6.8
* log 2 °H7N1 바이러스와의 더 높은 혈청 반응성은 특정 바이러스 균주에 기인할 수 있다. 유의성을 평가하기 위하여 공격 바이러스의 역가가 고려되어야 한다.

결론 - 칠면조

· 3가지 사정 프로그램에서 POULVAC XXX는

- 이탈리아 칠면조 개체군에 특유한 H7N3 균주의 10⁴ EID/50 항원 공격에 의한 감염 조류의 수, 발산 및 임상적 징후를 유의하게 감소시킬 수 있고,

- 신규 균주의 출현을 모의하기 위해 선택한 H5N2 균주의 10⁴ EID/50 항원 공격에 의한 감염 조류의 수 및 발산을 유의하게 감소시킬 수 있다.

· 칠면조에서의 예방 백신 접종은 실험 감염에 대한 개체군의 감수성을 감소시켰으며 발산 수준을 유의하게 낮추었다.

실시예 4

닭에서의 예방 백신 접종을 위한 POULVAC XXX 효능 시험

결과의 핵심 요약

일반적인 정보

실험적 시험

닭

· 2주령 및 5주령에 POULVAC XX, 0.5 ㎖/IM으로 백신 접종

· 4개의 실험군, 2개의 백신 접종군 및 2개의 백신 비접종군 2차 백신 접종 21일 후에 10 ㎕의 10⁶ EID/50으로 비강내 투여로 항원 공격

- LPAI A/ty/이탈리아/8000/2002/H7N3

- LPAI A/ty/이탈리아/H5N2/1980

· 1개의 백신 비접종 대조군

· 발산(3, 5, 7, 10, 14, 20일째 수거한 기관지 및 배설강 면봉 채취물), 혈청학 및 임상적 징후를 검토하였다.

방법

· EU 지침 92/40/EC에 따른 바이러스 분리

· EU 지침 92/40/EC에 따른 혈구 응집 억제 테스트

정의 및 통계학적 테스트

· 백신 접종군과 백신 비접종군 간의 발산 비교: 피셔의 정확 검정 확률(P)

· 항원 공격 전 및 후의 역가의 비교: 비모수적 부호 검정(동일한 군 내에서의 전-후) 및 윌콕손(맨-휘트니)의 2가지 샘플 검정(상이한 군 간의 역가 증가의 비교는 항원 공격 후 백신 접종군과 백신 비접종군 간에 역가 증가의 차이가 있는지 입증하기 위한 것임)

결과

닭 H5N2 10 ⁶ EID /50 항원 공격

피셔의 정확 검정 확률(P) = 0.0433 (< 0.05)

유의 수준: 백신 접종 조류에서는 감염이 유발되지 않았다.

	양성	음성	총계
백신 접종	0	10	10
백신 비접종	4	6	10

2. 백신 접종 조류 대 백신 비접종 조류에서의 발산 수준(배설강 및 기관지 면봉 채취물) 간의 비교

피셔의 정확 검정 확률(P) = 0.0008 (< 0.01)

유의 수준: 백신 접종 조류에서의 발산 수준이 백신 비접종 조류보다 유의하게 더 낮았다(감염이 유발되지 않았기 때문).

	양성	음성	총계
백신 접종	0	140	140
백신 비접종	10	130	140

3. 백신 접종 조류 대 백신 비접종 조류에서의 항원 공격 전 및 후의 HI 역가의 비교

비모수적 부호 검정:

백신 비접종: H5N2 : P = 0.0078 (< 0.01); H5N9 : P = 0.0078 (< 0.01)

백신 접종: H5N2 : P = 0.4531 (> 0.05); H5N9 : P = 0.6875 (> 0.05)

유의 수준: 백신 접종 조류에서의 공격 바이러스에 대한 혈청 역가 상승은 유의하지 않았다(감염이 유발되지 않았기 때문). 반면에 백신 비접종 조류에서는 유의한 역가 상승이 있었다.

	H5N2 항원 공격전	H5N2 항원 공격후	H5N9 항원 공격전	H5N9 항원 공격후
백신 접종	8.9^*	9.6	7.7	8.5
백신 비접종	0	4.1	0	4.1
* log 2

닭 H7N3 1 O ⁶ EID /5O 항원 공격

피셔의 정확 검정 확률(P) = 0.0015 (< 0.01)

유의 수준: 백신 접종 조류에서는 감염이 유발되지 않았다.

	양성	음성	총계
백신 접종	0	10	10
백신 비접종	7	3	10

피셔의 정확 검정 확률(P) = 0.0000 (< 0.01)

	양성	음성	총계
백신 접종	2	138	140
백신 비접종	25	115	140

비모수적 부호 검정:

백신 비접종: H7N1 : P = 0.0020 (< 0.01); H7N3 : P = 0.0020 (< 0.01)

백신 접종: H7N1 : P = 0.0020 (< 0.01); H7N3 : P = 1.0000 (> 0.05)

유의 수준: 백신 접종 조류에서는 공격 바이러스에 대한 혈청 역가의 유의한 상승이 없었다(감염이 유발되지 않았기 때문). 반면 백신 비접종 조류에서는 역가의 유의한 상승이 있었다.

	H7N1 항원 공격전	H7N1° 항원 공격후	H7H3 항원 공격전	H7N3 항원 공격후
백신 접종	8.4^*	10.8	6.1	6.1
백신 비접종	0	5	0	3.5
* log 2 °H7N1 바이러스와의 더 높은 혈청 반응성은 특정 바이러스 균주에 기인할 수 있다. 유의성을 평가하기 위하여 공격 바이러스의 역가가 고려되어야 한다.

결론 - 닭

· 2가지 사정 프로그램에서 POULVAC XXX는

- 이탈리아 칠면조 개체군에 특유한 H7N3 균주의 10⁶ EID/50에 의한 감염을 예방할 수 있고,

- 신규 균주의 출현을 모의하기 위해 선택한 H5N2 균주의 10⁶ EID/50에 의한 감염을 예방할 수 있다.

· 닭에서의 예방 백신 접종은 닭에서의 활성 감염의 확립을 예방하였다.

지금까지 본 발명을 각각의 다양한 실시형태로 기술하였으나, 당업자라면 전술한 상세한 설명에 기재되고 후술하는 청구 범위에 추가로 구체화된 바와 같이 본 발명의 본질적 사상 및 범위를 벗어나지 않도록 본 발명에 특정 변형을 가하여 실시할 수 있을 것이다.

Claims

조류 인플루엔자 바이러스 감염을 예방하거나 개선하는 데 효과적이고, 2종의 조류 인플루엔자 바이러스 불활성 균주를 포함하는 백신 조성물로서, 상기 균주 각각은 용량당 128 헤마글루티닌(HA) 유닛을 나타내며, 또한, 상기 균주 중 1종은 H5N9 조류 인플루엔자 바이러스이고, 상기 균주 중 1종은 H7N1 조류 인플루엔자 균주인 것인 백신 조성물.
제1항에 있어서, 약학적으로 허용가능한 담체를 추가로 포함하는 백신 조성물.
제2항에 있어서, 1종의 추가적인 가금류 항원을 추가로 포함하는 백신 조성물.
제3항에 있어서, 상기 담체는 수성 담체 및 에멀젼으로 구성되는 군으로부터 선택되는 것인 백신 조성물.
제4항에 있어서, 상기 담체는 유중수형 에멀젼인 백신 조성물.
제5항에 있어서, 상기 에멀젼은 2종의 계면활성제를 포함하는 것인 백신 조성물.
제6항에 있어서, 상기 2종의 계면활성제 중 하나는 솔비탄 세스퀴올레이트인 것인 백신 조성물.
제6항에 있어서, 상기 에멀젼은 2종의 솔비탄 올레이트 에스테르를 포함하는 것인 백신 조성물.
제8항에 있어서, 상기 솔비탄 올레이트 에스테르는 TWEEN^® 80 및 솔비탄 세스퀴올레이트인 백신 조성물.
삭제
2종의 조류 인플루엔자 바이러스 불활성 균주를 포함하는 백신 조성물을 가금류 구성원에게 투여하는 단계를 포함하는, 조류 인플루엔자 바이러스 감염의 발발을 예방하거나 개선하는 방법으로서, 상기 균주 각각은 용량당 128 HA 유닛을 나타내며, 또한 상기 균주 중 1종은 H5N9 조류 인플루엔자 바이러스이고, 상기 균주 중 1종은 H7N1 조류인플루엔자 균주인 것인 방법.
제11항에 있어서, 상기 백신 조성물은 식수 또는 살포를 통해 투여하는 것인 방법.
제11항에 있어서, 상기 용량은 가금류 구성원당 0.25 mL ~ 2.0 mL의 범위 이내인 것인 방법.
제13항에 있어서, 상기 백신은 1회 용량 이하로 투여하는 것인 방법.
조류 인플루엔자 바이러스 감염을 예방하거나 개선하는 데 효과적이고, 2종의 조류 인플루엔자 바이러스 불활성 균주를 포함하는 백신 조성물로서, 상기 균주 각각은 용량당 150 HA 유닛을 나타내며, 또한, 상기 균주 중 1종은 H5N9 조류 인플루엔자 바이러스이고, 상기 균주 중 1종은 H7N1 조류 인플루엔자 균주이고, 또한, 상기 조성물은 솔비탄 올레이트 에스테르를 포함하는 2종의 계면활성제를 포함하는 것인 백신 조성물.
제15항에 있어서, 상기 계면활성제는 TWEEN^® 80 및 솔비탄 세스퀴올레이트인 조성물.
조류 인플루엔자 바이러스 감염을 예방하거나 개선하는 데 효과적이고, 2종의 조류 인플루엔자 바이러스 불활성 균주를 포함하는 백신 조성물로서, 상기 균주 각각은 용량당 192 HA 유닛을 나타내며, 또한, 상기 균주 중 1종은 H5N9 조류 인플루엔자 바이러스이고, 상기 균주 중 1종은 H7N1 조류 인플루엔자 균주이고, 또한, 상기 조성물은 솔비탄 올레이트 에스테르를 포함하는 2종의 계면활성제를 포함하는 것인 백신 조성물.
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