CN115160448A - 一种分级多糖及美白、制备美白化妆品的用途 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种分级多糖及美白、制备美白化妆品的用途。本发明制备的分级多糖在扫描电子显微镜下呈纤薄、具孔片层状，相对均一；活性研究显示，该分级多糖具有优异的酪氨酸酶抑制活性。因此，该分级多糖具有用于开发制备美白面膜、美白面霜、美白眼霜和美白乳液等美白化妆品的前景。

Description

一种分级多糖及美白、制备美白化妆品的用途
技术领域
本发明属于多糖及化妆品应用领域，涉及一种分级多糖及美白、制备美白化妆品的用途。
背景技术
美白化妆品一般是指有助于减轻或减缓皮肤色素沉着，达到皮肤美白、增白效果的化妆品。除了以物理遮盖方式达到美白、增白效果的产品外，目前，美白化妆品的作用机理主要包括：抑制黑色素的生成、阻断黑色素的转运、还原黑色素、促进表皮黑色素的脱落等。产品的美白作用通常是通过配方中所用美白剂的其中一种或多种机理及原料组合来体现的。
植物来源的多糖、多肽等天然成分因为安全性高等原因成为美白剂开发的热门对象。以多糖为例，目前市售美白化妆品中，约30％种类中含有多糖类的美白剂。
虽然以天然多糖作为美白剂的化妆品品种看上去不少，但是多糖美白剂的发现和开发难度还是不容小觑。这主要是因为多糖结构多样且复杂，尤其是高级结构，与多糖的活性关系密切。同样单糖组成和连接方式(一级结构)的多糖，其活性可能存在天壤之别。这增加了发现多糖类美白剂的难度。
中药两面针是芸香科植物两面针Zanthoxylum nitidum(Roxb.)DC.的干燥根，最早收载于《神农本草经》，别名蔓椒、两背针、入地金牛等。两面针味苦辛，性平，微毒，具有顺气止痛、活血去瘀、祛风活络等作用。之前有研究报道两面针叶的总提取物具有美白抗紫外线的活性，但是并没有明确其中何种类别的化学物质发挥了该作用。而且，两面针更为被人熟知和被使用的是其根。目前并没有研究表明两面针的根中具有美白活性成分。
发明内容
为了克服现有技术的不足，本发明提供一种分级多糖及美白、制备美白化妆品的用途。
技术方案如下：
一种分级多糖，通过以下步骤制备：
步骤S1，总多糖的提取：取粉碎的两面针干燥根，加入到蒸馏水中，浸泡过夜，沸水浴热回流提取，提取液冷却后过滤，滤液浓缩，加入4倍体积无水乙醇混合均匀，静置醇沉，离心，收集沉淀，得到总多糖；
步骤S2，三氯乙酸脱蛋白：取适量总多糖，加入到蒸馏水中，配制成多糖水溶液，缓慢滴加适量三氯乙酸水溶液，低温静置，低温离心去除沉淀，上清液加入4倍体积无水乙醇混合均匀，静置醇沉，离心，收集沉淀，冷冻干燥，得到脱蛋白总多糖；
步骤S3，乙醇分级沉淀：取适量脱蛋白总多糖，加入到蒸馏水中，配制成多糖水溶液，先加入体积为多糖水溶液体积2倍的无水乙醇混合均匀，静置醇沉，离心，保留上清；再向上清中加入体积为多糖水溶液体积1倍的无水乙醇混合均匀，静置醇沉，离心，收集沉淀。
优选地，步骤S1中：静置醇沉时间为24h，离心条件为5000rpm离心15分钟。
优选地，步骤S2中：三氯乙酸水溶液中三氯乙酸的质量分数为10％，多糖水溶液与三氯乙酸水溶液的体积比为20:1。
优选地，步骤S2中：低温静置指4℃静置24h，低温离心的条件为4℃、5000rpm离心15分钟；静置醇沉时间为24h，静置醇沉后离心的条件为5000rpm离心15分钟。
优选地，步骤S3中：静置醇沉时间均为24h，离心条件均为5000rpm离心15分钟。
上述任一分级多糖用于制备美白化妆品的用途。
优选地，所述美白化妆品包括美白面膜、美白面霜、美白眼霜和美白乳液。
技术效果如下：
不同多糖在不同浓度乙醇溶液中的溶解性能不同，通过调节乙醇浓度进行分级沉淀可以获得不同种类的多糖。本发明制备的分级多糖在扫描电子显微镜下呈纤薄、具孔片层状，相对均一；活性研究显示，该分级多糖具有优异的酪氨酸酶抑制活性。因此，该分级多糖具有用于开发制备美白面膜、美白面霜、美白眼霜和美白乳液等美白化妆品的前景。
附图说明
图1为分级多糖在扫描电子显微镜下观察到的形貌，呈纤薄、具孔片层状，相对均一。
图2为不同待测物质对酪氨酸酶的抑制率。
具体实施方式
实施例1：
一、材料和试剂
从药材市场购买两面针Zanthoxylum nitidum(Roxb.)DC.的干燥根，粉碎备用。
无水乙醇和三氯乙酸为分析纯，购自麦克林试剂。
二、方法
1、总多糖的提取
取粉碎的两面针干燥根1.5kg，加入到15L蒸馏水中，浸泡过夜，沸水浴热回流提取3h，过滤，再沸水浴热回流提取2h，合并两次提取液，冷却，过滤，滤液浓缩至5L，加入20L无水乙醇混合均匀，静置醇沉24h，5000rpm离心15分钟，收集沉淀，得到总多糖22.7g。
2、三氯乙酸脱蛋白
取适量总多糖，加入到蒸馏水中，配制成浓度为20mg/mL的多糖水溶液，缓慢滴加质量分数10％的三氯乙酸水溶液，多糖水溶液与三氯乙酸水溶液的体积比为20:1。4℃静置24h，4℃、5000rpm离心15分钟去除沉淀，上清液加入4倍体积无水乙醇混合均匀，静置醇沉24h，5000rpm离心15分钟，收集沉淀，冷冻干燥，得到脱蛋白总多糖。
3、乙醇分级沉淀
取适量脱蛋白总多糖，加入到蒸馏水中，配制成浓度为20mg/mL的多糖水溶液，先加入体积为多糖水溶液体积2倍的无水乙醇混合均匀，静置醇沉24h，5000rpm离心15分钟，保留上清；再向上清中加入体积为多糖水溶液体积1倍的无水乙醇混合均匀，静置醇沉24h，5000rpm离心15分钟，收集沉淀。该沉淀即为目标分级多糖，1.5kg两面针干燥根约可以获得3.9g该目标分级多糖。
4、扫描电子显微镜观察
按照扫描电子显微镜操作规程制备样品，在扫描电子显微镜下观察，拍照记录。
三、结果
根据1.5kg两面针干燥根约可以获得3.9g该目标分级多糖，计算得到该分级多糖的得率为0.26％。扫描电子显微镜观察拍照图见图1，呈纤薄、具孔片层状，相对均一。
实施例2：
一、材料和试剂
分级多糖按实施例1方法制备，干燥保存备用。
β-熊果苷购自湖北成丰化工有限公司，纯度为化妆品级，98％～99％。
酪氨酸酶购自阿拉丁，来源于菌菇，规格25KU。
L-Dopa购自默克化学，纯度≥98％。
二、方法
酪氨酸酶抑制试验参考林芷晴等人方法(Chin.J.Org.Chem.2020,40,2980～2987)。
将DMSO和去离子水按照体积比1:19混合作为溶媒。将待测物质分别用溶媒溶解并稀释成梯度浓度的溶液。在96孔板中，每孔加入130μL磷酸缓冲溶液(50mmol/L，pH＝6.8)、10μL酪氨酸酶溶液(终浓度33.3U/mL)和10μL待测物质溶液混匀后，加入50μL L-Dopa(终浓度0.5mmol/L)混匀，反应10min，于490nm波长下测定OD值。对照组加入10μL溶媒代替待测物质溶液。不同浓度的待测物质溶液和对照分别平行设置3份，计算均值±标准差，根据公式计算待测物质对酪氨酸酶的抑制率：
抑制率(％)＝(OD对照-OD待测)/OD对照×100％。
三、结果
酪氨酸酶抑制试验的测定结果如下表和图2所示。
Figure BDA0003733874050000041
L-Dopa被酪氨酸酶催化氧化后形成的产物在490nm波长下具有强吸光特性，待测物质对酪氨酸酶的抑制作用越强，氧化产物就越少，490nm波长下的吸光值就越低。根据上述结果，实施例1制备的分级多糖具有较为优异的酪氨酸酶抑制活性，且明显强于阳性抑制剂β-熊果苷，具有开发成美白化妆品的前景。

Claims (7)

1.一种分级多糖，其特征在于，通过以下步骤制备：
步骤S1，总多糖的提取：取粉碎的两面针干燥根，加入到蒸馏水中，浸泡过夜，沸水浴热回流提取，提取液冷却后过滤，滤液浓缩，加入4倍体积无水乙醇混合均匀，静置醇沉，离心，收集沉淀，得到总多糖；
步骤S2，三氯乙酸脱蛋白：取适量总多糖，加入到蒸馏水中，配制成多糖水溶液，缓慢滴加适量三氯乙酸水溶液，低温静置，低温离心去除沉淀，上清液加入4倍体积无水乙醇混合均匀，静置醇沉，离心，收集沉淀，冷冻干燥，得到脱蛋白总多糖；
步骤S3，乙醇分级沉淀：取适量脱蛋白总多糖，加入到蒸馏水中，配制成多糖水溶液，先加入体积为多糖水溶液体积2倍的无水乙醇混合均匀，静置醇沉，离心，保留上清；再向上清中加入体积为多糖水溶液体积1倍的无水乙醇混合均匀，静置醇沉，离心，收集沉淀。
2.根据权利要求1所述的分级多糖，其特征在于，步骤S1中：静置醇沉时间为24h，离心条件为5000rpm离心15分钟。
3.根据权利要求1所述的分级多糖，其特征在于，步骤S2中：三氯乙酸水溶液中三氯乙酸的质量分数为10％，多糖水溶液与三氯乙酸水溶液的体积比为20:1。
4.根据权利要求1所述的分级多糖，其特征在于，步骤S2中：低温静置指4℃静置24h，低温离心的条件为4℃、5000rpm离心15分钟。
5.根据权利要求1所述的分级多糖，其特征在于，步骤S2中：静置醇沉时间为24h，静置醇沉后离心的条件为5000rpm离心15分钟。
6.根据权利要求1所述的分级多糖，其特征在于，步骤S3中：静置醇沉时间均为24h，离心条件均为5000rpm离心15分钟。
7.权利要求1～6任一所述的分级多糖用于制备美白化妆品的用途。
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