CN101874116A - 具有增强的产量相关性状的植物及其生产方法 - Google Patents

具有增强的产量相关性状的植物及其生产方法 Download PDF

Info

Publication number
CN101874116A
CN101874116A CN200880117394A CN200880117394A CN101874116A CN 101874116 A CN101874116 A CN 101874116A CN 200880117394 A CN200880117394 A CN 200880117394A CN 200880117394 A CN200880117394 A CN 200880117394A CN 101874116 A CN101874116 A CN 101874116A
Authority
CN
China
Prior art keywords
plant
ala
gly
leu
val
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN200880117394A
Other languages
English (en)
Other versions
CN101874116B (zh
Inventor
V·弗兰卡德
A·艾伦
C·鲍勒
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
CropDesign NV
Original Assignee
CropDesign NV
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by CropDesign NV filed Critical CropDesign NV
Publication of CN101874116A publication Critical patent/CN101874116A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN101874116B publication Critical patent/CN101874116B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/415—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from plants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A40/00—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production
    • Y02A40/10—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production in agriculture
    • Y02A40/146—Genetically Modified [GMO] plants, e.g. transgenic plants

Abstract

本发明一般涉及分子生物学领域，并涉及通过在植物中提高编码铵转运蛋白多肽之核酸序列的表达而提高多种植物产量相关性状的方法。本发明还涉及具有提高编码AMT多肽之核酸序列表达的植物，所述植物与对照植物相比具有提高的产量相关性状。本发明还提供可用于本发明方法的构建体。

Description

具有增强的产量相关性状的植物及其生产方法
本发明一般涉及分子生物学领域，并涉及通过在植物中提高编码铵转运蛋白(ammonium transporter，AMT)多肽之核酸序列的表达而提高多种植物产量相关性状的方法。本发明还涉及具有表达编码AMT多肽之核酸序列提高的植物，所述植物与对照植物相比具有提高的产量相关性状。本发明还提供可用于本发明方法的构建体。
持续增长的世界人口和农业用可耕地供应萎缩刺激了有关增加农业效率的研究。常规的作物及园艺学改良手段利用选择育种技术来鉴定具有受欢迎特性的植物。然而，此类选择育种技术具有几个缺陷，即这些技术一般耗费很多劳动并且产生这样的植物，其经常含有异源性遗传组分，这可能不总是导致所希望性状从亲代植物中传递。分子生物学进展已经允许人类改良动物及植物的生殖质。植物的遗传工程使得可以分离和操作遗传物质(一般处于DNA或RNA形式)并且随后引入该遗传物质至植物中。此类技术具有产生具备多种经济学、农学或园艺学改良性状的作物或植物的能力。
具有特殊经济意义的性状是增加的产量。产量通常定义为作物产生的可测量的经济价值。这可以就数量和/或品质方面进行定义。产量直接取决于几个因素，例如器官的数目和大小、植物构造(例如枝的数目)、种子产生、叶衰老等。根发育、养分摄入量、胁迫耐性和早期活力(early vigor)也可以是决定产量的重要因素。因此，优化前述因素可以对增加作物产量有贡献。
种子产量是特别重要的性状，这是因为许多植物的种子对于人类和动物营养而言至关重要。诸如玉米、稻、小麦、芸苔(canola)和大豆等作物占人类总卡路里摄取量的一半以上，不论是通过种子本身的直接消耗，还是通过由加工的种子所饲养的肉类产品的消耗。它们也是工业加工所用的糖类、油类和多类代谢物的来源。种子含有胚(新的枝条和根的来源)和胚乳(萌发和幼苗早期生长过程中胚生长的营养源)。种子的发育涉及许多基因，并且需要代谢物自根、叶和茎转移至正在生长的种子。特别是胚乳，同化糖类、油类和蛋白质的代谢前体，将其合成为贮存性高分子，以充盈谷粒。
植物生物量为饲料作物如苜蓿、青贮谷物和干草的产量。在谷物作物中使用产量的许多替代参数。其中首要的是估算植物大小。根据物种以及发育阶段的不同，可以通过许多方法测量植物大小，但是包括植物总干重、地上干重、地上鲜重、叶面积、茎体积、植物高度、莲座植物直径、叶长、根长、根生物量、分蘖数和叶数。许多物种在给定的发育阶段维持植物不同部分大小间的保守比。利用这些异速生长关系而对这些有关大小的测量结果进行由此及彼的外推(如Tittonell等2005 Agric Ecosys & Environ 105：213)。早期发育阶段的植物大小通常将与晚期发育阶段的植物大小有关。具有更大叶面积的较大植物通常能够比较小的植物吸收更多的光和二氧化碳，因此很可能在同期增重更多(Fasoula & Tollenaar 2005 Maydica50：39)。除了植物所具有的最初达到较大大小的微环境或遗传优势的潜在延续，此为其附加效应。植物大小和生长速率存在着强遗传组分(如terSteege等2005 Plant Physiology 139：1078)，且迄今为止，种种多样化基因型植物在一种环境条件下的大小很可能与另一种环境条件下的大小有关(Hittalmani等2003 Theoretical Applied Genetics 107：679)。以这种方式，使用标准环境作为田地中作物在不同时间和地点所遭遇的多样化动态环境的替代参数。
对于众多作物的另一个重要性状是早期活力。改进早期活力是现代稻育种计划在温带和热带稻品种上的重要目标。长根在水栽稻中对于正确土壤固着是重要的。在将稻直接播种至涝田的情况下，以及在植物必须从水中迅速出苗的情况下，较长的苗与萌发势相关。在实施条播(drill-seeding)的情况下，较长的中胚轴和胚芽鞘对于良好出苗是重要的。人工改造植物内早期活力的能力将在农业中是极其重要的。例如，不良的早期活力已经限制了基于玉米带生殖质(Corn Belt germplasm)的玉米(Zea mayes L.)杂种在欧洲大西洋地区的引种。
收获指数为种子产量与地上干重的比值，其在许多环境条件下相对稳定，因此在植物大小和谷物产量之间通常能够获得比较稳固的相关性(如Rebetzke等2002 Crop Science 42：739)。这些方法固有地联系在一起，因为大多数谷物生物量取决于植物叶和茎当前或贮存的光合作用生产力(Gardener等1985 Physiology of Crop Plants.Iowa State University Press，pp68-73)。因此，对植物大小的选择，甚至是在发育早期阶段的选择，已经用作为未来潜在产量的指标(如Tittonell等2005 Agric Ecosys &Environ 105：213)。当测试遗传差异对胁迫耐性的影响时，温室或植物培养室与田地相比具有固有的优势：即能够使土壤性能、温度、水和养分的可用性以及光强度标准化。不过，因缺乏风力或昆虫导致不良授粉，或由于空间不足以让成熟根或冠层生长等等，对产量造成的这些人工局限性会限制这些控制环境在测试产量差异中的应用。因此，在培养室或温室标准条件下测量早期发育阶段的植物大小，是提供潜在遗传产量优势指标的标准方法。
又一个重要性状是改进的非生物胁迫耐受性。非生物胁迫是世界范围作物损失的主要原因，对于大多数主要作物植物而言降低平均产量超过50％(Wang等、Planta(2003)218：1-14)。非生物胁迫可以由干旱、盐度、极端温度、化学毒性、养分(大量元素和/或微量元素)过剩或缺乏、辐射和氧化胁迫引起。提高植物对非生物胁迫耐受性的能力将在世界范围对农民具有极大的经济优势并且会允许在不利条件期间及在作物栽培否则是不可能的陆地上栽培作物。
作物产量因而可以通过优化前述因素之一而增加。
取决于最终用途，对某些产量性状的改良可能优先于其它产量性状。例如对于应用如饲料或木材生产或生物燃料资源而言，增加植物营养体部分可能是希望的，而对于应用如面粉、淀粉或油生产而言，增加种子参数可能是尤其希望的。即便在种子参数当中，某些参数可以更优先于其它参数，这取决于应用。多种机制可以对增加种子产量有贡献，无论形式为增加的种子大小或是增加的种子数目。
增加植物中产量相关性状(种子产量和/或生物量)的一种方法可以是通过调节植物的内在生长机制如细胞周期或参与植物生长或参与防御机制的多种信号途径。
现已发现可以通过提高植物中的编码铵转运蛋白(AMT)多肽的核酸序列在植物中表达而改进植物中的多种产量相关性状。所述提高的产量相关性状包括以下一种或多种：提高的早期活力、提高的地上部分生物量、提高的根生物量、提高的每株植物种子总产量、提高的种子饱满率、提高的饱满种子数和提高的收获指数。
背景
铵和硝酸盐是植物生长和发育的主要氮源。植物需要转运蛋白来获得铵和硝酸盐。铵和硝酸盐的转运蛋白不仅存在于植物中，而且存在于几乎所有生物中。铵转运蛋白(AMT)通常在基因组中作为基因家族存在，例如至少在拟南芥(Arabidopsis thaliana)中有6种，莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)中有8种(Gonzales-Ballester等(2004)Plant Molec Biol 56：863-878)，杨中有14种(Couturier等(2007)NewPhytologist 174：137-150)，三角褐指藻(Phaeodactylum tricornutum)这种硅藻中有6种(Allen(2005)J Phycology 41)。
基于系统进化分析，鉴定了铵转运蛋白的3个亚家族(Loqué& vonWiren(2004)J Exp Bot 55(401)：1293-1305)：
1.AMT亚家族，包括植物AMT1型转运蛋白和蓝细菌铵转运蛋白；
2.MEP亚家族，包括植物AMT2型转运蛋白、酵母MEP转运蛋白、大肠杆菌AmtB和其他原核同源物；
3.Rh亚家族，仅包括人和动物RH血型抗原。
所有AMT多肽都是高度疏水的膜蛋白，具有至少10个(通常11个)推定的跨膜螺旋。许多报道显示AMT多肽能在宽浓度范围内摄入铵，但亲和力在不同生物之间有差异。在某些生物(如植物)中，鉴定了高亲和力和低亲和力铵转运蛋白(Gazzarini等(1999)Plant Cell 11：937-47)。除了亲和力特性以外，还鉴定了铵摄取的其他调节机制，例如在转录和转录水平上(Yuan等(2007)Plant Phys 143：732-744)。
使用组成型表达的玉米泛素启动子，在两个稻栽培种(Taipei 309和Jarrah)中过表达了来自稻的编码AMT1的核酸序列。与野生型相比，转基因株系的嫩枝和根的生物量在幼苗和早期营养阶段出现下降，特别是在高铵营养下培养时(Hoque等(2006)Functional Plant Biol 33：153-163)。作者推断，转基因植物在早期生长阶段的生物量下降可能是因为由于铵同化不能与更高的铵摄取相匹配而导致铵在根中积累。
美国专利6,620,610描述了编码来自拟南芥的AMT1多肽的核酸序列、包含所述编码AMT1之核酸序列的用于在酵母和细菌中表达的载体。
美国专利6,833,492描述了编码来自大豆、玉米、小麦和稻的AMT1多肽的核酸序列。描述了编码AMT1多肽或者与分离的大豆AMT1多肽具有90％氨基酸序列同一性之AMT多肽的核酸序列。描述了包含编码这些多肽序列的重组核酸序列的植物和种子，以及产生这些植物的方法。
意想不到的是，现在发现提高编码AMT多肽之核酸序列的表达给予植物与对照植物相比提高的产量相关性状。
根据一个实施方案，提供了在植物中与对照植物相比提高产量相关性状的方法，包括在植物中提高编码本文所述AMT多肽之核酸序列的表达。提高的产量相关性状包括以下一种或多种：提高的早期活力、提高的地上部分生物量、提高的根生物量、提高的每株植物种子总产量、提高的种子饱满率、提高的饱满种子数、提高的每花序花数和提高的收获指数。
定义
多肽/蛋白质
术语“多肽”和“蛋白质”在本文中可互换使用，指处于任意长度聚合形式中的通过肽键连接在一起的氨基酸。
多核苷酸/核酸/核酸序列/核苷酸序列
术语“多核苷酸”、“核酸序列”、“核苷酸序列”、“核酸”在本文中可互换使用并且指处于任意长度聚合无分支形式中的核苷酸，即核糖核苷酸或脱氧核糖核苷酸或这二者组合。
对照植物
选择合适的对照植物是实验设置的惯用部分并且可以包括对应的野生型植物或无目的基因的对应植物。对照植物一般是与待评价植物相同的植物物种或甚至是相同的品种。对照植物也可以是待评价植物的失效合子。如本文中所用的“对照植物”不仅指整株植物，还指植物部分，包括种子及种子部分。
同源物
蛋白质的“同源物”包括这样的肽、寡肽、多肽、蛋白质及酶，它们相对于非修饰的所讨论蛋白质具有氨基酸替换、缺失和/或插入并且与衍生其的非修饰蛋白质具有相似生物学活性和功能活性。
缺失指从蛋白质中移除一个或多个氨基酸。
插入指一个或多个氨基酸残基在蛋白质中预定位点内的引入。插入可以包含单个或多个氨基酸的氨基端融合和/或羧基端融合以及序列内插入。通常，在氨基酸序列内部的插入会比氨基端融合或羧基端融合更小，约1-10个残基级别。氨基端或羧基端融合蛋白或融合肽的实例包括如酵母双杂交系统中所用转录激活物的结合结构域或激活结构域、噬菌体外壳蛋白、(组氨酸)-6-标签、谷胱甘肽S-转移酶-标签、蛋白A、麦芽糖结合蛋白、二氢叶酸还原酶、Tag·100表位、c-myc表位、
Figure GPA00001140604200061
-表位、lacZ、CMP(钙调蛋白结合肽)、HA表位、蛋白C表位和VSV表位。
替换指以具有相似特性(如相似疏水性、亲水性、抗原性、形成或破坏α-螺旋结构或β-折叠结构的倾向)的其它氨基酸替换蛋白质的氨基酸。氨基酸替换一般是单个残基的，不过可以是簇集性的，这取决于置于多肽的功能性约束；插入通常会是约1-10个氨基酸残基级别。氨基酸替换优选地是保守性氨基酸替换。保守性替换表是本领域众所周知的(见例如Creighton(1984)Proteins W.H.Freeman and Company编辑和下表1)。
表1：保守性氨基酸替换的实例
  残基   保守性替换   残基  保守性替换
  Ala   Ser   Leu  Ile；Val
  Arg   Lys   Lys  Arg；Gln
  Asn   Gln；His   Met  Leu；Ile
  Asp   Glu   Phe  Met；Leu；Tyr
  Gln   Asn   Ser  Thr；Gly
  残基   保守性替换   残基  保守性替换
  Cys   Ser   Thr   Ser；Val
  Glu   Asp   Trp   Tyr
  Gly   Pro   Tyr   Trp；Phe
  His   Asn；Gln   Val   Ile；Leu
  Ile   Leu，Val
氨基酸替换、缺失和/或插入可以使用本领域众所周知的肽合成技术如固相肽合成法等或通过重组DNA操作而容易地进行。用于操作DNA序列以产生蛋白质的替换、插入或缺失变体的方法是本领域众所周知的。例如，用于在DNA中的预定位点处产生替换突变的技术是本领域技术人员众所周知的并且包括M13诱变法、T7-Gen体外诱变法(USB，Cleveland，OH)、QuickChange位点定向诱变法(Stratagene，San Diego，CA)、PCR-介导的位点定向诱变或其它位点定向诱变法。
衍生物
“衍生物”包括这样的肽、寡肽、多肽，其中与天然存在形式的蛋白质(如目的蛋白质)的氨基酸序列相比，它们包含以非天然存在的氨基酸残基对氨基酸的替换或非天然存在的氨基酸残基的添加。蛋白质的“衍生物”也包含这样的肽、寡肽、多肽，其中与多肽的天然存在形式的氨基酸序列相比，它们包含天然存在的改变(糖基化、酰化、异戊二烯化、磷酸化、肉豆蔻酰化、硫酸化等)氨基酸残基或非天然的改变氨基酸残基。与衍生物所来源的氨基酸序列相比，该衍生物可以也包含与所述氨基酸序列共价或非共价结合的一个或多个非氨基酸取代基或添加(例如报道分子或其它配体)，如为促进检测该衍生物而结合的报道分子，和与天然存在的蛋白质的氨基酸序列相对比的非天然存在的氨基酸残基。
直向同源物/旁系同源物
直向同源物和旁系同源物包含用来描述基因祖先关系的进化概念。旁系同源物是相同物种内起源于祖先基因复制的基因，直向同源物是来自不同生物的起源于物种形成的基因，并且也来源于共同的祖先基因。
结构域
术语“结构域”指沿进化相关蛋白质的序列比对结果而在特定位置处保守的一组氨基酸。尽管在其它位置处的氨基酸可以在同源物之间变动，然而在特定位置处的高度保守的氨基酸指示在蛋白质的结构、稳定性或功能方面可能是必需的氨基酸。结构域因通过在蛋白质同源物家族的比对序列中的高保守程度而被鉴定，它们可以用作鉴定物以确定任意的所讨论多肽是否属于先前已鉴定的多肽家族。
基序/共有序列/标签
术语“基序”或“共有序列”或“标签”指在进化相关蛋白质的序列中的短保守区。基序往往是结构域的高度保守部分，不过也可以仅包括结构域的部分，或可以位于保守结构域之外(若基序的全部氨基酸位于定义的结构域之外)。
杂交
如本文中所定义的术语“杂交”是其中基本上同源的互补核苷酸序列彼此退火的过程。杂交过程可以完全在溶液中进行，即两种互补性核酸分子均处于溶液中。杂交过程也可以在互补性核酸分子之一固定到基质如磁珠、琼脂糖(Sepharose)珠或任何其他树脂的情况下发生。杂交过程也可以在互补性核酸分子之一固定至固相支持体如硝酸纤维素膜或尼龙膜上或通过例如照相平版印刷术固定至例如硅酸玻璃支持物(后者称作核酸序列阵列或微阵列或称作核酸序列芯片)上的情况下进行。为使杂交发生，通常将核酸分子热变性或化学变性以使双链解链成为两条单链和/或去除来自单链核酸分子的发夹或其它二级结构。
术语“严格性”指在其中发生杂交的条件。杂交的严格性受条件如温度、盐浓度、离子强度和杂交缓冲液组成影响。通常，将低严格性条件选择为在确定的离子强度及pH时低于特定序列热解链温度(Tm)约30℃。中等严格性条件是此时温度低于Tm约20℃，高严格性条件是此时温度低于Tm约10℃。高严格性杂交条件一般用于分离与靶核酸序列具有高序列相似性的杂交序列。然而，核酸分子可以在序列上偏离并且因遗传密码子的简并性而依旧编码基本上相同的多肽。因而有时候可能需要中等严格性杂交条件来鉴定此类核酸序列分子。
Tm是在确定的离子强度及pH下50％的靶序列与完全匹配的探针杂交时的温度。Tm取决于溶液条件和探针的碱基组成及长度。例如，较长的序列在较高温度下特异性地杂交。从低于Tm约16℃直至32℃获得最大杂交速率。一价阳离子在溶液中的存在降低了两条核酸序列链间的静电排斥，因而促进杂交分子形成；这种作用对于至多0.4M的钠浓度是明显的(对于更高浓度，这种效应可以忽略)。甲酰胺降低DNA-DNA和DNA-RNA双链体的解链温度，每百分数甲酰胺降低0.6-0.7℃，并且添加50％甲酰胺允许在30-45℃进行杂交，虽然杂交速率会降低。碱基对错配降低了杂交速率及双链体的热稳定性。平均而言并且对于大的探针来说，每％碱基错配Tm下降约1℃。取决于杂交分子的类型，Tm可以使用下列等式计算：
1)DNA-DNA杂交分子(Meinkoth和Wahl，Anal.Biochem.，138：267-284，1984)：
Tm＝81.5℃+16.6×log10[Na+]a+0.41×％[G/Cb]-500×[Lc]-1-0.61×％甲酰胺
2)DNA-RNA或RNA-RNA杂交分子
Tm＝79.8+18.5(log10[Na+]a)+0.58(％G/Cb)+11.8(％G/Cb)2-820/Lc
3)寡DNA或寡RNAd杂交分子：
对于＜20个核苷酸：Tm＝2(ln)
对于20-35个核苷酸：Tm＝22+1.46(ln)
a或对于其它一价阳离子，但是仅在0.01-0.4M范围内是精确的。
b仅对于％GC在30％-75％范围内是精确的。
cL＝双链体的长度(以碱基对计)。
dOligo，寡核苷酸；ln，引物的有效长度＝2×(G/C数)+(A/T数)。
可以众多已知技术的任何一种来控制非特异性结合，例如用含蛋白质的溶液封闭薄膜、添加异源性RNA、异源性DNA及SDS至杂交缓冲液并且用RNA酶处理。对于非同源性探针，一系列杂交可以通过改变以下条件之一进行：(i)逐渐降低退火温度(例如从68℃至42℃)或(ii)逐渐降低甲酰胺浓度(例如从50％至0％)。技术人员了解杂交期间可以加以改变和将维持或改变严格性条件的多种参数。
除杂交条件之外，杂交特异性一般还取决于杂交后洗涤的功能。为除去因非特异性杂交所致的背景，样品用稀释的盐溶液洗涤。此类洗涤的关键因素包括最终洗涤溶液的离子强度及温度：盐浓度越低并且洗涤温度越高，则洗涤的严格性越高。洗涤条件一般在杂交严格性上或低于杂交严格性而进行。阳性杂交产生至少两倍于背景信号的信号。通常，用于核酸序列杂交分析法或基因扩增检测方法的合适严格性条件如上所述。也可以选择更严格或更不严格的条件。技术人员了解洗涤期间可以加以改变和将维持或改变严格性条件的多种参数。
例如，用于长度大于50个核苷酸的DNA杂交分子的常见高严格性杂交条件包括在65℃于1×SSC中或在42℃于1×SSC和50％甲酰胺中杂交，随后在65℃于0.3×SSC中洗涤。用于长度大于50个核苷酸的DNA杂交分子的中等严格性杂交条件的实例包括在55℃于4×SSC中或在40℃于6×SSC和50％甲酰胺中杂交，随后在50℃于2×SSC中洗涤。杂交分子的长度是杂交核酸的预期长度。当序列已知的核酸分子杂交时，可以通过比对序列并鉴定本文中所述的保守区而确定杂交分子长度。1×SSC是0.15M NaCl和15mM柠檬酸钠；杂交溶液和洗涤溶液可以额外地包含5×Denhardt氏试剂、0.5-1.0％SDS、100μg/ml变性的片段化鲑精DNA、0.5％焦磷酸钠。
为了定义严格性水平的目的，可以参考Sambrook等(2001)MolecularCloning：a laboratory manual，第三版Cold Spring Harbor LaboratoryPress，CSH，New York或参考Current Protocols in Molecular Biology，John Wiley & Sons，N.Y.(1989和每年更新版本)。
剪接变体
如本文中所用的术语“剪接变体”包含其中已经切除、替换、移位或添加所选内含子和/或外显子或其中内含子已经缩短或加长的核酸序列的变体。此类变体将是其中基本上保留了蛋白质的生物活性的一种变体；这可以通过选择性保留蛋白质的功能性片段而实现。此类剪接变体可以在自然界中找到或可以人工制造。用于预测和分离此类剪接变体的方法是本领域众所周知的(见例如Foissac和Schiex(2005)，BMC Bioinformatics.；6：25)。
等位变体
等位基因或等位变体是给定基因的替代形式，位于相同染色体位置内。等位变体包含单核苷酸多态性(SNP)和小插入/缺失多态性(INDEL)。INDEL的尺寸通常小于100bp。SNP和INDEL形成在大部分生物的天然存在性多态性株系中序列变体的最大集合。
基因改组/定向进化
基因改组或定向进化的组成为：反复DNA改组，随后适当筛选和/或选择以产生编码具有改良生物学活性的蛋白质的核酸序列或其部分的变体(Castle等，(2004)Science 304(5674)：1151-4；美国专利5,811,238和6,395,547)。
调节元件/调控序列/启动子
术语“调节元件”、“调控序列”和“启动子”均在本文中可互换使用，并且在广义上意指能够实现与之连接的序列表达的调节性核酸序列。术语“启动子”一般指位于基因转录起点上游并参与识别及结合RNA聚合酶和其它蛋白质，因而指导有效连接的核酸转录的核酸序列调控序列。前述术语包括从典型的真核基因组基因(包括对于精确转录启动所需的TATA盒，具有或没有CCAAT盒序列)中衍生的转录调节序列和应答发育刺激和/或外部刺激或以组织特异性方式改变基因表达的额外调节元件(如，上游激活序列、增强子和沉默子)。本术语还包括典型的原核基因的转录调节序列，在此情况下它可以包括-35盒序列和/或-10盒转录调节序列。术语“调节元件”也包含赋予、激活或增强核酸序列分子在细胞、组织或器官中表达的合成的融合分子或衍生物。
“植物启动子”包含介导编码序列区段在植物细胞中表达的调节元件。“植物启动子”优选源自植物细胞，例如来自用待于本发明方法中表达及在本文中描述的核酸序列所转化的植物。这也适用于其它“植物”调节性信号，如“植物”终止子。用于本发明方法中的核苷酸序列上游的启动子可以由一个或多个核苷酸替换、插入和/或缺失而受到修饰，但不干扰启动子、开放阅读框(ORF)或3′调节区如终止子或远离ORF的其它3′调节区的功能性或活性。启动子的活性还有可能因修饰该启动子的序列或由更具活性的启动子、甚至来自异源生物的启动子彻底替换该启动子而增加。为在植物中表达，如上所述，核酸序列分子必须有效连接至或包含合适的启动子，其中所述的启动子在正确时间点上并以所需要的空间表达模式表达基因。
为了鉴定功能等价启动子，可以分析候选启动子的启动子强度和/或表达模式，例如通过将该启动子与报告基因有效连接并测定该报告基因在多种植物组织中的表达水平和模式。合适的熟知报告基因包括如β-葡糖醛酸糖苷酶或β-半乳糖苷酶。通过测量β-葡糖醛酸糖苷酶或β-半乳糖苷酶的酶活性来测定启动子活性。接着可以将启动子强度和/或表达模式与参考启动子(例如用于本发明方法中的)进行比较。或者，可以通过定量mRNA水平或者将本发明方法中所用核酸序列的mRNA水平与持家基因(如18SrRNA)mRNA水平进行比较来测定启动子强度，其中使用本领域熟知的技术，例如通过放射自显影的密度分析进行的Northern印迹或者定量实时PCR或RT-PCR(Heid等，1996 Genome Methods 6：986-994)。通常，“弱启动子”指驱动编码序列低水平表达的启动子。“低水平”指每个细胞中约1/10000的转录物至约1/100000的转录物至约1/5000000的转录物的水平。相反，“强启动子”驱动编码序列高水平表达，或者每个细胞中约1/10的转录物至约1/100的转录物至约1/1000的转录物的水平。通常，“中等强度启动子”指这样的启动子，其在所有情况下均驱动编码序列以低于35SCaMV启动子调控的水平进行表达。
有效连接
如本文中所用的术语“有效连接”指启动子序列与目的基因之间功能性地连接，以至于启动子序列能够启动目的基因转录。
组成型启动子
“组成型启动子”指在至少一种细胞、组织或器官中在其大多数(但不一定是全部)生长和发育阶段并在大多数环境条件下有转录活性的启动子。下表2a给出了组成型启动子的实例。
表2a：植物组成型启动子的实例
  基因来源   参考文献
  肌动蛋白   McElroy等，Plant Cell，2：163-171，1990
  HMGB   WO 2004/070039
  GOS2   de Pater等，Plant J Nov；2(6)：837-44，1992，WO2004/065596
  泛素   Christensen等，Plant Mol.Biol.18：675-689，1992
  稻亲环蛋白   Buchholz等，Plant Mol Biol.25(5)：837-43，1994
  玉米H3组蛋白   Lepetit等，Mol.Gen.Genet.231：276-285，1992
  苜蓿H3组蛋白   Wu等Plant Mol.Biol.11：641-649，1988
  肌动蛋白2   An等，Plant J.10(1)；107-121，1996
  核酮糖二磷酸羧化酶-加氧酶小亚基   US 4,962,028
  OCS   Leisner(1988)Proc Natl Acad Sci USA 85(5)：2553
  SAD1   Jain等，Crop Science，39(6)，1999：1696
  SAD2   Jain等，Crop Science，39(6)，1999：1696
  V-ATP酶   WO 01/14572
  G盒蛋白   WO 94/12015
遍在启动子
遍在启动子在生物的基本上全部组织或细胞中有活性。
发育调节性启动子
发育调节性启动子在某个发育期期间或在经历发育变化的植物部分内有活性。
诱导型启动子
诱导型启动子在应答化学品(综述见Gatz 1997，Annu.Rev.PlantPhysiol.Plant Mol.Biol.，48：89-108)、环境刺激或物理刺激时具有受诱导或增加的转录启动，或可以是“胁迫诱导型”，即当植物暴露于多种胁迫条件时受到激活，或是“病原体诱导型”，即当植物暴露于多种病原体时受到激活。
器官特异性/组织特异性启动子
器官特异性或组织特异性启动子是能够优先在某些器官或组织如叶、根、种子组织等内启动转录的启动子。例如，“根特异性启动子”是在植物根中优势地具有转录活性的启动子，在植物的任何其它部分内基本上无活性，尽管在植物的这些其它部分内允许任何泄露表达。能够仅在某些细胞中启动转录的启动子在本文中称作“细胞特异性”。
根特异性启动子的实例列于下表2b：
表2b：根特异性启动子的实例
  基因来源   参考文献
  稻RCc3   Xu等，(1995)Plant Mol Biol.27(2)：237-48
  拟南芥磷酸转运蛋白PHT1   Kovama等，2005
  苜蓿属磷酸转运蛋白   Xiao等，2006
 拟南芥属Pyk10   Nitz等(2001)Plant Sci 161(2)：337-346
 烟草根特异性基因RB7、RD2、RD5、RH12   Conkling等(1990)Plant Phys 93(3)：1203-1211
 大麦根特异性凝集素   Lerner & Raikhel(1989)Plant Phys91：124-129
 根特异性富含羟基脯氨酸的蛋白   Keller & Lamb(1989)Genes & Dev3：1639-1646
 拟南芥属CDC27B/hobbit   Blilou等(2002)Genes & Dev16：2566-2575
种子特异性启动子主要在种子组织中有转录活性，但不一定仅在种子组织中有(泄漏表达的情况)。种子特异性启动子可在种子发育和/或萌发过程中有活性。种子特异性启动子的实例示于下文表2c。种子特异性启动子的其他实例在Qing Qu和Takaiwa(Plant Biotechnol.J.2，113-125，2004)中给出，其公开内容通过整体引入本文作为参考。
表2c：种子特异性启动子的实例
  基因来源   参考文献
  种子特异性基因   Simon等，Plant Mol.Biol.5：191，1985；Scofield等，J.Biol.Chem.262：12202，1987.；Baszczynski等，Plant Mol.Biol.14：633，1990.
  巴西坚果(Brazil Nut)白蛋白   Pearson等，Plant Mol.Biol.18：235-245，1992.
  豆球蛋白   Ellis等，Plant Mol.Biol.10：203-214，1988.
  谷蛋白(稻)   Takaiwa等，Mol.Gen.Genet.208：15-22，1986；Takaiwa等，FEBS Letts.221：43-47，1987.
  玉米醇溶蛋白   Matzke等Plant Mol Biol，14(3)：323-321990
  NapA   Stalberg等，Planta 199：515-519，1996.
  小麦LMW和HMW麦谷蛋白-1   Mol Gen Genet 216：81-90，1989；NAR 17：461-2，1989
 小麦SPA   Albani等，Plant Cell，9：171-184，1997
 小麦α，β，γ-麦醇溶蛋白   EMBO J.3：1409-15，1984
 大麦Itr1启动子   Diaz等(1995)Mol Gen Genet 248(5)：592-8
 大麦B1，C，D大麦醇溶蛋白   Theor Appl Gen 98：1253-62，1999；Plant J 4：343-55，1993；MolGen Genet 250：750-60，1996
 大麦DOF   Mena等，The Plant Journal，116(1)：53-62，1998
 blz2   EP99106056.7
 合成启动子   Vicente-Carbajosa等，Plant J.13：629-640，1998.
 稻谷醇溶蛋白NRP33   Wu等，Plant Cell Physiology 39(8)885-889，1998
 稻a-球蛋白Glb-1   Wu等，Plant Cell Physiology 39(8)885-889，1998
 稻OSH1   Sato等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，93：8117-8122，1996
 稻α-球蛋白REB/OHP-1   Nakase等Plant Mol.Biol.33：513-522，1997
 稻ADP-葡萄糖焦磷酸化酶   Trans Res 6：157-68，1997
 玉米ESR基因家族   Plant J 12：235-46，1997
  基因来源   参考文献
 高粱α-高粱醇溶蛋白   DeRose等，Plant Mol.Biol 32：1029-35，1996
 KNOX   Postma-Haarsma等，Plant Mol.Biol.39：257-71，1999
 稻油质蛋白   Wu等，J.Biochem.123：386，1998
 向日葵油质蛋白   Cummins等，Plant Mol.Biol.19：873-876，1992
 PRO0117，推定的稻40S核糖体蛋白   WO 2004/070039
 PRO0136，稻丙氨酸氨基转移酶   未公开
 PRO0147，胰蛋白酶抑制剂ITR1(大麦)   未公开
 PRO0151，稻WSI18   WO 2004/070039
 PRO0175，稻RAB21   WO 2004/070039
 PRO005   WO 2004/070039
  PRO0095   WO 2004/070039
  α-淀粉酶(Amy32b)   Lanahan等，Plant Cell 4：203-211，1992；Skriver等，Proc NatlAcad Sci USA 88：7266-7270，1991
  组织蛋白酶β-样基因   Cejudo等，Plant Mol Biol 20：849-856，1992
  大麦Ltp2   Kalla等，Plant J.6：849-60，1994
  Chi26   Leah等，Plant J.4：579-89，1994
  玉米B-Peru   Selinger等，Genetics 149；1125-38，1998
如本文中所定义的绿色组织特异性启动子是主要在绿色组织中具有转录活性的启动子，在植物的任何其它部分内基本上无活性，尽管在植物的这些其它部分内允许任何泄露表达。
可以用来实施本发明方法的绿色组织特异性启动子的实例在下表2d中显示。
表2d：绿色组织特异性启动的实例
  基因   表达  参考文献
  玉米正磷酸二激酶(orthophosphate dikinase)   叶特异性  Fukavama等，2001
  玉米磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶   叶特异性  Kausch等，2001
  稻磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶   叶特异性  Liu等，2003
  稻核酮糖二磷酸羧化酶-加氧酶小亚基   叶特异性  Nomura等，2000
  稻β扩展蛋白EXBP9   苗特异性  WO 2004/070039
  木豆(Pigeonpea)核酮糖二磷酸羧化酶-加氧酶小亚基   叶特异性  Panguluri等，2005
  豌豆RBCS3A   叶特异性
组织特异性启动子的另一个实例是分生组织特异性启动子，其主要在分生性组织中具有转录活性，在植物的任何其它部分内基本上无活性，尽管在植物的这些其它部分内允许任何泄露表达。可用于实施本发明方法的分生组织特异性启动子的实例示于下文表2e。
表2e：分生组织特异性启动子的实例
  基因来源   表达模式   参考文献
  稻OSH1   嫩枝顶端分生组织，从胚的球形期到幼苗阶段   Sato等(1996)Proc.Natl.Acad.Sci.USA，93：8117-8122
  稻金属硫蛋白   分生组织特异性   BAD87835.1
  WAK1 & WAK 2   嫩枝和根顶端分生组织，以及张开的叶和萼片中   Wagner & Kohorn(2001)PlantCell 13(2)：303-318
终止子
术语“终止子”包括这样的调控序列，其是在转录单位末端的DNA序列，发出对原始转录物进行3’加工并多聚腺苷化以及终止转录的信号。终止子可以来自天然基因、来自多种其它植物基因或来自T-DNA。待添加的终止子可以来自例如胭脂碱合酶或章鱼碱合酶基因，或者来自其它植物基因或较不优选地来自任何其它真核基因。
调节
术语”调节”就表达或基因表达而言意指这样的过程，其中表达水平与对照植物相比因所述基因的表达而改变，优选地，表达水平增加。原先未受调节的表达可以是结构RNA(rRNA、tRNA)或mRNA的任何类型表达，随后是翻译。术语“调节活性”应当意指本发明核酸序列或所编码蛋白质的表达的任何变化，这导致植物增加的产量和/或增加的生长。
增加的表达/过表达
如本文中所用的术语”增加的表达”或“过表达”意指对于原有野生型表达水平是额外的任何形式表达。
在本领域内详细记载了用于增加基因或基因产物表达的方法并且它们包括例如，由适宜启动子驱动的过表达、使用转录增强子或翻译增强子。可以在非异源形式的多核苷酸的适宜位置(一般是上游)内导入作为启动子或增强子元件的分离核酸序列，以便上调编码目的多肽的核酸序列的表达。例如，内源性启动子可以通过突变、缺失和/或置换而在体内改变(见Kmiec，US 5,565,350；Zarling等，WO9322443)，或可以将分离的启动子以相对于本发明基因的正确方向及距离导入植物细胞，以便控制基因表达。
若需要多肽表达，通常希望在多核苷酸编码区的3’末端包括多聚腺苷化区。多聚腺苷化区可以来自天然基因、来自多种其它植物基因或来自T-DNA。待添加的3’末端序列可以来自例如胭脂碱合酶或章鱼碱合酶基因或备选地来自另一植物基因或更不优选来自任何其它真核基因。
内含子序列也可以添加至5′非翻译区(UTR)或部分编码性序列的编码序列上，以增加在胞质溶胶内积累的成熟信息的量。已经证实可剪接内含子在植物表达构建体和动物表达构建体中转录单位内的包含在mRNA水平及蛋白质水平上增加基因表达至多达1000倍(Buchman和Berg(1988)Mol.Cell biol.8：4395-4405；Callis等(1987)Gens Dev 1：1183-1200)。基因表达的此类内含子增强作用一般在位于转录单位5′末端附近时最强烈。使用玉米内含子Adh1-S内含子1、2和6、Bronze-1内含子是本领域已知的。对于一般信息，见：《玉米手册》，第116章，编者Freeling和Walbot，Springer，N.Y.(1994)。
内源基因
本文中提及的“内源”基因不仅仅指如在植物中以其天然形式(即没有任何人类干预)存在的所讨论基因，还指处于分离形式的随后(再)导入植物(转基因)的相同基因(或基本上同源的核酸/基因)。例如，含有这种转基因的转基因植物可以遭遇转基因表达大幅降低和/或内源基因表达的大幅降低。
降低的表达
本文中提及的“降低的表达”或者“降低或基本去除”的表达意指内源基因表达和/或多肽水平和/或多肽活性相对于对照植物的降低。与对照植物相比，降低或基本去除以递增优选顺序是至少10％、20％、30％、40％或50％、60％、70％、80％、85％、90％，或95％、96％、97％、98％、99％或更多的降低。
为了降低或基本去除内源基因在植物中的表达，需要核酸序列的足够长度的基本上连续的核苷酸。为了开展基因沉默，这个长度可以是少至20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10个或更少的核苷酸，或者该长度可以多至整个基因(包括5’和/或3’UTR，部分或全体)。基本上连续的核苷酸片段可以来自编码目的蛋白质的核酸序列(靶基因)或来自能够编码目的蛋白质的直向同源物、旁系同源物或同源物的任何核酸序列。优选地，基本上连续的核苷酸片段能够与靶基因(有义链或反义链)形成氢键，更优选地，基本上连续的核苷酸片段以递增优选顺序与靶基因(有义链或反义链)具有50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％、100％的序列同一性。编码(功能性)多肽的核酸序列不是本文中所讨论用于降低或基本去除内源基因表达的多种方法所需的。
表达的这种降低或基本去除可以使用常规工具和技术完成。用于降低或基本去除内源基因表达的一种方法是使用通过RNA介导的沉默，其中使用核酸序列或其部分(在此情况下是从目的基因或从任何核酸序列中衍生的一段基本上连续的核苷酸序列，其中所述的任何核酸能够编码目的蛋白质的直向同源物、旁系同源物或同源物)的反向重复序列(优选能够形成发夹结构)。RNA沉默方法的另一个实例包括以有义方向导入核酸序列或其部分(在此情况下是从目的基因或从任何核酸中衍生的一段基本上连续的核苷酸，其中所述的任何核酸能够编码目的蛋白质的直向同源物、旁系同源物或同源物)至植物内。RNA沉默方法的另一个实例包括使用反义核酸序列。基因沉默也可以通过插入诱变(例如T-DNA插入或转座子插入)或通过如Angell和Baulcombe((1999)Plant J.20(3)：357-62)、(AmpliconVIGS WO 98/36083)或Baulcombe(WO 99/15682)及其它人描述的策略而实现。其它方法，如使用针对内源性多肽的抗体以抑制此多肽在植物中的功能，或干扰所述多肽参与的信号途径，对于技术人员将是众所周知的。人工和/或天然的微RNA(miRNA)可以用来敲除基因表达和/或mRNA翻译。内源性miRNA是通常19-24个核苷酸长度的单链小RNA。通常21个核苷酸长度的人工微RNA(amiRNA)可以遗传改造以特异性地负调节单个或多个目的基因的基因表达。植物微RNA靶的选择的决定因素是本领域众所周知的。用于靶识别的经验参数已经确定并且可以用来辅助设计特定的amiRNA(Schwab等，(2005)Dev Cell 8(4)：517-27)。用于设计并产生amiRNA及其前体的便利工具也是公众可获得的(Schwab等，(2006)PlantCell 18(5)：1121-33)。
为最佳性能，用于降低内源基因在植物中表达的基因沉默技术需要使用来自单子叶植物的核酸序列以转化单子叶植物，和使用来自双子叶植物的核酸序列以转化双子叶植物。优选地，将来自任何给定植物物种的核酸序列导入同一个物种内。例如，将来自稻的核酸序列转化至稻植物。然而，并非绝对要求待导入的核酸序列起源于与该核酸序列将要导入的植物相同的植物物种。只要内源性靶基因与待导入的核酸序列之间存在相当大的同源性就足够了。
上文描述的是用于降低或基本去除内源基因在植物中表达的多种方法的实例。本领域技术人员会轻易地能够调整前述用于沉默的方法以至于例如通过利用合适启动子而实现在整株植物或在其部分中降低内源基因的表达。
选择标记(基因)/报告基因
“选择标记”、“选择标记基因”或“报告基因”包括向细胞赋予表型的任何基因，其中在所述的细胞内表达所述基因以促进鉴定和/或选择用本发明的核酸序列构建体所转染或转化的细胞。这些标记基因能够通过一系列不同原理鉴定核酸序列分子的成功转移。合适的标记可以选自赋予抗生素抗性或除草剂抗性、引入新代谢性状或允许目视选择的标记。选择标记基因的实例包括赋予抗生素抗性的基因(如使新霉素和卡那霉素磷酸化的nptII或使潮霉素磷酸化的hpt或赋予对例如博来霉素、链霉素、四环素、氯霉素、氨苄青霉素、庆大霉素、遗传霉素(Geneticin)(G418)、壮观霉素或杀稻瘟素的抗性的基因)、赋予除草剂抗性的基因(例如提供
Figure GPA00001140604200211
抗性的bar；提供草甘膦抗性的aroA或gox或赋予对例如咪唑啉酮、膦丝菌素或磺脲类的抗性的基因)或提供代谢性状的基因(如允许植物使用甘露糖作为唯一碳源的manA或利用木糖的木糖异构酶或抗营养标记如2-脱氧葡萄糖抗性)。视觉标记基因的表达导致形成颜色(例如β-葡糖醛酸糖苷酶、GUS或β-半乳糖苷酶与其有色底物例如X-Gal)、发光(如萤光素/萤光素酶系统)或荧光(绿色荧光蛋白GFP及其衍生物)。这个名单仅代表少数的可能标记。技术人员熟悉此类标记。取决于生物和选择方法，优选不同的标记。
已知当核酸序列稳定或瞬时整合至植物细胞时，仅小部分的细胞摄取外来DNA并且根据需要将其整合至细胞基因组，这取决于所用表达载体和使用的转染技术。为鉴定并选择这些整合体，通常将编码选择标记(如上文所述之一)的基因连同目的基因一起引入宿主细胞。这些标记可以在其中这些基因因例如常规方法所致的缺失而无功能的突变体中使用。此外，编码选择标记的核酸序列分子可以引入宿主细胞中，其与包含编码本发明多肽或本发明方法中所用多肽的序列在同一载体上，或在单独的载体上。已经用引入的核酸序列稳定转染的细胞可以例如通过选择进行鉴定(例如具有整合的选择标记的细胞存活而其它细胞死亡)。
因为一旦已经成功引入了核酸序列，则转基因宿主细胞中就不再需要或不希望有标记基因，尤其抗生素抗性基因和除草剂抗性基因，因此用于引入核酸序列的本发明方法有利地使用能够去掉或切除这些标记基因的技术。一种如此方法称作共转化法。共转化法使用同时用于转化的两种载体，一种载体携带本发明的核酸序列而另一种载体携带标记基因。高比例的转化体接受，或在植物的情况下，包含(高达40％或更多的转化体)这两种载体。在用农杆菌转化的情况下，转化体通常仅接受载体的一部分，即侧翼有T-DNA的序列，它通常代表表达盒。标记基因随后可以通过进行杂交而从转化的植物中去掉。在另一种方法中，整合至转座子的标记基因用来与想要的核酸序列一起进行转化(称作Ac/Ds技术)。转化体可以与转座酶来源植物杂交或转化体用导致转座酶表达的核酸序列构建体瞬时或稳定地转化。在一些情况下(大约10％)，转座子在已经成功发生转化时跳出宿主细胞的基因组并丢失。在其它更多情况下，转座子跳至不同位置。在这些情况下，标记基因必须通过进行杂交而去除。在微生物学中，开发了实现或促进检测这类事件的技术。又一个有利的方法依赖于已知的重组系统；此方法的优势在于不必通过杂交去除。该类型的最知名系统称作Cre/lox系统。Cre1是去掉位于loxP序列之间序列的重组酶。若标记基因整合于loxP序列之间，一旦已经成功发生转化时，则通过重组酶表达而去除标记基因。其它重组系统是HIN/HIX、FLP/FRT和REP/STB系统(Tribble等，J.Biol.Chem.，275，2000：22255-22267；Velmurugan等，J.Cell Biol.，149，2000：553-566)。有可能将本发明核酸序列以位点特异性方式整合至植物基因组。这些方法自然也可以应用至微生物如酵母、真菌或细菌。
转基因的/转基因/重组
为本发明目的，“转基因的”、“转基因”或“重组”就例如核酸序列而言意指包含此核酸序列的表达盒、基因构建体或载体或用本发明的核酸序列、表达盒或载体转化的生物，所有这些构建均通过重组方法产生，其中
(a)编码用于本发明方法中的蛋白质的核酸序列，或
(b)与本发明核酸序列有效连接的遗传调控序列，例如启动子，或
(c)a)和b)
不处于其天然遗传环境中或已经通过遗传操作方法修饰，修饰有可能采用例如替换、添加、缺失、倒位或插入一个或多个核苷酸残基的形式。天然遗传环境理解为意指来源植物中的天然基因组基因座或染色体基因座或在基因组文库中存在。在基因组文库的情况下，核酸序列的天然遗传环境优选地得到保留，至少部分地得以保留。该环境分布在核酸序列的至少一侧并且具有至少50bp，优选至少500bp，特别优选至少1000bp，最优选至少5000bp的序列长度。天然存在的表达盒-例如核酸序列的天然启动子与编码本发明方法中所用多肽的对应核酸序列的天然存在的组合，如上文所定义-在这种表达盒通过非天然的合成(“人工”)方法(如诱变处理)而受到修饰时，变成转基因表达盒。合适方法例如在US 5,565,350或WO 00/15815中描述。
为本发明目的，转基因植物因此如上理解为意指本发明方法中所用的核酸序列不位于所述植物基因组中该核酸的天然基因座内，所述核酸序列有可能同源或异源地表达。然而如所提及，转基因还意指尽管本发明核酸序列或在本发明方法中所用核酸序列处于植物基因组中该核酸的天然位置内，然而其序列相对于天然序列而言已经受到修饰，和/或所述天然序列的调节序列已经受到修饰。转基因优选地理解为意指本发明核酸序列在基因组中的非天然基因座内表达，即发生核酸序列的同源表达或优选异源表达。优选的转基因植物为本文中所提到的。
转化
如本文中所提及的术语“引入”或“转化”包括将外源性多核苷酸转移至宿主细胞内，无论用于转化的方法是什么。能够后续克隆性增殖(无论通过器官发生或胚胎发生)的植物组织可以用本发明的遗传构建体转化并且可以从中再生整株植物。选择的具体组织将取决于可用于并且最适于正进行转化的具体物种的克隆性增殖系统。示例性组织靶包括叶盘、花粉、胚、子叶、下胚轴、大配子体、愈伤组织、已有的分生组织(例如顶端分生组织、腋芽和根分生组织)和诱导的分生组织(例如子叶分生组织和下胚轴分生组织)。多核苷酸可以瞬时或稳定地引入宿主细胞并且可以非整合地维持，例如作为质粒。或者，多核苷酸可以整合至宿主基因组内。产生的转化植物细胞随后可以用来以本领域技术人员已知的方式再生出转化植物。
外来基因转化至植物基因组内称作转化。植物物种的转化现在是相当常规的技术。有利地，几种转化方法中的任一方法可以用来将目的基因引入合适的祖先细胞。用于从植物组织或植物细胞中转化并再生出植物的所述方法可以用于瞬时转化或用于稳定转化。转化方法包括使用脂质体、电穿孔法、增加游离DNA摄入的化学品、DNA直接注射至植物、粒子枪轰击法、使用病毒或花粉的转化法和显微注射。转化方法可以选自用于原生质体的钙/聚乙二醇法(Krens，F.A.等，(1982)Nature 296，72-74；NegrutiuI等(1987)Plant Mol Biol 8：363-373)；原生质体的电穿孔法(Shillito R.D.等(1985)Bio/Technol 3，1099-1102)；对植物材料的显微注射(Crossway A等，(1986)Mol.Gen Genet 202：179-185)；包被有DNA或RNA的粒子轰击法(Klein TM等，(1987)Nature 327：70)、(非整合性)病毒感染法等。转基因植物，包括转基因作物植物，优选地通过农杆菌介导的转化法产生。有利的转化方法是在植物中(in planta)的转化法。为此目的，例如有可能使农杆菌作用于植物种子或有可能用农杆菌接种植物的分生组织。根据本发明已经证明使转化的农杆菌混悬液作用于完整植物或至少作用于花原基是特别有利的。植物随后继续培育直至获得所处理植物的种子(Clough和Bent，Plant J.(1998)16，735-743)。用于农杆菌介导的稻转化的方法包括用于稻转化的公知方法，如在任一以下文献中描述的那些方法：欧洲专利申请EP 1198985 A1，Aldemita和Hodges(Planta 199：612-617，1996)；Chan等(Plant Mol Biol 22(3)：491-506，1993)，Hiei等(Plant J 6(2)：271-282，1994)，其公开内容在本文中引入作为参考，如同完全给出那样。在玉米转化的情况下，优选的方法如Ishida等(Nat.Biotechnol 14(6)：745-50，1996)或Frame等(Plant Physiol 129(1)：13-22，2002)描述，其公开内容在本文中如充分所述那样引入作为参考。所述方法通过举例方式进一步由B.Jenes等，Techniques for Gene Transfer，出自Transgenic Plants，第1卷，Engineering and Utilization，编者S.D.Kung和R.Wu，AcademicPress(1993)128-143及在Potrykus Annu.Rev.Plant Physiol.Plant Molec.Biol.42(1991)205-225)中描述。待表达的核酸序列或构建体优选地克隆至适于转化根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)的载体，例如pBin19(Bevan等，Nucl.Acids Res.12(1984)8711)。由这种载体转化的农杆菌随后可以按照已知方式用于转化植物，例如作为模型使用的植物，如拟南芥(拟南芥属于本发明的范围，不视为作物植物)或作物植物，例如烟草植物，通过在农杆菌溶液中浸泡擦伤的叶或切碎的叶并随后将它们在合适的培养基内培育而进行转化。植物通过根癌农杆菌的转化例如由
Figure GPA00001140604200251
和Willmitzer在Nucl.Acid Res.(1988)16，9877中描述或尤其从F.F.White，Vectors for Gene Transfer in Higher Plants；在Transgenic Plants，第1卷，Engineering and Utilization，编者S.D.Kung和R.Wu，Academic Press，1993，第15-38页中获知。
除了转化体细胞(其随后必须再生成完整植物)之外，还有可能转化植物分生组织的细胞及特别转化发育成配子的那些细胞。在这种情况下，转化的配子遵循天然的植物发育过程，产生转基因植物。因此，例如拟南芥种子用农杆菌处理并且从发育植物中获得种子，其中一定比例的所述植物受到转化并且因此是转基因的[Feldman，KA和Marks MD(1987)Mol GenGenet 208：274-289；Feldmann K(1992)。出自C Koncz，N-H Chua和J Shell编著，Methods in Arabidopsis Research，Word Scientific，Singapore，第274-289页]。替代性方法基于反复去掉花序并使莲座叶丛中心中的切除部位与转化的农杆菌孵育，因而转化的种子同样可以在较晚的时间点获得(Chang(1994)Plant J.5：551-558；Katavic(1994)Mol Gen Genet，245：363-370)。然而，尤其有效的方法是改良的真空渗入法，如“花浸染”法。在拟南芥真空渗入法的情况下，完整植物在减压下用农杆菌混悬液处理[Bechthold，N(1993)。C R Acad Sci Paris Life Sci，316：1194-1199]，而在“花浸染法”的情况下，正在发育的花组织与表面活性剂处理的农杆菌混悬液短暂孵育[Clough，SJ和Bent，AF(1998)The Plant J.16，735-743]。在两种情况下收获了一定比例的转基因种子，并且这些种子可以通过在如上所述的选择条件下培育而与非转基因种子区分。此外，质体的稳定转化是有利的，因为质体在大部分作物中以母体方式遗传，降低或消除了转基因经花粉流动风险。叶绿体基因组的转化一般通过已在Klaus等，2004[Nature Biotechnology 22(2)，225-229]中示例性加以展示的方法实现。简而言之，待转化的序列连同选择标记基因一起克隆至与叶绿体基因组同源的侧翼序列之间。这些同源的侧翼序列指导位点特异性整合至质体基因组内。已经对众多不同植物物种描述了质体转化并且综述可以出自Bock(2001)在基础研究和植物生物技术中的转基因质体(Transgenicplastids in basic research and plant biotechnology).J Mol Biol.2001年9月21日；312(3)：425-38或Maliga，P(2003)质体转化技术商业化进展(Progress towards commercialization of plastid transformationtechnology).Trends Biotechnol.21，20-28。进一步生物技术进展最近已经以无标记质体转化体的形式作了报道，所述无标记质体转化体可以通过瞬时共整合的标记基因产生(Klaus等，2004，Nature Biotechnology 22(2)，225-229)。
T-DNA激活标签化
T-DNA激活标签化(Hayashi等Science(1992)1350-1353)涉及在目的基因的基因组区域内或基因编码区上游或下游10kb处以如此结构插入T-DNA(通常含有启动子(也可以是翻译增强子或内含子))，使得启动子指导被靶定基因的表达。通常，由靶定基因的天然启动子对所述靶定基因表达的调节作用遭到破坏并且该基因处在新引入的启动子控制下。启动子一般嵌入在T-DNA中。这种T-DNA随机地插入植物基因组，例如通过农杆菌感染，并导致在所插入T-DNA附近的基因的修饰表达。因靠近所引入启动子的基因的修饰表达，产生的转基因植物表现显性表型。
TILLING
术语TILLING是“基因组内定向诱导的局部损伤”的缩写，指用于产生和/或鉴定核酸序列的诱变技术，其中所述的核酸序列编码具有修饰表达和/或活性的蛋白质。TILLING还允许选择携带此类突变变体的植物。这些突变变体可以显示在强度方面或在位置方面或在时间方面修饰的表达(例如若突变影响启动子)。这些突变变体可以显示比由处于其天然形式的基因所显出活性更高的活性。TILLING将高密度诱变与高通量筛选方法组合。一般在TILLING中遵循的步骤是：(a)EMS诱变(Redei GP和KonczC(1992)在Methods in Arabidopsis Research，Koncz C，Chua NH，SchellJ编辑，Singapore，World Scientific Publishing Co，第16-82页；Feldmann等，(1994)在Meyerowitz EM，Somerville CR编辑，Arabidopsis.ColdSpring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，NY，第137-172页；Lightner J和Caspar T(1998)在J Martinez-Zapater，J Salinas编者，Methods on Molecular Biology第82卷，Humana Press，Totowa，NJ，第91-104页)；(b)个体的DNA制备和汇集；(c)PCR扩增目的区；(d)变性和退火以允许形成异源双链体；(e)DHPLC，其中在汇集物中存在的异源双链体被检测为色谱图中的一个额外峰；(f)鉴定突变个体；和(g)对突变PCR产物测序。用于TILLING的方法是本领域众所周知的(McCallum等，(2000)Nat Biotechnol 18：455-457；综述见Stemple(2004)Nat Rev Genet5(2)：145-50)。
同源重组
同源重组允许选择的核酸序列在基因组中于确定的所选择位置内引入。同源重组是在生物科学中常规地用于低等生物如酵母或苔藓剑叶藓(Physcomitrella)的标准技术。用于在植物中开展同源重组的方法已经不仅对模式植物(Offringa等(1990)EMBO J 9(10)：3077-84)而且对作物植物例如稻(Terada等(2002)Nat Biotech 20(10)：1030-4；Iida和Terada(2004)Curr Opin Biotech 15(2)：132-8)进行了描述。
产量
术语“产量”通常意指经济价值的可测量结果，一般与指定作物、与面积并与时间段有关。单个植物部分基于它们的数目、大小和/或重量而直接对产量有贡献，或实际产量是对于某作物和一年的每英亩产量，这通过总产量(包括收获的和评价的产量)除以种植的英亩数而确定。术语植物的“产量”可以与该植物的营养体生物量、繁殖器官和/或繁殖体(例如种子)有关。
早期活力
“早期活力”指活跃、健康、良好平衡的生长(特别是在植物生长早期期间)，并可以因植物适合度增加而产生，其原因在于例如植物更好地适应其环境(即优化能源的使用和苗与根之间的分配)。具有早期活力的植物也显示增加的幼苗存活和更好的作物建立，这往往导致高度均匀的田块(作物整齐地生长，即大多数植物在基本上相同的时间上达到发育的各阶段)和往往更好及更高的产量。因而，早期活力可以通过多种因子如千粒重、萌发百分数、出苗百分数、幼苗生长、幼苗高度、根长度、根及苗生物量和众多其它因素而确定。
增加/改善/增强
术语“增加”，“改善”或“增强”是可互换的并且应当在本申请含义上指与如本文中定义的对照植物相比至少5％、6％、7％、8％、9％或10％、优选至少15％或20％、更优选地25％、30％、35％或40％更多的产量和/或生长。
种子产量
增加的种子产量本身可以表现为下列一种或多种指标：a)种子生物量(种子总重量)增加，这可以基于单粒种子和/或每株植物和/或每公顷或每英亩；b)每个花序和/或每株植物增加的花数；c)增加的(饱满)种子数；d)增加的种子饱满率(其表述为饱满种子数与种子总数之间的比率)；e)增加的收获指数，其表述为可收获部分(如种子)产量与总生物量的比率；和f)增加的原发花序(primary panicles)数；g)增加的千粒重(TKW)，这从计数的饱满种子数及其总重量外推而来。增加的TKW可以因增加的种子大小和/或种子重量所致，并且也可以因胚和/或胚乳尺寸的增加所致。
种子产量的增加也可以表现为种子大小和/或种子体积的增加。此外，产量的增加本身也可以自我表现为种子面积和/或种子长度和/或种子宽度和/或种子周长的增加。增加的种子产量也可以产生改良的结构，或可以因改良的结构而出现。
绿度指数
如本文所用的“绿度指数”根据植物的数字图像计算。对于图像中属于植物目标的每一个像素，计算绿色值相对于红色值(在用于编码颜色的RGB模型中)之比。绿度指数表达为绿红比超过给定阈值的像素百分比。在正常生长条件下、在盐胁迫生长条件下、在养分利用度下降的生长条件下，测量开花前末次成像时的植物绿度指数。相反，在干旱胁迫生长条件下，测量干旱后首次成像时的植物绿度指数。
植物
如本文中所用的术语“植物”包括整株植物、植物的祖先及后代和植物部分，包括种子、枝条、茎、叶、根(包括块茎)、花和组织及器官，其中每种所提及对象包含目的基因/核酸。术语“植物”也包括植物细胞、悬浮培养物、愈伤组织、胚、分生组织区、配子体、孢子体、花粉和小孢子，同样每种提及的对象包含目的基因/核酸。
特别用于本发明方法中的植物包括属于植物界(Viridiplantae)超家族的全部植物，尤其单子叶植物和双子叶植物，包括选自以下的饲用或饲料豆类、观赏植物、粮食作物、树或灌木：槭树属物种(Acer spp.)、猕猴桃属物种(Actinidia spp.)、秋葵属物种(Abelmoschus spp.)、剑麻(Agavesisalana)、冰草属物种(Agropyron spp.)、匍匐剪股颖(Agrostis stolonifera)、葱属物种(Allium spp.)、苋属物种(Amaranthus spp.)、欧洲海滨草(Ammophila arenaria)、凤梨(Ananas comosus)、番荔枝属物种(Annonaspp.)、芹菜(Apium graveolens)、落花生属物种(Arachis spp.)、木波罗属物种(Artocarpus spp.)、石刁柏(Asparagus officinalis)、燕麦属物种(Avenaspp.)(例如燕麦(Ayena sativa)、野燕麦(Avena fatua)、比赞燕麦(Avenabyzantina)、Avena fatua var.sativa、杂种燕麦(Avena hybrida)、阳桃(Averrhoacarambola)、箣竹属物种(Bambusa sp.)、冬瓜(Benincasa hispida)、巴西栗(Bertholletia excelsea)、甜菜(Beta vulgaris)、芸苔属物种(Brassica spp.)(例如欧洲油菜(Brassica napus)、芜青物种(Brassica rapa ssp.)[芸苔、油菜(oilseed rape)、蔓青(turnip rape)])、Cadaba farinosa、茶(Camellia sinensis)、美人蕉(Canna indica)、大麻(Cannabis sativa)、辣椒属物种(Capsicum spp.)、Carex elata、番木瓜(Carica papaya)、大果假虎刺(Carissa macrocarpa)、山核桃属物种(Carya spp.)、红花(Carthamus tinctorius)、栗属物种(Castaneaspp.)、美洲木棉(Ceiba pentandra)、苦苣(Cichorium endivia)、樟属物种(Cinnamomum spp.)、西瓜(Citrullus lanatus)、柑桔属物种(Citrus spp.)、椰子属物种(Cocos spp.)、咖啡属物种(Coffea spp.)、芋头(Colocasia esculenta)、非洲梧桐属物种(Cola spp.)、黄麻属物种(Corchorus sp.)、芫荽(Coriandrumsativum)、榛属物种(Corylus spp.)、山楂属物种(Crataegus spp.)、番红花(Crocus sativus)、南瓜属物种(Cucurbita spp.)、香瓜属物种(Cucumis spp.)、菜蓟属物种(Cynara spp.)、胡萝卜(Daucus carota)、山马蝗属物种(Desmodium spp.)、龙眼(Dimocarpus longan)、薯蓣属物种(Dioscorea spp.)、柿树属物种(Diospyros spp.)、稗属物种(Echinochloa spp.)、油棕属(Elaeis)(例如油棕(Elaeis guineensis)、美洲油棕Elaeis(oleifera))、穇子(Eleusine coracana)、蔗茅属物种(Erianthus sp.)、枇杷(Eriobotrya japonica)、桉属(Eucalyptus sp.)、红仔果(Eugenia unifiora)、荞麦属物种(Fagopyrumspp.)、水青冈属物种(Fagus spp.)、苇状羊茅(Festuca arundinacea)、无花果(Ficus carica)、金桔属物种(Fortunella spp.)、草莓属物种(Fragaria spp.)、银杏(Ginkgo biloba)、大豆属物种(Glycine spp.)(例如大豆、大豆(Sojahispida)或大豆(Soja max))、陆地棉(Gossypium hirstum)、向日葵属(Helianthus spp.)(例如向日葵(Helianthus annuus))、长管萱草(Hemerocallisfulva)、木槿属物种(Hibiscus spp.)、大麦属(Hordeum spp.)(例如大麦(Hordeum vulgare))、甘薯(Ipomoea batatas)、核桃属物种(Juglans spp.)、莴苣(Lactuca sativa)、山黧豆属物种(Lathyrus spp.)、兵豆(Lens culinaris)、亚麻(Linum usitatissimum)、荔枝(Litchi chinensis)、百脉根属物种(Lotusspp.)、棱角丝瓜(Luffa acutangula)、羽扇豆属物种(Lupinus spp.)、Luzulasylvatica、番茄属物种(Lycopersicon spp.)(例如番茄(Lycopersiconesculentum、Lycopersicon lycopersicum、Lycopersicon pyriforme))、硬皮豆属物种(Macrotyloma spp.)、苹果属物种(Malus spp.)、凹缘金虎尾(Malpighia emarginata)、牛油果(Mammea americana)、芒果(Mangiferaindica)、木薯属物种(Manihot spp.)、人心果(Manilkara zapota)、苜蓿(Medicago sativa)、草木樨属物种(Melilotus spp.)、薄荷属物种(Menthaspp.)、芒(Miscanthus sinensis)、苦瓜属物种(Momordica spp.)、黑桑(Morusnigra)、芭蕉属物种(Musa spp.)、烟草属物种(Nicotiana spp.)、木犀榄属物种(Olea spp.)、仙人掌属物种(Opuntia spp.)、鸟足豆属物种(Ornithopusspp.)、稻属(Oryza spp.)(例如稻、阔叶稻(Oryza latifolia))、稷(Panicummiliaceum)、柳枝稷(Panicum virgatum)、鸡蛋果(Passiflora edulis)、欧防风(Pastinaca sativa)、狼尾草属物种(Pennisetum sp.)、鳄梨属物种(Perseaspp.)、芹菜(Petroselinum crispum)、虉草(Phalaris arundinacea)、菜豆属物种(Phaseolus spp.)、猫尾草(Phleum pratense)、刺葵属物种(Phoenixspp.)、南方芦苇(Phragmites australis)、酸浆属物种(Physalis spp.)、松属物种(Pinus spp.)、阿月浑子(Pistacia vera)、豌豆属物种(Pisum spp.)、早熟禾属物种(Poa spp.)、杨属物种(Populus spp.)、牧豆草属物种(Prosopis spp.)、李属物种(Prunus spp.)、番石榴属物种(Psidium spp.)、石榴(Punicagranatum)、西洋梨(Pyrus communis)、栎属物种(Quercus spp.)、萝卜(Raphanus sativus)、波叶大黄(Rheum rhabarbarum)、茶蔗子属物种(Ribesspp.)、蓖麻(Ricinus communis)、悬钩子属物种(Rubus spp.)、甘蔗属物种(Saccharum spp.)、柳属物种(Salix sp.)、接骨木属物种(Sambucus spp.)、黑麦(Secale cereale)、胡麻属物种(Sesamum spp.)、白芥属物种(Sinapis sp.)、茄属(Solanum spp.)(例如马铃薯(Solanum tuberosum)、红茄(Solanumintegrifolium)或番茄(Solanum lycopersicum))、两色蜀黍(Sorghum bicolor)、菠菜属物种(Spinacia spp.)、蒲桃属物种(Syzygium spp.)、万寿菊属物种(Tagetes spp.)、酸豆(Tamarindus indica)、可可树(Theobroma cacao)、车轴草属物种(Trifolium spp.)、Triticale sp.、Triticosecale rimpaui、小麦属物种(Triticum spp.)(例如普通小麦(Triticum aestivum)、硬粒小麦(Triticumdurum)、圆柱小麦(Triticum turgidum)、Triticum hybernum、马卡小麦(Triticum macha)、普通小麦(Triticum sativum)或普通小麦(Triticumvulgare))、小金莲花(Tropaeolum minus)、金莲花(Tropaeolum majus)、越桔属物种(Vaccinium spp.)、野碗豆属物种(Vicia spp.)、豇豆属物种(Vignaspp.)、香堇(Viola odorata)、葡萄属物种(Vitis spp.)、玉蜀黍、Zizaniapalustris、枣属物种(Ziziphus spp.)等等。
发明详述
现已惊奇地发现提高编码本文所述AMT多肽的核酸序列在植物中的表达产生了相对于对照植物具有增强的产量相关性状的植物。根据一个实施方案，本发明提供了相对于对照植物增强植物中产量相关性状的方法，其包括提高编码AMT多肽的核酸序列在植物中的表达。
用于增加编码AMT多肽的核酸序列表达的优选方法是在植物中引入并表达编码AMT多肽的核酸序列。
下文中对“可用于本发明方法的蛋白质”的任何提及均指本文定义的AMT多肽。下文中对“可用于本发明方法的核酸序列”的任何提及均指编码该AMT多肽的核酸序列。待引入植物(因此可用于实施本发明方法)的核酸序列是编码现将描述的多肽类型的任何核酸序列，下文也称为“AMT核酸序列”或“AMT基因”。
本文定义的“AMT多肽”指包含与SEQ ID NO：33所示保守结构域(CD)具有至少50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％、99％或更高(优选程度逐渐提高)氨基酸序列同一性的结构域的任何多肽。
作为替代或补充，本文定义的“AMT多肽”指包含以下的任何多肽：(i)InterPro登录号IPR0001905的铵转运蛋白结构域；和(ii)至少10个跨膜螺旋。
作为替代或补充，本文定义的“AMT多肽”指当用于构建AMT系统发生树(如图2所示)时，与包含SEQ ID NO：2(图2中以圆圈示出)所示多肽序列的AMT多肽的进化枝而不是任何其他AMT进化枝聚类的任何多肽序列。
作为替代或补充，本文定义的“AMT多肽”指与SEQ ID NO：2所示AMT多肽或任何本文表A所给出多肽序列具有至少40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％、99％或更高(优选程度逐渐提高)氨基酸序列同一性的任何多肽。
作为替代或补充，“AMT多肽”能补救缺少所有3种天然酵母铵转运蛋白的酵母菌株MLY131(Hildebrand(2005)J Phycol 41：105-113)。
术语“结构域”和“基序”在本文“定义”章节中定义。存在用于鉴定结构域的专门数据库，例如SMART(Schultz等(1998)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 95，5857-5864；Letunic等(2002)Nucleic Acids Res 30，242-244)，InterPro(Mulder等，(2003)Nucl.Acids.Res.31，315-318)，Prosite(Bucher和Bairoch(1994)，A generalized profile syntax for biomolecular sequencesmotifs and its function in automatic sequence interpretation.(In)ISMB-94；Proceedings 2nd International Conference on Intelligent Systems forMolecular Biology.Altman R.，Brutlag D.，Karp P.，Lathrop R.，Searls D.编著，第53-61页，AAAI Press，Menlo Park；Hulo等，Nucl.Acids.Res.32：D134-D137，(2004)或者Pfam(Bateman等，Nucleic Acids Research 30(1)：276-280(2002)。用于计算机分析蛋白质序列的一组工具可获得自ExPASY蛋白组服务器(Swiss Institute of Bioinformatics(Gasteiger等，ExPASy：theproteomics server for in-depth protein knowledge and analysis，NucleicAcids Res.31：3784-3788(2003))。对SEQ ID NO：2的多肽序列的分析示于本文的实施例4。例如，SEQ ID NO：2所示AMT多肽包含InterPro登录号IPR0001905的铵转运蛋白结构域。还可以使用常规技术(如序列比对)来鉴定结构域。本文表A多肽的比对示于图3。这种比对可用于鉴定AMT多肽之间最为保守的结构域，例如SEQ ID NO：33所示保守结构域(CD)(包含于SEQ ID NO：2中)。
比对序列以进行比较的方法为本领域所熟知，这些方法包括GAP、BESTFIT、BLAST、FASTA和TFASTA。GAP利用Needleman和Wunsch((1970)J Mol Biol 48：443-453)的算法来寻找两序列间使匹配数最高并使空位数最少的全局比对(即在完整序列上)。BLAST算法(Altschul等(1990)J Mol Biol 215：403-10)在两序列间计算百分比序列同一性并进行相似性的统计学分析。用于进行BLAST分析的软件在National Centre forBiotechnology Information(NCBI)向公众提供。可以使用如默认配对比对参数的ClustalW多重序列比对算法(1.83版)和百分比评分法来容易地鉴定同源物。也可以使用MatGAT软件包(Campanella等(2003)，BMCBioinformatics.10：29.MatGAT：an application that generatessimilarity/identity matrices using protein or DNA sequences)中提供的方法之一确定全局相似性和同一性百分比。本领域技术人员会意识到，可以进行少量手动编辑以优化保守性基序之间的比对。此外，还可以使用特定的结构域代替全长序列来鉴定同源物。序列同一性值可使用默认参数的上述程序在完整的核酸序列或多肽序列上或在选定的结构域或保守性基序上测定。本文的实施例3在表B中描述了SEQ ID NO：2所示AMT多肽与表A所列AMT多肽之间的百分比同一性，其可低至44％的氨基酸序列同一性。如果在SEQ ID NO：33所示保守结构域(CD)(包含于SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：4中)与表A及图3所示AMT多肽的保守结构域之间进行同一性计算，则百分比同一性可提高。这些计算的结果示于本申请的表B1。
蛋白质亚细胞定位预测的工作是很重要的，并已充分研究。了解蛋白质的定位有助于阐明其功能。蛋白质定位实验方法的范围从免疫定位到使用绿色荧光蛋白(GFP)或β-葡糖醛酸糖苷酶(GUS)标记蛋白质。这些方法很准确，但与计算机方法相比需要大量劳动。从序列数据对蛋白质定位进行计算机预测近来已取得很大进展。本领域技术人员熟知的可获得算法包括Swiss Institute for Bioinformatics提供的ExPASy蛋白质组学工具，例如PSort、TargetP、ChloroP、LocTree、Predotar、LipoP、MITOPROT、PATS、PTS1、SignalP、TMHMM等。本申请的实施例5描述了对SEQ IDNO：2所示AMT多肽的亚细胞定位的预测。
此外，可用于本发明方法的AMT多肽(至少其天然形式)通常能对铵进行跨膜转运。有许多测定来测量这种摄取活性，包括内源性铵转运蛋白缺陷型酵母菌株的补救测定(Ninneman等(1994)EMBO J 13：3464-3471)，酵母、非洲爪蟾卵母细胞(Ludewig等(2003)J Biol Chem 278：45603-45610)、植物细胞、植物根(Yuan等(2007)Plant Phys 143：732-744)和完整植物(Hoque等(2006)Functional Plant Biology 33：153-163)中的摄取测定。
本发明以SEQ ID NO：3所示的核酸序列(包含于SEQ ID NO：1中)转化植物来进行举例说明，其编码AMT多肽序列SEQ ID NO：4(包含于SEQ ID NO：2中)。然而，本发明的实施并不局限于这些序列；本发明的方法可以有利地利用本文所定义的任何AMT多肽编码核酸序列来实施。
AMT多肽编码核酸序列的实例在本文实施例1的表A中给出。这样的核酸序列可用于实施本发明的方法。实施例1的表A中给出的多肽序列为SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：4所示AMT多肽的直向同源物和旁系同源物的示例序列，其中术语“直向同源物”和“旁系同源物”如本文所定义。可以通过进行所谓的交互BLAST检索容易地找到更多直向同源物和旁系同源物。通常，这包括以查询序列(例如，利用实施例1的表A所列的任一序列)针对任何序列数据库如可公众获得的NCBI数据库进行BLAST的首次BLAST。当从核苷酸序列开始时，通常使用BLASTN或TBLASTX(利用标准默认值)，而当从蛋白质序列开始时，则使用BLASTP或TBLASTN(利用标准默认值)。BLAST结果可以任选地过滤。接着使用过滤的结果或者未过滤的结果中的全长序列针对查询序列来源生物的序列进行反向BLAST(二次BLAST)(在查询序列为SEQ ID NO：1或SEQ IDNO：2的情况下，二次BLAST将会针对三角褐指藻序列)。然后比较首次和二次BLAST的结果。如果首次BLAST中高排名的命中来自查询序列源自的相同物种，然后反向BLAST理想地导致查询序列处于最高命中之中，则鉴定到旁系同源物；如果首次BLAST中高排名的命中不来自查询序列源自的相同物种，且优选地在反向BLAST时导致查询序列为最高命中，则鉴定到直向同源物。
高排名的命中是E值低的命中。E值越低，分值越显著(或者换句话说，偶然发现此命中的几率越低)。E值的计算是本领域众所周知的。除了E值之外，比较结果还由同一性百分数评分。同一性百分比是指两比较核酸(或多肽)序列之间在特定长度上的相同核苷酸(或氨基酸)数。在大家族的情况下可以使用ClustalW，继之以邻接树来以便辅助相关基因的聚类可视化，和以便鉴定直向同源物和旁系同源物。
核酸变体也可用于实施本发明的方法。这类核酸变体的实例包括编码实施例1的表A中所示任一多肽序列的同源物和衍生物的核酸序列，其中“同源物”和“衍生物”如本文所定义。同样可用于本发明方法的核酸序列是编码实施例1的表A所示任一多肽序列的直向同源物或旁系同源物的同源物和衍生物的核酸序列。可用于本发明方法的同源物和衍生物与其源自的未修饰蛋白质具有基本上相同的生物活性和功能活性。
可用于实施本发明方法的其他核酸变体包括AMT多肽编码核酸序列的部分、与AMT多肽编码核酸序列杂交的核酸序列、AMT多肽编码核酸序列的剪接变体、AMT多肽编码核酸序列的等位变体，以及通过基因改组获得的AMT多肽编码核酸序列的变体。术语杂交序列、剪接变体、等位变体和基因改组如本文所述。
AMT多肽编码核酸序列无需是全长核酸序列，因为本发明方法的实施不依赖于全长核酸序列的使用。根据本发明，提供了在植物中增强产量相关性状的方法，包括在植物中引入和表达实施例1的表A所示任一核酸序列的部分、或者编码实施例1的表A所示任一多肽序列的直向同源物、旁系同源物或同源物的核酸序列的部分。
例如，可以通过对核酸序列进行一个或多个缺失来制备所述核酸序列的“部分”。“部分”可以以分离的形式使用，或者可将其与其他编码(或非编码)序列融合，以便例如，产生组合了若干活性的蛋白质。当与其他编码序列融合时，经翻译后所产生的多肽可能比针对该蛋白质部分所预测到的要大。
可用于本发明方法的“部分”编码如本文所定义的AMT多肽，并与实施例1表A中给出的多肽序列具有基本上相同的生物活性。优选“部分”是实施例1表A中给出的任一核酸序列的部分，或是编码实施例1表A中给出的任一多肽序列的直向同源物或旁系同源物的核酸序列的部分。按照递增的优先度顺序，优选该“部分”长度为至少400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950、1000、1050、1100、1150、1200、1250、1300、1350、1380或更多个连续核苷酸，所述连续核苷酸是实施例1表A中给出的任一核酸序列，或者是编码实施例1表A中给出的任一多肽序列的直向同源物或旁系同源物的核酸序列。优选“部分”是编码包含下述结构域的多肽序列的核酸序列的部分，所述结构域与SEQ ID NO：33所示保守结构域(CD)按照递增的优先度顺序具有至少50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％、99％或更多的氨基酸序列同一性。更优选“部分”是SEQ ID NO：1的核酸序列的一部分。最优选“部分”由SEQ ID NO：3表示。
可用于本发明方法的另一类核酸序列变体为在降低的严格条件下、优选在严格条件下，能够与本文所定义的AMT多肽的编码核酸序列或者本文所定义的“部分”杂交的核酸序列。
根据本发明，提供了增强植物产量相关性状的方法，包括在植物中引入和表达能够与实施例1表A中所示任一核酸序列杂交的核酸序列，或者包括在植物中引入和表达能够与编码实施例1表A中所示任一多肽序列的直向同源物、旁系同源物或同源物的核酸序列杂交的核酸序列。
可用于本发明方法的杂交序列编码如本文所定义的AMT多肽，并与实施例1表A中所示多肽序列具有基本上相同的生物活性。优选杂交序列能够与实施例1表A中所示任一核酸序列杂交、或与任一前述序列的部分杂交，其中部分如上文所定义；或者其中杂交序列能够与编码实施例1表A中所示任一多肽序列的直向同源物或旁系同源物的核酸序列杂交。优选杂交序列能够与编码包含下述结构域的多肽序列的核酸序列杂交，所述结构域与SEQ ID NO：33所示保守结构域(CD)按照递增的优先度顺序具有至少50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％、99％或更多的氨基酸序列同一性。最优选杂交序列能够与SEQ IDNO：1所示核酸序列或其部分杂交。
可用于本发明方法的另一类核酸序列变体为编码前文所定义的AMT多肽的剪接变体，其中剪接变体如本文所定义。
根据本发明，提供了增强产量相关性状的方法，包括在植物中引入和表达实施例1表A中所示任一核酸序列的剪接变体、或编码实施例1表A中所示任一多肽序列的直向同源物、旁系同源物或同源物的核酸序列的剪接变体。
优选的剪接变体是SEQ ID NO：1所示核酸序列的剪接变体，或编码SEQ ID NO：2的直向同源物或旁系同源物的核酸序列的剪接变体。优选剪接变体是编码包含下述结构域的多肽序列的核酸序列的剪接变体，所述结构域与SEQ ID NO：33所示保守结构域(CD)按照递增的优先度顺序具有至少50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％、99％或更多的氨基酸序列同一性。
可用于实施本发明方法的另一类核酸序列变体为前文所定义的AMT多肽编码核酸序列的等位变体，其中等位变体如本文所定义。
根据本发明，提供了增强产量相关性状的方法，包括在植物中引入和表达实施例1表A中所示任一核酸序列的等位变体，或者包括在植物中引入和表达编码实施例1表A中所示任一多肽序列的直向同源物、旁系同源物或同源物的核酸序列的等位变体。
可用于本发明方法的等位变体与SEQ ID NO：2的AMT多肽和实施例1表A中所述任何多肽序列具有基本上相同的生物活性。等位变体天然存在，并且本发明的方法中包含使用这些天然等位基因。优选等位变体为SEQ IDNO：1的等位变体，或编码SEQ ID NO：2的直向同源物或旁系同源物的核酸序列的等位变体。优选等位变体是包含下述结构域的多肽序列的等位变体，所述结构域与SEQ ID NO：33所示保守结构域(CD)按照递增的优先度顺序具有至少50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％、99％或更多的氨基酸序列同一性。
基因改组或定向进化也可用于产生上文所定义的AMT多肽编码核酸序列的变体；其中术语“基因改组”如本文所定义。
根据本发明，提供了增强产量相关性状的方法，包括在植物中引入和表达实施例1表A中所示任一核酸序列的变体，或者包括在植物中引入和表达编码实施例1表A中给出的任一多肽序列的直向同源物、旁系同源物或同源物的核酸序列的变体，其中所述变体核酸序列通过基因改组获得。
优选地，通过基因改组获得的变体核酸序列编码包含下述结构域的多肽序列，所述结构域与SEQ ID NO：33所示保守结构域(CD)按照递增的优先度顺序具有至少50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％、99％或更多的氨基酸序列同一性。
此外，还可利用定点诱变获得核酸序列变体。若干方法可用来实现定点诱变，最常见的是基于PCR的方法(Current Protocols in MolecularBiology，Wiley编辑)。
编码AMT多肽的核酸序列可以来自任何天然或人工的来源。核酸可以通过有意的人为操作对在组成和/或基因组环境中的其天然形式进行修饰。编码AMT多肽的核酸序列来自真核生物领域，优选地来自囊泡藻界(Chromalveolata kingdom)，更优选来自不等鞭毛门(Heterokontophytaphylum)。更优选编码AMT多肽的核酸序列来自硅藻纲(Bacillariophyceae(diatoms)class)，和例如来自以下目：曲壳藻目(Achnanthales)、硅藻目(Bacillariales)、中心目(Centrales)(例如假微型海链藻(Thalassiosirapseudonana))、桥弯藻目(Cymbellales)、短缝藻目(Eunotiales)、胸隔藻目(Mastogloiales)、舟形藻目(Naviculales)、羽纹目(Pennales)(例如三角褐指藻(Pheaodactylum tricornutum))、棒杆藻目(Rhopalodiales)、双菱藻目(Surirellales)或Thalassiophysales。最优选编码AMT多肽的核酸序列来自三角褐指藻。
本发明方法的实施产生相对于对照植物具有增强的产量相关性状的植物。在本文中的“定义”部分中更详细地描述了术语“产量”和“种子产量”。
以玉米为例，产量增加可以表现为下列一种或多种指标：每公顷或英亩中已建立植物数的增加、每株植物穗数的增加、行数的增加、每行粒数、粒重、千粒重、玉米穗长度/直径、种子饱满率的增加(其中种子饱满率是饱满种子数除以种子总数并乘以100)及其它。以稻为例，产量增加本身可以表现为下列一种或多种指标的增加：每公顷或英亩植物数、每株植物圆锥花序数、每圆锥花序小穗数、每圆锥花序花(小花)数(其表达为饱满种子数对原圆锥花序数之比)、种子饱满率的增加(其中种子饱满率是饱满种子数除以种子总数并乘以100)、千粒重的增加及其它。
本发明提供了相对于对照植物增强植物的产量相关性状的方法，所述方法包括提高植物中本文所定义的AMT多肽的编码核酸序列的表达。
由于本发明的转基因植物具有增强的产量相关性状，因而在其生活周期中的对应阶段上相对于对照植物的生长速率，这些植物有可能表现增加的生长速率(在其生活周期的至少部分期间)。
增加的生长速率可以对于植物的一个或多个部分(包括种子)是特异性的，或可以基本上遍及整株植物。具有增加的生长速率的植物可以具备较短的生活周期。植物的生活周期可以视为意指从干燥成熟种子成长至植物已经产生与起始材料相似的干燥成熟种子的阶段所需要的时间。这个生活周期可以受下列因素影响，如早期活力、生长速率、绿度指数、开花时间和种子成熟速度。生长速率的增加可以在植物生活周期中的一个或多个阶段上或在基本上整个植物生活周期期间发生。在植物生活周期中的早期期间增加的生长速率可以反映提高的(早期)萌发势。生长速率的增加可以改变植物的收获周期，允许植物较晚播种和/或较早收获，否则这将不可能(相似的作用可以用较早的开花时间获得，延迟的开花时间通常不是作物中想要的性状)。若生长速率充分地增加，可以允许进一步播种相同植物物种的种子(例如播种并收获稻植物，随后播种并收获其它稻植物，全部稻植物均在一个常规生长时段内)。类似地，若生长速率足够地增加，可以允许进一步播种不同植物物种的种子(例如播种并收获玉米植物，随后例如播种并任选收获大豆、马铃薯或任何其它合适植物)。从相同的根茎中收获额外次数在一些作物植物的情况中也是可能的。改变植物的收获周期可以导致每英亩的年生物量产量的增加(因任何特定植物可以生长并收获的次数(如在一年中)增加)。生长速率的增加也可以允许比其野生型对应物在更广泛的地理区域内培育转基因植物，因为对培育作物的区域限制往往由栽种时节(早季)或在收获时期(晚季)的不利环境条件所决定。若缩短收获周期，则可以避开这类不利条件。生长速率可以通过从生长曲线中得到多种参数而确定，此类参数可以是：T-Mid(植物达到其50％最大尺寸所花费的时间)和T-90(植物达到其90％最大尺寸所花费的时间)，等等。
根据本发明的优选特征，本发明方法的实施产生相对于对照植物而具有增加的生长速率的植物。因而根据本发明，提供增加植物生长速率的方法，所述方法包括增加本文中所定义的编码AMT多肽的核酸序列在植物中的表达。
与在可比条件下生长的对照植物相比，无论植物处于非胁迫条件下还是植物暴露于多种胁迫下，都发生增强的产量相关性状。植物一般通过生长得更慢而对暴露于胁迫作出应答。在严重胁迫条件下，植物甚至可以完全停止生长。另一方面，轻微胁迫在本文中定义为植物对其暴露的任何胁迫，其中所述的胁迫未导致植物完全停止生长而没有恢复生长的能力。与非胁迫条件下的对照植物相比，轻微胁迫在本发明意义中导致受胁迫植物生长降低小于40％、35％或30％，优选小于25％、20％或15％，更优选小于14％、13％、12％、11％或10％或更低。由于农业实践(灌溉、施肥、杀虫剂处理)上的进步，在栽培作物植物中并不经常遇到严重胁迫。因此，由轻微胁迫诱导的受损生长往往是农业上不希望的特征。轻微胁迫是植物暴露的常见生物性和/或非生物性(环境)胁迫。非生物胁迫可以因干旱或水涝、厌氧胁迫、盐胁迫、化学毒性、氧化胁迫和热、寒冷或冰冻温度所致。非生物胁迫可以是由水胁迫(尤其因为干旱)、盐胁迫、氧化胁迫或离子胁迫引起的渗透胁迫。生物胁迫一般是由病原体如细菌、病毒、真菌、线虫和昆虫引起的那些胁迫。如本文中所用的术语“非胁迫”条件是允许植物最佳生长的那些环境条件。本领域技术人员清楚对于给定地点的正常土壤条件和气候条件。
本发明方法的实施相对于在可比条件下培育的对照植物，赋予在非胁迫条件下或在温和胁迫条件下培育的植物增强的产量相关性状。因而根据本发明，提供用于在非胁迫条件下或温和胁迫条件下培育的植物中增强产量相关性状的方法，所述方法包括提高编码AMT多肽的核酸序列在植物中的表达。
本发明方法的实施相对于在可比胁迫条件下培育的对照植物，赋予在非生物胁迫条件下培育的植物增强的产量相关性状。如在Wang等(Planta(2003)218：1-14)中报道，非生物胁迫导致不利地影响植物生长及生产力的一系列形态学变化、生理学变化、生物化学变化和分子变化。已知干旱、盐度、极端温度和氧化胁迫是相互联系的并可以通过相似机制而诱导生长损害及细胞损害。Rabbani等(Plant Physiol(2003)133：1755-1767)描述了干旱胁迫与高盐度胁迫间极高程度的“交叉”。例如，干旱和/或盐化作用主要表现为渗透胁迫，导致细胞内稳态和离子分布的破坏。经常伴随高温或低温、盐度或干旱胁迫的氧化胁迫可以造成功能性蛋白和结构蛋白变性。因此，这些多样的环境胁迫常常激活相似的细胞信号途径和细胞应答，如产生胁迫蛋白质、上调抗氧化物质、积累相容性溶质和生长抑制。由于不同的环境胁迫激活相似的途径，因此本发明就干旱胁迫进行的示例不应看作局限在干旱胁迫，而是更应看作表明上文定义的AMT多肽在一般性非生物胁迫下参与相对于在相当胁迫条件下培养的对照植物而提高产量相关性状的显示。
本文定义的术语“非生物胁迫”指以下任何一种或多种：水胁迫(由于干旱或水过多)、缺氧胁迫、盐胁迫、温度胁迫(由于热、冷或冰冻温度)、化学毒性胁迫和氧化胁迫。根据本发明的一个方面，非生物胁迫是渗透胁迫，其选自水胁迫、盐胁迫、氧化胁迫和离子胁迫。优选地，水胁迫为干旱胁迫。术语“盐胁迫”不仅限于常见盐(NaCl)，而是可以为由以下一种或多种引起的任何胁迫：NaCl、KCl、LiCl、MgCl2、CaCl2等。
本发明方法的实施赋予在非生物胁迫条件下培养的植物相对于在相当条件下培养的对照植物而言提高的产量相关性状。因此，根据本发明，提供了在非生物胁迫条件下培养的植物中提高产量相关性状的方法，该方法包括在植物中提高编码AMT多肽的核酸序列的表达。根据本发明的一个方面，非生物胁迫是渗透胁迫，其选自水胁迫、盐胁迫、氧化胁迫和离子胁迫的一种或多种。
非生物环境胁迫的另一实例是植物生长和发育的同化所需的一种或多种养分利用度的降低。由于养分利用效率对植物产量和产品质量有显著影响，因此在田间使用了大量肥料来优化植物生长和质量。植物的生产力一般受限于三种主要养分：磷、钾和氮，在这三者中，氮通常是植物生长的限速元素。因此，植物生长所需的主要养分元素是氮(N)。这是可见于活细胞中的多种重要化合物的组分，所述化合物包括氨基酸、蛋白质(酶)、核酸和叶绿素。植物干物质的1.5％至2％以及总植物蛋白质的约16％是氮。因此，氮的利用度是作物植物生长和生产的主要限制因素(Frink等(1999)Proc Natl Acad Sci USA 96(4)：1175-1180)，并也对蛋白质积累和氨基酸组成有重大影响。因此，在氮有限条件下培养时具有提高的产量相关性状的作物植物是很有意义的。
本发明方法的实施赋予在养分利用度降低条件下(特别是在减少的氮利用度的条件下)培养的植物相对于在相当条件下培养的对照植物而言具有提高的产量相关性状。因此，根据本发明，提供了在养分利用度降低条件下(优选在降低的氮利用度的条件下)培养的植物中提高产量相关性状的方法，该方法包括在植物中提高编码AMT多肽的核酸序列的表达。降低的养分利用度可能是由于养分(如氮、磷和其他含磷化合物、钾、钙、镉、镁、锰、铁和硼等)的缺少或过剩所致。优选地，降低的养分利用度是降低的氮利用度。
本发明包括可由根据本发明的方法获得的植物或其部分(包括种子)或其细胞。所述植物或其部分或其细胞含有编码如上文所定义的AMT多肽的核酸转基因。
本发明还提供遗传构建体和载体，以利于在植物中引入如上文所定义的AMT多肽的编码核酸序列和/或提高其表达。可以将基因构建体插入适于转化进入植物并用于在转化的细胞中表达目的基因的载体中，该载体可以是可商购的载体。本发明还提供了如本文所定义的基因构建体在本发明方法中的用途。
更具体地，本发明提供这样的构建体，其含有：
(a)编码如上文所定义的AMT多肽的核酸序列；
(b)一个或多个能够提高(a)中核酸序列表达的控制序列；和任选的
(c)转录终止序列。
优选编码AMT多肽的核酸序列如上文中定义。术语“控制序列”和“终止序列”如本文所定义。
优选构建体的控制序列之一是从植物基因组中分离的组成型启动子。植物组成型启动子的一个例子是GOS2启动子，优选为稻GOS2启动子，更优选为SEQ ID NO：34所示GOS2启动子。
使用含有任何上述核酸序列的载体转化植物。技术人员充分知晓载体中必须存在的遗传元件，以便成功进行转化、选择并繁殖含目的序列的宿主细胞。将目的序列有效连接于一个或多个控制序列(至少连接于启动子)。
有利地，任何类型的启动子，无论是天然或是合成的，均可用于提高核酸序列的表达。组成型启动子、优选从植物基因组分离的组成型启动子尤其适用于本发明的方法。植物组成型启动子驱动编码序列以下述水平表达，在所有情况下所述水平低于在35S CaMV病毒启动子的控制下获得的水平。
其他器官特异性启动子，例如在叶、茎、块茎、分生组织、种子(胚和/或胚乳)中优先表达的启动子可用于实施本发明的方法。多种启动子类型的定义见本文“定义”部分。
应当明确，本发明的适用性不限于如SEQ ID NO：1或SEQ ID N：3所示的编码AMT多肽的核酸序列，本发明的适用性也不限于由组成型启动子驱动时AMT多肽编码核酸序列的表达。
任选地，可在引入植物的构建体中使用一个或多个终止子序列。其他调节元件可包括转录及翻译增强子。本领域技术人员会了解适于实施本发明的终止子和增强子序列。也可如定义部分中所述，将内含子序列添加至5′非翻译区(UTR)或编码序列中，以增加在胞质溶胶中累积的成熟信息的量。其它控制序列(除启动子、增强子、沉默子、内含子序列、3’UTR和/或5’UTR区之外)可以是蛋白质和/或RNA稳定元件。本领域技术人员会知道或可以容易地获得此类序列。
本发明的遗传构建体还可以包括需要用于在特定细胞类型中维持和/或复制的复制原点序列。一个实例是当需要将遗传构建体在细菌细胞中维持为附加型遗传元件(例如质粒或粘粒分子)时。优选的复制原点包括但不限于f1-ori和colE1。
为检测如在本发明方法中所用核酸序列的成功转移和/或选择包含这些核酸序列的转基因植物，使用标记基因(或报告基因)是有利的。因而，遗传构建体可以任选地包含选择标记基因。选择标记在本文“定义”部分中有更详细的描述。
已知当核酸序列稳定或瞬时整合至植物细胞时，仅小部分的细胞摄取外来DNA并且根据需要将其整合至细胞基因组，这取决于所用表达载体和使用的转染技术。为鉴定并选择这些整合体，通常将编码选择标记(如上文所述之一)的基因连同目的基因一起引入宿主细胞。这些标记可以例如在其中这些基因因例如常规方法所致的缺失而无功能的突变体中使用。此外，编码选择标记的核酸序列分子可以引入宿主细胞中，与编码本发明多肽或本发明方法中所用多肽的序列在同一载体上，或在单独的载体上。已经用引入的核酸序列稳定转染的细胞可以例如通过选择进行鉴定(例如具有整合的选择标记的细胞存活而其它细胞死亡)。一旦不再需要，可以从转基因细胞中去除或切除标记基因。用于标记基因去除的技术是本领域已知的，有用的技术在上文定义部分中描述。
本发明还提供生产相对于对照植物具有增强的产量相关性状的转基因植物的方法，其包括在植物中引入和表达编码上文所定义AMT多肽的任何核酸序列。
更具体地，本发明提供了生产相对于对照植物具有增强的产量相关性状的转基因植物的方法，所述方法包括：
(i)向植物、植物部分或植物细胞中引入和表达处于植物组成型启动子控制下的编码AMT多肽的核酸序列；和
(ii)在促进植物生长和发育的条件下培养植物细胞、植物部分或植物。
(i)的核酸序列可以是能够编码上文定义的AMT多肽的任何核酸序列。
可以将核酸序列直接引入植物细胞或植物本身(包括引入植物的组织、器官或任何其它部分)。根据本发明优选的方面，优选通过转化将核酸序列引入植物。术语“转化”在本文“定义”部分有更详细的说明。
遗传修饰的植物细胞能够通过技术人员熟悉的所有方法再生。合适的方法可见于上述S.D.Kung和R.Wu、Potrykus或者
Figure GPA00001140604200461
和Willmitzer的出版物。
通常在转化以后，选出存在一个或多个标记的植物细胞或细胞群，所述标记由与目的基因共转移的植物可表达基因编码，继之将转化的材料再生成整个植物。为选择转化的植物，通常将在转化过程中获得的植物材料置于选择性条件下，从而可将转化的植物与非转化植物区分开来。例如，可以种植以上述方式获得的种子，并在最初的生长期之后，通过喷雾对其进行合适的选择。另一可能方案是使用合适的选择剂，将种子(适当时在灭菌之后)种在琼脂板上，从而仅转化的种子能够长成植物。可选地，针对转化的植物筛选可选择标记(如上文所述标记)的存在。
DNA转移和再生之后，还可评价推定转化的植物，例如用Southern分析(DNA印迹)，评价目的基因的存在、拷贝数和/或基因组构造。备选地或额外地，可用Northern和/或Western分析(蛋白质印迹)监测新引入的DNA的表达水平，这两种技术都是本领域普通技术人员所熟知的。
产生的转化植物可以通过多种方式繁殖，如通过克隆繁殖或经典的育种技术。例如，第一代(或T1)转化的植物可自交，选择纯合的第二代(或T2)转化体，而T2植物可进一步通过经典育种技术繁殖。产生的转化生物体可以有多种形式。例如，它们可以是转化细胞和非转化细胞的嵌合体；克隆的转化体(例如所有细胞经转化含有表达盒)；转化和非转化组织的嫁接体(例如在植物中，转化的根状茎嫁接到非转化的接穗上)。
本发明显然延及由本文所述任何方法产生的任何植物细胞或植物，以及所有的植物部分及其繁殖体。本发明还延及由任何上述方法产生的原代转化或转染的细胞、组织、器官或整个植物的后代，唯一的要求是所述后代呈现出与在本发明方法中产生的亲本相同的基因型和/或表型特征。
本发明也包括含有分离的编码上文所定义的AMT多肽的核酸序列的宿主细胞，所述核酸序列与植物组成型启动子有效连接。根据本发明优选的宿主细胞是植物细胞。对于用于本发明方法的核酸序列或载体、表达盒或构建体或载体的宿主植物，其原则上有利地为能够合成在本发明方法中使用的多肽的所有植物。
本发明方法有利地适用于任何植物。特别用于本发明方法中的植物包括属于植物界超家族的全部植物，尤其单子叶植物和双子叶植物，包括饲用或饲料豆类、观赏植物、粮食作物、树或灌木。根据本发明优选的实施方案，植物是作物植物。作物植物的实例包括大豆、向日葵、芸苔、苜蓿、油菜、棉花、番茄、马铃薯和烟草。还优选地，植物是单子叶植物。单子叶植物的实例包括甘蔗。更优选地，植物是谷物。谷物的实例包括稻、玉米、小麦、大麦、粟、黑麦、黑小麦、高粱和燕麦。
本发明也扩展至包含与植物组成型启动子有效连接的分离的AMT(如上文定义)编码核酸序列的植物的可收获部分如，但不限于种子、叶、果实、花、茎、根茎、块茎和球茎。本发明进一步涉及衍生自、优选直接衍生自这种植物的可收获部分中的产物，如干燥颗粒或粉末、油、脂肪及脂肪酸、淀粉或蛋白质。
用于提高核酸序列或基因或基因产物表达的方法均已记载于本领域中，其例子在定义部分中提供。
如上文所述，用于提高AMT多肽编码核酸序列表达的一种优选的方法是通过在植物中引入和表达AMT多肽编码核酸序列；然而，也可以使用其他公知的技术来实现实施所述方法的效果(即增强产量相关性状)，所述技术包括但不限于T-DNA激活标签化、TILLING、同源重组。这些技术的描述在定义部分中提供。
本发明还包括如本文所述AMT多肽编码核酸序列和这些AMT多肽在正常生长条件下、在非生物胁迫生长(优选渗透胁迫生长条件)条件下，和在降低的养分利用度的生长条件下，优选在降低的氮利用度的条件下，提高植物中任何前述产量相关性状的用途。
可以在育种程序中使用编码本文所述AMT多肽的核酸序列或AMT多肽本身，其中鉴定可能与AMT多肽编码基因遗传连锁的DNA标记。可以使用所述基因/核酸序列或所述AMT多肽本身定义分子标记。接着可以将此DNA或蛋白质标记在育种程序中使用，以在本发明的方法中选择具有如上文所定义的增强的产量相关性状的植物。
编码AMT多肽的基因/核酸序列等位变体也可以用于标记辅助的育种程序中。这种育种程序有时需要通过使用例如EMS诱变法对植物作诱变处理而引入等位基因变异；备选地，该程序可以从非人为引起的所谓“自然”起源的一组等位变体开始。随后进行等位变体的鉴定，例如通过PCR法。此后是用于选择所讨论及导致增强的产量相关性状的序列的优异等位变体的步骤。一般通过监测含有所讨论序列的不同等位变体的植物的生长性能而实施选择。可以在温室中或田间监测生长性能。其它任选步骤包括将鉴定出优异等位变体的植物与另一种植物杂交。这可以用来例如产生目标表型特征的组合。
编码AMT多肽的核酸序列也可以用作探针以便对基因进行遗传作图和物理作图，所述探针作为所述基因的一部分及与这些基因关联的性状的标记。此类信息可以用于植物育种中，以便开发具有想要表型的株系。编码AMT多肽的核酸序列的这种用途仅需要具有至少15个核苷酸长度的核酸序列。编码AMT多肽的核酸序列可以用作限制性片段长度多态性(RFLP)标记。限制性消化的植物基因组DNA的Southern印迹(SambrookJ，Fritsch EF和Maniatis T(1989)Molecular Cloning，A LaboratoryManual)可以用编码AMT多肽的核酸序列探测。产生的结合图式随后可以使用计算机程序如MapMaker(Lander等(1987)Genomics 1：174-181)进行遗传分析以构建遗传图。此外，该核酸序列可以用来探测含有经限制性内切核酸酶处理的一组个体的基因组DNA的Southern印迹，其中所述的一组个体代表亲代和具有确定的遗传杂交的后代。DNA多态性的分离被标出并用来计算编码AMT多肽的核酸序列在使用这个群体先前所获得的遗传图中的位置(Botstein等(1980)Am.J.Hum.Genet.32：314-331)。
在Bernatzky和Tanksley(1986)Plant Mol.Biol.Reporter 4：37-41中描述了植物基因衍生的探针的产生和其在遗传作图中的用途。众多出版物描述了使用以上所提及的方法学或其改良方法对特定cDNA克隆的遗传作图。例如，F2互交群、回交群、随机交配群、邻近纯合系和其它个体群体可以用于作图。此类方法学是本领域技术人员众所周知的。
所述核酸序列探针也可以用于物理作图(即序列在物理图上的排列；见Hoheisel等在：Non-mammalian Genomic Analyasis：A Practical Guide，Academic press 1996，第319-346页及其中引用的参考文献)。
在另一实施方案中，核酸序列探针可以在直接荧光原位杂交(FISH)作图法(Trask(1991)Trends Genet.7：149-154)中使用。尽管当前的FISH作图法偏好使用大型克隆(几个kb至几百个kb；见Laan等(1995)GenomeRes.5：13-20)，然而灵敏度的改善可以允许使用更短探针进行FISH作图。
用于遗传作图及物理作图的多种基于核酸序列扩增的方法可以使用所述核酸序列而实施。实例包括等位基因特异的扩增法(Kazazian(1989)J.Lab.Clin.Med 11：95-96)、PCR扩增片段的多态性(CAPS；Sheffield等(1993)Genomics 16：325-332)、等位基因特异性连接(Landegren等(1988)Science 241：1077-1080)、核苷酸延伸反应(Sokolov(1990)Nucleic acidsequence Res.18：3671)、放射杂交作图(Walter等(1997)Nat.Genet.7：22-28)和Happy作图法(Dear和Cook(1989)Nucleic acid sequence Res.17：6795-6807)。对于这些方法，使用一种核酸序列的序列来设计并产生在扩增反应或在引物延伸反应中使用的引物对。此类引物的设计是本领域技术人员众所周知的。在使用基于PCR遗传作图的方法中，可能必须鉴定在对应于当前核酸序列的区域内作图交叉亲代间的DNA序列差异。然而，这对于作图法而言通常不是必需的。
本发明方法产生具有如前文所述的产量相关性状提高的植物。这些性状也可以与其它经济有利的性状组合，如其它的产量增强性状、对非生物胁迫和生物胁迫的耐性、对除草剂、杀虫剂的耐性、调节多种构造性特征和/或生物化学特征和/或生理学特征的性状。
附图说明
现将参考以下附图描述本发明，在附图中：
图1代表用于SEQ ID NO：2的TMHMM2.0算法的图形输出。根据算法的预测，该多肽的N端位于膜外侧(胞质溶胶外)，然后是11个跨膜螺旋，该多肽的C端位于膜的内侧(胞质溶胶)。
图2显示来自多种来源生物的AMT多肽的系统发生树。第I组代表可用于实施本发明方法的多肽序列聚类，以括号示出。圆圈代表可用于实施本发明方法的多肽与其他AMT多肽之间在树中的分支点。
图3显示对表A中AMT多肽的AlignX(来自Vector NTI 10.3，Invitrogen Corporation)多序列比对。保守结构域(CD)的起点和终点以括号显示，如SEQ ID NO：33所示，并在共有序列下方以X标出。框出了参与正常AMT功能的保守性G(Gly)残基(Ludewig等(2003)J Biol Chem278：45603-10)。
图4显示用于在稻GOS2启动子(pGOS2)控制下在稻(Oryza sativa)中提高编码AMT多肽之核酸序列的表达的二元载体。
图5详细示例了可用于实施本发明方法的序列。
实施例
本发明将参考以下实施例来描述，所述实施例仅用于阐述。以下实施例不旨在全面定义或者以其他方式限制本发明的范围。
DNA操作：除非另有说明，根据(Sambrook(2001)Molecular Cloning：a laboratory manual，第三版，Cold Spring Harbor Laboratory Press，CSH，New York)或Ausubel等(1994)，Current Protocols in Molecular Biology，Current Protocols第1卷和第2卷中所述标准方案进行重组DNA技术。用于植物分子工作的标准材料和方法描述于BIOS Scientific PublicationsLtd(UK)和Blackwell Scientific Publications(UK)出版的由R.D.D编著的Plant Molecular Biology Labfax(1993)中。
实施例1：鉴定与本发明方法中使用的核酸序列相关的序列
使用数据库序列检索工具，如基本局部比对工具(BLAST)(Altschul等(1990)J.Mol.Biol.215：403-410；和Altschul等(1997)Nucleic Acids Res.25：3389-3402)在国家生物技术信息中心(NCBI)的Entrez核苷酸数据库中所维护的那些序列内鉴定到与本发明方法中使用的核酸序列相关的序列(全长cDNA、EST或者基因组序列)。该程序用来通过核酸序列或多肽序列与序列数据库比较并通过计算匹配的统计学显著性而找到序列间具有局部相似性的区域。例如，对本发明核酸序列所编码的多肽使用TBLASTN算法，采用默认设置和过滤以忽略低复杂性序列启动(set off)。分析的结果通过配对性比较显示，并根据概率评分(E-值)排序，其中该评分反映特定比对结果因偶然而发生的概率(E-值越低，命中的显著性越高)。除了E-值外，比较还通过同一性百分数进行记分。同一性百分数指两个所比较核酸序列(或多肽)序列之间在特定长度范围内的相同核苷酸(或氨基酸)数目。在一些情况下，可以调整默认参数以调节检索的严格性。例如，可以提高E-值来显示更少的严格匹配。藉此可以鉴定短的接近精确的匹配。
表A提供了与本发明方法中使用的核酸序列相关的核酸序列的列表。
表A：AMT多肽序列和编码核酸序列的例子：
  名称   来源生物   公开数据库登录号   核酸序列SEQID NO：   多肽序列SEQID NO：
  Phatr_AMT1_FL   三角褐指藻   jgi_Phatr2_20754_estExt_gwp_gw1.C_chr_100028   1   2
  Phatr_AMT1_部分   三角褐指藻   jgi_Phatr2_20754_estExt_gwp_gw1.C_chr_100028   3   4
  Phatr_AMT2   三角褐指藻   jgi_Phatr2_22927_estExt_gwp_gw1.C_chr_200095   5   6
  名称   来源生物   公开数据库登录号   核酸序列SEQID NO：   多肽序列SEQID NO：
  Phatr_AMT3   三角褐指藻   jgi_Phatr2_20954_estExt_gwp_gw1.C_chr_110018   7   8
  Phatr_AMT4   三角褐指藻   jgi_Phatr2_34491_fgenesh1_pg.C_chr_500029   9   10
  1
  Phatr_AMT5   三角褐指藻   jgi_Phatr2_33710_fgenesh1_pg.C_chr_4000065   11   12
  Phatr_AMT6   三角褐指藻   jgi_Phatr2_53344_phatr1_ua_pm.chr_10000004   13   14
  Phatr_AMT7   三角褐指藻   jgi_Phatr2_43458_estExt_fgenesh1_pg.C_chr_20211   15   16
  Cylfu_AMT1   筒柱藻(Cylindrotheca fusiformis)   AF360394   17   18
  Cylfu_AMT1变体   筒柱藻   AY651852   19   20
  Cylfu_AMT2a   筒柱藻   AY651853   21   22
  Thaps_AMT1   假微型海链藻   jgi_Thaps3_258067_thaps1_ua_pm.chr_7000085   23   24
  名称   来源生物   公开数据库登录号   核酸序列SEQID NO：   多肽序列SEQID NO：
  Thaps_AMT2   假微型海链藻   jgi_Thaps3_261441_thaps1_ua_kg.chr_2000265   25   26
  Thaps_AMT3   假微型海链藻   jgi_Thaps3_7968_fgenesh1_pg.C_chr_9000136   27   28
  Thaps_AMT4   假微型海链藻   jgi_Thaps3_2305_fgenesh1_pg.C_chr_2000260   29   30
  Thaps_AMT6   假微型海链藻   jgi_Thaps3_257021_thaps1_ua_pm.chr_4000455   31   32
在一些情况下，相关的序列由研究协会例如基因组研究协会(TIGR)暂时组合并对公众公开。可以使用真核基因直向同源物(EGO)数据库鉴定这类相关序列，用感兴趣的核酸序列或多肽序列进行关键词搜索或BLAST算法。在其他情况下，针对具体的生物创建了特定的核酸序列数据库，例如由接合基因组协会(Joint Genome Institute)例如针对假微型海链藻和三角褐指藻创建。
实施例2：AMT多肽序列的比对
使用AlignX算法(来自Vector NTI 10.3，Invitrogen Corporation)进行表A中所有AMT多肽序列的多序列比对。比对结果展示于本申请的图3中。使用括号展示例如如SEQ ID NO：33所示的保守结构域(CD)的开始和结束，并用X在共有序列下标记。用方框标出涉及正确的AMT功能的保守G(Gly)残基(Ludewig等(2003)J Biol Chem 278：45603-10)。
实施例3：计算用于实施本发明方法的多肽序列之间的全局同一性百 分比
使用本领域可获得的方法之一MatGAT(矩阵全局比对工具)软件(BMC Bioinformatics.20034：29.MatGAT：an application that generatessimilarity/identity matrices using protein or DNA sequences.CampanellaJJ，Bitincka L，Smalley J.；软件由Ledion Bitincka提供)确定用于实施本发明方法的全长多肽序列之间全局相似性百分数和同一性百分数。MatGAT软件为DNA序列或蛋白质序列产生相似性/同一性矩阵，无需数据的预比对。该程序使用Myers和Miller全局比对算法(空位打开罚分12和空位延伸罚分2)执行一系列逐对比对，使用例如Blosum 62(对于多肽)计算相似性和同一性并且随后将结果置于距离矩阵中。序列相似性在分界线的下半部分中显示，序列同一性在对角分界线的上半部分中显示。
比较中所用的参数是：
评分矩阵：Blosum62
第一空位：12
延伸空位：2
多肽序列(排除部分多肽序列)全长上的全局相似性和同一性软件分析结果在表B中显示。
在SEQ ID NO：33所示(并包含于SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：4中)的保守结构域(CD)和表A多肽的保守结构域(如图3中突出显示的)之间进行相同的分析，结果展示于表B1中。
Figure GPA00001140604200561
Figure GPA00001140604200571
可用于实施本发明方法的全长多肽序列之间的同一性百分比可以低至与SEQ ID NO：2相比44％的氨基酸同一性。
如表B1中所示，SEQ ID NO：33所示(并包含于SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：4中)的保守结构域(CD)和表A多肽的保守结构域(如图3中突出显示的)之间的同一性百分比提高至55％的氨基酸同一性。
实施例4：鉴定可用于实施本发明方法的多肽序列中包含的结构域
蛋白质家族、结构域和位点集成资源(InterPro)数据库是基于文本和序列的检索的通常所用标签数据库的集成界面。InterPro数据库组合了这些数据库，所述的数据库使用不同方法学和不同程度的有关已充分表征蛋白质的生物学信息以得到蛋白质标签。合作数据库包括SWISS-PROT、PROSITE、TrEMBL、PRINTS、Panther、ProDom和Pfam、Smart和TIGRFAMs。Interpro由英国的欧洲生物信息研究所提供。
InterPro扫描如SEQ ID NO：2所代表的多肽序列的结果在表C中。
表C：SEQ ID NO：2所示多肽序列的InterPro扫描结果
  InterPro登录号和名称   集成数据库名称   集成数据库登录号   集成数据库登录名称
  IPR0001905铵转运蛋白   Panther   PTHR11730   铵转运蛋白
  IPR0001905铵转运蛋白   TIGR   TIGR00836   Amt：铵转运蛋白
  IPR0001905铵转运蛋白   Prosite   PS01219   铵转运蛋白
  IPR010256Rh-样蛋白/铵转运蛋白   PFAM   F00909   铵转运蛋白
  未IPR集成   Panther   PTHR11730：SF8   铵转运蛋白1
 未IPR集成  tmhmm   跨膜区
实施例5：可用于实施本发明方法的多肽序列的亚细胞定位预测
蛋白质定位实验方法的范围从免疫定位到使用绿色荧光蛋白(GFP)或β-葡糖醛酸糖苷酶(GUS)标记蛋白质。例如，使用GFP融合实验将来自拟南芥的AMT转运蛋白定位于质膜中(Yuan等(2003)Plant Cell 19：2636-2652)。
还进行了从序列数据对蛋白质定位的计算机预测。本领域技术人员熟知的算法可获得自瑞士生物信息研究所(Swiss Institute forBioinformatics)提供的ExPASy蛋白组学工具，例如PSort、TargetP、ChloroP、LocTree、Predotar、LipoP、MITOPROT、PATS、PTS1、SignalP、TMHMM和其他。
跨膜结构域通常表示跨膜蛋白质的单个跨膜α螺旋。因为膜中的α-螺旋能够独立于蛋白质的剩余部分进行折叠，所以其被称作“结构域”。更广义地，跨膜结构域是在膜中热力学稳定的任何三维蛋白质结构。这可以是短杆菌肽A的单个α螺旋、若干个跨膜α螺旋的稳定复合物、跨膜β桶、β-螺旋或任何其他结构。
跨膜螺旋通常长度约20个氨基酸，尽管它们可以长得多或短得多。TMHMM2.0是一种能够预测蛋白质中跨膜螺旋的算法。该算法在丹麦技术大学(Technical University of Denmark)的服务器上托管。下表D展示了使用SEQ ID NO：2的多肽序列信息得到的TMHMM2.0输出结果。根据预测，多肽的N-端位于膜的外侧(胞质溶胶外)，之后是11个跨膜螺旋，多肽的多肽C-端位于膜的内侧(胞质溶胶中)。相同的构型适用于SEQ IDNO：4，不同之处是第一外部更小。图1是表D中输出结果的图示。
表D：使用SEQ ID NO：2的多肽序列信息得到的TMHMM2.0输出结果。
  定位   氨基酸坐标
  外侧   1-53
  TM螺旋(TMhelix)   54-76
  内侧   77-87
  TMhelix   88-110
  外侧   111-131
  TM螺旋   132-154
  内侧   155-160
  TM螺旋   161-183
  外侧   184-202
  TM螺旋   203-225
  内侧   226-245
  TM螺旋   246-268
  外侧   269-282
  TM螺旋   283-305
  内侧   306-317
  TM螺旋   318-340
  定位   氨基酸坐标
  外侧   341-344
  TM螺旋   345-367
  内侧   368-379
  TM螺旋   380-402
  外侧   403-429
  TM螺旋   430-452
  内侧   453-521
使用TMHMM2.0算法对SEQ ID NO：4所示AMT多肽预测的亚细胞区室是膜。
实施例6：与可用于实施本发明方法的多肽序列相关的测定法
AMT多肽能够跨膜运输铵。存在测量这类摄取活性的许多测定法，包括具有内源性铵转运蛋白缺陷的酵母菌株的互补测定法(Ninneman等(1994)EMBO J 13：3464-3471)，酵母、爪蟾卵母细胞(Ludewig等(2003)JBiol Chem 278：45603-45610)、植物细胞、植物根(Yuan等(2007)Plant Phys143：732-744)和整株植物(Hoque等(2006)Functional Plant Biology 33：153-163)中的摄取测定。本领域技术人员公知测量AMT活性(包括SEQID NO：2所示AMT多肽的AMT活性)的这类实验步骤。
实施例7：克隆SEQ ID NO：1所示核酸序列
除非另外说明，否则根据以下所述的标准方法进行重组DNA技术：(Sambrook(2001)Molecular Cloning：a laboratory manual，第三版ColdSpring Harbor Laboratory Press，CSH，New York)或者Ausubel等(1994)，Current Protocols in Molecular Biology，Current Protocols的第1和2卷。用于植物分子工程的标准材料和方法描述于R.D.D.Croy的PlantMolecular Biology Labfax(1993)，由BIOS Scientific Publications Ltd(UK)和Blackwell Scientific Publications(UK)出版。
使用从不同繁殖阶段以及不同生长条件下的三角褐指藻提取的mRNA合成的cDNA作为模板，通过PCR扩增编码SEQ ID NO：4所示AMT多肽序列的拟南芥cDNA。PCR扩增中使用包含用于Gateway重组的AttB位点的以下引物：
1)Prm09458(SEQ ID NO：35，有义)：
5’-ggggacaagtttgtacaaaaaagcaggcttaaacaatgatgcaggccggg-3’
2)Prm09459(SEQ ID NO：36，反义，互补)：
5’-ggggaccactttgtacaagaaagctgggtacacgagcagcaattaaacc-3′
在标准条件中使用Hifi Taq DNA聚合酶进行PCR。还使用标准方法扩增并纯化具有期望长度(包括attB位点)的PCR片段。随后实施Gateway方法的第一步骤，即BP反应，在此期间PCR片段与pDONR201质粒发生体内重组以产生根据Gateway命名的“进入克隆”。质粒pDONR201作为技术的部分从Invitrogen购买。
实施例8：使用SEQ ID NO：1所示核酸序列的表达载体构建
随后在LR反应中与用于稻转化的目的载体一起使用包含SEQ ID NO：3的进入克隆。这种载体在T-DNA边界内含有作为功能性元件的：植物可选择标记；可筛选标记表达盒和意图与已经克隆于所述进入克隆内的目的核酸序列发生LR体内重组的Gateway盒。用于组成型表达的稻GOS2启动子(SEQ ID NO：34)位于这种Gateway盒的上游。
在LR重组步骤后，产生的表达载体pGOS2::AMT(图4)根据本领域众所周知的方法转化至农杆菌菌株LBA4044中。
实施例9：植物转化
稻转化
含有表达载体的农杆菌用来转化稻植物。将稻的日本栽培品种Nipponbare的成熟干燥种子脱壳。通过在70％乙醇中孵育一分钟，随后在2％HgCl2中30分钟，随后用无菌蒸馏水洗涤6次15分钟而实施消毒。消毒的种子随后在含有2，4-D的培养基(愈伤组织诱导培养基)上萌发。在黑暗中孵育4周后，将胚发生性来自小盾片的愈伤组织切下并在同一种培养基上增殖。2周后，愈伤组织通过在同一种培养基上亚培养另外2周而繁殖或增殖。胚发生性愈伤组织片在新鲜培养基上亚培养3日，之后共培育(以增强细胞分裂活性)。
含有每个个体表达载体的农杆菌菌株LBA4404独立地用于共培育。农杆菌接种在含有适宜抗生素的AB培养基上并在28℃培养3日。随后将细菌收集并重悬在液体共培育培养基中至密度(OD600)约1。将混悬液随后转移至培养皿并将愈伤组织在该混悬液内浸泡15分钟。愈伤组织组织随后在滤纸上吸干并转移至固化的共培育培养基上并且在黑暗中于25℃孵育3日。共培育的愈伤组织在黑暗中于28℃在选择剂存在下于含有2，4-D的培养基上培育4周。在此时段期间，形成迅速生长的抗性愈伤组织岛。在这种材料转移至再生培养基并在光线下孵育后，胚发生潜力释放并且苗在随后4-5周发育。将苗从愈伤组织中切下并且在含有植物生长素的培养基上孵育2-3周，其中将苗从所述的培养基上转移至土壤。硬化的苗在高湿度和短日照下于温室中培育。
对每个构建体产生约35个独立的T0稻转化体。原代转化体从组织培养箱转移至温室。在定量PCR分析以验证T-DNA插入物的拷贝数后，仅保留表现选择剂耐受性的单拷贝转基因植物用于收获T1种子。种子随后在移植后3-5月收获。本方法以超过50％的比率产生单一基因座转化体(Aldemita和Hodges1996，Chan等1993，Hiei等1994)。
实施例10：表型评价方法
10.1评价准备
产生大约35个独立的T0稻转化体。原代转化体从组织培养箱转移至温室用于生长和收获T1种子。留下6个事件，其中所述事件的T1后代对转基因的存在/不存在以3∶1比例分离。对于这些事件中的每一事件，通过监测目视标记表达而选择含有转基因的大约10株T1幼苗(杂合子和纯合子)和缺少转基因的大约10株T1幼苗(失效合子)。转基因植物和对应的失效合子在随机位置上并排培育。温室条件是短日照(12小时光照)，在光照下28℃和在黑暗中22℃以及相对湿度70％。
4个T1事件在T2世代中按照如用于T1世代的相同评价方法作进一步评价，但每个事件采用更多的个体。使植物从播种期直至成熟期通过数字成像箱数次。在每一时间点上，对每株植物从至少6个不同角度拍摄数字图像(2048x1536像素，1600万颜色)。
10.2统计分析：F-检验
使用双因子ANOVA(方差分析)作为统计模型用于植物表型特征的整体评价。对用本发明基因转化的全部事件的全部植物的所有测量参数实施F检验。实施F检验以检查基因对于全部转化事件的作用并验证基因的整体作用(又称作全局基因作用)。用于真实全局基因作用的显著性的阈值对于F检验设置在5％概率水平上。显著性F检验值标示基因作用，意味着不仅仅基因的存在或位置才造成表型上的差异。
10.3测量的参数
生物量相关参数的测量
从播种期直至成熟期，使植物通过数字成像箱数次。在每一时间点上，对每株植物从至少6个不同角度拍摄数字图像(2048x1536像素，1600万颜色)。
植物地上部分面积(或叶生物量)通过计数在来自植物地上部分的数字图像上区别于背景的像素的总数而测定。该值对在相同时间点上从不同角度拍摄的画面进行平均化并且通过校正转化成以平方毫米表达的物理表面值。实验证实以这种方式测量的地上部分植物面积与地上植物部分的生物量相关。地上部分面积是在植物已经达到其最大叶生物量的时间点上时所测量的面积。早期活力是萌发后3周时植物(幼苗)地上面积。根生物量的提高被表述为总根生物量(测量为植物寿命中观察到的根的最大的生物量)的提高；或者表述为根/枝条指数(测量为根和枝条活性生长期中根质量和枝条质量的比例)的提高。
种子相关参数的测量
将成熟的原发花序收获、计数、装袋、加条形码标记并且随后在干燥箱内在37℃干燥3日。随后将花序脱粒并且收集及计数全部种子。使用吹气装置分开饱满粒与空粒。弃去空粒并再次对剩余部分计数。饱满粒在分析天平上称重。饱满种子数通过计数分离步骤后的饱满粒数而确定。每株植物的种子总重量通过称量从一株植物中收获的全部饱满粒而测量。每株植物种子总数通过计数从植物中收获的壳粒数目而测量。根据计数的饱满种子数及其总重量外推得出千粒重(TKW)。收获指数(HI)在本发明中定义为每株植物的种子总重量和地上面积(mm2)之间的比值再乘以因子106。每个花序的花总数在本发明中定义为种子总数与成熟的原发花序数之间的比率。种子饱满率在本发明中定义为饱满种子数占种子(或小花)总数的比例(以％表示)。
实施例11：表达编码SEQ ID NO：2所示AMT多肽的核酸序列的转基因稻植物的表型评价结果
下文展示了在正常生长条件下生长的，在用于组成型表达的GOS2启动子控制下表达编码SEQ ID NO：2所示AMT多肽的核酸序列的转基因稻植物的T2代评价结果。
如表E中所示，与相应的失效合子(对照)相比，转基因植物的早期活力、地上部分生物量、根生物量、每株植物的种子总产量、种子饱满率、饱满种子数量、每个花序的花数量和收获指数存在显著的提高。
表E：在用于组成型表达的GOS2启动子的控制下，表达编码SEQ IDNO：2所示AMT多肽的核酸序列的T2代转基因稻植物的评价结果。
  性状  T2世代中4个事件的总体平均提高％
  早期活力   39％
  地上部分生物量   16％
  根生物量   4％
  每株植物的种子总产量   31％
  种子饱满率   12％
  饱满种子数量   31％
  每个圆锥花序的花数量   6％
  收获指数   17％
实施例12：转化其他作物的例子
玉米转化
玉米的转化根据对Ishida等(1996.Nature Biotech 14(6)：745-50)描述方法的改良方法进行。在玉米中的转化是基因型依赖的并且仅特定的基因型可操作用于转化和再生。近交系A188(明尼苏达大学)或以A188作为亲本的杂种是用于转化的供体材料的良好来源，但是其它基因型也可以成功地使用。玉米穗从玉米植物中在授粉后大约11日(DAP)收获，此时不成熟胚的长度是大约1至1.2mm。不成熟胚与含有表达载体的根癌农杆菌共培育并且转基因植物通过器官发生而恢复。切下的胚在愈伤组织诱导培养基上、随后在玉米再生培养基上培育，其中所述的再生培养基含有选择剂(例如咪唑啉酮，但可以使用多种选择标记)。培养板在25℃于光照下培养2-3周，或直至苗发育。将绿色苗从每个胚转移至玉米生根培养基并在25℃培养2-3周，直至根发育。将生根的苗移植至温室的土壤中。从表现选择剂耐受的并含有单拷贝的T-DNA插入物的植物中产生T1种子。
小麦转化
小麦的转化用Ishida等Ishida等(1996)Nature Biotech 14(6)：745-50描述的方法进行。通常在转化中使用(可从墨西哥CIMMYT获得的)栽培品种Bobwhite。不成熟胚与含有表达载体的根癌农杆菌共培育并且转基因植物通过器官发生而恢复。在与农杆菌孵育后，胚在愈伤组织诱导培养基上、随后在再生培养基上体外培育，其中所述的再生培养基含有选择剂(例如咪唑啉酮，但可以使用多种选择标记)。培养平板在25℃于光照下培养2-3周，或直至苗发育。将绿色苗从每个胚转移至生根培养基并在25℃培养2-3周，直至根发育。将生根的苗移植至温室的土壤中。从表现选择剂耐受的并含有单拷贝的T-DNA插入物的植物中产生T1种子。
大豆转化
根据对Texas A&M美国专利5,164,310中所述方法的改良方法转化大豆。几个商业大豆品种对于通过这种方法的转化是可行的。栽培品种Jack(从Illinois种子基金会可获得)通常用于转化。对大豆种子消毒以便体外播种。从7日龄幼苗中切下下胚轴、胚根和一片子叶。进一步培育上胚轴和余下的子叶以发育腋生节。将这些腋生节切下并与含有表达载体的根癌农杆菌孵育。在共培育处理之后，将外植体洗涤并转移至选择培养基。将再生的苗切下并置于苗伸长培养基上。将长度不超过1cm的苗置于生根培养基上直至根发育。将生根的苗移植至温室的土壤中。从表现选择剂耐受的并含有单拷贝T-DNA插入物的植物中产生T1种子。
油菜籽/芸苔转化
使用5-6日龄幼苗的子叶柄和下胚轴作为用于组织培养的外植体并且根据Babic等(1998，Plant Cell Rep 17：183-188)转化。商业栽培品种Westar(Agriculture Canada)是用于转化的标准品种，但是也可以使用其它品种。对芸苔种子作表面消毒以便体外播种。从体外幼苗中切下具有附着子叶的子叶柄外植体，并与(含有表达载体的)农杆菌通过叶柄外植体的切口端浸入细菌混悬液而接种。外植体随后在含有3mg/l BAP、3％蔗糖、0.7％植物琼脂(Phytagar)的MSBAP-3培养基上在23℃，16小时光照下培养2天。在与农杆菌共培育2日后，将叶柄外植体转移至含有3mg/l BAP、头孢噻肟、羧苄青霉素或特美汀(300mg/l)的MSBAP-3培养基上持续7日，并且随后在含头孢噻肟、羧苄青霉素或特美汀和选择剂的MSBAP-3培养基上培养，直至苗再生。当苗具有5-10mm长度时，将苗切下并转移至苗伸长培养基(含0.5mg/l BAP的MSBAP-0.5)。将长度大约2cm的苗转移至用于根诱导的生根培养基(MS0)。将生根的苗移植至温室的土壤中。从表现选择剂耐受性并含有单拷贝T-DNA插入物的植物中产生T1种子。
苜蓿转化
苜蓿的再生性克隆使用(McKersie等，1999Plant Physiol 119：839-847)的方法加以转化。苜蓿的再生和转化是基因型依赖性的并且因而需要再生植物。已经描述了获得再生性植物的方法。例如，这些再生性植物可以选自栽培品种Rangelander(Agriculture Canada)或如Brown DCW与AAtanassov(1985.Plant Cell Tissue Culture 4：111-112)描述的任何其它商业苜蓿品种。备选地，RA3品种(威斯康星大学)已经被选择用于组织培养中(Walker等，1978Am J Bot 65：654-659)。将叶柄外植体与含有表达载体的根癌农杆菌C58C1 pMP90(McKersie等，1999Plant Physiol 119：839-847)或LBA4404的过夜培养物共培育。外植体在黑暗中在含有288mg/L Pro、53mg/L硫代脯氨酸、4.35g/L K2SO4和100μm乙酰丁香酮的SH诱导培养基上共培育3天。外植体在半浓缩Murashige-Skoog培养基(Murashige和Skoog，1962)中洗涤并平板接种在不含乙酰丁香酮而含有合适选择剂和合适抗生素以抑止农杆菌生长的相同SH诱导培养基上。在数周后，将体细胞胚转移至不含生长调节剂、不含抗生素而含有50g/L蔗糖的BOi2Y发育培养基中。体细胞胚随后在半浓缩Murashige-Skoog培养基上萌发。将生根的幼苗移植至花钵内并且在温室中培育。从表现选择剂耐受性并含有单拷贝T-DNA插入物的植物中产生T1种子。
棉花转化
使用根癌农杆菌在下胚轴外植体上进行棉花(陆地棉(Gossypiumhirsutum L.)转化。市售栽培种如Coker 130或Coker 312(SeedCo，Lubbock，TX)是用于转化的标准变种，但是也可以使用其他变种。将种子表面灭菌并在暗中萌发。从萌发的幼苗上切下长度约1-1.5厘米的下胚轴外植体。将下胚轴外植体在含有表达载体的根癌农杆菌接种物中浸渍5分钟，然后在MS+1.8mg/l KNO3+2％葡萄糖上于24℃下暗中共同培养约48小时。将外植体转移至含有适当的细菌和植物可选择标记物的相同培养基(更新若干次)，直至观察到胚发生性的愈伤组织。将愈伤组织分离并传代培养，直至出现体细胞胚。使来自体细胞胚的小植株在生根培养基上成熟，直至发育出根。将生根的苗移植至温室中的盆栽土壤中。T1种子由对选择剂显示耐性并且含有单拷贝T-DNA插入物的植物产生。
实施例13：非生物胁迫筛选的实例
干旱筛选
在正常培养条件下在盆土中培养来自选定事件数的植物，直至到达抽穗阶段。接着将其转移至停止浇水的“干旱”部分。在随机选择的盆中插入湿度探测器，以检测土壤含水量(SWC)。当SWC低一定阈值时，自动对植物持续再浇水直至再次达到正常水平。接着将植物再转移至正常条件。其余培养(植物成熟、种子收获)与不在非生物胁迫条件下培养的植物相同。如正常条件下培养所详细描述的那样记录生长和收获参数。
盐胁迫筛选
在由椰子纤维和argex(3∶1比例)构成的基质上培养植物。在将小植株移植到温室后的前两周使用正常营养液。前两周之后，向营养液中加入25mM盐(NaCl)，直至收获植物。如正常条件下培养所详细描述的那样记录生长和收获参数。
养分(氮)利用度降低筛选
在除营养液以外均为正常的条件下在盆土中培养来自6个事件的植物(T2种子)。从移植到成熟均使用特定的营养液对盆浇水，其中含有降低的氮(N)含量，通常降低7至8倍。其余培养(植物成熟、种子收获)与不在非生物胁迫条件下培养的植物相同。如正常条件下培养所详细描述的那样记录生长和收获参数。
序列表
<110>克罗普迪塞恩股份有限公司
 
<120>具有增强的产量相关性状的植物及其生产方法
 
<130>PF60250
 
<160>36
 
<170>PatentIn version 3.3
 
<210>1
<211>1566
<212>DNA
<213>三角褐指藻(Phaeodactylum tricornutum)
 
<400>1
atgtcttttg atttggacgc attctgcact ggcctgacag ccgcgtcgag ctcttctgag  60
caggctgtgt gcgctctgca aacgatcgtg gccggagttt ctaagactgt cggaggtatt  120
gacgcggaag ggattactgc aggtgttgat actttcttcc tcatttttgc gggtgccttg  180
gtcttcatga tgcaggccgg gttcgccatg ctttgtgctg gatccgtccg tcaaaagaat  240
gtaaagaata ttatgctcaa gaacttgttg gatgcctgtg gtggtgctat tggcttctac  300
accgttggtt tcggcttcgc ttatggcggt gacgacacca ccgacaagac cttcattggc  360
aacagctact tcgcgctccg tgattacaca aattatgcag gtttcttctt ccagtttgcg  420
tttgctgcca ctgccgccac gattgttgcc ggtacagttg ctgagcgatg caagatgtcg  480
gcataccttt gctactctct ctttcttacg ggtttcgtct atcccgtcgt tgtacgctct  540
gtctggagct ccaacgggtt cttgtcagcc ttcagtgccg accccttcca aggagttgga  600
accgttgact ttgccggatc aggtgtggtg cacatgactg gaggactcac cgccttgatt  660
gctgccattg ttcttggacc gcgtaagggt cggttctacg atgaggatgg caaccctctg  720
gagacgcccg ccagcttccc agcccactct gtagccctcc agatcctcgg aactttcatc  780
ttgtggttcg gatggtacgg attcaaccct ggttcagccc tgaagattgc taacgccgat  840
tcggccgcaa ccgccgcttt gtgtgccgtc accaccacta tggccgccgc tgccggttgt  900
gtttccgcca tgttcactga ctcgatcatt gacggcatgg cgaccggtga aactacgtac  960
gatctgacca tggccatgaa tggatgcctt gctggtctcg ttgccgtcac tgctggtaca  1020
tctgtcgtca ccccatgggc cgcaatcatt attggagtcg ttggaggttg ggtctacatt  1080
ggtatgtcca agcttttgat caagctcaag attgatgacg ctgtcgatgc catccctgtc  1140
catttcgcca atggtttctg gggtgtccta gccaccggcc ttttcgccaa cggtggattg  1200
atggcaaccg ctgggtacaa ctcggaacac gagggctggt tctacgaatg gggaagtggc  1260
tccggagatg gaagtcttct catctgccag cttgcttgcc tcgcctggat tattggatgg  1320
gtcaccacca ttatgacgcc cttttttatc cttttgaaca tggccggtat gttccgtgtg  1380
gacccgcttg aggaagaagt tggtcttgat atttcccatc accgtggatc tgcttacgat  1440
ctttcgggac ccagcaagga ccatgttgac gagctcatgg aaattcgtgc ctcgaagcac  1500
ggcaaggttg aggttccaaa ggaggttgcg caggctgctg atgacgccgc cgaagagact  1560
gcttaa                                                             1566
 
<210>2
<211>521
<212>PRT
<213>三角褐指藻
 
<400>2
 
Met Ser Phe Asp Leu Asp Ala Phe Cys Thr Gly Leu Thr Ala Ala Ser
1               5                   10                  15
Ser Ser Ser Glu Gln Ala Val Cys Ala Leu Gln Thr Ile Val Ala Gly
            20                  25                  30
Val Ser Lys Thr Val Gly Gly Ile Asp Ala Glu Gly Ile Thr Ala Gly
        35                  40                  45
Val Asp Thr Phe Phe Leu Ile Phe Ala Gly Ala Leu Val Phe Met Met
    50                  55                  60
Gln Ala Gly Phe Ala Met Leu Cys Ala Gly Ser Val Arg Gln Lys Asn
65                  70                  75                  80
Val Lys Asn Ile Met Leu Lys Asn Leu Leu Asp Ala Cys Gly Gly Ala
                85                  90                  95
Ile Gly Phe Tyr Thr Val Gly Phe Gly Phe Ala Tyr Gly Gly Asp Asp
            100                 105                 110
Thr Thr Asp Lys Thr Phe Ile Gly Asn Ser Tyr Phe Ala Leu Arg Asp
        115                 120                 125
Tyr Thr Asn Tyr Ala Gly Phe Phe Phe Gln Phe Ala Phe Ala Ala Thr
    130                 135                 140
Ala Ala Thr Ile Val Ala Gly Thr Val Ala Glu Arg Cys Lys Met Ser
145                 150                 155                 160
Ala Tyr Leu Cys Tyr Ser Leu Phe Leu Thr Gly Phe Val Tyr Pro Val
                165                 170                 175
Val Val Arg Ser Val Trp Ser Ser Asn Gly Phe Leu Ser Ala Phe Ser
            180                 185                 190
Ala Asp Pro Phe Gln Gly Val Gly Thr Val Asp Phe Ala Gly Ser Gly
        195                 200                 205
Val Val His Met Thr Gly Gly Leu Thr Ala Leu Ile Ala Ala Ile Val
    210                 215                 220
Leu Gly Pro Arg Lys Gly Arg Phe Tyr Asp Glu Asp Gly Asn Pro Leu
225                 230                 235                 240
Glu Thr Pro Ala Ser Phe Pro Ala His Ser Val Ala Leu Gln Ile Leu
                245                 250                 255
Gly Thr Phe Ile Leu Trp Phe Gly Trp Tyr Gly Phe Asn Pro Gly Ser
            260                 265                 270
Ala Leu Lys Ile Ala Asn Ala Asp Ser Ala Ala Thr Ala Ala Leu Cys
        275                 280                 285
Ala Val Thr Thr Thr Met Ala Ala Ala Ala Gly Cys Val Ser Ala Met
    290                 295                 300
Phe Thr Asp Ser Ile Ile Asp Gly Met Ala Thr Gly Glu Thr Thr Tyr
305                 310                 315                 320
Asp Leu Thr Met Ala Met Asn Gly Cys Leu Ala Gly Leu Val Ala Val
                325                 330                 335
Thr Ala Gly Thr Ser Val Val Thr Pro Trp Ala Ala Ile Ile Ile Gly
            340                 345                 350
Val Val Gly Gly Trp Val Tyr Ile Gly Met Ser Lys Leu Leu Ile Lys
        355                 360                 365
Leu Lys Ile Asp Asp Ala Val Asp Ala Ile Pro Val His Phe Ala Asn
    370                 375                 380
Gly Phe Trp Gly Val Leu Ala Thr Gly Leu Phe Ala Asn Gly Gly Leu
385                 390                 395                 400
Met Ala Thr Ala Gly Tyr Asn Ser Glu His Glu Gly Trp Phe Tyr Glu
                405                 410                 415
Trp Gly Ser Gly Ser Gly Asp Gly Ser Leu Leu Ile Cys Gln Leu Ala
            420                 425                 430
Cys Leu Ala Trp Ile Ile Gly Trp Val Thr Thr Ile Met Thr Pro Phe
        435                 440                 445
Phe Ile Leu Leu Asn Met Ala Gly Met Phe Arg Val Asp Pro Leu Glu
    450                 455                 460
Glu Glu Val Gly Leu Asp Ile Ser His His Arg Gly Ser Ala Tyr Asp
465                 470                 475                 480
Leu Ser Gly Pro Ser Lys Asp His Val Asp Glu Leu Met Glu Ile Arg
                485                 490                 495
Ala Ser Lys His Gly Lys Val Glu Val Pro Lys Glu Val Ala Gln Ala
            500                 505                 510
Ala Asp Asp Ala Ala Glu Glu Thr Ala
        515                 520
 
<210>3
<211>1380
<212>DNA
<213>三角褐指藻
 
<400>3
atgatgcagg ccgggttcgc catgctttgt gctggatccg tccgtcaaaa gaatgtaaag    60
aatattatgc tcaagaactt gttggatgcc tgtggtggtg ctattggctt ctacaccgtt    120
ggtttcggct tcgcttatgg cggtgacgac accagcgaca agaccttcat tggcaacagc    180
tacttcgcgc tccgtgatta cacaaattat gcaggtttct tcttccagtt tgcgtttgct    240
gccactgccg ccacgattgt tgccggtaca gttgctgagc gatgcaagat gtcggcatac    300
ctttgctact ctctctttct tacgggtttc gtctatcccg tcgttgtacg ctctgtctgg    360
agctccaacg ggttcttgtc agccttcagt gccgacccct tccaaggagt tggaaccgtt    420
gactttgccg gatcaggtgt ggtgcacatg actggaggac tcaccgcctt gattgctgcc    480
attgttcttg gaccgcgtaa gggtcggttc tacgatgagg atggcaaccc cctggagacg    540
cccgccagct tcccagccca ctctgtagcc ctccagatcc tcggaacttt catcttgtgg    600
ttcggatggt acggattcaa ccctggttca gccctgaaga ttgctaacgc cgattcggcc    660
acaaccgccg ctttgtgtgc cgtcaccacc actatggccg ccgctgccgg ttgtgtttcc    720
gccatgttca ctgactcgat cattgacggc atggcgaccg gtgaaactac gtacgatctg    780
accatggcca tgaatggatg ccttgctggt ctcgttgccg tcactgctgg tacatctgtc    840
gtcaccccat gggccgcaat cattattgga gtcattggag gttgggtcta cattggtatg    900
tccaagcttt tgataaagct caagattgat gacgctgtcg atgccatccc tgtccatttc    960
gccaacggtt tctggggtgt cctagccacc ggccttttcg ccaacggtgg attgatggca    1020
accgctgggt acaactcgga acacgagggc tggttctacg aatggggaag tggctccgga    1080
gatggaagtc ttctcatctg ccagcttgct tgcctcgcct ggattattgg atgggtcacc    1140
accattatga cgcccttttt tatccttttg aacatggccg gtatgttccg tgtggacccg    1200
cttgaggaag aagttggtct tgatatttcc catcaccgtg gatctgctta cgatctttcg    1260
ggacccagca aggaccatgt tgacgagctc atggaaattc gtgcctcgaa gcacggcaag    1320
gttgaggttc caaaggaggt tgcgcaggct gctgatgacg ccgccgaaga gactgcttaa    1380
<210>4
<211>459
<212>PRT
<213>三角褐指藻
 
<400>4
 
Met Met Gln Ala Gly Phe Ala Met Leu Cys Ala Gly Ser Val Arg Gln
1               5                   10                  15
Lys Asn Val Lys Asn Ile Met Leu Lys Asn Leu Leu Asp Ala Cys Gly
            20                  25                  30
Gly Ala Ile Gly Phe Tyr Thr Val Gly Phe Gly Phe Ala Tyr Gly Gly
        35                  40                  45
Asp Asp Thr Ser Asp Lys Thr Phe Ile Gly Asn Ser Tyr Phe Ala Leu
    50                  55                  60
Arg Asp Tyr Thr Asn Tyr Ala Gly Phe Phe Phe Gln Phe Ala Phe Ala
65                  70                  75                  80
Ala Thr Ala Ala Thr Ile Val Ala Gly Thr Val Ala Glu Arg Cys Lys
                85                  90                  95
Met Ser Ala Tyr Leu Cys Tyr Ser Leu Phe Leu Thr Gly Phe Val Tyr
            100                 105                 110
Pro Val Val Val Arg Ser Val Trp Ser Ser Asn Gly Phe Leu Ser Ala
        115                 120                 125
Phe Ser Ala Asp Pro Phe Gln Gly Val Gly Thr Val Asp Phe Ala Gly
    130                 135                 140
Ser Gly Val Val His Met Thr Gly Gly Leu Thr Ala Leu Ile Ala Ala
145                 150                 155                 160
Ile Val Leu Gly Pro Arg Lys Gly Arg Phe Tyr Asp Glu Asp Gly Asn
                165                 170                 175
Pro Leu Glu Thr Pro Ala Ser Phe Pro Ala His Ser Val Ala Leu Gln
            180                 185                 190
Ile Leu Gly Thr Phe Ile Leu Trp Phe Gly Trp Tyr Gly Phe Asn Pro
        195                 200                 205
Gly Ser Ala Leu Lys Ile Ala Asn Ala Asp Ser Ala Thr Thr Ala Ala
    210                 215                 220
Leu Cys Ala Val Thr Thr Thr Met Ala Ala Ala Ala Gly Cys Val Ser
225                 230                 235                 240
Ala Met Phe Thr Asp Ser Ile Ile Asp Gly Met Ala Thr Gly Glu Thr
                245                 250                 255
Thr Tyr Asp Leu Thr Met Ala Met Asn Gly Cys Leu Ala Gly Leu Val
            260                 265                 270
Ala Val Thr Ala Gly Thr Ser Val Val Thr Pro Trp Ala Ala Ile Ile
        275                 280                 285
Ile Gly Val Ile Gly Gly Trp Val Tyr Ile Gly Met Ser Lys Leu Leu
    290                 295                 300
Ile Lys Leu Lys Ile Asp Asp Ala Val Asp Ala Ile Pro Val His Phe
305                 310                 315                 320
Ala Asn Gly Phe Trp Gly Val Leu Ala Thr Gly Leu Phe Ala Asn Gly
                325                 330                 335
Gly Leu Met Ala Thr Ala Gly Tyr Asn Ser Glu His Glu Gly Trp Phe
            340                 345                 350
Tyr Glu Trp Gly Ser Gly Ser Gly Asp Gly Ser Leu Leu Ile Cys Gln
        355                 360                 365
Leu Ala Cys Leu Ala Trp Ile Ile Gly Trp Val Thr Thr Ile Met Thr
    370                 375                 380
Pro Phe Phe Ile Leu Leu Asn Met Ala Gly Met Phe Arg Val Asp Pro
385                 390                 395                 400
Leu Glu Glu Glu Val Gly Leu Asp Ile Ser His His Arg Gly Ser Ala
                405                 410                 415
Tyr Asp Leu Ser Gly Pro Ser Lys Asp His Val Asp Glu Leu Met Glu
            420                 425                 430
Ile Arg Ala Ser Lys His Gly Lys Val Glu Val Pro Lys Glu Val Ala
        435                 440                 445
Gln Ala Ala Asp Asp Ala Ala Glu Glu Thr Ala
    450                 455
 
<210>5
<211>1620
<212>DNA
<213>三角褐指藻
 
<400>5
atgtcgagta gtgctatcta tcaatcttgc gccggtcaat tcgatagcgg tgagcagctt    60
gatcagcttc tgcagtgcct ctctacggga catgacggcg cgctaagcga tcagaccagc    120
aacctcgcag gaggtatcga tgccttttat cttatctttg ccggggccct tgtctacttc    180
atgcagacag gatttgctat gctctgtgcc ggatccattc gagcgaagaa tgtcaagaat    240
gtgattctct ggaacttgct cgattcatgt ggaggcggtc tcgcgttctg gagtgtaggc    300
tatgcctttg cctacggtgg agacaatgct gggtccaaga catttgttgg taacgcaggc    360
tttttcctcc agggagatga cattcgactg gaaaactggt ttttccaatt tgcctttgct    420
tgtgcccttt cctcaattgt cgctggaacg atcgctgagc gcactcaaat gaaggcctat    480
ttgatgtatt ccgttttttt ggctgggttt gtctatccag ttgtcgccca cgcattttgg    540
tcgagcaacg gattcctctc caacacagcc acagatccat tgtggggatc tggcgccatt    600
gacttggcgg gctctggacc agtccacatg accggaggtg ttacggcttt ggcggcagct    660
ctggttttgg gccctcgcat tggtcgcttc tacgacaagg agggcaatcc tctcgaagag    720
ccagccgaat ttcctcccca ttcggttgcc ttgcagtttc tgggaacgtt ttgtctttgg    780
tttggctggt acggctttaa cccaggttcc gtcttcttca tttcgagtat tgaaaacggt    840
caagttgcgg ctttggtagc cgtcaatacc accctagctg cgtgtgcggg tgccgtcagc    900
gccatgttta cttcaacttt atttgactac tggtacaccg gcttgcacac atacgatttg    960
ggctacacta tgaacggatg tttgacggga ttggtcgcga taacagcggg atgcgcgact    1020
gttgaaacgt gggctgccgt cctgattggt attggcgctg gttggtttta cctgttgggt    1080
tcaaagttgc ttgtctactt ccgtattgac gatgctgtcg acgccattcc cgtgcatatg    1140
gtgggtggcg cctggggtgt gatcgcgacg ggccttttta cgaagggaga actactattg    1200
gccgcctttg gccaggagga acatgttgga tggttctacg agtggggcag tgggagcggt    1260
aactttaccc taatcggaat tcaattgctg tctgtgctgt tcattttcgc ctggactttt    1320
tccgtcatgg gaatttattt ttacgccctt agcttcatgg gttggttgcg catagatccg    1380
ttggaagagg aggttggtat ggatatttcg cgccacaagg gctcggcata cgacatgact  1440
tcagcaaata tggagcaggt acggtcgttg atggacgacc gcagtacgag caatcgaggc  1500
aagctgcgta agtcgtccat cattgagaag ccggccaaaa caggtccgat cgagggagga  1560
actgcctccg gagaatcaga aattaaggag tcggacgtgg aacatgccga gagggtctaa  1620
 
<210>6
<211>539
<212>PRT
<213>三角褐指藻
 
<400>6
 
Met Ser Ser Ser Ala Ile Tyr Gln Ser Cys Ala Gly Gln Phe Asp Ser
1               5                   10                  15
Gly Glu Gln Leu Asp Gln Leu Leu Gln Cys Leu Ser Thr Gly His Asp
            20                  25                  30
Gly Ala Leu Ser Asp Gln Thr Ser Asn Leu Ala Gly Gly Ile Asp Ala
        35                  40                  45
Phe Tyr Leu Ile Phe Ala Gly Ala Leu Val Tyr Phe Met Gln Thr Gly
    50                  55                  60
Phe Ala Met Leu Cys Ala Gly Ser Ile Arg Ala Lys Asn Val Lys Asn
65                  70                  75                  80
Val Ile Leu Trp Asn Leu Leu Asp Ser Cys Gly Gly Gly Leu Ala Phe
                85                  90                  95
Trp Ser Val Gly Tyr Ala Phe Ala Tyr Gly Gly Asp Asn Ala Gly Ser
            100                 105                 110
Lys Thr Phe Val Gly Asn Ala Gly Phe Phe Leu Gln Gly Asp Asp Ile
        115                 120                 125
Arg Leu Glu Asn Trp Phe Phe Gln Phe Ala Phe Ala Cys Ala Leu Ser
    130                 135                 140
Ser Ile Val Ala Gly Thr Ile Ala Glu Arg Thr Gln Met Lys Ala Tyr
145                 150                 155                 160
Leu Met Tyr Ser Val Phe Leu Ala Gly Phe Val Tyr Pro Val Val Ala
                165                 170                 175
His Ala Phe Trp Ser Ser Asn Gly Phe Leu Ser Asn Thr Ala Thr Asp
            180                 185                 190
Pro Leu Trp Gly Ser Gly Ala Ile Asp Leu Ala Gly Ser Gly Pro Val
        195                 200                 205
His Met Thr Gly Gly Val Thr Ala Leu Ala Ala Ala Leu Val Leu Gly
    210                 215                 220
Pro Arg Ile Gly Arg Phe Tyr Asp Lys Glu Gly Asn Pro Leu Glu Glu
225                 230                 235                 240
Pro Ala Glu Phe Pro Pro His Ser Val Ala Leu Gln Phe Leu Gly Thr
                245                 250                 255
Phe Cys Leu Trp Phe Gly Trp Tyr Gly Phe Asn Pro Gly Ser Val Phe
            260                 265                 270
Phe Ile Ser Ser Tle Glu Asn Gly Gln Val Ala Ala Leu Val Ala Val
        275                 280                 285
Asn Thr Thr Leu Ala Ala Cys Ala Gly Ala Val Ser Ala Met Phe Thr
    290                 295                 300
Ser Thr Leu Phe Asp Tyr Trp Tyr Thr Gly Leu His Thr Tyr Asp Leu
305                 310                 315                 320
Gly Tyr Thr Met Asn Gly Cys Leu Thr Gly Leu Val Ala Ile Thr Ala
                325                 330                 335
Gly Cys Ala Thr Val Glu Thr Trp Ala Ala Val Leu Ile Gly Ile Gly
            340                 345                 350
Ala Gly Trp Phe Tyr Leu Leu Gly Ser Lys Leu Leu Val Tyr Phe Arg
        355                 360                 365
Ile Asp Asp Ala Val Asp Ala Ile Pro Val His Met Val Gly Gly Ala
    370                 375                 380
Trp Gly Val Ile Ala Thr Gly Leu Phe Thr Lys Gly Glu Leu Leu Leu
385                 390                 395                 400
Ala Ala Phe Gly Gln Glu Glu His Val Gly Trp Phe Tyr Glu Trp Gly
                405                 410                 415
Ser Gly Ser Gly Asn Phe Thr Leu Ile Gly Ile Gln Leu Leu Ser Val
            420                 425                 430
Leu Phe Ile Phe Ala Trp Thr Phe Ser Val Met Gly Ile Tyr Phe Tyr
        435                 440                 445
Ala Leu Ser Phe Met Gly Trp Leu Arg Ile Asp Pro Leu Glu Glu Glu
    450                 455                 460
Val Gly Met Asp Ile Ser Arg His Lys Gly Ser Ala Tyr Asp Met Thr
465                 470                 475                 480
Ser Ala Asn Met Glu Gln Val Arg Ser Leu Met Asp Asp Arg Ser Thr
                485                 490                 495
Ser Asn Arg Gly Lys Leu Arg Lys Ser Ser Ile Ile Glu Lys Pro Ala
            500                 505                 510
Lys Thr Gly Pro Ile Glu Gly Gly Thr Ala Ser Gly Glu Ser Glu Ile
        515                 520                 525
Lys Glu Ser Asp Val Glu His Ala Glu Arg Val
    530                 535
 
<210>7
<211>1695
<212>DNA
<213>三角褐指藻
 
<400>7
atgaatagcc gtaccttttc ttacaacagc aacgatggga atgagttgtt ggatgcatgc  60
atggcttatc tcggcgctaa cgccacgacg tacgacttgc tcggctgcgt gtctgcgcaa  120
ctcagcaacg aagtcgggag tcgcgaattc tctcgttcgg tgctgctcgt ctacgctgct  180
gcactcgtat tctttatgca agccggcttc gccatgctct gtgccggagc cgtccggaaa  240
aagaacgtgc agaacaccat gctcaagaac ttgttggacg cctgtggagc cgccgtcgcc  300
tttttcatcg tgggctacgc tatagccttt ggaggcatgg aaccggaatc gcccaacaag  360
acatttctcg ggaacaccaa tttcttttta atgggagtgg acgatttggc cttttggttg  420
ttccagtacg ccttttccgc tgcctctgca accatcgtcg cgggaacttt ggccgagcgc  480
tgccaaatgg ttgcctactt gtgttactcc gtaatgttga cgggatgggt ctatccgatt  540
atcgcgcacg cgatttggtc acccaacggt tggctctccg ccagttccgt ggatccgcta    600
tggggtgtcg gcatggtcga tttcgccggc tcgggagtag tgcacatgac tggaggcgtt    660
accgccttgt tcgccactct catactcgga cctcgccgtg gacggtttca cgatgaaacc    720
ggacgccggc tcgacaaacc aaaatccttt cccggacact ccgtggcctt gcagatgctc    780
ggtaccttca ttctctggtt tggttggtat ggattcaatt gcggttcggc gttactcatc    840
gacaagcccg gtgctaacga tattgccgcc ttggcgggcg tcaatacgac actttctgcc    900
ggagtcgctg ggatagttgc actctttgtc aacctctggt acctcgagcg aacaaccgga    960
gaaccttttt ttgatttgac ctacgccatg aacggatccc tttcgggtct cgtggccatc    1020
acaggaggtt gcgctgttct cgagccctgg gcggcagcgg tcactggagt cggtgccggt    1080
atcttgtaca tggttggatc acgaggtttg gtcatgttgc gattggatga cgcggttgac    1140
gcgattcccg ttcattttgt gaacggggcc tggggtctca tgtcggtcgg attgttcgcg    1200
tcaccagcac gcttgctggc cgcgtacgac aacgacgctc atcctggatg gttctattcc    1260
ctacgaaacg gcaaatcgga cgggcgtttg gttggagttc agctggtagg cattgtattt    1320
atcgtgggat gggtcatggt gattatgttg cccttcttca tttggttgga ttggaaggga    1380
tggttccggt cggatccttt ggaagaaatt gtgggattgg acacgtcgta ccacggtggt    1440
ctcgctttgc tgggcgggga cgatgaagtc aaccctgagt acatttccgc gtacaagaag    1500
caaaggaacg aaggtacgct gcggcgtagg cataaaggga caaccagcag tgtcaagacg    1560
ggagaagtag aatcggacga aggcgccgaa cgggtggcgc ccgaagcgac gaagcacaaa    1620
aagattccga tcgctacaac gacagaggtt ttcaatggag gtcaagatac ggatcaaatg    1680
tcctaccacg cctga                                                     1695
 
<210>8
<211>564
<212>PRT
<213>三角褐指藻
 
<400>8
 
Met Asn Ser Arg Thr Phe Ser Tyr Asn Ser Asn Asp Gly Asn Glu Leu
1               5                   10                  15
Leu Asp Ala Cys Met Ala Tyr Leu Gly Ala Asn Ala Thr Thr Tyr Asp
            20                  25                  30
Leu Leu Gly Cys Val Ser Ala Gln Leu Ser Asn Glu Val Gly Ser Arg
        35                  40                  45
Glu Phe Ser Arg Ser Val Leu Leu Val Tyr Ala Ala Ala Leu Val Phe
    50                  55                  60
Phe Met Gln Ala Gly Phe Ala Met Leu Cys Ala Gly Ala Val Arg Lys
65                  70                  75                  80
Lys Asn Val Gln Asn Thr Met Leu Lys Asn Leu Leu Asp Ala Cys Gly
                85                  90                  95
Ala Ala Val Ala Phe Phe Ile Val Gly Tyr Ala Ile Ala Phe Gly Gly
            100                 105                 110
Met Glu Pro Glu Ser Pro Asn Lys Thr Phe Leu Gly Asn Thr Asn Phe
        115                 120                 125
Phe Leu Met Gly Val Asp Asp Leu Ala Phe Trp Leu Phe Gln Tyr Ala
    130                 135                 140
Phe Ser Ala Ala Ser Ala Thr Ile Val Ala Gly Thr Leu Ala Glu Arg
145                 150                 155                 160
Cys Gln Met Val Ala Tyr Leu Cys Tyr Ser Val Met Leu Thr Gly Trp
                165                 170                 175
Val Tyr Pro Ile Ile Ala His Ala Ile Trp Ser Pro Asn Gly Trp Leu
            180                 185                 190
Ser Ala Ser Ser Val Asp Pro Leu Trp Gly Val Gly Met Val Asp Phe
        195                 200                 205
Ala Gly Ser Gly Val Val His Met Thr Gly Gly Val Thr Ala Leu Phe
    210                 215                 220
Ala Thr Leu Ile Leu Gly Pro Arg Arg Gly Arg Phe His Asp Glu Thr
225                 230                 235                 240
Gly Arg Arg Leu Asp Lys Pro Lys Ser Phe Pro Gly His Ser Val Ala
                245                 250                 255
Leu Gln Met Leu Gly Thr Phe Ile Leu Trp Phe Gly Trp Tyr Gly Phe
            260                 265                 270
Asn Cys Gly Ser Ala Leu Leu Ile Asp Lys Pro Gly Ala Asn Asp Ile
        275                 280                 285
Ala Ala Leu Ala Gly Val Asn Thr Thr Leu Ser Ala Gly Val Ala Gly
    290                 295                 300
Ile Val Ala Leu Phe Val Asn Leu Trp Tyr Leu Glu Arg Thr Thr Gly
305                 310                 315                 320
Glu Pro Phe Phe Asp Leu Thr Tyr Ala Met Asn Gly Ser Leu Ser Gly
                325                 330                 335
Leu Val Ala Ile Thr Gly Gly Cys Ala Val Leu Glu Pro Trp Ala Ala
            340                 345                 350
Ala Val Thr Gly Val Gly Ala Gly Ile Leu Tyr Met Val Gly Ser Arg
        355                 360                 365
Gly Leu Val Met Leu Arg Leu Asp Asp Ala Val Asp Ala Ile Pro Val
    370                 375                 380
His Phe Val Asn Gly Ala Trp Gly Leu Met Ser Val Gly Leu Phe Ala
385                 390                 395                 400
Ser Pro Ala Arg Leu Leu Ala Ala Tyr Asp Asn Asp Ala His Pro Gly
                405                 410                 415
Trp Phe Tyr Ser Leu Arg Asn Gly Lys Ser Asp Gly Arg Leu Val Gly
            420                 425                 430
Val Gln Leu Val Gly Ile Val Phe Ile Val Gly Trp Val Met Val Ile
        435                 440                 445
Met Leu Pro Phe Phe Ile Trp Leu Asp Trp Lys Gly Trp Phe Arg Ser
    450                 455                 460
Asp Pro Leu Glu Glu Ile Val Gly Leu Asp Thr Ser Tyr His Gly Gly
465                 470                 475                 480
Leu Ala Leu Leu Gly Gly Asp Asp Glu Val Asn Pro Glu Tyr Ile Ser
                485                 490                 495
Ala Tyr Lys Lys Gln Arg Asn Glu Gly Thr Leu Arg Arg Arg His Lys
            500                 505                 510
Gly Thr Thr Ser Ser Val Lys Thr Gly Glu Val Glu Ser Asp Glu Gly
        515                 520                 525
Ala Glu Arg Val Ala Pro Glu Ala Thr Lys His Lys Lys Ile Pro Ile
    530                 535                 540
Ala Thr Thr Thr Glu Val Phe Asn Gly Gly Gln Asp Thr Asp Gln Met
545                 550                 555                 560
Ser Tyr His Ala
 
<210>9
<211>1554
<212>DNA
<213>三角褐指藻
 
<400>9
atggacgacg cgagctttat ccaaagcctg gtggaagggt acggtacctc gagcaaccac  60
accaccgtct atggatattg ctccaatgag gcggaaggag agaccaacct tattttgcaa  120
tgtattacgg aggtcatgga gcaaaagcag ctcgaaggag atcgtaacgt gaatcggtgg  180
ctaatgcttt tttccggtgg gctgatcttc ttcatgcaga ctggctttgc gatgctttgc  240
gctggttgcg tgcgcaaaaa gaacgttcaa aatacgatgc ttaaaaatct tttggatgcc  300
tgtggagctg ctctaggctt tttcctacta ggctacgctt ttgcgtttgg cggacaagac  360
gaccgggacg atgttacttt catcggaact tccaactttc taaacaccgg aaaagtcgat  420
atgtccttct ggtttttcca gtttgcattc tcggccactg ccgtgactat cgtcgcagga  480
actttggcag agcgttgcca aatggtagca tacctttgct attccatatt tttgacaggt  540
tttgtgtacc cggttgccgc ccacacaatt tggtctcgca acggcttcct cagcagcaca  600
gcagtagacc cttttcaagg tgtgggagcg attgatttcg ccggatccgg tgtggttcat  660
gtgacgggag gaaccacggc tctcgtcgcc acatatattc ttggagctag aaaaggtcgt    720
ttctacgaca atcgcggtcg ccagctggag acgccaaagt cctttccggg gcattcagtt    780
gctctgcagc tacttggtac attcgtattg tggtttggat ggtacggctt caatcctgga    840
tcagcattgc tgctggccca cacttcggat acgggtttcg tggcatcccg agcggctgtc    900
aatacctcgc tttcagctgc ttccggagcc gtatcggcac tgatgacaaa tatgtttatg    960
gaagagcgtt ccaccggcga atactccttt aacattatca tggccatgaa tggcgcctta    1020
gctggtctag tgtcaattac agcagcttgt ggtaccgtac aaaactgggc agccctttgc    1080
actggatgta ttggaggtct tatctacttg tggggttcca aaacgctggt tcgtttgaaa    1140
ttggacgatg ctgttgacgc gattccagtg cacatgtttg caggtggctg gggattgctt    1200
gctgtgggtt tgttaagtga tcctgacctc atgcacattg cctatgggac tggcaatcat    1260
cctggtttat tgtattcttg ggggttaggg gagtttaacg ccatcttgct gagcaatcaa    1320
gtgttggaac tagttttcgt ggcgggatgg gcttttggta ccatgacgcc tttctttttg    1380
ttcatcaatc gtatgggatg gttccggtcg gacagtttgg aggagttggt cggtttggat    1440
gaggcctacc acggaggtaa acatggcggg gaagaagtgg tggaactatc cgctctagaa    1500
ggctttatca aaaacaagat cagacaatcg caaattcggt cgccttacaa ttag          1554
 
<210>10
<211>517
<212>PRT
<213>三角褐指藻
 
<400>10
 
Met Asp Asp Ala Ser Phe Ile Gln Ser Leu Val Glu Gly Tyr Gly Thr
1               5                   10                  15
Ser Ser Asn His Thr Thr Val Tyr Gly Tyr Cys Ser Asn Glu Ala Glu
            20                  25                  30
Gly Glu Thr Asn Leu Ile Leu Gln Cys Ile Thr Glu Val Met Glu Gln
        35                  40                  45
Lys Gln Leu Glu Gly Asp Arg Asn Val Asn Arg Trp Leu Met Leu Phe
    50                  55                  60
Ser Gly Gly Leu Ile Phe Phe Met Gln Thr Gly Phe Ala Met Leu Cys
65                  70                  75                  80
Ala Gly Cys Val Arg Lys Lys Asn Val Gln Asn Thr Met Leu Lys Asn
                85                  90                  95
Leu Leu Asp Ala Cys Gly Ala Ala Leu Gly Phe Phe Leu Leu Gly Tyr
            100                 105                 110
Ala Phe Ala Phe Gly Gly Gln Asp Asp Arg Asp Asp Val Thr Phe Ile
        115                 120                 125
Gly Thr Ser Asn Phe Leu Asn Thr Gly Lys Val Asp Met Ser Phe Trp
    130                 135                 140
Phe Phe Gln Phe Ala Phe Ser Ala Thr Ala Val Thr Ile Val Ala Gly
145                 150                 155                 160
Thr Leu Ala Glu Arg Cys Gln Met Val Ala Tyr Leu Cys Tyr Ser Ile
                165                 170                 175
Phe Leu Thr Gly Phe Val Tyr Pro Val Ala Ala His Thr Ile Trp Ser
            180                 185                 190
Arg Asn Gly Phe Leu Ser Ser Thr Ala Val Asp Pro Phe Gln Gly Val
        195                 200                 205
Gly Ala Ile Asp Phe Ala Gly Ser Gly Val Val His Val Thr Gly Gly
    210                 215                 220
Thr Thr Ala Leu Val Ala Thr Tyr Ile Leu Gly Ala Arg Lys Gly Arg
225                 230                 235                 240
Phe Tyr Asp Asn Arg Gly Arg Gln Leu Glu Thr Pro Lys Ser Phe Pro
                245                 250                 255
Gly His Ser Val Ala Leu Gln Leu Leu Gly Thr Phe Val Leu Trp Phe
            260                 265                 270
Gly Trp Tyr Gly Phe Asn Pro Gly Ser Ala Leu Leu Leu Ala His Thr
        275                 280                 285
Ser Asp Thr Gly Phe Val Ala Ser Arg Ala Ala Val Asn Thr Ser Leu
    290                 295                 300
Ser Ala Ala Ser Gly Ala Val Ser Ala Leu Met Thr Asn Met Phe Met
305                 310                 315                 320
Glu Glu Arg Ser Thr Gly Glu Tyr Ser Phe Asn Ile Ile Met Ala Met
                325                 330                 335
Asn Gly Ala Leu Ala Gly Leu Val Ser Ile Thr Ala Ala Cys Gly Thr
            340                 345                 350
Val Gln Asn Trp Ala Ala Leu Cys Thr Gly Cys Ile Gly Gly Leu Ile
        355                 360                 365
Tyr Leu Trp Gly Ser Lys Thr Leu Val  Arg Leu Lys Leu Asp Asp Ala
    370                 375                 380
Val Asp Ala Ile Pro Val His Met Phe Ala Gly Gly Trp Gly Leu Leu
385                 390                 395                 400
Ala Val Gly Leu Leu Ser Asp Pro Asp Leu Met His Ile Ala Tyr Gly
                405                 410                 415
Thr Gly Asn His Pro Gly Leu Leu Tyr Ser Trp Gly Leu Gly Glu Phe
            420                 425                 430
Asn Ala Ile Leu Leu Ser Asn Gln Val Leu Glu Leu Val Phe Val Ala
        435                 440                 445
Gly Trp Ala Phe Gly Thr Met Thr Pro Phe Phe Leu Phe Ile Asn Arg
    450                 455                 460
Met Gly Trp Phe Arg Ser Asp Ser Leu Glu Glu Leu Val Gly Leu Asp
465                 470                 475                 480
Glu Ala Tyr His Gly Gly Lys His Gly Gly Glu Glu Val Val Glu Leu
                485                 490                 495
Ser Ala Leu Glu Gly Phe Ile Lys Asn Lys Ile Arg Gln Ser Gln Ile
            500                 505                 510
Arg Ser Pro Tyr Asn
        515
 
<210>11
<211>1704
<212>DNA
<213>三角褐指藻
 
<400>11
atgagtcact ctagtttgga tgtgttcggg acctgccttg cccaagttgg cgaagacgca    60
acgacaaagg agctactaga atgcgtttcc tttagtttgt cgcgagcagt gccagacggt    120
ctcgatgagc ctagttctaa aggcttcacg cggtctatcg ttgtcgtgtt tgcggctgcc    180
ttggtttttt tcatgcaagc cggctttgcc atgctgtgcg ctggagccgt tagggccaag    240
aatgttcaaa acaccatgct caagaatctt ttggatgctt gtggtgccgc cattgcgttc    300
tttactgtag gctacgcctt tgcctttggc ggtacggact ttcccaccga caccgacacc    360
gacaccggca acaaccaaac aacattcatt ggcacatcga actttttctt ggtgaatgtg    420
gacgattatt ccttttggct gtttcaatac gcattttccg ccgcgtccgc aaccattgtt    480
gctggaacac tggctgaacg gtgtcaaatg gccgcctacc tgggatattc cgctttgtta    540
acgggatggg tgtaccccat tgtcgctcac gctgtatgga acgtccacgg cttcctatcg    600
gctcatgcgg tagaaccttt gtggggggtt ggaatggtag attttgccgg ttctggggtc    660
gttcacgtta cgggaggtgt gacagcgctc ttcgcgacaa taattctggg tccccgccgt    720
ggacgctttc acgaccaaga tggccaaaga ttgataaggc cgcgaatatt tcctggacac    780
tcctttgctc tgcaaatgct tggaaccctt atcttatggt ttggctggta cggattcaat    840
attggcgctg ctctgctgct ggacgtgcct agttcagaca atattgcagc tctggctgcg    900
gtgaatacga ccttgtcggg cgggacggct ggcatcgttg ctctcttttt caatttgtgg    960
tatctggaca aaagaactgg cgaagcctat tttgacttga aatttgccat gaatgggtgc    1020
ctctgcggtc tcgtggccat cactggaggc tgtggtgtgg tcgaaccctg ggctgccgtt    1080
gtgattggct ttgtcgccgg tttgttgtac aacatcggaa gtcgcggact tatatatttg    1140
cgtttggatg atgccgtgga tgccattccg gtacatttgt gcaacggctc gtggggtctc    1200
gtagcagtag ggctgtttgc ctccccctcc cggctactag ttatttacgg acatagcgat    1260
catccaggat ggttttactc attacgagat ggcgaatccg atttccggtt actggcttcc    1320
cagttggtgg gccttatttt cattgtcttc tgggtcatgt tcaacatgct gccttttttc    1380
gtttggttaa actaccgtgg ctggtttcgg tccgatccgt tggaagagtt ggtgggtctc    1440
gacctgagct atcacggcgg tttaatgctg cacgaggaag ttgatcccga atacatatcg    1500
gcctatcgca agggccaaca cgaggctcat tctcgtactc tgcgacaacg gaaacgcaca    1560
tcccacgtgc gcttggaatc agtgagcgaa cattccgttg cgccaaatgg cggagactca    1620
gcccatacta gtaacggcga ttcgctcacg gaaacggtca ctatccgtga accggactcc    1680
ggttggccaa gggggaacgt ataa                                           1704
 
<210>12
<211>567
<212>PRT
<213>三角褐指藻
 
<400>12
 
Met Ser His Ser Ser Leu Asp Val Phe Gly Thr Cys Leu Ala Gln Val
1               5                   10                  15
Gly Glu Asp Ala Thr Thr Lys Glu Leu Leu Glu Cys Val Ser Phe Ser
            20                  25                  30
Leu Ser Arg Ala Val Pro Asp Gly Leu Asp Glu Pro Ser Ser Lys Gly
        35                  40                  45
Phe Thr Arg Ser Ile Val Val Val Phe Ala Ala Ala Leu Val Phe Phe
    50                  55                  60
Met Gln Ala Gly Phe Ala Met Leu Cys Ala Gly Ala Val Arg Ala Lys
65                  70                  75                  80
Asn Val Gln Asn Thr Met Leu Lys Asn Leu Leu Asp Ala Cys Gly Ala
                85                  90                  95
Ala Ile Ala Phe Phe Thr Val Gly Tyr Ala Phe Ala Phe Gly Gly Thr
            100                 105                 110
Asp Phe Pro Thr Asp Thr Asp Thr Asp Thr Gly Asn Asn Gln Thr Thr
        115                 120                 125
Phe Ile Gly Thr Ser Asn Phe Phe Leu Val Asn Val Asp Asp Tyr Ser
    130                 135                 140
Phe Trp Leu Phe Gln Tyr Ala Phe Ser Ala Ala Ser Ala Thr Ile Val
145                 150                 155                 160
Ala Gly Thr Leu Ala Glu Arg Cys Gln Met Ala Ala Tyr Leu Gly Tyr
                165                 170                 175
Ser Ala Leu Leu Thr Gly Trp Val Tyr Pro Ile Val Ala His Ala Val
            180                 185                 190
Trp Asn Val His Gly Phe Leu Ser Ala His Ala Val Glu Pro Leu Trp
        195                 200                 205
Gly Val Gly Met Val Asp Phe Ala Gly Ser Gly Val Val His Val Thr
    210                 215                 220
Gly Gly Val Thr Ala Leu Phe Ala Thr Ile Ile Leu Gly Pro Arg Arg
225                 230                 235                 240
Gly Arg Phe His Asp Gln Asp Gly Gln Arg Leu Ile Arg Pro Arg Ile
                245                 250                 255
Phe Pro Gly His Ser Phe Ala Leu Gln Met Leu Gly Thr Leu Ile Leu
            260                 265                 270
Trp Phe Gly Trp Tyr Gly Phe Asn Ile Gly Ala Ala Leu Leu Leu Asp
        275                 280                 285
Val Pro Ser Ser Asp Asn Ile Ala Ala Leu Ala Ala Val Asn Thr Thr
    290                 295                 300
Leu Ser Gly Gly Thr Ala Gly Ile Val Ala Leu Phe Phe Asn Leu Trp
305                 310                 315                 320
Tyr Leu Asp Lys Arg Thr Gly Glu Ala Tyr Phe Asp Leu Lys Phe Ala
                325                 330                 335
Met Asn Gly Cys Leu Cys Gly Leu Val Ala Ile Thr Gly Gly Cys Gly
            340                 345                 350
Val Val Glu Pro Trp Ala Ala Val Val Ile Gly Phe Val Ala Gly Leu
        355                 360                 365
Leu Tyr Asn Ile Gly Ser Arg Gly Leu Ile Tyr Leu Arg Leu Asp Asp
    370                 375                 380
Ala Val Asp Ala Ile Pro Val His Leu Cys Asn Gly Ser Trp Gly Leu
385                 390                 395                 400
Val Ala Val Gly Leu Phe Ala Ser Pro Ser Arg Leu Leu Val Ile Tyr
                405                 410                 415
Gly His Ser Asp His Pro Gly Trp Phe Tyr Ser Leu Arg Asp Gly Glu
            420                 425                 430
Ser Asp Phe Arg Leu Leu Ala Ser Gln Leu Val Gly Leu Ile Phe Ile
        435                 440                 445
Val Phe Trp Val Met Phe Asn Met Leu Pro Phe Phe Val Trp Leu Asn
    450                 455                 460
Tyr Arg Gly Trp Phe Arg Ser Asp Pro Leu Glu Glu Leu Val Gly Leu
465                 470                 475                 480
Asp Leu Ser Tyr His Gly Gly Leu Met Leu His Glu Glu Val Asp Pro
                485                 490                 495
Glu Tyr Ile Ser Ala Tyr Arg Lys Gly Gln His Glu Ala His Ser Arg
            500                 505                 510
Thr Leu Arg Gln Arg Lys Arg Thr Ser His Val Arg Leu Glu Ser Val
        515                 520                 525
Ser Glu His Ser Val Ala Pro Asn Gly Gly Asp Ser Ala His Thr Ser
    530                 535                 540
Asn Gly Asp Ser Leu Thr Glu Thr Val Thr Ile Arg Glu Pro Asp Ser
545                 550                 555                 560
Gly Trp Pro Arg Gly Asn Val
                565
 
<210>13
<211>1665
<212>DNA
<213>三角褐指藻
 
<400>13
atgagcacat ccgatggcag tctgtttcaa cagtgttctg ccgtcgctgg ggacagtgac    60
ccttcccgga ttctgcagtg tgtgtccgat gctctcgaaa ccaaccaaaa cgatcgagct    120
gccgatctca ataactggtt tctcatcatc gctggggcac tcgtcttttt catgcagtcc    180
ggcttcgcca tgctgtgtgc ggggtgtgtg cggaaaaaga acgtccaaaa caccatgctc    240
aagaatcttc tcgatgcctg cggtgccgct ctcgggtttt acgtaatcgg ttacgccttg    300
gcctttggtg gacaaaacga gcgatccgat gttacctttg tgggtaccac ggactttttc    360
aactggaaca gcgccgtccc ggtaaatcaa gccttttggt ttttcgaatt tgccttttcg    420
gccacgtccg tgacgattgt ggccgggacg ctggcggaac ggtgtcaaat ggtcgcctac    480
ctgtgctact cggtattctt aacaggcttt gtgtatcccg ttgtggccca ctccatctgg    540
agcaacaacg gctttctaag tgcatttgca gccgagccct tccagggcat tggcgtcctg    600
gactttgccg ggtcgggtgt ggtacacgtg acgggcggga ccactgcctt ggtcgccacg    660
tatatgctag gggcccgtaa ggggcgcttc tacgacgcac gtgggagaga attggaaaag    720
cccaaagcat ttcccggcca ttccatggcc ttgcagatga tgggcaccat gattctgtgg    780
ttcggatggt acggcttcaa ccctggttcg gccttgttgc tgacggcgac gtccaataca    840
ggtggcgtag cggctctcgc ggccgtgaac acgtccctct ctgccgcttc gggtgccgtt    900
tccgctctct ttacctcttt gtatctcgaa gaacgcaaga ctggagaata ctccttcaac    960
atcaccatgg ctatgaacgg tgctttggct ggcttagtgg gtattacggc cggctgtggc    1020
accgtcgaaa attgggccgc ttgttgcaca gggctcgtgt ctggatgggt ctatatattt    1080
ggcagtgcct tcttgttgcg tataaagatt gacgatgcag tcgacgcaat tccggtgcat    1140
atgttttgtg gcgcctgggg tcttattgca accggcctat tcagctcgcc acgccatacg    1200
ttagaagcat ttggtacgga cgcacacgta ggttggttct acagtcttgg ccaagattct    1260
ttggacgcta ttctcttgat gaaccagctt ttgggtcttt tatttattct cgggtggagc    1320
gccatcttga tgtcaccatt tttctggtgg ctgaactaca tgggatggtt gagggccgac    1380
tccttggagg agttggtagg tctggatcaa gcctaccacg gtggaaggga ggctggagag    1440
ggctttgatg atgaagtgcc ttttgccaca tccaaagaca aaccagacac tttacgtcga  1500
cggaaaggtg gcaacagcgc ggagggcacc cgcgatgatg gaagttggac cgatttgact  1560
gcctcggctc ctcgggaaac tgcgcctctg ccagaacttt attgtgagaa cgatgcgtct  1620
tccaaagaat ccgacgacga tccgtccgga atgcaccacg cataa                  1665
 
<210>14
<211>554
<212>PRT
<213>三角褐指藻
 
<400>14
 
Met Ser Thr Ser Asp Gly Ser Leu Phe Gln Gln Cys Ser Ala Val Ala
1               5                   10                  15
Gly Asp Ser Asp Pro Ser Arg Ile Leu Gln Cys Val Ser Asp Ala Leu
            20                  25                  30
Glu Thr Asn Gln Asn Asp Arg Ala Ala Asp Leu Asn Asn Trp Phe Leu
        35                  40                  45
Ile Ile Ala Gly Ala Leu Val Phe Phe Met Gln Ser Gly Phe Ala Met
    50                  55                  60
Leu Cys Ala Gly Cys Val Arg Lys Lys Asn Val Gln Asn Thr Met Leu
65                  70                  75                  80
Lys Asn Leu Leu Asp Ala Cys Gly Ala Ala Leu Gly Phe Tyr Val Ile
                85                  90                  95
Gly Tyr Ala Leu Ala Phe Gly Gly Gln Asn Glu Arg Ser Asp Val Thr
            100                 105                 110
Phe Val Gly Thr Thr Asp Phe Phe Asn Trp Asn Ser Ala Val Pro Val
        115                 120                 125
Asn Gln Ala Phe Trp Phe Phe Glu Phe Ala Phe Ser Ala Thr Ser Val
    130                 135                 140
Thr Ile Val Ala Gly Thr Leu Ala Glu Arg Cys Gln Met Val Ala Tyr
145                 150                 155                 160
Leu Cys Tyr Ser Val Phe Leu Thr Gly Phe Val Tyr Pro Val Val Ala
                165                 170                 175
His Ser Ile Trp Ser Asn Asn Gly Phe Leu Ser Ala Phe Ala Ala Glu
            180                 185                 190
Pro Phe Gln Gly Ile Gly Val Leu Asp Phe Ala Gly Ser Gly Val Val
        195                 200                 205
His Val Thr Gly Gly Thr Thr Ala Leu Val Ala Thr Tyr Met Leu Gly
    210                 215                 220
Ala Arg Lys Gly Arg Phe Tyr Asp Ala Arg Gly Arg Glu Leu Glu Lys
225                 230                 235                 240
Pro Lys Ala Phe Pro Gly His Ser Met Ala Leu Gln Met Met Gly Thr
                245                 250                 255
Met Ile Leu Trp Phe Gly Trp Tyr Gly Phe Asn Pro Gly Ser Ala Leu
            260                 265                 270
Leu Leu Thr Ala Thr Ser Asn Thr Gly Gly Val Ala Ala Leu Ala Ala
        275                 280                 285
Val Asn Thr Ser Leu Ser Ala Ala Ser Gly Ala Val Ser Ala Leu Phe
    290                 295                 300
Thr Ser Leu Tyr Leu Glu Glu Arg Lys Thr Gly Glu Tyr Ser Phe Asn
305                 310                 315                 320
Ile Thr Met Ala Met Asn Gly Ala Leu Ala Gly Leu Val Gly Ile Thr
                325                 330                 335
Ala Gly Cys Gly Thr Val Glu Asn Trp Ala Ala Cys Cys Thr Gly Leu
            340                 345                 350
Val Ser Gly Trp Val Tyr Ile Phe Gly Ser Ala Phe Leu Leu Arg Ile
        355                 360                 365
Lys Ile Asp Asp Ala Val Asp Ala Ile Pro Val His Met Phe Cys Gly
    370                 375                 380
Ala Trp Gly Leu Ile Ala Thr Gly Leu Phe Ser Ser Pro Arg His Thr
385                 390                 395                 400
Leu Glu Ala Phe Gly Thr Asp Ala His Val Gly Trp Phe Tyr Ser Leu
                405                 410                 415
Gly Gln Asp Ser Leu Asp Ala Ile Leu Leu Met Asn Gln Leu Leu Gly
            420                 425                 430
Leu Leu Phe Ile Leu Gly Trp Ser Ala Ile Leu Met Ser Pro Phe Phe
        435                 440                 445
Trp Trp Leu Asn Tyr Met Gly Trp Leu Arg Ala Asp Ser Leu Glu Glu
    450                 455                 460
Leu Val Gly Leu Asp Gln Ala Tyr His Gly Gly Arg Glu Ala Gly Glu
465                 470                 475                 480
Gly Phe Asp Asp Glu Val Pro Phe Ala Thr Ser Lys Asp Lys Pro Asp
                485                 490                 495
Thr Leu Arg Arg Arg Lys Gly Gly Asn Ser Ala Glu Gly Thr Arg Asp
            500                 505                 510
Asp Gly Ser Trp Thr Asp Leu Thr Ala Ser Ala Pro Arg Glu Thr Ala
        515                 520                 525
Pro Leu Pro Glu Leu Tyr Cys Glu Asn Asp Ala Ser Ser Lys Glu Ser
    530                 535                 540
Asp Asp Asp Pro Ser Gly Met His His Ala
545                 550
 
<210>15
<211>1620
<212>DNA
<213>三角褐指藻
 
<400>15
atgatctcta ctggctcttc cacgtccacg aatgcctacg gcacttgctc ggttcagctg    60
ggcgaaaact cttccgcgaa agagctcttg gaatgtgttt cagattatct acagaatcag    120
gaggcgcctt tctcgtctac tctggtactc acttttgcgg gcgcgattgt ctttctaatg    180
caagccggct ttgccatggt ctgtgctggt gctgtccgca caaaaaatgt ccaaaacgcc    240
atgctcaaga atctgttgga tgcttgcggt gcgtccttgg cgttcttttc cattggctac    300
gctctggggt ttgggggtat ggagcccgaa agttccaaaa agacctttgt cggacatagt    360
caattctttc tgatggacgt tgacgactac gctttttggt tattccaata cgccttttcc    420
gctgcatctg ccacaattgt cgcaggaacg ctcgcggaac gatgtcaaat gacggcctat    480
ctttgctact cccttatgct aaccgggtgg gtataccccg ttattctaca ctccatatgg    540
aatcccaacg gctggctatc tgcgtactcg gttgatccgc tttggggcag cgggctggtg    600
gattttgctg gctctggcgt cgttcatgtg accggaggaa tcaccgctct gtttgctaca    660
atggttttgg gcccccgacg aggacgcttt cacgatgatc ttgggcatga tctggcacgg    720
ccacgggaat ttcaggctca ttcgccggct ctgcaaatgc ttggtacttt tattttgtgg    780
tttggctttt acggatttaa cattggctcc gcgctgataa gcacaaagca aggctcagac    840
gaagcagccg ccttggccgg tgtcaacaca acgctctccg ctagcgcggc aggtattgtg    900
gcgctgtttt caaatctatg gtacctggag aagacgaccg gtgagcctct ctttgatcta    960
aagtatgcta tgaatggcgc catctgcggt cttgtagcta tttctggcgg ctgcggggtc    1020
ttcgagccct gggccgcggt ggtcaccggg gccgtggccg gtgtgatata tctattaggt    1080
agtcgcggac ttgtatccat gcgactggat gacgctgtgg atgccatccc tgtacacctc    1140
tgtggtgggg cctggggcat cctggcggtg ggactgttcg cagcgcccga acgtctcctt    1200
tccgtgtatg gacggaataa tcacccagga ttggtttata gcattcgtga aggagatatc    1260
gatggcgttc ttttcggaat tcaactaatt ggtctcatgt tcatcatggg atgggttatg    1320
atcatcatgc tacctttctt tgtatggctc aactggaaag gctggttccg atcagacccg    1380
ctggaggaga ttctcgggct cgatttaagc tatcacgtcg gattggcgtt acataccaac    1440
aatgttcatc cggaatacgt tggcagcgaa aaagatgtgg tcgacgaaat tatttctacg    1500
cgccaacgaa aggtcaacgg gagcaccact accaaggcga cctcaggtac ggaagaattg    1560
gagtatatcc cggaagttag cgacgaagac ttgagcgaga tgaaagagga atgcttgtga    1620
 
<210>16
<211>539
<212>PRT
<213>三角褐指藻
 
<400>16
 
Met Ile Ser Thr Gly Ser Ser Thr Ser Thr Asn Ala Tyr Gly Thr Cys
1               5                   10                  15
Ser Val Gln Leu Gly Glu Asn Ser Ser Ala Lys Glu Leu Leu Glu Cys
            20                  25                  30
Val Ser Asp Tyr Leu Gln Asn Gln Glu Ala Pro Phe Ser Ser Thr Leu
        35                  40                  45
Val Leu Thr Phe Ala Gly Ala Ile Val Phe Leu Met Gln Ala Gly Phe
    50                  55                  60
Ala Met Val Cys Ala Gly Ala Val Arg Thr Lys Asn Val Gln Asn Ala
65                  70                  75                  80
Met Leu Lys Asn Leu Leu Asp Ala Cys Gly Ala Ser Leu Ala Phe Phe
                85                  90                  95
Ser Ile Gly Tyr Ala Leu Gly Phe Gly Gly Met Glu Pro Glu Ser Ser
            100                 105                 110
Lys Lys Thr Phe Val Gly His Ser Gln Phe Phe Leu Met Asp Val Asp
        115                 120                 125
Asp Tyr Ala Phe Trp Leu Phe Gln Tyr Ala Phe Ser Ala Ala Ser Ala
    130                 135                 140
Thr Ile Val Ala Gly Thr Leu Ala Glu Arg Cys Gln Met Thr Ala Tyr
145                 150                 155                 160
Leu Cys Tyr Ser Leu Met Leu Thr Gly Trp Val Tyr Pro Val Ile Leu
                165                 170                 175
His Ser Ile Trp Asn Pro Asn Gly Trp Leu Ser Ala Tyr Ser Val Asp
            180                 185                 190
Pro Leu Trp Gly Ser Gly Leu Val Asp Phe Ala Gly Ser Gly Val Val
        195                 200                 205
His Val Thr Gly Gly Ile Thr Ala Leu Phe Ala Thr Met Val Leu Gly
    210                 215                 220
Pro Arg Arg Gly Arg Phe His Asp Asp Leu Gly His Asp Leu Ala Arg
225                 230                 235                 240
Pro Arg Glu Phe Gln Ala His Ser Pro Ala Leu Gln Met Leu Gly Thr
                245                 250                 255
Phe Ile Leu Trp Phe Gly Phe Tyr Gly Phe Asn Ile Gly Ser Ala Leu
            260                 265                 270
Ile Ser Thr Lys Gln Gly Ser Asp Glu Ala Ala Ala Leu Ala Gly Val
        275                 280                 285
Asn Thr Thr Leu Ser Ala Ser Ala Ala Gly Ile Val Ala Leu Phe Ser
    290                 295                 300
Asn Leu Trp Tyr Leu Glu Lys Thr Thr Gly Glu Pro Leu Phe Asp Leu
305                 310                 315                 320
Lys Tyr Ala Met Asn Gly Ala Ile Cys Gly Leu Val Ala Ile Ser Gly
                325                 330                 335
Gly Cys Gly Val Phe Glu Pro Trp Ala Ala Val Val Thr Gly Ala Val
            340                 345                 350
Ala Gly Val Ile Tyr Leu Leu Gly Ser Arg Gly Leu Val Ser Met Arg
        355                 360                 365
Leu Asp Asp Ala Val Asp Ala Ile Pro Val His Leu Cys Gly Gly Ala
    370                 375                 380
Trp Gly Ile Leu Ala Val Gly Leu Phe Ala Ala Pro Glu Arg Leu Leu
385                 390                 395                 400
Ser Val Tyr Gly Arg Asn Asn His Pro Gly Leu Val Tyr Ser Ile Arg
                405                 410                 415
Glu Gly Asp Ile Asp Gly Val Leu Phe Gly Ile Gln Leu Ile Gly Leu
            420                 425                 430
Met Phe Ile Met Gly Trp Val Met Ile Ile Met Leu Pro Phe Phe Val
        435                 440                 445
Trp Leu Asn Trp Lys Gly Trp Phe Arg Ser Asp Pro Leu Glu Glu Ile
    450                 455                 460
Leu Gly Leu Asp Leu Ser Tyr His Val Gly Leu Ala Leu His Thr Asn
465                 470                 475                 480
Asn Val His Pro Glu Tyr Val Gly Ser Glu Lys Asp Val Val Asp Glu
                485                 490                 495
Ile Ile Ser Thr Arg Gln Arg Lys Val Asn Gly Ser Thr Thr Thr Lys
            500                 505                 510
Ala Thr Ser Gly Thr Glu Glu Leu Glu Tyr Ile Pro Glu Val Ser Asp
        515                 520                 525
Glu Asp Leu Ser Glu Met Lys Glu Glu Cys Leu
    530                 535
 
<210>17
<211>1557
<212>DNA
<213>筒柱藻(Cylindrotheca fusiformis)
 
<400>17
atggctgagt ttgataacac gtttatcttg gatttttgca gtggtggaaa tgaatcgtcg    60
tctgacgttc aggccttgtg tcaagttgct ggtcttgcaa atggcacaag tgcctctgcc    120
gctggacttg ttgagggtat caacaccttc ttcctacttt tcgcaggagc tctggtcttt    180
ctcatgcaag ctggcttcgc catgctgtgc gctggatccg tccgtcaaaa gaacgtcaag    240
aatatcatgt tgaagaacat gttggacgct tgtggtggtg ctattggttt ctggactatc    300
gggtatgcgt tcgcctacgc tgataactcg tcgggagaca aaaccttcat tggaggcaag    360
aacttctttg tgaaccaatt ggatgagtct ggtggcgcat ggattggttt ctttttccaa    420
ttcgcctttg ctgccactgc cgccactatt gtcgccggaa ccgttgctga gcgctgtaag    480
atgagtgcat acctttgcta ctcagtcttc ctcactggtt ttgtctatcc tgtcgttgtt    540
cactccatct ggagtgctga tggatggttg actgccttcc gtgatgatcc ttggaagggt    600
gtcggtgtca ttgatttcgc cggatctggt gttgtgcaca tgaccggtgg agccactgct    660
cttgttgctg ctattgttct tggaccccgt aagggacgtt tctatgatga ggatggaaat    720
gctcttgaaa cccctgcaag tttcccagct cacagtgtgg cccttcaagt ccttggtacc    780
ttccttcttt ggttcggatg gtatggattc aacccaggat ctgctcttgt cattgacaat    840
gctgcgtccg cttctacctc agcactttgt gctgtcacta ccactcttgc cgctgccagt    900
ggttgtgtct gtgcgatgtt cactgatacc atcattgaaa tgatggcaac aggagaagca  960
tcttacgatt tgaccatggc catgaacggt gctcttggag gacttgttgc catcactgct  1020
ggatgctccg ttgtcacccc ttgggcttcg atcatcattg gtatcattgc tgggtgggtc  1080
tacattgcat tttccaaact cctagtcaaa ttgaagatcg atgatgctgt tgatgccgtt  1140
cctgttcact tcgccaatgg tatgtggggt gtcttggctg tgggtttctt cgccgaaccc  1200
gacgccatgg ttactgccgg gtacaacgat gtcccaggag tcttctacaa gggagatggt  1260
aaacttctcc tgtgccaatt tgtcgctatc atctggattt gcgcttggat cttcttcttg  1320
atgactcctt tcttcgtcgt cttgaacatc ttgggtatgt tccgtgtcga tcctcttgag  1380
gaagaagttg gtcttgatat ttcccaccat cgtggagctg cctacgacat gaccagtgcc  1440
aagaaggaag atgtcgagga gctcatggaa caccgttctt ctaagcatgg aaaggttgag  1500
gtccccaagg aagttcaaaa ggaggacacc gcctaaggaa tttgacatcc cttctag     1557
 
<210>18
<211>511
<212>PRT
<213>筒柱藻
 
<400>18
 
Met Ala Glu Phe Asp Asn Thr Phe Ile Leu Asp Phe Cys Ser Gly Gly
1               5                   10                  15
Asn Glu Ser Ser Ser Asp Val Gln Ala Leu Cys Gln Val Ala Gly Leu
            20                  25                  30
Ala Asn Gly Thr Ser Ala Ser Ala Ala Gly Leu Val Glu Gly Ile Asn
        35                  40                  45
Thr Phe Phe Leu Leu Phe Ala Gly Ala Leu Val Phe Leu Met Gln Ala
    50                  55                  60
Gly Phe Ala Met Leu Cys Ala Gly Ser Val Arg Gln Lys Asn Val Lys
65                  70                  75                  80
Asn Ile Met Leu Lys Asn Met Leu Asp Ala Cys Gly Gly Ala Ile Gly
                85                  90                  95
Phe Trp Thr Ile Gly Tyr Ala Phe Ala Tyr Ala Asp Asn Ser Ser Gly
            100                 105                 110
Asp Lys Thr Phe Ile Gly Gly Lys Asn Phe Phe Val Asn Gln Leu Asp
        115                 120                 125
Glu Ser Gly Gly Ala Trp Ile Gly Phe Phe Phe Gln Phe Ala Phe Ala
    130                 135                 140
Ala Thr Ala Ala Thr Ile Val Ala Gly Thr Val Ala Glu Arg Cys Lys
145                 150                 155                 160
Met Ser Ala Tyr Leu Cys Tyr Ser Val Phe Leu Thr Gly Phe Val Tyr
                165                 170                 175
Pro Val Val Val His Ser Ile Trp Ser Ala Asp Gly Trp Leu Thr Ala
            180                 185                 190
Phe Arg Asp Asp Pro Trp Lys Gly Val Gly Val Ile Asp Phe Ala Gly
        195                 200                 205
Ser Gly Val Val His Met Thr Gly Gly Ala Thr Ala Leu Val Ala Ala
    210                 215                 220
Ile Val Leu Gly Pro Arg Lys Gly Arg Phe Tyr Asp Glu Asp Gly Asn
225                 230                 235                 240
Ala Leu Glu Thr Pro Ala Ser Phe Pro Ala His Ser Val Ala Leu Gln
                245                 250                 255
Val Leu Gly Thr Phe Leu Leu Trp Phe Gly Trp Tyr Gly Phe Asn Pro
            260                 265                 270
Gly Ser Ala Leu Val Ile Asp Asn Ala Ala Ser Ala Ser Thr Ser Ala
        275                 280                 285
Leu Cys Ala Val Thr Thr Thr Leu Ala Ala Ala Ser Gly Cys Val Cys
    290                 295                 300
Ala Met Phe Thr Asp Thr Ile Ile Glu Met Met Ala Thr Gly Glu Ala
305                 310                 315                 320
Ser Tyr Asp Leu Thr Met Ala Met Asn Gly Ala Leu Gly Gly Leu Val
                325                 330                 335
Ala Ile Thr Ala Gly Cys Ser Val Val Thr Pro Trp Ala Ser Ile Ile
            340                 345                 350
Ile Gly Ile Ile Ala Gly Trp Val Tyr Ile Ala Phe Ser Lys Leu Leu
        355                 360                 365
Val Lys Leu Lys Ile Asp Asp Ala Val Asp Ala Val Pro Val His Phe
    370                 375                 380
Ala Asn Gly Met Trp Gly Val Leu Ala Val Gly Phe Phe Ala Glu Pro
385                 390                 395                 400
Asp Ala Met Val Thr Ala Gly Tyr Asn Asp Val Pro Gly Val Phe Tyr
                405                 410                 415
Lys Gly Asp Gly Lys Leu Leu Leu Cys Gln Phe Val Ala Ile Ile Trp
            420                 425                 430
Ile Cys Ala Trp Ile Phe Phe Leu Met Thr Pro Phe Phe Val Val Leu
        435                 440                 445
Asn Ile Leu Gly Met Phe Arg Val Asp Pro Leu Glu Glu Glu Val Gly
    450                 455                 460
Leu Asp Ile Ser His His Arg Gly Ala Ala Tyr Asp Met Thr Ser Ala
465                 470                 475                 480
Lys Lys Glu Asp Val Glu Glu Leu Met Glu His Arg Ser Ser Lys His
                485                 490                 495
Gly Lys Val Glu Val Pro Lys Glu Val Gln Lys Glu Asp Thr Ala
            500                 505                 510
 
<210>19
<211>1622
<212>DNA
<213>筒柱藻
 
<400>19
atggctgagt ttgataacac gtttatcttg gatttttgca gtggtggaaa tgaatcgtcg    60
tctgacgttc aggccttgtg tcaagttgct ggtgtaagtt gtttgccgat gttattctga    120
ccacagtata tcattttgcc ttgacttaca ccgtcgcgtc ttgatgttgt gcacttcagc    180
ttgcaaatgg cacaagtgcc tctgccgctg gacttgttga gggtatcaac accttcttcc    240
tacttttcgc aggagctctg gtctttctca tgcaagctgg cttcgccatg ctgtgcgctg    300
gatccgtccg tcaaaagaac gtcaagaata tcatgttgaa gaacatgttg gacgcttgtg    360
gtggtgctat tggtttctgg actatcgggt atgcgttcgc ctacgctgat aactcgtcgg    420
gagacaaaac cttcattgga ggcaagaact tctttgtgaa ccaattggat gagtctggtg    480
gcgcatggat tggtttcttt ttccaattcg cctttgctgc cactgccgcc actattgtcg    540
ccggaaccgt tgctgagcgc tgtaagatga gtgcatacct ttgctactca gtcttcctca    600
ctggttttgt ctatcctgtc gttgttcact ccatctggag tgctgatgga tggttgactg    660
ccttccgtga tgatccttgg aagggtgtcg gtgtcattga tttcgccgga tctggtgttg    720
tgcacatgac cggtggagcc actgctcttg ttgctgctat tgttcttgga ccccgtaagg    780
gacgtttcta tgatgaggat ggaaatgctc ttgaaacccc tgcaagtttc ccagctcaca    840
gtgtggccct tcaagtcctt ggtaccttcc ttctttggtt cggatggtat ggattcaacc    900
caggatctgc tcttgtcatt gacaatgctg cgtccgcttc tacctcagca ctttgtgctg    960
tcactaccac tcttgccgct gccagtggtt gtgtctgtgc gatgttcact gataccatca    1020
ttgaaatgat ggcaacagga gaagcatctt acgatttgac catggccatg aacggtgctc    1080
ttggaggact tgttgccatc actgctggat gctccgttgt caccccttgg gcttcgatca    1140
tcattggtat cattgctggg tgggtctaca ttgcattttc caaactccta gtcaaattga    1200
agatcgatga tgctgttgat gccgttcctg ttcacttcgc caatggtatg tggggtgtct    1260
tggctgtggg tttcttcgcc gaacccgacg ccatggttac tgccgggtac aacgatgtcc    1320
caggagtctt ctacaaggga gatggtaaac ttctcctgtg ccaatttgtc gctatcatct    1380
ggatttgcgc ttggatcttc ttcttgatga ctcctttctt cgtcgtcttg aacatcttgg    1440
gtatgttccg tgtcgatcct cttgaggaag aagttggtct tgatatttcc caccatcgtg    1500
gagctgccta cgacatgacc agtgccaaga aggaagatgt cgaggagctc atggaacacc    1560
gttcttctaa gcatggaaag gttgaggtcc ccaaggaagt tcaaaaggag gacaccgcct    1620
aa                                                                   1622
<210>20
<211>450
<212>PRT
<213>筒柱藻
 
<400>20
 
Met Gln Ala Gly Phe Ala Met Leu Cys Ala Gly Ser Val Arg Gln Lys
1               5                   10                  15
Asn Val Lys Asn Ile Met Leu Lys Asn Met Leu Asp Ala Cys Gly Gly
            20                  25                  30
Ala Ile Gly Phe Trp Thr Ile Gly Tyr Ala Phe Ala Tyr Ala Asp Asn
        35                  40                  45
Ser Ser Gly Asp Lys Thr Phe Ile Gly Gly Lys Asn Phe Phe Val Asn
    50                  55                  60
Gln Leu Asp Glu Ser Gly Gly Ala Trp Ile Gly Phe Phe Phe Gln Phe
65                  70                  75                  80
Ala Phe Ala Ala Thr Ala Ala Thr Ile Val Ala Gly Thr Val Ala Glu
                85                  90                  95
Arg Cys Lys Met Ser Ala Tyr Leu Cys Tyr Ser Val Phe Leu Thr Gly
            100                 105                 110
Phe Val Tyr Pro Val Val Val His Ser Ile Trp Ser Ala Asp Gly Trp
        115                 120                 125
Leu Thr Ala Phe Arg Asp Asp Pro Trp Lys Gly Val Gly Val Ile Asp
    130                 135                 140
Phe Ala Gly Ser Gly Val Val His Met Thr Gly Gly Ala Thr Ala Leu
145                 150                 155                 160
Val Ala Ala Ile Val Leu Gly Pro Arg Lys Gly Arg Phe Tyr Asp Glu
                165                 170                 175
Asp Gly Asn Ala Leu Glu Thr Pro Ala Ser Phe Pro Ala His Ser Val
            180                 185                 190
Ala Leu Gln Val Leu Gly Thr Phe Leu Leu Trp Phe Gly Trp Tyr Gly
        195                 200                 205
Phe Asn Pro Gly Ser Ala Leu Val Ile Asp Asn Ala Ala Ser Ala Ser
    210                 215                 220
Thr Ser Ala Leu Cys Ala Val Thr Thr Thr Leu Ala Ala Ala Ser Gly
225                 230                 235                 240
Cys Val Cys Ala Met Phe Thr Asp Thr Ile Ile Glu Met Met Ala Thr
                245                 250                 255
Gly Glu Ala Ser Tyr Asp Leu Thr Met Ala Met Asn Gly Ala Leu Gly
            260                 265                 270
Gly Leu Val Ala Ile Thr Ala Gly Cys Ser Val Val Thr Pro Trp Ala
        275                 280                 285
Ser Ile Ile Ile Gly Ile Ile Ala Gly Trp Val Tyr Ile Ala Phe Ser
    290                 295                 300
Lys Leu Leu Val Lys Leu Lys Ile Asp Asp Ala Val Asp Ala Val Pro
305                 310                 315                 320
Val His Phe Ala Asn Gly Met Trp Gly Val Leu Ala Val Gly Phe Phe
                325                 330                 335
Ala Glu Pro Asp Ala Met Val Thr Ala Gly Tyr Asn Asp Val Pro Gly
            340                 345                 350
Val Phe Tyr Lys Gly Asp Gly Lys Leu Leu Leu Cys Gln Phe Val Ala
        355                 360                 365
Ile Ile Trp Ile Cys Ala Trp Ile Phe Phe Leu Met Thr Pro Phe Phe
    370                 375                 380
Val Val Leu Asn Ile Leu Gly Met Phe Arg Val Asp Pro Leu Glu Glu
385                 390                 395                 400
Glu Val Gly Leu Asp Ile Ser His His Arg Gly Ala Ala Tyr Asp Met
                405                 410                 415
Thr Ser Ala Lys Lys Glu Asp Val Glu Glu Leu Met Glu His Arg Ser
            420                 425                 430
Ser Lys His Gly Lys Val Glu Val Pro Lys Glu Val Gln Lys Glu Asp
        435                 440                 445
Thr Ala
    450
 
<210>21
<211>1536
<212>DNA
<213>筒柱藻
 
<400>21
atggctgagt tcgataacac ttttatcttg gaattttgca gtggtggaaa tgaatcgtcg    60
tctgacgttc aggtcttgtg ccaagttgcc agtctcgcaa acggcaccag tgcctctgcc    120
ggtggactta ctgagggtat caataccttc tttctacttt ttgctggagc tctagtcttt    180
atcatgcaag ctggattcgc catgctgtgt gctggatccg tccgtcaaaa gaacgtcaag    240
aatatcatgt tgaaaaacat gttggacgct tgtggtggtg ctattggttt ctggactatc    300
gggtatgcct tcgcctacgc tgataactcg tctggaaata aaacattcat tggaggcaag    360
aacttctttg tgaaccaact ggatgagtct ggaggtgcat ggattggttt cttcttccaa    420
tttgcctttg ctgccactgc cgccactatt gtcgcgggaa ccgttgccga gcgctgcaag    480
atgagtgcgt acctatgcta ctcaatcttc ctcactggtt ttgtctatcc tgtcgttgtt    540
cactccatct ggagtgctga tggatggttg actgcctttc gtgatgatcc ttggcagggt    600
gtcggtgtca tcgatttcgc cggatctggt gttgtgcata tgtgcggtgg agccactgct    660
cttgttgctg ctattgttct tggaccccgt aagggacgtt tctatgatga ggatggaaat    720
gctcttgaaa cccctgcaag tttcccagct cacagtgtgg cccttcaagt cctcggtacc    780
ttccttcttt ggttcggatg gtatggattc aacccaggat ctgctcttgt cattgacaat    840
gctgcgtccg cttctacctc agcactttgt gctgtcacta ccactcttgc cgctgccagt    900
ggttgtgtca ccgcgatgtt caccgatacc ctcattgaaa tgatggctac cggagaagca    960
tcttatgatt tgaccatggc catgaacggt gcacttgcgg ggcttgttgc catcactgcc    1020
ggatgctccg ttgtcactcc ttgggcttct ctcatcattg gtattattgg cgggtgggtc    1080
taccttggac tttctaaact tctaatcaaa ttgaagatcg atgatgctgt tgatgccgtc    1140
cctgttcact tcggtaatgg tatgtggggt gtcttggctg ttggcttctt tgccgaaccc    1200
gacgccatgg ttactgccgg gtacaacgat gtcccaggag tgttctacaa aggagatggt    1260
tctcttctcc tgtgccaatt cgtcgctatc gtttgggttt gcgcttgggt cttcttcttg    1320
atgactcctt tcttcgtcgt cttgaacatt ttgggaatgt tccgtgtcga tcctcttgag    1380
gaagaagttg gtcttgatat ttcccaccac cgtggatctg cctacgacat gactactgcc  1440
aagaaggaag atgtcgaaga gctcatggaa caccgttctt cgaagcacgg gaaggttgag  1500
atccccaagg aagttcagaa ggaggacacc gcctaa                            1536
 
<210>22
<211>511
<212>PRT
<213>筒柱藻
 
<400>22
 
Met Ala Glu Phe Asp Asn Thr Phe Ile Leu Glu Phe Cys Ser Gly Gly
1               5                   10                  15
Asn Glu Ser Ser Ser Asp Val Gln Val Leu Cys Gln Val Ala Ser Leu
            20                  25                  30
Ala Asn Gly Thr Ser Ala Ser Ala Gly Gly Leu Thr Glu Gly Ile Asn
        35                  40                  45
Thr Phe Phe Leu Leu Phe Ala Gly Ala Leu Val Phe Ile Met Gln Ala
    50                  55                  60
Gly Phe Ala Met Leu Cys Ala Gly Ser Val Arg Gln Lys Asn Val Lys
65                  70                  75                  80
Asn Ile Met Leu Lys Asn Met Leu Asp Ala Cys Gly Gly Ala Ile Gly
                85                  90                  95
Phe Trp Thr Ile Gly Tyr Ala Phe Ala Tyr Ala Asp Asn Ser Ser Gly
            100                 105                 110
Asn Lys Thr Phe Ile Gly Gly Lys Asn Phe Phe Val Asn Gln Leu Asp
        115                 120                 125
Glu Ser Gly Gly Ala Trp Ile Gly Phe Phe Phe Gln Phe Ala Phe Ala
    130                 135                 140
Ala Thr Ala Ala Thr Ile Val Ala Gly Thr Val Ala Glu Arg Cys Lys
145                 150                 155                 160
Met Ser Ala Tyr Leu Cys Tyr Ser Ile Phe Leu Thr Gly Phe Val Tyr
                165                 170                 175
Pro Val Val Val His Ser Ile Trp Ser Ala Asp Gly Trp Leu Thr Ala
            180                 185                 190
Phe Arg Asp Asp Pro Trp Gln Gly Val Gly Val Ile Asp Phe Ala Gly
        195                 200                 205
Ser Gly Val Val His Met Cys Gly Gly Ala Thr Ala Leu Val Ala Ala
    210                 215                 220
Ile Val Leu Gly Pro Arg Lys Gly Arg Phe Tyr Asp Glu Asp Gly Asn
225                 230                 235                 240
Ala Leu Glu Thr Pro Ala Ser Phe Pro Ala His Ser Val Ala Leu Gln
                245                 250                 255
Val Leu Gly Thr Phe Leu Leu Trp Phe Gly Trp Tyr Gly Phe Asn Pro
            260                 265                 270
Gly Ser Ala Leu Val Ile Asp Asn Ala Ala Ser Ala Ser Thr Ser Ala
        275                 280                 285
Leu Cys Ala Val Thr Thr Thr Leu Ala Ala Ala Ser Gly Cys Val Thr
    290                 295                 300
Ala Met Phe Thr Asp Thr Leu Ile Glu Met Met Ala Thr Gly Glu Ala
305                 310                 315                 320
Ser Tyr Asp Leu Thr Met Ala Met Asn Gly Ala Leu Ala Gly Leu Val
                325                 330                 335
Ala Ile Thr Ala Gly Cys Ser Val Val Thr Pro Trp Ala Ser Leu Ile
            340                 345                 350
Ile Gly Ile Ile Gly Gly Trp Val Tyr Leu Gly Leu Ser Lys Leu Leu
        355                 360                 365
Ile Lys Leu Lys Ile Asp Asp Ala Val Asp Ala Val Pro Val His Phe
    370                 375                 380
Gly Asn Gly Met Trp Gly Val Leu Ala Val Gly Phe Phe Ala Glu Pro
385                 390                 395                 400
Asp Ala Met Val Thr Ala Gly Tyr Asn Asp Val Pro Gly Val Phe Tyr
                405                 410                 415
Lys Gly Asp Gly Ser Leu Leu Leu Cys Gln Phe Val Ala Ile Val Trp
            420                 425                 430
Val Cys Ala Trp Val Phe Phe Leu Met Thr Pro Phe Phe Val Val Leu
        435                 440                 445
Asn Ile Leu Gly Met Phe Arg Val Asp Pro Leu Glu Glu Glu Val Gly
    450                 455                 460
Leu Asp Ile Ser His His Arg Gly Ser Ala Tyr Asp Met Thr Thr Ala
465                 470                 475                 480
Lys Lys Glu Asp Val Glu Glu Leu Met Glu His Arg Ser Ser Lys His
                485                 490                 495
Gly Lys Val Glu Ile Pro Lys Glu Val Gln Lys Glu Asp Thr Ala
            500                 505                 510
 
<210>23
<211>1563
<212>DNA
<213>假微型海链藻(Thalassiosira pseudonana)
 
<400>23
atggccgaac caacaacaac cataggcgac ttcaacgtca ctgcctggtg cggcgacgac    60
gctgtagcaa cctacgaagg acaatccgtc gagaacggta tctgtgcagc ctacgcctac    120
accgacgaaa ccaacaccgg tcttgatgtg ttctacctcc tcttcgccgc tgccatggtc    180
ttcttcatgc aggctggatt cgccatgctc tgtgctggat ctgtgaggca gaagaatgtg    240
aagaatatca tgcttaagaa cattttggat gcttgtggtg gagctcttgg attttggtct    300
gtgggatttg cgtttgccta cggaggatct ggaccggaga agaagggatt catcggtaac    360
gagggattct tccttggtga ctttacaact ggaggcgatt tgatcggatg gttcttccag    420
ttcgcctttg ctgccaccgc cgccacaatt gtggctggaa ccgtagccga gcgttgcaag    480
ttcgaggcct acctctgcta ttctctcatg ctcaccgggt tcgtctaccc cgtgattgtg    540
tactccatct ggtcttcctc tgggttcctc accgccttca acgacgaccc tgcctttgga    600
tgtggtatgc atgatttcgc cggatcggga gttgttcaca tgacgggagg catcactgcc    660
ctttgggccg ccaagattct cggacctcgt atcggacgct tctacgatgc tgatggcaat    720
gagcttcccg agccagtgag cttccctccc cactccgtgg cccttcaagt tcttggtact    780
ttcatccttt gggtgggctg gtacggattc aaccccggtt ccactcttct catcagtaac    840
acggccgcag ctgatgtgtc tgccctttgt gccgtcacca ccaccattgc cgccgcttcg  900
ggctctgtct ctgccatgtt cactgatatg ttcttggagc gcagaaagac cggagagact  960
atgtacgaca ttaccatgtg tatgaacggt gctctttctg gattggtggg catcaccgct  1020
ggatgctcaa tcgttgagcc ttgggctgcc tttgtcattg gaattgtcgc cggatggact  1080
tacatcttct ggtccagtct ccttgtgaag cttaagattg atgatgccgt cgatgccatt  1140
cctgttcact ttggaaacgg aatgtggggc tgcattgccg ttggactctt tgccgagcct  1200
acccgtgtag ccaacgccta cagtgaccat ggacactatg gatggttcta ctcatggggt  1260
gctggaaacg ccgatgccca ccttttggct gctcaagtct gtggtgttct ctggatcatt  1320
ggatgggttt ccgtcattat gatcccatac ttcatcctgc tcaacgtcct gggtttgttc  1380
cgtgtggatg ccctcgaaga agaagttggt ttggatatct cccaccacaa gggagctgcc  1440
tacgatatgt ccggaccttc tgaagctgcc gccgagaagt ttgagatctc taggagtcag  1500
cgtaagcttg agatccctgt ggatgtcgcg cctgctactg ctcctgccga ggatgccgcg  1560
taa                                                                1563
 
<210>24
<211>520
<212>PRT
<213>假微型海链藻
 
<400>24
 
Met Ala Glu Pro Thr Thr Thr Ile Gly Asp Phe Asn Val Thr Ala Trp
1               5                   10                  15
Cys Gly Asp Asp Ala Val Ala Thr Tyr Glu Gly Gln Ser Val Glu Asn
            20                  25                  30
Gly Ile Cys Ala Ala Tyr Ala Tyr Thr Asp Glu Thr Asn Thr Gly Leu
        35                  40                  45
Asp Val Phe Tyr Leu Leu Phe Ala Ala Ala Met Val Phe Phe Met Gln
    50                  55                  60
Ala Gly Phe Ala Met Leu Cys Ala Gly Ser Val Arg Gln Lys Asn Val
65                  70                  75                  80
Lys Asn Ile Met Leu Lys Asn Ile Leu Asp Ala Cys Gly Gly Ala Leu
                85                  90                  95
Gly Phe Trp Ser Val Gly Phe Ala Phe Ala Tyr Gly Gly Ser Gly Pro
            100                 105                 110
Glu Lys Lys Gly Phe Ile Gly Asn Glu Gly Phe Phe Leu Gly Asp Phe
        115                 120                 125
Thr Thr Gly Gly Asp Leu Ile Gly Trp Phe Phe Gln Phe Ala Phe Ala
    130                 135                 140
Ala Thr Ala Ala Thr Ile Val Ala Gly Thr Val Ala Glu Arg Cys Lys
145                 150                 155                 160
Phe Glu Ala Tyr Leu Cys Tyr Ser Leu Met Leu Thr Gly Phe Val Tyr
                165                 170                 175
Pro Val Ile Val Tyr Ser Ile Trp Ser Ser Ser Gly Phe Leu Thr Ala
            180                 185                 190
Phe Asn Asp Asp Pro Ala Phe Gly Cys Gly Met His Asp Phe Ala Gly
        195                 200                 205
Ser Gly Val Val His Met Thr Gly Gly Ile Thr Ala Leu Trp Ala Ala
    210                 215                 220
Lys Ile Leu Gly Pro Arg Ile Gly Arg Phe Tyr Asp Ala Asp Gly Asn
225                 230                 235                 240
Glu Leu Pro Glu Pro Val Ser Phe Pro Pro His Ser Val Ala Leu Gln
                245                 250                 255
Val Leu Gly Thr Phe Ile Leu Trp Val Gly Trp Tyr Gly Phe Asn Pro
            260                 265                 270
Gly Ser Thr Leu Leu Ile Ser Asn Thr Ala Ala Ala Asp Val Ser Ala
        275                 280                 285
Leu Cys Ala Val Thr Thr Thr Ile Ala Ala Ala Ser Gly Ser Val Ser
    290                 295                 300
Ala Met Phe Thr Asp Met Phe Leu Glu Arg Arg Lys Thr Gly Glu Thr
305                 310                 315                 320
Met Tyr Asp Ile Thr Met Cys Met Asn Gly Ala Leu Ser Gly Leu Val
                325                 330                 335
Gly Ile Thr Ala Gly Cys Ser Ile Val Glu Pro Trp Ala Ala Phe Val
            340                 345                 350
Ile Gly Ile Val Ala Gly Trp Thr Tyr Ile Phe Trp Ser Ser Leu Leu
        355                 360                 365
Val Lys Leu Lys Ile Asp Asp Ala Val Asp Ala Ile Pro Val His Phe
    370                 375                 380
Gly Asn Gly Met Trp Gly Cys Ile Ala Val Gly Leu Phe Ala Glu Pro
385                 390                 395                 400
Thr Arg Val Ala Asn Ala Tyr Ser Asp His Gly His Tyr Gly Trp Phe
                405                 410                 415
Tyr Ser Trp Gly Ala Gly Asn Ala Asp Ala His Leu Leu Ala Ala Gln
            420                 425                 430
Val Cys Gly Val Leu Trp Ile Ile Gly Trp Val Ser Val Ile Met Ile
        435                 440                 445
Pro Tyr Phe Ile Leu Leu Asn Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Asp Ala
    450                 455                 460
Leu Glu Glu Glu Val Gly Leu Asp Ile Ser His His Lys Gly Ala Ala
465                 470                 475                 480
Tyr Asp Met Ser Gly Pro Ser Glu Ala Ala Ala Glu Lys Phe Glu Ile
                485                 490                 495
Ser Arg Ser Gln Arg Lys Leu Glu Ile Pro Val Asp Val Ala Pro Ala
            500                 505                 510
Thr Ala Pro Ala Glu Asp Ala Ala
        515                 520
 
<210>25
<211>1608
<212>DNA
<213>假微型海链藻
 
<400>25
atgtctgaag atccatcaat ctttgaagtg tgtactggcc agctcggaac agatcttacc    60
gtcgagcttt tacaatgtgt ctctgatgga gctgaaagcg caaaggatga tgtcatcagt    120
ggcgtcaact ccttctacct catctttgca ggagccctcg ttttcttcat gcaagtcggt    180
ttcgccatgc tctgtgctgg atccatccgt gagaagaacg tcaagaatgt attgctttgg    240
aatctcctcg attctgccgg tggtgccttt ggtttctgga gtattggtta tgcatttgct    300
tatggtggtg atgatattac caagggaaag accttcatcg gaaacgctga cttcttcttg    360
agtggagaaa ctgatatgga gttttggttc ttccaatacg cctttgcgtg tgctctctcc    420
tccattgttg ctggaaccat tgctgagcgc accaagatga tggcctactt gtgctactca    480
atcttccttt gtggattcgt ctacccagtc tgtgctcatg ccttttggtc tcagaatgga    540
ttcctctctg ccttcgctgc tgaacctttg tggggttcgg gcgttattga ctttgcagga    600
tcgggaccag ttcacatgtg tggaggagtt gctgctcttg tcatggctat tattcttgga    660
cctcgtaggg gacgtttcta tgacgacgat ggtgtcgtat tggatgagcc aaagtccatg    720
ggacctcact ccgtcacttt gcaattcctc ggaacctttg ctctttggtt cggatggtat    780
ggattcaacc ctggtagctc catcttgatt gcgtcagctg cctctggcga cgttgcatcg    840
cttgctgccg tcaacactac gctcggatct gctgctggag cactttctgg tatgttcacc    900
tccacgatcg tcgacgaaag aaagactgga gtgtatactt gggatactac tgctgcaatg    960
aacggatgcc tcaccggttt ggttgctatt actgctggtt gcgctaccgt cgagccttgg    1020
gctgccttcg tcattgggct cactgctggt tgggtgtacc ttgctgcatc tgctcttatg    1080
cttcgcttca agattgatga tgctgtcgat gccatccccg ttcacatgtt cggaggatca    1140
tggggagttt tttgcactgg tcttttcacc agtcctcgcc gtcttattac tgcatacgga    1200
aatgacaata atgttggttg gttctacgaa tggggacgtg gaagtggaaa cttcactctc    1260
cttggctgcc agctcgtctc gattctcttt gtcttgggat ggtctgcttg catctttgct    1320
ccattctgct tggcactcaa aaccctcaac tggctccgca ttgaccctct cgaggaggag    1380
gttggtatgg atatcagtcg ccataaggga cctgcctacg agtcggaggg atctgctcat    1440
tctgatgcta tcgagaagtt gagtgcctcc cgtcgtgata ttatgaatgc ctctggaagt  1500
ggaaggggaa aaagtttcag caggtcgact cccacgaaag ctaacgagga gcccaaaatc  1560
gaagcaactg aggatgcagg ggcacccgct ggagaagcaa ctgcttag               1608
 
<210>26
<211>535
<212>PRT
<213>假微型海链藻
 
<400>26
 
Met Ser Glu Asp Pro Ser Ile Phe Glu Val Cys Thr Gly Gln Leu Gly
1               5                   10                  15
Thr Asp Leu Thr Val Glu Leu Leu Gln Cys Val Ser Asp Gly Ala Glu
            20                  25                  30
Ser Ala Lys Asp Asp Val Ile Ser Gly Val Asn Ser Phe Tyr Leu Ile
        35                  40                  45
Phe Ala Gly Ala Leu Val Phe Phe Met Gln Val Gly Phe Ala Met Leu
    50                  55                  60
Cys Ala Gly Ser Ile Arg Glu Lys Asn Val Lys Asn Val Leu Leu Trp
65                  70                  75                  80
Asn Leu Leu Asp Ser Ala Gly Gly Ala Phe Gly Phe Trp Ser Ile Gly
                85                  90                  95
Tyr Ala Phe Ala Tyr Gly Gly Asp Asp Ile Thr Lys Gly Lys Thr Phe
            100                 105                 110
Ile Gly Asn Ala Asp Phe Phe Leu Ser Gly Glu Thr Asp Met Glu Phe
        115                 120                 125
Trp Phe Phe Gln Tyr Ala Phe Ala Cys Ala Leu Ser Ser Ile Val Ala
    130                 135                 140
Gly Thr Ile Ala Glu Arg Thr Lys Met Met Ala Tyr Leu Cys Tyr Ser
145                 150                 155                 160
Ile Phe Leu Cys Gly Phe Val Tyr Pro Val Cys Ala His Ala Phe Trp
                165                 170                 175
Ser Gln Asn Gly Phe Leu Ser Ala Phe Ala Ala Glu Pro Leu Trp Gly
            180                 185                 190
Ser Gly Val Ile Asp Phe Ala Gly Ser Gly Pro Val His Met Cys Gly
        195                 200                 205
Gly Val Ala Ala Leu Val Met Ala Ile Ile Leu Gly Pro Arg Arg Gly
    210                 215                 220
Arg Phe Tyr Asp Asp Asp Gly Val Val Leu Asp Glu Pro Lys Ser Met
225                 230                 235                 240
Gly Pro His Ser Val Thr Leu Gln Phe Leu Gly Thr Phe Ala Leu Trp
                245                 250                 255
Phe Gly Trp Tyr Gly Phe Asn Pro Gly Ser Ser Ile Leu Ile Ala Ser
            260                 265                 270
Ala Ala Ser Gly Asp Val Ala Ser Leu Ala Ala Val Asn Thr Thr Leu
        275                 280                 285
Gly Ser Ala Ala Gly Ala Leu Ser Gly Met Phe Thr Ser Thr Ile Val
    290                 295                 300
Asp Glu Arg Lys Thr Gly Val Tyr Thr Trp Asp Thr Thr Ala Ala Met
305                 310                 315                 320
Asn Gly Cys Leu Thr Gly Leu Val Ala Ile Thr Ala Gly Cys Ala Thr
                325                 330                 335
Val Glu Pro Trp Ala Ala Phe Val Ile Gly Leu Thr Ala Gly Trp Val
            340                 345                 350
Tyr Leu Ala Ala Ser Ala Leu Met Leu Arg Phe Lys Ile Asp Asp Ala
        355                 360                 365
Val Asp Ala Ile Pro Val His Met Phe Gly Gly Ser Trp Gly Val Phe
    370                 375                 380
Cys Thr Gly Leu Phe Thr Ser Pro Arg Arg Leu Ile Thr Ala Tyr Gly
385                 390                 395                 400
Asn Asp Asn Asn Val Gly Trp Phe Tyr Glu Trp Gly Arg Gly Ser Gly
                405                 410                 415
Asn Phe Thr Leu Leu Gly Cys Gln Leu Val Ser Ile Leu Phe Val Leu
            420                 425                 430
Gly Trp Ser Ala Cys Ile Phe Ala Pro Phe Cys Leu Ala Leu Lys Thr
        435                 440                 445
Leu Asn Trp Leu Arg Ile Asp Pro Leu Glu Glu Glu Val Gly Met Asp
    450                 455                 460
Ile Ser Arg His Lys Gly Pro Ala Tyr Glu Ser Glu Gly Ser Ala His
465                 470                 475                 480
Ser Asp Ala Ile Glu Lys Leu Ser Ala Ser Arg Arg Asp Ile Met Asn
                485                 490                 495
Ala Ser Gly Ser Gly Arg Gly Lys Ser Phe Ser Arg Ser Thr Pro Thr
            500                 505                 510
Lys Ala Asn Glu Glu Pro Lys Ile Glu Ala Thr Glu Asp Ala Gly Ala
        515                 520                 525
Pro Ala Gly Glu Ala Thr Ala
    530                 535
 
<210>27
<211>1632
<212>DNA
<213>假微型海链藻
 
<400>27
atgtttcagg tatcaagagc tggacacgtg tcagtgtatg aggtctgcaa atccttcgtc    60
aacccagaag attctcaagc agatcagttt gatgcaatgc tccaatgtgt tggggaatcc    120
aacggcaaga gtatagacgc tttcttcctt atatacgcat catccctcgt cttcttcatg    180
caagccggct tcgccatgct ttgtgctgga tgcgttcaac acaagaatgt tcagaacagt    240
atgttgaaga acctcctaga tgcatgcggt gcagcccttg gcttctattc cgtcgggtat    300
gcatttgctt acggtggcat ggactattca gatccaaaca agacatttat cggcacagag    360
aactttttct tgatgggagt ggacgatttc atgttttggc tattccaatt tgcattcgct    420
gcaagtgctg ctaccattgt ggcaggaacg ttggctgaac ggtgtcaaat gacggcatac    480
ttgtgctact cagtggcagt gactggattt gtatatccag tagttgtaca ttcggtttgg    540
tctccgcagg gtttcttgtg cggacaggct gtgagcccgt tatttggagt tggtgtagta    600
gactttgcag gatcatcggt tgtgcatttg actggagggt gcattgcact cattgccacg  660
tatattctag gcccaaggcg agggagattc tatgatcaca gaggagaacc tcttgagaca  720
ccagtcgagt ttccgggtca ttcagctgca cttcaaatgc tcggtgcctt catattatgg  780
tttggatggt atggcttcaa tactggatca actctttcga tcaccggccc tggccaacat  840
caagtcgtca gccttgtagc tgtaaacaca accctcgcgg cggcctctgc ttgtgtggct  900
tcccttcttg ccagttatta tgtcatcgaa cgaaagactg gcgaaggtac attctcgctt  960
tcttcagcaa tgaatgggtg cttaggagga ttagtcagta tcactggtgg atgtgcagtg  1020
gtggagcctt gggcagccgt cgtaatcgga ttcatagcag ggttgttgta tctcttcacg  1080
tcaaagctat tgattcgttt gcgaatagac gatgcagtcg atgctattcc ggtccacttg  1140
tctaacggaa tatggggtac ggttgcggtg gggttgttcg catcgtcgaa tcgtttgcag  1200
ttggcttttg gaaaagtcgc tgatactggt gtgttcatgg gtggaaccgg taaactgttg  1260
ggatgtcaaa taattggtgt cttctttgtg cttggatgga tttccttcat tatgattccg  1320
ttcttctgct tccttcacta catgggatgg cttcgatctg agtcaattga tgaagtagaa  1380
gggcttgatt ccaagtatca tggattgcga aacaaagatg agcatagaca tgacgaagaa  1440
gaagacaata ctccatcaca ctacggcgaa ggcaattgca ggctgaggcg tagcattttg  1500
cgccatgagg aaagaatgag acaagaggac tcggcaatac ccgcaacttt ggtatcaagt  1560
gatgataggt tcacgtgtga ctcaggagga aatagcactt caatgctatc tactgctaag  1620
caatacacct ag                                                      1632
 
<210>28
<211>543
<212>PRT
<213>假微型海链藻
 
<400>28
Met Phe Gln Val Ser Arg Ala Gly His Val Ser Val Tyr Glu Val Cys
1               5                   10                  15
Lys Ser Phe Val Asn Pro Glu Asp Ser Gln Ala Asp Gln Phe Asp Ala
            20                  25                  30
Met Leu Gln Cys Val Gly Glu Ser Asn Gly Lys Ser Ile Asp Ala Phe
        35                  40                  45
Phe Leu Ile Tyr Ala Ser Ser Leu Val Phe Phe Met Gln Ala Gly Phe
    50                  55                  60
Ala Met Leu Cys Ala Gly Cys Val Gln His Lys Asn Val Gln Asn Ser
65                  70                  75                  80
Met Leu Lys Asn Leu Leu Asp Ala Cys Gly Ala Ala Leu Gly Phe Tyr
                85                  90                  95
Ser Val Gly Tyr Ala Phe Ala Tyr Gly Gly Met Asp Tyr Ser Asp Pro
            100                 105                 110
Asn Lys Thr Phe Ile Gly Thr Glu Asn Phe Phe Leu Met Gly Val Asp
        115                 120                 125
Asp Phe Met Phe Trp Leu Phe Gln Phe Ala Phe Ala Ala Ser Ala Ala
    130                 135                 140
Thr Ile Val Ala Gly Thr Leu Ala Glu Arg Cys Gln Met Thr Ala Tyr
145                 150                 155                 160
Leu Cys Tyr Ser Val Ala Val Thr Gly Phe Val Tyr Pro Val Val Val
                165                 170                 175
His Ser Val Trp Ser Pro Gln Gly Phe Leu Cys Gly Gln Ala Val Ser
            180                 185                 190
Pro Leu Phe Gly Val Gly Val Val Asp Phe Ala Gly Ser Ser Val Val
        195                 200                 205
His Leu Thr Gly Gly Cys Ile Ala Leu Ile Ala Thr Tyr Ile Leu Gly
    210                 215                 220
Pro Arg Arg Gly Arg Phe Tyr Asp His Arg Gly Glu Pro Leu Glu Thr
225                 230                 235                 240
Pro Val Glu Phe Pro Gly His Ser Ala Ala Leu Gln Met Leu Gly Ala
                245                 250                 255
Phe Ile Leu Trp Phe Gly Trp Tyr Gly Phe Asn Thr Gly Ser Thr Leu
            260                 265                 270
Ser Ile Thr Gly Pro Gly Gln His Gln Val Val Ser Leu Val Ala Val
        275                 280                 285
Asn Thr Thr Leu Ala Ala Ala Ser Ala Cys Val Ala Ser Leu Leu Ala
    290                 295                 300
Ser Tyr Tyr Val Ile Glu Arg Lys Thr Gly Glu Gly Thr Phe Ser Leu
305                 310                 315                 320
Ser Ser Ala Met Asn Gly Cys Leu Gly Gly Leu Val Ser Ile Thr Gly
                325                 330                 335
Gly Cys Ala Val Val Glu Pro Trp Ala Ala Val Val Ile Gly Phe Ile
            340                 345                 350
Ala Gly Leu Leu Tyr Leu Phe Thr Ser Lys Leu Leu Ile Arg Leu Arg
        355                 360                 365
Ile Asp Asp Ala Val Asp Ala Ile Pro Val His Leu Ser Asn Gly Ile
    370                 375                 380
Trp Gly Thr Val Ala Val Gly Leu Phe Ala Ser Ser Asn Arg Leu Gln
385                 390                 395                 400
Leu Ala Phe Gly Lys Val Ala Asp Thr Gly Val Phe Met Gly Gly Thr
                405                 410                 415
Gly Lys Leu Leu Gly Cys Gln Ile Ile Gly Val Phe Phe Val Leu Gly
            420                 425                 430
Trp Ile Ser Phe Ile Met Ile Pro Phe Phe Cys Phe Leu His Tyr Met
        435                 440                 445
Gly Trp Leu Arg Ser Glu Ser Ile Asp Glu Val Glu Gly Leu Asp Ser
    450                 455                 460
Lys Tyr His Gly Leu Arg Asn Lys Asp Glu His Arg His Asp Glu Glu
465                 470                 475                 480
Glu Asp Asn Thr Pro Ser His Tyr Gly Glu Gly Asn Cys Arg Leu Arg
                485                 490                 495
Arg Ser Ile Leu Arg His Glu Glu Arg Met Arg Gln Glu Asp Ser Ala
            500                 505                 510
Ile Pro Ala Thr Leu Val Ser Ser Asp Asp Arg Phe Thr Cys Asp Ser
        515                 520                 525
Gly Gly Asn Ser Thr Ser Met Leu Ser Thr Ala Lys Gln Tyr Thr
    530                 535                 540
 
<210>29
<211>1572
<212>DNA
<213>假微型海链藻
 
<400>29
atgtcctcgt cggtacggac gagcctgtac gaggcttgca aatctactca atccaactct    60
acgttttcca actctacgct cgatgatgca ctctctcgcc aggaacagat cttccgttgc    120
atttcggaat cgaacgccaa tagtattgat acgttctttc tgctctatgc ctcatcgctg    180
gtattcttta tgcaagccgg attcgcgatg ctctgtgcag gatcagtgag aaagaagaat    240
gtgactaata ccatgttgaa gaaccttctc gatgcttgcg gtgccgcact tgggttctat    300
tctgtgggat acgcctttgc atacggagga tcagtagacg ccgggaagaa gacgtttata    360
ggtatgagca acttctttct acaggacgtt gacaactata tgttttggct ctttcagttt    420
gcattcgctg caacatcagc tacaatcgta gcaggaacat tggctgaaag atgtcaaatg    480
acagcttacc tttgctactc aattgcattg acgggatttg tctacccagt tgtcgctcat    540
tcaatatgga gtcagcaggg gttcttatca gctactgctc aagatccatt atggggtaca    600
ggtttcattg actttgcggg atcaacagta gtacatctga cgggtggatt tacagctttg    660
attgcgacat atcttctagg gccacgcaga ggacggttct acgatgcgaa aggcaagcag    720
ttggaagtgc caaatccaat gcctggccat tcagctgcac ttcagatgct tggtatcttc    780
attttatggt ttggttggta tggtttcatt gttggatcag cgataactat catcggtccg    840
aatcaagaca agatcatctc tacctctgca gtgaatacga cactctctgc agcgtcatca    900
tgcttctctg ccttactcgt caactacgtc attgtcgaga ggcaatcggg agaaggagaa    960
ttcagtcttc tcgctgcaat gaacggatgc ttgagtggat tggtagcgat aacaggtgga    1020
tgcgcagtga tagcaccatg ggcagcaatt atcgtcggac ttttcgctgg cctcttgtac  1080
ttatttacgt caaaggtatt ggtacgagtt cgaatcgacg atgcagtaga agccattcct  1140
gttcacatga ctaacgggat atggggtagt ttcgcagttg gactatttgc cgctccatcg  1200
gagctgcaat tggtatacgg aaaagcaaat cacgttggac tattctattc ttggcatcaa  1260
gggagtggag atgggacgtt actcggtgtc caatgcttgg gcattctgtt tgtagtgggc  1320
tgggtgttct gtctcatgtc tcccttcttc ctgtttctga actacaaagg ctggttcaga  1380
gccgacgtcc tcaacgagat tgctggctta gatttgagtt atcatgatgg agtggatatg  1440
gaattggtga ctcagatacg caatcaaagg aagaacttgc acgtcaacag caggaatcgc  1500
tttagttcga atagtgcatg tcctcatcat acggcaacac atgtcgatac ctcaactgat  1560
gcatcacttt ga                                                      1572
 
<210>30
<211>511
<212>PRT
<213>假微型海链藻
 
<400>30
 
Met Ser Ser Ser Val Arg Thr Ser Leu Tyr Glu Ala Cys Lys Ser Thr
1               5                   10                  15
Gln Ser Asn Ser Thr Phe Ser Asn Ser Thr Leu Asp Asp Ala Leu Ser
            20                  25                  30
Arg Gln Glu Gln Ile Phe Arg Cys Ile Ser Glu Ser Asn Ala Asn Ser
        35                  40                  45
Lle Asp Thr Phe Phe Leu Leu Tyr Ala Ser Ser Leu Val Phe Phe Met
    50                  55                  60
Gln Ala Gly Phe Ala Met Leu Cys Ala Gly Ser Val Arg Lys Lys Asn
65                  70                  75                  80
Val Thr Asn Thr Met Leu Lys Asn Leu Leu Asp Ala Cys Gly Ala Ala
                85                  90                  95
Leu Gly Phe Tyr Ser Val Gly Tyr Ala Phe Ala Tyr Gly Gly Ser Val
            100                 105                 110
Asp Ala Gly Lys Lys Thr Phe Ile Gly Met Ser Asn Phe Phe Leu Gln
        115                 120                 125
Asp Val Asp Asn Tyr Met Phe Trp Leu Phe Gln Phe Ala Phe Ala Ala
    130                 135                 140
Thr Ser Ala Thr Ile Val Ala Gly Thr Leu Ala Glu Arg Cys Gln Met
145                 150                 155                 160
Thr Ala Tyr Leu Cys Tyr Ser Ile Ala Leu Thr Gly Phe Val Tyr Pro
                165                 170                 175
Val Val Ala His Ser Ile Trp Ser Gln Gln Gly Phe Leu Ser Ala Thr
            180                 185                 190
Ala Gln Asp Pro Leu Trp Gly Thr Gly Phe Ile Asp Phe Ala Gly Ser
        195                 200                 205
Thr Val Val His Leu Thr Gly Gly Phe Thr Ala Leu Ile Ala Thr Tyr
    210                 215                 220
Leu Leu Gly Pro Arg Arg Gly Arg Phe Tyr Asp Ala Lys Gly Lys Gln
225                 230                 235                 240
Leu Glu Val Pro Asn Pro Met Pro Gly His Ser Ala Ala Leu Gln Met
                245                 250                 255
Leu Gly Ile Phe Ile Leu Trp Phe Gly Trp Tyr Gly Phe Ile Val Gly
            260                 265                 270
Ser Ala Ile Thr Ile Ile Gly Pro Asn Gln Asp Lys Ile Ile Ser Thr
        275                 280                 285
Ser Ala Val Asn Thr Thr Leu Ser Ala Ala Ser Ser Cys Phe Ser Ala
    290                 295                 300
Leu Leu Val Asn Tyr Val Ile Val Glu Arg Gln Ser Gly Glu Gly Glu
305                 310                 315                 320
Phe Ser Leu Leu Ala Ala Met Asn Gly Cys Leu Ser Gly Leu Val Ala
                325                 330                 335
Ile Thr Gly Gly Cys Ala Val Ile Ala Pro Trp Ala Ala Ile Ile Val
            340                 345                 350
Gly Leu Phe Ala Gly Leu Leu Tyr Leu Phe Thr Ser Lys Val Leu Val
        355                 360                 365
Arg Val Arg Ile Asp Asp Ala Val Glu Ala Ile Pro Val His Met Thr
    370                 375                 380
Asn Gly Ile Trp Gly Ser Phe Ala Val Gly Leu Phe Ala Ala Pro Ser
385                 390                 395                 400
Glu Leu Gln Leu Val Tyr Gly Lys Ala Asn His Val Gly Leu Phe Tyr
                405                 410                 415
Ser Trp His Gln Gly Ser Gly Asp Gly Thr Leu Leu Gly Val Gln Cys
            420                 425                 430
Leu Gly Ile Leu Phe Val Val Gly Trp Val Phe Cys Leu Met Ser Pro
        435                 440                 445
Phe Phe Leu Phe Leu Asn Tyr Lys Gly Trp Phe Arg Ala Asp Val Leu
    450                 455                 460
Asn Glu Ile Ala Gly Leu Asp Leu Ser Tyr His Asp Gly Val Asp Met
465                 470                 475                 480
Glu Leu Val Thr Gln Ile Arg Asn Gln Arg Lys Asn Leu His Val Asn
                485                 490                 495
Ser Arg Asn Arg Phe Ser Ser Asn Ser Ala Cys Pro His His Thr
            500                 505                 510
 
<210>31
<211>1791
<212>DNA
<213>假微型海链藻
 
<400>31
atggcatcat caaccaccac agacacctat caaacatgcc tcagcgatct ctcggcgacg    60
tcgtctaatg gatcctcgcc caccaccgac gccctccttc agtgcatctc ctcctccttc    120
gacgctcaaa cggcctctac acatgcttca atcaacacct ttttcctcct ctatgcagcc    180
accctcgtct tcttcatgca agccggcttt gccatggtta gcgctggatg tgttaggacg    240
aataatgttc agaatacgct gctgaagaat ctgttggacg cctgcggtgc cgctcttgga    300
ttctacactg ttggatacgc cttcgcatgg ggaggatcgt tggatacggc taccaccgag    360
aggacgttca tcggtacaca gaacttcttt ttgatggatg tggatagctc tcaggattca    420
ttttggttgt ttcaattggc tttctgctcg gcatctgcaa cgattgtggc tggaacgttg    480
gctgaacgtt gtcaaatggt tgcctatctt gcatactcca tgacattggc aggatttgtc    540
tacccagtcg tcgtacacag tatctggagt ccgagtggat tcttgagtgc tactcgtgag    600
accgatctct tcttggatgt gggaatgatt gacttcgcag gatcaaccgt cgtgcatttg    660
acgggaggga tgactgcgtt gattgctacg attgtgctgg gaccgaggac gggaaggttc    720
tatgatttga gaggaaatcc gttgaaagta ccaaaggagt ttgcaggaca ttcattggct    780
ttgcaaatgt tgggggtgtt catcttgtgg tttggatggt atggcttcaa cgctggatcg    840
atcctcaaca tcaccaacga tctcaatcat acaatcgtca gtcatactgc catcaacaca    900
actcttgcag cttctgctgg atccatcatg actctcttcc tcagtaccgt cgtagccgaa    960
agatttacgg gggagatagt gtttagtcta tcttatgcca tgaatgggtg tttgagtgga    1020
ttggtggcaa tcacagctgg ctgctcagtg gtagaacact gggctgcaat cataatcggg    1080
cttgtaggag gggcattgta tttggcatgc tccaagttct tggtgaagaa acgtatcgat    1140
gatgcagttg atggtatccc tgtccacttg attaatggaa tctggggaac gttgagtgtc    1200
ggtctcttcg ctgtgcctga gttgttggag caagtgtatg gaaggggtga tcacgctggt    1260
tggttttaca gttggggaca aggatcagca gacgccaagt tgttgggagc tcaagtagtt    1320
ggaatcttgt ttgtcagtgg ctgggttatg atcacgatgt ttcctttctt ttgtttcttg    1380
cattatgttg gatggcttcg tgccgactct ctcgaggaag tagtcggtct cgacgctgct    1440
tactcccaag gtgttcttca gacgcgtgcc cgtgcccaaa gtgaggaaga gaacatggag    1500
cattacatca gtgaatatgt taagcagcgt gaggaaaaag cattcatcaa gaagatcaac    1560
agcaatagta ctcacggacg tactatcctt ggtgcaagca tgcattcaat gaacatcatt    1620
aattccagca tgcattccag aaaggacagt ctaccacgtg caattgaaag tctcaacaat    1680
tcaagacact ctggttcaag aggatcaaga tcaattaatg atattgcgat tgacaatttg    1740
catggtcaat ctgaggatgg ttttgctgca cctgatgagg gcagtgctta g    1791
 
<210>32
<211>596
<212>PRT
<213>假微型海链藻
 
<400>32
 
Met Ala Ser Ser Thr Thr Thr Asp Thr Tyr Gln Thr Cys Leu Ser Asp
1               5                   10                  15
Leu Ser Ala Thr Ser Ser Asn Gly Ser Ser Pro Thr Thr Asp Ala Leu
            20                  25                  30
Leu Gln Cys Ile Ser Ser Ser Phe Asp Ala Gln Thr Ala Ser Thr His
        35                  40                  45
Ala Ser Ile Asn Thr Phe Phe Leu Leu Tyr Ala Ala Thr Leu Val Phe
    50                  55                  60
Phe Met Gln Ala Gly Phe Ala Met Val Ser Ala Gly Cys Val Arg Thr
65                  70                  75                  80
Asn Asn Val Gln Asn Thr Leu Leu Lys Asn Leu Leu Asp Ala Cys Gly
                85                  90                  95
Ala Ala Leu Gly Phe Tyr Thr Val Gly Tyr Ala Phe Ala Trp Gly Gly
            100                 105                 110
Ser Leu Asp Thr Ala Thr Thr Glu Arg Thr Phe Ile Gly Thr Gln Asn
        115                 120                 125
Phe Phe Leu Met Asp Val Asp Ser Ser Gln Asp Ser Phe Trp Leu Phe
    130                 135                 140
Gln Leu Ala Phe Cys Ser Ala Ser Ala Thr Ile Val Ala Gly Thr Leu
145                 150                 155                 160
Ala Glu Arg Cys Gln Met Val Ala Tyr Leu Ala Tyr Ser Met Thr Leu
                165                 170                 175
Ala Gly Phe Val Tyr Pro Val Val Val His Ser Ile Trp Ser Pro Ser
            180                 185                 190
Gly Phe Leu Ser Ala Thr Arg Glu Thr Asp Leu Phe Leu Asp Val Gly
        195                 200                 205
Met Ile Asp Phe Ala Gly Ser Thr Val Val His Leu Thr Gly Gly Met
    210                 215                 220
Thr Ala Leu Ile Ala Thr Ile Val Leu Gly Pro Arg Thr Gly Arg Phe
225                 230                 235                 240
Tyr Asp Leu Arg Gly Asn Pro Leu Lys Val Pro Lys Glu Phe Ala Gly
                245                 250                 255
His Ser Leu Ala Leu Gln Met Leu Gly Val Phe Ile Leu Trp Phe Gly
            260                 265                 270
Trp Tyr Gly Phe Asn Ala Gly Ser Ile Leu Asn Ile Thr Asn Asp Leu
        275                 280                 285
Asn His Thr Ile Val Ser His Thr Ala Ile Asn Thr Thr Leu Ala Ala
    290                 295                 300
Ser Ala Gly Ser Ile Met Thr Leu Phe Leu Ser Thr Val Val Ala Glu
305                 310                 315                 320
Arg Phe Thr Gly Glu Ile Val Phe Ser Leu Ser Tyr Ala Met Asn Gly
                325                 330                 335
Cys Leu Ser Gly Leu Val Ala Ile Thr Ala Gly Cys Ser Val Val Glu
            340                 345                 350
His Trp Ala Ala Ile Ile Ile Gly Leu Val Gly Gly Ala Leu Tyr Leu
        355                 360                 365
Ala Cys Ser Lys Phe Leu Val Lys Lys Arg Ile Asp Asp Ala Val Asp
    370                 375                 380
Gly Ile Pro Val His Leu Ile Asn Gly Ile Trp Gly Thr Leu Ser Val
385                 390                 395                 400
Gly Leu Phe Ala Val Pro Glu Leu Leu Glu Gln Val Tyr Gly Arg Gly
                405                 410                 415
Asp His Ala Gly Trp Phe Tyr Ser Trp Gly Gln Gly Ser Ala Asp Ala
            420                 425                 430
Lys Leu Leu Gly Ala Gln Val Val Gly Ile Leu Phe Val Ser Gly Trp
        435                 440                 445
Val Met Ile Thr Met Phe Pro Phe Phe Cys Phe Leu His Tyr Val Gly
    450                 455                 460
Trp Leu Arg Ala Asp Ser Leu Glu Glu Val Val Gly Leu Asp Ala Ala
465                 470                 475                 480
Tyr Ser Gln Gly Val Leu Gln Thr Arg Ala Arg Ala Gln Ser Glu Glu
                485                 490                 495
Glu Asn Met Glu His Tyr Ile Ser Glu Tyr Val Lys Gln Arg Glu Glu
            500                 505                 510
Lys Ala Phe Ile Lys Lys Ile Asn Ser Asn Ser Thr His Gly Arg Thr
        515                 520                 525
Ile Leu Gly Ala Ser Met His Ser Met Asn Ile Ile Asn Ser Ser Met
    530                 535                 540
His Ser Arg Lys Asp Ser Leu Pro Arg Ala Ile Glu Ser Leu Asn Asn
545                 550                 555                 560
Ser Arg His Ser Gly Ser Arg Gly Ser Arg Ser Ile Asn Asp Ile Ala
                565                 570                 575
Ile Asp Asn Leu His Gly Gln Ser Glu Asp Gly Phe Ala Ala Pro Asp
            580                 585                 590
Glu Gly Ser Ala
        595
 
<210>33
<211>407
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>SEQ ID NO：02和SEQ ID NO：04中包含的保守结构域
 
<400>33
 
Met Gln Ala Gly Phe Ala Met Leu Cys Ala Gly Ser Val Arg Gln Lys
1               5                   10                  15
Asn Val Lys Asn Ile Met Leu Lys Asn Leu Leu Asp Ala Cys Gly Gly
            20                  25                  30
Ala Ile Gly Phe Tyr Thr Val Gly Phe Gly Phe Ala Tyr Gly Gly Asp
        35                  40                  45
Asp Thr Thr Asp Lys Thr Phe Ile Gly Asn Ser Tyr Phe Ala Leu Arg
    50                  55                  60
Asp Tyr Thr Asn Tyr Ala Gly Phe Phe Phe Gln Phe Ala Phe Ala Ala
65                  70                  75                  80
Thr Ala Ala Thr Ile Val Ala Gly Thr Val Ala Glu Arg Cys Lys Met
                85                  90                  95
Ser Ala Tyr Leu Cys Tyr Ser Leu Phe Leu Thr Gly Phe Val Tyr Pro
            100                 105                 110
Val Val Val Arg Ser Val Trp Ser Ser Asn Gly Phe Leu Ser Ala Phe
        115                 120                 125
Ser Ala Asp Pro Phe Gln Gly Val Gly Thr Val Asp Phe Ala Gly Ser
    130                 135                 140
Gly Val Val His Met Thr Gly Gly Leu Thr Ala Leu Ile Ala Ala Ile
145                 150                 155                 160
Val Leu Gly Pro Arg Lys Gly Arg Phe Tyr Asp Glu Asp Gly Asn Pro
                165                 170                 175
Leu Glu Thr Pro Ala Ser Phe Pro Ala His Ser Val Ala Leu Gln Ile
            180                 185                 190
Leu Gly Thr Phe Ile Leu Trp Phe Gly Trp Tyr Gly Phe Asn Pro Gly
        195                 200                 205
Ser Ala Leu Lys Ile Ala Asn Ala Asp Ser Ala Ala Thr Ala Ala Leu
    210                 215                 220
Cys Ala Val Thr Thr Thr Met Ala Ala Ala Ala Gly Cys Val Ser Ala
225                 230                 235                 240
Met Phe Thr Asp Ser Ile Ile Asp Gly Met Ala Thr Gly Glu Thr Thr
                245                 250                 255
Tyr Asp Leu Thr Met Ala Met Asn Gly Cys Leu Ala Gly Leu Val Ala
            260                 265                 270
Val Thr Ala Gly Thr Ser Val Val Thr Pro Trp Ala Ala Ile Ile Ile
        275                 280                 285
Gly Val Val Gly Gly Trp Val Tyr Ile Gly Met Ser Lys Leu Leu Ile
    290                 295                 300
Lys Leu Lys Ile Asp Asp Ala Val Asp Ala Ile Pro Val His Phe Ala
305                 310                 315                 320
Asn Gly Phe Trp Gly Val Leu Ala Thr Gly Leu Phe Ala Asn Gly Gly
                325                 330                 335
Leu Met Ala Thr Ala Gly Tyr Asn Ser Glu His Glu Gly Trp Phe Tyr
            340                 345                 350
Glu Trp Gly Ser Gly Ser Gly Asp Gly Ser Leu Leu Ile Cys Gln Leu
        355                 360                 365
Ala Cys Leu Ala Trp Ile Ile Gly Trp Val Thr Thr Ile Met Thr Pro
    370                 375                 380
Phe Phe Ile Leu Leu Asn Met Ala Gly Met Phe Arg Val Asp Pro Leu
385                 390                 395                 400
Glu Glu Glu Val Gly Leu Asp
                405
 
<210>34
<211>2194
<212>DNA
<213>稻(Oryza sativa)
 
<400>34
aatccgaaaa gtttctgcac cgttttcacc ccctaactaa caatataggg aacgtgtgct    60
aaatataaaa tgagacctta tatatgtagc gctgataact agaactatgc aagaaaaact    120
catccaccta ctttagtggc aatcgggcta aataaaaaag agtcgctaca ctagtttcgt    180
tttccttagt aattaagtgg gaaaatgaaa tcattattgc ttagaatata cgttcacatc    240
tctgtcatga agttaaatta ttcgaggtag ccataattgt catcaaactc ttcttgaata    300
aaaaaatctt tctagctgaa ctcaatgggt aaagagagag atttttttta aaaaaataga    360
atgaagatat tctgaacgta ttggcaaaga tttaaacata taattatata attttatagt    420
ttgtgcattc gtcatatcgc acatcattaa ggacatgtct tactccatcc caatttttat    480
ttagtaatta aagacaattg acttattttt attatttatc ttttttcgat tagatgcaag    540
gtacttacgc acacactttg tgctcatgtg catgtgtgag tgcacctcct caatacacgt    600
tcaactagca acacatctct aatatcactc gcctatttaa tacatttagg tagcaatatc    660
tgaattcaag cactccacca tcaccagacc acttttaata atatctaaaa tacaaaaaat    720
aattttacag aatagcatga aaagtatgaa acgaactatt taggtttttc acatacaaaa    780
aaaaaaagaa ttttgctcgt gcgcgagcgc caatctccca tattgggcac acaggcaaca    840
acagagtggc tgcccacaga acaacccaca aaaaacgatg atctaacgga ggacagcaag    900
tccgcaacaa ccttttaaca gcaggctttg cggccaggag agaggaggag aggcaaagaa    960
aaccaagcat cctccttctc ccatctataa attcctcccc ccttttcccc tctctatata    1020
ggaggcatcc aagccaagaa gagggagagc accaaggaca cgcgactagc agaagccgag    1080
cgaccgcctt ctcgatccat atcttccggt cgagttcttg gtcgatctct tccctcctcc    1140
acctcctcct cacagggtat gtgcctccct tcggttgttc ttggatttat tgttctaggt    1200
tgtgtagtac gggcgttgat gttaggaaag gggatctgta tctgtgatga ttcctgttct    1260
tggatttggg atagaggggt tcttgatgtt gcatgttatc ggttcggttt gattagtagt    1320
atggttttca atcgtctgga gagctctatg gaaatgaaat ggtttaggga tcggaatctt    1380
gcgattttgt gagtaccttt tgtttgaggt aaaatcagag caccggtgat tttgcttggt    1440
gtaataaagt acggttgttt ggtcctcgat tctggtagtg atgcttctcg atttgacgaa    1500
gctatccttt gtttattccc tattgaacaa aaataatcca actttgaaga cggtcccgtt    1560
gatgagattg aatgattgat tcttaagcct gtccaaaatt tcgcagctgg cttgtttaga    1620
tacagtagtc cccatcacga aattcatgga aacagttata atcctcagga acaggggatt    1680
ccctgttctt ccgatttgct ttagtcccag aatttttttt cccaaatatc ttaaaaagtc    1740
actttctggt tcagttcaat gaattgattg ctacaaataa tgcttttata gcgttatcct    1800
agctgtagtt cagttaatag gtaatacccc tatagtttag tcaggagaag aacttatccg    1860
atttctgatc tccattttta attatatgaa atgaactgta gcataagcag tattcatttg    1920
gattattttt tttattagct ctcacccctt cattattctg agctgaaagt ctggcatgaa    1980
ctgtcctcaa ttttgttttc aaattcacat cgattatcta tgcattatcc tcttgtatct    2040
acctgtagaa gtttcttttt ggttattcct tgactgcttg attacagaaa gaaatttatg    2100
aagctgtaat cgggatagtt atactgcttg ttcttatgat tcatttcctt tgtgcagttc  2160
ttggtgtagc ttgccacttt caccagcaaa gttc                              2194
 
<210>35
<211>50
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>引物：prm09458
 
<400>35
ggggacaagt ttgtacaaaa aagcaggctt aaacaatgat gcaggccggg   50
 
<210>36
<211>49
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>引物：prm09459
 
<400>36
ggggaccact ttgtacaaga aagctgggta cacgagcagc aattaaacc    49

Claims (22)

1.与对照植物相比在植物中提高产量相关性状的方法，其包括：在植物中提高编码铵转运蛋白(AMT)多肽之核酸序列的表达；以及任选地选择具有提高的产量相关性状的植物，其中所述AMT多肽包含与SEQ IDNO：33所示保守结构域(CD)以递增优选顺序具有至少50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％、99％或更高氨基酸序列同一性的结构域。
2.根据权利要求1的方法，其中所述AMT多肽包含：(i)InterPro登录号IPR0001905的铵转运蛋白结构域，和(ii)至少10个跨膜螺旋。
3.根据权利要求1或2的方法，其中所述AMT多肽在用于构建AMT系统发生树例如图2所示系统发生树时，与包含SEQ ID NO：2所示多肽序列的AMT多肽进化枝(图2中以圆圈示出)聚类，而不与任何其他AMT进化枝聚类。
4.根据前述权利要求中任一项的方法，其中所述AMT多肽与SEQ IDNO：2所示AMT多肽或本文表A中给出的任何多肽序列以递增优选顺序具有至少40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％、99％或更高的氨基酸序列同一性。
5.根据前述权利要求中任一项的方法，其中所述编码AMT多肽的核酸序列表示为表A所给出任一核酸序列SEQ ID NO或其部分，或是能与表A所给出任一核酸序列SEQ ID NO杂交的序列。
6.根据前述权利要求中任一项的方法，其中所述核酸序列编码表A所给出任一多肽序列SEQ ID NO的直向同源物或旁系同源物。
7.根据前述权利要求中任一项的方法，其中所述提高的表达通过以下任何一种或多种来实现：T-DNA激活标签化、TILLING或同源重组。
8.根据前述权利要求中任一项的方法，其中所述提高的表达通过在植物中引入并表达编码AMT多肽的核酸序列来实现。
9.根据前述权利要求中任一项的方法，其中所述提高的产量相关性状为以下一种或多种：提高的早期活力、提高的地上部分生物量、提高的根生物量、提高的每株植物种子总产量、提高的种子饱满率、提高的饱满种子数或提高的收获指数。
10.根据前述权利要求中任一项的方法，其中所述核酸序列与组成型启动子有效连接，优选与植物组成型启动子有效连接，更优选与GOS2启动子有效连接，最优选与如SEQ ID NO：34所示的来自稻的GOS2启动子有效连接。
11.根据前述权利要求中任一项的方法，其中所述编码AMT多肽的核酸序列来自不等鞭毛门，优选来自硅藻纲，更优选来自羽纹目，最优选来自三角褐指藻。
12.可通过前述权利要求中任一项获得的植物、其部分(包括种子)或植物细胞，其中所述植物、其部分或细胞包含编码AMT多肽的分离的核酸转基因，其与植物组成型启动子有效连接。
13.构建体，其包含：
(a)编码权利要求1至6中任一项所定义AMT多肽的核酸序列；
(b)能驱动(a)的核酸序列表达的一种或多种控制序列；和任选的
(c)转录终止序列。
14.根据权利要求13的构建体，其中所述控制序列为植物组成型启动子，优选GOS2启动子，更优选如SEQ ID NO：34所示的GOS2启动子。
15.根据权利要求13或14的构建体在用于产生与对照植物相比具有提高的产量相关性状之植物的方法中的用途，其中所述提高的产量相关性状为以下一种或多种：提高的早期活力、提高的地上部分生物量、提高的根生物量、提高的每株植物种子总产量、提高的种子饱满率、提高的饱满种子数或提高的收获指数。
16.转化有根据权利要求13或14的构建体的植物、植物部分或植物细胞。
17.用于产生与对照植物相比具有提高的产量相关性状的转基因植物的方法，其包括：
(i)在植物、植物部分或植物细胞中引入并表达编码权利要求1至6中任一项所定义AMT多肽的核酸序列，其处于植物组成型启动子的控制之下；和
(ii)在促进植物生长和发育的条件下培养所述植物细胞、植物部分或植物。
18.由于提高了编码权利要求1至6中任一项所定义AMT多肽之核酸序列的表达而与对照植物相比具有提高的产量相关性状的转基因植物，或者来自所述转基因植物的转基因植物细胞或转基因植物部分，其中所述核酸序列与植物组成型启动子有效连接。
19.根据权利要求12、16或18的转基因植物或者来自所述转基因植物的转基因植物细胞，其中所述植物是作物植物或单子叶植物或谷类，例如稻、玉米、小麦、大麦、黍、黑麦、黑小麦、高粱和燕麦。
20.根据权利要求19的植物中包含编码AMT多肽之分离核酸序列的可收获部分，其中所述可收获部分优选为种子。
21.来自根据权利要求19的植物和/或根据权利要求20的植物可收获部分的产品。
22.编码权利要求1至6中任一项所定义AMT多肽的核酸序列在提高产量相关性状中的用途，所述提高的产量相关性状包括以下一种或多种：提高的早期活力、提高的地上部分生物量、提高的根生物量、提高的每株植物种子总产量、提高的种子饱满率、提高的饱满种子数和提高的收获指数。
CN200880117394.1A 2007-11-22 2008-11-21 具有增强的产量相关性状的植物及其生产方法 Expired - Fee Related CN101874116B (zh)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP07121362.3 2007-11-22
EP07121362 2007-11-22
US99013207P 2007-11-26 2007-11-26
US60/990,132 2007-11-26
PCT/EP2008/065947 WO2009065912A2 (en) 2007-11-22 2008-11-21 Plants having increased yield-related traits and a method for making the same

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201310734030.0A Division CN103773795A (zh) 2007-11-22 2008-11-21 具有增强的产量相关性状的植物及其生产方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN101874116A true CN101874116A (zh) 2010-10-27
CN101874116B CN101874116B (zh) 2014-02-26

Family

ID=40578017

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201310734030.0A Pending CN103773795A (zh) 2007-11-22 2008-11-21 具有增强的产量相关性状的植物及其生产方法
CN200880117394.1A Expired - Fee Related CN101874116B (zh) 2007-11-22 2008-11-21 具有增强的产量相关性状的植物及其生产方法

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201310734030.0A Pending CN103773795A (zh) 2007-11-22 2008-11-21 具有增强的产量相关性状的植物及其生产方法

Country Status (10)

Country Link
US (1) US8704043B2 (zh)
EP (1) EP2225378B1 (zh)
CN (2) CN103773795A (zh)
AR (1) AR069410A1 (zh)
AU (1) AU2008327899B2 (zh)
BR (1) BRPI0819286A2 (zh)
CA (1) CA2706506A1 (zh)
ES (1) ES2423209T3 (zh)
MX (1) MX2010004699A (zh)
WO (1) WO2009065912A2 (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103087167A (zh) * 2013-01-09 2013-05-08 中国农业科学院生物技术研究所 来源于硅藻的与植物氮利用和生长相关的蛋白质及其编码基因与应用

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101969759A (zh) * 2007-12-20 2011-02-09 巴斯夫植物科学有限公司 具有增强的产量相关性状的植物及其制备方法
BR112012018108A2 (pt) 2010-01-22 2015-10-20 Bayer Ip Gmbh combinações acaricidas e/ou inseticidas de ingredientes ativos
DE112011102151T5 (de) * 2010-06-25 2013-07-11 Basf Plant Science Company Gmbh Pflanzen mit gesteigerten Ertragsmerkmalen und Verfahren zu deren Herstellung
US9265252B2 (en) 2011-08-10 2016-02-23 Bayer Intellectual Property Gmbh Active compound combinations comprising specific tetramic acid derivatives

Family Cites Families (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1989012102A1 (en) 1988-06-01 1989-12-14 The Texas A&M University System Method for transforming plants via the shoot apex
WO1993022443A1 (en) 1992-04-24 1993-11-11 Sri International In vivo homologous sequence targeting in eukaryotic cells
DE4337597C2 (de) 1993-10-28 2002-07-18 Aventis Cropscience Gmbh DNA-Sequenzen für Ammoniumtransporter, Plasmide, Bakterien, Hefen, Pflanzenzellen und Pflanzen enthaltend den Transporter
DE69425903T2 (de) 1993-12-09 2001-02-15 Thomas Jefferson University Ph Verbindungen und verfahren zur ortsspezifischen mutation in eukaryotischen zellen
US6395547B1 (en) 1994-02-17 2002-05-28 Maxygen, Inc. Methods for generating polynucleotides having desired characteristics by iterative selection and recombination
US5605793A (en) 1994-02-17 1997-02-25 Affymax Technologies N.V. Methods for in vitro recombination
GB9703146D0 (en) 1997-02-14 1997-04-02 Innes John Centre Innov Ltd Methods and means for gene silencing in transgenic plants
GB9720148D0 (en) 1997-09-22 1997-11-26 Innes John Centre Innov Ltd Gene silencing materials and methods
US6833492B2 (en) 1998-08-28 2004-12-21 E. I. Du Pont De Nemours And Company Nitrogen transport metabolism
US6555732B1 (en) 1998-09-14 2003-04-29 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Rac-like genes and methods of use
WO2001006844A1 (fr) 1999-07-22 2001-02-01 Japan As Represented By Director General Of National Institute Of Agrobiological Resources Ministry Of Agriculture, Forestry And Fisheries Procede de transformation ultrarapide de monocotyledon
CA2875402C (en) * 2004-12-21 2021-09-28 Monsanto Technology Llc Transgenic plants with enhanced agronomic traits
US20080148432A1 (en) * 2005-12-21 2008-06-19 Mark Scott Abad Transgenic plants with enhanced agronomic traits
AU2006204997B2 (en) * 2005-01-12 2011-09-01 Monsanto Technology, Llc Genes and uses for plant improvement

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103087167A (zh) * 2013-01-09 2013-05-08 中国农业科学院生物技术研究所 来源于硅藻的与植物氮利用和生长相关的蛋白质及其编码基因与应用

Also Published As

Publication number Publication date
WO2009065912A2 (en) 2009-05-28
CN101874116B (zh) 2014-02-26
AR069410A1 (es) 2010-01-20
MX2010004699A (es) 2010-05-14
BRPI0819286A2 (pt) 2014-10-07
US20110004963A1 (en) 2011-01-06
US8704043B2 (en) 2014-04-22
EP2225378B1 (en) 2013-05-08
CA2706506A1 (en) 2009-05-28
AU2008327899B2 (en) 2014-04-03
AU2008327899A1 (en) 2009-05-28
EP2225378A2 (en) 2010-09-08
ES2423209T3 (es) 2013-09-18
CN103773795A (zh) 2014-05-07
WO2009065912A3 (en) 2009-09-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102676575B (zh) 具有增强的产量相关性状的植物和用于产生该植物的方法
CN101868544B (zh) 具有提高的产量相关性状的植物和用于制备该植物的方法
CN101627125B (zh) 具有增强的产量相关性状的植物及其制备方法
CN101981195B (zh) 产量相关性状增强的植物及其制备方法
CN102066568A (zh) 具有增强的产量相关性状的植物和用于产生该植物的方法
CN101855355A (zh) 具有提高的产量相关性状的植物和用于制备该植物的方法
CN102143971A (zh) 通过过表达编码tfl-1 样蛋白的多核苷酸而具有增强的产量相关性状的植物及其制备方法
CN102224247A (zh) 具有改良的产量相关性状的植物和用于制备该植物的方法
CN103103199A (zh) 具有增强的产量相关性状的伸展蛋白受体样激酶受调节表达的植物和用于产生该植物的方法
CN102936605A (zh) 具有增强的产量相关性状的植物和用于制备该植物的方法
CN103249836A (zh) 具有增强的产量相关性状的植物和用于产生该植物的方法
CN102186877A (zh) 具有增强的产量相关性状的植物和用于产生该植物的方法
CN104789573A (zh) 具有增强的产量相关性状的植物及其制备方法
CN101688214A (zh) 具有增强的产量相关性状的植物和用于产生该植物的方法
CN101849009A (zh) 具有增强的产率相关性状的植物及其制备方法
CN105087634A (zh) 具有增强的产量相关性状的nac转录因子受调节表达的植物和用于产生该植物的方法
CN101765609A (zh) 具有增强的产量相关性状的植物和用于制备该植物的方法
CN103397049A (zh) 具有增强的产量相关性状的植物及其制备方法
CN102099480A (zh) 具有增强的产量相关性状的植物和用于产生该植物的方法
CN103502456A (zh) 具有增强的产量相关性状的植物和用于制备该植物的方法
CN104328137A (zh) 具有增强的非生物胁迫耐受性和/或增强的产量相关性状的植物及其制备方法
CN102272309A (zh) 具有增强的非生物胁迫耐受性和/或增强的产量相关性状的植物及其制备方法
CN103154254A (zh) 具有增强的产量相关性状的植物和产生该植物的方法
CN103068992A (zh) 具有增强的产量相关性状的植物和用于制备该植物的方法
CN103003432A (zh) 具有增强的产量相关性状的植物和用于产生该植物的方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20140226

Termination date: 20161121