CN115054673B - 抗疲劳中药复方组合物 - Google Patents
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Abstract
抗疲劳中药复方组合物,由人参、黄精、黄芪、白扁豆、山药、茯苓、干姜、陈皮和甘草组成,其中以重量份计,人参:9~15份;黄精:40~50份;黄芪:19~25份;白扁豆:8~10份;山药:11~13份;茯苓13~17份;干姜:5~7份;陈皮4~6份以及甘草:6~8份。本发明的组合物可以显著改善身体机能、增强体力、减缓体力疲劳。该方剂安全、高效且成本经济。
Description
技术领域
本发明涉及一种抗疲劳中药复方组合物。
背景技术
疲劳的中医症候分型主要为形体疲劳证、脏腑疲劳证和神志疲劳证,证候多见为:筋肉疲劳、关节骨疲劳、神志疲劳、脾胃失调、气虚、血虚、气血两虚、肾元亏虚、阳虚,阴虚、阴阳两虚和月经失常。
疲劳的病因病机复杂:起居失常、偏食或暴饮暴食、情志不舒、过度疲劳、个人体质等皆是疲劳诱因;疲劳的病机在于机体气血之损与脾肾虚弱、肝气郁滞等脏腑功能下降或失调有关。
传统中药复方制剂在抗疲劳综合能力方面具有独到优势,但寻求更为精准高效的保健配方一直是该领域的努力方向。
发明内容
本发明的目的是提供一种普适高效的抗疲劳中药复方组合物。
根据本发明的第一方面,提供了一种抗疲劳中药复方组合物,由人参、黄精、黄芪、白扁豆、山药、茯苓、干姜、陈皮和甘草组成,其中以重量份计,人参:9~15份;黄精:40~50份;黄芪:19~25份;白扁豆:8~10份;山药:11~13份;茯苓13~17份;干姜:5~7份;陈皮4~6份以及甘草:6~8份。
本发明主要从健脾益气的角度出发,脾主四肢,养好脾,四肢有力量从而缓解疲劳,其中:人参大补元气为君药;黄精补气养阴、健脾、润肺、益肾,黄芪补气固表,山药补益脾胃,助运化吸收,共为臣药;干姜性微温,散寒解表,降逆止呕,白扁豆偏于燥湿,茯苓健脾,偏于渗利,陈皮理气,使补而不腻,共为佐药;甘草偏于平补,调和诸药为使。
本发明还提供了一种抗疲劳制剂,包含上述组合物的水提物。本发明的抗疲劳制剂可以采用任何合适形式,例如口服液或胶囊等,成人(以60kg计)一天推荐用量所对应的组合物为:人参12g、黄精45g、黄芪22g、白扁豆9g、山药12g、茯苓15g、干姜6g、陈皮5g以及甘草7g。
发明人通过多方筛选验证,在遵循“理、法、方、药”,“君、臣、佐、使”等中医药理论的基础上,结合现代药理学研究方法,获得了一种普适高效的抗疲劳中药复方组合物:以调养多个脏腑的配方为基础,辅以补益气血的药味,再加入调理气机、疏肝解郁、清热滋阴的药味,达到调理肝肾阴虚、健脾利湿、理气扶正、标本兼治的效果,从而改善身体机能、增强体力、减缓体力疲劳。该方剂安全、高效且成本经济。
附图说明:
图1示出了第一批实验的各实验组受试物对小鼠体重的影响;
图2示出了第一批实验的各实验组受试物对小鼠肝脏指数、肾脏指数、肌肉指数的测定结果;
图3示出了第一批实验的各实验组受试物对小鼠运动耐力(力竭时间)的影响;
图4示出了第一批实验的各实验组的受试物对小鼠血清尿素氮BUN的影响(左);以及对小鼠肝糖原LG的影响(右);
图5示出了第二批实验的各实验组受试物对小鼠体重的影响;
图6示出了第二批实验的各实验组受试物对小鼠肝脏指数、肌肉指数、肾脏指数的测定结果;
图7示出了第二批实验的各实验组受试物对小鼠运动耐力(力竭时间)的影响;
图8示出了第二批实验的各实验组受试物对BLA曲线下面积的影响;
图9示出了第二批实验的各实验组受试物对BUN含量的影响;
图10示出了第二批实验的各实验组受试物对糖原(MG/LG)含量的影响;
图11示出了第二批实验的各实验组受试物对血糖含量的影响;
图12示出了第二批实验的各实验组受试物对血清LDH、CK活力的影响;
图13示出了第二批实验的各实验组受试物对AST、ALT含量的影响;图14示出了第二批实验的各实验组受试物对肝/肌中SOD含量的影响;
图15示出了第二批实验的各实验组受试物对肝/肌中MDA含量的影响;
图16示出了第二批实验的各实验组受试物对肝GSH-Px活性的影响;
图17示出了第三批实验的各实验组受试物对小鼠体重的影响;
图18示出了第三批实验的各实验组受试物对小鼠肝脏指数、肾脏指数、肌肉指数、心脏指数、脾脏指数的测定结果;
图19示出了第三批实验的各实验组受试物对小鼠运动耐力(力竭时间)的影响;
图20示出了第三批实验的各实验组受试物对BLA含量的影响;
图21示出了第三批实验的各实验组受试物对BUN含量的影响;
图22示出了第三批实验的各实验组受试物对肝糖原含量的影响;
图22示出了第三批实验的各实验组受试物对肝糖原含量的影响;
图23示出了第三批实验的各实验组受试物对肌糖原含量的影响;
图24示出了第三批实验的各实验组受试物对肌ATPase酶的影响;
图25示出了第三批实验的各实验组受试物对血糖的影响;
图26示出了第三批实验的各实验组受试物对血清LDH活力的影响;
图27示出了第三批实验的各实验组受试物对血清CK活力的影响;
图28示出了第三批实验的各实验组受试物对血清AST含量的影响;
图29示出了第三批实验的各实验组受试物对血清ALT含量的影响;
图30示出了第三批实验的各实验组受试物对肝SOD含量的影响;
图31示出了第三批实验的各实验组受试物对肌SOD含量的影响;
图32示出了第三批实验的各实验组受试物对肝MDA含量的影响;
图33示出了第三批实验的各实验组受试物对肌MDA含量的影响;
图34示出了第三批实验的各实验组受试物对肝GSH-Px活性的影响。
具体实施方式
下面结合具体实验实例和附图对本发明做进一步说明,本领域技术人员应该理解,这些实例和附图只是为了更好地理解本发明,并不用来做出任何限制。
实验仪器
HWS26型电热恒温水浴锅(上海恒科仪器有限公司);
AL204型电子分析天平(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司);
GZX-GF101-3-BS型电热恒温鼓风干燥箱(上海跃进医疗器械有限公司);
5430R小型冷冻离心机(艾本德中国有限公司);
MPR-414F-PC型药品冷库冷冻保存箱(Panasonic);
KZ-Ⅱ型高速组织研磨仪(Servicebio);
Multiskan MK3酶标仪(Thermo Scientific);
AU480型全自动生化分析仪(美国贝克曼库尔特有限公司);
Epoch涡旋混合器(BioTek);
RE-3000型旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂);
ZF-1型三用紫外分析仪(江苏海门其林贝尔仪器制造有限公司);
DZF-6020型真空干燥箱(上海精宏实验设备有限公司);
KH-500DE型数控超声波清洗器(昆山禾创超声仪器有限公司);
CA-1116A型冷却水循环装置(上海爱朗仪器有限公司);
SHB-B95A型循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司)
实验材料
中药饮片:火麻仁、枸杞子、葛根、茯苓、灵芝、决明子、黄芪、香橼、天麻、白扁豆、百合、熟地黄、酸枣仁、桑葚、川芎、甘草、知母、当归、阿胶、姜黄、人参、黄精、干姜、陈皮、沙苑子、佛手、覆盆子、肉苁蓉,均购于安国市隆达中药饮片有限公司(GMP证书编号:HE20190010)。
阳性药:补中益气丸(批号:国药准字Z36021765)、补中益气口服液(浙江艾诺生物药业股份有限公司以下简称Bzyq)、复方高山红景天口服液(莎普爱思以下简称Rhc)。
试剂盒及试剂:尿素测定试剂盒(产品批号:190671,中生北控生物科技股份有限公司)、小鼠乳酸ELISA试剂盒(货号:LB2763B武汉力博瑞生物科技有限公司)、肝/肌糖原酶联免疫试剂盒(货号:A043-1-1上海酶联);肌酸激酶测定试剂盒(货号:100020040)、葡萄糖测定试剂盒(货号:100020100)、尿素测定试剂盒(产品批号:190971)、乳酸脱氢酶测定试剂盒(货号:100020050)、天冬氨酸氨基转移酶测定试剂盒(货号:100020013)、丙氨酸氨基转移酶测定试剂盒(货号:100020003)均购自于中生北控生物科技股份有限公司;小鼠全乳酸试剂盒(货号:A019-1-1南京建成生物工程研究所)、谷胱甘肽过氧化物酶测试盒(货号:A005)、丙二醛测试盒(货号:A003-1)、超氧化物歧化酶测试盒(货号:A001-1)均购自于南京建成生物工程研究所有限公司。
实验动物
SPF级BABL/C纯系雄性小鼠,体质量18~22g,购自北京维通利华实验动物技术有限公司,许可证编号:SCXK(京)2016-0006。本研究由北京协和医学院药用植物研究所实验动物中心伦理委员会批准通过,三批实验伦理审查编号依次为:SLXD-20190826005、SLXD-20200902022、SLXD20201112045。在北京协和医学院药用植物研究所动物房饲养,每天自由饮水、进食。
根据各实验配方制备相应的浸膏粉
利用水提法提取表1中各配方的中药材,制备相应的配方浸膏粉。水提法(回流提取法):提取2次,料液比(重量比)为1∶8,提取时间为一煎40min,二煎30min,水煎液用8层纱布过滤,合并两次水煎液,旋转蒸发浓缩至一定浓度,将浓缩液置于干燥箱中烘成粉末,密封好冷藏于4℃冰箱保存。
表1:三批实验所有配方组成
阳性药配制:补中益气丸(批号:国药准字Z36021765)进行超声溶解于蒸馏水后再进行灌胃。补中益气口服液和复方高山红景天口服液,按说明书剂量换算成小鼠剂量后直接灌胃,灌胃量为10mL·Kg-1d-1,阳性药配制完毕后放置于4℃保存。
实验药配置:将所得相应浸膏粉采用蒸馏水溶解,分别配成所需浓度的药液,即得药理学试验受试药物浓度。其浓度按(式1-1)计算,各配方给药浓度见表2。
受试物给药浓度计算式:
C给=(m×Q÷60=0.02=10)/(10×0.02) (式1-1)
注:(1)C给为给药浓度,小鼠每天的服用量/给药容积;(2)每个人每天服用的浸膏量为m×Q,m为配方每日人临床饮片用量(表1中各配方组分重量之和),Q为配方提取出膏率(表1中各配方提取出的浸膏粉与其所有组分总重之比);(3)每只小鼠每天的服用量为m×Q÷60kg(人的平均体重)×0.02kg(小鼠的平均体重)×10(小鼠剂量为人剂量10倍);(4)小鼠给药容积为10mL·kg-1,20g小鼠每天的灌胃量为10mL·kg-1×0.02kg=0.2mL。
表2受试物的配制浓度
缓解体疲劳实验
依据《保健食品功能评价方法2020版》(征求意见稿)(下文简称《评价方法》)要求,采用行为学指标—小鼠负重力竭游泳时间,结合BLA(血乳酸)、BUN(血尿素氮)、MG/LG(肌糖原/肝糖原)三个指标,制定判定配方有效的规则:在行为学实验结果呈阳性的前提下,BLA、BUN、MG/LG三个指标中有任意两个呈阳性,即可判定配方具有缓解体力疲劳功效。
本实验拟测定行为学指标—小鼠负重力竭游泳时间及BLA、BUN、MG/LG四个指标。其中耐力是直接反映机体抗疲劳程度的金指标,耐力越强(负重力竭游泳时间越长),抗疲劳能力越强。剧烈运动时,机体相对缺氧,糖酵解加快,产生大量乳酸,使肌肉中H+浓度上升,pH值下降,导致疲劳。减少乳酸的产生或加快乳酸的消除,都可延缓疲劳发生和/或加速疲劳的消除,血乳酸水平可以反映有氧代谢能力、疲劳的产生和消除速度。肝糖原及肌糖原是机体重要的能源储备物质,若配方能显著提高小鼠机体糖原储备,则说明能在一定程度上缓解疲劳。机体在长时间运动时,体内能源储备糖原物质消耗殆尽,就会开始消耗体内蛋白质,从而产生大量BUN,机体对运动负荷的适应性越低,形成的尿素越多。反之,机体运动后BUN含量越低,表明机体对运动负荷的适应能力越强,抗疲劳能力也就越强。
为进一步揭示缓解体疲劳的作用机理,增加了Glu(血糖)指标,并三次断点采血检测了BLA的代谢曲线,以进一步反应受试物对小鼠机体能量调节的影响;增加了肝脏和肌肉组织SOD(超氧化物歧化酶)、MDA(丙二醛)含量检测,以及肝脏GSH-Px(谷胱甘肽过氧化物酶)的含量测定,以评价受试物能否减轻氧化应激损伤,从而缓解机体疲劳;本研究还增加了CK(肌酸激酶)、LDH(乳酸脱氢酶)、AST(谷草转氨酶)、ALT(谷丙转氨酶)含量检测,检验受试药物能否减少代谢产物累积,从而达到缓解机体疲劳的功效。
分如下三批次进行药理实验,取样检测的指标不同。
第一批实验初步筛选配方,测定了体重和脏器指数等机体及器官指标,根据《评价方法》评判功效要求,观测了力竭游泳时间,取样检测了BUN(血尿素氮)和MG(肌糖原)2项指标。
第二批实验,测定了体重和脏器指数等机体及器官指标,按《评价方法》要求测定了力竭游泳时间、血乳酸(BLA)、血尿素氮(BUN)、肌糖原和肝糖原(MG/LG)含量4项评测指标。此外,还检测了10项与抗疲劳相关生理生化指标。包括血糖(Glu)、血清乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)和谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、丙二醛(肝MDA/肌MDA)含量,还测定了超氧化物歧化酶(肝SOD/肌SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)等酶活性。
第三批实验,除测定了第二次实验的全部指标外,又增加了肌肉中肌球蛋白ATP酶(ATPase)活力的检测。
样品采集与处理方法
血清采集:在温度为28±1℃的水中无负重游泳并休息后进行眼眶采血,4000rpm·min-1离心15min取血清,置于4℃冰箱保存。
组织采集:小鼠颈椎脱臼处死后,迅速取肝脏、大腿肌肉、肾脏于预冷的生理盐水中漂洗数次,用滤纸吸干肝脏表面生理盐水后称肝脏总重。取肝脏、大腿肌肉、肾脏用10%中性福尔马林溶液固定。取肝脏、大腿肌肉、肾脏剪取0.2g组织块,量取质量体积比为1∶9的预冷生理盐水(即约1.8mL),将组织块剪碎后与生理盐水一并放入15mL离心管中,将离心管放入冰水混合物中,用手持匀浆器反复研磨至充分研碎,即制成10%组织匀浆。将制备好的匀浆4℃下4000rpm·min-1冷冻离心15min,用移液枪吸取上清液置于1.5mL离心管中,-80℃冰箱中冷冻保存。
评价指标测定方法
1.负重力竭游泳时间的测定
连续灌胃第29天时,给药30min后,将尾部负重5%体重铅皮的小鼠置于游泳箱中游泳,水深不少于30cm,水温28±1℃(第一批实验25±1℃),记录小鼠自游泳开始至力竭而沉入水中并维持8s不能浮出水面,且四肢不能协调划水的时间。
2.BUN、CK、LDH、Glu、AST、ALT含量的测定
给药30min后,在温度为28±1℃的水中无负重游泳90min,休息60min后进行眼眶采血,采血量为0.5mL,4000rpm·min-1离心15min取血清,置于4℃冰箱保存。按照试剂盒说明,在全自动生化仪中进行BUN、CK、LDH、Glu、AST、ALT含量检测。
3.BLA含量的检测
灌胃38天时无负重游泳30min休息10min后,摘眼球取血,分离血清方法参考1.2.3.2,按血清乳酸测试盒说明书操作,测定吸光度:室温平衡20min后,在标准品孔各加不同浓度的标准品50μL,样本孔先加待测样本10μL,再加样本5倍稀释液40μL,除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。然后弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干。如此重复洗板5次后,每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min后加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。绘制标准回归曲线A=0.2208C+0.4852,R2=0.990,计算各样本BLA浓度值。
4.LG、MG含量的测定
灌胃38天时无负重游泳30min休息10min,立即摘眼球取血后,颈椎脱臼处死,迅速取肝脏和双后肢肌肉,用生盐水漂洗3遍,用滤纸擦干并称重,取0.5g标本,按1:9(质量比)加入生理盐水,并置于冷冻研磨机中进行粉碎匀浆化,3 000r·min-1离心15min,取上清液于EP管中,置于-20℃冰箱保存。
使用前将各种试剂移至室温(18-25℃)平衡至少30min,按要求配制标准品、洗涤液等试剂。正式试验前,先进行预试验,摸索样品最佳稀释倍数。分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步骤相同)、标准品孔、待测样本孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μL,待测样品孔中先加样品稀释液40μL,然后再加待测样品10μL(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于梅标孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。然后空白孔除外,每孔加入酶标试剂100mL,用封板膜封板后置37℃温育60min后小心揭掉封板膜,弃去孔内液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,甩干洗涤液后每孔先加入显色剂A50μL,再加入显色剂B50μL,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15min后,每孔加终止液50μL,终止反应。以空白孔调零,在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值),计算MG/LG的含量。
缓解体疲劳功效实验数据分析方法
用SPSS Statistics 20软件进行方差分析,各项数据以x±s表示,组间比较采用LSD法检验,P<0.05为差异具有统计学意义。两两比较采用独立T检验。用GraphPad Prism软件作图。本发明的缓解体疲劳功效评价数据均用此方法进行统计分析。
第一批药理实验:缓解体疲劳初选配方
制备缓解体力疲劳配方提取物的浓缩液
对初步设计的6个配方AC1~AC6,按表1各药味的配伍提取,并制备受试药物浓缩液,制备方法如前所述。
制备阳性药
以补中益气丸(代号Bzyqw)作为阳性药,取药物进行超声溶解于蒸馏水,配成0.4mg·mL-1的溶液后再进行灌胃,灌胃量为10mL·Kg-1d-1,4℃保存。
动物实验处理与取样测定
本批实验在北京协和医学院药用植物研究所实验动物中心完成,实验动物为SPF级BABL/C雄性小鼠(体重为18~22g),购自北京维通利华实验动物技术有限公司。在SPF级环境下饲养8周龄,每天自由进水进食,适应性喂养一周后分为2组,每组12只。空白组每天灌胃蒸馏水,阳性药超声溶解于蒸馏水后灌胃,灌胃量为10mL·Kg-1d-1,各配方组每天灌胃对应受试药物。受试药物的浓度如前所述。
饲喂受试药物30天后小鼠进行负重力竭游泳试验:将尾部负重5%体重铅皮的小鼠置于游泳箱中游泳,水温25±1℃(《规范》条件),记录小鼠自游泳开始至力竭而沉入水中并维持8s不能浮出水面的时间,并马上把小鼠捞出水面。而后继续受试药物灌胃3天,进行血清尿素氮含量(BUN)测定:末次给受试药物30min后,不负重游泳90min,休息60min后进行眼眶采血,取血清备用,利用全自动生化仪及血清尿素氮试剂盒进行BUN含量检测。在灌胃38天时,颈椎脱臼处死小鼠,取肝脏制备肝组织匀浆,按照肝糖原酶联免疫试剂盒说明书测定肝糖原含量。
受试药物对小鼠体重及组织指数的影响
给药38天,在各给药过程中,包括末次体重,各组小鼠体重与对照组试验数据相比较,均无显著性差异,各给药组小鼠体重之间亦无显著性差异,实验周期内小鼠体重变化见图1。通过分析体重数据发现,灌胃2周后,各个配方组和阳性药组(补中益气丸组,代号Bzyqw)体重均高于空白组,看见饲喂药物有使小鼠体重增加的倾向。灌胃第38天时,AC2组、AC5组较前一周体重略微减少,其余各组均呈现增加趋势,但各组间均无显著性差异,产生原因有待研究,不排除第33天时对小鼠进行内眦采血造成的影响。体重记录实验结果说明各配方组对小鼠机体正常生活无显著性影响。
小鼠肝脏指数、肾脏指数、肌肉指数的测定结果见图2。与Control组相比,AC3组小鼠肝脏指数显著高于空白组,其肝脏指数增加率为17.90%,其他配方组和补中益气丸(Bzyqw)组虽然都高于Control组,但统计学分析并无显著性差异。与Control组对比,肾脏指数只有AC3组有显著性差异,其肾脏组织增加率为10.14%,且AC3组小鼠肾脏指数显著高于AC2组、AC4组、AC6组、Control组,与阳性药组相比,各配方组无显著差异。与Control组相比,各组小鼠肌肉指数(大腿股直肌和股外侧肌)均无显著性差异。AC6组肌肉指数最小,降低率为6.9%,与阳性药组对比,各配方组亦均无显著性差异。
受试药物对力竭游泳时间的影响
连续灌胃第29天时,给药30min后,将尾部负重5%体重铅皮的小鼠置于游泳箱中游泳,水深不少于30cm,水温25±1℃,记录小鼠自游泳开始至力竭而沉入水中并维持8s不能浮出水面的时间。
运动耐力的下降是疲劳出现最直观的体现,小鼠负重游泳的力竭时间的长短是反映耐力的重要指标之一。这也是作为检验某功能型产品是否具有缓解体疲劳功能的基础且必要的条件。
从行为学测试结果来看,不同配方使小鼠力竭游泳时间都有一定程度增加。各受试物对小鼠运动耐力影响的数值见表3及图3,连续灌胃四周后,与Control组相比,AC1、AC2、AC5组有显著性差异,其延长率分别为:53.76%、61.85%、79.59%;与阳性药组相比,AC1、AC2、AC5组游泳时长也有显著增加。
表3:受试物对小鼠运动耐力影响
受试药物对血清尿素氮及肝糖原的影响
当机体长时间不能通过糖、脂肪分解代谢得到足够的能量时,机体蛋白质与氨基酸分解代谢随之增强,氨基酸经过转氨基或脱氨基后,碳链被氧化,在经过一系列生化反应,使血液中尿素含量增加,血尿素氮对于评价机体负荷时的承受能力,是一个非常灵敏的指标。受试物对小鼠血清尿素氮影响的数值见图4(左),连续灌胃33天,末次给受试样品30min后,在温度为25±1℃的水中无负重游泳90min,休息60min后进行眼眶采血,采血量为0.5ml,采集血清,进行尿素氮(BUN)含量检测。与Control组相比,AC1、AC2、AC4、AC5组有显著性差异,其降低率分别为16.5%、16.41%、27.99%、12.79%。
肝糖原的积累量对于维持运动时的血糖水平有重要意义,中枢神经及一些体细胞(如红血球)仅能利用糖作为能源。受试物对小鼠肝糖原的影响数值见图4(右),连续灌胃38天后,各配方对小鼠体内肝糖原(LG)的积累量都有不同程度的增加,与Control组相比,AC1、AC2组有显著性差异,其增加率为17.03%、15.18%;与阳性药组相比,各配方组均无显著性差异。
实验结论
根据《2003版保健食品检验与评价技术规范实施手册》规定:负重游泳结果呈阳性,且血乳酸、血清尿素氮、肝糖原/肌糖原三项生化指标中任意两项指标呈阳性,可判定该受试样品具有缓解体力疲劳功能的作用。
与对照组相比,AC1、AC2、AC5组能显著延长小鼠力竭游泳时间,AC1、AC2、AC4、AC5组可显著降低运动负荷小鼠血清尿素氮含量,AC1、AC2、AC5组能显著提高小鼠体内肝糖原积累量。综合上述行为学和血液生化检测指标,初步评判,AC1和AC2、AC5配方具有缓解体疲劳的功效。鉴于AC3对肝肾指数产生了明显影响,以及AC6配方使肌肉指数下降的情况,取消AC3、AC6配方的后续实验。
此实验考察指标不完全,没有考察血乳酸及肌糖原含量,应在后续实验中进行补充。且在行为学实验过程中,发现小鼠达到“沉入水中并维持8s不能浮出水面”的状态时,四肢仍能保持协调划水,说明其仍能保持由神经中枢控制的四肢运动,未达到彻底力竭状态。因此本发明把“力竭”的标准进一步设置为:小鼠自游泳开始至力竭而沉入水中并维持8s不能浮出水面,且四肢不能协调划水的时间。
另外,与空白组相比,补中益气丸组的小鼠力竭游泳时间显著延长,延长率为30.63%,肝糖原含量无显著增加,血清尿素氮含量没有显著降低,提示补中益气丸可显著增强小鼠运动耐力,但对于调节机体能量代谢方面无明显作用,并不能显著缓解体力疲劳,分析可能原因是丸剂超声后不能完全溶解与于水,导致灌胃量(给药浓度)不足,小鼠机体对药的吸收受到限制,因此在后续实验(第三批药理实验)中选择口服液制剂(补中益气口服液)作为配方优选实验的阳性药。本实验中每组小鼠都有死亡现象发生,推测与水温过低有关,因此在后续实验中把水温上升至28±1℃。
第二批药理实验:缓解体疲劳优化配方
缓解体力疲劳配方浓缩液的制备
综合分析第一次药理实验结果,放弃功效较低的AC1和AC6号配方,对其余4个配方,分析各项检测指标测定结果,分析配方在改善体能方面的作用,采用中医扬长补短的指导思想对配方进行优化调整,确定4个优化配方(详见表1)BC1、BC2、BC4、BC5。按表1配方药味的配伍提取,并制备受试药物,制备方法同前。
阳性药的选择与制备
复方高山红景天口服液具有补肾健脾,养心安神的作用,适用于脾肾不足,心神失养所致的头晕目眩,食少脘胀,体倦乏力等。其功效与作用机制与本项目研究的缓解体力疲劳配方一致。其剂型为口服液,与受试配方的给药方式相同。另外,复方高山红景天口服液与优化配方均为中药配方,具有较强的可比性,故第二批药理实验以其作为阳性药物。
取复方高山红景天口服液,换算成小鼠用量后进行灌胃,灌胃量为10mL·Kg-1d-1,4℃保存。
实验动物分组与给药方法
所有BABL/C雄性小鼠于常规条件下适应性饲养1周后随机分为6组,分别为空白组(Control)、复方高山红景天组(Rhc)、BC1、BC2、BC4、BC5,每组12只。各组均灌胃38d,每天1次。动物每周称重1次,按体重调整受试药物剂量,各组动物处理方法见表4。受试药物的浓度计算同前。
表4:动物处理方法
评价指标及取样测定
本批次测定指标,在第一批实验检测的力竭游泳时间、尿素氮(BUN)和肝糖原(LG)含量以及小鼠体重、脏器和肌肉指数5方面内容基础上,增加了全血乳酸、肌糖原(MG)和血糖(Glu)含量的测定。
为探究抗疲劳的作用机制,增加了体能相关生化因子的测定。取样检测了血清乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)和谷丙转氨酶(ALT)及谷草转氨酶(AST)含量,还检测了超氧化物歧化酶(肝SOD/肌SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)等酶的活性。
负重力竭游泳时间的测定
连续灌胃第29天时,给药30min后,将尾部负重5%体重铅皮的小鼠置于游泳箱中游泳,水深不少于30cm,水温28±1℃,记录小鼠自游泳开始至力竭而沉入水中并维持8s不能浮出水面,且四肢不能协调划水的时间。
全血乳酸含量的测定
灌胃33天时,进行三次断点采血,检测全血乳酸含量。
BUN、CK、MG/LG等生化指标含量的测定
灌胃给药第38天时进行无负重游泳90min休息60min后,摘眼球取血并制备血清,取脏器组织测定BUN、CK、LDH、MG/LG、SOD、MDA等生化指标。
优化配方对体重及组织指数的影响
实验周期内小鼠体重变化见图5。给药38天实验过程中,各组小鼠体重与空白组试验数据相比较,均无显著性差异,各给药组小鼠体重之间亦无显著性差异。
小鼠肝脏指数、肾脏指数、肌肉(大腿股直肌和股外侧肌)指数测定结果见图6。各给药组与Control组相比,小鼠的脏器指数及肌肉指数均无显著性差异。各组总体肝脏指数平均值为4.90%、肌肉指数平均值为1.56%、肾脏指数平均值为1.55%。与阳性药组对比,各配方组的各项指数亦均无显著性差异。
在给药期间,小鼠的毛发、尿液、粪便正常,社会学行为等正常,说明小鼠的生长发育情况良好。
优化配方对力竭游泳耐力的影响
从行为学测试结果来看,除BC1外,其余配方对小鼠力竭游泳时间都有一定程度增加。各受试物对小鼠运动耐力影响的数值见表5及图7。连续灌胃四周后,与Control组相比,各配方组均可明显延长小鼠的负重力竭游泳时间,除BC1外其余配方增幅均在10%以上,但与阳性药相比还有一定增幅空间,由此推测进一步优化配方还可延长游泳力竭时间。
表5:受试药物对小鼠运动耐力影响
与第一批实验结果相比,配方优化后,各组小鼠的力竭游泳时间均大幅度提高,说明配方的优化效果明显。另外,实验条件和观测方法也可能会有一定影响。一是水温由原来的25℃提升至28℃,避免了因水温过低而导致提前“力竭”甚至抽搐死亡的问题;二是评判力竭标准有所变化,在原来标准的基础上(小鼠自游泳开始至力竭而沉入水中并维持8s不能浮出水面的时间),增加了“四肢不能协调划水”的体态指标,会使力竭时间也有所延长。
优化配方对血乳酸及血清尿素氮含量的影响
血液中乳酸(BLA)的积累取决于乳酸的产生与消除速度,因此,减少乳酸的产生或加快乳酸的消除,都可延缓疲劳发生和/或加速疲劳的消除,血乳酸曲线下面积可以反映有氧代谢能力、疲劳的产生和消除速度。由图8所示,各个给药组均可显著降低运动后小鼠乳酸曲线下面积,即各个配方均有助于提高乳酸在机体内的代谢速率,加快乳酸的消除,缓解体力疲劳。与对照组相比,各受试药物组的乳酸曲线下面积的均有显著降低,BC2和BC5组降幅最大,其降幅较阳性药组(Rhc)更大,且有显著差异。
由图9所示,对照组的血清尿素氮(BUN)含量均值为14.52mmol/L,受试药物组的BUN均值为13.18mmol/L,除BC4外其余受试药物组BUN含量均明显低于对照组,一般降低10%左右,表明各优化配方均可有效降低机体运动后BUN含量,增强小鼠机体对运动负荷的适应能力。
优化配方对肌糖原和肝糖原及血糖的影响
肝糖原可转化为血糖,维持机体血糖相对稳定。剧烈运动肝糖原耗尽后,机体血糖水平会迅速下降,低血糖会抑制中枢神经系统功能,可产生乏力、头晕等疲劳现象,致使运动耐力降低。
图10的肝糖原和肌糖原测定结果说明,受试药物可不同程度的提高小鼠的糖原含量,其中BC1和BC4的肝糖原增幅最大,其含量与阳性药为同一水平。由此可以推测,BC2和BC5配方还有进一步提升空间。
图11的血糖(Glu)检测结果说明,受试药物使小鼠血糖含量显著增加,BC5增幅最大,明显比阳性药含量还要高,较对照增加1倍以上。上述结果说明,受试药物对小鼠机体的能量储存或代谢产生了显著的积极影响。
优化配方对LDH、CK和ALT及AST等酶活性的影响
剧烈运动除了会导致机体能源物质减少外,产生的内源性自由基和脂质过氧化使体内活性氧簇(ROS)大量激增,ROS会引起细胞损伤,内容物便释放进入血液,可引起机体离子及代谢功能紊乱,引发疲劳。而乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)等大分子可通过损伤的细胞进入淋巴液,最终进入血液循环。LDH不仅是组织损伤的标志,亦是参与糖酵解和糖异生过程中催化乳酸和丙酮酸之间氧化还原反应的重要酶类,直接影响机体能量代谢过程,其活力与机体的乳酸含量呈正相关关系,当机体的乳酸含量上升时,LDH活力也随之增强,催化由乳酸氧化为丙酮酸,减少其在肌肉内的堆积,进而可提高机体的抗疲劳能力。
图12(左)的测定结果说明,各给药组的LDH活力均有明显降低,BC1、BC2、BC4、BC5降低率分别为19.24%、26.18%、11.94%、14.73%,间接证明各配方在一定程度上降低了乳酸含量低。血清CK水平的高低与横纹肌受损程度有关,正常生理状态下CK处于肌肉中,使肌酸上增加磷酸基团,转化为高分子磷酸基团,释放能量。肌细胞受损后,CK会经细胞间隙渗透到淋巴液,最终进入血液循环,间接引起血清中CK活力增加,在血液中检测到CK含量增加,暗示肌肉损伤的发生。图12(右)显示各给药组均可显著降低血清CK活力(P<0.05),说明受试药物可改善急性运动引起的骨骼肌损伤,从而缓解体力疲劳。
剧烈运动还会导致谷丙转氨酶(ALT)及谷草转氨酶(AST)生理性增高,ALT、AST是肝组织损伤的关键标志物,若配方能显著降低小鼠长时间运动后机体的ALT、AST含量,则说明其可在一定程度上减轻肝组织损伤程度,缓解小鼠体疲劳。检测结果说明,各受试药物均可显著降低ALT含量,如图13(左)所示;同样对AST含量也有明显降低作用如图13(右)所示,其中BC1、BC5降低幅度最大,与阳性药(Rhc)处于相同水平。
优化配方对肝/肌中SOD、MDA含量及肝GSH-Px活性的影响
MDA是一种脂质过氧化反应的产物,反应过程产生的大量自由基可能会改变机体内细胞生物膜的通透性,破坏细胞结构和功能,从而扰乱细胞内外的离子转运,影响肌纤维的兴奋收缩和偶联造成机体损伤,也会导致机体产生疲劳。超氧化物歧化酶(SOD)与谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)是机体酶抗氧化系统中重要的成员,起到清除自由基,保护细胞免受氧化应激损伤的作用。因此,可以通过测定运动后小鼠上述生化指标,评估其通过减轻氧化反应而缓解体力疲劳的作用。
图14-16的测定结果显示,各配方均可显著提高肝脏和肌肉中SOD的活力,从而起到减轻体疲劳的作用。各受试药物均有助于降低肝脏中MDA含量,且BC1、BC2、BC5还可显著降低肌肉中MDA含量(P<0.05)。与空白组相比,各受试药物均有助于提高运动后小鼠机体内SOD、GSH-Px活力。
综上,各受试药物在减轻机体氧化损伤程度方面均有显著的积极作用,可通过增强清除机体自由基的能力和减轻脂质过氧化对细胞的损伤,减轻氧化应激损伤,从而起到缓解体力疲劳的作用。
结论
《评价方法》规定:负重游泳结果呈阳性,且血乳酸、血清尿素氮、肝糖原/肌糖原三项生化指标中任意两项指标呈阳性,可判定该受试样品具有缓解体力疲劳的功能。
根据《评价方法》评判具有缓解体疲劳功能的标准,综合第二批药理实验各项评价指标测定结果(参见表6),力竭游泳实验BC2、BC4、BC5配方可显著延长小鼠的负重力竭游泳时间;4个配方均具有显著的降低运动后小鼠机体内血乳酸(BLA)含量的作用;BC2和BC5可显著降低运动后小鼠机体内BUN含量;4个配方均可显著增加肌糖原水平,BC1、BC2、BC4配方还可显著提高肝糖原水平。根据《规范》评判规则,认为BC2、BC4、BC5具有缓解体力疲劳的功效。
表6:评判具有缓解体疲劳功能指标测定结果(第二批实验)汇总表
对比分析第一和第二批药理实验的共同检测指标,配方优化调整后,4个配方的缓解体疲劳功效都有一定程度的提高,其中BC2、BC4、BC5三个配方达到了《规范》的标准要求,特别是BC2和BC5两个配方,《规范》规定评价缓解体疲劳功效的4个指标全部达到了要求。BC1虽然没有达到《规范》标准要求,综合其所有检测指标看,也具有达标的潜力。综合分析各项检测指标,3个符合《规范》标准的配方,其缓解体疲劳功能上与阳性药红景天口服液基本相同,但在不同检测指标上互有高低,由此推测各配方和阳性药在缓解体疲劳的作用机理上,在改善小鼠生理机能方面可能会存在一定差别。
综合分析与缓解体疲劳相关生理指标的检测结果,推测有效配方可能的作用机制。受试药物被吸收后,可通过增强运动后代谢速率,减少疲劳小鼠机体BUN含量及MG/LG消耗量,维持运动后机体Glu的稳定;可通过增强LDH活性加快运动后乳酸的清除速率,减少BLA积累,即提高机体能量代谢;可通过增强SOD/GSH-Px活力,降低脂质过氧化产物MDA的含量来增强机体清除自由基的能力和减轻高强度运动后脂质过氧化对机体的损伤,即增强机体抗氧化能力;可通过抑制运动后血清中CK、AST、ALT活力的增加来减轻细胞器、细胞膜的损伤,减少运动代谢产物的积累或加快其清除速率。上述综合作用可改善小鼠某些机能或增强某些生理活动,从而提高身体运动机能或减缓运动疲劳的产生。
第三批药理实验:缓解体力疲劳遴选配方
缓解体力疲劳配方浓缩液的制备
综合分析第二次药理实验结果,针对AC1、AC4号和AC5配方所反映出来的某些功能较弱的情况,借助现代药理药效研究成果,结合临床中医对配方做进一步优化迭代,组成3个备选缓解体疲劳功效的配方(详见表1),代号分别为ZC1、ZC4、ZC5。由于其它因素影响,本发明暂终止BC2配方的后续实验。对备选配方开展药理学实验,按表1配方药味的配伍提取,并制备受试药物,制备方法同前。
阳性药的选择与制备
为了确证配方功效,第三批实验选择补中益气口服液(Bzyqk)和复方高山红景天口服液(Rhc)两种中成药同时作阳性药进行对比实验。阳性药制备,分别取市售补中益气口服液(Bzyqk)和复方高山红景天口服液(Rhc),换算成小鼠用量后进行灌胃,灌胃量为10mL·Kg-1d-1,4℃保存。
实验动物分组与给药方法
所有BABL/C雄性小鼠于常规条件下适应性饲养1周后随机分为7组,对照设置两组,分别为安静对照组(不做游泳处理,作为正常生活小鼠参照,代号C-Q)、运动对照组(做受试药物组相同的游泳处理,代号C-S)。阳性药设置两组,分别为复方高山红景天口服液组(Rhc)、补中益气口服液组(Bzyqk)。验证功效配方3组,ZC1、ZC4、ZC5。每组12只,各组均按实验设计灌胃35d,每天1次。动物每周称重1次,按体重调整受试药物剂量,各组动物处理方法见表7。受试药物的浓度计算同前。
表7:动物处理方法
评价指标及取样测定
本批实验取样测定了第二批实验检测的全部指标,另外增加了肌球蛋白ATP酶(ATPase)活力测定。血乳酸不再单独三次断点取样,而与其他生化检测指标一起在实验最后阶段取样。取样时间见表7,取样测定方法同前。
受试药物对体重及组织指数的影响
给药35天,在各给药过程中,包括末次体重,各组小鼠体重与空白组试验数据相比较,均无显著性差异,各给药组小鼠体重之间亦无显著性差异,实验周期内小鼠体重变化见图17。体重记录实验结果说明各配方组对小鼠机体正常生活无显著性影响。
受试物对小鼠肝脏指数、肾脏指数、肌肉(大腿股直肌和股外侧肌)指数、心脏指数、脾脏指数的影响如图18。各给药组与C-Q组相比,各组小鼠的肾脏指数无显著性差异,ZC4肌肉、ZC5脾脏指数显著高于安静对照C-Q组。Bzyqk组肌肉指数显著高于运动对照(C-S)组。
在给药期间,小鼠的毛发、尿液、粪便正常,社会学行为等正常,说明小鼠的生长发育情况良好。
受试药物对力竭游泳时间的影响
从行为学测试结果来看,各配方使小鼠力竭游泳时间都有一定程度增加,连续灌胃四周后,小鼠力竭游泳时间见表8及图19。与运动对照组(C-S)相比,Rhc、Bzyqk、ZC5组显著延长了小鼠的负重力竭游泳时间,其时长分别增加63.21%、60.33%、54.94%;3个配方组与两个阳性药组相比,力竭游泳时长无显著性差异,ZC5的时长与两个阳性药处于同一水,相差仅为5.1%和3.4%。ZC5配方再次优化后,与对照相比力竭游泳时间由优化前(第二批实验)延长20.01%提高到54.94%,优化效果十分明显。
表8:受试物对小鼠运动耐力影响
受试药物对血清乳酸及尿素氮的影响
图20为血清乳酸测定结果,各个配方均有助于减少运动后血清乳酸(BLA)在机体内的含量,加快乳酸的消除,缓解体力疲劳。运动对照组(C-S)组乳酸含量为1.78mmol/L,与其相比各配方均可显著降低BLA含量(P<0.05)。与安静对照组(C-Q)相比,ZC1、ZC4、ZC5组与其均无显著性差异,说明3个配方均可帮助小鼠运动后机体乳酸恢复至正常水平范围。
图21为血清尿素氮含量测定结果,C-S组的血清尿素氮(BUN)含量均值为16.16mmol/L,各组的BUN均值为12.25mmol/L。ZC1、ZC4、ZC5配方组小鼠的BUN含量均值显著低于C-S组(P<0.05),降低率分别为35.46%、12.58%、14.98%。由此说明,3个配方均可有效降低机体运动后BUN含量,增强小鼠机体对运动负荷的适应能力。其中,ZC1与C-Q组无显著差异,说明该配方可使小鼠动后机体尿素氮很快恢复至正常水平。
受试药物对肝糖原、肌糖原、ATP酶及血糖的影响
肝糖原(LG)含量测定结果见图22,C-S组平均含量为2.27mg/g,C-Q组平均含量为3.29mg/g。各配方组LG含量较C-S组均明显提高,说明配方可使肝机体糖原储备量增加(P<0.05),且ZC1、ZC4组含量可恢复至静息(C-Q组)水平。
肌糖原(MG)含量测定结果见图23,C-S的平均含量为1.41mg/g,C-Q组LG的平均含量为2.18mg/g。各配方组较运动对照组含量均有明显提高,且与安静对照组相比均无显著性差异。
图24为ATPase酶测定结果,C-S组肌ATPase酶的平均酶活为1180.84μmolPi/mgprot/hour,C-Q组为1314.6473μmolPi/mg prot/hour。各配方组较C-S组均有明显提高,但未达到C-Q水平,说明各配方对ATPase酶活力可产生一定影响。
血糖(Glu)含量测定结果见图25,C-S组平均含量为2.61mmol/L,C-Q组Glu的平均含量为6.41mmol/L,各配方组均可明显提高机体运动后的血糖含量,但却远远低于C-Q组。说明各组配方虽有利于机体提升血糖,但在短时间内无法使其恢复至正常水平。
受试药物对血清LDH、CK、AST、ALT含量的影响
图26为LDH测定结果,受试药物有助于降低机体LDH活力,LDH活性低在一定程度上反映了乳酸含量低。C-S组LDH活力为1136.00U/mg protein,C-Q组为630.92U/mg protein。ZC5组与C-S组相比LDH活力无显著差异,ZC4组降低效果较好,与安静对照组相比无显著性差异。
血清CK活力如图27所示,各给药组均有助于降低血清CK活力(P<0.05),改善急性运动引起的骨骼肌损伤,从而缓解体力疲劳。
AST、ALT酶含量测定结果见图28和图29,各配方组均可显著降低AST含量,且与安静对照组相比无显著性差异;与C-S组相比,ZC4、ZC5组可显著降低ALT含量(P<0.05),但未达到安静对照组水平。
受试药物对肝/肌中SOD、MDA含量及肝GSH-Px活性的影响
超氧化物歧化酶(肝SOD/肌SOD)含量如图30所示,各给药组均有助于提高机体肝SOD活力,C-S组肝SOD活力为546.88U/mg protein,C-Q组为580.59U/mg protein。与C-S组相比ZC4组可显著提高肝SOD活力26.41%(P<0.05)。如图31,肌肉中SOD含量显示,各给药组均有助于提高机体肌SOD活力,C-S组SOD活力为201.65U/mg protein,C-Q组为249.56U/mgprotein。与C-S组相比ZC4组可显著提高SOD活力28.46%(P<0.05),与肝脏中的表现一致。
丙二醛(肝MDA/肌MDA)含量测定结果见图32和图33,各给药组均有助于降低机体肝肌MDA含量,C-S组肝MDA含量为0.43U/mg prot,C-Q组肝MDA含量为0.33U/mg prot。与C-S组相比ZC1、ZC4、ZC5组可显著降低肝MDA含量(P<0.05),降低率分别为17.33%、16.52%、20.91%。肌肉MDA含量C-S组为1.393U/mg prot,C-Q组肌MDA含量为1.02U/mg prot。除ZC4组外,其他配方组含量均较C-S组明显降低,且与C-Q含量无显著差异。
谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)测定结果见图34,除ZC1外,各给药组均有助于提高机体肝GSH-Px活力,且有助于机体恢复GSH-Px活力至正常范围。
结论
按照《评价方法》规定的评判标准,综合分析第三批药理实验测定结果(见表9),抗疲劳配方遴选研究结果如下:力竭游泳实验结果证明,3个备选配方均具有明显延长小鼠力竭游泳时间的功能,其中ZC5配方功效最好,与对照形成显著差异,与两个阳性药功能无异;3个配方均具有显著降低运动后小鼠机体内血乳酸(BLA)和尿素氮(BUN)含量的作用;3个配方具有明显提高肌糖原和肝糖原含量的作用,以ZC1效果最好。按《评价方法》判定,ZC1、ZC4、ZC5都具有缓解体力疲劳的功能,其中ZC5功效最好。
表9:缓解体疲劳功能及作用机制指标评价结果(第三批实验)汇总表
注:***表示与C-S差异极显著;**表示与C-S差异显著;--表示与C-S差异不显著
对检测的11个与抗疲劳相关生理生化指标(表9)分析发现,90%以上指标都显示3个配方均具有缓解体疲劳的作用,大部分指标的作用显著高于运动对照水平,部分指标与安静对照水平相同。此结果佐证了配方的抗疲劳功能,证明了各配方表现出的缓解体疲劳功能具有生理生化基础。比较同一指标测定结果发现,3个配方对大部分指标的作用基本相同,但对个别指标的作用差异明显,未产生影响的指标各不相同。由此推测,3个备选配方在抗疲劳功能上虽然作用一致,但在调节机体生理生化机能及缓解体疲劳作用机制方面可能存在一定差异。
与两个阳性对照药物抗疲劳功能比较,3个配方的多项指标都与阳性药相同或相近,可以药食两用药材配制与药品功效等同或近似的功能食品。力竭游泳时长ZC5配方效果最好,功效与两个阳性药无差别。血乳酸、肝糖原和肌糖原含量,3个配方功效均与两个阳性药作用相同。在11项作用机理相关指标中,有7项3个配方与两个阳性药达到了无差异程度。在3个配方与两个阳性药作用有差异的5个生理生化指标上,不同配方表现出来的作用不尽相同,血尿素氮含量只有ZC1达到了两个阳性药的作用水平。三个配方中ZC5功效最好,其力竭游泳能力达到了两个阳性药水平,较对照提高了54.94%,其力竭游泳时长与两个阳性药的时长仅相差5.1%和3.4%。其15项生理生化检测指标中,有13项达到了复方高山红景天口服液作用水平,有12达到了补中益气口服液作用水平。
ZC5在第二次药理实验(BC5)中多项指标抗疲劳作用显著,虽在机体运动耐力方面略显不足,但在增强机体代谢速率以及提高机体抗氧化能力方面表现突出。对配方进行再优化后力竭游泳时间显著延长,显著降低了运动后小鼠机体内BLA和BUN含量。可能与去掉山茱萸增加山药,使其补益脾胃功能加强,增强了小鼠机体运化吸收功能,提高了机体能量的储存有关。
Claims (3)
1.一种抗疲劳中药复方组合物,由人参、黄精、黄芪、白扁豆、山药、茯苓、干姜、陈皮和甘草制成,其中以重量份计,人参:9~15份;黄精:40~50份;黄芪:19~25份;白扁豆:8~10份;山药:11~13份;茯苓13~17份;干姜:5~7份;陈皮4~6份以及甘草:6~8份。
2.一种抗疲劳制剂,其为权利要求1所述组合物的水提物。
3.根据权利要求2的抗疲劳制剂,其中成人一天用量所对应的组合物为:人参12g、黄精45g、黄芪22g、白扁豆9g、山药12g、茯苓15g、干姜6g、陈皮5g以及甘草7g。
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