CN115154472A - 一种具有靶向功能的治疗脑卒中的氢化可的松多功能超声微泡 - Google Patents

一种具有靶向功能的治疗脑卒中的氢化可的松多功能超声微泡 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种具有靶向功能的治疗脑卒中的氢化可的松多功能超声微泡，按质量份计包括0.9份DSPC，0.5份DSPE‑PEG2000，0.5份靶向剂DPPS，主要以DSPC和DSPE‑PEG2000为载体，加载靶向剂DPPS及氢化可的松制得，每1ml微泡中添加0.4mg氢化可的松。采用本发明方法制备的多功能超声微泡粒径较小，易于穿过血脑屏障，且能够协助药物进入血流循环，在超声靶向微泡爆破技术的作用下，可以在脑卒中缺血区域进行精准的定位辐照，促进药物的局部释放。同时本发明的多功能超声微泡能够抑制M1型小胶质细胞活性，减少大量炎症前介质分泌，可以降低神经元的死亡，另可以诱导生成更多的M2型小胶质细胞，对于促进NVU再生和神经功能网络恢复具有重要意义。

Description

一种具有靶向功能的治疗脑卒中的氢化可的松多功能超声 微泡
技术领域
本发明涉及生物医用技术领域，具体涉及一种具有靶向功能的治疗脑卒中的氢化可的松多功能超声微泡。
背景技术
脑梗死又称缺血性卒中，中医称之为卒中或中风。本病系由各种原因所致的局部脑组织区域血液供应障碍，导致脑组织缺血缺氧性病变坏死，进而产生临床上对应的神经功能缺失表现。缺血性脑卒中一方面是血管堵塞导致大脑局部区域血流减少，另外一个重要的病理过程是缺血后坏死和凋亡引起神经细胞死亡，脑缺血坏死会激活脑内M2型小胶质细胞在局部发挥吞噬作用，充当脑内巨噬细胞功能；然后向M1型转化，在脑损伤区域分泌大量炎症前介质，加剧神经元的死亡。针对继发炎症抑制M1型活性，促进M2型转化以利于神经突触的再连接以重塑神经功能网络是脑卒中治疗的中的热点问题。
血脑屏障（Blood-brain Barrier，BBB）是脑微血管周围的复杂的、发挥主动和被动功能的屏障系统，由于BBB的存在，不仅严格限制了血液中的神经毒性物质、炎症因子、免疫细胞等进入中枢神经系统（CNS），同时也使得具有潜在应用价值的治疗脑损伤和脑肿瘤的药物应用受到限制。开放血脑屏障及靶向调控小胶质细胞是实现脑卒中炎症有效治疗的关键，超声联合造影剂可介导血脑屏障的短暂性安全开放，通过技术偶联实现药物靶向输送至小胶质细胞的重要靶点，相关药物可以抑制M1型小胶质细胞活性，促进M2型增殖及神经功能网络的重建。现有技术中常常通过薄膜水化法制作超声微泡，通过化学联合将靶向剂及靶向药物与微泡进行链接，制作出含有靶向作用的药物超声微泡，普通薄膜水化法制备的粒子粒径在0.2-5um之间，粒径大小较大，不易通过肺循环及血脑屏障，因而制备一种粒径小，容易通过肺循环与血脑屏障的微泡是本领域技术人员亟需解决的技术问题。
发明内容
本发明针对上述问题，提供了一种具有靶向功能的治疗脑卒中的氢化可的松多功能超声微泡。解决了现有技术中微泡粒径过大，不易通过血脑屏障的问题。
为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案如下：
本发明的一种具有靶向功能的治疗脑卒中的氢化可的松多功能超声微泡，主要以DSPC（2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸-线）和DSPE-PEG2000（1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-将磷酸乙醇胺- n-[甲氧基(聚乙二醇)-2000]）为载体，加载靶向剂DPPS（1,2 -二棕榈酰-sn-甘油酸- o-3-膦- l-丝氨酸），包括0.9质量份的DSPC，0.05质量份的DSPE-PEG2000，0.05质量份的靶向剂DPPS，每1ml微泡中添加0.4mg氢化可的松。
进一步地，所述多功能超声微泡的制备方法如下：
一种加载氢化可的松且具有靶向功能的磷脂微泡（HP-MBs）的制备：
S1：将DSPC（2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸-线）、胆固醇、DSPE-PEG2000（1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-将磷酸乙醇胺- n-[甲氧基(聚乙二醇)-2000]）以及DPPS（1,2 -二棕榈酰-sn-甘油酸- o-3-膦- l-丝氨酸）按照摩尔比为80-90:0-10:5:5溶于乙醇中形成2mg/L的脂类混合物，记为溶液1，将氢化可的松溶于三氯甲烷形成溶液2，将溶液2加入溶液1中，其中溶液1占溶液2的质量比为0.05-0.2；
S2：将步骤S1中制备的溶液放入旋转蒸发器中进行旋转蒸发，并将装溶液的烧瓶置于恒温水浴中，所述恒温水浴的温度为40-45℃，可以加快有机溶剂的蒸发；
S3：蒸发结束后，将烧瓶内的溶液置于真空干燥箱中干燥以除去有机溶剂残留物，所述烧瓶开口处覆盖一层设有若干小孔的伞膜，在干燥的过程中可以有效避免灰尘或污染物的进入；
S4：给干燥的脂质膜中加入1ml PBS，以最大速度将溶液涡旋三次，每次10s，使脂质膜能够均匀的悬浮在溶液中，再将其置入水浴超声仪中超声处理15s，使脂质膜能够更均匀的悬浮在溶液中，超声结束后静置8h以上，从而使脂质物质能够有效的进行水合；
S5：将1,2-丙二醇、丙三醇以及步骤S4中所得溶液在3ml的玻璃小瓶中进行混合，混合均匀后用全氟丙烷对瓶内进行填充，填充完成后在摇床上搅拌45s即得。
更进一步地，所述步骤S1中将DSPC、胆固醇、DSPE-PEG2000以及DPPS按照摩尔比为80:10:5:5溶于乙醇中形成溶液1，将氢化可的松溶于三氯甲烷形成溶液2，将溶液2加入溶液1中，其中溶液1占溶液2的质量比为0.05。
更进一步地，所述步骤S1中将DSPC、胆固醇、DSPE-PEG2000以及DPPS按照摩尔比为85:5:5:5溶于乙醇中形成溶液1，将氢化可的松溶于三氯甲烷形成溶液2，将溶液2加入溶液1中，其中溶液1占溶液2的质量比为0.1。
更进一步地，所述步骤S1中将DSPC、胆固醇、DSPE-PEG2000以及DPPS按照摩尔比为90:0:5:5溶于乙醇中形成溶液1，将氢化可的松溶于三氯甲烷形成溶液2，将溶液2加入溶液1中，其中溶液1占溶液2的质量比为0.2。
更进一步地，所述多功能超声微泡的平均粒径为1.54±0.51μm，浓度为2mg/ml。
更进一步的，所述步骤S5中1,2-丙二醇、丙三醇与所述步骤S4中PBS的体积比为1:1:10。
进一步地，所述步骤S5中摇床为VialMix摇床。
与现有技术相比，本发明的有益效果：
本发明方法在旋转蒸发后增加了真空干燥的环节，将有机溶剂彻底蒸发滤掉，加入缓冲液后，采用超声波仪进行再次粉碎处理使处理过的微泡粒径稳定在1.45um左右，具有穿过肺循环与血脑屏障的安全性。此外将脂质体与氢化可的松用不同溶剂溶解，最大限度增加了其溶解度，为获得氢化可的松较高的包封率奠定了基础。
采用本发明方法制备的多功能超声微泡联合UTMD（超声靶向微泡破坏技术）不仅可以打开血脑屏障，微泡上面还可以链接靶向剂及靶向药物，能够在血脑屏障开放后高效、快速、精准的对靶向区域进行治疗。血脑屏障打开后，在药物可以进入大脑的同时，全身血液的毒素也有可能会进入大脑，靶向药物的另一个功能是加快血脑屏障的关闭，在靶向给药的同时加速血脑屏障的关闭，最大限度的治疗疾病同时保护大脑。
附图说明
图1是本发明的多功能超声微泡在显微镜明场下的结构
图2是本发明的多功能超声微泡的粒径分布图
图3是本发明的多功能超声微泡在静置不同时间后的粒径图
图4是本发明的多功能超声微泡稀释不同比例后的造影效果图
图5为不同浓度的多功能超声微泡与HUVEC细胞相结合的细胞活力图
图6为不同浓度的多功能超声微泡与RAW细胞相结合的细胞活力图
图7为连接荧光剂的多功能超声微泡与HUVEC细胞及RAW细胞结合的荧光图
图8为连接荧光剂的多功能超声微泡与HUVEC细胞及RAW细胞结合的荧光折线图
图9为M2型小胶质细胞数量随着HP-MBs诱导时间的变化图
图10为M1型小胶质细胞数量与M2型小胶质细胞数量随着HP-MBs诱导时间的变化图
图11为大鼠试验中经过不同处理后的大鼠在相同时间内大脑伊思文蓝的渗出量示意图
图12 为试验大鼠脑实质中伊文思蓝的组织含量。
具体实施方式
为了使本发明的目的及优点更加清楚明白，以下结合实施例对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
以下实施例中所涉及的仪器、试剂、材料等，若无特别说明，均为现有技术中已有的常规仪器、试剂、材料等，可通过正规商业途径获得。下列实施例中所涉及的实验方法、检测方法等，若无特别说明，均为现有技术中已有的常规实验方法、检测方法等。
实施例
本实施例中一种具有靶向功能的治疗脑卒中的氢化可的松多功能超声微泡，主要以DSPC和DSPE-PEG2000为载体，加载靶向剂DPPS，包括0.9质量份的DSPC，0.05质量份的DSPE-PEG2000，0.05质量份的靶向剂DPPS，每1ml微泡中添加0.4mg氢化可的松。具体制备方法如下：
S1：将DSPC（2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸-线）、胆固醇、DSPE-PEG2000（1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-将磷酸乙醇胺- n-[甲氧基(聚乙二醇)-2000]）以及DPPS（1,2 -二棕榈酰-sn-甘油酸- o-3-膦- l-丝氨酸）分别按照摩尔比为80:10:5:5、85:5:5:5及90:0:5:5溶于乙醇中形成2mg/L的脂类混合物，记为溶液1，将氢化可的松溶于三氯甲烷形成溶液2，将溶液2加入溶液1中，其中溶液1占溶液2的质量比分别为为0.05、0.1和0.2；
S2：将步骤S1中制备的溶液放入旋转蒸发器中进行旋转蒸发，并将装溶液的烧瓶置于恒温水浴中，所述恒温水浴的温度为40-45℃，可以加快有机溶剂的蒸发；
S3：蒸发结束后，将烧瓶内的溶液置于真空干燥箱中干燥以除去有机溶剂残留物，所述烧瓶开口处覆盖一层设有若干小孔的伞膜，在干燥的过程中可以有效避免灰尘或污染物的进入；
S4：给干燥的脂质膜中加入1ml PBS，以最大速度将溶液涡旋三次，每次10s，使脂质膜能够均匀的悬浮在溶液中，再将其置入水浴超声仪中超声处理15s，使脂质膜能够更均匀的悬浮在溶液中，超声结束后静置8h以上，从而使脂质物质能够有效的进行水合；
S5：将1,2-丙二醇、丙三醇以及步骤S4中所得溶液在3ml的玻璃小瓶中进行混合，1,2-丙二醇、丙三醇的添加量与步骤S4中PBS添加量的体积比为10%：10%：100%（即1:1:10），混合均匀后用全氟丙烷对瓶内进行填充，填充完成后在VialMix摇床上搅拌45s即得。
该实验方法制得的多功能超声微泡的浓度为2mg/ml，参照附图1-4可知，该实验方法制得的多功能超声微泡的平均粒径为1.54±0.51μm，在静置一端时间后，多功能超声微泡的平均粒径仍然稳定在1.54±0.51μm，且其经过不同比例稀释后，造影效果十分优异。
对该方法制备的多功能超声微泡的安全性、靶向性、可诱导性等性能进行检测表征，结果参照附图5-10。
安全性实验：将载药多功能超声微泡分别和体内正常细胞（HUVEC）及脑梗区域炎症细胞（RAW）细胞结合，从附图5-6可以看出，当多功能微泡与HUVEC细胞相结合时，HUVEC细胞并没有明显死亡，说明该多功能微泡具有良好的安全性，当多功能微泡与RAW细胞相结合时,可以明显看到当浓度超过50μg/ml时，细胞有死亡，说明本发明制备的多功能微泡在一定浓度内是具有安全性的，超过一定浓度则具有一定的细胞毒性。
靶向性实验：在多功能微泡上化学连接荧光剂fitc，通过相同时间的孵育，参照附图7-8，随着时间逐渐延长可以看到，多功能微泡被RAW炎症细胞吞噬的多，被HUVEC正常细胞吞噬的少说明多功能微泡上面连接的靶向剂DPPS起到的靶向作用可以高效的把多功能微泡送到大脑炎症区域，具有靶向性是定点靶向给药的前提。
可诱导性实验：将多功能微泡和细胞进行共同孵育，参照附图9-10可以看到图9右下角蓝色光点越来越多，越来越密，蓝色光点及代表M2型小胶质细胞，即M2逐渐增多，图10中红色柱状图为M2，黑色为M1，随着孵育，红色越来越多，黑色越来越少，说明M2型小胶质细胞逐渐增多。由此可知，本发明方法制备的多功能超声微泡能高效的诱导出更多的M2型小胶质细胞，且随着诱导时间的延长，诱导获得的M2型小胶质细胞更多。
采用本方法制备的多工能微泡进行大鼠试验，所有大鼠均严格按照中华人民共和国动物伦理程序和指南进行处理，本研究试验经北京大学第三医院动物伦理委员会批准。
大鼠试验
本试验中采用超声机器、超分辨超声仪器、单细胞成像仪；本实施例中采用的超声机器拥有UTMD功能，可实现定点、定时、定量爆破微泡。超分辨超声仪器，比普通超声机器分辨率更高，能够快速连续采集图像，通过后处理技术形成微小血管成像效果。单细胞成像仪，采用高频探头采集细胞层级的神经细胞。
用2%异氟醚麻醉雄性SpragueDawley（SD）大鼠（280–320 g）。采用改进的腔内细丝法建立大脑中动脉闭塞（MCAO）模型，为了阻断大鼠大脑同侧半球的血液供应，将6–0尼龙单丝缝合线插入右侧颈内动脉，阻断右侧大脑中动脉。在整个过程中，用加热毯将体温维持在37℃。动物接受2小时的MCAO，然后通过小心地拔出细丝重新融合。
IR后24h进行TTC染色，测定梗死体积，将处理后大鼠的脑组织切成2mm厚的冠状切面，在60℃下浸入2% TTC溶液(Sigma, St. Louis, MO, USA) 30min。然后将染色切片浸入4%甲醛溶液中固定，对每张切片的梗死区域拍照并称重。
将SD大鼠分成10组（PBS（-）US，0hEB、PBS-UTMD-0hEB、HP-MBs-UTMD-0hEB、HP-MBs-UTMD-0.5hEB、HP-MBs-UTMD-1hEB、HP-MBs-UTMD-2hEB、HP-MBs-UTMD-4hEB、HP-MBs-UTMD-6hEB、HP-MBs-UTMD-8hEB、HP-MBs-UTMD-10hEB），每组3只，对照组通过尾静脉向大鼠注射1ml生理盐水，实验组分别注入1ml含氢化可的松和不含氢化可的松的MBs，按照分组进行UTMD500s，在不同时间点（0h、0.5h、1h、2h、4h、6h、8h、10h）通过尾静脉向大鼠注射5 ml/kg的2%伊文思蓝（EB），在相同时间点测量伊文思蓝渗出量，参照附图11。循环2小时后，通过腹腔注射戊巴比妥钠（100 mg/kg）麻醉动物，然后用肝素生理盐水灌流，再用4%多聚甲醛灌注，大鼠四肢僵硬停止，断头取脑称重拍照，将称重后的脑组织粉碎加入10ml体积分数４％甲酰胺中萃取脑实质中渗出的伊文思蓝，通过测量610 nm的吸光度确定伊文思蓝的浓度，并根据线性标准曲线量化伊文思蓝的组织含量，并以伊文思蓝（ng）/组织（g）表示，参照附图12。
由附图12可知，在相同时间点用含有氢化可的松微泡进行爆破，伊文思蓝的渗出量远低于用不含有氢化可的松微泡爆破的伊文思蓝渗出量，说明含有氢化可的松的微泡在提前关闭血脑屏障方面起到了很大作用。
综上，采用本发明方法制备的多功能超声微泡粒径小，在UTMD技术的辅助下不仅可以打开血脑屏障，还可以在微泡上面链接靶向剂及靶向药物，能够在血脑屏障开放后高效、快速、精准的对靶向区域进行治疗。血脑屏障打开后，在药物可以进入大脑的同时，全身血液的毒素也有可能会进入大脑，靶向药物能够加快血脑屏障的关闭，在靶向给药的同时加速血脑屏障的关闭，在最大限度治疗疾病的同时保护大脑。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (8)

1.一种具有靶向功能的治疗脑卒中的氢化可的松多功能超声微泡，其特征在于：主要以DSPC和DSPE-PEG2000为载体，加载靶向剂DPPS，包括0.9质量份的DSPC，0.05质量份的DSPE-PEG2000，0.05质量份的靶向剂DPPS，每1ml微泡中添加0.4mg氢化可的松。
2.根据权利要求1所述的一种具有靶向功能的治疗脑卒中的氢化可的松多功能超声微泡，其特征在于：所述多功能超声微泡的制备方法如下：
S1：将DSPC、胆固醇、DSPE-PEG2000以及DPPS按照摩尔比为80-90:0-10:5:5溶于乙醇中形成溶液1，将氢化可的松溶于三氯甲烷形成溶液2，将溶液2加入溶液1中，其中溶液1占溶液2的质量比为0.05-0.2；
S2：将步骤S1中制备的溶液放入旋转蒸发器中进行旋转蒸发，并将装溶液的烧瓶置于恒温水浴中，所述恒温水浴的温度为40-45℃；
S3：蒸发结束后，将烧瓶内的溶液置于真空干燥箱中干燥，所述烧瓶开口处覆盖一层设有若干小孔的伞膜；
S4：给干燥的脂质膜中加入1ml PBS，以最大速度将溶液涡旋三次，每次10s，再将其置入水浴超声仪中超声处理15s，超声结束后静置8h以上；
S5：将1,2-丙二醇、丙三醇以及步骤S4中所得溶液在瓶中进行混合，混合均匀后用全氟丙烷对瓶内进行填充，填充完成后在摇床上搅拌45s。
3.根据权利要求2所述的一种具有靶向功能的治疗脑卒中的氢化可的松多功能超声微泡，其特征在于：所述步骤S1中将DSPC、胆固醇、DSPE-PEG2000以及DPPS按照摩尔比为80:10:5:5溶于乙醇中形成溶液1，将氢化可的松溶于三氯甲烷形成溶液2，将溶液2加入溶液1中，其中溶液1占溶液2的质量比为0.05。
4.根据权利要求2所述的一种具有靶向功能的治疗脑卒中的氢化可的松多功能超声微泡，其特征在于：所述步骤S1中将DSPC、胆固醇、DSPE-PEG2000以及DPPS按照摩尔比为85:5:5:5溶于乙醇中形成溶液1，将氢化可的松溶于三氯甲烷形成溶液2，将溶液2加入溶液1中，其中溶液1占溶液2的质量比为0.1。
5.根据权利要求2所述的一种具有靶向功能的治疗脑卒中的氢化可的松多功能超声微泡，其特征在于：所述步骤S1中将DSPC、胆固醇、DSPE-PEG2000以及DPPS按照摩尔比为90:0:5:5溶于乙醇中形成溶液1，将氢化可的松溶于三氯甲烷形成溶液2，将溶液2加入溶液1中，其中溶液1占溶液2的质量比为0.2。
6.根据权利要求2所述的一种具有靶向功能的治疗脑卒中的氢化可的松多功能超声微泡，其特征在于：所述多功能超声微泡的平均粒径为1.54±0.51μm，浓度为2mg/ml。
7.根据权利要求2所述的一种具有靶向功能的治疗脑卒中的氢化可的松多功能超声微泡，其特征在于：所述步骤S5中1,2-丙二醇、丙三醇与所述步骤S4中PBS的体积比为1:1:10。
8.根据权利要求2所述的一种具有靶向功能的治疗脑卒中的氢化可的松多功能超声微泡，其特征在于：所述步骤S5中摇床为VialMix摇床。
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Citations (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102138889A (zh) * 2011-03-25 2011-08-03 中国科学院深圳先进技术研究院 靶向载药超声微泡及其制备方法
CN102657612A (zh) * 2012-03-06 2012-09-12 北京大学 一种载gdnf微泡制剂及其制备方法
US20130204166A1 (en) * 2010-04-16 2013-08-08 Florideliza Villanueva Custom designed microbubble contrast agents and techniques of ultrasound delivery optimized for gene therapy
CN104368016A (zh) * 2013-12-12 2015-02-25 张悦 一种制备载多西紫杉醇脂质超声微泡的方法
CN105106977A (zh) * 2015-07-27 2015-12-02 深圳市人民医院 一种携带iRGD穿膜肽双靶向阳离子超声微泡制备方法
US20180161462A1 (en) * 2015-06-10 2018-06-14 Teikyo University Theranostic bubble preparation (tb), and method for using same
CN108721648A (zh) * 2018-06-07 2018-11-02 北京大学第三医院 一种多功能微泡及其制备方法和应用
WO2019004669A2 (ko) * 2017-06-26 2019-01-03 서강대학교 산학협력단 광감작제를 포함한 마이크로버블-나노입자 복합체 및 이를 포함하는 항암 치료제
CN110064057A (zh) * 2018-01-22 2019-07-30 北京大学 一种透过血脑屏障的载药纳米颗粒的制备及其联合聚焦超声靶向微泡破坏技术的应用
WO2019182353A1 (ko) * 2018-03-20 2019-09-26 (주) 바이오인프라생명과학 약물전달을 위한 초음파 반응형 미소기포를 포함하는 리포좀 제조 방법 및 이를 이용한 리포좀
CN110801451A (zh) * 2019-12-16 2020-02-18 深圳大学 一种治疗肌萎缩性脊髓侧索硬化症的药物及提高血脑屏障开放效果的方法
CN111298142A (zh) * 2020-04-01 2020-06-19 东南大学 一种纳米超声微泡及其制备方法和应用
US20210015751A1 (en) * 2018-03-20 2021-01-21 Bioinfra Life Science Inc. Method for preparing liposome comprising ultrasound reactive microbubble for drug delivery and liposome using same
CN112546245A (zh) * 2020-12-08 2021-03-26 哈尔滨医科大学 一种用于缺血性心脏病基因靶向治疗的载基因显影微泡及其制备方法
WO2021098686A1 (zh) * 2019-11-18 2021-05-27 深圳先进技术研究院 一种跨越血脑屏障和特异性靶向脑胶质瘤治疗药物的投递系统的制备方法
CN114558133A (zh) * 2021-12-20 2022-05-31 北京大学第三医院（北京大学第三临床医学院） 一种同时递送声敏剂和靶向抗体的超声靶向微泡及其制备方法和应用
CN114732796A (zh) * 2022-02-18 2022-07-12 北京大学第三医院（北京大学第三临床医学院） 一种双靶向载药微泡及其制备方法和应用

Patent Citations (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20130204166A1 (en) * 2010-04-16 2013-08-08 Florideliza Villanueva Custom designed microbubble contrast agents and techniques of ultrasound delivery optimized for gene therapy
CN102138889A (zh) * 2011-03-25 2011-08-03 中国科学院深圳先进技术研究院 靶向载药超声微泡及其制备方法
CN102657612A (zh) * 2012-03-06 2012-09-12 北京大学 一种载gdnf微泡制剂及其制备方法
CN104368016A (zh) * 2013-12-12 2015-02-25 张悦 一种制备载多西紫杉醇脂质超声微泡的方法
US20180161462A1 (en) * 2015-06-10 2018-06-14 Teikyo University Theranostic bubble preparation (tb), and method for using same
CN105106977A (zh) * 2015-07-27 2015-12-02 深圳市人民医院 一种携带iRGD穿膜肽双靶向阳离子超声微泡制备方法
WO2019004669A2 (ko) * 2017-06-26 2019-01-03 서강대학교 산학협력단 광감작제를 포함한 마이크로버블-나노입자 복합체 및 이를 포함하는 항암 치료제
CN110064057A (zh) * 2018-01-22 2019-07-30 北京大学 一种透过血脑屏障的载药纳米颗粒的制备及其联合聚焦超声靶向微泡破坏技术的应用
WO2019182353A1 (ko) * 2018-03-20 2019-09-26 (주) 바이오인프라생명과학 약물전달을 위한 초음파 반응형 미소기포를 포함하는 리포좀 제조 방법 및 이를 이용한 리포좀
US20210015751A1 (en) * 2018-03-20 2021-01-21 Bioinfra Life Science Inc. Method for preparing liposome comprising ultrasound reactive microbubble for drug delivery and liposome using same
CN108721648A (zh) * 2018-06-07 2018-11-02 北京大学第三医院 一种多功能微泡及其制备方法和应用
WO2021098686A1 (zh) * 2019-11-18 2021-05-27 深圳先进技术研究院 一种跨越血脑屏障和特异性靶向脑胶质瘤治疗药物的投递系统的制备方法
CN110801451A (zh) * 2019-12-16 2020-02-18 深圳大学 一种治疗肌萎缩性脊髓侧索硬化症的药物及提高血脑屏障开放效果的方法
CN111298142A (zh) * 2020-04-01 2020-06-19 东南大学 一种纳米超声微泡及其制备方法和应用
CN112546245A (zh) * 2020-12-08 2021-03-26 哈尔滨医科大学 一种用于缺血性心脏病基因靶向治疗的载基因显影微泡及其制备方法
CN114558133A (zh) * 2021-12-20 2022-05-31 北京大学第三医院（北京大学第三临床医学院） 一种同时递送声敏剂和靶向抗体的超声靶向微泡及其制备方法和应用
CN114732796A (zh) * 2022-02-18 2022-07-12 北京大学第三医院（北京大学第三临床医学院） 一种双靶向载药微泡及其制备方法和应用

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