CN115094155B - 一种影响小麦耐盐性的snp和单倍型 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种影响小麦耐盐性的SNP和单倍型。所述SNP的核酸的序列如SEQ IDNo.5所示，所述SNP位于SEQ ID No.5上的从5’端起的第1014位点，为T或C。所述单倍型的核酸的序列如SEQ ID No.5所示，所述单倍型的9个SNP差异位点别为如SEQ IDNo.6所示的从5’到3’端的第1014位的C>T，第1183位的T>G，第1185位的C>G，第1189位的G>A，第1191位的G>T，第1202位的T>A，第1204位和1205位AT缺失，第1243位的T>A，第1247位后ACTG的插入。
Description
技术领域
本发明涉及植物耐盐领域，特别涉及一种影响小麦耐盐性的SNP和单倍型。
背景技术
土壤盐渍化已经成为全球范围内限制作物生产的主要逆境之一。全世界超过3％的陆地面积受到盐渍的影响，导致全世界的作物产量下降。我国的盐碱地面积为9913万公顷，占耕地面积的20％，而具有开发利用潜力的盐碱地面积为1333.3万公顷。因此，盐碱地已成为我国极为重要的后备耕地资源，而耐盐碱植物新品种的遗传改良及利用是盐碱地资源利用的有效途径之一。挖掘盐碱地潜力，开展盐碱地的高效利用对促进我国农业可持续发展和保障国家粮食安全具有重要战略意义。
发明内容
本发明之一提供了一种小麦的SNP，所述SNP的核酸的序列如SEQ ID No.5所示，所述SNP位于SEQ ID No.5上的从5’端起的第1014位点，为T或C。
本发明之二提供了一种小麦的单倍型，所述单倍型的核酸的序列如SEQ ID No.5所示，所述单倍型的9个SNP差异位点分别为如SEQ ID No.6所示的从5’到3’端的第1014位的C>T，第1183位的T>G，第1185位的C>G，第1189位的G>A，第1191位的G>T，第1202位的T>A，第1204位和1205位AT缺失，第1243位的T>A，第1247位后ACTG的插入。
本发明之三提供了一种小麦的KASP基因分型引物，其序列如SEQ ID No.7、SEQ IDNo.8和SEQ ID No.9所示。
本发明之四提供了根据本发明之一所述的SNP、本发明之二所述的单倍型和本发明之三所述的KASP基因分型引物在用于确定小麦耐盐中的应用。
在一个具体实施方式中，所述小麦的品种为中国春、gary、Alzada dorum、brundage、Dw、coda club、broundage、Deloris、UI dorwin、weston、boundary、石矮1号、石矮2号、烟农19、烟农15、渭麦9号、师栾02-1、藁优5766、藁优5218、藁优8901、新麦26、新麦28、济麦44、济南17、济麦22、济紫麦1号、济旱5036、济麦106、济农CH02、济麦52、济麦38、济麦60、济4099、石麦27、石麦25、石11-7091-1、石T10-153-3、石优20、石麦22、石优17、石15鉴21、安科4157、硬早2018、良星99、良星66、良星77、滨州16-3、滨州16-4、商355、驻麦305、驻麦328、驻麦762、商农5、衡16观71、衡Y16-5335、衡Y16-6127、衡16-5365、衡H16观44、衡H165087、衡1442、衡Y16观164、衡16观136、17初113、17初121、兰天45、兰天01-308、兰天36、兰天40、兰天31、兰天42、兰天43、兰天26、兰天44、兰天39、兰天33、兰天34、兰天10-2、兰天13-16、兰天15、兰天19、兰天21、兰天31、兰天46、兰天47、兰天48、兰天49、兰天50、兰天52、金禾9123、金禾12339、金禾13294、运旱102、运8427、运麦3101、兰天01-309、运旱179、运旱625、运旱115、运旱618、运旱137、运旱22-33、运旱1号、运8444、运83083、运丰旱2号、运8376-3、临旱5325、临旱955、临176038、临优165、临汾5064、临农11、临17鉴21、盐92-8014、盐科8、金麦5295、长9194、长8744、长4783、长4378、邢麦13、邢麦18、邢麦20、郑麦1860、郑麦136、郑麦103、郑品麦22号、郑麦132、郑麦119、烟农173、烟农999、山农25、山农29、山农30、红蚂蚱、茶淀红、科遗29、科遗26、沧麦119、沧麦6002、沧麦6003、沧麦6004、沧麦6005、沧核030、沧麦028、科农2011、科农9204、科农2009、Kn1002、科兴3302、科兴789、沧红、临WX88、菏麦0746-2、菏麦26、菏麦28、菏麦30、漯麦163、长航一号、九丰抗条9、小黑麦、长载734、轮选166、泉麦29、农大2011、珍麦3号、泰禾麦2号、中农麦4007、丹麦118、紫麦19、濮兴0369、豫农186、泛育麦17、新麦35、中育1220、平安0518、淮麦4046、许科918、涡麦1212、丰德存麦16号、机麦211、赛德麦5号、冀麦32、存麦11号、安科1405、龙麦30、龙麦35、龙麦39、山农紫麦1号、16YA67、DC3688、16YA24、漯麦906、漯麦163、鲁麦14、鲁麦21、耐盐78、耐盐101、西农528、德抗961、山融3号、衡9966、衡观35、轮选48、轮选49、轮选145、淄麦61、淄麦29、淄麦28、Kn8024、hope、土耳其B17G2805、大青芒B16G0009、铜麦6号、临Y8155、菏麦0839、菏麦0662-12、并麦3号、石17T5248、运旱1512、运旱805、运旱139-1、并195、并192、太113、晋作80、鲁原148、鲁研128、鲁原118、菏麦19、菏麦20、菏麦21、菏麦22、菏麦23、菏麦24、菏麦25、菏麦0711、菏麦08139、菏麦029、晋麦84、运麦14观74、邢麦18、邢麦27、邢麦26、中麦29、中麦30、中麦31、科农1223、冀资麦14号、冀资麦8号、河农6119、河农3320、河农6133、衡9966、衡H116021、衡Y166076、金禾330、金禾14219、金禾15310、金禾16294、冀资麦9号、冀麦161、临研16、临育18、17初120、济农CH03、洛农17103、邯15-5097、邯14-5337、邯麦19、临805临801、临176038、临农11和沧麦6001中的至少一种。
本发明之五提供了一种小麦耐盐性能的鉴定方法，其包括如下步骤：
确定小麦中的如本发明之一所述的SNP，如果所述SNP位点为T/T或C/T，则为耐盐型，如果所述SNP位点为C/C，则为盐敏感型。
本发明之六提供了一种小麦遗传改良的方法，所述方法包括：确定小麦品系的如本发明之一所述的SNP，并根据所述SNP做出相应的选择：
在所述小麦品系中选择在所述SEQ ID No.5上的从5’端起的第1014位点为T/T和C/T基因型的个体，淘汰在该位点为C/C基因型的个体，以逐代提高该位点的等位基因T的频率；优选在所述SEQ ID No.5上的从5’端起的第1014位点为T/T基因型的个体，淘汰在该位点为C/T和C/C基因型的个体，以逐代提高该位点的等位基因T的频率。
在一个具体实施方式中，利用分析所述小麦的核酸的序列来确定其中的如本发明之一所述的SNP或如本发明之二所述的单倍型，其中所述核酸的序列如SEQ ID No.5所示。
在一个具体实施方式中，利用如本发明之三所述的KASP基因分型引物分析所述小麦的核酸的序列来确定其中的如本发明之一所述的SNP。
本发明之七提供了一种改善小麦耐盐性能的小麦新品系和/或小麦新品种建立的方法，其包括如下步骤：对于如本发明之一所述SNP的基因型为C/T或C/C的小麦，通过定点突变将其中的C/T和C/C突变为T/T基因型。
本发明的有益效果：
发明首次确定了位于SEQ ID No.5上的从5’端起的第1014位点的SNP可以影响小麦的耐盐性能，其中，该位点为T/T基因型时的耐盐性能优于该位点为C/C基因型时的耐盐性能。利用该SNP可以快速鉴定新品种的耐盐性或对已有盐敏感型的小麦品种或品系进行遗传改良。
具体实施方式
以下通过优选的实施案例的形式对本发明的上述内容作进一步的详细说明，但其不构成对本发明的限制。
如无特别说明，本发明的实施例中的试剂均可通过商业途径购买。
实施例1
SNP和单倍型的获得
引物由Thermo Fisher Scientific公司合成。
用植物基因组DNA提取试剂盒(北京天根生化科技有限公司)对18个品种的小麦幼苗叶片分别提取基因组DNA。其中，18个小麦品种分别为沧麦6001、沧麦6002、沧麦6003、沧麦6004、科遗26、科农9204、科遗29、石麦22、衡4399、良星99、山农20、轮抗6、轮抗7、矮抗58、茶淀红、红蚂蚱、沧红和中国春。
以1P1F(SEQ ID No.1)和1P1R(SEQ ID No.2)为引物，分别以所提取的各品种小麦的基因组DNA为模板，进行PCR反应，得到片段约为2.1kb的PCR产物，将PCR产物送至ThermoFisher Scientific公司(北京测序部)进行测序，其中，以1P1F(SEQ ID No.1)、1P-seq2(SEQ ID No.3)和1P-seq3(SEQ ID No.4)进行测序，之后进行拼接，进而获得18个品种小麦的TaHKT1基因序列。
对18个品种小麦的TaHKT1基因序列进行比对分析发现，该基因存在两种单倍型，其中一种单倍型的基因序列如SEQ ID No.5所示，另一种单倍型的基因序列如SEQ ID No.6所示。在两种单倍型中，存在9个SNP差异位点，分别为如SEQ ID No.6所示的从5’到3’端的第1014位的C>T，第1183位的T>G，第1185位的C>G，第1189位的G>A，第1191位的G>T，第1202位的T>A，第1204位和1205位AT缺失，第1243位的T>A，第1247位后ACTG的插入。
实施例2
275个小麦品种的KASP基因分型
基于SEQ ID No.5所示的从5’到3’端的第1014位的C＞T的SNP，设计KASP引物：Xkasp1-FAM(SEQ ID No.7)、Xkasp1-HEX(SEQ ID No.8)和Xkasp1-C(SEQ ID No.9)。其中，Xkasp1-FAM的5’端添加的特异性荧光序列FAM，Xkasp1-HEX引物的5’端添加特异性荧光序列HEX。
用植物基因组DNA提取试剂盒(北京天根生化科技有限公司)，对275个品种的小麦幼苗叶片分别提取基因组DNA。其中，275个小麦品种具体见表1。
分别以275个小麦品种的基因组DNA为模板，以Xkasp1-FAM、Xkasp1-HEX和Xkasp1-C为KASP引物，按照KASP 5000V4.0 2×MasterMix试剂盒(LGC公司，英国)操作进行PCR扩增。PCR反应体系为10μL，包括DNA模板4.78μL(5-50ng/μL)，5μL KASP 5000V4.0 2×Master-Mix，0.14μL KASP Assay Mix，0.08μL Mg+。其中，KASP Assay Mix由Xkasp1-FAM、Xkasp1-HEX和Xkasp1-C 3条引物的稀释获得：先将每条引物稀释至100μmol/L，再按Xkasp1-FAM∶Xkasp1-HEX∶Xkasp1-C∶ddH2O＝12∶12∶30∶46的比例混合。PCR反应在Bio-RadCFX96 PCR仪上(Bio-Rad，美国)上进行。每次反应设置4个空白对照组(NTC，以超纯水代替DNA模板)。PCR反应为降落PCR，反应程序为：94℃热处理15min；94℃ 20s，61℃至55℃ 1min(每个循环下降0.6℃)，10个循环；94℃ 20s，55℃ 1min，30个循环；4℃避光保存。反应结束后进行荧光扫描，并做基因分型分析，结果见表1。
表1 275个小麦品种的单倍型分析
实施例3
275个小麦品种芽期耐盐性评价
在每个培养皿中放2层滤纸，加入总盐含量为0.5wt％的盐溶液(硅酸钠(Na2SiO3·9H2O)0.0680g/kg、氯化钙(CaCl2·2H2O)1.7604g/kg、氯化镁2.1262g/kg、碳酸氢钠0.3360g/kg、氯化钠1.9186g/kg、硫酸钠2.1646g/kg、氯化钾0.0172g/kg)，向其中加入30粒相同品种的种子进行盐处理，每个培养皿为1次重复，每个品种设置3次重复。以每个品种的超纯水处理作为空白对照。于光照培养箱中进行发芽处理(25℃恒温，光照16h)。7d后调查发芽的数量，并随机挑选10株幼苗调查芽长、根长、根数、芽鲜质量、根鲜质量及根冠比，最后计算发芽率和幼苗各指标的相对值。其中，发芽率(％)＝发芽种子数/种子总数×100％，各指标的相对值(％)＝各品种盐处理的测定指标值/各品种空白对照的测定指标值×100％。
用Excel2007软件进行数据整理，用SPSS21.0软件进行统计分析。
小麦芽期耐盐性的鉴定与评价，采用隶属函数法，根据主成分分析和聚类分析结果进行小麦芽期耐盐等级的划分。
具体计算方法和过程如下：
(1)主成分分析。对小麦的相对发芽率、相对芽长、相对根长等7个指标进行主成分分析，以主成分分析获得的各品种的主成分因子作为鉴定小麦芽期耐盐性的综合指标。综合判定选择3个独立的主成分作为小麦芽期耐盐鉴定的综合指标。
(2)综合评价D值。计算各品种各综合指标的隶属函数值及权重，进而得到各品种芽期的耐盐性综合评价值(D)。
利用SPSS 21.0计算275个小麦品种的各综合指标(3个主成分)的隶属函数值、权重值和耐盐综合评价D值，计算公式如下：
式中，U(Xij)为第i个品种第j个综合指标的隶属函数值，Xij为第i个品种第j个综合指标值，Xjmax为该综合指标的最大值，Xjmin为该综合指标的最小值。
式中，Wj值表示第j个综合指标在所有综合指标的重要程度；Pj表示第j个综合指标的贡献率；综合指标和贡献率由主成分分析法获得。
其中，D值是纯数值，其范围为[0,1]，D值越大，耐盐性越强。
(3)聚类分析。采用K-均值聚类方法将供试材料的耐盐性D值进行聚类分析，划分为髙耐(A)、耐盐(B)、中耐(C)、敏感(D)、高感(E)5个级别，详见表2。
表2 275个小麦品种芽期耐盐鉴定结果
表2结果表明：耐盐等级鉴定为A级(高耐)的材料为临旱955、邢麦27和轮选49等11个品种，耐盐性鉴定等级为B级(耐盐)的材料为沧麦6005、沧麦6002等。将小麦品种的髙耐(A)、耐盐(B)、中耐(C)、敏感(D)、高感(E)5个级别分为两类，A至C为耐盐，D和E为敏感，其中，沧麦系列品种基本上鉴定为耐盐等级。以上结果说明基于小麦芽期形态指标检测结果，用耐盐性综合评价D值表示小麦耐盐性强弱的方法是可行的，而且与实践经验较为一致。
实施例4
KASP基因分型与耐盐表型的关系
采用回归分析，考察该单倍型的有无对小麦芽期各指标相对值的影响。若材料含有此单倍型时，其KASP基因分型为T/T，则X＝1；若材料不含此单倍型时，其KASP基因分型为C/C，则X＝0。以X为自变数，分别以相对发芽率(Y1)、相对芽长(Y2)、相对根长(Y3)、相对根数(Y4)、相对芽鲜质量(Y5)、相对根鲜质量(Y6)、相对根冠比(Y7)和D值(Y8)为依变数进行回归分析，结果见表3。
表3小麦芽期各指标相对值与此单倍型的回归关系
注：*表示0.05水平差异显著，**表示0.01水平差异极显著。
表3结果表明，此单倍型的有无对相对发芽率、相对芽长、相对根长、相对根数和相对根冠比的回归关系显著或极显著存在。含有此单倍型的品种比不含有此单倍型的相对发芽率、相对芽长、相对根长、相对根数、相对根冠比和耐盐能力D值分别增加0.1804、0.2151、0.2974、0.1520、0.0657和0.0989。
综合而言，含有此单倍型的小麦品种比不含该单倍型的小麦品种，其芽期耐盐能力高0.0989。
序列表
<110> 沧州市农林科学院
<120> 一种影响小麦耐盐性的SNP和单倍型
<130> LHA2260356
<160> 9
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
gtagcaccag tatgcgacct 20
<210> 2
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
caggcagtac actagcgaca 20
<210> 3
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
ggagtaggtc tgtcaagtgc t 21
<210> 4
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
aggtactact tgctttggaa tctca 25
<210> 5
<211> 1983
<212> DNA
<213> 小麦 (Triticum aestivum)
<400> 5
atgggccggg tgaaaagatt ttaccaggat ttcatccata tcaagctgca tagcttctgc 60
cgtatcagtg gatatgttgt cgattcaata gcttttgtct atagatttgt tgcattgcat 120
gttcacccct tctggatcca actgtcctac ttccttgcca ttgctatact tggttcagtc 180
ctcttgatgt cgctgaaacc aagcaaccct gacttcagcc ctccttacat tgacatgtta 240
ttcttgtcaa cttctgctct aacagtttct ggcctcagca ccatcacgat ggaggatctc 300
tcaagctctc aaattgtggt tttgacattg ctcatgctta taggagggga gatctttgtt 360
tcactcttag ggctcatgct tagagtgaac catcaagaca tgcaagatct tccaagcgtg 420
aagatcagct cggttcctgt cgagcttgaa gagctagact tgcccaacag catggcacta 480
tgtgatgagt cgcagcttga agaagcagct catgcaattc cacccaagaa atgtacagag 540
ttgaagagga gtaggtctgt caagtgctta ggatatgtgg tctttgggta ctttgccatg 600
atccatgtct tgggctttct gctggttttt ctgtatataa ctcatgtgcc aactgcaagt 660
gccccactga acaagaaagg gatcaacatc gtgctcttct cactatcagt caccgttgcc 720
tcctgtgcga atgcaggact cgtgcccaca aatgagaaca tggtcatctt ctcaaagaat 780
tcaggcctct tgttgctgct gagtggccag atgctcgcag gcaatacatt gttccctctc 840
ttcctgaggc tactggtgtg gttcctgggg aggatcacaa aggtgaagga gctgaggctc 900
atgatcaata accccgagga agtgcgtttt gctaatttgc ttgctaggtt gccaactgtg 960
tttctctcct caacggtcgt tggccttgta gcagctgggg tcacgatgtt ctgtgctgtt 1020
gattggaatt cttcagtctt tgatgggctc agctcttatc agaagactgt caatgcattc 1080
ttcatggtgg tgaatgcgag gcactcaggg gagaattcca tcgactgctc gctcatgtcc 1140
cctgccatta tagtactatt catcgtcatg atgtaagttc atgagtgcat tgcacttcat 1200
taattgatgt ttcatttcat atcatttgat aagtaggtac aacttactgg ctttggaatc 1260
tcaaattcac gtgcgacaat ttacttcttg gtctcaggta tttgccatca tcagcaacat 1320
ttgcaccacc cagtggagat actaaaacca ccaatgagaa cacgaaaggg aaagtcaaga 1380
gagggtcgtt ggtgcagaat ttggcattct caccgctcgg gtgtaacatc atctttgtga 1440
tggttgcctg catcacggaa aggagaaggc tcagaaacga tccactcaac ttctccacct 1500
tgaacatgat atttgaggtc atcaggtgtg ttattctttg atataattga aatatttcat 1560
tactctaccg gttagcaaag atggagaaaa gacagtagga cgaaggtagc atagactaac 1620
ggtaaatagc agttgcggca tagcggtaga gtgaagtaag ttcataaaca gaccactttg 1680
tgtttgcaag agctaaacac gatactaaac taggacacga aatctagctc gtgaatgcct 1740
ttgactaagg tataaatgat tttgtatgct ttgttttgca gcgcatatgg caatgcaggg 1800
ttatccactg gttacagttg ttctagactg catcagctgc acccagagat catctgccag 1860
gacaaaccat acagcttttc tggatggtgg agtgacggag gaaagtttgt gctaatattg 1920
gtcatgctct atggaaggct taaggctttc acactggcca cgggtaaatc ctggaaagta 1980
tga 1983
<210> 6
<211> 1981
<212> DNA
<213> 小麦 (Triticum aestivum)
<400> 6
atgggccggg tgaaaagatt ttaccaggat ttcatccata tcaagctgca tagcttctgc 60
cgtatcagtg gatatgttgt cgattcaata gcttttgtct atagatttgt tgcattgcat 120
gttcacccct tctggatcca actgtcctac ttccttgcca ttgctatact tggttcagtc 180
ctcttgatgt cgctgaaacc aagcaaccct gacttcagcc ctccttacat tgacatgtta 240
ttcttgtcaa cttctgctct aacagtttct ggcctcagca ccatcacgat ggaggatctc 300
tcaagctctc aaattgtggt tttgacattg ctcatgctta taggagggga gatctttgtt 360
tcactcttag ggctcatgct tagagtgaac catcaagaca tgcaagatct tccaagcgtg 420
aagatcagct cggttcctgt cgagcttgaa gagctagact tgcccaacag catggcacta 480
tgtgatgagt cgcagcttga agaagcagct catgcaattc cacccaagaa atgtacagag 540
ttgaagagga gtaggtctgt caagtgctta ggatatgtgg tctttgggta ctttgccatg 600
atccatgtct tgggctttct gctggttttt ctgtatataa ctcatgtgcc aactgcaagt 660
gccccactga acaagaaagg gatcaacatc gtgctcttct cactatcagt caccgttgcc 720
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tcaggcctct tgttgctgct gagtggccag atgctcgcag gcaatacatt gttccctctc 840
ttcctgaggc tactggtgtg gttcctgggg aggatcacaa aggtgaagga gctgaggctc 900
atgatcaata accccgagga agtgcgtttt gctaatttgc ttgctaggtt gccaactgtg 960
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gttgcctgca tcacggaaag gagaaggctc agaaacgatc cactcaactt ctccaccttg 1500
aacatgatat ttgaggtcat caggtgtgtt attctttgat ataattgaaa tatttcatta 1560
ctctaccggt tagcaaagat ggagaaaaga cagtaggacg aaggtagcat agactaacgg 1620
taaatagcag ttgcggcata gcggtagagt gaagtaagtt cataaacaga ccactttgtg 1680
tttgcaagag ctaaacacga tactaaacta ggacacgaaa tctagctcgt gaatgccttt 1740
gactaaggta taaatgattt tgtatgcttt gttttgcagc gcatatggca atgcagggtt 1800
atccactggt tacagttgtt ctagactgca tcagctgcac ccagagatca tctgccagga 1860
caaaccatac agcttttctg gatggtggag tgacggagga aagtttgtgc taatattggt 1920
catgctctat ggaaggctta aggctttcac actggccacg ggtaaatcct ggaaagtatg 1980
a 1981
<210> 7
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
gaaggtgacc aagttcatgc tctggggtca cgatgttctg t 41
<210> 8
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 8
gaaggtcgga gtcaacggat tctggggtca cgatgttctg c 41
<210> 9
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 9
agagctgagc ccatcaaag 19
Claims (6)
1. 一种与小麦耐盐相关的SNP分子标记，所述SNP分子标记的序列如SEQ ID No. 5所示，所述SEQ ID No. 5所示序列从5’端起的第1014位点的碱基为T或C。
2. 一种小麦的KASP基因分型引物，其序列如SEQ ID No. 7、SEQ ID No. 8和SEQ IDNo. 9所示。
3.一种小麦遗传改良的方法，所述方法包括：确定小麦品系的如权利要求1所述的SNP分子标记，并根据所述SNP分子标记做出相应的选择：
在所述小麦品系中选择在所述SEQ ID No. 5上的从5’端起的第1014位点为T/T和C/T基因型的个体，淘汰在该位点为C/C基因型的个体，以逐代提高该位点的等位基因T的频率。
4. 根据权利要求3所述的方法，其特征在于，在所述小麦品系中选择在所述SEQ IDNo. 5上的从5’端起的第1014位点为T/T基因型的个体，淘汰在该位点为C/T和C/C基因型的个体，以逐代提高该位点的等位基因T的频率。
5. 根据权利要求3所述的方法，其特征在于，利用分析所述小麦的核酸的序列来确定其中的如权利要求1所述的SNP分子标记，其中所述SNP分子标记的序列如SEQ ID No. 5所示。
6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，利用如权利要求2所述的KASP基因分型引物分析所述小麦的核酸的序列来确定其中的如权利要求1所述的SNP分子标记。
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