CN115152904B - 一种具有免疫增强功能的组合物及其应用 - Google Patents

一种具有免疫增强功能的组合物及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开一种具有免疫能力功能的组合物及其应用，本发明制备的组合物选用特殊工艺制备的改性维生素A衍生物提取液、食用明胶、干酪乳杆菌作为微胶囊的包埋壁材，可能因改性后的维生素A衍生物提取液可促进干酪乳杆菌的增殖速度并且提升了某些活性代谢物或者次代谢物，提高动物消化过程中菌落的浓度，二者与食用明胶的协同效应可以增强老年猫的免疫功能，增强体内的自由基清除能力，帮助其提高抗氧化水平，减少腹泻和皮肤病等疾病发生的概率。

Description

一种具有免疫增强功能的组合物及其应用
技术领域
本发明属于宠物食品领域，具体涉及为一种具有免疫增强功能的组合物及其应用，本产品解决了传统宠物对于宠物粮消化吸收率低的问题，加入特殊工艺提取的改性维生素A衍生物以及干酪乳杆菌和粪肠球菌等活性益生菌，制备成微胶囊，充分提高宠物对食物的吸收能力，帮助宠物犬猫增强免疫力。
背景技术
随着人们生活观念的改变，人们对于宠物的陪伴需求越来越明显，宠物已经成为人们生活和情感的寄托，而宠物数量的突然增长液造成宠物粮需求的暴涨，需求增多，不可避免的需要更加关注宠物粮的品质与功能。然而，很多宠物主人不注重关注宠物的肠胃功能和免疫能力，常常用人类餐桌上的剩余饭菜喂养宠物，造成宠物的免疫功能下降，抵抗力不足，从而出现了很多肠胃问题。随着日复一日的喂养，不合理的食物配比和喂食提高免疫力的药物更加加剧了宠物的肠胃功能紊乱。本发明的主要目的在于提供可以有效增强动物猫犬的免疫功能的组合物，同时该组合物对宠物的细菌性皮肤炎症有一定的修复效果。
发明内容
为于解决传统宠物对于宠物粮消化吸收率低以及宠物免疫力下降的问题，本发明的目的是提供一种有免疫增强功能的组合物，该物质可以充分提高宠物对食物的吸收能力，同时增强体内的自由基清除能力，帮助其提高抗氧化水平，减少腹泻和皮肤病等疾病发生的概率。本发明通过以下技术方案来实现：
一种具有免疫增强功能的组合物及其应用，其特征在于：选取特殊工艺制备的改性维生素A衍生物提取液加入食用明胶、干酪乳杆菌和粪肠球菌作为微胶囊包埋壁材主体，再加入多种食物馅料，制备出的具有免疫增强功能的组合物。
S1、改性维生素A衍生物提取液：称取熟鸡蛋黄200-500g、饮用水1000mL-2000mL，放入破壁机中搅碎后，使用冷冻机在-10--40℃的条件下低温储存2-5h以除去蛋黄中的水分，取出后加入1：1的甲醇和乙醇的混合溶液500-800mL，放入旋涡混合器中震荡20-30min，然后将匀浆离心，离心条件为4000-8000r/min，持续时间5-8min，在550-850℃的恒温条件下通入氯气，持续1-3h后，取上层混合液加入生理盐水300-500mL，使用氩气将混合液吹干，即得到改性维生素A衍生物提取物；
S2、制备蔬果泥馅料：称取胡萝卜100-200g、海带100-200g、海藻粉50-100g、蔓越莓100-200g、纯净水500-800mL，放入研磨机内与常温条件下搅碎，搅拌时间为3-5min；
S3、微胶囊包埋壁材的制备：称取S1制备所得的改性维生素A衍生物提取液50-100g、淀粉200-500g、食用明胶50-100g、纯净水500-1000mL放入均质机中均质，具体条件如下：温度为25-40℃，压力为10-30MPa，均质后加入干酪乳杆菌5-10g、粪肠球菌5-10g，继续在常温下充分搅拌10-20min后，即得到微胶囊的包埋壁材备用；
S4、复配物的包埋：将S2制备好的蔬果泥馅料加入100-200g食盐，进行匀质处理，匀质温度为30-35℃，持续20-50min，取匀质后的馅料2-5kg、微胶囊包埋壁材0.5-1kg放入微胶囊包埋机中，即可制备得到5mm的微胶囊组合物。
优选地：所述S1称取的熟鸡蛋黄为200g、饮用水为1000mL、甲醇和乙醇的混合溶液为500mL、生理盐水为300mL；
优选地：所述S2称取的胡萝卜为100g、海带为100g、海藻粉为50g、蔓越莓为100g、纯净水为500mL；
优选地：所述S3称取的改性维生素A衍生物提取液为50g、淀粉为200g、食用明胶为50g、纯净水为500mL、干酪乳杆菌为5g、粪肠球菌为5g。
优选地：所述S5称取的食盐为100g、匀质后的馅料为2kg、微胶囊包埋壁材为0.5kg。
1、本发明制备的组合物选用特殊工艺制备的改性维生素A衍生物提取液、食用明胶、干酪乳杆菌作为微胶囊的包埋壁材，可能因改性后的维生素A衍生物提取液可促进干酪乳杆菌的增殖速度并且提升了某些活性代谢物或者次代谢物，提高动物消化过程中菌落的浓度，二者与食用明胶的协同效应可以增强老年猫的免疫功能，增强体内的自由基清除能力，帮助其提高抗氧化水平，减少腹泻和皮肤病等疾病发生的概率。
2、本发明制备的组合物零添加人工防腐剂和抗氧化剂，对于宠物的肠胃友好。
3、本发明制备的微胶囊组合物中的粪肠球菌与海藻粉的复合作用对于猫犬的过敏性皮肤有一定的修复效果，同时加强猫犬等宠物的肠胃吸收能力。
4、本发明操作过程简单，选用的食物原料丰富，适合工业级别的大量生产。
5、本发明的宠物粮配方合理、适口性良好、营养全面，食物种类可以满足宠物的生长发育需求。
附图说明
图1为微胶囊包埋壁材的微观扫描图。
图2为本发明组合物的外形图。
图3为本发明实施例和对比例的脂肪消化吸收率柱状图。
图4为本发明实施例和对比例的蛋白质消化吸收率柱状图。
图5为本发明制备对比例4和实施例1-3的抑菌结果。
图6为本发明的超氧化物歧化酶含量图。
图7为本发明组合物中维生素A衍生物的分子式图。
图8为本发明组合物中维生素A衍生物的核磁共振氢谱图。
具体实施方式
本发明用到的干酪乳杆菌和粪肠球菌均为纯化菌粉，通过购买获得。
实施例1
S1、改性维生素A衍生物提取液：称取熟鸡蛋黄200g、饮用水1000mL，放入破壁机中搅碎后，使用冷冻机在-10℃的条件下低温储存2h以除去蛋黄中的水分，取出后加入1：1的甲醇和乙醇的混合溶液500mL，放入旋涡混合器中震荡20min，然后将匀浆离心，离心条件为4000r/min，持续时间5min，，在550℃的恒温条件下通入氯气，持续1h后，取上层混合液加入生理盐水300-500mL，使用氩气将混合液吹干，即得到改性维生素A衍生物提取物；
S2、制备蔬果泥馅料：称取胡萝卜100g、海带100g、海藻粉50g、蔓越莓100g、纯净水500mL，放入研磨机内与常温条件下搅碎，搅拌时间为3min；
S3、微胶囊包埋壁材的制备：称取S1制备所得的改性维生素A衍生物提取液50g、淀粉200g、食用明胶50g、纯净水500mL放入均质机中均质，具体条件如下：温度为25℃，压力为10MPa，均质后加入干酪乳杆菌5g、粪肠球菌5g，继续在常温下充分搅拌10min后，即得到微胶囊的包埋壁材备用；
S4、复配物的包埋：将S2制备好的蔬果泥馅料加入100g食盐，进行匀质处理，匀质温度为30℃，持续20min，取匀质后的馅料2kg、微胶囊包埋壁材0.5kg放入微胶囊包埋机中，即可制备得到5mm的微胶囊组合物。
对比例1、在S1步骤中除了不加氯气条件外(即未改性的维生素A)，其余参数与实施例1相同。
对比例2、在S1步骤中除了将1：1的甲醇和乙醇的混合溶液替换成无水乙醇外，其余参数与实施例1相同。
对比例3、在S1步骤中除了将1：1的甲醇和乙醇的混合溶液替换成95％的甲醇溶液外，其余参数与实施例1相同。
实施例2
S1、改性维生素A衍生物提取液：称取熟鸡蛋黄500g、饮用水2000mL，放入破壁机中搅碎后，使用冷冻机在-10℃的条件下低温储存5h以除去蛋黄中的水分，取出后加入1：1的甲醇和乙醇的混合溶液500mL，放入旋涡混合器中震荡30min，然后将匀浆离心，离心条件为4000r/min，持续时间5min，，在550℃的恒温条件下通入氯气，持续1h后，取上层混合液加入生理盐水300-500mL，使用氩气将混合液吹干，即得到改性维生素A衍生物提取物；
S2、制备蔬果泥馅料：称取胡萝卜200g、海带200g、海藻粉100g、蔓越莓200g、纯净水800mL，放入研磨机内与常温条件下搅碎，搅拌时间为5min；
S3、微胶囊包埋壁材的制备：称取S1制备所得的改性维生素A衍生物提取液100g、淀粉500g、食用明胶100g、纯净水1000mL放入均质机中均质，具体条件如下：温度为40℃，压力为30MPa，均质后加入干酪乳杆菌10g、粪肠球菌10g，继续在常温下充分搅拌20min后，即得到微胶囊的包埋壁材备用；
S4、复配物的包埋：将S2制备好的杂粮食材和蔬果泥馅料加入200g食盐，进行匀质处理，匀质温度为35℃，持续50min，取匀质后的馅料5kg、微胶囊包埋壁材1kg放入微胶囊包埋机中，即可制备得到5mm的微胶囊组合物。
对比例4、在S3步骤中只加食用明胶外，其余参数与实施例2相同。
对比例5、在S3步骤中只加干酪乳杆菌外，其余参数与实施例2相同。
对比例6、在S3步骤中只加粪肠球菌外，其余参数与实施例2相同。
实施例3
S1、改性维生素A衍生物提取液：称取熟鸡蛋黄300g、饮用水1300mL，放入破壁机中搅碎后，使用冷冻机在-10℃的条件下低温储存3h以除去蛋黄中的水分，取出后加入1：1的甲醇和乙醇的混合溶液500mL，放入旋涡混合器中震荡23min，然后将匀浆离心，离心条件为4000r/min，持续时间5min，，在550℃的恒温条件下通入氯气，持续1h后，取上层混合液加入生理盐水300-500mL，使用氩气将混合液吹干，即得到改性维生素A衍生物提取物；
S2、制备蔬果泥馅料：称取胡萝卜130g、海带130g、海藻粉65g、蔓越莓130g、纯净水600mL，放入研磨机内与常温条件下搅碎，搅拌时间为3.5min；
S3、微胶囊包埋壁材的制备：称取S1制备所得的改性维生素A衍生物提取液65g、淀粉300g、食用明胶60g、纯净水600mL放入均质机中均质，具体条件如下：温度为30℃，压力为15MPa，均质后加入干酪乳杆菌6g、粪肠球菌6g，继续在常温下充分搅拌13min后，即得到微胶囊的包埋壁材备用；
S4、复配物的包埋：将S2制备好的蔬果泥馅料加入130g食盐，进行匀质处理，匀质温度为32℃，持续25min，取匀质后的馅料3kg、微胶囊包埋壁材0.6kg放入微胶囊包埋机中，即可制备得到5mm的微胶囊组合物。
对比例7、在S3步骤中除了不加食用明胶外，其余参数与实施例3相同。
对比例8、在S3步骤中除了不加干酪乳杆菌外，其余参数与实施例3相同。
对比例9、在S3步骤中除了不加粪肠球菌外，其余参数与实施例3相同。
实施例4
S1、改性维生素A衍生物提取液：称取熟鸡蛋黄400g、饮用水1700mL，放入破壁机中搅碎后，使用冷冻机在-10℃的条件下低温储存4h以除去蛋黄中的水分，取出后加入1：1的甲醇和乙醇的混合溶液500mL，放入旋涡混合器中震荡27min，然后将匀浆离心，离心条件为4000r/min，持续时间5min，，在550℃的恒温条件下通入氯气，持续1h后，取上层混合液加入生理盐水300-500mL，使用氩气将混合液吹干，即得到改性维生素A衍生物提取物；
S2、制备蔬果泥馅料：称取胡萝卜170g、海带170g、海藻粉80g、蔓越莓170g、纯净水700mL，放入研磨机内与常温条件下搅碎，搅拌时间为4min；
S3、微胶囊包埋壁材的制备：称取S1制备所得的改性维生素A衍生物提取液80g、淀粉400g、食用明胶80g、纯净水800mL放入均质机中均质，具体条件如下：温度为35℃，压力为25MPa，均质后加入干酪乳杆菌8g、粪肠球菌8g，继续在常温下充分搅拌17min后，即得到微胶囊的包埋壁材备用；
S4、复配物的包埋：将S2制备好的蔬果泥馅料加入170g食盐，进行匀质处理，匀质温度为33℃，持续40min，取匀质后的馅料4kg、微胶囊包埋壁材0.8kg放入微胶囊包埋机中，即可制备得到5mm的微胶囊组合物。
对比例10、在S5步骤中除了不加食盐外，其余参数与实施例3相同。
消化率测试：
消化率表示消化物质占食入物质的百分比，因进入消化系统的养分只有一部分能被吸收，被吸收的这部分可以通过消化试验进行测定，并作为确定消化率的参数。我们可以同时测定饲料和粪便中含有的营养物质的量，计算出这两部分的差值就是被宠物消化吸收的部分，通常用百分数或对于1的小数表示(1表示完全消化)。
宠物食品的消化率(以狗为例)简单地说，反映了狗狗所摄入的食物输送基本营养物质的能力，这不仅影响着粪便量和质量(狗狗拉多少，以及便便的性状和气味)，最重要的是，宠物食品的消化率影响了狗狗的长期健康。一般来说，狗粮的消化率为75％或更少，那么它的品质相对较低；消化率在75％—82％之间，属于中等品质；消化率高于82％，属于高品质食物。
按照本领域的常规实验方法，将实施例1-4和对比例1-10的组合物分别喂养犬类各20只，每组犬类之间无统计学差异，犬类要求为健康成年1-3岁的中华田园犬，公母各一半，体重10kg±0.5kg，具体饲养条件相同，如下：温度保持在20-25℃，湿度为50％-60％，喂食量为50g/kg，喂养3天后取粪便，测试粪便中的脂肪和蛋白质残留量，每个实施例和对比例进行平行实验取平均值，计算消化吸收率结果见表1。
表1
测试样品 蛋白质消化吸收率 脂肪消化吸收率
实施例1 0.908±0.010 0.821±0.011
实施例2 0.906±0.011 0.781±0.009
实施例3 0.893±0.009 0.803±0.012
实施例4 0.845±0.007 0.792±0.018
对比例1 0.880±0.012 0.800±0.014
对比例2 0.886±0.016 0.765±0.003
对比例3 0.848±0.018 0.787±0.021
对比例4 0.833±0.017 0.756±0.014
对比例5 0.817±0.020 0.750±0.016
对比例6 0.794±0.006 0.738±0.018
对比例7 0.753±0.009 0.681±0.016
对比例8 0.811±0.010 0.755±0.021
对比例9 0.842±0.022 0.780±0.020
对比例10 0.792±0.018 0.708±0.023
通过表1和图3中的实验结果表明，与实施例2-4和对比例1-8相比，实施例1的组合物中的脂肪含量最高，且宠物狗的消化吸收率高达82.1％，说明实施例1的宠物粮组合物属于高品质宠物食品，能够提供给宠物足够的脂肪含量，同时还可以加快宠物猫对食物的吸收效率，揭示本发明提供的组合物可以在一定程度上提高宠物的消化吸收能力。与实施例2-4和对比例1-8相比，实施例1的组合物中原本含有的蛋白质含量最高，同时，宠物狗的消化吸收率最高，说明实施例1中具有足够的蛋白质能够提供给宠物充足的营养，揭示本发明提供的组合物具有一定提高宠物消化吸收的能力。
抑有害菌效果测试：
宠物肠胃炎大多数是由细菌感染引起的，而导致肠胃感染的细菌常见的为大肠杆菌、梭菌、沙门菌等。因此采用大肠杆菌作为测试菌，采用抑菌圈测定法检测实施例的抑菌活性，以抑菌圈为指标，测量抑菌圈的大小。
(1)药敏片的制备
用6mm打孔器制备滤纸片，高压蒸汽灭菌或紫外照射灭菌后备用。分别取实施例1-4和对比例4制备的样品1g溶于1mL无菌蒸馏水中。滤纸片分别在50μL样品溶液、PBS溶液、无菌蒸馏水中浸泡2小时后，晾干，置于4℃冰箱备用。
(2)悬浮液的制备
将活化的大肠杆菌菌株接种于LB液体培养基中，37℃空气浴摇床中振荡培养12小时。将测试菌液LB液体培养基稀释，浓度至1×106cfu/mL，备用。
(3)涂板培养
对制备好的L固体无菌培养基分别进行编号，分别取100μL各受试菌悬液，均匀涂布于固体LB平皿上，自然晾干5min并标记。将实施例1-3、对比例1、无菌蒸馏水药敏片分别放置于涂布好的细菌平板表面，倒置培养过夜培养于37℃生化恒温培养箱中，通过抑菌圈大小判定样品对试验菌株是否具有抗性。
图5为本发明制备的对比例4和实施例1-3所制备的样品对大肠杆菌的抑菌环。由此可知，本发明制备的宠物粮对导致肠胃感染的大肠杆菌具有一定的抑制作用。此外，图中对比例4的抑菌环要小于实施例1-3的抑菌环的大小，由此我们不难得出，本发明制备的宠物粮对大肠杆菌具有一定的抑制作用，可以很好的加强肠胃免疫力，提高宠物对肠胃炎的免疫作用。
抗氧化能力测试：
市面上测试抗氧化能力一般对血清中的抗氧化指标如超氧化物歧化酶、丙二醛的含量进行测试，具体测试方法如下：
(1)测试分组：
挑生长年龄为6-8岁、体重3-4kg的英国短毛猫90只，分为9组，每组10只，各组之间无统计学差异。其中1组为对照组，其余8组为处理组，具体分组为：
对照组：普通猫粮
实施例1-2组：使用本发明制备的实施例1-2的宠物粮
对比例1-6组：使用本发明制备的对比例1-6的宠物粮
(2)动物实验：将宠物猫饲养在环境温度为25℃、湿度为25-30％的相同环境中，根据分组饲喂相应的宠物粮，每日饲喂的质量为50g粮/kg(宠物)，自由采水，饲喂60天。
(3)结果检测
饲喂期结束后，采用Avian SOD ELISA试剂盒来测定超氧化物歧化酶含量，测试结果取平均值见表2。
表2
Figure BDA0003724784630000101
Figure BDA0003724784630000111
从表2中的测试结果可以看出，与对比例相比，实施例1的超氧化物歧化酶含量和活性均显著高很多，而丙二醇的含量却较低，说明实施例1的组合物可以有效提高宠物的免疫能力和抗氧化能力。原因可能是因改性后的维生素A衍生物提取液可促进干酪乳杆菌的增殖速度，提高动物消化过程中菌落的浓度，二者与食用明胶的协同效应可以增强老年猫的免疫功能，增强体内的自由基清除能力，帮助其提高抗氧化水平，减少腹泻和皮肤病等疾病发生的概率。
以上所述实施例仅表达了本发明的具体实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明保护范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，其他任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.一种具有免疫增强功能的组合物的制备方法，其特征在于：选取改性维生素A衍生物提取液加入食用明胶、淀粉、干酪乳杆菌和粪肠球菌作为微胶囊包埋壁材主体，加入多种食物馅料作为微胶囊的内容填充物，制备出的具有免疫增强功能的组合物；所述改性维生素A衍生物为：
Figure QLYQS_1
；
制备步骤如下：S1、改性维生素A衍生物提取液：称取熟鸡蛋黄、饮用水，放入破壁机中搅碎后，使用冷冻机在-10--40℃的条件下低温储存2-5h以除去蛋黄中的水分，取出后加入1：1的甲醇和乙醇的混合溶液，放入旋涡混合器中震荡，然后将匀浆离心，在550-850℃的恒温条件下通入氯气，持续1-3h后，取上层混合液加入生理盐水300-500mL，使用氩气将混合液吹干，即得到改性维生素A衍生物提取物；S2、制备蔬果泥馅料；S3、微胶囊包埋壁材的制备：称取S1制备所得的改性维生素A衍生物50-100g、淀粉200-500g、食用明胶50-100g、纯净水500-1000mL放入均质机中均质，具体条件如下：温度为25-40℃，压力为10-30MPa，均质后加入干酪乳杆菌5-10g、粪肠球菌5-10g，继续在常温下充分搅拌10-20min后，即得到微胶囊的包埋壁材备用；S4、复配物的包埋：将S2制备好的蔬果泥馅料加入100-200g食盐，进行匀质处理，匀质温度为30-35℃，持续20-50min，取匀质后的馅料2-5kg、微胶囊包埋壁材0.5-1kg放入微胶囊包埋机中，即可制备得到5mm的微胶囊组合物。
2.权利要求1所述的一种具有免疫增强功能的组合物的制备方法，其特征在于步骤如下：S1、改性维生素A衍生物提取液：称取熟鸡蛋黄200-500g、饮用水1000mL-2000mL，放入破壁机中搅碎后，使用冷冻机在-10--40℃的条件下低温储存2-5h以除去蛋黄中的水分，取出后加入1：1的甲醇和乙醇的混合溶液500-800mL，放入旋涡混合器中震荡20-30min，然后将匀浆离心，离心条件为4000-8000r/min，持续时间5-8min，在550-850℃的恒温条件下通入氯气，持续1-3h后，取上层混合液加入生理盐水300-500mL，使用氩气将混合液吹干，即得到改性维生素A衍生物提取物；S2、制备蔬果泥馅料：称取胡萝卜100-200g、海带100-200g、海藻粉50-100g、蔓越莓100-200g、纯净水500-800mL，放入研磨机内与常温条件下搅碎，搅拌时间为3-5min；S3、微胶囊包埋壁材的制备：称取S1制备所得的改性维生素A衍生物50-100g、淀粉200-500g、食用明胶50-100g、纯净水500-1000mL放入均质机中均质，具体条件如下：温度为25-40℃，压力为10-30MPa，均质后加入干酪乳杆菌5-10g、粪肠球菌5-10g，继续在常温下充分搅拌10-20min后，即得到微胶囊的包埋壁材备用；S4、复配物的包埋：将S2制备好的蔬果泥馅料加入100-200g食盐，进行匀质处理，匀质温度为30-35℃，持续20-50min，取匀质后的馅料2-5kg、微胶囊包埋壁材0.5-1kg放入微胶囊包埋机中，即可制备得到5mm的微胶囊组合物。
3.根据权利要求1或2所述的一种具有免疫增强功能的组合物的制备方法，其特征在于：所述S1中称取的熟鸡蛋黄为200g、饮用水为1000mL、甲醇和乙醇的混合溶液为500mL、生理盐水为300mL。
4.根据权利要求1或2所述的一种具有免疫增强功能的组合物的制备方法，其特征在于：所述S3称取的胡萝卜为100g、海带为100g、海藻粉为50g、蔓越莓为100g、纯净水为500mL。
5.根据权利要求1或2所述的一种具有免疫增强功能的组合物的制备方法，其特征在于：所述S3称取的改性维生素A衍生物提取液为50g、淀粉为200g、食用明胶为50g、纯净水为500mL、干酪乳杆菌为5g、粪肠球菌为5g。
6.根据权利要求1或2所述的一种具有免疫增强功能的组合物的制备方法，其特征在于：所述S4称取的食盐为100g、匀质后的馅料为2kg、微胶囊包埋壁材为0.5kg。
7.根据权利要求1-6任意一项所述的制备方法制备得到的一种具有免疫增强功能的组合物。
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