CN115154575A - 一种小分子药物在促进小鼠毛发再生中的应用 - Google Patents

一种小分子药物在促进小鼠毛发再生中的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN115154575A
CN115154575A CN202210830175.XA CN202210830175A CN115154575A CN 115154575 A CN115154575 A CN 115154575A CN 202210830175 A CN202210830175 A CN 202210830175A CN 115154575 A CN115154575 A CN 115154575A
Authority
CN
China
Prior art keywords
umbilical cord
promoting
extract
regeneration
small molecule
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202210830175.XA
Other languages
English (en)
Inventor
王丹
李曦哲
鲁建云
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Third Xiangya Hospital of Central South University
Original Assignee
Third Xiangya Hospital of Central South University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Third Xiangya Hospital of Central South University filed Critical Third Xiangya Hospital of Central South University
Priority to CN202210830175.XA priority Critical patent/CN115154575A/zh
Publication of CN115154575A publication Critical patent/CN115154575A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/70Polygonaceae (Buckwheat family), e.g. spineflower or dock
    • A61K36/704Polygonum, e.g. knotweed
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/48Reproductive organs
    • A61K35/51Umbilical cord; Umbilical cord blood; Umbilical stem cells
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/28Asteraceae or Compositae (Aster or Sunflower family), e.g. chamomile, feverfew, yarrow or echinacea
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/88Liliopsida (monocotyledons)
    • A61K36/906Zingiberaceae (Ginger family)
    • A61K36/9068Zingiber, e.g. garden ginger
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/14Drugs for dermatological disorders for baldness or alopecia
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602Vertebrate cells
    • C12N5/0652Cells of skeletal and connective tissues; Mesenchyme
    • C12N5/0662Stem cells
    • C12N5/0668Mesenchymal stem cells from other natural sources
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/30Extraction of the material
    • A61K2236/33Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones
    • A61K2236/333Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones using mixed solvents, e.g. 70% EtOH
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/30Extraction of the material
    • A61K2236/39Complex extraction schemes, e.g. fractionation or repeated extraction steps
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/50Methods involving additional extraction steps
    • A61K2236/55Liquid-liquid separation; Phase separation
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2509/00Methods for the dissociation of cells, e.g. specific use of enzymes

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Cosmetics (AREA)

Abstract

本发明属于治疗脱发的药物技术领域,公开了一种小分子药物在促进小鼠毛发再生中的应用,促进小鼠毛发再生的小分子药物按照质量份数计,由充质干细胞冻干粉原液30~50份、中药提取物20~30份、纳米小分子材料10~15份、皮脂分泌抑制剂8~12份、维甲酸6~12份、抗雄激素剂4~8份、自噬诱导剂3~5份、冻干保护剂2~4份以及余量灭菌去离子水组成。本发明的促进小鼠毛发再生的小分子药物,将中药与西药相结合,将中药材分为主料和辅料,在实现小鼠毛发修复的同时,能够起到抑制现有再生液副作用的效果。本发明的促进小鼠毛发再生的小分子药物的制备方法简单,操作方便,具有显著效果,有助于缓解脱发的趋势和/或改善毛发状态。

Description

一种小分子药物在促进小鼠毛发再生中的应用
技术领域
本发明属于治疗脱发的药物技术领域,涉及一种小分子药物在促进小鼠毛发再生中的应用。
背景技术
毛发是机体重要的器官,毛发的健康与机体的整体状况息息相关。毛发的生长呈周期性,历经生长期、退行期、静止期,循环往复。正常情况下,每天约有50~100根头发处于退行期并脱落。遗传、激素水平、心理状态、免疫紊乱、营养状况、感染等因素可影响头发的生长,并导致脱发的发生。根据发病原因不同,脱发可分为雄激素性脱发、斑秃、感染性脱发、营养不良性脱发等,其中雄激素性脱发和斑秃最为常见。
脱发是重要的民生健康问题,不仅影响患者美观,更给患者带来极大的精神心理负担。此外,研究表明脱发患者的生活质量和心理状态均受到显著的影响,其中年轻(小于25)的患者心理压力相对更大,尤其病程越长、病情越重的情况下,患者更容易处于较重的抑郁状态。由此可见,脱发已经成为现代大量年轻人的困扰,改善脱发问题迫在眉睫。
目前,临床中广泛使用的改善脱发的方法主要包括药物和手术治疗,但均存在显著的局限和弊端。口服和外用药物虽花费较低、可暂时缓解脱发症状,但存在副作用大、起效慢、疗效不稳定、停药后病情反复等诸多问题。手术治疗起效快,但费用高,且由于手术采用自体单个毛囊和毛囊单位进行移植,数量有限、存活率不稳定。因此,探索新的安全有效的治疗脱发方式尤为重要。
通过上述分析,现有技术存在的问题及缺陷为:
(1)现有的改善脱发的方法中,口服和外用药物存在副作用大、起效慢、疗效不稳定、停药后病情反复等诸多问题。
(2)现有的改善脱发的方法中,手术治疗费用高,且由于手术采用自体单个毛囊和毛囊单位进行移植,数量有限、存活率不稳定。
发明内容
针对现有技术存在的问题,本发明提供了一种小分子药物可促进小鼠毛发再生。
本发明是这样实现的,一种促进小鼠毛发再生的小分子药物的制备方法,所述促进小鼠毛发再生的小分子药物的制备方法包括以下步骤:
步骤一,进行充质干细胞冻干粉原液的制备:获取新鲜的脐带,对新鲜脐带进行预处理后得到脐带组织;对脐带组织依次进行原代提取、传代培养以及预处理后,制备得到充质干细胞冻干粉原液,备用;
步骤二,进行中药提取物的制备:将何首乌干燥块根粉碎后,利用乙醇对何首乌粉末进行提取后,再利用大孔树脂吸附柱分离纯化,得到何首乌提取液;分别将干姜和旱莲草粉碎后用乙醇在提取罐中回流提取,经萃取得到干姜提取液和旱莲草提取液;将三种提取液合并,得到中药提取物,备用;
步骤三,进行小分子药物的制备:分别进行小分子药物制备原料的称取;将称取后的原料依次进行混合搅拌,干燥,制得以纳米小分子材料为载体的促进小鼠毛发再生的小分子药物。
进一步,所述步骤一中的充质干细胞冻干粉原液的制备方法包括:
(1)获取新鲜的脐带,并对脐带进行预处理后,得到脐带组织;
(2)将脐带组织利用PBS缓冲液处理后,沥净多余液体,切碎,加入由胶原酶、解离酶、胰蛋白酶以及DNA酶组成的酶消化液中,37℃震荡消化处理2~4h,得到脐带组织消化液;
(3)将脐带组织消化液进行过滤并在过滤后的液体中加入含有10%的胎牛血清的DMEM培养基,混合,离心弃上清,得到脐带组织细胞团;
(4)利用DMEM培养基重悬步骤(3)得到的脐带组织细胞团,将重悬后的细胞培养液移入到细胞培养瓶中进行传代培养,得到传代培养产物;
(5)对所述传代培养产物添加生理盐水进行重悬后,依次进行冻融、超声和过滤处理后,得到充质干细胞冻干粉原液。
进一步,所述对脐带进行预处理的方法包括:
采用酒精和生理盐水对获取的脐带进行清洗和消毒处理;
利用消毒后的医用剪刀将清洗和消毒处理后的脐带剪成2~4cm的段状;
将得到的段状脐带的脐静脉内侧剖开脐带,将脐静脉、脐动脉以及脐带包膜从脐带中去除,得到脐带组织。
进一步,所述步骤二中的何首乌提取液的制备方法包括:
(1)将何首乌干燥块根粉碎后过100~120目筛,得何首乌粉末;
(2)将何首乌粉末用50%的乙醇在10~35℃的条件下提取2~3次,过滤,合并滤液,得何首乌粗提物;
(3)将何首乌粗提物采用大孔树脂吸附柱分离纯化后,采用硅胶柱精制,得到何首乌提取液。
进一步,所述步骤二中的干姜提取液的制备方法包括:
(1)将干姜粉碎后,用95%乙醇在提取罐中回流提取2~4次,冷却过滤,并合并过滤后的提取液;
(2)利用回收装置进行提取液中乙醇的回收,回收至无醇味后,将提取液在55~65℃的条件下进行减压浓缩,得到干姜膏体;
(3)将浓缩后的干姜膏体用乙醚、氯仿、正己烷中的至少一种萃取三次,合并三次的萃取液,得到干姜提取液。
进一步,所述步骤二中的旱莲草提取液的制备方法包括:
(1)取旱莲草全株,洗净后干燥,粉碎过筛80~120目,得旱莲草粉末;
(2)向旱莲草粉末中加入助溶剂并浸泡并过滤,浓缩,以充分除去其中的有机溶剂,得旱莲草粗提液;
(3)向旱莲草粗提液中加入萃取剂,分离其中的极性小组份并除去,萃余液减压蒸馏并充分除去其中的有机溶剂,加入去离子水并充分搅拌后,将其中的不溶性的沉淀物过滤后,得旱莲草提取液。
进一步,所述步骤三中的小分子药物的制备方法包括:
(1)分别称取充质干细胞冻干粉原液、中药提取物、纳米小分子材料、皮脂分泌抑制剂、维甲酸、抗雄激素剂、自噬诱导剂以及冻干保护剂,备用;
(2)将充质干细胞冻干粉原液、冻干保护剂与维甲酸混合并静置2~3h后,再依次加入中药提取物、皮脂分泌抑制剂、抗雄激素剂、自噬诱导剂以及灭菌去离子水,混合均匀,得混合物;
(3)向步骤(2)得到的混合物中加入纳米小分子材料,混合均匀,使得混合药剂搭载于纳米小分子材料上,制备得到小分子药物。
本发明的另一目的在于提供一种应用所述的促进小鼠毛发再生的小分子药物的制备方法制备得到的促进小鼠毛发再生的小分子药物,所述促进小鼠毛发再生的小分子药物按照质量份数计,由充质干细胞冻干粉原液30~50份、中药提取物20~30份、纳米小分子材料10~15份、皮脂分泌抑制剂8~12份、维甲酸 6~12份、抗雄激素剂4~8份、自噬诱导剂3~5份、冻干保护剂2~4份以及余量灭菌去离子水组成。
进一步,所述中药提取物由干姜提取液、旱莲草提取液以及何首乌提取液按照5:1:0.01的质量比混合而成;
所述维甲酸与所述间充质干细胞冻干粉原液联用;
所述纳米小分子材料作为促进小鼠毛发再生的小分子药物的载体介质,选自BpV(oxa)、bpV(pie)、bpV(bipy)或bpV(phen)中的任意一种;
所述自噬诱导剂选自ATP合酶抑制剂、AMPK激活剂、二甲双胍、寡霉素、雷帕霉素或SMER28中的任意一种。
本发明的另一目的在于提供一种所述的促进小鼠毛发再生的小分子药物在促进小鼠毛发再生中的应用,所述小分子药物在促进小鼠毛发再生中的应用方法包括:
将小分子药物溶解在纯DMSO中配成母液,使母液浓度达到10mg/mL,再按照体积比加入生理盐水溶解母液至透明,使最终工作液浓度为0.01mg/mL。
结合上述的技术方案和解决的技术问题,请从以下几方面分析本发明所要保护的技术方案所具备的优点及积极效果为:
第一、针对上述现有技术存在的技术问题以及解决该问题的难度,紧密结合本发明的所要保护的技术方案以及研发过程中结果和数据等,详细、深刻地分析本发明技术方案如何解决的技术问题,解决问题之后带来的一些具备创造性的技术效果。具体描述如下:
本发明提供的促进小鼠毛发再生的小分子药物,将中药与西药相结合,将中药材分为主料和辅料,在实现小鼠毛发修复的同时,能够起到抑制现有再生液副作用的效果。此外,本发明的促进小鼠毛发再生的小分子药物原料中的脐带间充质干细胞增值快、免疫源性低,且为医疗废弃物,获取简单。
第二,把技术方案看做一个整体或者从产品的角度,本发明所要保护的技术方案具备的技术效果和优点,具体描述如下:
本发明提供的促进小鼠毛发再生的小分子药物的制备方法简单,操作方便,具有显著的效果,有助于缓解小鼠脱发的趋势和/或改善毛发状态。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案,下面将对本发明实施例中所需要使用的附图做简单的介绍,显而易见地,下面所描述的附图仅仅是本发明的一些实施例,对于本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动的前提下还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是本发明实施例提供的促进小鼠毛发再生的小分子药物的制备方法流程图;
图2是本发明实施例提供的对脐带进行预处理的方法流程图;
图3是本发明实施例提供的何首乌提取液的制备方法流程图;
图4是本发明实施例提供的隔日拍照评估毛发生长情况示意图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白,以下结合实施例,对本发明进行进一步详细说明。应当理解,此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明,并不用于限定本发明。
针对现有技术存在的问题,本发明提供了一种小分子药物在促进小鼠毛发再生中的应用,下面结合附图对本发明作详细的描述。
一、解释说明实施例。为了使本领域技术人员充分了解本发明如何具体实现,该部分是对权利要求技术方案进行展开说明的解释说明实施例。
本发明实施例提供的促进小鼠毛发再生的小分子药物按照质量份数计,由充质干细胞冻干粉原液30~50份、中药提取物20~30份、纳米小分子材料10~15 份、皮脂分泌抑制剂8~12份、维甲酸6~12份、抗雄激素剂4~8份、自噬诱导剂3~5份、冻干保护剂2~4份以及余量灭菌去离子水组成。
本发明实施例提供的中药提取物由干姜提取液、旱莲草提取液以及何首乌提取液按照5:1:0.01的质量比混合而成。
本发明实施例提供的维甲酸与所述间充质干细胞冻干粉原液联用。
本发明实施例提供的纳米小分子材料作为促进小鼠毛发再生的小分子药物的载体介质,选自BpV(oxa)、bpV(pie)、bpV(bipy)或bpV(phen)中的任意一种。
本发明实施例提供的自噬诱导剂选自ATP合酶抑制剂、AMPK激活剂、二甲双胍、寡霉素、雷帕霉素或SMER28中的任意一种。
如图1所示,本发明实施例提供的促进小鼠毛发再生的小分子药物的制备方法包括以下步骤:
S101,进行充质干细胞冻干粉原液的制备:获取新鲜的脐带,对新鲜脐带进行预处理后得到脐带组织;对脐带组织依次进行原代提取、传代培养以及预处理后,制备得到充质干细胞冻干粉原液,备用;
S102,进行中药提取物的制备:将何首乌干燥块根粉碎后,利用乙醇对何首乌粉末进行提取后,再利用大孔树脂吸附柱分离纯化,得到何首乌提取液;分别将干姜和旱莲草粉碎后用乙醇在提取罐中回流提取,经萃取得到干姜提取液和旱莲草提取液;将三种提取液合并,得到中药提取物,备用;
S103,进行小分子药物的制备:分别进行小分子药物制备原料的称取;将称取后的原料依次进行混合搅拌,干燥,制得以纳米小分子材料为载体的促进小鼠毛发再生的小分子药物。
本发明实施例提供的步骤S101的充质干细胞冻干粉原液的制备方法包括:
(1)获取新鲜的脐带,并对脐带进行预处理后,得到脐带组织;
(2)将脐带组织利用PBS缓冲液处理后,沥净多余液体,切碎,加入由胶原酶、解离酶、胰蛋白酶以及DNA酶组成的酶消化液中,37℃震荡消化处理2~4h,得到脐带组织消化液;
(3)将脐带组织消化液进行过滤并在过滤后的液体中加入含有10%的胎牛血清的DMEM培养基,混合,离心弃上清,得到脐带组织细胞团;
(4)利用DMEM培养基重悬步骤(3)得到的脐带组织细胞团,将重悬后的细胞培养液移入到细胞培养瓶中进行传代培养,得到传代培养产物;
(5)对所述传代培养产物添加生理盐水进行重悬后,依次进行冻融、超声和过滤处理后,得到充质干细胞冻干粉原液。
如图2所示,本发明实施例提供的对脐带进行预处理的方法包括:
S201,采用酒精和生理盐水对获取的脐带进行清洗和消毒处理;
S202,利用消毒后的医用剪刀将清洗和消毒处理后的脐带剪成2~4cm段状;
S203,将得到的段状脐带的脐静脉内侧剖开脐带,将脐静脉、脐动脉以及脐带包膜从脐带中去除,得到脐带组织。
如图3所示,本发明实施例提供的步骤S102的何首乌提取液制备方法包括:
S301,将何首乌干燥块根粉碎后过100~120目筛,得何首乌粉末;
S302,将何首乌粉末用50%的乙醇在10~35℃的条件下提取2~3次,过滤,合并滤液,得何首乌粗提物;
S303,将何首乌粗提物采用大孔树脂吸附柱分离纯化后,采用硅胶柱精制,得到何首乌提取液。
本发明实施例提供的步骤S102中的干姜提取液的制备方法包括:
(1)将干姜粉碎后,用95%乙醇在提取罐中回流提取2~4次,冷却过滤,并合并过滤后的提取液;
(2)利用回收装置进行提取液中乙醇的回收,回收至无醇味后,将提取液在55~65℃的条件下进行减压浓缩,得到干姜膏体;
(3)将浓缩后的干姜膏体用乙醚、氯仿、正己烷中的至少一种萃取三次,合并三次的萃取液,得到干姜提取液。
本发明实施例提供的步骤S102中的旱莲草提取液的制备方法包括:
(1)取旱莲草全株,洗净后干燥,粉碎过筛80~120目,得旱莲草粉末;
(2)向旱莲草粉末中加入助溶剂并浸泡并过滤,浓缩,以充分除去其中的有机溶剂,得旱莲草粗提液;
(3)向旱莲草粗提液中加入萃取剂,分离其中的极性小组份并除去,萃余液减压蒸馏并充分除去其中的有机溶剂,加入去离子水并充分搅拌后,将其中的不溶性的沉淀物过滤后,得旱莲草提取液。
本发明实施例提供的步骤S103中的小分子药物的制备方法包括:
(1)分别称取充质干细胞冻干粉原液、中药提取物、纳米小分子材料、皮脂分泌抑制剂、维甲酸、抗雄激素剂、自噬诱导剂以及冻干保护剂,备用;
(2)将充质干细胞冻干粉原液、冻干保护剂与维甲酸混合并静置2~3h后,再依次加入中药提取物、皮脂分泌抑制剂、抗雄激素剂、自噬诱导剂以及灭菌去离子水,混合均匀,得混合物;
(3)向步骤(2)得到的混合物中加入纳米小分子材料,混合均匀,使得混合药剂搭载于纳米小分子材料上,制备得到小分子药物。
二、应用实施例。为了证明本发明的技术方案的创造性和技术价值,该部分是对权利要求技术方案进行具体产品上或相关技术上的应用实施例。
本发明的应用实施例提供了一种应用所述的促进小鼠毛发再生的小分子药物的制备方法制备得到的促进小鼠毛发再生的小分子药物。
本发明的应用实施例提供了一种促进小鼠毛发再生的小分子药物在促进小鼠毛发再生中的应用,该小分子药物在促进小鼠毛发再生中的应用方法包括:
将小分子药物溶解在纯DMSO中配成母液,使母液浓度达到10mg/mL,再按照体积比加入生理盐水溶解母液至透明,使最终工作液浓度为0.01mg/mL。
三、实施例相关效果的证据。本发明实施例在研发或者使用过程中取得了一些积极效果,和现有技术相比的确具备很大的优势,下面内容结合试验过程的数据、图表等进行描述。
本发明实验提供的促进小鼠毛发再生的小分子药物的操作流程如下:
药液配置:小分子药物MLKL抑制剂NSA配置方法:先把药物溶解在纯 DMSO中配成母液,使母液浓度达到10mg/mL,再按照体积比加入生理盐水溶解母液至透明,使最终工作液浓度为0.01mg/mL(10μg/mL)。
本发明实验提供的促进小鼠毛发再生的小分子药物的注射方法如下:
1.注射前24小时将用脱毛膏给小鼠背部脱毛,面积约为2*2cm2,注射当日将用戊巴比妥钠腹腔注射进行麻醉后,在实验组小鼠皮内注射NSA(浓度为 10μg/mL),对照组小鼠皮内注射配置好的DMSO溶液(1μL DMSO:1000mL 生理盐水),注射剂量均为100μL/只,以48h的间隔连续注射。
2.隔日拍照评估毛发生长情况(见图4)。
本发明提供的促进小鼠毛发再生的小分子药物是一个小分子抑制剂 (MLKL-inhibitor),由于目前毛发的治疗方法非常有限,脱发又比较常见,所以有必要探索一些新的治疗方法。本发明就是利用这个小分子抑制剂,经配比稀释之后,再均匀地注射到小鼠的背部皮肤;背部皮肤事先经过脱毛处理,用剃毛刀以及脱毛膏进行脱毛处理,然后再皮下单点注射,即隔两个毫米左右,注射一针进皮下注射,每天观察小鼠毛发的生长情况,观察四周后发现,使用该小分子抑制剂注射的这一组小鼠,毛发生长是更快的。
以上所述,仅为本发明的具体实施方式,但本发明的保护范围并不局限于此,任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内,凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等,都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种促进小鼠毛发再生的小分子药物的制备方法,其特征在于,所述促进小鼠毛发再生的小分子药物的制备方法包括以下步骤:
步骤一,进行充质干细胞冻干粉原液的制备:获取新鲜的脐带,对新鲜脐带进行预处理后得到脐带组织;对脐带组织依次进行原代提取、传代培养以及预处理后,制备得到充质干细胞冻干粉原液,备用;
步骤二,进行中药提取物的制备:将何首乌干燥块根粉碎后,利用乙醇对何首乌粉末进行提取后,再利用大孔树脂吸附柱分离纯化,得到何首乌提取液;分别将干姜和旱莲草粉碎后用乙醇在提取罐中回流提取,经萃取得到干姜提取液和旱莲草提取液;将三种提取液合并,得到中药提取物,备用;
步骤三,进行小分子药物的制备:分别进行小分子药物制备原料的称取;将称取后的原料依次进行混合搅拌,干燥,制得以纳米小分子材料为载体的促进小鼠毛发再生的小分子药物。
2.如权利要求1所述促进小鼠毛发再生的小分子药物的制备方法,其特征在于,所述步骤一中的充质干细胞冻干粉原液的制备方法包括:
(1)获取新鲜的脐带,并对脐带进行预处理后,得到脐带组织;
(2)将脐带组织利用PBS缓冲液处理后,沥净多余液体,切碎,加入由胶原酶、解离酶、胰蛋白酶以及DNA酶组成的酶消化液中,37℃震荡消化处理2~4h,得到脐带组织消化液;
(3)将脐带组织消化液进行过滤并在过滤后的液体中加入含有10%的胎牛血清的DMEM培养基,混合,离心弃上清,得到脐带组织细胞团;
(4)利用DMEM培养基重悬步骤(3)得到的脐带组织细胞团,将重悬后的细胞培养液移入到细胞培养瓶中进行传代培养,得到传代培养产物;
(5)对所述传代培养产物添加生理盐水进行重悬后,依次进行冻融、超声和过滤处理后,得到充质干细胞冻干粉原液。
3.如权利要求2所述促进小鼠毛发再生的小分子药物的制备方法,其特征在于,所述对脐带进行预处理的方法包括:
采用酒精和生理盐水对获取的脐带进行清洗和消毒处理;
利用消毒后的医用剪刀将清洗和消毒处理后的脐带剪成2~4cm的段状;
将得到的段状脐带的脐静脉内侧剖开脐带,将脐静脉、脐动脉以及脐带包膜从脐带中去除,得到脐带组织。
4.如权利要求1所述促进小鼠毛发再生的小分子药物的制备方法,其特征在于,所述步骤二中的何首乌提取液的制备方法包括:
(1)将何首乌干燥块根粉碎后过100~120目筛,得何首乌粉末;
(2)将何首乌粉末用50%的乙醇在10~35℃的条件下提取2~3次,过滤,合并滤液,得何首乌粗提物;
(3)将何首乌粗提物采用大孔树脂吸附柱分离纯化后,采用硅胶柱精制,得到何首乌提取液。
5.如权利要求1所述促进小鼠毛发再生的小分子药物的制备方法,其特征在于,所述步骤二中的干姜提取液的制备方法包括:
(1)将干姜粉碎后,用95%乙醇在提取罐中回流提取2~4次,冷却过滤,并合并过滤后的提取液;
(2)利用回收装置进行提取液中乙醇的回收,回收至无醇味后,将提取液在55~65℃的条件下进行减压浓缩,得到干姜膏体;
(3)将浓缩后的干姜膏体用乙醚、氯仿、正己烷中的至少一种萃取三次,合并三次的萃取液,得到干姜提取液。
6.如权利要求1所述促进小鼠毛发再生的小分子药物的制备方法,其特征在于,所述步骤二中的旱莲草提取液的制备方法包括:
(1)取旱莲草全株,洗净后干燥,粉碎过筛80~120目,得旱莲草粉末;
(2)向旱莲草粉末中加入助溶剂并浸泡并过滤,浓缩,以充分除去其中的有机溶剂,得旱莲草粗提液;
(3)向旱莲草粗提液中加入萃取剂,分离其中的极性小组份并除去,萃余液减压蒸馏并充分除去其中的有机溶剂,加入去离子水并充分搅拌后,将其中的不溶性的沉淀物过滤后,得旱莲草提取液。
7.如权利要求1所述促进小鼠毛发再生的小分子药物的制备方法,其特征在于,所述步骤三中的小分子药物的制备方法包括:
(1)分别称取充质干细胞冻干粉原液、中药提取物、纳米小分子材料、皮脂分泌抑制剂、维甲酸、抗雄激素剂、自噬诱导剂以及冻干保护剂,备用;
(2)将充质干细胞冻干粉原液、冻干保护剂与维甲酸混合并静置2~3h后,再依次加入中药提取物、皮脂分泌抑制剂、抗雄激素剂、自噬诱导剂以及灭菌去离子水,混合均匀,得混合物;
(3)向步骤(2)得到的混合物中加入纳米小分子材料,混合均匀,使得混合药剂搭载于纳米小分子材料上,制备得到小分子药物。
8.一种应用如权利要求1~7任意一项所述的促进小鼠毛发再生的小分子药物的制备方法制备得到的促进小鼠毛发再生的小分子药物,其特征在于,所述促进小鼠毛发再生的小分子药物按照质量份数计,由充质干细胞冻干粉原液30~50份、中药提取物20~30份、纳米小分子材料10~15份、皮脂分泌抑制剂8~12份、维甲酸6~12份、抗雄激素剂4~8份、自噬诱导剂3~5份、冻干保护剂2~4份以及余量灭菌去离子水组成。
9.如权利要求8所述促进小鼠毛发再生的小分子药物,其特征在于,所述中药提取物由干姜提取液、旱莲草提取液以及何首乌提取液按照5:1:0.01的质量比混合而成;
所述维甲酸与所述间充质干细胞冻干粉原液联用;
所述纳米小分子材料作为促进小鼠毛发再生的小分子药物的载体介质,选自BpV(oxa)、bpV(pie)、bpV(bipy)或bpV(phen)中的任意一种;
所述自噬诱导剂选自ATP合酶抑制剂、AMPK激活剂、二甲双胍、寡霉素、雷帕霉素或SMER28中的任意一种。
10.一种如权利要求8~9任意一项所述的促进小鼠毛发再生的小分子药物在促进小鼠毛发再生中的应用,其特征在于,所述小分子药物在促进小鼠毛发再生中的应用方法包括:
将小分子药物溶解在纯DMSO中配成母液,使母液浓度达到10mg/mL,再按照体积比加入生理盐水溶解母液至透明,使最终工作液浓度为0.01mg/mL。
CN202210830175.XA 2022-07-15 2022-07-15 一种小分子药物在促进小鼠毛发再生中的应用 Pending CN115154575A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210830175.XA CN115154575A (zh) 2022-07-15 2022-07-15 一种小分子药物在促进小鼠毛发再生中的应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210830175.XA CN115154575A (zh) 2022-07-15 2022-07-15 一种小分子药物在促进小鼠毛发再生中的应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN115154575A true CN115154575A (zh) 2022-10-11

Family

ID=83495341

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202210830175.XA Pending CN115154575A (zh) 2022-07-15 2022-07-15 一种小分子药物在促进小鼠毛发再生中的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN115154575A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116173063A (zh) * 2023-04-12 2023-05-30 中南大学湘雅三医院 Mlkl抑制剂在制备促进毛发生长或改善雄激素性脱发制剂中的应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111920828A (zh) * 2020-07-07 2020-11-13 西安世越再生医学研究中心有限公司 基于脐带间充质干细胞用于毛发再生的冻干粉、制备方法、生发营养液及毛发再生方法
CN114699446A (zh) * 2022-04-29 2022-07-05 诺赛联合(北京)生物医学科技有限公司 一种用于治疗脱发的外泌体复合液及其制备方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111920828A (zh) * 2020-07-07 2020-11-13 西安世越再生医学研究中心有限公司 基于脐带间充质干细胞用于毛发再生的冻干粉、制备方法、生发营养液及毛发再生方法
CN114699446A (zh) * 2022-04-29 2022-07-05 诺赛联合(北京)生物医学科技有限公司 一种用于治疗脱发的外泌体复合液及其制备方法

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116173063A (zh) * 2023-04-12 2023-05-30 中南大学湘雅三医院 Mlkl抑制剂在制备促进毛发生长或改善雄激素性脱发制剂中的应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
WO2022105156A1 (zh) 一种间充质干细胞外泌体的制备方法和应用
CN114699446A (zh) 一种用于治疗脱发的外泌体复合液及其制备方法
CN115154575A (zh) 一种小分子药物在促进小鼠毛发再生中的应用
CN104284601B (zh) 用于促进类胰岛素生长因子分泌及骨骼生长的白何首乌提取物和续断提取物及其制造方法
CN115074357A (zh) 一种多聚脱氧核糖核苷酸的制备方法及应用
CN113197911A (zh) 人参皂苷组合物在制备通过作用于毛囊组织防治脱发的药物中的用途
CN117959350B (zh) 一种基于复合干细胞svf的骨关节炎治疗组合物
CN112353819A (zh) 一种促进毛发生长的制剂及其制备方法
CN107375474B (zh) 白癜风维药复方及其制备方法
CN112451544A (zh) 用于改善薄型子宫内膜的组合物及其制备方法、应用
CN104163847A (zh) 蝇蛆活性蛋白肽的制备方法与所制备的蝇蛆活性蛋白肽及其用途
CN113509433A (zh) 美白组合物及其制剂和美白方法
CN113041207A (zh) 一种人间充质干细胞培养上清液冻干粉的制备及复苏方法
CN116515743B (zh) 一种毛囊修复蛋白组合物及其制备方法和其应用
CN111568851A (zh) 一种利用围产期msc生产活性因子的方法及美容制剂
CN113880961B (zh) 葡甘六糖、其制备方法、其应用和毛发再生制剂
CN113855619B (zh) 胎盘干细胞外泌体在制备皮肤美容化妆品或药物中的应用
CN103265493A (zh) 波叶山蚂蝗提取物及提取方法和提取物的新用途
CN113116970A (zh) 一种含黄栀子提取物的干细胞皮肤修复液及制备方法
CN115089767B (zh) 一种大豆创伤修复材料及其制备方法与应用
CN113604529B (zh) 一种鸡羽毛低聚肽及其提取方法与应用
CN114681486B (zh) 一种干细胞因子组合物及其在毛发再生中的用途
DE3485773T2 (de) Aus kultivierten mesenchymzellen extrahierte makromolekuele zur behandlung von degenerationskrankheiten.
CN116617264B (zh) 一种用于抗阿兹海默症的间充质干细胞制剂及其制备方法
CN118109401B (zh) 一种脐带间充质干细胞外泌体及其制备方法和应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20221011