CN101090972A - 具有改良生长特性的植物及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及通过增加植物中HKT蛋白或其同源物的活性来改良植物生长特性的方法。一种这样的方法包括向植物中引HKT核酸分子或其功能性变体。本发明还涉及具有改良生长特性的转基因植物，所述植物中HKT蛋白编码核酸的表达增加。本发明也涉及在本发明方法中有用的构建体。

Description

具有改良生长特性的植物及其制备方法
技术领域
本发明一般地涉及分子生物学领域，并涉及改良植物生长特性的方法。更具体地，本发明涉及通过增加植物中Na+-K+协同转运蛋白(HKT)或其同源物的活性来改良植物生长特性尤其是产率的方法。本发明还涉及具有增加HKT活性的植物，这些植物相对于相应的野生型植物，具有改良的生长特性。本发明还提供在发明方法中有用的构建体。
技术背景
鉴于不断增长的世界人口和农业可耕种土地面积的缩小，提高农业效率和增加园艺植物的多样性一直是农业研究的主要目标。农作物和园艺改良的常规方法是利用选育技术来鉴定具有期望特性的植物。然而，这样的选育技术有几个缺点，即这些技术通常是劳动密集型的，并且产生通常含有异源遗传组分的植物，这些遗传组分并非总是产生从亲本植物传递的期望性状。分子生物学的进展已经允许人类改造动物和植物的种质(germplasm)。植物基因工程需要分离和操作遗传物质(通常为DNA或RNA的形式)及随后将该遗传物质引入植物。这种技术导致开发具有多种改良的经济、农业或园艺性状的植物。具有特别经济利益的性状是生长特性如高产。产率通常被定义为来自农作物经济价值的可测量产出。其可以根据数量和/或质量来定义。产率直接依赖于几种因素，例如：器官的数量和大小，植物构造(例如分枝数)，种子产量及更多的因素。根的发育，营养吸收和胁迫耐受性也是决定产率的重要因素。可以通过优化上述因素之一来增加农作物的产率。
植物的一个主要的非生物胁迫因素是盐分。盐胁迫，特别是Na+胁迫对若干细胞过程具有负面作用。除包括膜功能不良的高渗损伤之外，高钠浓度还可能干扰Na+敏感性酶并可能导致失常的离子转运(有关细胞和分子应答的综述，参见Hasegawa等，2000.Annu.Rev.Plant Physiol.PlantMol.Biol.51，463-499)。另一方面，钾是一种重要的营养素，对于蛋白质上负电荷的中和、K+依赖性酶的激活、细胞膨压及渗透平衡的维持等都是必要的。Na+和K+转运彼此相互关联：实验数据显示两种离子都使用同样的转运蛋白，而且植物可以通过吸收钠来代偿钾的不足(Pitman，1967.Nature 216，1343-1344；Pitman等，1968.Aust.J.Biol.Sci 21，871-881)。非电压门控单价阳离子通道(Voltage-insensitive monovalent-cation channel)(VIC)在植物的Na+和K+吸收方面起着重要作用(White，1999.Trends PlantSci.4，245-246)。此外，已经在拟南芥(Arabidopsis)中描述了几种K+吸收蛋白质(Maser等，2001.Plant Physiol.126：1646-1667)：AKT/KAT型通道蛋白、HAK/AT/KUP样转运蛋白和HKT型转运蛋白。植物HKT蛋白是植物阳离子转运蛋白超家族的一部分，该超家族也包括酵母Trk蛋白和原核生物KdpA、KrkH和KtrB蛋白(Schachtman&Liu，1999.Trends Plant Sci.4，281-286)。
已在拟南芥中证明跨膜蛋白AtHKT1也参与根及盐耐受情况下的Na+吸收(Uozumi等，2000.Plant Physiol.122，1249-1259；Rus等，2001.Proc.Natl.Acad.Sci.USA 98，14150-14155)；该蛋白在稻中的对应物(OsHKT1)在钾消耗的条件下执行相似的功能(Garciadeblás等，2003.Plant J.34，788-801)。还报道AtHKT1对于从芽到根的Na+再循环很重要，由此促成了植物的盐耐受(Berthomieu等，2003.EMBO J.22，2004-2014)。在稻中，已经鉴定和表征了9类HKT转运蛋白(Garciadeblás等，2003.Plant J.34，788-801，Horie等，2001.Plant J.27，129-138)。此外，稻HKT1不仅介导Na+和K+转运，而且还介导其他碱性阳离子的转运(Golldack等，2002.PlantJ.31，529-542)。在稻中对高和低HKT1蛋白水平的影响进行了研究(Golldack等，2002)：就吸收或外排钠的能力而言，盐耐受品系Pokkali和盐敏感品系IR29彼此差异显著。高浓度的碱性离子在两种品系中均抑制OsHKT1表达，但是与盐耐受品系Pokkali相比，这种抑制作用在IR29品系的根和叶脉管组织中不太突出。
有关HKT1基因在植物中异源表达的数据不多。Schroeder和Schachtman(WO96/05722)公开了一种小麦HKT1蛋白，并提出通过操纵这种HKT1蛋白的表达来利用其调节环境中的盐吸收，产生可用于脱盐的植物(通过增强HKT1表达增加钠吸收)，或产生对毒性碱金属具有抗性的植物(通过抑制HKT1表达降低或抑制吸收)。然而，如Laurie等所示(PlantJ.32，139-149，2002)，过表达HKT1植物的表型与对照植物没有多大不同：在NaCl胁迫条件下，HKT1过表达品系的鲜重下降至与对照植物相似的程度，而且，与对照相比，过表达品系根中的Na+含量也没有显著增加。Laurie等还证明实现HKT1表达下调的条件相当复杂。迄今为止，与HKT1有关的现有技术主要集中在阳离子转运和离子稳态方面，而且多数研究是在酵母或爪蟾(Xenopus)卵母细胞中进行的，这些结果也许不能完全反映植物中的HKT1功能。
在拟南芥(Arabidopsis thaliana)中AtHKT1由单个基因编码。据认为此基因存在于所有植物基因组中，有时可能作为小的基因家族存在，例如在稻中即如此。AtHKT1基因于根中表达，其他组织中的表达程度较小(Uozumi等，2000)。已经利用序列分析和疏水性分析构建了一种HKT型蛋白的三维模型(Durell等，Biophys.J.77，775-788，1999；Durell和Guy，Biophys.J.77，789-807，1999)：表明该蛋白是疏水性的，并包含一种核心结构，该核心结构为侧接形成孔的4个环的8个跨膜结构域(换言之：四个单位的跨膜结构域-孔形成结构域-跨膜结构域)，预测每个孔形成结构域部分地定位于膜内(见图1)并含有保守的甘氨酸或丝氨酸残基。野生型AtHKT1的异源表达揭示该蛋白选择性地介导Na+转运，而K+转运程度较小(Uozumi等，2000)。来自不同植物物种的其他HKT蛋白显示出Na+/K+同向转运蛋白活性。认为离子选择性是由第一孔形成结构域(或P环)决定的。将AtHKT1基因中的Ser-68突变为Gly能够恢复K+的渗透性。在其他HKT蛋白中也发现了对应于AtHKT1中突变Gly-68的甘氨酸残基；已证明此Gly是发挥离子选择性滤孔作用的保守“GYG”基序中的第一个Gly(M_ser等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 99，6428-6433，2002)。除了Na+和K+，证明HKT型蛋白还转运其他阳离子如Rb+、Li+和Cs+(Golldack等，2002)。除了拟南芥，已从多种其他植物物种中分离到HKT蛋白，包括稻、小麦、赤桉(Eucalyptus camaldulensis)、大麦(Hordeum vulgare)和冰叶日中花(Mesembryanthemum crystallinum)。
现已惊奇地发现，与相应野生型植物相比，增加植物中HKT蛋白或其同源物的活性使植物具有改良的生长特性，特别是无胁迫条件下的生长特性。
发明内容
根据本发明的一个实施方案，提供了改良植物生长特性的方法，其包括增加植物中HKT蛋白或其同源物的活性。任选的后续步骤可以选择具有改良生长特性的植物
有利地，执行本发明的方法使植物具有多种改良的生长特性，尤其是增加的产率，特别是种子产率。
本文所定义术语“增加的产率”意指相对于相应的野生型植物，在以下任一或多个方面的增加：(i)植物的一个或多个部分，特别是地上(可收获)部分增加的生物量(重量)、增加的根生物量或者任何其他可收获部分增加的生物量；(ii)增加的种子产率，包括种子生物量(种子重量)的增加，并且可以是每株植物种子重量或以单个种子为基础的增加；(iii)增加的每个圆锥花序的花(小穗florets)的数量；(iv)增加的(饱满)种子数量；(v)增加的种子大小，其也可能影响种子的组成；(vi)增加的种子体积，其也可能影响种子的组成(包括油、蛋白质和糖类总含量以及组成)；(vii)增加的单个种子的面积；(viii)增加的单个种子的长度和/或宽度；(ix)增加的收获指数，其表示为可收获部分如种子的产率与总生物量的比值；和(x)增加的千粒重(TKW)，其是从所计的饱满种子数和它们的总重量推断出的。增加的TKW可能源自增加的种子大小和/或种子重量。增加的TKW可能源自增加的胚大小和/或胚乳大小。
以玉米为例，产率的增加可以表现为以下的一项或多项：每公顷或每英亩植物数量的增加，每株植物穗数的增加，行数、行粒数、粒重量、千粒重、穗长度/直径的增加等等的增加。以稻为例，产率的增加可以表现为以下一项或多项的增加：每公顷或每英亩植物的数量，每株植物的圆锥花序数，每个圆锥花序的小穗数，每个圆锥花序的花数，种子饱满率的增加，千粒重的增加等等。产率的增加也可能产生改变的构造，或者可以作为改变的构造的结果发生。
根据优选的方面，执行本发明的方法产生具有增加的产率特别是增加的生物量和/或增加的种子产率的植物。因此，本发明提供了改良植物生长特性特别是增加种子产率的方法，该方法包括增加植物中HKT蛋白或其同源物的活性。
由于本发明的改良植物具有增加的产率，相对于相应野生型植物在它们生命周期相应阶段的生长速率而言，这些植物可能呈现增加的生长速率(在至少它们部分的生命周期中)。增加的生长速率可能是对植物的一个或多个部分或一种或多种细胞类型(包括种子)特异性的，或者可能基本上遍及整个植物。具有增加生长速率的植物可能具有较短的生命周期。植物的生命周期意味着从成熟干种子成长至该植物产生与类似于起始的材料的成熟干种子的阶段所需的时间。生命周期可能受到诸如早期活力、生长速率、开花时间和种子成熟的速度等因素的影响。生长速率的增加可能出现在植物生命周期的一个或多个阶段，或者出现在基本上整个植物生命周期的过程中。在植物生命周期的早期阶段，生长速率的增长可能表现为增强的活力。生长速率的增加可以改变植物的收获周期，使植物能够比其他可能的情况更晚播种和/或更快收获。如果生长速率充分增加，可能允许播种同种植物物种更多的种子(例如完全在一个常规的生长期内，播种和收获稻类植物、接着播种和收获更多的稻类植物)。同样的，如果生长速率充分地增长，可能允许播种不同植物物种更多的种子(例如播种和收获稻类植物，随后，如播种和任选的收获大豆、马铃薯或任何其他适合的植物)。在一些植物的情况下也可能从同一根茎收获增加的次数。改变植物的收获周期可能会导致每英亩年生物量产量的增加(这是由于(比方说在一年中)任何特定植物可以生长和收获次数的增加)。与野生型对应物相比，生长速率的增加还可能使能够在更广阔的地域栽培转基因植物，因为种植农作物的地域限制通常由种植时(早季)或收获时(晚季)不利的环境条件所决定。如果缩短收获周期，可以避免这类不利条件。可以通过来自生长曲线的多种参数确定生长速率，这类参数可以是：T-Mid(植物达到其最大大小的50％所需时间)和T-90(植物达到其最大大小90％所需时间)等等。
执行本发明的方法赋予植物增加的生长速率。因此，本发明提供了增加植物生长速率的方法，该方法包括增加植物中HKT蛋白或其同源物的活性。
无论植物处于无胁迫条件下，或植物相对于对照植物暴露于多种胁迫下，都发生产率和/或生长速率的增加。因而应当理解，在本发明中生产率和/或生长速率的增加不依赖生长条件，不管是胁迫条件或无胁迫条件。通常植物通过更加缓慢的生长来应答接触的胁迫。在重度胁迫条件下，植物甚至可以完全停止生长。另一方面，轻度胁迫在本文中定义为当植物接触时不导致植物完全停止生长丧失重新开始生长能力的任何胁迫。由于耕作方法(灌溉、施肥、杀虫剂处理)的发展，栽培的农作物植物常常不会遇到重度胁迫。因此，由轻度胁迫诱导的受损的生长成为农业中不期望的要素。轻度胁迫是植物可能接触的典型胁迫。这些胁迫可以是植物接触的日常生物的和/或非生物的(环境的)胁迫。典型的非生物的或环境的胁迫包括由反常的热或冷/冰冻温度产生的温度胁迫；盐胁迫；水胁迫(干旱或过量的水)。非生物胁迫也可以由化学物质引起。生物的胁迫一般是由病原体如细菌、病毒、真菌和昆虫引起的那些胁迫。本文所用术语“无胁迫条件”是指不超出植物每天遭遇的气候或其他非生物胁迫条件的那些环境条件。本领域技术人员知道对于给定的地理位置的正常土壤条件和气候条件。
可以在任何植物中有利地修饰上述生长特性。
本文所用术语“植物”包括整个植物、植物的祖先和后代以及植物的部分，包括种子、芽、茎、叶、根(包括块茎)、花以及组织和器官。术语“植物”还包括植物细胞、悬浮培养物、愈伤组织、胚、分生区、配子体、孢子体、花粉和小孢子。术语“植物”还包括人工干预修饰的植物、植物部分或植物细胞，如突变或转化的植物或植物部分，这些突变或转化的植物或植物部分包括目的基因/核酸或目的基因/核酸的特定修饰。
尤其可用于本发明方法中的植物包括藻类、蕨类植物以及属于植物界(Viridiplantae)超家族的所有植物，尤其是单子叶植物和双子叶植物，包括选自如下物种的饲料或饲料豆科植物、观赏植物、粮食作物、乔木或灌木：秋葵属物种(Abelmoschus spp.)、槭树属物种(Acer spp.)、猕猴桃属物种(Actinidia spp.)、冰草属物种(Agropyron spp.)、葱芹属物种(Alliumspp.)、苋属物种(Amaranthus spp.)、凤梨(Ananas comosus)、番荔枝属物种(Annona spp.)、芹菜(Apium graveolens)、拟南芥、落花生属物种(Arachis spp.)、木波罗属物种(Artocarpus spp.)、石刁柏(Asparagusofficinalis)、燕麦(Avena sativa)、阳桃(Averrhoa carambola)、冬瓜(Benincasa hispida)、巴西栗(Bertholletia excelsea)、甜菜(Betavulgaris)、芸苔属物种(Brassica spp.)、Cadaba farinosa、大叶茶(Camelliasinensis)、美人蕉(Canna indica)、辣椒属物种(Capsicum spp.)、番木瓜(Carica papaya)、大果假虎刺(Carissa macrocarpa)、红花(Carthamustinctorius)、山核桃属物种(Carya spp.)、栗属物种(Castanea spp.)、苦苣(Cichorium endivia)、樟属物种(Cinnamomum spp.)、西瓜(Citrulluslanatus)、柑橘属物种(Citrus spp.)、椰子属物种(Cocos spp.)、咖啡属物种(Coffea spp.)、Cola spp.、芋(Colocasia esculenta)、榛属物种(Corylus spp.)、山楂属物种(Crataegus spp.)、香瓜属物种(Cucumisspp.)、南瓜属物种(Cucurbita spp.)、菜蓟属物种(Cynara spp.)、胡萝卜(Daucus carota)、山马蟥属物种(Desmodium spp.)、龙眼(Dimocarpuslongan)、薯蓣属物种(Dioscorea spp.)、柿树属物种(Diospyros spp.)、稗属物种(Echinochloa spp.)、穇子(Eleusine coracana)、枇杷(Eriobotryajaponica)、红仔果(Eugenia uniflora)、荞麦属物种(Fagopyrum spp.)、山毛榉属物种(Fagus spp.)、无花果(Ficus carica)、金桔属物种(Fortunellaspp.)、草莓属物种(Fragaria spp.)、银杏(Ginkgo biloba)、大豆属物种(Glycine spp.)、陆地棉(Gossypium hirsutum)、向日葵属物种(Helianthus spp.)、木槿属物种(Hibiscus spp.)、大麦属物种(Hordeumspp.)、甘薯(Ipomoea batatas)、核桃属物种(Juglans spp.)、莴苣(Lactucasativa)、山黧豆属物种(Lathyrus spp.)、浮萍属物种(Lemna spp.)、兵豆(Lens culinaris)、亚麻(Linum usitatissimum)、荔枝(Litchichinensis)、百脉根属物种(Lotus spp.)、棱角丝瓜(Luffa acutangula)、羽扇豆属物种(Lupinus spp.)、硬皮豆属物种(Macrotyloma spp.)、西印度樱桃(Malpighia emarginata)、苹果属物种(Malus spp.)、曼密苹果(Mammea americana)、芒果(Mangifera indica)、木薯属物种(Manihotspp.)、人心果(Manilkara zapota)、紫苜蓿(Medicago sativa)、草木樨属物种(Melilotus spp.)、薄荷属物种(Mentha spp.)、苦瓜属物种(Momordicaspp.)、黑桑(Morus nigra)、芭蕉属物种(Musa spp.)、烟草属物种(Nicotianum spp.)、木犀榄属物种(Olea spp.)、仙人掌属物种(Opuntiaspp.)、Ornithopus spp.、稻属物种(Oryza spp.)、稷(Panicum miliaceum)、鸡蛋果(Passiflora edulis)、欧防风(Pastinaca sativa)、鳄梨属物种(Perseaspp.)、香芹(Petroselinum crispum)、菜豆属物种(Phaseolus spp.)、刺葵属物种(Phoenix spp.)、酸浆属物种(Physalis spp.)、松属物种(Pinusspp.)、阿月浑子(Pistacia vera)、豌豆属物种(Pisum spp.)、早熟禾属物种(Poa spp.)、杨属物种(Populus spp.)、牧豆树属物种(Prosopisspp.)、李属物种(Prunus spp.)、番石榴属物种(Psidium spp.)、石榴(Punica granatum)、西洋梨(Pyrus communis)、栎属物种(Quercusspp.)、萝卜(Raphanus sativus)、波叶大黄(Rheum rhabarbarum)、茶藨子属物种(Ribes spp.)、悬钩子属物种(Rubus spp.)、甘蔗属物种(Saccharum spp.)、接骨木属物种(Sambucus spp.)、黑麦(Secalecereale)、Sesamum spp.、茄属物种(Solanum spp.)、两色蜀黍(Sorghumbicolor)、菠菜属物种(Spinacia spp.)、蒲桃属物种(Syzygium spp.)、酸豆(Tamarindus indica)、可可树(Theobroma cacao)、车轴草属物种(Trifolium spp.)、Triticosecale rimpaui、小麦属物种(Triticum spp.)、越桔属物种(Vaccinium spp.)、野豌豆属物种(Vicia spp.)、豇豆属物种(Vigna spp.)、葡萄属物种(Vitis spp.)、玉蜀黍(Zea mays)、北美洲野生稻(Zizania palustris)、枣属物种(Ziziphus spp.)等等。
根据本发明优选的特征，所述植物为农作物植物，如大豆、向日葵、芸苔、苜蓿、油菜籽或棉花。本发明进一步优选的植物是单子叶植物，如甘蔗，更优选的植物是谷类，如稻、玉米、小麦、粟、大麦、黑麦、燕麦或高粱。
可以通过提高HKT多肽的水平，例如通过提高编码HKT蛋白的核苷酸水平来增加HKT蛋白或其同源物的活性。备选地，当HKT水平没有改变，或者甚至当HKT水平降低的时候，其活性也可以增加。这种情况出现在多肽固有特性发生改变的时候，例如，通过制备比野生型多肽更具活性的突变体或选择这样的变体。
本文定义的术语“HKT蛋白或其同源物”指具有HKT活性的多肽且该多肽包括四个单位的跨膜结构域-孔形成结构域-跨膜结构域。优选的，HKT蛋白具有SEQ ID NO：2所代表的序列，或为其同源物：按照增加的偏好顺序与SEQ ID NO：2所代表的氨基酸序列具有至少35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、48％、49％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％总体序列同一性。总体序列同一性利用可执行全局比对的比对算法进行确定，例如GAP程序(GCG Wisconsin Package，Accelrys)中的Needleman Wunsch算法。
可以用本领域技术人员众所周知的常规技术容易地鉴定落入上述定义范围内的“HKT蛋白或其同源物”。例如，可以用本领域众所周知的技术在体内或体外容易地测定HKT作为阳离子转运蛋白的活性。例如，可如Uozumi等(2000)所述测定将HKT基因克隆进大肠杆菌菌株LB2003(K+吸收系统Trk、Kup和Kdp缺陷株)后对K+吸收的互补作用和效果。类似地，酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)菌株CYl62(高亲和力吸收系统trk1和trk2缺陷株)可通过克隆入HKT基因而得到互补，而酵母菌株G19(Na+外排ATPase基因ENA1至ENA4缺陷株)或野生型酵母菌株在克隆入HKT基因之后将表现出生长抑制作用(Horie等，2001)。可选地，可利用非洲爪蟾(Xenopus laevis)卵母细胞进行电压钳测定(参见例如Horie等，2001)，或如Garciadeblas等(Plant J.34，788-801，2003)和Banuelos等(PlantPhysiol.130，784-795，2002)所述在根或酵母中进行阳离子吸收/消耗试验。至少一种上述测定(或本领域公知的其他测定)将证明HKT蛋白或其同源物的阳离子转运活性。可选地，与相应的野生型植物相比，当这样的“HKT蛋白或其同源物”在稻(Oryza sativa)栽培种日本晴(Nipponbare)中处于WSI18启动子的控制下表达时，能够增加种子产率。种子产率的增加可以通过多种方式衡量，例如饱满种子数量的增加。从而增加HKT活性涵盖至少如下之一：增加HKT蛋白或其同源物编码核酸的水平、增加HKT蛋白或其同源物的水平、增加转运蛋白活性或增加种子产率。
衡量HKT编码核酸水平增加的技术本领域公知，并且包括例如Northern印迹、实时PCR或定量PCR。HKT蛋白水平的增加可利用例如Western印迹、通过在粗蛋白样品凝胶电泳后估计带/斑的强度、或者通过测试酶活(可行的话)进行测定。
HKT蛋白的多种结构域可利用专门的数据库加以鉴定，如SMART(Schultz等(1998)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 95，5857-5864；Letunic等(2002)Nucleic Acids Res 30，242-244；http://smart.embl-heidelberg.de/)，InterPro(Mulder等，(2003)Nucl.Acids.Res.31，315-318；http://www.ebi.ac.uk/interpro/)、Prosite(Bucher和Bairoch(1994)，Ageneralized profile syntax for biomolecular sequences motifs and itsfunction in automatic sequence interpretation.(In)ISMB-94；Proceedings2nd International Conference on Intelligent Systems for Molecular Biology.Altman R.，Brutlag D.，Karp P.，Lathrop R.，Searls D.编辑，53-61页，AAAIPress，Menlo Park；Hulo等，Nucl.Acids.Res.32：D134-D137，(2004)，http://www.expasy.org/prosite/)或Pfam(Bateman等，Nucleic AcidsResearch 30(1)：276-280(2002)，http://www.sanger.ac.uk/Software/Pfam/).
HKT蛋白的结构域为本领域公知，且其拓扑模型得到实验证据的支持(Kato等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 98，6488-6493，2001)。HKT型蛋白质包括这样的蛋白质：其含有四个“跨膜结构域-孔结构域-跨膜结构域”单位(MPM)。四个孔形成结构域中的每一个都含有保守的甘氨酸或丝氨酸残基。第一个孔形成结构域中的保守甘氨酸(或丝氨酸)残基(在图1的结构域A中标示为星号)决定阳离子特异性。每个MPM单位包含如Durell等(1999)所表征的MPM基序。例如，AtHKT1中的四个MPM单位(SEQ IDNO：2)包含基序：GL IVSQLSFLTICIFLSITERQNLQRDPINFN VLNITLEVISAYGNVGFTTGYSCERRLDISDGGCKDASYGFAGRW SPMGKFVLIIVMFYGRFKQFTAKSGRAWILYPSS(SEQ ID NO：7)，
其中，黑体标下划线的序列部分代表跨膜基序，而斜体标下划线的部分表示孔形成环基序，其中保守甘氨酸残基为黑斜体。
HKT蛋白如SEQ ID NO：2还包含TrkH结构域(Pfam登录号PF02386，Interpro登录号IPR003445)(对于SEQ ID NO：2而言起始于G145而终止于Y502)，这是如下的一类蛋白所特有的：这类蛋白包括钾转运蛋白(Trk)和V型钠ATP合酶亚基J或易位ATPase J。
优选地，可用于本发明的HKT蛋白在第4个孔形成结构域中包含相应于EVISAYGNVGFTTGY(SEQ ID NO：8)的共有序列，其中黑体显示的残基总是保守的，而其他残基可以变化(参见例如图2)。优选地，第4个孔形成结构域中的共有序列相应于：E(V，I)(I，V)SA(Y，F)G(N，T)(V，A，I)G(F，L，Y)(T，S)(T，I，L，V，M)GY(SEQ ID NO：9)。更优选地，第4个孔形成结构域中的共有序列相应于：E(V，I)(I，V)SA(Y，F)GNVG(F，L，Y)(T，S)(T，L，V)GY。
可选地，可用于本发明方法的HKT蛋白在第4个孔形成结构域中包含SA(Y，F)GN序列标签和DP(I，L)N(Y，F，L)序列标签(SEQ ID NO：10)。优选地，SEQ ID NO：10的标签序列为DP(I，L)NF。
可以通过序列比对容易地确定多肽与SEQ ID NO：2代表的氨基酸是否具有至少35％的同一性。搜索和鉴定HKT同源物的方法是本领域技术人员熟知的。这类方法包括将计算机可读形式SEQ ID NO：1或SEQ IDNO：2所代表的序列与公共数据库如MIPS(http://mips.gsf.de/)、GenBank(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Genbank/index.html)或EMBL核苷酸数据库(http://www.ebi.ac.uk/embl/index.html)中可用的的序列进行比较，使用本领域公知的序列比对或比较算法，如GAP(Needleman和Wunsch，J.Mol.Biol.48；443-453(1970))、BESTFIT(使用Smith和Waterman的局部同源性算法(Advances in Applied Mathematics 2；482-489(1981)))、BLAST(Altschul，S.F.，Gish，W.，Miller，W.，Myers，E.W.&Lipman，D.J.，J.Mol.Biol.215：403-410(1990))、FASTA和TFASTA(W.R.Pearson和D.J.Lipman Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85：2444-2448(1988))，或使用例如VNTI AlignX多重比对程序，基于修改的clustal W算法(InforMax，Bethesda，MD，http://www.informaxinc.com)，采用缺省设置，空位开放罚分为10且空位延伸为0.05。执行BLAST分析的软件可从生物技术信息国家中心(NCBI)公开地获得。下面所述同源物使用BLAST缺省参数(带有空位开放罚分为11以及空位延伸为1)鉴定，优选此分析中采用全长序列。
落入“HKT或其同源物”定义的多肽的实例包括两个赤桉同源物(SEQ ID NO：16，GenBank登录号AAF97728和SEQ ID NO：18，GenBank登录号AAD53890)；来自冰叶日中花的两个同源物(SEQ ID NO：14，GenBank登录号AAK52962和SEQ ID NO：12，GenBank登录号AAO73474)。适用于实施本发明方法的其他同源物包括GenBank登录号AAG37274(OsHKT1，SEQ ID NO：20)、BAB61791(OsHKT2，SEQ ID NO：22)、CAD37187(OsHKT3，SEQ ID NO：24)、CAD37183(OsHKT4，SEQ IDNO：26)、CAD37185(OsHKT6，SEQ ID NO：28)、CAD37197(OsHKT7，SEQ ID NO：30)、BAB93392(OsHKT8，SEQ ID NO：32)和CAD37199(OsHKT9，SEQ ID NO：34)所代表的稻同源物以及小麦同源物(GenBank登录号AAA52749，SEQ ID NO：36)。不过可以预期，与SEQ ID NO：2序列同一性低于35％的HKT同源物仍可以适用于本发明的方法，这类蛋白质的实例为海滨碱蓬(Suaeda maritima)同源物(SEQ ID NO：38，GenBank登录号AY530754)、或非植物同源物如酵母TRK1(SEQ ID NO：40，GenBank登录号NP_012406)或TRK2(SEQ ID NO：42，GenBank登录号CAA82128)或葡萄汁酵母(Sacharomyces uvarum)TRK1(GenBank登录号JU0466或AAA34661)。
表1列举了来自其他生物的HKT蛋白和同源物、蛋白质长度及其与SEQ ID NO：2的序列同一性。
表1
蛋白质序列 长度aa 与AAF68393-AtHKT1的同一性％
 SEQ ID NO：2  AAF68393-AtHKT1     506     100.0
 SEQ ID NO：12  AAO73474-McHKT2     543     43.2
 SEQ ID NO：14  AAK52962-McHKT1     505     43.0
 SEQ ID NO：16  AAF97728-EcHKT1     550     46.0
 SEQ ID NO：18  AAD53890-EcHKT2     549     45.5
 SEQ ID NO：36  AAA52749-TaHKT1     533     36.9
 SEQ ID NO：20  AAG37274-OsHKT1     530     36.9
 SEQ ID NO：22  BAB61791-OsHKT2     530     37.0
 SEQ ID NO：24  CAD37187-OsHKT3     509     35.1
 SEQ ID NO：26  CAD37183-OsHKT4     552     37.1
 SEQ ID NO：28  CAD37185-OsHKT6     531     43.1
 SEQ ID NO：30  CAD37197-OsHKT7     500     42.2
 SEQ ID NO：32  BAB93392-OsHKT8     554     42.0
 SEQ ID NO：34  CAD37199-OsHKT9     509     35.1
 SEQ ID NO：38  AY530754-SmHKT1     485     33.5
 SEQ ID NO：40  NP_012406-ScTRK1     1235     11.3
 SEQ ID NO：42  CAA82128-ScTRK2   889     13.9
 SEQ ID NO：44  JU0466-SuTRK1   1241     9.7
At，拟南芥；Mc，冰叶日中花；Ec，，赤桉；Ta，小麦(Triticum aestivum)；
Os，稻；Sc，酿酒酵母；Sm，海滨碱蓬；Su，葡萄汁酵母。
尽管看起来与SEQ ID NO：2的序列同源性相对低(低至大约35％)，HTK蛋白在结构上高度保守，全长蛋白质具有四个“跨膜结构域-孔结构域-跨膜结构域”(MPM)单位，并且优选在第4个孔形成结构域中包含相应于EVISAYGNVGFTTGY(SEQ ID NO：8)的共有序列，其中黑体显示的残基总是保守，而其他残基可以变化。优选地，第4个孔形成结构域中的共有序列相应于SEQ ID NO：9。更优选地，第4个孔形成结构域中的共有序列相应于E(V，I)(I，V)SA(Y，F)GNVG(F，L，Y)(T，S)(T，L，V)GY。可选地，可用于本发明的HKT蛋白在第4个孔形成结构域中包含SA(Y，F)GN序列和DP(I，L)N(Y，F，L)序列。此外，当比较不同来源的HKT序列时，贯穿整个序列都可以鉴定到保守氨基酸(图2，并不表示限制性的HKT蛋白列表)，而且不同物种之间第4个MPM单位中的序列同一性高达70％。因此可以容易地在其他植物物种中找到HKT基因。因此应当理解，术语“HKT多肽或其同源物”并不局限于SEQ ID NO：2所代表的序列或者上文所列的SEQ ID NO：12至36，相反，满足具有HKT活性、具有如上文所列的HKT拓扑学且与SEQ ID NO：2具有至少35％序列同一性标准的任何多肽都可以适用于本发明的方法。不过，正如上文所指出的那样，可以预期具有上述HKT拓扑学但与SEQ ID NO：2具有低于35％序列同一性的蛋白质仍然可以用于本发明的方法。
编码HKT多肽或其同源物的核酸可以是任何天然或合成的核酸。如上文所定义的HKT多肽或其同源物由HKT核酸/基因编码。因此如本文所定义的术语“HKT核酸/基因”是编码如上文所定义的HKT多肽或其同源物的任何核酸/基因。HKT核酸的实例包括编码SEQ ID NO：2的那些核酸以及SEQ ID NO：1所代表的序列，或SEQ ID NO：12至36(GenBank登录号为AAF97728、AAD53890、AAK52962、AAO73474、AAG37274、BAB61791、CAD37187、CAD37183、CAD37185、CAD37197、BAB93392、CAD37199或AAA52749)所代表的蛋白质的编码核酸。不过，具有上述HKT拓扑学但与SEQ ID NO：2具有低于35％序列同一性的蛋白质的编码核酸仍然可以用于本发明的方法；实例包括SEQ ID NO：38至44。HKT核自基因及其功能性变体可适用于实施本发明的方法。功能性变体HKT核酸/基因包括HKT核酸/基因的部分和/或能够与HKT核酸/基因杂交的核酸。就功能性变体而言的术语“功能性”是指编码多肽的变体(即部分或杂交序列)，所述多肽具有HKT活性且包含四个单位的跨膜结构域-孔形成结构域-跨膜结构域，其中第4个孔形成结构域优选包含相应于EVISAYGNVGFTTGY(SEQ ID NO：8)的共有序列，其中黑体显示的残基总是保守的，而其他残基可以变化。优选地，第4个孔形成结构域中的共有序列相应于SEQ ID NO：9。更优选地，第4个孔形成结构域中的共有序列相应于E(V，I)(I，V)SA(Y，F)GNVG(F，L，Y)(T，S)(T，L，V)GY。可选地，变体HKT蛋白在第4个孔形成结构域中可以包含SA(Y，F)GN序列和DP(I，L)N(Y，F，L)序列。
本文定义的术语“部分”指包括至少80个或以上核苷酸的DNA片段，优选至少330个核苷酸，该部分编码具有HKT活性的多肽，且该多肽包含至少一个单位的跨膜结构域-孔形成结构域-跨膜结构域。可以，例如，通过在HKT核酸中产生一个或多个缺失来制备部分。部分可以以分离的形式应用，或者它们可以与其他编码(或非编码)序列融合以，例如，产生组合数种活性的蛋白质，其中之一是HKT活性，例如阳离子转运活性。当与其他编码序列融合时，翻译产生的多肽产物可能大于预测的HKT片断。优选地，功能性部分是由SEQ ID NO：1所代表的核酸的部分，或上述定义蛋白质的编码核酸的部分，并且该部分编码具有HKT活性的多肽。
另一类变体HKT是在降低的严格条件下，优选在严格条件下能够与上文所定义的HKT核酸/基因杂交的核酸，该杂交序列编码具有HKT活性的多肽，且该多肽包含至少一个单位的跨膜结构域-孔形成结构域-跨膜结构域。杂交序列长度优选至少80核苷酸，更优选至少330个核苷酸。优选地，杂交序列能与由SEQ ID NO：1所代表的核酸杂交，或与上文所定义蛋白质的编码核酸，例如SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：12至SEQ IDNO：36所代表蛋白质的编码核酸杂交。
本文定义的术语“杂交”指其中基本同源互补的核酸序列彼此退火的过程，从而一种核酸物质的有义链将与另一种核酸物质的反义链退火。杂交过程能够完全在溶液中发生，即互补的核酸都在溶液中。杂交过程也可以在这种情况下进行，即互补核酸之一固定于基质上，如磁珠、琼脂糖珠或任何其他树脂上。此外，杂交过程也可以如此进行，即其中互补核酸之一固定在固相支持物如硝酸纤维素或尼龙膜上，或者如用照相平板印刷固定在硅质玻璃支持物上(后者称之为核酸阵列或微阵列，或称之为核酸芯片)。为了使杂交发生，通常使核酸分子热变性或化学变性，以使双链解链成两条单链，和/或除去单链核酸中的发夹结构或其他二级结构。杂交的严格性受诸如温度、盐浓度、离子强度和杂交缓冲液组成等条件的影响。
在核酸杂交实验(如Southern和Northern杂交)的情况中，“严格杂交条件”和“严格杂交洗涤条件”取决于序列，并且在不同的环境参数下不同。熟练的技术人员知晓多种参数可以在杂交和洗涤过程中进行改变，从而保持或者改变严格条件。
Tm是在确定的离子强度和pH值下，50％的靶序列与完全匹配的探针杂交的温度。Tm依赖于溶液条件和探针的碱基组成及长度。例如，较长的序列在较高温度下特异性杂交。在低于Tm值16℃到32℃获得最大杂交率。在杂交溶液中存在一价阳离子会减少两核酸链之间的静电排斥作用，从而促进杂合体形成；当钠浓度高达0.4M时，这一作用明显。每个百分点的甲酰胺可使DNA-DNA和DNA-RNA双链体的解链温度降低0.6-0.7℃，加入50％甲酰胺使杂交在30-45℃完成，尽管这将降低杂交率。碱基对错配降低杂交率和双链体的热稳定性。平均而言，对于大的探针，每个百分点碱基错配使Tm值下降约1℃。Tm值可以用取决于杂合体类型的下列方程式计算：
·DNA-DNA杂合体(Meinkoth和Wahl，Anal.Biochem.，138：267-284，1984)：
Tm＝81.5℃+16.6×log[Na+]a+0.41×％[G/Cb]-500×[Lc]-1-0.61×％甲酰胺
·DNA-RNA或RNA-RNA杂合体：
Tm＝79.8+18.5(log10[Na+]a)+0.58(％G/Cb)+11.8(％G/Cb)2-820/Lc
·寡DNA或寡RNAd杂合体：
＜20个核苷酸：Tm＝2(ln)
20-35个核苷酸：Tm＝22+1.46(ln)
a或对于其他一价阳离子，但是仅在0.01-0.4M范围内精确。
b仅对于在30％到75％范围内的％GC精确。
cL＝双链体的碱基对长度。
d寡，寡核苷酸；ln，引物的有效长度＝2×(G/C数)+(A/T数)。
注释：对于每1％甲酰胺，Tm值降低约0.6-0.7℃，而6M尿素的存在可使Tm值降低约30℃。
杂交特异性通常是杂交后洗涤的函数。为了除去非特异杂交产生的背景，用稀释的盐溶液洗涤样品。这类洗涤的关键因素包括最终洗涤溶液的离子强度和温度：盐浓度越低、洗涤温度越高，洗涤的严格性就越高。洗涤条件通常在等于或低于杂交严格性条件下进行。一般地，如上设置适用于核酸杂交测定或基因扩增检测操作的严格条件。也可以选择更高或更低的严格性条件。通常，对于在确定的离子强度和pH值下的特定序列，选择比热解链温度(Tm)低约50℃的低严格条件。中等严格条件是温度比Tm低20℃，高严格条件是温度比Tm低10℃。例如，严格条件是至少像如条件A-L一样严格；降低的严格条件是至少像如条件M-R一样严格。可以通过许多已知技术中的任一来控制非特异性结合，所述技术诸如，例如用含蛋白质的溶液封闭膜，在杂交缓冲液中添加异源RNA、DNA和SDS，以及用RNA酶处理。
在下表2中列出了杂交和洗涤条件的实例。
表2：杂交和洗涤条件的实例
严格条件 多核苷酸杂合体± 杂合体长度(bp)_ 杂交温度和缓冲液_ 洗涤温度和缓冲液_
A DNA:DNA ＞或等于50  65℃ 1×SSC；或42℃，1×SSC和50％甲酰胺 65℃；0.3×SSC
 B  DNA:DNA ＜50  Tb*；1×SSC Tb*；1×SSC
C DNA:RNA ＞或等于50  67℃ 1×SSC；或45℃，1×SSC和50％甲酰胺 67℃；0.3×SSC
 D  DNA:RNA ＜50  Td*；1×SSC Td*；1×SSC
E RNA:RNA ＞或等于50  70℃ 1×SSC；或50℃，1×SSC和50％甲酰胺 70℃；0.3×SSC
 F  RNA:RNA ＜50  Tf*；1×SSC Tf*；1×SSC
G DNA:DNA ＞或等于50  65℃ 4×SSC；或45℃，4×SSC和50％甲酰胺 65℃；1×SSC
 H  DNA:DNA ＜50  Th*；4×SSC Th*；4×SSC
I DNA:RNA ＞或等于50  67℃ 4×SSC；或45℃，4×SSC和50％甲酰胺 67℃；1×SSC
 J  DNA:RNA ＜50  Tj*；4×SSC Tj*；4×SSC
K RNA:RNA ＞或等于50  70℃ 4×SSC；或40℃，6×SSC和50％甲酰胺 67℃；1×SSC
 L  RNA:RNA ＜50  Tl*；2×SSC Tl*；2×SSC
M DNA:DNA ＞或等于50  50℃ 4×SSC；或40℃，6×SSC和50％甲酰胺 50℃；2×SSC
 N  DNA:DNA ＜50  Tn*；6×SSC  Tn*；6×SSC
O DNA:RNA ＞或等于50  55℃ 4×SSC；或42℃，6×SSC和50％甲酰胺 55℃；2×SSC
 P  DNA:RNA ＜50  Tp*；6×SSC  Tp*；6×SSC
Q RNA:RNA ＞或等于50  60℃ 4×SSC；或45℃，6×SSC和50％甲酰胺 60℃.；2×SSC
 R  RNA:RNA ＜50  Tr*；4×SSC  Tr*；4×SSC
_“杂交长度”是杂交核酸的预期长度。当已知序列的核酸杂交时，可以通过比对序列及鉴定本文所述的保守区域来确定杂合体长度。
_在杂交和洗涤缓冲液中，可以用SSPE(1×SSPE是0.15M NaCl，10mM NaH2PO4和1.25mM EDTA，pH7.4)代替SSC(1×SSC是0.15MNaCl和15mM柠檬酸钠)；杂交完成后洗涤15分钟。杂交和洗涤可以另外地包括5×Denhardt′s试剂、0.5-1.0％SDS、100μg/ml变性的片段化的鲑精DNA、0.5％焦磷酸钠和高达50％的甲酰胺。
*Tb-Tr：对于预期长度小于50个碱基对的杂合体，杂交温度应该比杂合体的解链温度Tm低5-10℃；根据上述方程式确定Tm。
±本发明还包括以PNA或修饰的核酸代替任一或多个DNA或RNA杂交配偶体。
为了定义严格性水平，可以便利地参考Sambrook等(2001)的分子克隆：实验室手册，第三版，冷泉港实验室出版，冷泉港，纽约，或者CurrentProtocols in Molecular Biology，John Wiley&Sons，N.Y.(1989)。
例如，在杂交实验中可使用编码SEQ ID NO：2或其同源物的核酸。或者可以利用其片段作为探针。根据待鉴定HKT蛋白的起始序列库，可以选择不同的片段进行杂交。例如，当期望与HKT具有高度序列同一性的有限数量的同源物时，可使用不太保守的片段进行杂交。通过比对SEQID NO：2和其同源物，有可能设计可作为探针进行杂交的等同核酸片段。
在杂交和洗涤之后，可通过放射自显影或通过化学发光、免疫检测、通过荧光或显色检测(使用放射性标记探针的情况下)来检测双链体，这取决于探针标记类型。或者，可进行核糖核酸酶保护测定以检测RNA：RNA杂合体。
HKT核酸或其变体可以来自任何天然或人工的来源。核酸/基因或其变体可以分离自微生物来源，如细菌、酵母或真菌，或分离自植物、藻类或动物(包括人类)。可以通过仔细的人为操作在组成和/或基因组环境方面修饰所述核酸的天然形式。优选植物来源的核酸，无论来源于同一植物物种(例如对于其被引入的物种而言)或来源于不同植物物种。可以从双子叶物种，优选从十字花科(Brassicaceae)，更优选从拟南芥分离所述核酸。更优选地，从拟南芥中分离的HKT核酸表示为SEQ ID NO：1，并且HKT氨基酸序列表示为SEQ ID NO：2。
可以通过引入遗传修饰(优选在HKT基因座)提高HKT多肽或其同源物的活性。本文所定义的基因座意指基因组区，其包括目的基因和编码区上游或下游的10KB。
可以通过任一(或多种)如下方法引入遗传修饰，所述方法包括：TDNA激活、TILLING、定点诱变、同源重组、定向进化或通过在植物中引入和表达编码HKT多肽或其同源物的核酸，条件是每种方法要求认为干预。引入遗传修饰之后的步骤是选择活性增加的HKT多肽，其活性的增加使植物具有改良的生长特性。
T-DNA激活标记(Hayashi等Science(1992)1350-1353)包括将通常含有启动子(也可以是翻译增强子或内含子)的T-DNA插入在目的基因的基因组区或基因编码区上游或下游10KB，从而在构型上使启动子能够指导靶向基因的表达。通常破坏天然启动子对靶基因表达的调控，基因由新引入的启动子控制。启动子一般包含于T-DNA中。例如，通过农杆菌(Agrobacterium)感染将此T-DNA随机插入植物基因组并导致在插入T-DNA附近的基因过表达。得到的转基因植物由于引入的启动子附近基因过表达而表现出显性表型。引入的启动子可以是任意能够在期望生物体内(在本案中是植物)指导基因表达的启动子。例如，组成型、组织特异性、细胞类型特异性和诱导型启动子都适用于T-DNA激活。
也可以通过TILLING(定向诱导的基因组局部突变)技术将遗传修饰引入HKT基因座。这是一种诱变技术，用于产生和/或鉴定以及最后分离诱变的能呈现HKT活性的HKT核酸变体。TILLING还允许选择携带此种突变变体的植物。这些突变变体甚至可能比其天然形式基因呈现更高的HKT活性。TILLING结合了高密度诱变和高通量筛选方法。TILLING一般遵循的步骤有：(a)EMS诱变(Redei和Koncz，1992；In：C Koncz，N-HChua，J Schell编辑，Methods in Arabidopsis Research.World Scientific，Singapore，16-82页；Feldmann等，1994；In：EM Meyerowitz，CRSomerville编辑，Arabidopsis.Cold Spring Harbor Laboratory Press，ColdSpring Harbor，NY，137-172页；Lightner和Caspar，1998；In：JMartinez-Zapater，J Salinas编辑，Methods on Molecular Biology，Vol.82.Humana Press，Totowa，NJ，91-104页)；(b)DNA制备和个体合并；(c)目的区域的PCR扩增；(d)变性和退火以形成杂双链体；(e)DHPLC，其中库中存在的杂双链体会在色谱图上检测到额外的峰；(f)突变个体的鉴定；和(g)突变PCR产物的测序。TILLING的方法是本领域内众所周知的(McCallum Nat Biotechnol.2000年4月；18(4)：455-7，Stemple，Nature RevGenet.5，145-50 2004)。
定点诱变可用于产生HKT核酸或其部分的变体，其保留HKT活性，例如阳离子转运活性。可以通过若干方法来完成定点诱变，最常见的是基于PCR的方法(例如见Ausubel等，current protocols in molecular biology.Wiley编辑http://www.4ulr.com/products/currentprotocols/index.html)。
定向进化也可以用于产生编码HKT多肽或同源物的HKT核酸分子的功能性变体，或其具有增加的上述生物活性的部分的变体。定向进化包括DNA改组的重复，继之以适当筛选和/或选择(Castle等，(2004)Science304(5674)：1151-4；美国专利5,811,238和6,395,547)。
TDNA激活、TILLING、定点诱变和定向进化是能产生新的HKT等位基因和变体的技术的实例，所述HKT等位基因和变体保留HKT功能，从而可用于本发明的方法。
同源重组允许向基因组中的指定选择位置引入所选的核酸。同源重组是生物科学中常规使用的标准技术，其用于低等有机体如酵母或小立碗藓(physcomitrella)。在植物中执行同源重组的方法已经不仅在模式植物中描述(Offringa等1990 EMBO J.9：3077-84)，而且也在作物植物如稻中描述(Terada等(2002)Nature Biotechnol.20，1030-1034；或Iida和Terada(2004)：Curr Opin Biotechnol.15：132-8)。所靶向的核酸(其可以是上文中定义的HKT核酸分子或其变体)不需靶向HKT基因座，但是可以被引入例如高表达的区域。所靶向的核酸可以是改良的等位基因，其用于替换内源基因或额外引入到内源基因中。
根据本发明的优选实施方案，通过在植物中引入和表达分离的编码HKT多肽或其同源物的核酸，可以改良植物的生长特性。
引入遗传修饰(在本案中不需引入HKT基因座中)的优选方法是在植物中引入和表达编码HKT多肽或其同源物的核酸。上文所述的HKT多肽或其同源物具有HKT活性和四个单位的跨膜结构域-孔形成结构域-跨膜结构域。所述HKT多肽按照增加的偏好次序与SEQ ID NO：2所代表的氨基酸序列具有至少35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、48％、49％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％的序列同一性，或如SEQ ID NO：2所示。
蛋白质的“同源物”包括肽、寡肽、多肽、蛋白质和酶，其相对于所讨论的未修饰蛋白质具有氨基酸取代、缺失和/或插入，并且具有与衍生其的未修饰形式蛋白质相似的生物学活性和功能活性。
术语“同源物”也包括两种具体形式的同源物，其包括直系同源序列和旁系同源序列，其涵盖用于描述基因祖先关系的进化概念。术语“旁系同源”涉及在物种基因组内部的基因复制产生的旁系基因。术语“直系同源”涉及由于物种形成产生的不同有机体中的同源基因。
例如，可以通过所谓的交互(reciprocal)blast搜索容易地找到例如在单子叶植物种中的直系同源物。这可以通过使用所研究序列(例如来自拟南芥的SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2)针对任何序列数据库——如可在http://www.ncbi.nlm.nih.gov找到的公共可获得的NCBI数据库——进行一次blast而实现。例如，如果寻找稻中的直系同源物，对研究序列的blast应该在可从NCBI获得的针对日本晴稻的28,469个全长cDNA克隆中进行。当从核苷酸开始时可使用具有标准缺省值的BLASTn或tBLASTX，或当从蛋白质开始时可使用具有标准缺省值的BLASTP或TBLASTN。可以过滤Blast结果。接着使用过滤结果或者未过滤结果中的全长序列针对所研究序列源自的生物体如拟南芥的序列进行反向blast(二次blast)。然后比较第一次和第二次blast的结果。例如，当所述二次blast结果给出与查询的HKT核酸或HKT多肽具有最高相似性序列时，则找到了旁系同源物。如果一次blast结果之一来自相同的生物体，则找到了旁系同源物。认为这样的旁系同源物也是HKT同源物，条件是此同源物具有HKT活性，并包含四个单位的跨膜结构域-孔形成结构域-跨膜结构域，优选地还包含上文所定义的保守序列。大家族的情况下可以使用Clustal W，继之以邻近连接树来辅助聚类可视化。
同源物可能是蛋白质的“取代变体”的形式，即在氨基酸序列中至少有一个残基被去除，并且在这一位置插入不同的残基。氨基酸取代通常是单个残基的取代，但是视施加于多肽的功能性限制而定也可能是成簇取代；插入通常在1到10个氨基酸残基数量级。优选地，氨基酸取代包括保守的氨基酸取代(表3)。为了产生这样的同源物，蛋白质的氨基酸可以由具有相似性质(如相似的疏水性、亲水性、抗原性、形成或打破α螺旋结构或β片层结构的倾向)的其他氨基酸替换。保守取代表是本领域内众所周知的(例如见Creighton(1984)Proteins.W.H.Freeman and Company)。
表3：保守氨基酸取代的实例
残基 保守取代 残基 保守取代
 Ala  Ser  Leu  Ile、Val
 Arg  Lys  Lys  Arg、Gln
 Asn  Gln、His  Met  Leu、Ile
 Asp  Glu  Phe  Met、Leu、Tyr
 Gln  Asn  Ser  Thr、Gly
 Cys  Ser  Thr  Ser、Val
 Glu  Asp  Trp  Tyr
 Gly  Pro  Tyr  Trp、Phe
 His  Asn、Gln  Val  Ile、Leu
 Ile  Leu、Val
在上述氨基酸性质不太关键的情况下，可以进行不太保守的取代。
同源物也可能是蛋白质的“插入变体”的形式，即在蛋白质的预定位置引入一个或多个氨基酸残基。插入可以包括氨基端和/或羧基端的融合，以及单个或多个氨基酸的内部序列插入。一般氨基酸序列内部的插入将小于氨基或羧基端的融合，数量级在约1到10个残基。氨基或羧基端融合蛋白质或肽的实例包括在酵母双杂交系统中应用的转录激活因子的结合结构域或激活结构域、噬菌体外壳蛋白质、(组氨酸)6标签、谷胱甘肽S-转移酶标签、蛋白质A、麦芽糖结合蛋白、二氢叶酸还原酶、Tag·100表位、c-myc表位、FLAG_表位、laeZ、CMP(钙调蛋白结合肽)、HA表位、蛋白质C表位和VSV表位。
蛋白质“缺失变体”形式的同源物特征在于从蛋白质中除去一个或多个氨基酸。
可通过本领域内众所周知的肽合成技术，如固相肽合成法等，或通过重组DNA操作容易地得到蛋白质的氨基酸变体。用于产生蛋白质的取代、插入或缺失变体的DNA序列操作方法是本领域众所周知的。例如，本领域的技术人员熟知在DNA预定位置产生取代突变的技术，其包括M13诱变、T7-Gen体外诱变(USB，Cleveland，OH)、QuickChange定点诱变(Stratagene，San Diego，CA)、PCR介导的定点诱变或其他定点诱变方案。
HKT多肽或其同源物可以是衍生物。“衍生物”包括肽、寡肽、多肽、蛋白质和酶，与天然产生形式的蛋白质，例如SEQ ID NO：2所代表的氨基酸序列相比，其可以包括取代、缺失或添加的天然的和非天然产生的氨基酸残基。蛋白质的“衍生物”包括肽、寡肽、多肽、蛋白质和酶，与天然产生形式多肽的氨基酸序列相比，其可以包括天然产生的改变的、糖基化、酰基化的氨基酸残基或非天然产生的氨基酸残基。衍生物还可以包括相对于其源自的氨基酸序列的一个或多个非氨基酸取代基，例如共价或非共价地结合于氨基酸序列的报告分子或其他配体，例如与之结合有利于衍生物检测的报告分子，以及相对于天然存在蛋白质的氨基酸序列而言非天然产生的氨基酸残基。
HKT多肽或其同源物可能由HKT核酸/基因的可选剪接变体编码。本文所用的术语“可性剪接变体”包括其中选择的内含子和/或外显子已被切除、替换或添加的核酸序列的变体。这样的变体保留了蛋白质的生物活性，这可能通过选择性地保留蛋白质的功能性片段来实现。这样的剪接变体可以是天然的或人工的。产生这类剪接变体的方法是本领域内众所周知的。优选的剪接变体是衍生自SEQ ID NO：3所代表核酸的剪接变体。更优选编码多肽的剪接变体，所述多肽具有HKT活性，并包含至少一个、优选四个单位的跨膜结构域-孔形成结构域-跨膜结构域。优选的剪接变体如SEQ ID NO：1所示。
同源物还可以由HKT多肽或其同源物的编码核酸的等位基因变体所编码，优选由SEQ ID NO：1所代表核酸的等位基因变体编码。更优选由等位基因变体编码的多肽具有HKT活性，并包含至少一个、优选四个单位的跨膜结构域-孔形成结构域-跨膜结构域。同源物还可以由SEQ ID NO：11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、35或37所代表核酸的等位基因变体编码。等位基因变体天然存在，并且这些天然等位基因的用途包含于本发明的方法中。等位基因变体包括单核苷酸多态性(SNP)，以及小型插入/缺失多态性(INDEL)。INDEL的大小通常小于100bp。SNP和INDEL在大多数生物体天然存在的多态性品系中形成最大的一组序列变体。
根据本发明的优选方面，HKT核酸分子或其变体的表达有所提高或增加。获得提高或增加的基因或基因产物表达的方法在本领域内有充分的记录，其包括，例如由适当的启动子驱动的过表达、转录增强子或翻译增强子的使用。可以将用作启动子或增强子元件的分离的核酸引入到非异源形式多核苷酸的适当位置(一般是上游)，从而上调HKT核酸或其变体的表达。例如，可以通过突变、缺失和/或取代，在体内改变内源启动子(见Kmiec，美国专利No.5,565,350；Zarling等，PCT/US93/03868)，或者将分离的启动子在本发明基因的适当方向和距离引入植物细胞中，从而控制基因的表达。
如果期望多肽表达，通常要在多肽编码区域的3’末端包括多腺苷酸化区域。多腺苷酸化区域可以源自天然基因、多种其他植物基因或T-DNA。例如，加入的3’末端序列可以源自胭脂碱合酶或章鱼碱合酶基因、或可选地源自其他植物基因、或次优选地源自任何其他真核基因。
也可以在5’非翻译区或部分编码序列的编码序列中加入内含子序列，来增加在胞质中累积的成熟信使的数量。已显示，在植物和动物表达构建体的转录单位中包含的可剪接的内含子均可以在mRNA和蛋白质水平使基因表达提高至高达1000倍(Buchman和Berg，Mol.Cell biol.8：4395-4405(1988)；Callis等，Genes Dev.1：1183-1200(1987))。通常这种内含子被放置在转录单位5’末端附近时，其提高基因表达的作用达到最大。玉米内含子Adh1-S内含子1、2和6以及Bronze-1内含子的使用是本领域公知的。通常见The Maize Handbook，第116章，Freeling和Walbot编辑，Springer，N.Y.(1994)。
本发明还提供遗传构建体和载体，以促进用于本发明方法中的核苷酸序列的引入和/或表达。
因此，提供的基因构建体包含：
(i)HKT核酸分子或其功能性变体；
(ii)一个或多个能驱动(i)中核酸序列表达的控制序列；和任选的
(iii)转录终止序列。
优选的，基因勾践体中所使用的控制序列为种子特异性控制序列。
可以使用本领域技术人员熟知的重组DNA技术构建用于本发明方法的构建体。可以将基因构建体插入载体中，所述载体可商购获得，适合于转化进入植物并在转化的细胞中表达目的基因。
使用包括目的序列(即HKT核酸或其变体)的载体转化植物。将目的序列有效连接于一个或多个控制序列(至少连接于启动子)。术语“调控元件”、“控制序列”和“启动子”在文中都可互换使用，从广义上是指能够影响其连接序列表达的调控核酸序列。上述术语包括源自典型真核生物基因组基因(包括具有或没有CCAAT盒序列的TATA盒，其对于精确的转录起始是必需的)的转录调控序列，以及另外的调控元件(即上游激活序列、增强子和沉默子)，其通过应答发育刺激和/或外部刺激或通过组织特异性的方式改变基因表达。该术语还包括了经典原核生物基因的转录调控序列，在此情况下可以包括-35盒序列和/或-10盒转录调控序列。术语“调控元件”也包含合成的融合分子或衍生物，其赋予、激活或提高细胞、组织或器官中核酸分子的表达。本文所用的术语“有效连接”指在启动子序列和目的基因之间的功能性连接，以使启动子序列能起始目的基因的转录。
有利地，可以使用任意类型的启动子驱动核酸序列的表达。启动子可以是诱导型启动子，即应答发育、化学、环境或物理刺激，具有诱导的或增加的转录起始。诱导型启动子的实例是胁迫诱导型启动子。此外，或者可选地，启动子可以是组成型启动子。本文所用术语“组成型”是指在至少一种组织或器官中最显著表达、并且在植物的任何生命阶段最显著表达的启动子。优选的组成型启动子在整个植物中最显著表达。另外或备选的，所述启动子可以是组织特异性的启动子，即能够在某些组织，如在叶、根、种子等组织中优先地起始转录。
优选的，HKT核酸或其变体有效的连接于种子特异性启动子。还优选种子特异性启动子为胚特异性及糊粉特异性，并且主要在胚胎发生晚期有活性。本文所用术语“种子特异性”是指在植物种子中最显著表达的启动子。优选地，所述启动子在胚和/或糊粉层中最显著表达。更优选种子特异性启动子的表达模式与WSI18启动子相当。更优选种子特异性启动子为稻WSI18启动子(WO2004/070039)，如SEQ ID NO：45所示(对应于SEQID NO：4的核苷酸1至1828)。稻WSI18启动子应答于脱落酸(ABA)，在包含ABA如种子干燥的条件下高度诱导。因此，优选的用于本发明的启动子还可以是由ABA和/或胁迫条件如干旱所诱导的任何其他启动子。应该明确的是本发明的应用不限于SEQ ID NO：1代表的HKT核酸，也不限于由WSI18启动子驱动时HKT核酸的表达。应该明确的是本发明的应用并不限于SEQ ID NO：1代表的HKT核酸，也不限于由WSI18启动子驱动的HKT核酸的表达。其他可用于驱动HKT核酸表达的种子特异性启动子的实例显示于以下表4中。
表4：用于实施本发明的种子特异性启动子的实例
基因来源 表达模式 参考文献
种子特异性基因 种子 Simon等，Plant Mol.Biol.5：191，1985；Scofield等，J.Biol.Chem.262：12202，1987；Baszczynski等，Plant Mol.Biol.14：633，1990.
巴西果白蛋白 种子 Pearson等，Plant Mol.Biol.18：235-245，1992.
豆球蛋白 种子 Ellis等，Plant Mol.Biol.10：203-214，1988.
谷蛋白(稻) 种子 Takaiwa等，Mol.Gen.Genet.208：15-22，1986；Takaiwa等，FEBS Letts.221：43-47，1987.
玉米醇溶蛋白 种子 Matzke等Plant Mol Biol，14(3)：323-321990
 napA 种子 Stalberg等，Planta 199：515-519，1996.
小麦LMW和 胚乳 Mol Gen Genet 216：81-90，1989；NAR
HMW麦谷蛋白-1 17：461-2，1989
小麦SPA 种子 Albani等，Plant Cell，9：171-184，1997
小麦α、β、γ-小麦醇溶蛋白 胚乳 EMBO J.3：1409-15，1984
大麦Itr1启动子 胚乳
大麦B1、C、D大麦醇溶蛋白 胚乳 Theor Appl Gen 98：1253-62，1999；Plant J4：343-55，1993；Mol Gen Genet250：750-60，1996
大麦DOF 胚乳 Mena等，The Plant Journal，116(1)：53-62，1998
blz2 胚乳 EP99106056.7
合成启动子 胚乳 Vicente-Carbajosa等，Plant J.13：629-640，1998.
稻醇溶谷蛋白NRP33 胚乳 Wu等，Plant Cell Physiology 39(8)885-889，1998
稻α-球蛋白Glb-1 胚乳 Wu等，Plant Cell Physiology 39(8)885-889，1998
rice OSH1 胚 Sato等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，93：8117-8122，1996
稻α-球蛋白REB/OHP-1 胚乳 Nakase等Plant Mol.Biol.33：513-522，1997
稻ADP-葡萄糖PP 胚乳 Trans Res 6：157-68，1997
玉米ESR基因家族 胚乳 Plant J 12：235-46，1997
高粱γ-高梁醇溶蛋白 胚乳 PMB 32：1029-35，1996
KNOX 胚 Postma-Haarsma等，Plant Mol.Biol.
39：257-71，1999
稻油质蛋白 胚和糊粉 Wu等，J.Biochem.，123：386，1998
向日葵油质蛋白 种子(胚和干种子) Cummins等，Plant Mol.Biol.19：873-876，1992
PRO0117，推定的稻40S核糖体蛋白 胚乳中弱表达 WO2004/070039
PRO0135，稻α-球蛋白 胚乳中强表达
PRO0136，稻丙氨酸转氨酶 胚乳中弱表达
PRO0147，胰蛋白酶抑制剂ITR1(大麦) 胚乳中弱表达
PRO0175，稻RAB21 胚+胁迫 WO2004/070039
PRO0218，稻油质蛋白18kd 糊粉+胚
任选的，还可以在引入植物的构建体中使用一个或多个终止子序列。术语“终止子”包括控制序列，其为位于转录单位末端的DNA序列，传递信号引发原始转录物的3’加工和多腺苷酸化以及转录的终止。另外的调控元件可以包括转录和翻译的增强子。本领域的那些技术人员将知道适合用于实施本发明的终止子和增强子的序列。这种序列为本领域技术人员所公知，或者可以容易地获得。
本发明的遗传构建体还可以包括复制起点序列，这是在特定细胞类型中维持和/或复制所必需的。一个实例是当需要将遗传构建体作为附加型遗传元件(如质粒或粘粒分子)在细菌细胞中维持时。优选的复制起点包括(但不限于)f1-ori和colE1。
遗传构建体可以任选地包括可选择的标记基因。如本文所用，术语“可选择的标记基因”包括赋予细胞表型的任意基因，该基因在细胞中的表达有利于鉴定和/或选择经本发明的核酸构建体转染或转化的细胞。适当的标记可以选自带有抗生素或除草剂抗性、引入新的代谢性状或允许可视选择的标记。可选择的标记基因的实例包括赋予抗生素抗性的基因(例如磷酸化新霉素和卡那霉素的npt II，或磷酸化潮霉素的hpt)，赋予除草剂抗性的基因(例如bar提供对Basta的抗性；aroA或gox提供对草甘膦的抗性)，或提供代谢特性的基因(如允许植物使用甘露糖作为唯一碳源的manA)。可视的标记致使形成颜色(例如β-葡糖醛酸糖苷酶，GUS)、发光(例如荧光素酶)或荧光(绿色荧光蛋白GFP及其衍生物)。
在优选的实施方案中，上文提及的遗传构建体含有HKT核酸，其以有义方向偶联于启动子，启动子优选为种子特异性启动子，如稻WSI18启动子。因此，本发明另一方面为载体构建体，其携带与SEQ ID NO 4基本上相似的表达盒，包含WSI18启动子，稻HKT基因和T-玉米醇溶蛋白+T-核酮糖二磷酸羧化酶δGA(T-rubisco deltaGA)转录终止序列。与SEQID NO 4基本上相似的序列包含第一核酸序列，其编码与SEQ ID NO 2同源的蛋白质或者与SEQ ID NO 1杂交，所述第一核酸有效连接于WSI18启动子或具有相似表达模式的启动子，另外地或可选地，所述第一核酸连接于转录终止序列。
本发明还包括由本发明方法可获得的植物或部分(包括植物细胞)。本发明因此提供可由本发明方法获得的植物或其部分(包括植物细胞)，该植物中引入了分离的HKT核酸或其变体，或该植物中，优选在HKT基因座，引入了遗传修饰。
本发明还提供产生具有改良生长特性的转基因植物的方法，其包括在植物中引入和表达分离的HKT核酸或其变体。
更具体地，本发明提供产生具有改良生长特性的转基因植物的方法，该方法包括：
(i)向植物或植物细胞中引入分离的HKT核酸或其变体；和
(ii)在促进植物生长和发育的条件下培养植物细胞。
可以将核酸直接引入植物细胞或植物本身(包括引入组织、器官或植物的任何其他部分)。根据本发明的优选方面，优选通过转化将核酸引入植物。
本文所提及的术语“转化”包含将外源多核苷酸转移进宿主细胞，不考虑转移所用的方法。无论是通过器官发生还是胚胎发生，能够随即克隆增殖的植物组织都可以使用本发明的遗传构建体转化并从其再生整个植物。具体的组织选择将因可提供和最适于转化的具体物种的克隆增殖系统而改变。示例性的靶组织包括叶盘、花粉、胚、子叶、下胚轴、雌配子、愈伤组织、既有的分生组织(例如顶端分生组织、腋芽和根分生组织)以及诱导的分生组织(例如子叶分生组织和下胚轴分生组织)。可以将多核苷酸瞬时地或稳定地引入宿主细胞，并且可以保持非整合的状态，例如作为质粒。备选地，其可以整合进入宿主基因组。得到的转化植物细胞可以接着用于以本领域技术人员熟知的方式再生为转化的植物。
植物物种的转化目前是一种相当常规的技术。有利地，可以使用几种转化方法的任一向适当的祖先细胞引入目的基因。转化方法包括用脂质体、电穿孔、增强游离DNA摄取的化学物质、直接向植物注射DNA、粒子枪轰击、用病毒或花粉转化和显微投影(microprojection)。方法可以选自用于原生质体的钙/聚乙二醇方法(Krens等，1882，Nature 296，72-74；Negrutiu等，June 1987，Plant Mol.Biol.8，363-373)；原生质体的电穿孔法(Shillito等，1985 Bio/Technol 3，1099-1102)；植物材料的显微注射(Crossway等，1986，Mol.Gen Genet 202，179-185)；DNA或RNA包被的粒子轰击(Klein等，1987，Nature 327，70)；(非整合型)病毒感染等等。优选使用任何熟知的稻转化方法通过农杆菌介导的转化的产生表达HTK蛋白的转基因稻类植物，例如在任何以下文献中描述的方法：公开的欧洲专利申请EP 1198985 A1，Aldemita和Hodges(Planta，199，612-617，1996)；Chan等(Plant Mol.Biol.22(3)491-506，1993)，Hiei等(Plant J.6(2)271-282，1994)，其公开的内容如同其陈述的全部内容那样并入本文作为参考。至于谷物转化优选的方法如Ishida等(Nat.Biotechnol.1996，14(6)：745-50)或Frame等(Plant Physiol.2002，129(1)：13-22)中所述，其公开的内容如同其陈述的全部内容那样并入本文作为参考。
通常在转化以后，选出存在一个或多个标记的植物细胞或细胞组，所述标记由与目的基因共转移的植物可表达基因编码，继之转化的材料再生成整个植物。
DNA转移和再生之后，可评估推定的转化植物，例如用Southern分析目的基因的存在、拷贝数和/或基因组组成。备选的或额外的，可用Northern和/或Western分析监测新引入基因的表达水平，这两种技术都是本领域内普通技术人员熟知的。从而，将转化的植物细胞培养为成熟的植物可能包括选择和/或再生和/或成长至成熟的步骤。
产生的转化植物可以通过多种方式繁殖，如用克隆繁殖或经典的育种技术。例如，第一代(或T1)转化的植物可自交得到纯合的第二代(或T2)转化体，T2植物进一步通过经典育种技术繁殖。
产生的转化生物体可以有多种形式。例如，它们可以是转化细胞和非转化细胞的嵌合体；克隆的转化体(例如经过转化包含表达盒的所有细胞)；转化和非转化组织的嫁接体(例如在植物中，转化的根茎嫁接到非转化的接穗上)。
本发明显然延及由本文所述方法产生的任何植物细胞或植物，以及所有植物的部分和其繁殖体。本发明还涵盖由任意上述方法产生的原代转化或转染的细胞、组织、器官或整个植物的后代，所述后代的唯一要求是与本发明方法产生的亲本呈现同样的基因型和/或表型特性。本发明也包括含有分离的HKT核酸或其变体的宿主细胞。本发明优选的宿主细胞是植物细胞。本发明也延及植物可收获的部分，例如，但不限于种子、叶、果实、花、茎培养物、根茎、块茎和球茎。此外本发明还涉及由这样的植物的可收获部分直接衍生的产品，如干粒或干粉、油、脂肪和脂肪酸、淀粉或蛋白质。
本发明还包括HKT核酸或其变体的用途以及HKT多肽或其同源物的用途。
一种这样的用途涉及改良植物的生长特性，特别是改良产率，尤其是种子产率。种子产率可能包括如下的一项或多项：增加的(饱满)种子数、增加的种子重量、增加的收获指数、增加的千粒重、种子饱满度等等。
可以在育种程序中使用HKT核酸或其变体，或者HKT多肽或其同源物，其中鉴定可以遗传地连接于HKT基因或其变体的DNA标记。可以使用HKT或其变体，或者HKT多肽或其同源物界定分子标记。接着可以将此DNA或蛋白质标记在育种程序中使用，以选择具有改良的生长特性的植物。例如，HKT基因或其变体可以是由SEQ ID NO：1所代表的核酸，或者是编码上述任何同源物的核酸。
HKT等位基因变体也可以用于标记辅助的育种程序。这类育种程序有时需要使用，例如EMS诱变，通过植物诱变处理引入等位基因变体；备选的，此程序可以以收集无意产生的所谓“天然”起源的等位基因变体开始。然后通过例如PCR鉴定等位基因变体。随后是选择步骤用以选择所讨论序列的较好等位基因变体，所述等位基因变体赋予植物改良的生长特性。一般通过监测含有所研究序列的不同等位基因变体植物的生长行为来进行选择，所述研究序列的不同等位基因变体是例如SEQ ID NO：1或是上述任何植物同源物编码核酸的不同等位基因变体。可以在温室或田地中监测生长行为。更多任选的步骤包括，将经鉴定含有较好等位基因变体的植物与另一植物杂交。例如，可使用这种方法产生目的表型特征的组合。
HKT核酸或其变体还可以作为探针，用于对其为基因一部分的基因进行遗传和物理的作图，以及作为那些基因连锁性状的标记。这些信息可以在植物育种中使用，以得到具有期望表型的品系。HKT核酸或其变体的这类应用仅需要至少10个核苷酸长的一段核酸序列。HKT核酸或其变体也可以用作限制性片段长度多态性(RFLP)标记。可用HKT核酸或其变体探测限制酶切消化的植物基因组DNA的Southern印迹。随后使用计算机程序如MapMaker(Lander等，(1987)Genomics 1，174-181)对产生的带型进行遗传分析，以构建遗传图谱。此外，可以使用核酸在含有一组个体的限制性内切酶处理的基因组DNA中探测Southern印迹，所述一组个体为代表明确的遗传杂交的亲本和子代的一组个体。记录DNA多态性的分离，并用于计算在先前用此群体获得的遗传图谱中HKT核酸或其变体的位置(Botstein等(1980)Am.J.Hum.Genet.32：314-331)。
在遗传作图中使用的植物基因衍生探针的产生和用途描述于Bematzky和Tanksley(Plant Mol.Biol.Reporter 4：37-41，1986)中。很多出版物中描述过用上述方法或其变通形式对特定cDNA克隆进行遗传作图。例如，可以使用F2杂交群体、回交群体、随机交配群体、近亲同基因系和其他个体组作图。这类方法是本领域技术人员众所周知的。
核酸探针也可以用于物理作图(即在物理图谱上安置序列；见Hoheisel等In：Non-mammalian Genomic Analysis：A Practical Guide，Academicpress 1996，第319-346页，及其中引用的参考文献)。
在另一个实施方案中，核酸探针用于直接荧光原位杂交(FISH)作图(Trask(1991)Trends Genet.7：149-154)。尽管目前FISH作图的方法倾向用于大的克隆(几个到几百个KB；见Laan等(1995)Genome Res.5：13-20)，但是灵敏度的提高允许在FISH作图中应用较短的探针。
用于遗传和物理作图的多种基于核酸扩增的方法可以使用所述核酸进行。实例包括等位基因特异性扩增(Kazazian(1989)J.Lab.Clin.Med 11，95-96)、PCR扩增片段的多态性(CAPS；Sheffield等(1993)Genomics 16，325-332)、等位基因特异性连接(Landegren等(1988)Science 241，1077-1080)、核苷酸延伸反应(Sokolov(1990)Nucleic Acid Res.18，3671)、放射杂交作图(Walter等(1997)Nat.Genet.7，22-28)和Happy作图(Dear和Cook(1989)Nucleic Acid Res.17，6795-6807)。为实施这些方法，使用核酸序列设计和产生用于扩增反应或引物延伸反应的引物对。这类引物的设计是本领域技术人员众所周知的。使用基于PCR的遗传作图的方法，可能需要鉴定跨越相应于本发明核酸序列区域作图的亲本之间DNA序列的差异。不过，这对作图方法通常不是必要的。
以这种方式，可以实施具有增加HKT活性、表现出改良生长特性的植物的产生、鉴定和/或分离。
HKT核酸或其变体，或者HKT多肽或其同源物还可用为生长调节剂。由于这些分子已显示在促进植物生长特性中有用，所以它们也是有用的生长调节剂，如除草剂或生长刺激物。因此，本发明提供用作生长调节剂，优先用作生长促进剂的组合物，其包括HKT或其变体或者HKT多肽或其同源物，以及适当的载体、稀释剂或赋形剂。
实施根据本发明的方法得到如前所述具有改良生长特性的植物。这些有利的生长特性还可以组合其他经济上有利的性状，如进一步提高产率的性状、对多种胁迫的耐受性、改变各种构造特征和/或生化和/或生理学特征的性状，前提是GenBank登录号U16709所代表的序列并不用于修饰植物盐耐受或用于积累碱金属。
附图说明
现参考以下附图描述本发明，其中：
图1为HKT蛋白的示意图(M_ser等，2002)。跨膜结构域以罗马数字I至VIII标记，而四个孔形成结构域以字母A至D标示。比对显示了与酿酒酵母Trk1(M21328)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)TrkH(AAG06598)、溶藻性弧菌(Vibrio alginolyticus)KtrB(BAA32063)以及果蝇(Drosophila)Shaker通道(S00479)的孔形成结构域进行比较的多种植物HKT的孔形成结构域A。对应于K+通道GYG基序中第一个甘氨酸的残基以星号标记。
图2为多种HKT蛋白序列的多重比对。给出了数据库登录号，所用的缩写为：At，拟南芥；Mc，冰叶日中花；Ec，，赤桉；Os，稻。JU0466代表葡萄汁酵母的TRK1序列，而CAA82128为酿酒酵母的TRK2序列。
图3为进入克隆(entry clone)p036的示意图，在来自Gateway_的AttL1和AttL2位点之间含有克隆至pDONR201骨架中的CDS1532。CDS1532为拟南芥HKT编码序列的内部密码子。该载体还含有细菌卡那霉素抗性盒以及细菌复制起点。
图4显示了用于在稻中表达拟南芥HKT基因(内参CDS1532)的二元载体，该基因处于稻WSI18启动子(内参PRO0151)的控制之下。此载体含有衍生子Ti质粒的T-DNA，受左边界(LB重复，LB Ti C58)和右边界(RB重复，RB Ti C58)限制。该T-DNA自左边界至右边界的顺序含有：用于抗生素选择转化植物的盒；组成型启动子-可选择标记-NOS终止子；用于可视筛选转化植物的盒；PRO0151-CDS1532构建体-玉米醇溶蛋白和rbcS-deltaGA双终止子；拟南芥HKT基因的表达盒。此载体还含有用于细菌复制的pBR322复制起点和用于进行细菌壮观霉素和链霉素选择的可选择标记(Spe/SmeR)。
图5详述了用于实施本发明方法的序列实例。
实施例
现参考以下实施例描述本发明，所述实施例仅意在举例说明。
DNA操作：除非另外说明，重组DNA技术根据描述于(Sambrook(2001)分子克隆：实验室手册，第三版，冷泉港实验室出版，CSH，纽约或者Ausubel等(1994)，分子生物学最新指南的第一卷和第二卷)的标准方法执行。植物分子操作的标准材料和方法由R.D.D.Croy描述于PlantMolecular Biology Labfase(1993)，由BIOS Scientific Publications Ltd(UK)和Blackwell Scientific Publications(UK)出版。
实施例1：基因克隆
使用拟南芥幼苗cDNA文库(Invitrogen，Paisley，UK)作为模板通过PCR扩增拟南芥HKT基因(CDS1523)。从幼苗提取的RNA经反转录后，将cDNA克隆进pCMV Sport 6.0中。该库平均插入大小为1.5kb，并且原始克隆数的数量级在1.59×107cfu。在6×1011 cfu/ml的第一次扩增之后，确定原始滴度为9.6×105 cfu/ml。提取质粒之后，将200ng模板用于50μlPCR混合物中。PCR扩增所用引物(其包括Gateway重组的AttB位点)为prm3283(SEQ ID NO：5)和prm8443(SEQ ID NO：6)。在标准条件下使用Hifi Taq DNA聚合酶进行PCR。同样用标准方法扩增和纯化1613 bp的PCR片段。接着进行Gateway过程的第一步，BP反应，在此期间将PCR片段与pDONR201质粒体内重组以产生(根据Gateway术语)“进入克隆”，p036(图3)。作为Gateway_技术一部分的质粒pDONR201购自Invitrogen。
实施例2：载体构建
接着，使用进入克隆p036和用于稻转化的指定载体p56一起进行LR反应。此载体在T-DNA边界内包含以下部分作为功能性元件：植物可选择的标记；可视标记；旨在与已克隆到进入克隆中的目的序列进行体内重组的LR的Gateway表达盒。用于组成型表达的稻WSI18启动子(PRO0151)位于此Gateway盒的上游。LR重组步骤之后，产生的表达载体p060(图4)包含SEQ ID NO：4的表达盒，将其转化进入农杆菌菌株LBA4044，随后转化进入稻植物。使转化的稻类植物生长，随后检测实施例3中描述的参数。
实施例3：转化评估
大约产生了15到20个独立的T0转化体。初级转化体由组织培养室转移到温室生长并收获T1种子。5个事件得以保留，其中T1后代发生转基因存在/缺乏的3∶1分离。通过可视标记筛选，在每一事件中选出10个含转基因(杂合子和纯合子)的T1幼苗，和10个缺少转基因(无效合子)的T1幼苗。将所选的T1植物转移到温室中。每个植物给予一个独特的条形标记，以将表型数据与对应植物明确联系起来。所选择的T1植物在10cm直径花盆的土壤中在下列环境情况下生长：光周期＝11.5小时、日光强度＝30,000勒克斯或以上、日间温度＝28℃或更高、夜间温度＝22℃、相对湿度＝60-70％。转基因植物和相应的无效合子在随机位置上并排生长。从播种期到成熟期，使植物几次通过数字成像箱。在每个时间点上对每株植物从至少6个不同的角度取得数字图像(2048×1536像素，1千6百万色)。
收获成熟的初级圆锥花序、装袋并贴上条形码标记，然后在37℃烤箱中干燥三天。随后将圆锥花序脱粒并且收集所有的种子。使用鼓风装置将饱满谷壳和空壳分开。在分离后，使用可商购的计数仪器对两批种子进行计数。弃去空壳。在分析天平上称重饱满的外壳并且使用数字成像测量种子的截面积。此方法得到一组下面描述的种子相关参数。
这些参数是使用图像分析软件，以自动方式从数字图像中得到并且进行统计分析的。将对不平衡设计进行修正的双因素ANOVA(方差分析)用作统计模型，用于植物表型特征的全面评估。对用本发明基因转化的所有植株的所有事件的所有测量参数进行F测验。进行F检验以检查基因对所有转化事件的效应，并检验基因的总效应，亦称之为整体基因效应。如果F检验的值显示数据具有显著性，那么结论是有“基因”效应，这意味着基因的存在或定位引起了效应。真实整体基因效应的显著性阈值设置为F检验的5％概率水平。
为了检查基因在事件中的效应，即品系特异性效应，在每一事件中使用来自转基因植物和相应无效植物的数据集进行t检验。“无效植物”或“无效分离子”或“无效合子”是以与转基因植物相同的方式处理的，但是转基因已经从中分离的植物。也可以将无效植物描述为纯合的阴性转化植物。将t检验显著性的阈值设定为10％概率水平。一些事件的结果可以高于此阈值或低于此阈值。这是基于这种假设，即基因可以仅在基因组中的某些位置中具有效应，且这种位置依赖性效应的发生不是罕见的。本文中此类基因效应也称为“基因的线性效应(line effect of the gene)”。通过将t值与t分布比较得到p值，或者通过将F值与F分布比较得到p值。p值给出了无效假设(即不存在转基因效应)正确的概率。
在第一个实验中得到的数据在使用T2植物的第二个实验中得到证实。选择了具有正确表达模式的3个品系用于进一步分析。通过监控标记表达来筛选T1中来自阳性植物(杂合子和纯合子)的一批种子。对于每一个所选事件，随后保存几批杂合种子用于进行T2评估。在每批种子中，在温室中种植等量的阳性和阴性植物用于评估。
在T2代中评估了总计120个HKT转化植物，即每个事件的30个植物中，有15个为转基因阳性而15个为阴性。
由于进行了具有重叠事件的两个实验，因此进行组合分析。这可用于检查两个实验中效应的一致性，并且如果情况果真如此，其可用于从两个实验中收集证据从而增加结论的可信性。使用的方法是考虑到数据的多级结构(即实验-事件-分离子)的混合模型方法。通过对比卡方分布的似然比测试获得p值。
实施例4：转化体的评估：产率相关参数的测量
当如上所述对种子进行分析时，发明人发现，与无效合子植物相比，用AtHKT基因构建体转化的植物在数种产量参数上得分更高，包括饱满种子数、总产率和收获指数。总产率通过称重从植物重收获的所有饱满谷壳来测量。饱满种子数通过计数在分离步骤之后剩下的饱满谷壳数来测定。收获指数在本发明中定义为种子总产率与地上面积(以mm2计)之间的比率。
选择了四个事件进行T2植物评价。T2代中同样存在增产结果。个体品系收获指数的增加在8-20％之间变动，种子总重量的增加在12-24％之间变动，而饱满种子数的增加为15％左右。
序列表
<110>克罗普迪塞恩股份有限公司
<120>具有改良生长特性的植物及其制备方法
<130>CD-125-PCT
<150>EP 04105406.5
<151>2004-10-29
<150>US 60/624,892
<151>2004-11-04
<160>45
<170>PatentIn vers ion 3.3
<210>1
<211>1521
<212>DNA
<213>拟南芥(Arabidopsis thaliana)
<400>1
atggacagag tggtggcaaa aatagcaaaa atccgttcgc agcttactaa attacgttca     60
ctattcttcc tttacttcat ctacttcttg ttcttctcct ttttagggtt tttggcactc    120
aagatcacaa agccaagaac cacttcacgt cctcatgact ttgacctttt cttcacttct    180
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caacttatct tcctcactat cctcatgttc ctcggtggcg aaatcttcac ctcctttctc    300
aacctctacg tctcctattt caccaagttc gtcttccctc ataacaagat tagacatatt    360
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gattatcgcg agggtcttat caagatcgat gaaagggcat ctaagtgctt gtactcggtg    480
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gagaagttgg ttggatcgtt gtttcaagtg gtgaattcgc gacacaccgg agaaactata   1020
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cctccataca ctttatttat gccgttgacg gaacaaaaga cgatagagaa agaaggagga   1140
gatgatgatt ccgaaaatgg aaagaaagtt aaaaagagtg gactcatcgt gtcacaactt   1200
tcctttttga cgatatgtat ctttctcatt tcaatcaccg aaaggcaaaa tctacaacgt   1260
gatccgataa atttcaacgt ccttaacatc actctcgaag ttatcagtgc atatggaaac   1320
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ctttacccct cgtcttccta a                                             1521
<210>2
<211>506
<212>PRT
<213>拟南芥
<400>2
Met Asp Arg Val Val Ala Lys Ile Ala Lys Ile Arg Ser Gln Leu Thr
1               5                   10                  15
Lys Leu Arg Ser Leu Phe Phe Leu Tyr Phe Ile Tyr Phe Leu Phe Phe
            20                  25                  30
Ser Phe Leu Gly Phe Leu Ala Leu Lys Ile Thr Lys Pro Arg Thr Thr
        35                  40                  45
Ser Arg Pro His Asp Phe Asp Leu Phe Phe Thr Ser Val Ser Ala Ile
    50                  55                  60
Thr Val Ser Ser Met Ser Thr Val Asp Met Glu Val Phe Ser Asn Thr
65                  70                  75                  80
Gln Leu Ile Phe Leu Thr Ile Leu Met Phe Leu Gly Gly Glu Ile Phe
                85                  90                  95
Thr Ser Phe Leu Asn Leu Tyr Val Ser Tyr Phe Thr Lys Phe Val Phe
            100                 105                 110
Pro His Asn Lys Ile Arg His Ile Leu Gly Ser Tyr Asn Ser Asp Ser
        115                 120                 125
Ser Ile Glu Asp Arg Cys Asp Val Glu Thr Val Thr Asp Tyr Arg Glu
    130                 135                 140
Gly Leu Ile Lys Ile Asp Glu Arg Ala Ser Lys Cys Leu Tyr Ser Val
145                 150                 155                 160
Val Leu Ser Tyr His Leu Val Thr Asn Leu Val Gly Ser Val Leu Leu
                165                 170                 175
Leu Val Tyr Val Asn Phe Val Lys Thr Ala Arg Asp Val Leu Ser Ser
            180                 185                 190
Lys Glu Ile Ser Pro Leu Thr Phe Ser Val Phe Thr Thr Val Ser Thr
        195                 200                 205
Phe Ala Asn Cys Gly Phe Val Pro Thr Asn Glu Asn Met Ile Ile Phe
    210                 215                 220
Arg Lys Asn Ser Gly Leu Ile Trp Leu Leu Ile Pro Gln Val Leu Met
225                 230                 235                 240
Gly Asn Thr Leu Phe Pro Cys Phe Leu Val Leu Leu Ile Trp Gly Leu
                245                 250                 255
Tyr Lys Ile Thr Lys Arg Asp Glu Tyr Gly Tyr Ile Leu Lys Asn His
            260                 265                 270
Asn Lys Met Gly Tyr Ser His Leu Leu Ser Val Arg Leu Cys Val Leu
        275                 280                 285
Leu Gly Val Thr Val Leu Gly Phe Leu Ile Ile Gln Leu Leu Phe Phe
    290                 295                 300
Cys Ala Phe Glu Trp Thr Ser Glu Ser Leu Glu Gly Met Ser Ser Tyr
305                 310                 315                 320
Glu Lys Leu Val Gly Ser Leu Phe Gln Val Val Asn Ser Arg His Thr
                325                 330                 335
Gly Glu Thr Ile Val Asp Leu Ser Thr Leu Ser Pro Ala Ile Leu Val
            340                 345                 350
Leu Phe Ile Leu Met Met Tyr Leu Pro Pro Tyr Thr Leu Phe Met Pro
        355                 360                 365
Leu Thr Glu Gln Lys Thr Ile Glu Lys Glu Gly Gly Asp Asp Asp Ser
    370                 375                 380
Glu Asn Gly Lys Lys Val Lys Lys Ser Gly Leu Ile Val Ser Gln Leu
385                 390                 395                 400
Ser Phe Leu Thr Ile Cys Ile Phe Leu Ile Ser Ile Thr Glu Arg Gln
                405                 410                 415
Asn Leu Gln Arg Asp Pro Ile Asn Phe Asn Val Leu Asn Ile Thr Leu
            420                 425                 430
Glu Val Ile Ser Ala Tyr Gly Asn Val Gly Phe Thr Thr Gly Tyr Ser
        435                 440                 445
Cys Glu Arg Arg Val Asp Ile Ser Asp Gly Gly Cys Lys Asp Ala Ser
    450                 455                 460
Tyr Gly Phe Ala Gly Arg Trp Ser Pro Met Gly Lys Phe Val Leu Ile
465                 470                 475                 480
Ile Val Met Phe Tyr Gly Arg Phe Lys Gln Phe Thr Ala Lys Ser Gly
                485                 490                 495
Arg Ala Trp Ile Leu Tyr Pro Ser Ser Ser
            500                 505
<210>3
<211>3817
<212>DNA
<213>拟南芥
<400>3
gcttaaaccg actcgagaac taaaatggac agagtggtgg caaaaatagc aaaaatccgt     60
tcgcagctta ctaaattacg ttcactattc ttcctttact tcatctactt cttgttcttc    120
tcctttttag ggtttttggc actcaagatc acaaagccaa gaaccacttc acgtcctcat    180
gactttgacc ttttcttcac ttctgtctct gccatcaccg tctcttccat gtctaccgtc    240
gacatggaag tcttctccaa cacccaactt atcttcctca ctatcctcat gttcctcggt    300
ggcgaaatct tcacctcctt tctcaacctc tacgtctcct atttcaccaa gttcgtcttc    360
cctcataaca agattagaca tattttggga tcttataatt cggacagttc catcgaggat    420
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ggatttgtcc ccacgaatga gaacatgatc atctttcgca agaactctgg tctcatctgg    720
ctcctaatcc ctcaagtact gatgggaaac actttgttcc cttgcttctt ggttttgctc    780
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tcgcgacaca ccggagaaac tatagtagac ctctctacac tttccccagc tatcttggta   1080
ctctttattc ttatgatgta agtttctttc aatcctctcc tcatatatcg aatcatttgc   1140
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gatcttcata atttaataac tttgaaaaaa tttctcatta tagaaaatat ctttctaaaa  3000
tcaattacaa gtaaaaaata atatcatgta tagaaaacaa caccaatatg ttttgatata  3060
gtaaaatatt agaactaaat ttcaaataag aatatataca aatttaagca aaaaaatatc  3120
agaaatatat ttttaagaaa tttcttacat ataatgtata tatatagttg atatatttgt  3180
gcaattatta atttctgata ttgatggacc atatatttac ataggacttt caaaaaaatt  3240
attatctaat taatttatcg atttatgtca ttttttatac tactcccaac tcgggaccgg  3300
aagaatttat taatttatag aggttattaa tttatcgagt ataaatttat aaaataaaaa  3360
gaaacatata tatatatata atatatatat atatatataa ttcactcatt atgaattgat  3420
tgtgaattag aagttaagaa ttatcaacaa aataagtttt gtaatggcag tgcatatgga  3480
aacgttggtt tcactaccgg gtacagctgt gaacggcgtg tggacatcag cgatggtggc  3540
tgcaaagacg cgagttatgg gtttgcagga cgatggagtc caatgggaaa attcgtacta  3600
ataatagtaa tgttttatgg taggtttaag cagttcacag ccaaatctgg ccgcgcatgg  3660
attctttacc cctcgtcttc ctaacatatt tcgatcatat ataaatgtta tattaaaatt  3720
agtcactttt agcattcctt ttctgtgagt gatgtacaat aagtttgtat gtagtttgca  3780
tcatcgttaa tcctcgttaa tattatgata atgtatg                           3817
<210>4
<211>4308
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>表达盒
<400>4
aatccgaaaa gtttctgcac cgttttcacc ccctaactaa caatataggg aacgtgtgct     60
aaatataaaa tgagacctta tatatgtagc gctgataact agaactatgc aagaaaaact    120
catccaccta ctttagtggc aatcgggcta aataaaaaag agtcgctaca ctagtttcgt    180
tttccttagt aattaagtgg gaaaatgaaa tcattattgc ttagaatata cgttcacatc    240
tctgtcatga agttaaatta ttcgaggtag ccataattgt catcaaactc ttcttgaata    300
aaaaaatctt tctagctgaa ctcaatgggt aaagagagag atttttttta aaaaaataga    360
atgaagatat tctgaacgta ttggcaaaga tttaaacata taattatata attttatagt    420
ttgtgcattc gtcatatcgc acatcattaa ggacatgtct tactccatcc caatttttat    480
ttagtaatta aagacaattg acttattttt attatttatc ttttttcgat tagatgcaag    540
gtacttacgc acacactttg tgctcatgtg catgtgtgag tgcacctcct caatacacgt    600
tcaactagca acacatctct aatatcactc gcctatttaa tacatttagg tagcaatatc    660
tgaattcaag cactccacca tcaccagacc acttttaata atatctaaaa tacaaaaaat    720
aattttacag aatagcatga aaagtatgaa acgaactatt taggtttttc acatacaaaa    780
aaaaaaagaa ttttgctcgt gcgcgagcgc caatctccca tattgggcac acaggcaaca    840
acagagtggc tgcccacaga acaacccaca aaaaacgatg atctaacgga ggacagcaag    900
tccgcaacaa ccttttaaca gcaggctttg cggccaggag agaggaggag aggcaaagaa    960
aaccaagcat cctcctcctc ccatctataa attcctcccc ccttttcccc tctctatata   1020
ggaggcatcc aagccaagaa gagggagagc accaaggaca cgcgactagc agaagccgag   1080
cgaccgcctt cttcgatcca tatcttccgg tcgagttctt ggtcgatctc ttccctcctc   1140
cacctcctcc tcacagggta tgtgcccttc ggttgttctt ggatttattg ttctaggttg   1200
tgtagtacgg gcgttgatgt taggaaaggg gatctgtatc tgtgatgatt cctgttcttg   1260
gatttgggat agaggggttc ttgatgttgc atgttatcgg ttcggtttga ttagtagtat   1320
ggttttcaat cgtctggaga gctctatgga aatgaaatgg tttagggtac ggaatcttgc   1380
gattttgtga gtaccttttg tttgaggtaa aatcagagca ccggtgattt tgcttggtgt    1440
aataaaagta cggttgtttg gtcctcgatt ctggtagtga tgcttctcga tttgacgaag    1500
ctatcctttg tttattccct attgaacaaa aataatccaa ctttgaagac ggtcccgttg    1560
atgagattga atgattgatt cttaagcctg tccaaaattt cgcagctggc ttgtttagat    1620
acagtagtcc ccatcacgaa attcatggaa acagttataa tcctcaggaa caggggattc    1680
cctgttcttc cgatttgctt tagtcccaga attttttttc ccaaatatct taaaaagtca    1740
ctttctggtt cagttcaatg aattgattgc tacaaataat gcttttatag cgttatccta    1800
gctgtagttc agttaatagg taatacccct atagtttagt caggagaaga acttatccga    1860
tttctgatct ccatttttaa ttatatgaaa tgaactgtag cataagcagt attcatttgg    1920
attatttttt ttattagctc tcaccccttc attattctga gctgaaagtc tggcatgaac    1980
tgtcctcaat tttgttttca aattcacatc gattatctat gcattatcct cttgtatcta    2040
cctgtagaag tttctttttg gttattcctt gactgcttga ttacagaaag aaatttatga    2100
agctgtaatc gggatagtta tactgcttgt tcttatgatt catttccttt gtgcagttct    2160
tggtgtagct tgccactttc accagcaaag ttcatttaaa tcaactaggg atatcacaag    2220
tttgtacaaa aaagcaggct tcacaatgga cagagtggtg gcaaaaatag caaaaatccg    2280
ttcgcagctt actaaattac gttcactatt cttcctttac ttcatctact tcttgttctt    2340
ctccttttta gggtttttgg cactcaagat cacaaagcca agaaccactt cacgtcctca    2400
tgactttgac cttttcttca cttctgtctc tgccatcacc gtctcttcca tgtctaccgt    2460
cgacatggaa gtcttctcca acacccaact tatcttcctc actatcctca tgttcctcgg    2520
tggcgaaatc ttcacctcct ttctcaacct ctacgtctcc tatttcacca agttcgtctt    2580
ccctcataac aagattagac atattttggg atcttataat tcggacagtt ccatcgagga    2640
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ctctgtgttg cttcttgtgt acgtaaattt tgttaaaacg gcgagagatg ttcttagttc    2820
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cggatttgtc cccacgaatg agaacatgat catctttcgc aaaaactctg gtctcatctg    2940
gctcctaatc cctcaagtac tgatgggaaa cactttgttc ccttgcttct tggttttgct    3000
catatgggga ctttataaga tcacaaagcg tgacgagtat ggttacattc tcaagaacca    3060
caataagatg ggatactctc atctactctc ggttcgtcta tgtgttcttc ttggagtgac    3120
ggtgctaggg tttctgataa tacagcttct tttcttctgc gcctttgaat ggacctctga    3180
gtctctagaa ggaatgagtt cgtacgagaa gttggttgga tcgttgtttc aagtggtgaa    3240
ttcgcgacac accggagaaa ctatagtaga cctctctaca ctttccccag ctatcttggt    3300
actctttatt cttatgatgt atcttcctcc atacacttta tttatgccgt tgacggaaca    3360
aaagacgata gagaaagaag gaggagatga tgattccgaa aatggaaaga aagttaaaaa    3420
gagtggactc atcgtgtcac aactttcctt tttgacgata tgtatctttc tcatttcaat    3480
caccgaaagg caaaatctac aacgtgatcc gataaatttc aacgtcctta acatcactct    3540
cgaagttatc agtgcatatg gaaacgtggg tttcactacc gggtacagct gtgaacggcg    3600
tctggacatc agcgatggtg gctgcaaaga cgcgagttat gggtttgcag gacgatggag    3660
tccaatggga aaattcgtac taataatagt aatgttttat ggtaggttta agcagttcac    3720
agtcaaatct ggccgcgcat ggatacttta cccctcgtct tcctaacaac ccagctttct    3780
tgtacaaagt ggtgatatca caagcccggg cggtcttcta gggataacag ggtaattata    3840
tccctctaga tcacaagccc gggcggtctt ctacgatgat tgagtaataa tgtgtcacgc    3900
atcaccatgg gtggcagtgt cagtgtgagc aatgacctga atgaacaatt gaaatgaaaa    3960
gaaaaaaagt actccatctg ttccaaatta aaattcattt taacctttta ataggtttat    4020
acaataattg atatatgttt tctgtatatg tctaatttgt tatcatccgg gcggtcttct    4080
agggataaca gggtaattat atccctctag acaacacaca acaaataaga gaaaaaacaa    4140
ataatattaa tttgagaatg aacaaaagga ccatatcatt cattaactct tctccatcca    4200
tttccatttc acagttcgat agcgaaaacc gaataaaaaa cacagtaaat tacaagcaca    4260
acaaatggta caagaaaaac agttttccca atgccataat actcgaac                 4308
<210>5
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<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物：prm3283
<400>5
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<210>6
<211>52
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物：prm3286
<400>6
ggggaccact ttgtacaaga aagctgggtg aaatatgtta ggaagacgag gg    52
<210>7
<211>112
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>结构域
<400>7
Gly Leu Ile Val Ser Gln Leu Ser Phe Leu Thr Ile Cys Ile Phe Leu
1               5                   10                  15
Ile Ser Ile Thr Glu Arg Gln Asn Leu Gln Arg Asp Pro Ile Asn Phe
            20                  25                  30
Asn Val Leu Asn Ile Thr Leu Glu Val Ile Ser Ala Tyr Gly Asn Val
        35                  40                  45
Gly Phe Thr Thr Gly Tyr Ser Cys Glu Arg Arg Leu Asp Ile Ser Asp
    50                  55                  60
Gly Gly Cys Lys Asp Ala Ser Tyr Gly Phe Ala Gly Arg Trp Ser Pro
65                  70                  75                  80
Met Gly Lys Phe Val Leu Ile Ile Val Met Phe Tyr Gly Arg Phe Lys
                85                  90                  95
Gln Phe Thr Ala Lys Ser Gly Arg Ala Trp Ile Leu Tyr Pro Ser Ser
            100                 105                 110
<210>8
<211>15
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>结构域
<400>8
Glu Val Ile Ser Ala Tyr Gly Asn Val Gly Phe Thr Thr Gly Tyr
1               5                   10                  15
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<211>15
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>共有序列
<220>
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<220>
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<220>
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<220>
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<220>
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<220>
<221>MISC_FEATURE
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<220>
<221>MISC_FEATURE
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<223>Xaa可以是Thr、Ile、Leu、Val或Met
<400>9
Glu Xaa Xaa Ser Ala Xaa Gly Xaa Xaa Gly Xaa Xaa Xaa Gly Tyr
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<210>10
<211>5
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>标签
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(3)..(3)
<223>Xaa可以是Ile或Leu
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa可以是Tyr、Phe或Leu
<400>10
Asp Pro Xaa Asn Xaa
1               5
<210>11
<211>1632
<212>DNA
<213>冰叶日中花(Mesembryanthemum crystallinum)
<400>11
atggggagat ttgggtttct taaggagaaa gttcagcaac tttatggttg tctttgtgta     60
ggcttatttt accttcttag tactttgttt tgggtatcca acaaaattta tgactttatt    120
acctatcgta tgagtcattt ttccattgaa gtgtgttact tcatctttgt gtcgtgttta    180
gggttcttaa tcttgaggaa tataaagcct aggacgtatc cggttaaacc tggagaatta    240
gatatgttct ttacctcggt ctcggccgca acagtttcat ccatggctac tgttgaaatg    300
gaggtatttt cagatgccca actccatatt atgaccattt tgatgttcat aggaggggag    360
gttttcactt ccatggtagg ccttcatttt aaggcctcta ggcttgggaa tacaccctta    420
ggtgtaaaaa gtagggctaa ttctgtggct agtttaccat gcccaccaga agattttgat    480
cacattgagt taggcatcat cactaccaca accaccacaa caacaacaac cacaaccaca    540
ttgcaaaaaa ctaaatcaga aattgatttc ctcttaaagt ctagatcaat tagggttttg    600
ggttttgtag ttttggccta cctactaata gttcatgtct taggcacaat aatggtctat    660
gcatacctta gaattgagcc tagtgcgaag agggttctag agactaaagg gttaaaatct    720
atcacattcg cgattttcac tagtgtttca acattttcaa gctgtgggtt cgtccctacc    780
aatgaaaaca tgatcatttt tcgacaaaat tccggcctcc tcttgatgct aatccctcaa    840
gtcctcctag gaaacacatt gttaccatct ttcttaagat taacaatttg ggtcctggga    900
aaatttacaa agaaggatga atctaagtat cttatgagga acacaaagga gattgcatac    960
catcatttgc tccctaccaa gcactctaag tatgtggttg tgaccgtttt cgggttcatt   1020
ttggcgtcac tcattatgtt ttgctcaatg gattggaact tgaagggatt aagtgatctt   1080
aatgtttacc aaaaactggt gggtgcattg ttccaatgtg tgaatgcaag acatactggt   1140
gaaactattg ttgatctctc aactattgcc tcagctgtct tggttgtttt cgtcataatg   1200
atgtatcttc ccccttatac atcatttctg ccaacaaaag atggagaaga agaataccca   1260
ctagtataca aaggagaaaa gacaaagggg aagttgattt tggacaatgt ggtattctca   1320
caactctcct accttgtcat cttcatcatc cttgtttgca tcacagagag aaaaagcatg   1380
aaagaagatc ccctcaattt caatgttctc aacattgttg ttgaagttat tagtgcatat   1440
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aagctcctat aa                                                       1632
<210>12
<211>543
<212>PRT
<213>冰叶日中花
<400>12
Met Gly Arg Phe Gly Phe Leu Lys Glu Lys Val Gln Gln Leu Tyr Gly
1               5                   10                  15
Cys Leu Cys Val Gly Leu Phe Tyr Leu Leu Ser Thr Leu Phe Trp Val
            20                  25                  30
Ser Asn Lys Ile Tyr Asp Phe Ile Thr Tyr Arg Met Ser His Phe Ser
        35                  40                  45
Ile Glu Val Cys Tyr Phe Ile Phe Val Ser Cys Leu Gly Phe Leu Ile
    50                  55                  60
Leu Arg Asn Ile Lys Pro Arg Thr Tyr Pro Val Lys Pro Gly Glu Leu
65                  70                  75                  80
Asp Met Phe Phe Thr Ser Val Ser Ala Ala Thr Val Ser Ser Met Ala
                85                  90                  95
Thr Val Glu Met Glu Val Phe Ser Asp Ala Gln Leu His Ile Met Thr
            100                 105                 110
Ile Leu Met Phe Ile Gly Gly Glu Val Phe Thr Ser Met Val Gly Leu
        115                 120                 125
His Phe Lys Ala Ser Arg Leu Gly Asn Thr Pro Leu Gly Val Lys Ser
    130                 135                 140
Arg Ala Asn Ser Val Ala Ser Leu Pro Cys Pro Pro Glu Asp Phe Asp
145                 150                 155                 160
His Ile Glu Leu Gly Ile Ile Thr Thr Thr Thr Thr Thr Thr Thr Thr
                165                 170                 175
Thr Thr Thr Thr Leu Gln Lys Thr Lys Ser Glu Ile Asp Phe Leu Leu
            180                 185                 190
Lys Ser Arg Ser Ile Arg Val Leu Gly Phe Val Val Leu Ala Tyr Leu
        195                 200                 205
Leu Ile Val His Val Leu Gly Thr Ile Met Val Tyr Ala Tyr Leu Arg
    210                 215                 220
Ile Glu Pro Ser Ala Lys Arg Val Leu Glu Thr Lys Gly Leu Lys Ser
225                 230                 235                 240
Ile Thr Phe Ala Ile Phe Thr Ser Val Ser Thr Phe Ser Ser Cys Gly
                245                 250                 255
Phe Val Pro Thr Asn Glu Asn Met Ile Ile Phe Arg Gln Asn Ser Gly
            260                 265                 270
Leu Leu Leu Met Leu Ile Pro Gln Val Leu Leu Gly Asn Thr Leu Leu
        275                 280                 285
Pro Ser Phe Leu Arg Leu Thr Ile Trp Val Leu Gly Lys Phe Thr Lys
    290                 295                 300
Lys Asp Glu Ser Lys Tyr Leu Met Arg Asn Thr Lys Glu Ile Ala Tyr
305                 310                 315                 320
His His Leu Leu Pro Thr Lys His Ser Lys Tyr Val Val Val Thr Val
                325                 330                 335
Phe Gly Phe Ile Leu Ala Ser Leu Ile Met Phe Cys Ser Met Asp Trp
            340                 345                 350
Asn Leu Lys Gly Leu Ser Asp Leu Asn Val Tyr Gln Lys Leu Val Gly
        355                 360                 365
Ala Leu Phe Gln Cys Val Asn Ala Arg His Thr Gly Glu Thr Ile Val
    370                 375                 380
Asp Leu Ser Thr Ile Ala Ser Ala Val Leu Val Val Phe Val Ile Met
385                 390                 395                 400
Met Tyr Leu Pro Pro Tyr Thr Ser Phe Leu Pro Thr Lys Asp Gly Glu
                405                 4l0                 415
Glu Glu Tyr Pro Leu Val Tyr Lys Gly Glu Lys Thr Lys Gly Lys Leu
            420                 425                 430
lle Leu Asp Asn Val Val Phe Ser Gln Leu Ser Tyr Leu Val Ile Phe
        435                 440                 445
Ile Ile Leu Val Cys Ile Thr Glu Arg Lys Ser Met Lys Glu Asp Pro
    450                 455                 460
Leu Asn Phe Asn Val Leu Asn Ile Val Val Glu Val Ile Ser Ala Tyr
465                 470                 475                 480
Gly Asn Val Gly Phe Ser Thr Gly Tyr Ser Cys Ser Arg Gln Leu Lys
                485                 490                 495
Pro Asp Ala Asn Cys Val Asp Lys Trp Tyr Gly Phe Val Gly Lys Trp
            500                 505                 510
Ser Asp Gln Gly Lys Ile Ile Leu Ile Phe Val Met Phe Phe Gly Arg
        515                 520                 525
Leu Lys Lys Phe Asn Met Lys Gly Gly Arg Ala Trp Lys Leu Leu
    530                 535                 540
<210>13
<211>1518
<212>DNA
<213>冰叶日中花
<400>13
atggagaaat atttggctct cttccacaag aaattagatc aattttttaa tttttgttat   60
acaaaagctt tatcatatat tagctccttg tatgagtaca taatcttcca agttcaccca  120
ttttggcatc acctctttta ttatatcata gtttctctct tgggttactt ctccttgaag  180
gccacttcaa gaaagcagag gagctcccct gttttctctg atccccgcca cgatgacctc  240
gacctcttct tcacctctgt ctccgccacc accatctcga gcatgtcgac aatcgagatg  300
gaggatttct cgagtcccca gctcgtcgtt ctcatcatcc tcatgctttc tggtggggaa  360
gtcttccttt ccctccttgg cctccagctc cgtaaatcca agcataggaa gagggagcaa  420
aagaacatcc tcttgaactc gccctccgaa ggtatgaaat ataagtcact ggtggcacta  480
ggacatgttg ttttgggcta cctcttggtg tgccatataa ttgggtacag tctagcttcc  540
ttgtacataa gcatttctag aagtgcaagc aatgtgctcg agagaaaaca cattgagatg  600
catctcttct ccctcttcgt caccgtctcc acattctcca actgtggatt catcccaaca  660
aatgagaaca tgatggtctt taagggaaat tcaggattgc tattgatcct catcccacaa  720
atcctcctag ggaacaaact gtacccatct tgcctaaggc tagttctttg ggtgctcgaa  780
aagctaaccg gcaaagccga gttcagctac atattgaaga aaaatgatga gcttggttat  840
gggttgtttt tctcgcaagt cgatgcgttg ctcttggctg tgactgcggt tggattggtt  900
atggttcagt ttgtggtgtt ttgcatcttg gagtggaatt cggtagcgtt gatggatctt  960
aattggcatc aaaaactggt cggatctctc tttcaaactg tcaattctag gcacagtgga 1020
gaatctatca ttgatctctc ccttatttcc cctgccacca tggttctctt cgttgtcatg 1080
atgtatcttc catcctatac cacatttata cctgttggat acgacaaaga aatatcgcca  1140
gaaatgagca gcaagaagag caaaaagcaa ggttgcagca ttgcagaaaa tcteaaattc  1200
tctcagcttt cttacttggc tatctttgtt atgattgttt gcatcactga aaggagaaat  1260
ttagtggaag accctctcaa cttcaacgtc ttcaacatta tcgtagaagt cataagtgca  1320
tatggaaatg ttggattctc catgggttat agttgtaaaa gaagacttgg agacattgga  1380
acttgcaagg atgcaggata tggcttcgtg ggtcgatgga gtagacaagg gaaaatggtt  1440
atcatcttgg tcatgctttt tggtaggctt aagagattta attttaaagg cggaaaagct  1500
tggaaacttt ctctttaa                                                1518
<210>14
<211>505
<212>PRT
<213>冰叶日中花
<400>14
Met Glu Lys Tyr Leu Ala Leu Phe His Lys Lys Leu Asp Gln Phe Phe
I               5                   10                  15
Asn Phe Cys Tyr Thr Lys Ala Leu Ser Tyr Ile Ser Ser Leu Tyr Glu
            20                  25                  30
Tyr Ile Ile Phe Gln Val His Pro Phe Trp His His Leu Phe Tyr Tyr
        35                  40                  45
Ile Ile Val Ser Leu Leu Gly Tyr Phe Ser Leu Lys Ala Thr Ser Arg
    50                  55                  60
Lys Gln Arg Ser Ser Pro Val Phe Ser Asp Pro Arg His Asp Asp Leu
65                  70                  75                  80
Asp Leu Phe Phe Thr Ser Val Ser Ala Thr Thr Ile Ser Ser Met Ser
                85                  90                  95
Thr Ile Glu Met Glu Asp Phe Ser Ser Pro Gln Leu Val Val Leu Ile
            100                 105                 110
Ile Leu Met Leu Ser Gly Gly Glu Val Phe Leu Ser Leu Leu Gly Leu
        115                 120                 125
Gln Leu Arg Lys Ser Lys His Arg Lys Arg Glu Gln Lys Asn Ile Leu
    130                 135                 140
Leu Asn Ser Pro Ser Glu Gly Met Lys Tyr Lys Ser Leu Val Ala Leu
145                 150                 155                 160
Gly His Val Val Leu Gly Tyr Leu Leu Val Cys His Ile Ile Gly Tyr
                165                 170                 175
Ser Leu Ala Ser Leu Tyr Ile Ser Ile Ser Arg Ser Ala Ser Asn Val
            180                  185                190
Leu Glu Arg Lys His Ile Glu Met His Leu Phe Ser Leu Phe Val Thr
        195                 200                 205
Val Ser Thr Phe Ser Asn Cys Gly Phe Ile Pro Thr Asn Glu Asn Met
    210                 215                 220
Met Val Phe Lys Gly Asn Ser Gly Leu Leu Leu Ile Leu Ile Pro Gln
225                 230                 235                 240
Ile Leu Leu Gly Asn Lys Leu Tyr Pro Ser Cys Leu Arg Leu Val Leu
                245                 250                 255
Trp Val Leu Glu Lys Leu Thr Gly Lys Ala Glu Phe Ser Tyr Ile Leu
            260                 265                 270
Lys Lys Asn Asp Glu Leu Gly Tyr Gly Leu Phe Phe Ser Gln Val Asp
        275                 280                 285
Ala Leu Leu Leu Ala Val Thr Ala Val Gly Leu Val Met Val Gln Phe
    290                 295                 300
Val Val Phe Cys Ile Leu Glu Trp Asn Ser Val Ala Leu Met Asp Leu
305                 310                 315                 320
Asn Trp His Gln Lys Leu Val Gly Ser Leu Phe Gln Thr Val Asn Ser
                325                 330                 335
Arg His Ser Gly Glu Ser Ile Ile Asp Leu Ser Leu Ile Ser Pro Ala
            340                 345                 350
Thr Met Val Leu Phe Val Val Met Met Tyr Leu Pro Ser Tyr Thr Thr
        355                 360                 365
Phe Ile Pro Val Gly Tyr Asp Lys Glu Ile Ser Pro Glu Met Ser Ser
    370                 375                 380
Lys Lys Ser Lys Lys Gln Gly Cys Ser Ile Ala Glu Asn Leu Lys Phe
385                 390                 395                 400
Ser Gln Leu Ser Tyr Leu Ala Ile Phe Val Met Ile Val Cys Ile Thr
                405                 410                 415
Glu Arg Arg Asn Leu Val Glu Asp Pro Leu Asn Phe Asn Val Phe Asn
            420                 425                 430
Ile Ile Val Glu Val Ile Ser Ala Tyr Gly Asn Val Gly Phe Ser Met
        435                 440                 445
Gly Tyr Ser Cys Lys Arg Arg Leu Gly Asp Ile Gly Thr Cys Lys Asp
    450                 455                 460
Ala Gly Tyr Gly Phe Val Gly Arg Trp Ser Arg Gln Gly Lys Met Val
465                 470                 475                 480
Ile Ile Leu Val Met Leu Phe Gly Arg Leu Lys Arg Phe Asn Phe Lys
                485                 490                 495
Gly Gly Lys Ala Trp Lys Leu Ser Leu
            500                 505
<210>15
<211>1653
<212>DNA
<213>赤桉(Eucalyptus camaldulensis)
<400>15
atgatgagct ttttttcgtc tttaggcaaa gaggttgcgt tcctttgtag cgcttcatgg     60
atcaaactag cctgcatctg caggtccctt tgcttcctcc tttcttgctg tttccgcttc    120
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ctcggcttct gggtcctcaa ggccctaggg ccgcggaccg attcctttag gcctagggac    240
ttggatctgt tcttcacttc cgtctctgcg acgaccgtct cgagcatgtc cacggtcgag    300
atggaagtct tctccaactc acagcttgtc gtgatgaccg tcctgatgtt catcggagga    360
gaggtcttca tttccctcgt tgggcttcat cttaggaaat ccaagctccg gtggcgcatc    420
agaaccgaag acaaagtcgc ctctgccgat ggcaatctct gcccttccgc cccaacaaat    480
gacattgttg accacataga gttaggtgta gtggcgaaaa cagattgcct gaactcgcag    540
gtagagcctc aattttacag accgcaagac aagtcctcag atcttgacta tttgaaatat    600
tgttcggtta ggtttttgtg ttatgtagtg ttaggttacc ttctggtagt ccaagttcta    660
ggagttgccg cagtttcgct ctatatcaca ctagttccta gcgccagaga tgtgctaaag    720
aagaaaggtc tcaaaatggt gaccttttcc gtcttcacca ccgtgtcgac ctttgccagt    780
tgtgggtttg tcccgaccaa tgaaaacatg attatcttca gcaaaaactc tggcctcctc    840
ctgattctca tccctcaggc ccttcttggg aacatgctgt tcccatcgag cctacgtttg    900
acgctttggc tcatcgggag attcagcgag aaagatgaaa tcgggtactt gttgagcagg    960
acaagtgaaa ttggttacaa gcacttgctt ccgagcctct actcgtcgct actgggggtc   1020
acggtgttgg ggttcgtcgg tattcagttt ataatgtttt gctcgatgca gtgggattcg   1080
gaatcgttga atggactaag ctcctgtgag aaaatcgtgg gcgcgctgtt tcagtgcgtg   1140
aacagcagac ataccggcga gacggtcgtc gatctgtcca cagttgctcc cgccatcttg   1200
gtgctattcg tggtcatgat gtaccttccg ccttacacgt cgttccttcc ggtgaaaggc   1260
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ttggagaatc tcaaattttc acagctttcc tacctggcca tctttatcat cgtgatttgc   1380
atcaccgaga ggaaaaagat gaaggaagat cccctcaatt tcaacgtgtt gaacatcgtg   1440
gtcgaagtgg taagcgcata tggaaatgtg gggtttacga caggatacag ttgcgaacgc   1500
caactaaggc ctgtcaaagg ctgcgaggac aagtggtatg gattctctgg gaaatggagc   1560
gatgaaagca aaatcatcct catcgtagtc atgtttttcg gaagattaaa gaagttcaac   1620
atgaagggcg gccgagcttg gatactcttg tag                                1653
<210>16
<211>550
<212>PRT
<213>赤桉
<400>16
Met Met Ser Phe Phe Ser Ser Leu Gly Lys Glu Val Ala Phe Leu Cys
1               5                   10                  15
Ser Ala Ser Trp Ile Lys Leu Ala Cys Ile Cys Arg Ser Leu Cys Phe
            20                  25                  30
Leu Leu Ser Cys Cys Phe Arg Phe Leu Leu Leu Arg Val Asn Ser Phe
        35                  40                  45
Cys Ile Gln Val Phe Tyr Phe Val Phe Leu Ser Phe Leu Gly Phe Trp
    50                  55                  60
Val Leu Lys Ala Leu Gly Pro Arg Thr Asp Ser Phe Arg Pro Arg Asp
65                  70                  75                  80
Leu Asp Leu Phe Phe Thr Ser Val Ser Ala Thr Thr Val Ser Ser Met
                85                  90                  95
Ser Thr Val Glu Met Glu Val Phe Ser Asn Ser Gln Leu Val Val Met
            100                 105                 110
Thr Val Leu Met Phe Ile Gly Gly Glu Val Phe Ile Ser Leu yal Gly
        115                 120                 125
Leu His Leu Arg Lys Ser Lys Leu Arg Trp Arg Ile Arg Thr Glu Asp
    130                 135                 140
Lys Val Ala Ser Ala Asp Gly Asn Leu Cys Pro Ser Ala Pro Thr Asn
145                 150                 155                 160
Asp Ile Val Asp His Ile Glu Leu Gly Val Val Ala Lys Thr Asp Cys
                165                 170                 175
Leu Asn Ser Gln Val Glu Pro Gln Phe Tyr Arg Pro Gln Asp Lys Ser
            180                 185                 190
Ser Asp Leu Asp Tyr Leu Lys Tyr Cys Ser Val Arg Phe Leu Cys Tyr
        195                 200                 205
Val Val Leu Gly Tyr Leu Leu Val Val Gln Val Leu Gly Val Ala Ala
    210                 215                 220
Val Ser Leu Tyr Ile Thr Leu Val Pro Ser Ala Arg Asp Val Leu Lys
225                 230                 235                 240
Lys Lys Gly Leu Lys Met Val Thr Phe Ser Val Phe Thr Thr Val Ser
                245                 250                 255
Thr Phe Ala Ser Cys Gly Phe Val Pro Thr Asn Glu Asn Met Ile Ile
            260                 265                 270
Phe Ser Lys Asn Ser Gly Leu Leu Leu Ile Leu Ile Pro Gln Ala Leu
        275                 280                 285
Leu Gly Asn Met Leu Phe Pro Ser Ser Leu Arg Leu Thr Leu Trp Leu
    290                 295                 300
Ile Gly Arg Phe Ser Glu Lys Asp Glu Ile Gly Tyr Leu Leu Ser Arg
305                 310                 315                 320
Thr Ser Glu Ile Gly Tyr Lys His Leu Leu Pro Ser Leu Tyr Ser Ser
                325                 330                 335
Leu Leu Gly Val Thr Val Leu Gly Phe Val Gly Ile Gln Phe Ile Met
            340                 345                 350
Phe Cys Ser Met Gln Trp Asp Ser Glu Ser Leu Asn Gly Leu Ser Ser
        355                 360                 365
Cys Glu Lys Ile Val Gly Ala Leu Phe Gln Cys Val Asn Ser Arg His
    370                 375                 380
Thr Gly Glu Thr Val Val Asp Leu Ser Thr Val Ala Pro Ala Ile Leu
385                 390                 395                 400
Val Leu Phe Val Val Met Met Tyr Leu Pro Pro Tyr Thr Ser Phe Leu
                405                 410                 415
Pro Val Lys Gly Asn Glu Arg Phe Pro Glu Asn Gly Glu Arg Arg Lys
            420                 425                 430
Pro Lys Gln Ser Tyr Arg Leu Leu Leu Glu Asn Leu Lys Phe Ser Gln
        435                 440                 445
Leu Ser Tyr Leu Ala Ile Phe Ile Ile Val Ile Cys Ile Thr Glu Arg
    450                 455                 460
Lys Lys Met Lys Glu Asp Pro Leu Asn Phe Asn Val Leu Asn Ile Val
465                 470                 475                 480
Val Glu Val Val Ser Ala Tyr Gly Asn Val Gly Phe Thr Thr Gly Tyr
                485                 490                 495
Ser Cys Glu Arg Gln Leu Arg Pro Val Lys Gly Cys Glu Asp Lys Trp
            500                 505                 510
Tyr Gly Phe Ser Gly Lys Trp Ser Asp Glu Ser Lys Ile Ile Leu Ile
        515                 520                 525
Val Val Met Phe Phe Gly Arg Leu Lys Lys Phe Asn Met Lys Gly Gly
    530                 535                 540
Arg Ala Trp Ile Leu Leu
545                 550
<210>17
<211>1650
<212>DNA
<213>赤桉
<400>17
atgatgcgct ttccttgttt aggcaaagaa gtcgtgtgtc tttgtattgc ttcatgcctc     60
aaaatagccc gcctcttcag gtccttctgc ttcctctttt cttggtactt ccgcttcctg    120
ctcctccgag tcaactcctt ttgtgtccag cttttgtact tcgtcttcct ctcgctcctt    180
ggcttctggg tccttaaggc atcgaggccg ctaacccatt ccttcaggcc tagggacttg    240
gatctgttct tcacctctgt ctccttggct actgtctcga gcatgtccac ggtggagatg    300
gaggtcctct ccgactccca gctcgtcgtg atgaccgtcc tgatgttcgt cggaggggaa    360
gtcttcacct ctcttgccgg gcttcacttc aggaaactga aactccagtc gctcctgaaa    420
accgaagaaa cagtcgcctc cgtccatacc aatctttgcc cttcgaaccc aaccaacggt    480
gttgttgacc acgtagagtt agctgtagta acgaattcag attgcctgaa ctctcgagta    540
gaacctcagt tgcacggacc gcgagacgag tccccagatc tcgactattt gaaatatcgt    600
tccgctaacg ttttgtgtct tgtagtgtta ggttaccttc tgggagtcaa tgttctcggt    660
gtcgccgcag tttcactcta tatgatactt gtttccagcg cgagagacgt gctaaagcgg    720
aagggcctca aaatgatgac attttccatc ttcaccactg tgtcgacctt cgccagttgc    780
gggttcgtcc cgacgaacga aaacatggct gtcttcaaca agaactccgg cctcctccta    840
attctcatcc ctcaggtcct tctcgggaac acgctgttcc cgtcgacctt acggctggta    900
ctttggctct tgggaaaatt cagcaagaaa gcagaaatcg attatttgtt gagcagaaca    960
ggtgaaattg gttacaagca cttgcttccg agcctctact cgtcgctcct ggtggtaacg   1020
gtgttggggt ttattggtgt tcagttcata atgttttgct caatgcagtg ggattcagaa   1080
tcgttagatg gactaaactc gtacgagaaa attgtggccg tgctctttca gtgcgtgaac   1140
accagatata cgggcgagac gatcgttaat ctgtccaaag tatctcctgc catcttggtg   1200
ttattcgtcg tcatgatgta ccttccgcca tacacgtcct tccttccggc gataggtggt   1260
gaggagctcc tgggaaatgg ggaaagaaaa aaggcgaaac gaagtcataa actaatgttg   1320
aagagtctca tattctcaca gccctcctac ttggccatct ttatcatcac gatttgcata   1380
acggagaagg aaaagatgaa gaaagatcct ctcaacttta atgtgttcaa catcgtggtc   1440
gaagtgataa gtgcatatgg gaatgtgggg ttcacgatag gttacaattg cgatcggcaa   1500
ctaagacgta ttgaaggctg cgaggacaag tggtacggat tctctgggaa atggagcgat   1560
gagggcaaaa ttatcctcat tgccgtcatg attttcggaa gattaaagaa gttcaacatg   1620
aaaggtggcc gaaattggat actcttgtga                                    1650
<210>18
<211>549
<212>PRT
<213>赤桉
<400>18
Met Met Arg Phe Pro Cys Leu Gly Lys Glu Val Val Cys Leu Cys Ile
1               5                   10                  15
Ala Ser Cys Leu Lys Ile Ala Arg Leu Phe Arg Ser Phe Cys Phe Leu
            20                  25                  30
Phe Ser Trp Tyr Phe Arg Phe Leu Leu Leu Arg Val Asn Ser Phe Cys
        35                  40                  45
Val Gln Leu Leu Tyr Phe Val Phe Leu Ser Leu Leu Gly Phe Trp Val
    50                  55                  60
Leu Lys Ala Ser Arg Pro Leu Thr His Ser Phe Arg Pro Arg Asp Leu
65                  70                  75                  80
Asp Leu Phe Phe Thr Ser Val Ser Leu Ala Thr Val Ser Ser Met Ser
                85                  90                  95
Thr Val Glu Met Glu Val Leu Ser Asp Ser Gln Leu Val Val Met Thr
            100                 105                 110
Val Leu Met Phe Val Gly Gly Glu Val Phe Thr Ser Leu Ala Gly Leu
        115                 120                 125
His Phe Arg Lys Leu Lys Leu Gln Ser Leu Leu Lys Thr Glu Glu Thr
    130                 135                 140
Val Ala Ser Val His Thr Asn Leu Cys Pro Ser Asn Pro Thr Asn Gly
145                 150                 155                 160
Val Val Asp His Val Glu Leu Ala Val Val Thr Asn Ser Asp Cys Leu
                165                 170                 175
Asn Ser Arg Val Glu Pro Gln Leu His Gly Pro Arg Asp Glu Ser Pro
            180                 185                 190
Asp Leu Asp Tyr Leu Lys Tyr Arg Ser Ala Asn Val Leu Cys Leu Val
        195                 200                 205
Val Leu Gly Tyr Leu Leu Gly Val Asn Val Leu Gly Val Ala Ala Val
    210                 215                 220
Ser Leu Tyr Met Ile Leu Val Ser Ser Ala Arg Asp Val Leu Lys Arg
225                 230                 235                 240
Lys Gly Leu Lys Met Met Thr Phe Ser Ile Phe Thr Thr Val Ser Thr
                245                 250                 255
Phe Ala Ser Cys Gly Phe Val Pro Thr Asn Glu Asn Met Ala Val Phe
            260                 265                 270
Asn Lys Asn Ser Gly Leu Leu Leu Ile Leu Ile Pro Gln Val Leu Leu
        275                 280                 285
Gly Asn Thr Leu Phe Pro Ser Thr Leu Arg Leu Val Leu Trp Leu Leu
    290                 295                 300
Gly Lys Phe Ser Lys Lys Ala Glu Ile Asp Tyr Leu Leu Ser Arg Thr
305                 310                 315                 320
Gly Glu Ile Gly Tyr Lys His Leu Leu Pro Ser Leu Tyr Ser Ser Leu
                325                 330                 335
Leu Val Val Thr Val Leu Gly Phe Ile Gly Val Gln Phe Ile Met Phe
            340                 345                 350
Cys Ser Met Gln Trp Asp Ser Glu Ser Leu Asp Gly Leu Asn Ser Tyr
        355                 360                 365
Glu Lys Ile Val Ala Val Leu Phe Gln Cys Val Asn Thr Arg Tyr Thr
    370                 375                 380
Gly Glu Thr Ile Val Asn Leu Ser Lys Val Ser Pro Ala Ile Leu Val
385                 390                 395                 400
Leu Phe Val Val Met Met Tyr Leu Pro Pro Tyr Thr Ser Phe Leu Pro
                405                 4l0                 415
Ala Ile Gly Gly Glu Glu Leu Leu Gly Asn Gly Glu Arg Lys Lys Ala
            420                 425                 430
Lys Arg Ser His Lys Leu Met Leu Lys Ser Leu Ile Phe Ser Gln Pro
        435                 440                 445
Ser Tyr Leu Ala Ile Phe Ile Ile Thr Ile Cys Ile Thr Glu Lys Glu
    450                 455                 460
Lys Met Lys Lys Asp Pro Leu Asn Phe Asn Val Phe Asn Ile Val Val
465                 470                 475                 480
Glu Val Ile Ser Ala Tyr Gly Asn Val Gly Phe Thr Ile Gly Tyr Asn
                485                 490                 495
Cys Asp Arg Gln Leu Arg Arg Ile Glu Gly Cys Glu Asp Lys Trp Tyr
            500                 505                 510
Gly Phe Ser Gly Lys Trp Ser Asp Glu Gly Lys Ile Ile Leu Ile Ala
        515                 520                 525
Val Met Ile Phe Gly Arg Leu Lys Lys Phe Asn Met Lys Gly Gly Arg
    530                 535                 540
Asn Trp Ile Leu Leu
545
<210>19
<211>1593
<212>DNA
<213>稻(Oryza sativa)
<400>19
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agatattttg ttaattttgt tgttctagcc catagattca ttgccttgca tattcaccca    120
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ttcctgaagc caagcaaccc agaattcaga ccaggttaca ttgacatgct gttcttgtca    240
acctctgctc tgacactttc cagcctcatc accatcgaaa tggaggttct ctcaagctca    300
caaattgtgg ttattacact gctgatgctt ctcgggggtg aagtctttgt ttctttcctg    360
ggcctcatgc ttagactgaa ccataagcac aacccagagt tttcagggga caaggtcagt    420
tcagttccta tcgagcttga tacaatcaac tcggcaagca ctgtgataag ttgtgaagag    480
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gtcgctggct ttctgctggt tctctggtac ataagtcgtg tctcatctgc aaaagctcca    660
ctgaagaaga aagggatcaa cattgcactc ttctcattct cggtcacggt ctcctcgttt    720
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<210>20
<211>530
<212>PRT
<213>稻
<400>20
Met Thr Ser Ile Tyr His Asp Phe Ile His Asn Lys Leu Gln Ser Phe
1               5                   10                  15
Gly Arg Ile Gly Arg Tyr Phe Val Asn Phe Val Val Leu Ala His Arg
            20                  25                  30
Phe Ile Ala Leu His Ile His Pro Phe Trp Ile Gln Leu Ser Tyr Phe
        35                  40                  45
Leu Leu Ile Ser Ile Leu Gly Ser Val Leu Leu Met Phe Leu Lys Pro
    50                  55                  60
Ser Asn Pro Glu Phe Arg Pro Gly Tyr Ile Asp Met Leu Phe Leu Ser
65                  70                  75                  80
Thr Ser Ala Leu Thr Leu Ser Ser Leu Ile Thr Ile Glu Met Glu Val
                85                  90                  95
Leu Ser Ser Ser Gln Ile Val Val Ile Thr Leu Leu Met Leu Leu Gly
            100                 105                 110
Gly Glu Val Phe Val Ser Phe Leu Gly Leu Met Leu Arg Leu Asn His
        115                 120                 125
Lys His Asn Pro Glu Phe Ser Gly Asp Lys Val Ser Ser Val Pro Ile
    130                 135                 140
Glu Leu Asp Thr Ile Asn Ser Ala Ser Thr Val Ile Ser Cys Glu Glu
145                 150                 155                 160
Leu Gln Leu Glu Ala Ala Ile Pro Glu Val Pro Ser Ser Thr Ile Lys
                165                 170                 175
Asp Leu Lys Arg Ser Lys Arg Leu Arg Trp Phe Leu Gly Phe Val Val
            180                 185                 190
Phe Ser Tyr Phe Val Val Ile His Val Ala Gly Phe Leu Leu Val Leu
        195                 200                 205
Trp Tyr Ile Ser Arg Val Ser Ser Ala Lys Ala Pro Leu Lys Lys Lys
    210                 215                 220
Gly Ile Asn Ile Ala Leu Phe Ser Phe Ser Val Thr Val Ser Ser Phe
225                 230                 235                 240
Ala Asn Val Gly Leu Val Pro Thr Asn Glu Asn Met Ala Ile Phe Ser
                245                 250                 255
Lys Asn Pro Gly Leu Leu Leu Leu Phe Ile Gly Gln Ile Leu Ala Gly
            260                 265                 270
Asn Thr Leu Tyr Pro Leu Phe Leu Arg Leu Leu Ile Trp Phe Leu Gly
        275                 280                 285
Lys Val Thr Lys Leu Arg Glu Leu Lys Leu Met Ile Lys Asn Pro Glu
    290                 295                 300
Glu Leu Gln Tyr Asp Tyr Leu Leu Pro Lys Leu Pro Thr Ala Phe Leu
305                 310                 315                 320
Ala Ser Thr Val Ile Gly Leu Met Ala Ser Leu Val Thr Leu Phe Gly
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Ala Val Asp Trp Asn Ser Ser Val Phe Asp Gly Leu Ser Ser Tyr Gln
            340                 345                 350
Lys Ile Ile Asn Ala Leu Phe Met Ala Val Asn Ala Arg His Ser Gly
        355                 360                 365
Glu Asn Ser Ile Asp Cys Ser Leu Ile Ala Pro Ala Val Leu Val Leu
    370                 375                 380
Phe Ile Ile Leu Met Tyr Leu Pro Pro Ser Thr Thr Phe Ala Leu Ser
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Asn Gly Asp Glu Lys Thr Ala Asn Lys Lys Ala Lys Arg Lys Leu Gly
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Leu Val Val Gln Asn Leu Ala Phe Ser Gln Leu Ala Cys Ile Ser Val
            420                 425                 430
Phe Val Ile Val Ala Phe Ile Thr Glu Arg Ser Arg Leu Arg Asn Asp
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Pro Leu Asn Phe Ser Ala Leu Asn Met Ile Phe Glu Ile Ile Ser Ala
    450                 455                 460
Tyr Gly Asn Val Gly Leu Ser Thr Gly Tyr Ser Cys Ser Arg Leu Gln
465                 470                 475                 480
Lys Leu His Pro Gly Ser Ile Cys Gln Asp Lys Pro Tyr Ser Leu Ser
                485                 490                 495
Gly Trp Trp Ser Asp Glu Gly Lys Leu Leu Leu Val Phe Val Met Leu
            500                 505                 510
Tyr Gly Arg Leu Lys Ala Phe Thr Lys Gly Thr Gly Glu Tyr Trp Arg
        515                 520                 525
Leu Trp
    530
<210>21
<211>1593
<212>DNA
<213>稻
<400>21
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<210>22
<211>530
<212>PRT
<213>稻
<400>22
Met Thr Ser Ile Tyr Gln Glu Phe Ile His Thr Lys Cys Gln Ser Phe
1               5                   10                  15
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65                  70                  75                  80
Thr Ser Ala Met Thr Val Ser Gly Leu Ser Thr Ile Glu Met Glu Val
                85                  90                  95
Leu Ser Ser Ser Gln Ile Val Val Leu Thr Leu Leu Met Leu Val Gly
            100                 105                 110
Gly Glu Val Phe Val Ser Phe Leu Gly Leu Met Leu Arg Leu Lys His
        115                 120                 125
Lys His Asn Pro Glu Phe Ser Gly Asp Arg Val Ser Ser Val Pro Ile
    130                 135                 140
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Leu Gln Ile Glu Ala Ala Ala Pro Asp Val Pro Ser Ser Thr Ile Lys
                165                 170                 175
Asp Leu Lys Arg Ser Lys Arg Leu Arg Trp Phe Leu Gly Phe Val Val
            180                 185                 190
Phe Ser Tyr Phe Val Val Ile His Val Val Gly Phe Leu Leu Val Leu
        195                 200                 205
Trp Tyr Ile Ser Arg Val Ser Ser Ala Lys Ala Pro Leu Lys Lys Lys
    210                 215                 220
Gly Ile Asn Ile Ala Leu Phe Ser Phe Ser Val Thr Val Ser Ser Phe
225                 230                 235                 240
Ala Asn Gly Gly Leu Val Pro Thr Asn Glu Asn Met Ala Ile Phe Ser
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Lys Asn Pro Gly Leu Leu Leu Leu Phe Ile Gly Gln Ile Leu Ala Gly
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        275                 280                 285
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    530
<210>23
<211>1530
<212>DNA
<213>稻
<400>23
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cagctgcagc accaggaggg gattgcctgc catgagaagg cgtacaactt ctcggggtgg    1440
tggagtgaac cagggaaact gattcttgtt cttgcaatgc tctgcgggag gctcaactca    1500
aaggattcca caagcgcacg aactaggtga                                     1530
<2l0>24
<211>509
<212>PRT
<213>稻
<400>24
Met Pro Ile Arg Leu His Ile Phe Val Asn Ser Ala Arg His Ala Ile
1               5                   10                  15
Asn Ser Ser Ala Phe Ile Cys Arg Phe Ile Ala Tyr His Leu Ser Pro
            20                  25                  30
Leu Leu Ile His Leu Ser Tyr Phe Leu Ile Ile Asp Ile Leu Gly Phe
        35                  40                  45
Val Ser Leu Val Val Leu Arg Pro Ser Asn His Lys Tyr Asn Pro Arg
    50                  55                  60
Tyr Val Asp Met Phe Phe Leu Ser Thr Ser Ala Val Thr Val Ile Gly
65                  70                  75                  80
Leu Ala Thr Ile Gln Met Glu Asp Leu Ser Ser Ser Gln Ile Ala Ile
                85                  90                  95
Leu Thr Leu Leu Met Phe Leu Asp Ser Lys Met Phe Leu Ser Phe Leu
            100                 105                 ll0
Gly Leu Val Leu Glu Ser Ser Lys Gln Asn Lys His Asp Pro Glu Asn
        115                 120                 125
Arg Arg Val Ser Ser Val Thr Val Cys Lys Gln Ser Gln Leu Glu Glu
    130                 135                 140
Ala Thr Pro Gln Thr Pro Ser Met Asn Ser Ile Asp Ile Lys Lys Arg
145                 150                 155                 160
Cys Leu Lys Tyr Leu Val Phe Val Val Leu Ala Tyr Met Ile Ile Ile
                165                 170                 175
Leu Val Thr Gly Ser Leu Leu Val Phe Met Tyr Ile Ala His Val Ser
            180                 185                 190
Ser Ala Arg Asp Val Leu Thr Arg Lys Ser Ile Asn Lys Ala Leu Phe
        195                 200                 205
Ser Ile Ser Val Thr Val Ser Ser Phe Thr Asn Gly Gly Leu Leu Pro
    210                 215                 220
Thr Asn Glu Ser Met Val Val Phe Ser Ser Asn Asn Gly Leu Leu Leu
225                 230                 235                 240
Leu Leu Ile Gly Gln Ile Leu Ala Gly Ser Thr Leu Phe Pro Val Phe
                245                 250                 255
Leu Arg Leu Val Ile Trp Ala Leu Arg Gly Leu Arg Leu Ala Lys Ala
            260                 265                 270
Glu Glu Pro Asp Phe Met Met Asn Asn Ser Ser Ala Val Gly Phe Ser
        275                 280                 285
His Leu Leu Pro Asn Leu Gln Thr Ile Phe Leu Ala Val Val Glu Val
    290                 295                 300
Ala Phe Val Ala Met Thr Val Ile Leu Phe Cys Cys Leu Asn Trp Asp
305                 3l0                 315                 320
Ser Val Val Phe Ala Gly Leu Ser Ser Leu Gln Lys Ile Thr Asn Ala
                325                 330                 335
Leu Phe Met Ala Val Asn Ala Arg Gln Ala Gly Glu Asn Ser Ile Asp
            340                 345                 350
Cys Ser Leu Val Ala Pro Ala Ala Leu Val Leu Phe Met Val Met Met
        355                 360                 365
Tyr Thr Pro Ser Leu Thr Lys Leu Phe Ser Ala Cys Gln Asp His Lys
    370                 375                 380
Arg Ile Gly Pro Glu Ser Asp Asp Arg Thr Ser Lys Gly Lys Pro Phe
385                 390                 395                 400
Leu Lys Met Met Ala Phe Ser Pro Leu Gly Phe Asn Thr Thr Val Ile
                405                 410                 415
Met Leu Val Cys Ile Thr Glu Arg Arg Ser Leu Ser Thr Asp Pro Leu
            420                 425                 430
Asn Leu Ser Thr Phe Asn Ile Ile Phe Glu Val Ile Ser Ala Tyr Gly
        435                 440                 445
Asn Ile Gly Leu Ser Thr Gly Tyr Ser Cys Ser Arg Gln Leu Gln His
    450                 455                 460
Gln Glu Gly Ile Ala Cys His Glu Lys Ala Tyr Asn Phe Ser Gly Trp
465                 470                 475                 480
Trp Ser Glu Pro Gly Lys Leu Ile Leu Val Leu Ala Met Leu Cys Gly
                485                 490                 495
Arg Leu Asn Ser Lys Asp Ser Thr Ser Ala Arg Thr Arg
            500                 505
<210>25
<211>1659
<212>DNA
<213>稻
<400>25
atgcatccac caagtttagt gctagatacc ttgaagcgta tcaaactata catagccatg     60
aagctcctgt taccgaattc ggaggtgcct cggatctatt gggagaaagc tcagcatctc    120
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caatcttata gttttctggt ttgcaaaagt aaccctttgg tagttcagct cgtttacttt    240
gtgataatct catttgctgg tttccttgct ctgaagaatc tcaagcccca gggtaagcca    300
ggtccaaagg atttggacct attgttcacc tctgtgtcta cacttactgt ctcgagcatg    360
gcaacagtag agatggaaga cttatctgac aggcaactct gggttctgat ccttctgatg    420
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agtcctgcaa acaatgggga tcacaaaatt acggaatgtg gccaatcaga agaaactatg    600
tcgcaaaacc aggtacagca aaacaaaagc ataacatata atccttgcgc tgtgttggtt    660
cgcatagtga caggttattt cgtagctact gtcatttcca gttctgtcat cattattatt    720
tacttttgga ttgattcaga tgcaagaaat gtactgaaaa gtaaggagat caatatgtat    780
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catttgcatg tgaggagaaa ttctgtttac attgttctga gtgttactgg actgattcta   1080
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tgtttagcaa tgttcacatt cctggcatgc ataacagaaa ggaagtcaat ttcttctgat   1440
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<210>26
<211>552
<212>PRT
<213>稻
<400>26
Met His Pro Pro Ser Leu Val Leu Asp Thr Leu Lys Arg Ile Lys Leu
1               5                   10                  15
Tyr Ile Ala Met Lys Leu Leu Leu Pro Asn Ser Glu Val Pro Arg Ile
            20                  25                  30
Tyr Trp Glu Lys Ala Gln His Leu Cys Gly Phe Leu Ser Met Lys Leu
        35                  40                  45
Ile Ser Arg Ala Arg Cys Val Ala Ser Ser Val Lys Gln Ser Tyr Ser
    50                  55                  60
Phe Leu Val Cys Lys Ser Asn Pro Leu Val Val Gln Leu Val Tyr Phe
65                  70                  75                  80
Val Ile Ile Ser Phe Ala Gly Phe Leu Ala Leu Lys Asn Leu Lys Pro
                85                  90                  95
Gln Gly Lys Pro Gly Pro Lys Asp Leu Asp Leu Leu Phe Thr Ser Val
            100                 105                 110
Ser Thr Leu Thr Val Ser Ser Met Ala Thr Val Glu Met Glu Asp Leu
        115                 120                 125
Ser Asp Arg Gln Leu Trp Val Leu Ile Leu Leu Met Leu Met Gly Gly
    130                 135                 140
Glu Val Phe Thr Ser Met Leu Gly Leu Tyr Phe Asn Asn Ala Asn Ala
145                 150                 155                 160
Asn Arg Asn Glu Asn Ser Gln Arg Ser Leu Pro Ser Ile Ser Leu Asp
                165                 170                 175
Ile Glu Phe Asn Ser Pro Ala Asn Asn Gly Asp His Lys Ile Thr Glu
            180                 185                 190
Cys Gly Gln Ser Glu Glu Thr Met Ser Gln Asn Gln Val Gln Gln Asn
        195                 200                 205
Lys Ser Ile Thr Tyr Asn Pro Cys Ala Val Leu Val Arg Ile Val Thr
    210                 215                 220
Gly Tyr Phe Val Ala Thr Val Ile Ser Ser Ser Val Ile Ile Ile Ile
225                 230                 235                 240
Tyr Phe Trp Ile Asp Ser Asp Ala Arg Asn Val Leu Lys Ser Lys Glu
                245                 250                 255
Ile Asn Met Tyr Thr Phe Cys Ile Phe Thr Ala Val Ser Ser Phe Ala
            260                 265                 270
Asn Cys Gly Phe Thr Pro Leu Asn Ser Asn Met Gln Pro Phe Arg Lys
        275                 280                 285
Asn Trp Val Leu Leu Leu Leu Val Ile Pro Gln Ile Leu Ala Gly Asn
    290                 295                 300
Thr Leu Phe Ser Pro Leu Leu Arg Leu Cys Val Trp Val Leu Gly Lys
305                 310                 315                 320
Val Ser Gly Lys Ala Glu Tyr Ala Tyr Ile Leu Gln His Pro Gly Glu
                325                 330                 335
Thr Gly Tyr Lys His Leu His Val Arg Arg Asn Ser Val Tyr Ile Val
            340                 345                 350
Leu Ser Val Thr Gly Leu Ile Leu Leu Gln Val Met Phe Ile Cys Ser
        355                 360                 365
Phe Glu Trp Asn Ser Glu Ser Leu Glu Gly Met Asn Trp Leu Gln Lys
    370                 375                 380
Leu Val Gly Leu Leu Phe Gln Ser Val Asn Thr Arg Gln Ala Gly Glu
385                 390                 395                 400
Ser Ile Leu Asp Ile Ser Thr Leu Ser Pro Ser Thr Leu Leu Leu Phe
                405                 410                 415
Ala Val Val Met Tyr Leu Pro Ser Asp Ala Ser Phe Leu Thr Ala Asn
            420                 425                 430
Ala Asp Asn Gln Pro Leu Thr Asp Lys Lys Thr Asn Ser Ile Ser Arg
        435                 440                 445
Ala Leu Trp Arg Asn Phe Thr Val Asn Lys Leu Ser Cys Leu Ala Met
    450                 455                 460
Phe Thr Phe Leu Ala Cys Ile Thr Glu Arg Lys Ser Ile Ser Ser Asp
465                 470                 475                 480
Pro Leu Asn Phe Asn Ile Phe Ser Ile Val Phe Glu Ile Ile Ser Ala
                485                 490                 495
Phe Gly Asn Val Gly Tyr Ser Leu Gly Tyr Ser Cys Gln Lys Leu Leu
            500                 505                 510
Lys Pro Asp Ala Thr Cys Lys Asp Ala Ser Tyr Gly Phe Val Gly Arg
        515                 520                 525
Trp Thr Glu Glu Gly Lys Leu Ile Val Ile Leu Val Met Phe Leu Gly
    530                 535                 540
Arg Leu Lys Glu Phe Ile Leu Lys
545                 550
<210>27
<211>1596
<212>DNA
<213>稻
<400>27
atgaatcatt gtcttgtagt atcccacaaa aaactccaaa ctttccgcac atttgcagct     60
agcaagttct cttcttttac caaatctgca cagaagtcta taaaatactc cttccagttc    120
atctaccaaa acaatccact ctttgtccat gtagcttact ttgccctgat ctcctttgct    180
ggatatggat ctctaaaggt cctcaagcca cgagacaagt caaatactct gaaagacttg    240
gacgtgctat ttacttccgt atctgcatca actgtttcaa gcatggctac tgttgaaatg    300
gaggatttct caagcgctca actctgggtt ttgactattt taatgctgat tggtggtgag    360
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gtcagcacaa gggatcactc accttgcatt gatattgagt ctattacttc cacaaaattt    480
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ggaggacatg tagagcccaa gacgattaaa tttttaggtt ttgtagtgat gggatatctt    600
ctaataacaa acttaggcgg ctccctactt atttacctct accttaacct ggtaccaagt    660
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tctttggagt ggagctcggt agctttggat ggaatgagca actatcaaaa gatagtatcc   1080
gctctatttc agtcggtcaa tgctaggcat gcaggtgaat ctgttacaga tctgtcaaac   1140
ctctcttcag caatcctagt cctatacacc atcatgatgt atctccctgg ttacacttcg   1200
tttttaccca gacatgatgg tgaggattct aagaccgaga agataaacaa aagaaaaggg   1260
ctattggaga actggatctt ctcacatatg tcttatttgg ctatctttgt aatgctaatt   1320
tgcatcacag aacgggactc gatggctaca gatccactta atttcaatgt tttcagcata   1380
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aacatgaagg gtggaagagc ctggaagctt agataa                             1596
<210>  28
<211>531
<212>PRT
<213>稻
<400>28
Met Asn His Cys Leu Val Val Ser His Lys Lys Leu Gln Thr Phe Arg
1               5                   10                  15
Thr Phe Ala Ala Ser Lys Phe Ser Ser Phe Thr Lys Ser Ala Gln Lys
            20                  25                  30
Ser Ile Lys Tyr Ser Phe Gln Phe Ile Tyr Gln Asn Asn Pro Leu Phe
        35                  40                  45
Val His Val Ala Tyr Phe Ala Leu Ile Ser Phe Ala Gly Tyr Gly Ser
    50                  55                  60
Leu Lys Val Leu Lys Pro Arg Asp Lys Ser Asn Thr Leu Lys Asp Leu
65                  70                  75                  80
Asp Val Leu Phe Thr Ser Val Ser Ala Ser Thr Val Ser Ser Met Ala
                85                  90                  95
Thr Val Glu Met Glu Asp Phe Ser Ser Ala Gln Leu Trp Val Leu Thr
            100                 105                 110
Ile Leu Met Leu Ile Gly Gly Glu Val Phe Thr Ser Met Leu Gly Ile
        115                 120                 125
His Phe Met Arg Ala Glu Phe Gly Thr Lys Glu Ser Val Ser Thr Arg
    130                 135                 140
Asp His Ser Pro Cys Ile Asp Ile Glu Ser Ile Thr Ser Thr Lys Phe
145                 150                 155                 160
Gly Pro Ser Thr Gln Gly Thr Lys Val Thr Val Ser Phe Ser Glu Leu
                165                 170                 175
Arg Met Glu Asn Gly Gly His Val Glu Pro Lys Thr Ile Lys Phe Leu
            180                 185                 190
Gly Phe Val Val Met Gly Tyr Leu Leu Ile Thr Asn Leu Gly Gly Ser
        195                 200                 205
Leu Leu Ile Tyr Leu Tyr Leu Asn Leu Val Pro Ser Ala His Lys Ile
    210                 215                 220
Leu Lys Arg Lys Gly Ile Gly Ile Ile Val Phe Ser Val Phe Thr Ala
225                 230                 235                 240
Ile Ser Ser Val Gly Asn Cys Gly Phe Thr Pro Val Asn Glu Asn Met
                245                 250                 255
Ile Ile Phe Gln Lys Asn Ser Ile Leu Leu Leu Leu Ile Leu Pro Gln
            260                 265                 270
Ile Leu Ala Gly Asn Thr Leu Phe Ala Pro Cys Leu Arg Leu Met Val
        275                 280                 285
Trp Ser Leu Glu Lys Ile Thr Gly Lys Lys Asp Cys Arg Tyr Ile Leu
    290                 295                 300
Glu Tyr Pro Lys Ala Ile Gly Tyr Lys His Leu Met Ser Thr Arg Glu
305                 310                 315                 320
Ser Val Tyr Leu Thr Leu Thr Val Val Ser Leu Ile Ile Leu Gln Thr
                325                 330                 335
Val Leu Phe Leu Ser Leu Glu Trp Ser Ser Val Ala Leu Asp Gly Met
            340                 345                 350
Ser Asn Tyr Gln Lys Ile Val Ser Ala Leu Phe Gln Ser Val Asn Ala
        355                 360                 365
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Ile Leu Val Leu Tyr Thr Ile Met Met Tyr Leu Pro Gly Tyr Thr Ser
385                 390                 395                 400
Phe Leu Pro Arg His Asp Gly Glu Asp Ser Lys Thr Glu Lys Ile Asn
                405                 410                 415
Lys Arg Lys Gly Leu Leu Glu Asn Trp Ile Phe Ser His Met Ser Tyr
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Leu Ala Ile Phe Val Met Leu Ile Cys Ile Thr Glu Arg Asp Ser Met
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Ala Thr Asp Pro Leu Asn Phe Asn Val Phe Ser Ile Leu Phe Glu Val
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Val Ser Ala Tyr Gly Asn Val Gly Phe Ser Val Gly Tyr Ser Cys Lys
465                 470                 475                 480
Arg Leu Leu Asn His Asp Ala Arg Cys Lys Asp Ala Ser Tyr Gly Phe
                485                 490                 495
Ala Gly Lys Trp Ser Asp Asn Gly Lys Ala Ile Leu Ile Ile Val Met
            500                 505                 510
Leu Phe Gly Arg Leu Lys Thr Phe Asn Met Lys Gly Gly Arg Ala Trp
        515                 520                 525
Lys Leu Arg
    530
<210>29
<211>1503
<212>DNA
<213>稻
<400>29
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tag                                                                 1503
<210>30
<211>500
<212>PRT
<213>稻
<400>30
Met Pro Thr Ser Arg Arg Ala Leu Ala Gly Gly Ala Leu Ser Met His
1               5                   10                  15
Val Ala Tyr Phe Leu Ala Ile Ser Cys Leu Gly Tyr Gly Leu Leu Gly
            20                  25                  30
Val Leu Lys Val Arg Glu Pro Gly Ala Ala Pro Arg Arg Ile Asp Arg
        35                  40                  45
Phe Phe Thr Ala Val Ser Ala Ala Thr Val Ser Ser Met Ser Thr Val
    50                  55                  60
Glu Met Glu Val Phe Ser Asn Gly Gln Leu Val Val Leu Thr Val Leu
65                  70                  75                  80
Met Leu Leu Gly Gly Glu Val Phe Val Ser Leu Val Gly Leu Ala Ser
                85                  90                  95
Lys Trp Ser Lys Leu Arg Ser Asp Ala Met Asp Arg Ser Arg Arg Val
            100                 105                 110
Glu Ser His Gly Asp Val Ala Leu Ala Asp Ile Asp Gly Gly Asp Val
        115                 120                 125
Glu Asn Pro Thr Ser Ser Gly Glu Glu Ala Ala Ser Arg Arg Arg Pro
    130                 135                 140
Met Asp Ala Asp Thr Leu Arg His Asn Ala Val Arg Ala Leu Phe Tyr
145                 150                 155                 160
Ile Val Leu Ala Ile Phe Ala Val Val His Val Val Gly Ala Val Ala
                165                 170                 175
Val Ala Ala Tyr Val Leu Ala Ser Pro Gly Ala Arg Arg Thr Leu Gly
            180                 185                 190
Asp Lys Ser Leu Asn Thr Trp Thr Phe Ala Val Phe Thr Thr Val Ser
        195                 200                 205
Thr Phe Ser Asn Cys Gly Phe Met Pro Thr Asn Glu Asn Met Val Val
    210                 215                 220
Phe Lys Arg Asp Ala Pro Leu Gln Leu Leu Leu Val Pro Gln Val Leu
225                 230                 235                 240
Ala Gly Asn Thr Leu Phe Ala Pro Leu Leu Ala Ala Cys Val Trp Ala
                245                 250                 255
Ala Ala Ala Ala Thr Arg Arg Glu Glu Leu Val Glu Met Ala Arg Glu
            260                 265                 270
Gly Gly Arg Ala Ala Ala Ala Gly Tyr Ala His Leu Met Pro Ala Arg
        275                 280                 285
Arg Cys Trp Met Leu Ala Ala Thr Val Ala Ala Phe Val Ala Val Leu
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Met Ala Leu Val Cys Gly Met Glu Trp Gly Gly Ala Leu Gln Gly Met
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Ser Pro Trp Glu Lys Val Val Asn Ala Leu Phe Leu Ala Val Asn Ala
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Arg His Thr Gly Glu Ser Thr Val Asp Leu Ser Ile Leu Ala Pro Ala
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Ile Leu Val Leu Phe Val Leu Met Met Tyr Leu Pro Pro Tyr Thr Thr
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Trp Phe Pro Phe Glu Glu Asn Ser Thr Thr Lys Asp Ser Asn Ala Glu
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Asn Gln Gly Ile Arg Leu Leu Glu Ser Thr Leu Leu Ser Gln Leu Ser
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Tyr Leu Thr Ile Phe Val Ile Ala Ile Cys Ile Thr Glu Arg Arg Lys
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Leu Lys Glu Asp Pro Leu Asn Phe Ser Val Leu Ser Ile Val Val Glu
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Val Val Ser Ala Tyr Gly Asn Val Gly Phe Ser Met Gly Tyr Ser Cys
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Ser Arg Gln Ile Asn Pro Asp His Leu Cys Thr Asp Lys Trp Thr Gly
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Phe Val Gly Arg Trp Ser Asp Ser Gly Lys Leu Ile Leu Ile Phe Val
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Met Phe Phe Gly Arg Leu Lys Lys Phe Ser Met Lys Gly Gly Lys Ala
                485                 490                 495
Trp Lys Leu Ser
            500
<210>31
<211>1665
<212>DNA
<213>稻
<400>31
atgagttctc tggatgccac tactcctaga tatgacgagt  ttaaaaggat ctaccacctt    60
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ggtgaggtct tcaccagcat ccttggcctc tacttcacca acgccaagta ctcctccaag    360
atgatagcaa ccttacctga tgatgacgac catggtggca gtggcaaacc accaccacca    420
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gtcgtcaacc ctaccaccac tgcgacgacg cacgacgagg tagagctagg gttaggacgt    540
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gtcgccgggt acacggccat cgtcgtgtac ctcagcgccg tcggcggcgc gggggcggtg    720
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<210>32
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<212>PRT
<213>稻
<400>32
Met Ser Ser Leu Asp Ala Thr Thr Pro Arg Tyr Asp Glu Phe Lys Arg
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Ile Tyr His Leu Phe Leu Phe His Ala His Pro Phe Trp Leu Gln Leu
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Leu Tyr Phe Leu Phe Ile Ser Leu Leu Gly Phe Leu Met Leu Lys Ala
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Leu Pro Met Lys Thr Ser Met Val Pro Arg Pro Met Asp Leu Asp Leu
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Ile Phe Thr Ser Val Ser Ala Thr Thr Val Ser Ser Met Val Ala Val
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Glu Met Glu Ser Phe Ser Asn Ser Gln Leu Leu Leu Ile Thr Leu Leu
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Met Leu Leu Gly Gly Glu Val Phe Thr Ser Ile Leu Gly Leu Tyr Phe
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Thr Asn Ala Lys Tyr Ser Ser Lys Met Ile Ala Thr Leu Pro Asp Asp
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Asp Asp His Gly G1y Ser Gly Lys Pro Pro Pro Pro Thr Thr Ser Pro
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Ser Ser Thr Leu Val Glu Leu Glu Leu Ala Pro Pro Met Asp Val Val
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Val Val Asn Pro Thr Thr Thr Ala Thr Thr His Asp Glu Val Glu Leu
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Gly Leu Gly Arg Arg Asn Lys Arg Gly Cys Thr Cys Thr Thr Thr His
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Thr Ser Ser Ser Ser Ser Ala Ser Lys Thr Thr Thr Thr Arg Leu Leu
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Met Phe Val Val Met Gly Tyr His Ala Val Val His Val Ala Gly Tyr
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Thr Ala Ile Val Val Tyr Leu Ser Ala Val Gly Gly Ala Gly Ala Val
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Val Ala Gly Lys Gly Ile Ser Ala His Thr Phe Ala Ile Phe Thr Val
                245                 250                 255
Val Ser Thr Phe Ala Asn Cys Gly Phe Val Pro Thr Asn Glu Gly Met
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Val Ser Phe Arg Ser Phe Pro Gly Leu Leu Leu Leu Val Met Pro His
        275                 280                 285
Val Leu Leu Gly Asn Thr Leu Phe Pro Val Phe Leu Arg Leu Ala Ile
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Ala Ala Leu Glu Arg Val Thr Gly Trp Pro Glu Leu Gly Glu Leu Leu
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Ile Arg Arg Arg Arg Gly Gly Gly Glu Gly Tyr His His Leu Leu Pro
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Ser Ser Arg Thr Arg Phe Leu Ala Leu Thr Val Ala Val Leu Val Val
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Ala Gln Leu Ala Leu Phe Cys Ala Met Glu Trp Gly Ser Asp Gly Leu
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Val Asn Ser Arg His Ser Gly Glu Met Val Leu Asp Leu Ser Thr Val
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<213>稻
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ttagccacca cacaaatgga ggatctttct agctctcaga tagctgtcct gactctcttg    300
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aaaagcatca acaaagctct cttctcgata tcggtcacag tctcctcatt tacaaatgga    660
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gctgtggagg ttgcttttgt aggcatgaca gtcatcctct tctgctgctt gaactgggat    960
tctgcagtgt ttgcagggct aacctccctc cagaagataa ccaatgcatt gttcatggca   1020
gtgagtgcaa ggcaggcagg agaaaattcc attgattgtt cccttgttgc gccagcggct   1080
ttagtactat tcatggtcat gatgtacact ccatccttga caaagttgtt ctcagcatgt   1140
caagatcaca aacaaatcgg cccggaaagc gacgatagaa caagcaaggg gaaaccattc   1200
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<211>509
<212>PRT
<213>稻
<400>34
Met Pro Ile Arg Leu His Ile Phe Val Ser Ser Ala Arg His Ala Ile
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Leu Thr Leu Leu Met Phe Leu Gly Ser Glu Met Phe Leu Ser Phe Leu
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Gly Leu Val Leu Glu Ser Ser Lys Gln Asn Lys His Asp Pro Glu Asn
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Leu Val Thr Gly Ser Leu Leu Val Phe Met Tyr Ile Ala His Val Ser
            180                 185                 190
Ser Ala Arg Asp Val Leu Thr Arg Lys Ser Ile Asn Lys Ala Leu Phe
        195                 200                 205
Ser Ile Ser Val Thr Val Ser Ser Phe Thr Asn Gly Gly Leu Leu Pro
    210                 215                 220
Thr Asn Glu Ser Met Ala Val Phe Ser Ser Asn Asn Gly Leu Leu Leu
225                 230                 235                 240
Leu Leu Ile Gly Gln Ile Leu Ala Gly Ser Thr Leu Leu Pro Met Phe
                245                 250                 255
Leu Arg Leu Val Ile Trp Ala Leu Arg Gly Leu Arg Leu Ala Lys Ala
            260                 265                 270
Glu Glu Pro Asp Phe Met Met Asn Asn Ser Ser Ser Val Gly Phe Ser
        275                 280                 285
His Leu Leu Pro Asn Leu Gln Thr Ile Phe Leu Ala Ala Val Glu Val
    290                 295                 300
Ala Phe Val Gly Met Thr Val Ile Leu Phe Cys Cys Leu Asn Trp Asp
305                 310                 315                 320
Ser Ala Val Phe Ala Gly Leu Thr Ser Leu Gln Lys Ile Thr Asn Ala
                325                 330                 335
Leu Phe Met Ala Val Ser Ala Arg Gln Ala Gly Glu Asn Ser Ile Asp
            340                 345                 350
Cys Ser Leu Val Ala Pro Ala Ala Leu Val Leu Phe Met Val Met Met
        355                 360                 365
Tyr Thr Pro Ser Leu Thr Lys Leu Phe Ser Ala Cys Gln Asp His Lys
    370                 375                 380
Gln Ile Gly Pro Glu Ser Asp Asp Arg Thr Ser Lys Gly Lys Pro Phe
385                 390                 395                 400
Leu Lys Thr Met Ala Phe Ser Pro Leu Ala Phe Asn Thr Thr Val Ile
                405                 410                 415
Met Leu Val Cys Ile Thr Glu Arg Arg Ser Ile Ser Thr Asp Pro Leu
            420                 425                 430
Asn Phe Ser Thr Phe Asn Ile Ile Phe Glu Val Ile Ser Ala Tyr Gly
        435                 440                 445
Asn Ile Gly Leu Ser Thr Gly Tyr Ser Cys Ser Arg Gln Leu Gln His
    450                 455                 460
Gln Asp Gly Ile Ala Cys His Glu Lys Pro Tyr Ser Phe Ser Gly Trp
465                 470                 475                 480
Trp Ser Glu Pro Gly Lys Leu Ile Leu Val Leu Ala Met Leu Tyr Gly
                485                 490                 495
Arg Leu Asn Ser Lys Asp Ser Thr Ser Ala Arg Thr Arg
            500                 505
<210>35
<211>1602
<212>DNA
<213>小麦(Triticum aestivum)
<400>35
atgggccggg tgaaaagatt ttaccaggat ttcatccata tcaagctgca tagcttctgc     60
cgtatcagtg gatatgttgt cgattcaata gcttttgtct atagatttgt tgcattgcat    120
gttcacccct tctggatcca actgtcctac ttccttgcca ttgctatact tggttcagtc    180
ctcttgatgt cgctgaaacc aagcaaccct gacttcagcc ctccttacat tgacatgtta    240
ttcttgtcaa cttctgctct aacagtttct ggcctcagca ccatcacgat ggaggatctc    300
tcaagctctc aaattgtggt tttgacattg ctcatgctta taggagggga gatctttgtt    360
tcactcttag ggctcatgct tagagtgaac catcaagaca tgcaagatct tccaagcgtg    420
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ttgaagagga gtaggtctgt caagtgctta ggatatgtgg tctttgggta ctttgccatg    600
atccatgtct tgggctttct gctggttttt ctgtatataa ctcatgtgcc aactgcaagt    660
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tcctgtgcga atgcaggact cgtgcccaca aatgagaaca tggtcatctt ctcaaagaat    780
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ttcctgaggc tactggtgtg gttcctgggg aggatcacaa aggtgaagga gctgaggctc    900
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tttctctcct caacggtcgt tggccttgta gcagctgggg tcacgatgtt ctgcgctgtt   1020
gattggaatt cttcagtctt tgatgggctc agctcttatc agaagactgt caatgcattc   1080
ttcatggtgg tgaatgcgag gcactcaggg gagaattcca tcgactgctc gctcatgtcc   1140
cctgccatta tagtactatt catcgtcatg atgtatttgc catcatcagc aacatttgca   1200
ccacccagtg gagatactaa aaccaccaat gagaacacga aagggaaagt caagagaggg   1260
tcgttggtgc agaatttggc attctcaccg ctcgggtgta acatcatctt tgtgatggtt   1320
gcctgcatca cggaaaggag aaggctcaga aacgatccac tcaacttctc caccttgaac   1380
atgatatttg aggtcatcag cgcatatggc aatgcagggt tatccactgg ttacagttgt   1440
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aaggctttca cactggccac gggtaaatcc tggaaagtat ga                      1602
<210>36
<211>533
<212>PRT
<213>小麦
<400>36
Met Gly Arg Val Lys Arg Phe Tyr Gln Asp Phe Ile His Ile Lys Leu
1               5                   10                  15
His Ser Phe Cys Arg Ile Ser Gly Tyr Val Val Asp Ser Ile Ala Phe
            20                  25                  30
Val Tyr Arg Phe Val Ala Leu His Val His Pro Phe Trp Ile Gln Leu
        35                  40                  45
Ser Tyr Phe Leu Ala Ile Ala Ile Leu Gly Ser Val Leu Leu Met Ser
    50                  55                  60
Leu Lys Pro Ser Asn Pro Asp Phe Ser Pro Pro Tyr Ile Asp Met Leu
65                  70                  75                  80
Phe Leu Ser Thr Ser Ala Leu Thr Val Ser Gly Leu Ser Thr Ile Thr
                85                  90                  95
Met Glu Asp Leu Ser Ser Ser Gln Ile Val Val Leu Thr Leu Leu Met
            100                 105                 110
Leu Ile Gly Gly Glu Ile Phe Val Ser Leu Leu Gly Leu Met Leu Arg
        115                 120                 125
Val Asn His Gln Asp Met Gln Asp Leu Pro Ser Val Lys Ile Ser Ser
    130                 135                 140
Val Pro Val Glu Leu Glu Glu Leu Asp Leu Pro Asn Ser Met Ala Leu
145                 150                 155                 160
Cys Asp Glu Ser Gln Leu Glu Glu Ala Ala His Ala Ile Pro Pro Lys
                165                 170                 175
Lys Cys Thr Glu Leu Lys Arg Ser Arg Ser Val Lys Cys Leu Gly Tyr
            180                 185                 190
Val Val Phe Gly Tyr Phe Ala Met Ile His Val Leu Gly Phe Leu Leu
        195                 200                 205
Val Phe Leu Tyr Ile Thr His Val Pro Thr Ala Ser Ala Pro Leu Asn
    210                 215                 220
Lys Lys Gly Ile Asn Ile Val Leu Phe Ser Leu Ser Val Thr Val Ala
225                 230                 235             240
Ser Cys Ala Asn Ala Gly Leu Val Pro Thr Asn Glu Asn Met Val Ile
                245                 250             255
Phe Ser Lys Asn Ser Gly Leu Leu Leu Leu Leu Ser Gly Gln Met Leu
            260                 265             270
Ala Gly Asn Thr Leu Phe Pro Leu Phe Leu Arg Leu Leu Val Trp Phe
        275                 280             285
Leu Gly Arg Ile Thr Lys Val Lys Glu Leu Arg Leu Met Ile Asn Asn
    290                 295             300
Pro Glu Glu Val Arg Phe Ala Asn Leu Leu Ala Arg Leu Pro Thr Val
305                 310             315                     320
Phe Leu Ser Ser Thr Val Val Gly Leu Val Ala Ala Gly Val Thr Met
                325             330                     335
Phe Cys Ala Val Asp Trp Asn Ser Ser Val Phe Asp Gly Leu Ser Ser
            340             345                     350
Tyr Gln Lys Thr Val Asn Ala Phe Phe Met Val Val Asn Ala Arg His
        355                 360                 365
Ser Gly Glu Asn Ser Ile Asp Cys Ser Leu Met Ser Pro Ala Ile Ile
    370                 375                 380
Val Leu Phe Ile Val Met Met Tyr Leu Pro Ser Ser Ala Thr Phe Ala
385                 390                 395                 400
Pro Pro Ser Gly Asp Thr Lys Thr Thr Asn Glu Asn Thr Lys Gly Lys
                405                 410                 415
Val Lys Arg Gly Ser Leu Val Gln Asn Leu Ala Phe Ser Pro Leu Gly
            420                 425                 430
Cys Asn Ile Ile Phe Val Met Val Ala Cys Ile Thr Glu Arg Arg Arg
        435                 440                 445
Leu Arg Asn Asp Pro Leu Ash Phe Ser Thr Leu Asn Met Ile Phe Glu
    450                 455                 460
Val Ile Ser Ala Tyr Gly Asn Ala Gly Leu Ser Thr Gly Tyr Ser Cys
465                 470                 475                 480
Ser Arg Leu His Gln Leu His Pro Glu Ile Ile Cys Gln Asp Lys Pro
                485                 490                 495
Tyr Ser Phe Ser Gly Trp Trp Ser Asp Gly Gly Lys Phe Val Leu Ile
            500                 505                 510
Leu Val Met Leu Tyr Gly Arg Leu Lys Ala Phe Thr Leu Ala Thr Gly
        515                 520                 525
Lys Ser Trp Lys Val
    530
<210>37
<211>1458
<212>DNA
<213>海滨碱蓬盐地亚种(Suaeda maritima subsp.Salsa)
<400>37
atgttgagtt tcaaatttat agtagaaaaa tgcaaacatt tttatacttc tctttatcta   60
cttcttgtct atgtttttac atccttatat tggttaattt caaaaatcta tgattttatt  120
atggtttatg tttgccactt gattattgag ttatgttact tcattcttgt atcttctttt  180
ggattcttgt ttttaaaaac cctaattcca aaatcatcta ataatagtaa taacaataat  240
aattcaataa atggtttaga tttgtttttc acctcggttt ccgccacaac cgtctcaagc  300
atgtcaaccc tagagatgga ggtattctca aattcccaac tcattgtttt aaccattttg  360
atgttcatag gaggtgaggt ctttacctcc atggtaggtc tccatttttc ggcctcgaaa  420
cttgtgtaca ctcccctgca agcaaggagt agagtaaact cagtggctag cttaccactt  480
cctcctgaaa gtattgagtt aggaatcatt attccatcat caacaacaac aacacaagaa  540
attagggttt catcaaccat tgaaaaaaca aaatcagaaa tagatttcct aataaaatca   600
aaatcaatta gggttttagg ctttgtggtt ttgtcttact taatcatagt tcatttccta   660
ggaatttcaa tggtattaac atacattaat acaatcccaa atgctaaaaa tgttttagac   720
aaaaaaggtc ttaaaacatt cactttttca attttttcag ttgtttcaac ttttgcaagt   780
tgtggtttca cccctacaaa tgaaaacatg caagttttta gcaaaaactc tggcctcttg   840
ttgatgctaa tccctcaaat cctccttggg aacacattgt ttccttcgtt tcttcgattt   900
tcgatatgga tgctaggaaa atttgtcaaa aaagacgaaa ccaagtatct aatgagaaac   960
tcaaaggaaa ttgagtacca tcatttgctc tctagcaaac actctaggtt tttaattgtg  1020
acggttttag ggttcatttt ggtgcaattt ataatgtttt gttcaatgga atggaatttc  1080
gatggtctga ataatgatca taatatttat caaaaattag tgggaatatt atttcaatgt  1140
gttaattcaa gacatacagg tgaaagcatt gttgatcttt cctccattaa ttcagctatg  1200
ttggtgattt tcatcgttat gatgtacctt ccaccatata cttcctttct gccaataaag  1260
gatgaagaaa aagaatatcc aaacatggta ttatttcaca aaggagaaaa gaaacggaag  1320
aagattttga agaatttcct attttcacag cttggccata ttgccatttc atcattatta  1380
tttgcatcac agagaagcaa aagattaaag atgatcccct caatttcaac gttttcaaca  1440
ttgcctttga ggttctaa                                                1458
<210>38
<211>485
<212>PRT
<213>海滨碱蓬盐地亚种
<400>38
Met Leu Ser Phe Lys Phe Ile Val Glu Lys Cys Lys His Phe Tyr Thr
1               5                   10                  15
Ser Leu Tyr Leu Leu Leu Val Tyr Val Phe Thr Ser Leu Tyr Trp Leu
            20                  25                  30
Ile Ser Lys Ile Tyr Asp Phe Ile Met Val Tyr Val Cys His Leu Ile
        35                  40                  45
Ile Glu Leu Cys Tyr Phe Ile Leu Val Ser Ser Phe Gly Phe Leu Phe
    50                  55                  60
Leu Lys Thr Leu Ile Pro Lys Ser Ser Asn Asn Ser Asn Asn Asn Asn
65                  70                  75                  80
Asn Ser Ile Asn Gly Leu Asp Leu Phe Phe Thr Ser Val Ser Ala Thr
                85                  90                  95
Thr Val Ser Ser Met Ser Thr Leu Glu Met Glu Val Phe Ser Asn Ser
            100                 105                 110
Gln Leu Ile Val Leu Thr Ile Leu Met Phe Ile Gly Gly Glu Val Phe
        115                 120                 125
Thr Ser Met Val Gly Leu His Phe Ser Ala Ser Lys Leu Val Tyr Thr
    130                 135                 140
Pro Leu Gln Ala Arg Ser Arg Val Asn Ser Val Ala Ser Leu Pro Leu
145                 150                 155                 160
Pro Pro Glu Ser Ile Glu Leu Gly Ile Ile Ile Pro Ser Ser Thr Thr
                165                 170                 175
Thr Thr Gln Glu Ile Arg Val Ser Ser Thr Ile Glu Lys Thr Lys Ser
            180                 185                 190
Glu Ile Asp Phe Leu Ile Lys Ser Lys Ser Ile Arg Val Leu Gly Phe
        195                 200                  205
Val Val Leu Ser Tyr Leu Ile Ile Val His Phe Leu Gly Ile Ser Met
    210                 215                 220
Val Leu Thr Tyr Ile Asn Thr Ile Pro Asn Ala Lys Asn Val Leu Asp
225                 230                 235                 240
Lys Lys Gly Leu Lys Thr Phe Thr Phe Ser Ile Phe Ser Val Val Ser
                245                 250                 255
Thr Phe Ala Ser Cys Gly Phe Thr Pro Thr Asn Glu Asn Met Gln Val
            260                 265                 270
Phe Ser Lys Asn Ser Gly Leu Leu Leu Met Leu Ile Pro Gln Ile Leu
        275                 280                 285
Leu Gly Asn Thr Leu Phe Pro Ser Phe Leu Arg Phe Ser Ile Trp Met
    290                 295                 300
Leu Gly Lys Phe Val Lys Lys Asp Glu Thr Lys Tyr Leu Met Arg Asn
305                 310                 315                 320
Ser Lys Glu Ile Glu Tyr His His Leu Leu Ser Ser Lys His Ser Arg
                325                 330                 335
Phe Leu Ile Val Thr Val Leu Gly Phe Ile Leu Val Gln Phe Ile Met
            340                 345                 350
Phe Cys Ser Met Glu Trp Asn Phe Asp Gly Leu Asn Asn Asp His Asn
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    370                 375                 380
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385                 390                 395                 400
Leu Val Ile Phe Ile Val Met Met Tyr Leu Pro Pro Tyr Thr Ser Phe
                405                 4l0                 415
Leu Pro Ile Lys Asp Glu Glu Lys Glu Tyr Pro Asn Met Val Leu Phe
            420                 425                 430
His Lys Gly Glu Lys Lys Arg Lys Lys Ile Leu Lys Ash Phe Leu Phe
        435                 440                 445
Ser Gln Leu Gly His Ile Ala Ile Ser Ser Leu Leu Phe Ala Ser Gln
    450                 455                 460
Arg Ser Lys Arg Leu Lys Met Ile Pro Ser Ile Ser Thr Phe Ser Thr
465                 470                 475                 480
Leu Pro Leu Arg Phe
                485
<210>39
<211>3708
<212>DNA
<213>酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)
<400>39
atgcatttta gaagaacgat gagtagagtg cccacattgg catctcttga aatacgatat     60
aaaaaatctt tcggccataa atttcgtgat tttattgctc tatgtggtca ctattttgct    120
ccagttaaaa aatatatctt ccccagtttt atcgcggttc actacttcta cacgatatcc    180
ctgacattaa taacttcaat cctgctatat cccattaaga ataccagata cattgataca    240
ttgtttttag cagcgggcgc agttacacaa ggtggcttaa atactgtgga tatcaacaat    300
ctaagcttat accaacaaat tgttctgtat atcgtatgct gcatatcaac accaattgca    360
gttcatagtt gcttggcatt tgtacggctt tactggtttg agcgctactt cgatggtatt    420
agagactctt ctagacgaaa ttttaagatg agaagaacga aaacaatctt agaaagggaa    480
ctaacagcaa gaaccatgac caagaataga acaggtaccc aaagaacgtc ttatcctagg    540
aaacaagcta aaacagatga tttccaagaa aaattgttca gcggagaaat ggttaataga    600
gatgagcagg actcagttca cagcgaccag aattctcatg acattagtag ggacagcagc    660
aataataata cgaatcacaa tggtagcagt ggcagtttag atgatttcgt taaggaagac    720
gaaacggatg acaatggaga atatcaggag aacaactcct actcgacggt aggtagttcg    780
tctaacacag ttgcagacga aagtttaaat cagaagccca agccaagcag tcttcggttt    840
gatgagccac acagcaaaca aagacccgca agagttccct cagagaaatt tgcaaaaaga    900
aggggttcaa gagatattag cccagccgat atgtatcgat ccattatgat gctacaaggt    960
aagcatgaag caactgctga agatgaaggt ccccctttag tcatcgggtc ccctgcggat   1020
ggcacaagat ataaaagtaa tgtcaataag ctaaagaagg ccaccggcat aaatggtaac   1080
aaaatcaaga ttcgagataa gggaaatgaa agtaacactg atcaaaattc cgtgtcaagt   1140
gaagcaaaca gtacggcgag cgtttcggac gaaagctcgt tacacacaaa ttttggtaac   1200
aaagtacctt cattaagaac aaatactcat agatcaaatt cgggcccgat agccattact   1260
gataacgcag aaacagacaa aaagcatggg ccatcaattc aattcgatat aactaaacct   1320
cctagaaaaa tttcaaaaag agtttcaacc ttcgatgatt tgaacccaaa atcttccgtt   1380
ctttatcgaa aaaaagcatc gaagaagtac ctcatgaaac attttcctaa agcgcggcga   1440
atacggcaac aaattaagag aaggctttct actggttcaa ttgagaaaaa cagcagtaac   1500
aatgtttcag atagaaaacc tattactgat atggatgatg atgatgatga cgatgacaac   1560
gacggcgata acaacgaaga atactttgct gacaacgaaa gcggcgatga agatgaacga   1620
gtacagcagt ctgaaccaca ttctgattca gaactcaaat cgcaccaaca acagcaagaa   1680
aaacaccaac tgcagcagaa cctgcaccgc atgtataaaa ccaaatcatt tgatgataat   1740
cgttcaagag cagttcctat ggaacgttcc aggaccatcg atatggcaga ggctaaggat   1800
ctaaatgagc tcgcaaggac gcctgatttt caaaaaatgg tctatcaaaa ttggaaagcc  1860
catcatagaa aaaaaccgaa ctttaggaag aggggatgga ataacaagat atttgaacat  1920
ggtccctatg catctgacag cgatcgcaat tatcctgata atagtaatac tggaaacagt  1980
attcttcatt acgcagagtc tattttacat catgatggct ctcataaaaa tggaagcgaa  2040
gaagcctctt ccgactctaa tgagaatatc tattccacga atggaggaag cgaccacaat  2100
ggtcttaaca actatcctac ttacaacgac gatgaagaag gctattatgg tttacatttc  2160
gataccgatt atgacctaga tcctcgtcat gatttatcta aaggcagtgg taaaacgtat  2220
ctatcatggc aaccaactat tggacgtaac tcaaacttcc ttggattaac aagagcccag  2280
aaagatgaat taggtggtgt cgagtacaga gcaatcaaac ttttatgcac catattggtt  2340
gtctactacg ttggatggca tattgttgct tttgttatgt tagtaccttg gattattttg  2400
aaaaagcatt atagtgaagt tgttagagat gatggtgttt cacctacatg gtggggattt  2460
tggacagcaa tgagtgcatt taatgattta ggtttgacat taactccaaa ttcaatgatg  2520
tcgtttaaca aagctgtata cccattgatc gttatgattt ggtttatcat tatcggaaat  2580
acagggtttc ccatccttct tagatgcatc atttggataa tgtttaaaat ttctcctgat  2640
ttatcacaga tgagagaaag tttaggtttt ctcttagacc atccacgtcg ttgtttcacc  2700
ttgctatttc ctaaggcagc tacatggtgg ctacttttaa cgcttgcagg attgaatata  2760
actgattgga ttttatttat tattctagat tttggctcaa cagttgtgaa atcattatcg  2820
aaaggctata gagtccttgt cggcctgttt caatctgtta gcacaagaac tgctggattc  2880
agcgttgtcg atttaagtca actgcatcct tctatccaag tctcctatat gctaatgatg  2940
tatgtctccg tattaccatt ggccatctct attcgacgga caaatgttta cgaggagcaa  3000
tctttaggac tatatggaga tatgggggga gaaccagaag atacggatac tgaagacgat  3060
ggtaacgatg aagatgacga cgaggaaaac gagagtcacg aaggtcaaag tagtcaaaga  3120
agtagttcga acaacaacaa caataacaac aggaaaaaga aaaagaaaaa gaaaactgaa  3180
aatccaaatg aaatatctac aaaatccttt atcggtgccc atttaaggaa acagctttca  3240
tttgacttgt ggtttctatt tttagggtta tttatcattt gcatttgtga aggggacaag  3300
ataaaggacg tacaagaacc aaactttaat atatttgcaa ttctttttga aattgttagc  3360
gcttacggta cagttgggct atcgctaggt tatccggaca ccaaccaatc gttttcaaga  3420
cagtttacta cattatctaa gttggtgatc atagctatgc tgatcagagg caagaataga  3480
ggtctaccat actcactgga tcgtgcaatt atcttgccta gtgatagact tgaacatatt  3540
gaccaccttg agggcatgaa attgaagaga caggctagaa ccaatacaga agacccaatg  3600
acggaacatt tcaagagaag tttcactgat gtgaaacatc gttggggagc tcttaagcgt  3660
aagaccacac attcccgaaa tcctaaaagg agcagcacaa cgctctaa               3708
<210>40
<211>1235
<212>PRT
<213>酿酒酵母
<400>40
Met His Phe Arg Arg Thr Met Ser Arg Val Pro Thr Leu Ala Ser Leu
1               5                   10                  15
Glu Ile Arg Tyr Lys Lys Ser Phe Gly His Lys Phe Arg Asp Phe Ile
            20                  25                  30
Ala Leu Cys Gly His Tyr Phe Ala Pro Val Lys Lys Tyr Ile Phe Pro
        35                  40                  45
Ser Phe Ile Ala Val His Tyr Phe Tyr Thr Ile Ser Leu Thr Leu Ile
    50                  55                  60
Thr Ser Ile Leu Leu Tyr Pro Ile Lys Asn Thr Arg Tyr Ile Asp Thr
65                  70                  75                  80
Leu Phe Leu Ala Ala Gly Ala Val Thr Gln Gly Gly Leu Asn Thr Val
                85                  90                  95
Asp Ile Asn Asn Leu Ser Leu Tyr Gln Gln Ile Val Leu Tyr Ile Val
            100                 105                 110
Cys Cys Ile Ser Thr Pro Ile Ala Val His Ser Cys Leu Ala Phe Val
        115                 120                 125
Arg Leu Tyr Trp Phe Glu Arg Tyr Phe Asp Gly Ile Arg Asp Ser Ser
    130                 135                 140
Arg Arg Asn Phe Lys Met Arg Arg Thr Lys Thr Ile Leu Glu Arg Glu
145                 150                 155                 160
Leu Thr Ala Arg Thr Met Thr Lys Asn Arg Thr Gly Thr Gln Arg Thr
                165                 170                 175
Ser Tyr Pro Arg Lys Gln Ala Lys Thr Asp Asp Phe Gln Glu Lys Leu
            180                 185                 190
Phe Ser Gly Glu Met Val Asn Arg Asp Glu Gln Asp Ser Val His Ser
        195                 200                 205
Asp Gln Asn Ser His Asp Ile Ser Arg Asp Ser Ser Asn Asn Asn Thr
    210                 215                 220
Asn His Asn Gly Ser Ser Gly Ser Leu Asp Asp Phe Val Lys Glu Asp
225                 230                 235                 240
Glu Thr Asp Asp Asn Gly Glu Tyr Gln Glu Asn Asn Ser Tyr Ser Thr
                245                 250                 255
Val Gly Ser Ser Ser Asn Thr Val Ala Asp Glu Ser Leu Asn Gln Lys
            260                 265                 270
Pro Lys Pro Ser Ser Leu Arg Phe Asp Glu Pro His Ser Lys Gln Arg
        275                 280                 285
Pro Ala Arg Val Pro Ser Glu Lys Phe Ala Lys Arg Arg Gly Ser Arg
    290                 295                 300
Asp Ile Ser Pro Ala Asp Met Tyr Arg Ser Ile Met Met Leu Gln Gly
305                 310                 315                 320
Lys His Glu Ala Thr Ala Glu Asp Glu Gly Pro Pro Leu Val Ile Gly
                325                 330                 335
Ser Pro Ala Asp Gly Thr Arg Tyr Lys Ser Asn Val Asn Lys Leu Lys
            340                 345                 350
Lys Ala Thr Gly Ile Asn Gly Asn Lys Ile Lys Ile Arg Asp Lys Gly
        355                 360                 365
Asn Glu Ser Asn Thr Asp Gln Asn Ser Val Ser Ser Glu Ala Asn Ser
    370                 375                 380
Thr Ala Ser Val Ser Asp Glu Ser Ser Leu His Thr Asn Phe Gly Asn
385                 390                 395                 400
Lys Val Pro Ser Leu Arg Thr Asn Thr His Arg Ser Asn Ser Gly Pro
                405                 410                 415
Ile Ala Ile Thr Asp Asn Ala Glu Thr Asp Lys Lys His Gly Pro Ser
            420                 425                 430
Ile Gln Phe Asp Ile Thr Lys Pro Pro Arg Lys Ile Ser Lys Arg Val
        435                 440                 445
Ser Thr Phe Asp Asp Leu Asn Pro Lys Ser Ser Val Leu Tyr Arg Lys
    450                 455                 460
Lys Ala Ser Lys Lys Tyr Leu Met Lys His Phe Pro Lys Ala Arg Arg
465                 470                 475                 480
Ile Arg Gln Gln Ile Lys Arg Arg Leu Ser Thr Gly Ser Ile Glu Lys
                485                 490                 495
Asn Ser Ser Asn Asn Val Ser Asp Arg Lys Pro Ile Thr Asp Met Asp
            500                 505                 510
Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asn Asp Gly Asp Asn Asn Glu Glu Tyr
        515                 520                 525
Phe Ala Asp Asn Glu Ser Gly Asp Glu Asp Glu Arg Val Gln Gln Ser
    530                 535                 540
Glu Pro His Ser Asp Ser Glu Leu Lys Ser His Gln Gln Gln Gln Glu
545                 550                 555                 560
Lys His Gln Leu Gln Gln Asn Leu His Arg Met Tyr Lys Thr Lys Ser
                565                 570                 575
Phe Asp Asp Asn Arg Ser Arg Ala Val Pro Met Glu Arg Ser Arg Thr
            580                 585                 590
Ile Asp Met Ala Glu Ala Lys Asp Leu Asn Glu Leu Ala Arg Thr Pro
        595                 600                 605
Asp Phe Gln Lys Met Val Tyr Gln Asn Trp Lys Ala His His Arg Lys
    610                 615                 620
Lys Pro Asn Phe Arg Lys Arg Gly Trp Asn Asn Lys Ile Phe Glu His
625                 630                 635                 640
Gly Pro Tyr Ala Ser Asp Ser Asp Arg Asn Tyr Pro Asp Asn Ser Asn
                645                 650                 655
Thr Gly Asn Ser Ile Leu His Tyr Ala Glu Ser Ile Leu His His Asp
            660                 665                 670
Gly Ser His Lys Asn Gly Ser Glu Glu Ala Ser Ser Asp Ser Asn Glu
        675                 680                 685
Asn Ile Tyr Ser Thr Asn Gly Gly Ser Asp His Asn Gly Leu Asn Asn
    690                 695                 700
Tyr Pro Thr Tyr Asn Asp Asp Glu Glu Gly Tyr Tyr Gly Leu His Phe
705                 710                 715                 720
Asp Thr Asp Tyr Asp Leu Asp Pro Arg His Asp Leu Ser Lys Gly Ser
                725                 730                 735
Gly Lys Thr Tyr Leu Ser Trp Gln Pro Thr Ile Gly Arg Asn Ser Asn
            740                 745                 750
Phe Leu Gly Leu Thr Arg Ala Gln Lys Asp Glu Leu Gly Gly Val Glu
        755                 760                 765
Tyr Arg Ala Ile Lys Leu Leu Cys Thr Ile Leu Val Val Tyr Tyr Val
    770                 775                 780
Gly Trp His Ile Val Ala Phe Val Met Leu Val Pro Trp Ile Ile Leu
785                 790                 795                 800
Lys Lys His Tyr Ser Glu Val Val Arg Asp Asp Gly Val Ser Pro Thr
                805                 810                 815
Trp Trp Gly Phe Trp Thr Ala Met Ser Ala Phe Asn Asp Leu Gly Leu
            820                 825                 830
Thr Leu Thr Pro Asn Ser Met Met Ser Phe Asn Lys Ala Val Tyr Pro
        835                 840                 845
Leu Ile Val Met Ile Trp Phe Ile Ile Ile Gly Asn Thr Gly Phe Pro
    850                 855                 860
Ile Leu Leu Arg Cys Ile Ile Trp Ile Met Phe Lys Ile Ser Pro Asp
865                 870                 875                 880
Leu Ser Gln Met Arg Glu Ser Leu Gly Phe Leu Leu Asp His Pro Arg
                885                 890                 895
Arg Cys Phe Thr Leu Leu Phe Pro Lys Ala Ala Thr Trp Trp Leu Leu
            900                 905                 910
Leu Thr Leu Ala Gly Leu Asn Ile Thr Asp Trp Ile Leu Phe Ile Ile
        915                 920                 925
Leu Asp Phe Gly Ser Thr Val Val Lys Ser Leu Ser Lys Gly Tyr Arg
    930                 935                 940
Val Leu Val Gly Leu Phe Gln Ser Val Ser Thr Arg Thr Ala Gly Phe
945                 950                 955                 960
Ser Val Val Asp Leu Ser Gln Leu His Pro Ser Ile Gln Val Ser Tyr
                965                 970                 975
Met Leu Met Met Tyr Val Ser Val Leu Pro Leu Ala Ile Ser Ile Arg
            980                 985                 990
Arg Thr Asn Val Tyr Glu Glu Gln Ser Leu Gly Leu Tyr Gly Asp Met
        995                 1000                 1005
Gly Gly Glu Pro Glu Asp Thr Asp Thr Glu Asp Asp Gly Asn Asp
    1010                1015                1020
Glu Asp Asp Asp Glu Glu Asn Glu Ser His Glu Gly Gln Ser Ser
    1025                1030                1035
Gln Arg Ser Ser Ser Asn Asn Asn Asn Asn Asn Asn Arg Lys Lys
    1040                1045                1050
Lys Lys Lys Lys Lys Thr Glu Asn Pro Asn Glu Ile Ser Thr Lys
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Ser Phe Ile Gly Ala His Leu Arg Lys Gln Leu Ser Phe Asp Leu
    1070                1075                1080
Trp Phe Leu Phe Leu Gly Leu Phe Ile Ile Cys Ile Cys Glu Gly
    1085                1090                1095
Asp Lys Ile Lys Asp Val Gln Glu Pro Asn Phe Asn Ile Phe Ala
    1100                1105                1110
Ile Leu Phe Glu Ile Val Ser Ala Tyr Gly Thr Val Gly Leu Ser
    1115                1120                1125
Leu Gly Tyr Pro Asp Thr Asn Gln Ser Phe Ser Arg Gln Phe Thr
    1130                1135                1140
Thr Leu Ser Lys Leu Val Ile Iie Ala Met Leu Ile Arg Gly Lys
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Asn Arg Gly Leu Pro Tyr Ser Leu Asp Arg Ala Ile Ile Leu Pro
    1160                1165                1170
Ser Asp Arg Leu Glu His Ile Asp His Leu Glu Gly Met Lys Leu
    1175                1180                1185
Lys Arg Gln Ala Arg Thr Asn Thr Glu Asp Pro Met Thr Glu His
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Phe Lys Arg Ser Phe Thr Asp Val Lys His Arg Trp Gly Ala Leu
    1205                1210                1215
Lys Arg Lys Thr Thr His Ser Arg Asn Pro Lys Arg Ser Ser Thr
    1220                1225                1230
Thr Leu
    1235
<210>41
<211>2670
<212>DNA
<213>酿酒酵母
<400>41
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ttggtgcaca agaaatcatg gggccatcgg ctaagagact tcatttccgg gttcttaaaa    120
tcatgcagac ccattgctaa atacgttttc cccaacttca tcgtggtgca ctatatctac    180
ctgatcacgc tgtcgattat cgggtccatt ctgttatatc cgtgcaagaa cacggcgttc    240
atcgatgtgc tatttctggc tgctggagcg tctacacagg gcgggctggc caccaagagc    300
actaacgatt tcaacctgta ccagcagata gtggtgtacg tcattacatt gctgtccacg    360
cctatactta ttcatgggtt tttggccttt gtcaggctgt attggtttga aaggtacttc    420
gacaacatta gggatatctc caaacagaat tttaaactaa gaaggaccat gacgttgcaa    480
caaagggaac tatcgggcag cagtggcaat gccgctcgaa gtaggagttt caaggacaac    540
ctgttccgtg ggaagtttgt ttccagagaa gacccacgac aatccgcttc agatgtgccg    600
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accaagaaga aaaaaatatc tagaacgcaa tcatgtaaca tcccaacgta tactgcttca   1080
ccgagtccta aaacctcagg ccaagtagtt gaaaatcata gaaacttggc caagtcggcg   1140
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agaacaatga gcaccaacta tctatcgtgg cagccaacct ttggcagaaa ctccgtcttc   1320
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tctccaacct ggtgggggtt tttcactgca atgagtgcat tcagcaactt gggtctgtct  1560
ttgaccgctg attcaatggt ttcctttgat actgcgccgt atccgctgat tttcatgatg  1620
ttcttcatca tcataggcaa tacaggcttc ccaattatgt tacgatttat catttggatc  1680
atgttcaaga cctcgagaga cctatctcag tttaaggaaa gtcttgggtt tctcttggat  1740
catccgcgca ggtgttttac gttgctgttc cccagcggcc ccacatggtg gctgtttaca  1800
actttagtcg tcttaaacgc tacggattgg attcttttca taattctgga tttcaactcc  1860
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gtgtcttata tgctaatgat gtacgtttcg gtcctgccgc tggcgatttc cattagaaga  2040
acgaatgttt atgaggagca atcgttggga ctatacgata gtggacaaga tgacgaaaat  2100
atcacccacg aagacgatat aaaggaaaca gaccatgatg gcgaatccga agagcgagac  2160
actgtatcta caaagtccaa gccgaagaaa cagtccccaa aatcgtttgt tggtgctcat  2220
ttgaggaggc aactctcttt tgatttatgg tacctattcc ttggattatt tataatatgc  2280
atatgcgagg gcagaaaaat cgaagacgtt aataaacctg atttcaatgt ctttgctata  2340
ttgtttgaag ttgttagcgc ttatggtaca gtgggtttgt cattgggtta cccaaacacc  2400
aacacatcac tatctgccca gttcaccgta ttatcgaagc tagtcataat tgccatgcta  2460
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gacaaactgg aacaaattga tcgtttacaa gatatgaaag ctaagggtaa gttgttagcc  2580
aaagttggtg aggatccaat gactacttac gtcaaaaaga gatcccacaa actgaaaaaa  2640
atagcaacaa agttttgggg gaagcattaa                                   2670
<210>42
<211>889
<212>PRT
<213>酿酒酵母
<400>42
Met Pro Thr Ala Lys Arg Thr Ser Ser Arg Ala Ser Leu Ala Leu Pro
1               5                   10                  15
Phe Gln Leu Arg Leu Val His Lys Lys Ser Trp Gly His Arg Leu Arg
            20                  25                  30
Asp Phe Ile Ser Gly Phe Leu Lys Ser Cys Arg Pro Ile Ala Lys Tyr
        35                  40                  45
Val Phe Pro Asn Phe Ile Val Val His Tyr Ile Tyr Leu Ile Thr Leu
    50                      55              60
Ser Ile Ile Gly Ser Ile Leu Leu Tyr Pro Cys Lys Ash Thr Ala Phe
65                  70                  75                  80
Ile Asp Val Leu Phe Leu Ala Ala Gly Ala Ser Thr Gln Gly Gly Leu
                85                  90                  95
Ala Thr Lys Ser Thr Asn Asp Phe Asn Leu Tyr Gln Gln Ile Val Val
            100                 105                 110
Tyr Val Ile Thr Leu Leu Ser Thr Pro Ile Leu Ile His Gly Phe Leu
        115                 120                 125
Ala Phe Val Arg Leu Tyr Trp Phe Glu Arg Tyr Phe Asp Asn Ile Arg
    130                 135                 140
Asp Ile Ser Lys Gln Asn Phe Lys Leu Arg Arg Thr Met Thr Leu Gln
145                 150                 155                 160
Gln Arg Glu Leu Ser Gly Ser Ser Gly Asn Ala Ala Arg Ser Arg Ser
                165                 170                 175
Phe Lys Asp Asn Leu Phe Arg Gly Lys Phe Val Ser Arg Glu Asp Pro
            180                 185                 190
Arg Gln Ser Ala Ser Asp Val Pro Met Asp Ser Pro Asp Thr Ser Ala
        195                 200                 205
Leu Ser Ser Ile Ser Pro Leu Asn Val Ser Ser Ser Lys Glu Glu Ser
    210                 215                 220
Ser Asp Thr Gln Ser Ser Pro Pro Asn Phe Ser Ser Lys Arg Gln Pro
225                 230                 235                 240
Ser Asp Val Asp Pro Arg Asp Ile Tyr Lys Ser Ile Met Met Leu Gln
                245                 250                 255
Lys Gln Gln Glu Lys Ser Asn Ala Asn Ser Thr Asp Ser Phe Ser Ser
            260                 265                 270
Glu Thr Asn Gly Pro Ala Phe Ile Val Gln Glu Arg His Glu Arg Arg
        275                 280                 285
Ala Pro His Cys Ser Leu Lys Arg His Ser Val Leu Pro Ser Ser Gln
    290                 295                 300
Glu Leu Asn Lys Leu Ala Gln Thr Lys Ser Phe Gln Lys Leu Leu Gly
305                 310                 315                 320
Leu Arg Arg Asp Glu Gly Asp His Asp Tyr Phe Asp Gly Ala Pro His
                325                 330                 335
Lys Tyr Met Val Thr Lys Lys Lys Lys Ile Ser Arg Thr Gln Ser Cys
            340                 345                 350
Asn Ile Pro Thr Tyr Thr Ala Ser Pro Ser Pro Lys Thr Ser Gly Gln
        355                 360                 365
Val Val Glu Asn His Arg Asn Leu Ala Lys Ser Ala Pro Ser Ser Phe
    370                 375                 380
Val Asp Glu Glu Met Ser Phe Ser Pro Gln Glu Ser Leu Asn Leu Gln
385                 390                 395                 400
Phe Gln Ala His Pro Pro Lys Pro Lys Arg Arg Glu Gly Asp Ile Gly
                405                 410                 415
His Pro Phe Thr Arg Thr Met Ser Thr Asn Tyr Leu Ser Trp Gln Pro
            420                 425                 430
Thr Phe Gly Arg Asn Ser Val Phe Ile Gly Leu Thr Lys Gln Gln Lys
        435                 440                 445
Glu Glu Leu Gly Gly Val Glu Tyr Arg Ala Leu Arg Leu Leu Cys Cys
    450                 455                 460
Ile Leu Met Val Tyr Tyr Ile Gly Phe Asn Ile Leu Ala Phe Val Thr
465                 470                 475                 480
Ile Val Pro Trp Ala Cys Thr Arg His His Tyr Ser Glu Ile Ile Arg
                485                 490                 495
Arg Asn Gly Val Ser Pro Thr Trp Trp Gly Phe Phe Thr Ala Met Ser
            500                 505                 510
Ala Phe Ser Asn Leu Gly Leu Ser Leu Thr Ala Asp Ser Met Val Ser
        515                 520                 525
Phe Asp Thr Ala Pro Tyr Pro Leu Ile Phe Met Met Phe Phe Ile Ile
    530                 535                 540
Ile Gly Asn Thr Gly Phe Pro Ile Met Leu Arg Phe Ile Ile Trp Ile
545                 550                 555                 560
Met Phe Lys Thr Ser Arg Asp Leu Ser Gln Phe Lys Glu Ser Leu Gly
                565                 570                 575
Phe Leu Leu Asp His Pro Arg Arg Cys Phe Thr Leu Leu Phe Pro Ser
            580                 585                 590
Gly Pro Thr Trp Trp Leu Phe Thr Thr Leu Val Val Leu Asn Ala Thr
        595                 600                 605
Asp Trp Ile Leu Phe Ile Ile Leu Asp Phe Asn Ser Ala Val Val Arg
    610                 615                 620
Gln Val Ala Lys Gly Tyr Arg Ala Leu Met Gly Leu Phe Gln Ser Val
625                 630                 635                 640
Cys Thr Arg Thr Ala Gly Phe Asn Val Val Asp Leu Ser Lys Leu His
                645                 650                 655
Pro Ser Ile Gln Val Ser Tyr Met Leu Met Met Tyr Val Ser Val Leu
            660                 665                 670
Pro Leu Ala Ile Ser Ile Arg Arg Thr Asn Val Tyr Glu Glu Gln Ser
        675                 680                 685
Leu Gly Leu Tyr Asp Ser Gly Gln Asp Asp Glu Asn Ile Thr His Glu
    690                 695                 700
Asp Asp Ile Lys Glu Thr Asp His Asp Gly Glu Ser Glu Glu Arg Asp
705                 710                 715                 720
Thr Val Ser Thr Lys Ser Lys Pro Lys Lys Gln Ser Pro Lys Ser Phe
                725                 730                 735
Val Gly Ala His Leu Arg Arg Gln Leu Ser Phe Asp Leu Trp Tyr Leu
            740                 745                 750
Phe Leu Gly Leu Phe Ile Ile Cys Ile Cys Glu Gly Arg Lys Ile Glu
        755                 760                 765
Asp Val Asn Lys Pro Asp Phe Asn Val Phe Ala Ile Leu Phe Glu Val
    770                 775                 780
Val Ser Ala Tyr Gly Thr Val Gly Leu Ser Leu Gly Tyr Pro Asn Thr
785                 790                 795                 800
Ash Thr Ser Leu Ser Ala Gln Phe Thr Val Leu Ser Lys Leu Val Ile
                805                 810                 815
Ile Ala Met Leu Ile Arg Gly Arg Asn Arg Gly Leu Pro Tyr Thr Leu
            820                 825                 830
Asp Arg Ala Ile Met Leu Pro Ser Asp Lys Leu Glu Gln Ile Asp Arg
        835                 840                 845
Leu Gln Asp Met Lys Ala Lys Gly Lys Leu Leu Ala Lys Val Gly Glu
    850                 855                 860
Asp Pro Met Thr Thr Tyr Val Lys Lys Arg Ser His Lys Leu Lys Lys
865                 870                 875                 880
Ile Ala Thr Lys Phe Trp Gly Lys His
                885
<210>43
<211>3726
<212>DNA
<213>葡萄汁酵母(Saccharomyces uvarum)
<400>43
atgcacatta gagggaccat gagcagagtg cccacattag catcgttcga agtacgatac     60
aaaaaatcct tcggccacaa atttcgtgat ttcattgctc tatgtggcca ctattgctcc    120
ccaattaaaa aatatatttt ccctaatttt atcgcagtcc attatttcta tacgatagtc    180
ctcacgctaa taacctctat tctgttgtat ccagttaaga acatcagata tatcgacgct     240
ttgtttttgg cagcaggtgc ggtcactcaa ggtggtttga atactgtgga tgtcaacaat     300
ctaaccttat atcaacagat tattttgtac attatatgct gcatatcaac gcccattgcc     360
gttcatagtt gtttggcatt cgtaagactc tattggtttg aacgttattt tgacggtatt     420
agagactcgt ccaggctaaa tttcaaaatg agaagaacaa agacaatctt ggaaagggaa     480
ctaaccgcta gaaccatgac caaaagtaag acaggaggga ctcaaagagt gtcacgtccc     540
gggaaatcag acaagagaga cgatttccaa gaaaaattgt ttaatggaga aatggttaat     600
agagatgagc aggactcggt tcatagtagc cacaattctc gtgatagtaa tagcaatgcc     660
aataccaata gtagcaacaa taatagcatc aaccacaatg gtagtagtgg cagtttggat     720
gattatgtta gggaagacaa agcggatgag gtcgaaaaat accacggaaa taagtcctat     780
tcaagtgtag gtagttcgtc caatacagcc acagatgaaa atataagtca aaaattaaag     840
ccaagtagtc ttcgattcga tgagtcgcaa aataaaagaa aacgtacggg agccccttca     900
gaaaaatttg ccaaaaggag aggttcaaga gatatcactc ctgaagatat gtatcgatcc     960
attatgatgc tacaaggtga gcacgagggt actgcagaag atgaaggtcc acctttagtt    1020
attggatcgc ctacggatgg tacaagaaat atggacaacg gtagtgagtc aaagtctgct    1080
cccacgatga atgagagtaa aatcaggatt caggataaag gagctaaaat tagccttgac    1140
caggactccg tattacatag ttcaaattct tccgcatgca cttcggatga ggattctcta    1200
cctacaaatt ttggaggcac aacaccttca ttgagcgcaa agccacggga atcaagttca    1260
ggcccaatag cgttcactga aggggaaaat gctgatagaa aacaaggccc atcgattcag    1320
ttcaatatca ctaaaccgcc aaggaaggct tctaaatcga agagggtttc tactatggat    1380
gacttgaacc caagatcaat ttttccgcat caaaaaaaat catcgaaagg atacataatg    1440
aaacatttgc cgaaagcccg tcgaatacgg cagcagatta aaagaagact ttccacgggt    1500
tcgatcgata aaaacagtag cagtgacgct ctcgatagag ggctcatttc tggtctaaat    1560
gatgatgatg atggcaacga aggtgataac atggaagagt actttgccga caacgaaagt    1620
ggggatgaag atgaccgaat gcagcaatct gaaccacagt ctggatcaga acttaaattg    1680
aaacaacagc aacagcacca attgcagcaa aacctgcatc gtatgtacaa gacgaaatct    1740
tttgacgata atcgttcaaa acctgtcctc atggaaaggt ctaagactat cgatatggct    1800
gaagctagag atttaaatga acttgccagg actcctgact ttcaaaaaat ggtttataag    1860
aattggaaag cccatcatag aaataaacct aacttcaaaa gaaggggctg gaatggcaag    1920
atgtttgaac atggtcctta tacatctgac agcgaccata attatcagga taatggaaat    1980
aatagtaata gtatagttca ctacgcagaa tctattctac atcgtgataa ttctcataga    2040
aatggaagcg aagatgtttc ttcagattct aatgagacca cctatccttt gaatggaaac    2100
aatgatcaca gccaaaacga tgctaatggc tatcccacct acaacgatga agaggaaggc    2160
tattacggtt tacatttcga ttctgattat aacttggatc ctcaccatgc tctatccagt    2220
aacgctagca aaaactactt gtcatggcaa ccaaccattg gacgtaattc aaactttctt    2280
gggttgacaa gagcccaaaa ggacgaattg ggtggtgtcg agtacagagc catcaaacta    2340
ctatgtacca tattggttgt ctattatgtt ggatggcaca tcgtctcttt tgttatgttg    2400
gtgccttgga ttaacttgaa aaagcactat agcgatattg tcagaagcga tggcgtttca    2460
cctacatggt ggggtttttg gacagcaatg agtgccttca acgatttggg attaacatta    2520
accccggact caatgatgtc atttgataaa gctgtatatc ccttgatcgt tatgatttgg    2580
tttatcatta ttggaaatac agggtttccc atccttctta gatgcattat ttggataatg    2640
ttcaaacttt cccctgattt gtcacagatg agagagagtt taggctttct tttagatcac    2700
ccgcgtcgtt gttttactct attatttcca aaggctgcca catggtggct gcttttgacg    2760
cttgtgggac taaattttac agattggatc ttatttatta ttttggattt tggatcaact    2820
gtagttaaat cgttatcaaa aggttataga gttcttgttg gtttattcca atctgtcagt    2880
acgaggaccg ccggtttcag tgtcgttgat ttgagtcagt tacacccctc tatccaagtc    2940
tcctatatgc ttatgatgta tgtctccgtg ttgccattag ctatttctat tagacggaca    3000
aatgtttacg aggagcaatc tttgggactg tatggagaaa tgggaggtaa accagaagat    3060
actgatactg aagaggacgg cgactgcgat gatgaagatg acgacaacga agaagaggag    3120
agccatgaag gtggaagtag ccaaaggggc aaatcaaaga aagaaacaaa aaagaaaaaa    3180
aagagaaaag aaaatgagaa ccccaacgaa gaatcaacca agtccttcat tggtgcgcat    3240
ttaagaagac agctatcttt tgatttatgg tttttgtttc ttgggctatt tatcatttgt    3300
atctgcgaac gtgacaagat aaaagacatc cagagaccga acttcaatgt atttacaatt  3360
ctttttgaga ttgtaagcgc ttatggtaca gtcggactat cattgggcta tccgaacact  3420
aaccaatcat tttcaagaca gttaaccaca ttatctaaat taatcatcat agctatgctg  3480
attagaggta agaatagagg tctgccctat tctttggacc gtgctattat cctgccaagt  3540
gatagacttg aacatattga tcacattgag gacttgaaat tgaagagaca ggccagaacc  3600
gatacggatg atccgatgac ggagcatctc aagagaagca ttagcgatgc caaacatcgt  3660
tgggacgaac ttaaacacaa gagaagcctt tcccggagtt cgaaaagaag caccaaaacc  3720
aactaa                                                             3726
<210>44
<211>1241
<212>PRT
<213>葡萄汁酵母
<400>44
Met His Ile Arg Gly Thr Met Ser Arg Val Pro Thr Leu Ala Ser Phe
1               5                   10                  15
Glu Val Arg Tyr Lys Lys Ser Phe Gly His Lys Phe Arg Asp Phe Ile
            20                  25                  30
Ala Leu Cys Gly His Tyr Cys Ser Pro Ile Lys Lys Tyr Ile Phe Pro
        35                  40                  45
Asn Phe Ile Ala Val His Tyr Phe Tyr Thr Ile Val Leu Thr Leu Ile
    50                  55                  60
Thr Ser Ile Leu Leu Tyr Pro Val Lys Asn Ile Arg Tyr Ile Asp Ala
65                  70                  75                  80
Leu Phe Leu Ala Ala Gly Ala Val Thr Gln Gly Gly Leu Asn Thr Val
                85                  90                  95
Asp Val Asn Asn Leu Thr Leu Tyr Gln Gln Ile Ile Leu Tyr Ile Ile
            100                 105                 110
Cys Cys Ile Ser Thr Pro Ile Ala Val His Ser Cys Leu Ala Phe Val
        115                 120                 125
Arg Leu Tyr Trp Phe Glu Arg Tyr Phe Asp Gly Ile Arg Asp Ser Ser
    130                 135                 140
Arg Leu Asn Phe Lys Met Arg Arg Thr Lys Thr Ile Leu Glu Arg Glu
145                 150                 155                 160
Leu Thr Ala Arg Thr Met Thr Lys Ser Lys Thr Gly Gly Thr Gln Arg
                165                 170                 175
Val Ser Arg Pro Gly Lys Ser Asp Lys Arg Asp Asp Phe Gln Glu Lys
            180                 185                 190
Leu Phe Asn Gly Glu Met Val Asn Arg Asp Glu Gln Asp Ser Val His
        195                 200                 205
Ser Ser His Asn Ser Arg Asp Ser Asn Ser Asn Ala Asn Thr Asn Ser
    210                 215                 220
Ser Asn Asn Asn Ser Ile Asn His Asn Gly Ser Ser Gly Ser Leu Asp
225                 230                 235                 240
Asp Tyr Val Arg Glu Asp Lys Ala Asp Glu Val Glu Lys Tyr His Gly
                245                 250                 255
Asn Lys Ser Tyr Ser Ser Val Gly Ser Ser Ser Asn Thr Ala Thr Asp
            260                 265                 270
Glu Asn Ile Ser Gln Lys Leu Lys Pro Ser Ser Leu Arg Phe Asp Glu
        275                 280                 285
Ser Gln Asn Lys Arg Lys Arg Thr Gly Ala Pro Ser Glu Lys Phe Ala
    290                 295                 300
Lys Arg Arg Gly Ser Arg Asp Ile Thr Pro Glu Asp Met Tyr Arg Ser
305                 310                 315                 320
Ile Met Met Leu Gln Gly Glu His Glu Gly Thr Ala Glu Asp Glu Gly
                325                 330                 335
Pro Pro Leu Val Ile Gly Ser Pro Thr Asp Gly Thr Arg Asn Met Asp
            340                 345                 350
Asn Gly Ser Glu Ser Lys Ser Ala Pro Thr Met Asn Glu Ser Lys Ile
        355                 360                 365
Arg Ile Gln Asp Lys Gly Ala Lys Ile Ser Leu Asp Gln Asp Ser Val
    370                 375                 380
Leu His Ser Ser Asn Ser Ser Ala Cys Thr Ser Asp Glu Asp Ser Leu
385                 390                 395                 400
Pro Thr Asn Phe Gly Gly Thr Thr Pro Ser Leu Ser Ala Lys Pro Arg
                405                 410                 415
Glu Ser Ser Ser Gly Pro Ile Ala Phe Thr Glu Gly Glu Asn Ala Asp
            420                 425                 430
Arg Lys Gln Gly Pro Ser Ile Gln Phe Asn Ile Thr Lys Pro Pro Arg
        435                 440                 445
Lys Ala Ser Lys Ser Lys Arg Val Ser Thr Met Asp Asp Leu Asn Pro
    450                 455                 460
Arg Ser Ile Phe Pro His Gln Lys Lys Ser Ser Lys Gly Tyr Ile Met
465                 470                 475                 480
Lys His Leu Pro Lys Ala Arg Arg Ile Arg Gln Gln Ile Lys Arg Arg
                485                 490                 495
Leu Ser Thr Gly Ser Ile Asp Lys Asn Ser Ser Ser Asp Ala Leu Asp
            500                 505                 510
Arg Gly Leu Ile Ser Gly Leu Asn Asp Asp Asp Asp Gly Asn Glu Gly
        515                 520                 525
Asp Asn Met Glu Glu Tyr Phe Ala Asp Asn Glu Ser Gly Asp Glu Asp
    530                 535                 540
Asp Arg Met Gln Gln Ser Glu Pro Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Leu
545                 550                 555                 560
Lys Gln Gln Gln Gln His Gln Leu Gln Gln Asn Leu His Arg Met Tyr
                565                 570                 575
Lys Thr Lys Ser Phe Asp Asp Asn Arg Ser Lys Pro Val Leu Met Glu
            580                 585                 590
Arg Ser Lys Thr Ile Asp Met Ala Glu Ala Arg Asp Leu Asn Glu Leu
        595                 600                 605
Ala Arg Thr Pro Asp Phe Gln Lys Met Val Tyr Lys Asn Trp Lys Ala
    610                 615                 620
His His Arg Asn Lys Pro Asn Phe Lys Arg Arg Gly Trp Asn Gly Lys
625                 630                 635                 640
Met Phe Glu His Gly Pro Tyr Thr Ser Asp Ser Asp His Asn Tyr Gln
                645                 650                 655
Asp Asn Gly Asn Asn Ser Asn Ser Ile Val His Tyr Ala Glu Ser Ile
            660                 665                     670
Leu His Arg Asp Asn Ser His Arg Asn Gly Ser Glu Asp Val Ser Ser
        675                 680                     685
Asp Ser Asn Glu Thr Thr Tyr Pro Leu Asn Gly Asn Asn Asp His Ser
    690                 695                     700
Gln Asn Asp Ala Asn Gly Tyr Pro Thr Tyr Asn Asp Glu Glu Glu Gly
705                  7l0                715                 720
Tyr Tyr Gly Leu His Phe Asp Ser Asp Tyr Asn Leu Asp Pro His His
                725                 730                 735
Ala Leu Ser Ser Asn Ala Ser Lys Asn Tyr Leu Ser Trp Gln Pro Thr
            740                 745                 750
Ile Gly Arg Asn Ser Asn Phe Leu Gly Leu Thr Arg Ala Gln Lys Asp
        755                 760                 765
Glu Leu Gly Gly Val Glu Tyr Arg Ala Ile Lys Leu Leu Cys Thr Ile
    770                 775                 780
Leu Val Val Tyr Tyr Val Gly Trp His Ile Val Ser Phe Val Met Leu
785                 790                 795                 800
Val Pro Trp Ile Asn Leu Lys Lys His Tyr Ser Asp Ile Val Arg Ser
                805                 810                 815
Asp Gly Val Ser Pro Thr Trp Trp Gly Phe Trp Thr Ala Met Ser Ala
            820                 825                 830
Phe Asn Asp Leu Gly Leu Thr Leu Thr Pro Asp Ser Met Met Ser Phe
        835                 840                 845
Asp Lys Ala Val Tyr Pro Leu Ile Val Met Ile Trp Phe Ile Ile Ile
    850                 855                 860
Gly Asn Thr Gly Phe Pro Ile Leu Leu Arg Cys Ile Ile Trp Ile Met
865                 870                 875                 880
Phe Lys Leu Ser Pro Asp Leu Ser Gln Met Arg Glu Ser Leu Gly Phe
                885                 890                 895
Leu Leu Asp His Pro Arg Arg Cys Phe Thr Leu Leu Phe Pro Lys Ala
            900                 905                 910
Ala Thr Trp Trp Leu Leu Leu Thr Leu Val Gly Leu Asn Phe Thr Asp
        915                 920                 925
Trp Ile Leu Phe Ile Ile Leu Asp Phe Gly Ser Thr Val Val Lys Ser
    930                 935                 940
Leu Ser Lys Gly Tyr Arg Val Leu Val Gly Leu Phe Gln Ser Val Ser
945                 950                 955                 960
Thr Arg Thr Ala Gly Phe Ser Val Val Asp Leu Ser Gln Leu His Pro
                965                 970                 975
Ser Ile Gln Val Ser Tyr Met Leu Met Met Tyr Val Ser Val Leu Pro
            980                 985                 990
Leu Ala Ile Ser Ile Arg Arg Thr Asn Val Tyr Glu Glu Gln Ser Leu
        995                 1000                 1005
Gly Leu Tyr Gly Glu Met Gly Gly Lys Pro Glu Asp Thr Asp Thr
    10l0                1015                1020
Glu Glu Asp Gly Asp Cys Asp Asp Glu Asp Asp Asp Asn Glu Glu
    1025                1030                1035
Glu Glu Ser His Glu Gly Gly Ser Ser Gln Arg Gly Lys Ser Lys
    1040                1045                1050
Lys Glu Thr Lys Lys Lys Lys Lys Arg Lys Glu Asn Glu Asn Pro
    1055                1060                1065
Asn Glu Glu Ser Thr Lys Ser Phe Ile Gly Ala His Leu Arg Arg
    1070                1075                1080
Gln Leu Ser Phe Asp Leu Trp Phe Leu Phe Leu Gly Leu Phe Ile
    1085                1090                1095
Ile Cys Ile Cys Glu Arg Asp Lys Ile Lys Asp Ile Gln Arg Pro
    1100                1105                1110
Asn Phe Asn Val Phe Thr Ile Leu Phe Glu Ile Val Ser Ala Tyr
    1115                1120                1125
Gly Thr Val Gly Leu Ser Leu Gly Tyr Pro Asn Thr Asn Gln Ser
    1130                1135                1140
Phe Ser Arg Gln Leu Thr Thr Leu Ser Lys Leu Ile Ile Ile Ala
    1145                1150                1155
Met Leu Ile Arg Gly Lys Asn Arg Gly Leu Pro Tyr Ser Leu Asp
    1160                1165                1170
Arg Ala Ile Ile Leu Pro Ser Asp Arg Leu Glu His Ile Asp His
    1175                1180                1185
Ile Glu Asp Leu Lys Leu Lys Arg Gln Ala Arg Thr Asp Thr Asp
    1190                1195                1200
Asp Pro Met Thr Glu His Leu Lys Arg Ser Ile Ser Asp Ala Lys
    1205                1210                1215
His Arg Trp Asp Glu Leu Lys His Lys Arg Ser Leu Ser Arg Ser
    1220                1225                1230
Ser Lys Arg Ser Thr Lys Thr Asn
    1235                    1240
<210>45
<211>1828
<212>DNA
<213>稻
<400>45
gcttgagtca tagggagaaa acaaatcgat catatttgac tcttttccct ccatctctct     60
taccggcaaa aaaagtagta ctggtttata tgtaaagtaa gattctttaa ttatgtgaga    120
tccggcttaa tgcttttctt ttgtcacata tactgcattg caacaattgc catatattca    180
cttctgccat cccattatat agcaactcaa gaatggattg atatatcccc tattactaat    240
ctagacatgt taaggctgag ttgggcagtc catcttccca acccaccacc ttcgtttttc    300
gcgcacatac ttttcaaact actaaatggt gtgtttttta aaaatatttt caatacaaaa    360
gttgctttaa aaaattatat tgatccattt ttttaaaaaa aatagctaat acttaattaa    420
tcacgtgtta aaagaccgct ccgttttgcg tgcaggaggg ataggttcac atcctgcatt    480
accgaacaca gcctaaatct tgttgtctag attcgtagta ctggatatat taaatcatgt    540
tctaagttac tatatactga gatgaataga ataagtaaaa ttagacccac cttaagtctt    600
gatgaagtta ctactagctg cgtttgggag gacttcccaa aaaaaaaagt attagccatt    660
agcacgtgat taattaagta ctagtttaaa aaacttaaaa aataaattaa tatgattctc    720
ttaagtaact ctcctataga aaacttttac aaaattacac cgtttaatag tttggaaaat    780
atgtcagtaa aaaataagag agtagaagtt atgaaagtta gaaaaagaat tgttttagta    840
gtatacagtt ataaactatt ccctctgttc taaaacataa gggattatgg atggattcga    900
catgtaccag taccatgaat cgaatccaga caagtttttt atgcatattt attctactat    960
aatatatcac atctgctcta aatatcttat atttcgaggt ggagactgtc gctatgtttt   1020
tctgcccgtt gctaagcaca cgccaccccc gatgcgggga cgcctctggc cttcttgcca   1080
cgataattga atggaacttc cacattcaga ttcgataggt gaccgtcgac tccaagtgct   1140
ttgcacaaaa caactccggc ctcccggcca ccagtcacac gactcacggc actaccaccc   1200
ctgactccct gaggcggacc tgccactgtt ctgcatgcga agctatctaa aattctgaag   1260
caaagaaagc acagcacatg ctccgggaca cgcgccaccc ggcggaaaag ggctcggtgt   1320
ggcgatctca cagccgcata tcgcatttca caagccgccc atctccaccg gcttcacgag   1380
gctcatcgcg gcacgaccgc gcacggaacg cacgcggccg acccgcgcgc ctcgatgcgc   1440
gagcccatcc gccgcgtcct ccctttgcct ttgccgctat cctctcggtc gtatcccgtt   1500
tctctgtctt ttgctccccg gcgcgcgcca gttcggagta ccagcgaaac ccggacacct   1560
ggtacacctc cgccggccac aacgcgtgtc ccccctacgt ggccgcgcag cacatgccca   1620
tgcgcgacac gtgcacctcc tcatccaaac tctcaagtct caacggtcct ataaatgcac   1680
ggatagcctc aagctgctcg tcacaaggca agaggcaaga ggcaagagca tccgtattaa   1740
ccagcctttt gagacttgag agtgtgtgtg actcgatcca gcgtagtttc agttcgtgtg   1800
ttggtgagtg attccagcca agtttgcg                                      1828

Claims (31)

1.改良相对于相应野生型植物的植物生长特性的方法，包括增加植物中HKT蛋白或其同源物的活性，和任选地选择具有改良的生长特性的植物。
2.权利要求1的方法，其中通过优选地在编码HKT多肽或其同源物的基因座引入遗传修饰来产生所述增加的活性。
3.权利要求2的方法，其中通过定点诱变、定向进化、同源重组、TILLING和T-DNA激活中之一产生所述遗传修饰。
4.改良相对于相应野生型植物的植物生长特性的方法，包括在植物中引入和表达HKT核酸分子或其功能性变体。
5.权利要求4的方法，其中所述功能性变体是分离的HKT核酸分子的部分或是能与HKT核酸分子杂交的序列。
6.权利要求4或5的方法，其中所述分离的HKT核酸分子或其功能性变体在植物中过表达。
7.根据权利要求4到6中任一项的方法，其中所述分离的HKT核酸分子或其功能性变体是植物来源的，优选来自双子叶植物，进一步优选来自十字花科，更加优选核酸来自拟南芥。
8.根据权利要求4到7中任一项的方法，其中所述功能性变体编码HKT直系同源物或旁系同源物。
9.根据权利要求4到8中任一项的方法，其中所述分离的HKT核酸分子或其功能性变体有效连接于种子特异性启动子。
10.根据权利要求4到9中任一项的方法，其中所述分离的HKT核酸分子或其功能性变体有效连接于胚和/或糊粉特异性启动子。
11.根据权利要求9或10的方法，其中所述启动子的表达模式与WSI18启动子相当。
12.根据权利要求1到11中任一项的方法，其中所述改良的植物生长特性是相对于相应的野生型植物而言增加的产率。
13.根据权利要求12的方法，其中所述增加的产率是增加的生物量和/或增加的种子产率。
14.根据权利要求13的方法，其中所述增加的种子产率选自以下的一项或多项：(i)增加的种子生物量；(ii)增加的种子数；(ii)增加的饱满种子数；(iv)增加的种子大小；(v)增加的种子体积；(vi)增加的收获指数(HI)和(vii)增加的千粒重(TKW)。
15.可根据权利要求1到14中任一项的方法获得的植物或植物细胞。
16.构建体，其包含：
(i)分离的HKT核酸分子或其功能性变体；
(ii)能够驱动(i)中核酸序列表达的一个或多个种子特异性控制序列；和任选的
(iii)转录终止序列。
17.根据权利要求16的构建体，其中所述种子特异性控制序列是胚和/或糊粉特异性启动子。
18.根据权利要求17的构建体，其中所述启动子的表达模式与WSI18启动子相当。
19.根据权利要求18的构建体，其中所述启动子如SEQ IDNO：45所示。
20.构建体，含有与SEQ ID NO：4基本上相似的表达盒。
21.使用根据权利要求15到20中任一项的构建体转化的植物或植物细胞。
22.产生具有改良生长特性的转基因植物的方法，该方法包括：
(i)向植物中引入分离的HKT核酸分子或其功能性变体；
(ii)在促进植物生长和发育的条件下培养植物细胞。
23.相对于野生型植物具有改良生长特性的转基因植物或植物细胞，其中所述改良的生长特性通过在所述植物或植物细胞中引入分离的HKT核酸分子或其功能性变体产生。
24.根据权利要求15、20或22的转基因植物或植物细胞，其中所述植物是单子叶植物，如甘蔗，或其中所述植物是谷类，如稻、玉米、小麦、大麦、粟、黑麦、燕麦或高粱；或者其中所述植物细胞来自单子叶植物，如甘蔗，或其中所述植物细胞来自谷类，如稻、玉米、小麦、大麦、粟、黑麦、燕麦或高粱。
25.根据权利要求15、20、22或23中任一项的植物的可收获部分和/或由所述植物或可收获部分直接衍生的产品。
26.根据权利要求24的可收获部分和/或由所述植物或可收获部分直接衍生的产品，其中所述可收获部分是种子。
27.分离的HKT核酸分子或其功能性变体或HKT多肽或其同源物在改良植物生长特性，特别是增加产率，尤其是生物量和/或种子产率中的用途。
28.根据权利要求26的用途，其中所述增加的种子产率至少包括增加的饱满种子数。
29.分离的HKT核酸分子或其功能性变体作为分子标记的用途。
30.组合物，其包含分离的HKT核酸分子或其功能性变体，用于改良植物生长及发育，优选用作生长调节剂，更优选用作生长促进剂。
31.组合物，其包含HKT蛋白或其同源物，用于改良植物生长及发育，优选用作生长调节剂，更优选用作生长促进剂。
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