CN106676016B

CN106676016B - 高产葡聚糖的棕色真姬菇菌株及其栽培方法和应用

Info

Publication number: CN106676016B
Application number: CN201611246200.0A
Authority: CN
Inventors: 韩成玲; 吴惠敏; 张文宏
Original assignee: Hebei Fengke Biotechnology Co ltd; Qingdao Fengke Biotechnology Co ltd; SHANGHAI FINC BIO-TECH Inc
Current assignee: Hebei Fengke Biotechnology Co ltd; Qingdao Fengke Biotechnology Co ltd; SHANGHAI FINC BIO-TECH Inc
Priority date: 2016-12-29
Filing date: 2016-12-29
Publication date: 2019-04-05
Anticipated expiration: 2036-12-29
Also published as: CN106676016A

Abstract

本发明公开了一种高产葡聚糖的棕色真姬菇菌株及其栽培方法和其应用，所述高产葡聚糖的棕色真姬菇菌Finc‑B‑7株，以干基计，子实体中葡聚糖含量为5～10％。本发明提供的棕色真姬菇菌株Finc‑B‑7，葡聚糖含量以干基计，子实体中葡聚糖含量为5～10％，子实体培养和栽培周期短，单产高，大大提高了生产效率，降低了生产成本；单株之间以及单株内单根子实体之间的外观均一度高，有利于机械化和自动化作业；菌盖花纹非常清晰，外观精美，商品性状好，保鲜期长，有利于存储，菌株综合特性优良，可以作为重要亲本从而培育出更多性能优良的菌株，非常适合于大面积推广种植，市场前景广阔。

Description

高产葡聚糖的棕色真姬菇菌株及其栽培方法和应用

技术领域

本发明涉及一种真姬菇菌株。

背景技术

斑玉蕈，中文别名真姬菇(拉丁文名称Hypsizygus marmoreus)，隶属担子菌亚门、层菌纲、伞菌目、白蘑科、离褶菌族、玉蕈属，因它具有独特的蟹鲜味，故又称它为蟹味菇。目前栽培的有棕色和纯白色两个品系，深受市场欢迎。

最初的人工栽培于1978年前后开始于日本，其味道鲜美、食感脆嫩、营养丰富，其味比平菇鲜，其肉比滑菇厚,其质比香菇韧，口感甚佳，其干品还香味浓溢。真姬菇含有丰富维生素和17种氨基酸，子实体中提取的β-1，3-D葡聚糖具有很高的抗肿瘤活性，是一种低热量、低脂肪的保健食品，未来具有广阔的市场前景。

所述的β-葡聚糖，长久以来一直被认为是免疫系统中的非特定刺激物，通常会引起巨噬细胞活化。在过去的二十年中，β-葡聚糖刺激人类身体免疫系统的作用已被证实。1991年，Czop and coworkers鉴定出β-(1,3)-D-葡聚糖系列中的低聚糖，是特定的巨噬细胞表面受体。β葡聚糖是在微生物、蘑菇和植物中广泛存在的一种多糖，它是组成高等植物、酵母菌和真菌细胞壁的结构大分子之一。现有的真姬菇品种虽然可以工厂化成产，但是其葡聚糖含量仍然相对较低，一般仅为4％以下。

发明内容

本发明的目的是公开一种高产葡聚糖的棕色真姬菇菌株及其栽培方法和应用，以克服现有技术存在的葡聚糖含量较低的缺陷。

本发明提供的棕色真姬菇菌株名称Finc-B-7，属于真姬菇(Hypsizygusmarmoreus)，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路 1号院3号，保藏编号为CGMCC No.13193，保藏日期为2016年11月28日。

所述棕色真姬菇菌株Finc-B-7以Finc-B-3为亲本，通过多孢自交，再经选育获得。

所述多孢自交是指从一个亲本的孢子中培养分离出的两个以上的单核体在同一培养面上彼此之间相隔一定距离(一般在2-3cm)进行培养，从中分离筛选的出新菌株的方法。

所述的Finc-B-3菌株是上海丰科生物科技股份有限公司培育菌株,保藏于中国典型培养物保藏中心，Finc-B-3菌株保藏编号CGMCC No.11204 。

进一步，本发明还涉及培养所述棕色真姬菇菌株Finc-B-7得到的孢子、菌丝体或子实体；

进一步，本发明还涉及所述棕色真姬菇菌株Finc-B-7作为亲本，在育种中的应用；

进一步的，所述育种方法包括单孢自交、单孢杂交、多孢自交或多孢杂交育种；

本发明还提供了所述棕色真姬菇菌株Finc-B-7的子实体的栽培方法，包括如下步骤：先培养原种，然后再栽培子实体。

所述的培养原种的方法，包括如下步骤：

将所述棕色真姬菇菌株Finc-B-7的母种接入原种培养基，18～23℃，空气相对湿度 65～75％，二氧化碳浓度2000～4000ppm的条件下，培养28～35天，获得原种。

所述原种培养基，包括重量百分比含量为38-40％的原种培养料和余量的水；

所述原种培养料按重量百分比计包括：

杂木屑60-65％

米糠18-23％

麸皮7-10％

玉米粉7-10％

所述栽培子实体的方法，包括如下步骤：

(1)接种与发菌：将所述棕色真姬菇菌株Finc-B-7的原种接入栽培培养基，18～23℃，空气相对湿度65～75％，二氧化碳浓度2000～4000ppm的条件下，培养70-85 天；

(2)出菇：将步骤(1)发好菌的栽培瓶进行出菇管理，温度13℃～15℃，空气相对湿度93％～100％，二氧化碳浓度1000～2000ppm的条件下，前3～5天黑暗，然后开始光照，光照强度为50～100Lux，至第13～15天起，光照强度为200～300Lux；

所述栽培培养基，包括重量百分比含量为34-36％的栽培培养料和余量的水；

所述栽培培养料，包括如下重量百分比的组分：

优选的，在开始光照时，进行间隙式光照，刺激出菇，总共20～22天，获得菇盖成熟的子实体；

具体的，所述的进行间隙式光照的方法，包括如下步骤：

在开始光照时，光照1.5～2.5小时，黑暗4～6分钟，依次循环交替给光；

至第13～15天起，光照35～60分钟，优选45分钟，黑暗10～20分钟，优选15分钟，依次交替给光；

采用上述方法，获得的所述棕色真姬菇菌株Finc-B-7的子实体，含有蛋白质，葡聚糖，氨基酸等营养物质，可作为食品，或者应用于食品，化妆品及其保健品中，或者将子实体做成菌菇干、菌菇粉、油炸菌菇、调味料等。

本发明所述棕色真姬菇菌株Finc-B-7，具有如下性质：

1.形态特征：

菌盖：直径为1.8±0.5cm，斑纹颜色为(PANTONE 7504C)，菌盖边缘颜色为(PANTONE 466U)，断面呈圆山型，斑纹十分清晰，主要分布在菌盖中央,中央斑纹大，边缘小，菌盖边缘可见竖状分布的环纹，环纹颜色为(PANTONE 465U)；宽度3±2mm，菌盖边缘圆整，表面无龟裂，质地脆嫩；

菌褶：颜色(RAL 9003)、排列方式笔直排列；孢子印颜色为(RAL 9010)；

菌柄：长度为8±2cm，颜色为(RAL 9003)，中粗1.0±0.5cm，与菌盖连接方式为中生，菌柄簇生。

颜色标准参照PANTONE国际色卡，RAL色卡作为颜色描述标准，

其中PANTONE国际色卡购自上海喷通文化用品有限公司

RAL色卡来源于网络

http://wenku.baidu.com/link？url＝3WTaqOT96m5depJKlEyCB7Hv1agPwn-ws2ZRAo8v itviBDTMYuh8r_osLztD5Pl7y26w_lASDdEADz8QD91aRQWgrV88kp4nl23RhQZ2iwC；

2.在各种培养基上的特征：

将所述棕色真姬菇菌株Finc-B-7的栽培种接入以下培养基，温度23℃，空气相对湿度75％，二氧化碳浓度4000ppm条件下培养80天；之后搔菌，并置于生育房进行出菇，温度13℃，空气相对湿度100％，二氧化碳浓度2000ppm，前4天黑暗，后5～13 天光照强度100Lux，第14天起光照强度300Lux；分别于搔菌后第6天，第14天，第 21天观察。

优选的，第5天起开始每天间隙式进行光照刺激出菇，所述的间隙式进行光照的方法，包括如下步骤：

第5～13天，光照2小时，黑暗5分钟，依次交替给光

第14天开始，光照45分钟，黑暗15分钟，依次交替给光

颜色标准参照PANTONE国际色卡，RAL色卡作为颜色描述标准。

(1)培养基A：

结果如下：

第6天：料面出现针尖状原基，原基颜色(RAL 1013)

第14天：分化出菌盖，颜色(PANTONE 410C)，菇盖表面中央位置可见真姬菇特有的大理石状斑纹，斑纹颜色(PANTONE 411C)；子实体高度约1-3cm，菌柄颜色(RAL 9003)。

第21天：子实体成熟，直径为1.8±0.5cm，斑纹颜色为(PANTONE 7504C)，菌盖边缘颜色为(PANTONE 466U)，断面呈圆山型，斑纹十分清晰，主要分布在菌盖中央,中央斑纹大，边缘小，菌盖边缘可见竖状分布的环纹，环纹颜色为(PANTONE 465U)；宽度1-5mm，菌盖边缘圆整，表面无龟裂，质地脆嫩；菌柄长度为6-10cm，中粗(0.5-1.5cm)， (RAL 9003)，与菌盖连接方式为中生，菌柄簇生。

(2)培养基B：

结果如下：

第6天：料面出现针尖状原基，原基颜色(RAL 1013)

第21天：子实体成熟，直径为1.7±0.5cm，斑纹颜色为(PANTONE 7504C)，菌盖边缘颜色为(PANTONE 466U)，断面呈圆山型，斑纹十分清晰，主要分布在菌盖中央,中央斑纹大，边缘小，菌盖边缘可见竖状分布的环纹，环纹颜色为(PANTONE 465U)；宽度1～5mm，菌盖边缘圆整，表面无龟裂，质地脆嫩；菌柄长度为5～9cm，中粗(0.4～ 1.2cm)，颜色(RAL 9003)，与菌盖连接方式为中生，菌柄簇生。

由此可见，Finc-B-7菌株在不同的培养基中栽培表现一致，具有良好的稳定性和重复性。

3.生物学特征：

菌丝体培养温度18℃～23℃，湿度65～75％，CO2浓度2000ppm～4000ppm，培养周期65d～80d。适宜出菇温度为13℃～15℃，湿度93％～100％，CO2浓度1000～ 2000ppm，前6天光照强度50～100Lux，之后光照强度100～300Lux，每天间隙式开启层架灯刺激出菇，栽培周期约21～22d。

色素分泌：

将Finc-B-7菌丝接种在PDA培养基中，23℃下培养12天，之后在同样的温度条件下光照(200Lux)24～72小时，背面观察，培养基呈红褐色。

根据《中国大型真菌》(卯晓岚主编，河南科学技术出版社，2000年出版)第158 页关于斑玉蕈的照片及相应特征描述，Finc-B-7属于斑玉蕈，中文别名真姬菇(拉丁文名称Hypsizygus marmoreus)，隶属担子菌亚门、层菌纲、伞菌目、白蘑科、离褶菌族、玉蕈属。

但是，该菌株与现有真姬菇菌株相比具有明显区别，其主要不同点在于：

(1)菌盖斑纹十分清晰，主要分布在菌盖中央，斑纹颜色为(PANTONE 7504C)，菌盖边缘颜色为(PANTONE 466U)，菌盖边缘有竖状分布的环纹，环纹宽度1～5mm,环纹颜色为(PANTONE 465U)，菌丝体长满平板后，经过光照可分泌色素，菌柄颜色为(RAL 9003)，菌柄中粗(0.4～1.5cm)。

(2)以干基计，子实体中葡聚糖含量为5～10％，优选的，子实体中葡聚糖含量为 6～9％；

所述的葡聚糖为：β-1,3-D葡聚糖；

术语“β-1,3-D葡聚糖”的化学结构和理化性能，在以下文献中有详细的记载；

王京杭，王强，徐兵.β-1,3-葡聚糖的结构与功能《国外医学(分子生物学分册)》1997年04期；

葡聚糖含量的检测采用苯酚-硫酸法，“苯酚-硫酸法”，在以下文献中有详细记载：

邓胜国，邓泽元.燕麦麸中β-葡聚糖的提取、测定及其在面条种的应用[J].食品科学， 2004，11(25)：204-206.

具体的，子实体中，葡聚糖含量的检测方法如下：

Finc-B-7新鲜子实体采收后，采用红外水分测定仪FD-610进行检测含水量；

然后采用苯酚-硫酸法检测葡聚糖含量；

根据下式计算葡聚糖含量：葡聚糖含量％＝g/(G-G1)×100；

其中：

g为采用苯酚-硫酸法检测到的葡聚糖质量；

G为样品子实体质量；

G1为采用红外水分测定仪FD-610检测到的水的质量；

与现有技术相比，本发明提供的棕色真姬菇菌株Finc-B-7具有以下优点：

(1)葡聚糖含量非常高，以干基计，子实体中葡聚糖含量为5～10％；

(2)子实体培养和栽培周期短，单产高，大大提高了生产效率，降低了生产成本；

(3)单株之间以及单株内单根子实体之间的外观均一度高，有利于机械化和自动化作业；

(4)菌盖花纹非常清晰，外观精美，商品性状好；

(5)保鲜期长，有利于存储

(6)目前棕色真姬菇种植资源稀缺，本发明提供的菌株综合特性优良，可以作为重要亲本从而培育出更多性能优良的菌株，丰富真姬菇种类。

综上所述，本发明提供的技术方案，获得的新菌株子实体中葡聚糖含量高，栽培周期短，出菇时间较为集中，单产高，朵型优美，保鲜期长，非常适合于大面积推广种植，市场前景广阔。

附图说明

图1是实施例2中棕色真姬菇菌株Finc-B-7和Finc-B-3的拮抗试验正面图，左侧为Finc-B-7，右侧为Finc-B-3；

图2是实施例2中棕色真姬菇菌株Finc-B-7和Finc-B-3的拮抗试验背面图，左侧为Finc-B-7，右侧为Finc-B-3；

图3是本发明所述棕色真姬菇菌株Finc-B-7栽培的子实体照片；

图4是本发明所述棕色真姬菇菌株Finc-B-3栽培的子实体照片；

具体实施方式

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

以下实施例中的Finc-B-5、Finc-B-3、Finc-B-1菌株是上海丰科生物科技股份有限公司培育菌株,保藏于中国典型培养物保藏中心，Finc-B-1菌株保藏编号CCTCC NO:M2012308；Finc-B-3菌株保藏编号CGMCC No.11204；Finc-B-5菌株保藏编号CGMCCNo.11203。

TNN11，TNN12的子实体可在市场上购买获得。

下述实施例颜色标准参照PANTONE国际色卡，RAL色卡作为颜色描述标准。

其中PANTONE国际色卡购自上海喷通文化用品有限公司

RAL色卡来源于网络

实施例1多孢自交获得Finc-B-7

采用多孢自交育种方法获得棕色真姬菇菌株Finc-B-7。

具体步骤如下：

1)亲本菌株Finc-B-3；

2)配制母种培养基、原种培养基和栽培培养基：

母种培养基(PDA培养基)：每1L培养基用马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂20g，水补足1L。

原种培养基：按重量百分比计,包括40％的原种培养料和60％的水，所述原种培养料按重量百分比计包括：

杂木屑 65％

米糠 18％

麸皮 10％

玉米粉 7％

栽培培养基：按重量百分比计，包括34％的栽培种培养料和66％的水，所述栽培种培养料包括：

3)担孢子的分离：将亲本菌株Finc-B-3子实体的菌盖置于培养皿中，24小时后，收集落在培养皿中的孢子，在无菌水中稀释成适当的浓度，并涂布在PDA培养基平板上。

在23℃下培养10天，待孢子萌发后用接种环分别接种到PDA斜面试管上。将这些试管在23℃下培养12天，然后从试管中分离出菌丝，并在显微镜下观察锁状联合的形成，将没有锁状联合的菌株储存在冰箱中备用。

4)自交：将一个单核体和另一个单核体彼此相隔2.5cm接种到新鲜的马铃薯琼脂板中，然后在恒温培养箱中23℃下培养10天。分离菌丝并通过显微镜观察以确定锁状联合的形成，选择具有锁状联合的菌株，通过此方法获得500个菌株；

5)把获得的菌株根据常规的方法进行栽培试验和筛选；

6)获得目标菌株：通过系统筛选，从500个菌株中，获得一个棕色真姬菇菌株，培养及栽培周期短，单产高，朵型优美，瘤盖菇出现率低，可食率高，保鲜期长，菌株活性稳定，该菌株被命名为Finc-B-7。

实施例2拮抗实验

本发明Finc-B-7和亲本菌株Finc-B-3为试验材料，所用培养基为PDA培养基。

所述PDA培养基同实施例1。Finc-B-7和亲本菌株Finc-B-3在平板培养基上分别对峙接种和培养，接种点相距2.5cm，23℃恒温培养20天，本试验结果请参阅表1。

表1不同棕色真姬菇菌株间拮抗试验

品种	Finc-B-3
		Finc-B-7	拮抗

如图1，图2所示，在对峙培养菌落交界处之间，有明显拮抗线，说明Finc-B-7是与亲本菌株Finc-B-3不同的棕色真姬菇菌株。

实施例3栽培实验一

将Finc-B-7与亲本菌株Finc-B-3分别进行培养和栽培，从65天到80天设置4个菌龄，每增加5天为一个菌龄，每个菌龄96瓶，然后对小批量栽培的结果进行汇总比较，总结出本发明菌株Finc-B-7的优势。

栽培瓶容积：850cc，瓶口直径58mm。

母种培养基(PDA培养基)：参照实施例1。

杂木屑 65％

米糠 18％

麸皮 10％

玉米粉 7％

原种制备：将所述棕色真姬菇菌株Finc-B-7的母种接入原种培养基，23℃，空气相对湿度75％，二氧化碳浓度4000ppm的条件下，培养35天，获得原种。

接种与发菌：将原种接种到栽培培养基，温度25℃，空气相对湿度75％，二氧化碳浓度4000ppm条件下分别培养65，70，75，80天。

栽培出菇：出菇温度设定为13℃，空气相对湿度100％，二氧化碳浓度2000ppm，前4天黑暗，后5～13天，光照强度100Lux，第14天起光照强度300Lux；

第5天起开始每天间隙式进行光照刺激出菇，获得菇盖成熟的子实体；

所述的间隙式进行光照的方法，包括如下步骤：

第5～13天，光照2小时，黑暗5分钟，依次交替给光

第14天开始，光照45分钟，黑暗15分钟，依次交替给光

表2为Finc-B-7与亲本菌株Finc-B-3栽培试验结果，具体包括培养周期，栽培周期，单产。

表2棕色真姬菇菌株栽培试验结果

试验结果表明：Finc-B-7在上述培养基和栽培条件下最佳菌龄为70天，相应栽培周期为21天，平均单产为188克/瓶；Finc-B-3最佳菌龄为70天，相应栽培周期为21天，平均单产为183克/瓶；Finc-B-7单产方面表现出明显的优势。

实施例4栽培实验二

本发明Finc-B-7与亲本菌株Finc-B-3分别进行培养和栽培，从65天到80天设置4个菌龄，每增加5天为一个菌龄，每个菌龄96瓶，然后对小批量栽培的结果进行汇总比较，总结出本发明菌株Finc-B-7的优势和形态学特点。

栽培瓶容积：850cc，瓶口直径58mm。

母种培养基(PDA培养基)：参照实施例1。

原种培养基：按重量百分比计，包括38％的原种培养料和62％的水，所述原种培养料按重量百分比计包括：

杂木屑 60％

米糠 23％

麸皮 7％

玉米粉 10％

栽培培养基：按重量百分比计，包括36％的栽培种培养料和64％的水，所述栽培种培养料包括：

原种制备：将所述棕色真姬菇菌株Finc-B-7的母种接入原种培养基，18℃，空气相对湿度65％，二氧化碳浓度2000ppm的条件下，培养28天，获得原种。

接种与发菌：将原种接种到栽培培养基，温度21℃，空气相对湿度65％，二氧化碳浓度2000ppm条件下分别培养65，70，75，80天；

栽培：出菇温度设定为15℃，空气相对湿度93％，二氧化碳浓度1000ppm，前4 天黑暗，后5～13天，光照强度50Lux，第14天起光照强度200Lux；

优选的，第5天起开始每天间隙式进行光照刺激出菇，获得菇盖成熟的子实体；

所述的间隙式进行光照的方法，包括如下步骤：

第5～13天，光照2小时，黑暗5分钟，依次交替给光；

第14天开始，光照45分钟，黑暗15分钟，依次交替给光；

表4为Finc-B-7与亲本菌株Finc-B-3栽培试验结果，具体包括培养周期，栽培周期，单产。

表4棕色真姬菇菌株栽培试验结果

Finc-B-7在上述培养基和栽培条件下最佳菌龄为70天，相应栽培周期为21天，平均单产为186克/瓶；Finc-B-3最佳菌龄为70天，相应栽培周期为21天，平均单产为183克 /瓶；Finc-B-7单产方面表现出明显的优势。

实施例5

形态学特性

Finc-B-7及其亲本Finc-B-3在实施例3所述的培养基和栽培环境下，培养70天，栽培周期21天条件下具体形态特征的差异，请参阅表5。

表5不同菌株形态特征对比

如图3、表5所示，Finc-B-7的形态特征：

菌丝：颜色(RAL 9010)，气生菌丝中等，菌丝密度中等，菌落边缘圆整；

菌褶：颜色(RAL 9010)、排列方式笔直排列；孢子印颜色为(RAL 9010)；

菌柄：长度为8±2cm，颜色(RAL 9003)，中粗1.0±0.5cm，与菌盖连接方式为中生，菌柄簇生。

如图4、表5所示，Finc-B-3的形态特征：

菌丝：颜色(RAL 9010)，气生菌丝发达，菌丝致密，菌落边缘圆整；

菌盖：直径为1.8±0.5cm，斑纹颜色为PANTONE 7559U，边缘颜色PANTONE 7502U，断面呈圆山型，斑纹清晰度一般，主要分布在菌盖中央，菌盖边缘圆整，表面无龟裂，质地脆嫩；

菌柄：长度为6±2cm，颜色(RAL 1013)，柄粗0.6±0.5cm，与菌盖连接方式为略偏心生，菌柄簇生。

实施例6一致性，稳定性试验

第5天起开始每天间隙式进行光照刺激出菇，所述的间隙式进行光照的方法，包括如下步骤：第5～13天，光照2小时，黑暗5分钟，依次交替给光；第14天开始，光照45分钟，黑暗15分钟，依次交替给光；

(1)培养基A：

结果如下

第6天：料面出现针尖状原基，原基颜色(RAL 1013)

第21天：子实体成熟，直径为1.5±0.5cm，斑纹颜色为(PANTONE 7504C)，菌盖边缘颜色为(PANTONE 466U)，断面呈圆山型，斑纹十分清晰，主要分布在菌盖中央,中央斑纹大，边缘小，菌盖边缘可见竖状分布的环纹，环纹颜色为(PANTONE 465U)；宽度3±2mm，菌盖边缘圆整，表面无龟裂，质地脆嫩；菌柄长度为8±2cm，中粗1±0.5cm，颜色为(RAL 9003)，与菌盖连接方式为中生，菌柄簇生。

(2)培养基B：

结果如下

第6天：料面出现针尖状原基，原基颜色(RAL 1013)

第14天：分化出菌盖，颜色(PANTONE 410C)，菇盖表面中央位置可见真姬菇特有的大理石状斑纹，斑纹颜色(PANTONE 411C)；子实体高度约1～3cm，菌柄颜色(RAL 9003)。

第21天：子实体成熟，直径为1.8±0.5cm，斑纹颜色为(PANTONE 7504C)，菌盖边缘颜色为(PANTONE 466U)，断面呈圆山型，斑纹十分清晰，主要分布在菌盖中央,中央斑纹大，边缘小，菌盖边缘可见竖状分布的环纹，环纹颜色为(PANTONE 465U)；宽度3±2mm，菌盖边缘圆整，表面无龟裂，质地脆嫩；菌柄长度为8±2cm，中粗(0.8±0.4cm)，颜色为(RAL9003)，与菌盖连接方式为中生，菌柄簇生。由此可见，Finc-B-7菌株在不同的培养基中栽培表现一致，具有良好的稳定性和重复性。

实施例7菌丝生长的温度梯度试验

本实施例以培养温度为标准，设计4组实验，从接种了Finc-B-7和Finc-B-3马铃薯琼脂板板上分别切取直径为5.0mm的接种块接种到PDA培养基上，分别于18℃、23℃、 28℃和33℃培养15天，试验结果见表6。

表6温度对不同棕色真姬菇菌丝生长速率的影响

结果表明，棕色真姬菇菌株Finc-B-7菌株的适宜培养温度为18～23℃。

实施例8子实体中葡聚糖含量试验

分别进行培养和栽培，所获得的子实体进行葡聚糖含量的测定。

本发明Finc-B-7与对照菌株Finc-B-3、Finc-B-1、TNN-12、TNN-11接入以下培养基，温度23℃，空气相对湿度70％，二氧化碳浓度3000ppm条件下培养75天；之后搔菌，并置于生育房进行出菇，温度13℃，空气相对湿度95％，二氧化碳浓度2000ppm，前4天黑暗，后5～13天光照强度100Lux，第14天起光照强度300Lux；第5天起开始每天间隙式进行光照刺激出菇，所述的间隙式进行光照的方法，同实施例6；于第21 天采收；

(1)培养基A：

(2)培养基B：

葡聚糖含量的检测：

取Finc-B-7新鲜子实体作为样品，采用红外水分测定仪FD-610进行检测：

培养基A中培养的子实体，水分含量为90.6％；

培养基B中培养的子实体，水分含量为91％，

然后采用苯酚-硫酸法检测葡聚糖含量；

根据下式计算葡聚糖含量：葡聚糖含量％＝g/(G-G1)×100；

培养基A中培养的子实体的葡聚糖含量为8±2％；

培养基B中培养的子实体的葡聚糖含量为7±2％；

检测结果见表7。采用相同的方法，其它对照菌株的子实体在上述两种培养基中培养后获得的子实体进行检测，结果，没有检测出葡聚糖。所述的葡聚糖为β-1,3-D葡聚糖；试验结果请参阅表7。

表7不同菌株子实体中葡聚糖含量对比

对比项目	Finc-B-7	Finc-B-3	TNN-11	TNN-12
					葡聚糖％培养基A	8±2	未检出	未检出	未检出
葡聚糖％培养基B	7±2	未检出	未检出	未检出

注：样品的所有结果是以干基计；

实施例9色素分泌试验

将Finc-B-7与对照菌株Finc-B-3、Finc-B-1、TNN-12、TNN-11菌丝接种在PDA培养基中，23℃下培养12天，之后在同样的温度条件下分别光照(150±50Lux)12，24， 48，72小时，背面观察。试验结果见表

表8不同菌株色素分泌

试验结果表明Finc-B-7的菌丝发满平皿后，经过一定时间的光照，有红色色素产生，随着光照时间的延长，色素逐渐加深。

Claims

1.一种真姬菇菌株，其特征在于，属于真姬菇(Hypsizygus marmoreus)，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.13193。

2.根据权利要求1所述的真姬菇菌株，其特征在于，以干基计，子实体中葡聚糖含量为5～10％。

3.根据权利要求1所述的真姬菇菌株，其特征在于，以干基计，子实体中葡聚糖含量为6～9％。

4.根据权利要求3所述的真姬菇菌株，其特征在于，所述的葡聚糖为β-1,3-D葡聚糖。

5.根据权利要求1～4任一项所述的真姬菇菌株的子实体的栽培方法，其特征在于，先培养原种，然后再栽培子实体。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述的原种培养的方法，包括如下步骤：将所述棕色真姬菇菌株的母种接入原种培养基，18～23℃，空气相对湿度65～75％，二氧化碳浓度2000～4000ppm的条件下，培养28～35天，获得原种。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述原种培养基，包括重量百分比含量为38-40％的原种培养料和余量的水；

所述原种培养料按重量百分比计包括：

杂木屑60-65％

米糠18-23％

麸皮7-10％

玉米粉7-10％。

8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，栽培子实体的方法，包括如下步骤：

(1)接种与发菌：将所述棕色真姬菇菌株的原种接入栽培培养基，18～23℃，空气相对湿度65～75％，二氧化碳浓度2000～4000ppm的条件下，培养70-85天；

(2)将步骤(1)发好菌的栽培瓶进行出菇管理，温度13℃～15℃，空气相对湿度93％～100％，二氧化碳浓度1000～2000ppm的条件下，前3～5天黑暗，然后开始光照，光照强度为50～100Lux，至第13～15天起，光照强度为200～300Lux。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，在开始光照时，进行间隙式光照，刺激出菇，总共20～22天，获得菇盖成熟的子实体，所述的进行间隙式光照的方法，包括如下步骤：在开始光照时，光照1.5～2.5小时，黑暗4～6分钟，依次循环交替给光；

至第13～15天起，光照35～60分钟，黑暗10～20分钟，依次交替给光。

10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述栽培培养基，包括重量百分比含量为34-36％的栽培培养料和余量的水。

11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，所述栽培培养料，包括如下重量百分比的组分：