CN115093976B

CN115093976B - 一株白玉菇ZHSjg-byg及其栽培方法

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Publication number: CN115093976B
Application number: CN202210735196.3A
Authority: CN
Inventors: 姚强; 宫志远; 张元祺; 黄春燕; 司洪宇; 韩建东; 梁晓辉; 杨鹏; 常猛; 李瑾; 李兆荣; 谢红艳; 张广龙; 谢业水; 常召航
Original assignee: Jining Hongxin Agricultural Technology Co ltd; Jining Lima Fungus Co ltd; Shandong Changshengyuan Biotechnology Co ltd; Shandong Fuyou Fungus Co ltd; Shandong Academy of Agricultural Sciences; Energy Research Institute of Shandong Academy of Sciences
Current assignee: Jining Hongxin Agricultural Technology Co ltd; Jining Lima Fungus Co ltd; Shandong Changshengyuan Biotechnology Co ltd; Shandong Fuyou Fungus Co ltd; Shandong Academy of Agricultural Sciences; Energy Research Institute of Shandong Academy of Sciences
Priority date: 2022-06-27
Filing date: 2022-06-27
Publication date: 2023-05-09
Anticipated expiration: 2042-06-27
Also published as: CN115093976A

Abstract

本发明涉及一株白玉菇ZHSjg‑byg及其栽培方法，属于食用菌栽培技术领域。本发明利用化学试剂N‑甲基‑N’‑硝基‑N‑亚硝基胍(NTG)诱变方式首次获得一株白玉菇(Hypsizygusmarmoreus)ZHSjg‑byg，2019年08月30日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.18158。该菌株较原始白玉菇菌株，菌瓶内无黄斑出现，吃料及菌丝爬壁效果良好，生产周期缩短，性状表现俱佳，具有较强的抗绿色木霉和链孢霉的能力，且具有基因遗传稳定性；较现有已知白玉菇具有更好的商品性和更高的产量。

Description

一株白玉菇ZHSjg-byg及其栽培方法

技术领域

本发明涉及一株白玉菇ZHSjg-byg及其栽培方法，属于食用菌栽培技术领域。

背景技术

白玉菇别称白雪菇、白色蟹味菇、白色真姬菇、白玉蕈，属于伞菌目，口蘑科、白蘑属，是一种珍稀的食用菌。白玉菇菇体洁白如玉，晶莹剔透；质地细腻，菇体脆嫩鲜滑，清甜可口。

白玉菇含蛋白质较一般蔬菜高，必需氨基酸比例合适，还有多种微量元素等人体必需物质，为起到良好的保健作用应长期食用。白玉菇有镇痛、镇静、止咳化痰、通便排毒、降压等功效，其营养丰富，含有大量多糖和各种维生素，经常食用会改善人体的新陈代谢，降低胆固醇含量，白玉菇的有效成分可增强T淋巴细胞功能，从而提高机体抵御各种疾病的免疫力。有研究从白玉菇中提取到一种物质具有镇痛、镇静的功效，其镇痛效果可代替吗啡。白玉菇提取液用于动物实验，发现其有明显的镇咳、稀化痰液的作用。白玉菇鲜品价值高达30至40元，被誉为食用菌中的"金枝玉叶"，具有广阔的栽培前景和市场潜力。

菇体形态：子实体丛生，每丛15～50株不等，少散生。菌盖幼时半球形，深褐色，后渐平展，色泽变淡，呈黄褐色；中部色深，茶褐色；盖面平滑，有2～3圈斑纹；盖缘平或微下弯，稍波状；菌盖直径1.5～2.0厘米；菌肉白色，质韧而脆，致密。菌褶白色至浅黄色，弯生，有时略直生，密，不等长，离生。菌柄中生，圆柱形，长3～12厘米，幼时下部明显膨大，白色至灰白色，粗0.5～3.5厘米，上细下粗，充分生长时上下粗细几乎相同，多数稍弯曲，有黄褐色条纹，中实，老熟时内部松软。担孢子无色，平滑，球形，孢子印白色。分生孢子白色，培养条件不适宜时出现在气生菌丝末端。

菌丝特征：白玉菇菌丝生长旺盛，发菌较快，黑褐色品系抗杂菌能力强，白色品系抗病虫害能力较弱。成熟的老菌丝能够分泌黄色液滴，形成菌皮。斜面培养基上菌丝浓白色，气生菌丝旺盛，爬壁能力强，老熟后呈浅土灰色。培养条件适宜，菌丝7～10天长满试管斜面；条件不适宜时，不易形成子实体。

发育过程：白玉菇是典型的异宗结合食用菌，担孢子在适宜条件下萌发为单核菌丝，和亲合的单核菌丝融合，原生质交配形成双核菌丝，适宜条件下双核菌丝扭结形成原基，进而发育成成熟子实体。根据子实体不同发育阶段的形态特征，可人为地将其分为转色期、菇蕾期、显白期、成盖期、伸展期和成熟期。

转色期：白玉菇菌丝体长满培养容器达生理成熟后才具有结实能力，此时容器中的菌块由纯白色转为灰色。子实体分化前，先在培养料表面出现一薄层瓦灰色或土灰色短绒，因此称转色期。适宜条件下此期历时3～4天。

菇蕾期：培养料面转色后3～4天，短绒层菌丝开始扭结形成疣状凸起，进而发育成瓦灰色针头状菇蕾。在适宜条件下培养2～3天，长至0.5～1厘米时便进入显白期。

显白期：随着菇蕾的生长，在其尖端出现一个小白点，逐渐长大成直径1～3毫米的圆形白色平面，此为初生菌盖。这个阶段称为显白期。

成盖期：初生菌盖经2～3天的生长发育，白色平面开始凸起，颜色开始转深。3～4天后形成完整的菌盖，此时菌盖直径3～5毫米，深赭红色，边缘常密布小水珠，盖顶端开始出现网状斑纹，菌柄开始伸长、增粗。

伸展期：子实体菌盖形成后，生长速度加快，菌盖迅速平展、加厚，盖色变浅，菌柄迅速伸长、加粗。

目前市场上白玉菇栽培模式的缺点是栽培周期长，产量一般，多采用的解决方式是优化培养基和培养方式，或者寻找新的具有优势的白玉菇菌种。

N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍(NTG)用于诱变育种，是公认的效果显著的化学超诱变剂，结构式为：

通过基因重组、诱导突变相结合的方式，获得各种不同类型的菌株，为选择优势白玉菇菌种提供丰富的材料。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供了一株白玉菇ZHSjg-byg及其栽培方法。白玉菇ZHSjg-byg通过化学诱变的方式筛选获得，性状优良，实现了高产质优的目的，并适宜多种栽培模式生产。

本发明技术方案如下：

一株白玉菇(Hypsizygusmarmoreus)ZHSjg-byg，2019年08月30日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3楼中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCC No.18158。

根据本发明优选的，所述白玉菇ZHSjg-byg的ITS序列如SEQ ID NO.1所示。

上述白玉菇ZHSjg-byg菌液的制备方法，包括如下步骤：

(1)将白玉菇ZHSjg-byg进行脱毒处理，制得脱毒后菌体；

(2)将步骤(1)制得的脱毒后菌体接入液体菌种培养基中，在23±1℃、150～200r/min的条件下，摇床培养7～10天，制得白玉菇ZHSjg-byg菌液。

根据本发明优选的，步骤(1)中所述脱毒采用断桥脱毒法。

进一步优选的，所述脱毒步骤如下：

将试管斜面培养基前端3cm处用接种耙截断并留1cm空白区域，接入白玉菇ZHSjg-byg菌丝体，23±1℃避光条件下培养，直到菌丝越过空白区域长满截断块培养基，取截断块培养基的菌丝体接种至相同处理过的空白试管斜面培养基中，反复处理3～4次。

上述脱毒的目的是脱去白玉菇所携带的病原菌。

根据本发明优选的，步骤(2)中所述液体菌种培养基的组份如下，均为重量百分比：

白砂糖0.3％、玉米粉0.3％，磷酸二氢钾0.05％、硫酸镁0.05％，溶剂水。

上述白玉菇ZHSjg-byg的栽培方法，步骤如下：

(i)将白玉菇栽培培养基配制好后装瓶，830-850g/瓶，灭菌，冷却，制得菌瓶；

(ii)向步骤(i)制得的菌瓶中接种上述白玉菇ZHSjg-byg菌液，接种量为15～20mL/瓶，在温度18±1℃、湿度65～70％的条件下，待菌丝长满瓶后继续进行菌丝后熟培养，85～90d后进行开瓶搔菌，搔菌后注水；

(iii)将步骤(ii)注水后的菌瓶移入出菇房进行出菇培养，出菇房温度调整至10±1℃，低温刺激菇蕾形成，待菇柄长至瓶口1cm时，将出菇房温度调至15±1℃，每日补光，200lux光照3～4h，菇房相对湿度保持90～95％，通风；待菇柄长至6～8cm、菇盖直径长至2～4cm且未开伞时即可采收。

根据本发明优选的，步骤(i)中所述栽培培养基的原料组份如下，均为重量百分比：

玉米芯30％、棉籽壳20％、豆秸10％、麸皮16％、啤酒糟5％、米糠5％、甜菜渣10％、豆粕2％、贝壳粉2％；

所述栽培培养基按照所述组份搅拌均匀后，加水至含水量为64～66％，调节pH至6.5～7.0后装瓶。

根据本发明优选的，步骤(i)中所述灭菌条件为121℃、0.13MPa，灭菌4h。

根据本发明优选的，步骤(i)中所述冷却的温度为15～25℃。

根据本发明优选的，步骤(ii)中所述注水的注水量15～20mL/瓶。

有益效果：

本发明利用化学试剂N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍(NTG)诱变方式首次获得一株白玉菇(Hypsizygusmarmoreus)ZHSjg-byg，该菌株较原始白玉菇菌株，菌瓶内无黄斑出现，吃料及菌丝爬壁效果良好，生产周期缩短，性状表现俱佳，具有较强的抗绿色木霉和链孢霉的能力，且具有基因遗传稳定性；较现有已知白玉菇具有更好的商品性和更高的产量。

附图说明

图1为白玉菇ZHSjg-byg和原始白玉菇的拮抗对峙实验照片；其中，左边为原始白玉菇，右边为白玉菇ZHSjg-byg。

图2为白玉菇ZHSjg-byg的菌瓶培养照片。

图3为白玉菇ZHSjg-byg的出菇照片。

图4为原始白玉菇的出菇照片。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明的技术方案做进一步阐述，但本发明所要求保护的范围不限于此，任何在本实验技术的基础上做出的修改或等效替代均属于本发明的保护范围。

菌种来源：

原始白玉菇(Hypsizygusmarmoreus)：由野外采集分离获得。

白玉菇(Hypsizygusmarmoreus)ZHSjg-byg，2019年08月30日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3楼中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCC No.18158。

PDA固体培养基组份如下：

马铃薯200g，木屑(用两层纱布包裹，同马铃薯一起煮汁)50g，葡萄糖20g，琼脂20g，水定容至1L。

实施例1：

白玉菇ZHSjg-byg，采用如下方法筛选获得：

(1)选取自然成熟的性状优良的原始白玉菇子实体，无菌环境下用孢子印法收取孢子，10h后将收集的孢子转入无菌水中并稀释10⁵倍，用接种环蘸取孢子液涂于PDA固体培养基平板中，密封，放置于23±1℃环境下避光培养；待菌丝长至3～6mm时，于独立菌落挑取一小块菌丝置于PDA固体培养基平板中央位置，25℃单独培养，选取5～8个菌丝生长最旺盛的菌落，待菌丝即将长满平板，对各菌落进行镜检，挑出单核体菌丝；

(2)将直径为2mm的N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍(NTG)结晶放置于PDA固体培养基平板的中心部位；选取20个单核菌丝体交互配对，接种于放置有NTG结晶的PDA固体培养基平板中，与NTG结晶的距离为30mm，25℃恒温避光培养；分别于第5、10、15天检测菌丝两端生长距离，生长速度≥4.5mm/d的菌丝进行镜检，其余淘汰，镜检后有锁状联合的菌落，选取紧靠NTG外围的菌丝进行移植扩繁培养；

(3)脱毒处理：将试管斜面PDA固体培养基前端3cm处用接种耙截断并留1cm空白区域，正常接入步骤(2)选取的白玉菇菌丝体，23±1℃避光条件下培养，直到菌丝越过空白区域长满截断块培养基，取截断块培养基的菌丝体接种至相同处理过的空白试管斜面PDA固体培养基中，如此反复处理4次，从而脱去白玉菇所携带病原菌；

(4)将步骤(3)脱毒后的菌丝体接入配置好的液体菌种培养基中，在23±1℃、190r/min的条件下，摇床培养8天，接入到栽培培养基中；

所述液体菌种培养基，组份如下，均为重量百分比：

白砂糖0.3％、玉米粉0.3％，磷酸二氢钾0.05％、硫酸镁0.05％，溶剂水；

所述栽培培养基，原料组份如下，均为重量百分比：

玉米芯30％、棉籽壳20％、豆秸10％、麸皮16％、啤酒糟5％、米糠5％、甜菜渣10％、豆粕2％、贝壳粉2％；所述栽培培养基按照以上组份搅拌均匀后，加水至含水量为65％，调节pH至6.5；

(5)待栽培培养基中的菌丝生长活力旺盛，在无菌环境下，机械接入已灭菌制备好的白玉菇菌瓶中，进行发菌、出菇培养。

检测出菇产量、性状、培养周期等情况并做好记录，最终筛选出一株菌株，菌瓶内无黄斑出现，吃料及菌丝爬壁效果良好，生产周期缩短5～7d，命名为ZHSjg-byg。

筛选菌株的验证及鉴定：

筛选菌株进行ITS序列分析鉴定，将测序结果进行拼接，除去两端不可信序列，利用Nucleotide BLAST进行序列比对，比对网址为http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi。

鉴定结果表明：本发明筛选出的菌株为真菌界、担子菌门Basidiomycota、伞菌纲Agaricomycetes、伞菌目Agaricales、离褶伞科Lyophyllaceac、玉蕈属、真姬菇Hypsizygusmarmoreus，其ITS序列如SEQ ID NO.1所示，与HypsizygusmarmoreusZJNKYY(NCBI ACCESSION：JX046031)的同源相似度达99.69％，且与原始白玉菇在ITS序列上没有较大差异，亲缘关系较近，但不能否认两者的子实体在外观、产量等农艺性状上有差异，甚至是显著差异，即品种间的差异。

白玉菇(Hypsizygusmarmoreus)ZHSjg-byg，于2019年08月30日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3楼中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCC No.18158。

实施例2：

白玉菇ZHSjg-byg菌液的制备方法，步骤如下：

(1)将试管斜面PDA固体培养基前端3cm处用接种耙截断并留1cm空白区域，接入白玉菇ZHSjg-byg菌丝体，23±1℃避光条件下培养，直到菌丝越过空白区域长满截断块培养基，取截断块培养基的菌丝体接种至相同处理过的空白试管斜面PDA固体培养基中，如此反复处理4次，从而脱去白玉菇ZHSjg-byg所携带病原菌，制得脱毒后的白玉菇ZHSjg-byg菌体；

(2)将步骤(1)制得的脱毒后的白玉菇ZHSjg-byg菌体接入液体菌种培养基中，在23±1℃、190r/min的条件下，摇床培养8天，制得白玉菇ZHSjg-byg菌液；

其中，液体菌种培养基，组份如下，均为重量百分比：

白玉菇ZHSjg-byg的栽培方法，步骤如下：

(i)将栽培培养基装入白玉菇菌瓶中，840g/瓶，中间打5孔后进行121℃、0.13MPa灭菌4h，冷却至温度为18～20℃，制得菌瓶；

其中，栽培培养基，原料组份如下，均为重量百分比：

玉米芯30％、棉籽壳20％、豆秸10％、麸皮16％、啤酒糟5％、米糠5％、甜菜渣10％、豆粕2％、贝壳粉2％；所述栽培培养基按照以上组份搅拌均匀后，加水至含水量为65％，调节pH至6.5后装瓶；

(ii)向步骤(i)制得的菌瓶内接种上述白玉菇ZHSjg-byg菌液，接种量为20mL/瓶，在温度18±1℃、湿度70％的条件下，待菌丝长满瓶后继续进行菌丝后熟培养，共计85～90d后进行开瓶搔菌，搔菌后注水，注水量15-20mL/瓶为宜；

(iii)将步骤(ii)注水后的菌瓶移入出菇房进行出菇培养，出菇房温度调整至10±1℃，低温刺激菇蕾形成，待菇柄长至瓶口1cm时，将出菇房温度调至15±1℃，每日补光，200lux光照3h，菇房相对湿度保持90～95％，适量通风；等菇柄长至6～8cm、菇盖直径长至2～4cm且未开伞时即可采收；最短出菇期栽培时间为24d。

对比例：

如实施例2所述的制备方法，不同之处在于，菌种采用原始白玉菇，最短出菇期栽培时间为26d。

实验例：

菌株拮抗实验：

以白玉菇ZHSjg-byg和原始白玉菇为实验材料，所用培养基PDA固体培养基；

白玉菇ZHSjg-byg和原始白玉菇在PDA固体培养基上分别进行对峙接种和培养，接种点相距3cm，25℃恒温培养15天。

结果分析：

培养结果如图1所示，在对峙培养菌落交界处，白玉菇ZHSjg-byg与原始白玉菇拮抗线明显，说明筛选出的白玉菇ZHSjg-byg与原始菌株已产生根本性差异，为新型白玉菇品种。

抗病性实验：

绿色木霉和链孢霉是白玉菇栽培过程中的主要病害。以白玉菇的致病菌绿色木霉和链孢霉为指示剂，进行对峙培养，通过观察菌落的生长和拮抗带的宽度来判断白玉菇ZHSjg-byg和原始白玉菇的抗病能力。

菌种活化：将白玉菇菌株和绿色木霉菌株分别放在PDA固体培养基中以25℃的温度进行活化培养，长满培养皿后作为备用。链孢霉在PDA固体培养基中以25℃的温度培养2天后作为备用。在菌种使用前，用直径0.5cm的打孔器制备菌饼。

抗绿色木霉能力测定方法：

使用直径90mm的定量培养皿，每皿用定量蠕动泵定量加入40mL PDA固体培养基凝固。相距中心2cm接入直径0.5cm的白玉菇菌饼，25℃培养4天后，在与白玉菇对峙、距离中心2cm处接入绿色木霉菌饼，25℃继续培养。观察测量拮抗线的宽度、菌落生长宽度，并且持续观察抑制带的颜色、大小变化。

抗链孢霉能力测定方法：

使用直径90mm的定量培养皿，每皿用定量蠕动泵定量加入40mL PDA固体培养基凝固。相距中心1.7cm接入直径0.5cm的白玉菇菌饼，在与白玉菇对峙、距离中心1.7cm处用接种环接入活化的链孢霉，25℃培养4天。观察测量拮抗线的宽度、菌落生长宽度。

菌株抗病情况结果如表1所示：

表1.白玉菇ZHSjg-byg和原始白玉菇抗绿色木霉和链孢霉特性

由以上数据可知，对峙于绿色木霉，白玉菇ZHSjg-byg拮抗线宽度为4.0mm，比原始白玉菇拮抗线宽度6.9mm要窄；对峙于链孢霉，白玉菇ZHSjg-byg拮抗线宽度为4.7mm，比原始白玉菇拮抗线宽度5.0mm也要窄；表明，白玉菇ZHSjg-byg的抗病性要优于原始白玉菇。

白玉菇ZHSjg-byg具有较强的抗绿色木霉和链孢霉的能力。白玉菇在工厂化栽培过程中，容易爆发细菌病害，出现烂菇病，而白玉菇ZHSjg-byg菌株抗细菌能力强，可以减轻病害，因此有广阔的应用前景。

栽培试验：

采用白玉菇ZHSjg-byg与原始白玉菇在白玉菇工厂化栽培企业进行栽培周期优选实验，白玉菇ZHSjg-byg与原始白玉菇各出菇2000瓶，对整个栽培周期、生物学转化率及产量进行对比：

栽培条件如下：

栽培培养基原料组份如下，均为质量百分比：玉米芯30％、棉籽壳20％、豆秸10％、麸皮16％、啤酒糟5％、米糠5％、甜菜渣10％、豆粕2％、贝壳粉2％。

拌料：按上述配方要求准确定量，使物料充分搅拌均匀，加水至含水量达到64～66％，pH至6.5-7.0。根据季节变化调整搅拌时间，防止栽培培养基混合料酸败，搅拌至装瓶结束。

装瓶：使用耐高温塑料瓶，要求装料紧实度均匀，1100mL塑料瓶栽培培养基装瓶量830-850g，中间打孔至瓶底，装瓶后立即盖上瓶盖。

灭菌：装瓶结束后立即进行高压灭菌。灭菌时间为塑料瓶栽培培养基混合料的中心温度必须达到118～121℃，并保持30分钟，必须彻底杀灭栽培培养基中的所有微生物及孢子。

接种：当栽培培养基温度降到25℃以下时接种。接种操作人员必须符合无菌操作的要求，接种时瓶内温度控制在25℃以下，并使用显微镜检，确保菌液无污染且活力旺盛方可用于接种栽培，每瓶的接种量为20mL菌液。菌液的制备方法按照实施例2中菌液的制备方法制得。

菌瓶培养：

培养室温度控制在18±1℃，湿度维持在70％，CO₂浓度控制在4000ppm以下；培养时间为85～90天。白玉菇ZHSjg-byg的培养菌瓶照片如图2，菌瓶内无黄斑出现，吃料及菌丝爬壁效果良好。

出菇管理：

(1)搔菌：培养成熟后，进行搔菌处理。采用专用搔菌刀头，搔菌后注水，每瓶注水量15-20mL。

(2)催蕾：室内控制温度为10±1℃，低温刺激菇蕾形成，湿度为90～95％，CO₂浓度2000ppm以内，光照强度50lux～100lux，适量通风；催蕾时间为8-10天。

(3)子实体生长：温度控制为14～17℃，湿度为90％以上，CO₂浓度为2000ppm以下，光照强度250～500lux，根据不同生长阶段，调整灯光开启时间；生长时间12-17天。

适时采收：菇柄长至6～8cm、菇盖直径长至2～4cm且未开伞时即可采收。

其中，白玉菇ZHSjg-byg的出菇照片如图3所示，原始白玉菇的出菇照片如图4所示；采收后进行相关统计分析，结果如表2所示：

表2.白玉菇ZHSjg-byg和原始白玉菇的在栽培出菇情况

由上表可知，白玉菇ZHSjg-byg的出菇情况与产量和综合评价均符合筛选要求，性状表现也超过原始白玉菇。与原始白玉菇对比可知，白玉菇ZHSjg-byg缩短了栽培周期；在工厂化栽培生产中，白玉菇ZHSjg-byg产量也有显著的差异，在相同的栽培出菇模式下，产量达到了较高水平，且综合评价为优秀；并且白玉菇ZHSjg-byg遗传稳定，长时间栽培，出菇产量及品质不退化。

SEQUENCE LISTING

<110> 山东省农业科学院

山东省科学院能源研究所

济宁鸿鑫农业科技有限公司

山东常生源生物科技股份有限公司

济宁利马菌业股份有限公司

山东福友菌业股份有限公司

<120> 一株白玉菇ZHSjg-byg及其栽培方法

<160> 1

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 663

<212> DNA

<213> 白玉菇（Hypsizygus marmoreus）ZHSjg-byg

<400> 1

tgcctaattt gataccttgt ttgggttgtt gctggctctt aggagcatgt gcacgcctga 60

cacattttta ccacctgtgc accctttgta gacctggaac acctctcgag gcaactcggt 120

ttgaggattg ccgctgctga aaagccggct ttccttgcgt tcccggtcta tgtctttata 180

taccccatga atgtaactga atgtctttaa tgggccttag tgcctttaaa tcaaatacaa 240

ctttcaacaa cggatctctt ggctctcgca tcgatgaaga acgcagcgaa atgcgataag 300

taatgtgaat tgcagaattc agtgaatcat cgaatctttg aacgcacctt gcgctccttg 360

gtattccgag gagcatgcct gtttgagtgt cattaaattc tcaacctttc cagcttttac 420

tagcttggtc aggcttggat gtgggggttg cgggcttctc agaagtcggc tctccttaaa 480

tgcattagcg gaacctttgt tgaccagctc tggtgtgata attatctacg ccattgtgaa 540

gcagctttaa taatggggtt cagcttctaa ccgtcccctt cacgggacaa ctctctgaca 600

ttttgacctc aaatcaggta ggattacccg ctgaacttaa gcatatcaaa aggcgggagg 660

gaa 663

Claims

1.一株白玉菇（Hypsizygusmarmoreus）ZHSjg-byg，2019年08月30日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3楼中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCC No.18158。

2.如权利要求1所述的白玉菇ZHSjg-byg，其特征在于，其ITS序列如SEQ ID NO.1所示。

3.权利要求1所述的白玉菇ZHSjg-byg菌液的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）将白玉菇ZHSjg-byg进行脱毒处理，制得脱毒后菌体；

（2）将步骤（1）制得的脱毒后菌体接入液体菌种培养基中，在23±1℃、150~200r/min的条件下，摇床培养7~10天，制得白玉菇ZHSjg-byg菌液。

4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中所述脱毒采用断桥脱毒法。

5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述脱毒步骤如下：

6.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）中所述液体菌种培养基的组份如下，均为重量百分比：

白砂糖0.3%、玉米粉0.3%，磷酸二氢钾0.05%、硫酸镁0.05%，溶剂水。

7.权利要求1所述的白玉菇ZHSjg-byg的栽培方法，其特征在于，步骤如下：

（i）将白玉菇栽培培养基配制好后装瓶，830-850g/瓶，灭菌，冷却，制得菌瓶；

（ii）向步骤（i）制得的菌瓶中接种白玉菇ZHSjg-byg菌液，接种量为15~20mL/瓶，在温度18±1℃、湿度65~70%的条件下，待菌丝长满瓶后继续进行菌丝后熟培养，85～90 d后进行开瓶搔菌，搔菌后注水；

（iii）将步骤（ii）注水后的菌瓶移入出菇房进行出菇培养，出菇房温度调整至10±1℃，低温刺激菇蕾形成，待菇柄长至瓶口1 cm时，将出菇房温度调至15±1℃，每日补光，200lux光照3~4 h，菇房相对湿度保持90～95%，通风；待菇柄长至6～8 cm、菇盖直径长至2～4cm且未开伞时即可采收。

8.如权利要求7所述的栽培方法，其特征在于，步骤（i）中所述栽培培养基的原料组份如下，均为重量百分比：

玉米芯30%、棉籽壳20%、豆秸10%、麸皮16%、啤酒糟5%、米糠5%、甜菜渣10%、豆粕2%、贝壳粉2%；

所述栽培培养基按照所述组份搅拌均匀后，加水至含水量为64~66%，调节pH至6.5~7.0后装瓶。

9.如权利要求7所述的栽培方法，其特征在于，步骤（i）中所述灭菌条件为121℃、0.13MPa，灭菌4h。

10.如权利要求7所述的栽培方法，其特征在于，步骤（i）中所述冷却的温度为15～25℃。

11.如权利要求7所述的栽培方法，其特征在于，步骤（ii）中所述注水的注水量15~20mL/瓶。